PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI ETIL ASETAT BATANG JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN METODE YES-ASSAY SKRIPSI

  

PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI

ETIL ASETAT BATANG JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN

METODE YES-ASSAY

SKRIPSI

  Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1

  

Diajukan Oleh :

Meisty Aulia Karimah

  1008010072

  

Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Purwokerto

Purwokerto

2014

  PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI ETIL ASETAT BATANG JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN METODE YES-ASSAY SKRIPSI

  Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1

  Diajukan Oleh :

  Meisty Aulia Karimah

  1008010072

  Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto Purwokerto 2014

  

INTISARI

MEISTY AULIA KARIMAH. Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air dan

  Fraksi Etil Asetat Batang Jeruju (Acanthus ilicifolius) Menggunakan Metode YES-ASSAY. Dibawah Bimbingan BINAR ASRINING DHIANI dan SUSANTI.

  

Latar Belakang : Tanaman jeruju termasuk tanaman semi mangrove yang oleh

  masyarakat pesisir pantai dianggap sebagai gulma. Beberapa penelitian menunjukkan ekstrak jeruju (Acanthus ilicifolius) memiliki aktivitas antimikroba, antikanker, antioksidan, hepatoprotektif, antiinflamasi, dan hemolitik. Senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam batang tanaman jeruju salah satunya berupa senyawa lignan glukosida yang digolongkan sebagai senyawa fitoestrogen. Sehingga menarik untuk diteliti tentang aktivitas estrogenik pada batang tanaman jeruju menggunkan metode YES-assay.

  

Tujuan Penelitian : Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas

  estrogenik dari fraksi air dan fraksi etil asetat batang jeruju (Acanthus ilicifolius) serta untuk mengetahui profil KLT nya.

  

Metode Penelitian : Fraksinasi dilakukan dengan Fraksinasi Cair-Cair. Uji

  Estrogenik pada fraksi air dan fraksi etil asetat batang jeruju dibuat dengan seri konsentrasi 50µl, 100µl, 200µl, 400µl, 800µl, 1200µl, 1600µl, 2000µl. Data dianalisis dengan program Graphad prism versi 4. Uji identifikasi senyawa fraksi ekstrak batang jeruju dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT).

  

Hasil : Fraksi air memiliki aktivitas estrogenik paling besar baik yang ditentukan

  menggunakan YES- hERα maupun YES-hERβ, sedangkan fraksi etil asetat kemungkinan memiliki aktivitas estrogenik paling rendah baik yang ditentukan menggunakan YES-

  50 dari fraksi air dan

  hERα maupun YES-hERβ. Nilai EC

  30

  fraksi etil asetat yang ditentukan YES-hER α sebesar 360,2 µg/ml dan 4,369x10

  µg/ml. Nilai EC pada fraksi air dan fraksi etil asetat yang ditentukan YES-

  50

  hERβ

  6

  sebesar 1083 µg/ml, dan 1,34x10 µg/ml. Dari identifikasi senyawa menggunakan KLT menunjukkan pada fraksi air positif terdapat senyawa flavonoid. Pada fraksi etil asetat positif terdapat senyawa flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, dan terpenoid.

  

Kesimpulan : Fraksi air memiliki aktivitas estrogenik yang rendah baik yang

  ditentukan menggunakan YES- hERα maupun YES-hERβ dengan hubungan terbalik antara konsentrasi dengan unit β-galaktosidase yang dihasilkan.

  Sedangkan fraksi etil asetat batang jeruju (Acanthus ilicifolius) tidak memiliki aktivitas estrogenik baik yang ditentukan menggunakan YES- hERα maupun YES- hERβ. Identifikasi senyawa menggunakan KLT untuk mengetahui kandungan senyawa yang terdapat pada fraksi air batang jeruju meliputi flavonoid, sedangkan pada fraksi etil asetat meliputi alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, terpenoid

  

Kata Kunci : Fraksi batang Jeruju, Estrogenik, YES-assay, Kromatografi Lapis

  Tipis (KLT)

  

ABSTRACT

MEISTY AULIA KARIMAH. Estrogenic Activity Determination of Water and

  Ethyl Acetate Fraction of Jeruju Stem (Acanthus ilicifolius) Using YES-Assay Method. Under supervision of BINAR ASRINING DHIANI and SUSANTI.

  

Background : Jeruju belongs to semi-mangrove plants which is considered as

  weeds by the people in coastal area. Several researches reported that extract of jeruju (Acanthus ilicifolius) exhibited antimicrobial activity, anticancer, antioxidant, hepatoprotective, antiinflamation, and hemolytic. One of secondary metabolite compound which exists in jeruju stem is lignan glucosides which is categorized as phytoestrogens. Thus, it is interested to observe about estrogenic activity in jeruju stem using YES-assay method.

  

Aims of The Research : This research was aimed to determine estrogenic activity

  of water and ethyl acetate fraction of jeruju stem (Acanthus ilicifolius) and to determine its TLC profile.

  

Research Methodology : Fractionation was done by using liquid-liquid

  fractionation. Estrogenic assay on water and ethyl acetate fraction of jeruju stem was done with concentration series of 50µl, 100µl, 200µl, 400µl, 800µl, 1200µl, 1600µl, 2000µl. The data was analyzed by using Graphad prism 4th version. Identification of fraction from extract of jeruju stem was done by using Thin Layer Chromatogram method (TLC).

  

Result : Water fraction exhibited the highest estrogenic activity either determined

  by using YES- hERα or YES-hERβ, while ethyl acetate fraction showed the lowest estrogenic activity either determined by YES- hERα or YES-hERβ. The value of

  EC 50 from water and ethyl acetate fraction determined by YES-

  hERα was 360,2

  30

  µg/ml and 4,369x10 µg/ml. The value of EC

  50 from water and ethyl acetate

  6

  fraction determined by YES- µg/ml. From hERβ was 1083 µg/ml, and 1,34x10 compound identification using TLC, it showed that water fraction contained flavonoid. While within ethyl acetate fraction contained flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, and terpenoid.

  

Conclusion : Water fraction exhibited low estrogenic activity either determined

  by using YES- hERα or YES-hERβ with negative relation between consentration and β-galaktosidase unit that was produced. Whereas ethyl acetate fraction of jeruju stem (Acanthus ilicifolius

  ) didn’t have estrogenic activity either that determined by using YES- hERα or YES-hERβ. Compound identification used

  TLC to know the compound that was in water fraction of jeruju stem containing flavonoid, and within ethyl acetate fraction, it contained alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, terpenoid.

  

Keywords : Fraction of Jeruju stem, Estrogenic, YES-assay, Thin Layer

  Chromatography (TLC)

  

PERSEMBAHAN

Alhamdulillahi robbil ‘alamin, segala puji syukur atas segala nikmat dan anugrah Allah SWT yang senantiasa memberikan pertolongan dalam setiap langkahku

  Dengan rasa syukur skripsi ini kupersembahkan untuk yang tercinta, tersayang: Bapak dan ibu, yang senantiasa mendoakanku, memberikan motivasi, kasih sayang dan dukungan yang tiada tara.

  Kakakku (Mba Wiwit dan Mas Heru), yang selalu memberikan dukungan dan motivasi. Adekku Si Kembar (Ana dan Ani) yang telah menghibur dikala duka dan memberikan keceriaan. Keluarga besarku (Bude dan Pak De) yang selalu memberikan doa dan dukungan dalam setiap langkahku. Untuk guru, dosen yang senantiasa mengajariku dengan tulus hati, memberikan banyak ilmu dan pengetahuan, terutama untuk dosen pembimbing ibu Binar dan

  Ibu Susanti yang telah bersabar dalam membimbing hinggak skripsi ini dapat terselesaikan

  

Special thanks to : Titi, Ica, Ii, Rany, Group Acanthus : Dian Kartika Sari, Dina

  Febrina, Desy, Adang, Hari jo, Personil baru: Grah, Ruru, Ayu Sunda, Tika, Sally, Ratna, Anis, Pendukung : Mba Rahma, Mba Damar, Mba Sandya, Mas Fuad, Mba

  Ayu terimakasih untuk kalian yang senantiasa memberikan motivasi dan semangat.

  Alhamdulilah, segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis mampu menyelesaikan skripsi ini yang berjudul

  ”Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Batang Jeruju (Acanthus ilicifolius) Menggunakan

  persyaratan untuk

  Metode YES-Assay ”. Skripsi ini disusun guna memenuhi

  mencapai derajat Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

  Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Binar

Asrining Dhiani, M.Sc., Apt dan Ibu Susanti, M.Phil., Apt yang telah berkenan

membimbing dan mengarahkan penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Ucapan terima

kasih dan penghargaan juga penulis sampaikan kepada :

  1. Bapak Drs. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

  2. Ibu Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt sebagai dekan dari Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

  3. Semua dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang telah memberikan bekal bagi kehidupan.

  4. Teman-teman Farmasi Angkatan 2010 terima kasih dukungannya.

  5. Semua pihak yang telah membantu penulis dalam menulis skripsi ini.

  Besar harapan penulis, penulisan skripsi ini dapat bermanfaat. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak penyusunan skripsi ini tidak akan berjalan baik. Semoga skripsi ini dapat berguna untuk setiap orang yang membacanya. Aamiin.

  Purwokerto, Agustus 2014 Penulis Nama : Meisty Aulia Karimah NIM/ Angkatan : 1008010072/ 2010 Tempat/ Tanggal Lahir : Cilacap / 29 Mei 1991 Jenis Kelamin : Perempuan Agama : Islam Alamat : Jl. Raya Karangtengah RT 02/ RW 06 Kecamatan

  Sampang, Cilacap Riwayat Pendidikan:

  1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto (Angkatan 2010)

  2. SMA/ Tahun Lulus : SMA Negeri 1 Sampang/ Tahun 2010

  3. SMP/Tahun Lulus : SMP Negeri 1 Sampang/ Tahun 2007

  4. SD/ Tahun Lulus : SD Negeri Tambakreja 7/ Tahun 2004

  5. TK / Tahun Lulus : TK Aysiah/Tahun1998

  Prestasi :

  Asisten Praktikum Fitokimia, Asisten Praktikum Farmakologi

  

DAFTAR ISI

  halaman

  HALAMAN JUDUL ...................................................................................... ii HALAMAN PERSETUJUAN ...................................................................... iii HALAMAN PENGESAHAN. ....................................................................... iv HALAMAN PERNYATAAN ........................................................................ v

  INTISARI ....................................................................................................... vi ABSTRACT ..................................................................................................... viii HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................... x PRAKATA ...................................................................................................... xi RIWAYAT HIDUP ........................................................................................ xii DAFTAR ISI ................................................................................................... xiii DAFTAR TABEL .......................................................................................... xv DAFTAR GAMBAR ..................................................................................... xvi DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xvii

  BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah ......................................................... 1 B. Perumusan Masalah................................................. .............. 2 C. Tujuan Penelitian .................................................................. 2 D. Manfaat Penelitian ................................................................. 3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Tumbuhan Acanthus ilicifolius .............................................. 4 B. Uji Aktivitas Estrogenik ........................................................ 6 C. Hormon Estrogen .................................................................. 8 D. Kromatografi Lapis Tipis ...................................................... 8 BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................. 10 B. Variabel Penelitian ................................................................. 10 C. Definisi Variabel Operasional ................................................ 10 D. Waktu dan Tempat Penelitian............................................ .... 10

  E.

  Alat dan Bahan…………………………………………… ... 11 F. Cara Penelitian…………………………………………. ...... 12 G. Analisis Hasil………………………………………. ............ 14

  BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Pembuatan Fraksi air dan Fraksi Etil Asetat Batang Jeruju Acanthus ilicifolius ....................... ......................................... 15 B. Uji Aktivitas Estrogenik…………………………………. .... 16 C. Penentuan profil KLT senyawa

  ………………………….. ... 25

  BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan ............................................................................ 32 B. Saran ....................................................................................... 32 DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN

DAFTAR TABEL

  halaman Tabel 1. Hasil identifikasi golongan senyawa yang terkandung dalam fraksi etil asetat batang jeruju dengan menggunakan KLT ........... 26 Tabel 2. Hasil identifikasi golongan senyawa yang terkandung dalam fraksi air batang jeruju dengan menggunakan KLT ...................... 28

  

DAFTAR GAMBAR

  halaman Gambar 1. Prinsip Metode YES ...................................................................... 7 Gambar 2. Kurva hubungan antara log konsentrasi estradiol (M) dengan unit β-galaktosidase (Miller Unit) ................................................. 19 Gambar 3. Kurva hubungan antara log konsentrasi genistein (M) dengan unit β-galaktosidase (Miller Unit) ................................................ 20 Gambar 4. Kurva hubungan antara log konsentrasi fraksi air dan fraksi etil asetat dengan unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES- hERα .............................................................................................. 23

  Gambar 5. Kurva hubungan antara log konsentrasi fraksi air dan fraksi etil asetat dengan unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES- hERβ .............................................................................................. 24

  Gambar 6. Identifikasi senyawa fraksi etil asetat dengan KLT ...................... 25 Gambar 7. Identifikasi senyawa fraksi air dengan KLT ................................. 28 Gambar 8. KLT-preparatif fraksi etil asetat ................................................... 31 Gambar 9. KLT-preparatif fraksi air ............................................................... 31