Perbandingan Efektivitas Aspirin, Propolis, dan Bee Pollen sebagai Antiplatelet Berdasarkan Waktu Perdarahan pada Mencit
DAFTAR RIWAYAT HIDUP
Nama
: Muhammad Luthfi
Tempat, Tanggal Lahir
: Lhokseumawe, 5 November 1994
Agama
: Islam
Alamat
: Jln. Dr. Hamzah No. 4
(Samping Mesjid Dakwah Kampus USU)
Medan Baru, Medan – 20154
Riwayat Pendidikan
:
1. TK RA Nurul Hilal Bireuen (1998-2000)
2. SD Negeri 21 Bireuen (2000-2003 & 2004-2006)
3. SD Sekolah Indonesia Bangkok (2003-2004)
4. SMP Negeri 1 Bireuen (2006-2009)
5. SMAS Fatih Bilingual School Banda Aceh (2009-2012)
6. Fakultas Kedokteran USU Medan (2012-sekarang)
LAMPIRAN 1. Dosis Konversi
DOSIS KONVERSI
1.
Aspirin
Dosis aspirin yang digunakan pada manusia adalah 80 mg per hari. Adapun
konversi dosis pada manusia dengan berat 70 kg ke mencit 20 gram adalah 0,0026
(Laurence & Bacharach, 1964).
Perhitungan dosis konversi:
80 mg/hari x 0,0026 : 20 x 1000 = 10,4 mg/kgBB mencit/hari
Dosis aspirin untuk mencit : 10,4 mg/kgBB mencit/hari.
2.
Propolis
Dosis propolis yang digunakan pada manusia adalah 500 mg per hari. Adapun
konversi dosis pada manusia dengan berat 70 kg ke mencit 20 gram adalah 0,0026
(Laurence & Bacharach, 1964).
Perhitungan dosis konversi:
500 mg x 0,0026 : 20 x 1000 = 65 mg/kgBB mencit/hari
Dosis propolis untuk mencit : 65 mg/kgBB mencit/hari.
3.
Bee Pollen
Dosis bee pollen yang digunakan pada manusia adalah 520 mg per hari. Adapun
konversi dosis pada manusia dengan berat 70 kg ke mencit 20 gram adalah 0,0026.
(Laurence & Bacharach, 1964).
Perhitungan dosis konversi:
520 mg/hari x 0,0026 : 20 x 1000 = 68 mg/kgBB mencit/hari
Dosis bee pollen untuk mencit : 68 mg/kgBB mencit/hari.
Dosis yang diberikan pada kelompok perlakuan akan diencerkan 0,5 ml sesuai
dengan kapasitas lambung mencit.
LAMPIRAN 2. Data Penelitian
Mencit
plasebo1
plasebo2
plasebo3
plasebo4
plasebo5
plasebo6
plasebo7
plasebo8
aspirin1
aspirin2
aspirin3
aspirin4
aspirin5
aspirin6
aspirin7
aspirin8
propolis1
propolis2
propolis3
propolis4
propolis5
propolis6
propolis7
propolis8
beepollen1
beepollen2
beepollen3
beepollen4
beepollen5
beepollen6
beepollen7
beepollen8
Kelompok Pemberian Waktu Perdarahan (detik)
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
118
114
100
40
103
91
158
125
507
468
470
352
232
452
789
273
269
196
327
312
245
434
248
450
133
228
277
209
299
207
103
168
LAMPIRAN 3. Hasil Analisa Data SPSS
40
DAFTAR PUSTAKA
Baigent, C., Sudlow, C., Collins, R. & Peto, R., 2002. Collaborative Meta-Analysis of
Randomised Trials of Antiplatelet Therapy for Prevention of Death, Myocardial
Infarction, and Stroke in High Risk Patients. British Medical Journal, Volume 324, pp.
71-86.
Bankova, V. S., Castro, S. L. D. & Marcucci, M. C., 2000. Propolis: Recent Advances in
Chemistry and Plant Origin. Apidologie, Volume 31, pp. 3-15.
Barrett, K. E., Boitano, S., Barman, S. M. & Brooks, H. L., 2012. Ganong's Review of
Medical Physiology. 24th ed. New York: McGraw-Hill.
Burdock, G. A., 1998. Review of the Biological Properties and Toxicity of Bee Propolis
(Propolis). Food and Chemical Toxicology, Volume 36, pp. 347-363.
Castro, S. L. D., 2001. Propolis: Biological and Pharmacological Activities. Therapeutic
Uses of this Bee-product. ARBS Annual Review of Biomedical Sciences, Volume 3, pp.
49-83.
Chen, T.-G.et al., 2007. Antiplatelet Activity of Caffeic Acid Phenethyl Ester is Mediated
through a Cyclic GMP-Dependent Pathway in Human Platalets. Chinese Journal of
Physiology, 50(3), pp. 121-126.
Colvin, B., 2004. Physiology of Haemostasis. Vox Sanguinis, 87(Suppl. 1), pp. 43-46.
Corazzi, T. et al., 2005. Direct and Irreversible Inhibition of Cyclooxygenase-1 by
Nitroaspirin (NCX 4016). The Journal of Pharmacology and Experimental
Therapeutics, 315(3), pp. 1331-1337.
Choi, E.-M., 2007. Antinociceptive and Antiinflamatory Activities of Pine (Pinus densiflora)
Pollen Extract. Phytotherapy Research, 21(5), pp. 471-475.
41
Doutremepuich, C., Aguejouf, O., Desplat, V. & Eizayaga, F. X., 2011. Paradoxical Effect
of Aspirin. Thrombosis, Volume 2012.
Farnesi, A. P. et al., 2009. Effects of Stingless Bee and Honey Bee Propolis on Four Species
of Bacteria. Genetics and Molecular Research, 8(2), pp. 635-640.
Ganong, W. F., 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. 22 ed. Jakarta: Penerbit Buku
Kedokteran EGC.
Ghoshal, K. & Bhattacharyya, M., 2014. Overview of Platelet Physiology: Its Hemostatic
and Nonhemostatic Role in Disease Pathogenesis. The Scientific World Journal, pp. 116.
Gryglewski, R. J., Botting, R. M. & Vane, J. R., 1988. Mediators Produced by the Endothelial
Cell. Hypertension, Volume 12, pp. 530-548.
Guyton, A. C. & Hall, J. E., 2006. Textbook of Medical Physiology. 11th ed. Philadelphia:
Elsevier Inc.
Hsiao, G. et al., 2007. Vharacterization of a Novel and Potent Collagen Antagonist, Caffeic
Acid Phenethyl Ester, in Human Platelets: in vitro and in vivo Studies. Cardiovascular
Research, Volume 75, pp. 782-792.
Katzung, B. G. ed., 2012. In: Farmakologi Dasar & Klinik. Jakarta: Penerbit Buku
Kedokteran EGC.
Koc, A. N., Silici, S., Sariguzel-Mutlu, F. & Sagdic, O., 2007. Antifungal Activity of Propolis
in Four Different Fruit Juices. Foot Technology. Biotechnology, 45(1), pp. 57-61.
Komosinska-Vassev, K. et al., 2015. Bee Pollen: Chemical Composition and Therapeutic
Application. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, pp. 1-6.
Kumar, N., K. K., A. M., Dang, R. & Husain, A., 2008. Antioxidant and Antimicrobial
Activity of Propolis from Tamil Nadu Zone. Journal of Medicinal Plant Research, 2(12),
pp. 361-364.
42
Liu, Y., Jennings, N. L., Dart, A. M. & Du, X.-J., 2012. Standardizing a simpler, more
sensitive and accurate tail bleeding assay in mice. World Journal of Experimental
Medicine, 2(2), pp. 30-36.
Munnix, I. C., Cosemans, J. M., Auger, J. M. & Heemskerk, J. W., 2009. Platelet Response
Heterogenity in Thrombus Formation. Thromb Haemost, Volume 102, pp. 1149-1156.
Palta, S., Saroa, R. & Palta, A., 2014. Overview of the Coagulation System. Indian Journal
of Anaesthesia, 58(5), pp. 515-523.
Patrono, C. et al., 2004. Platelet-Active Drugs: The Relationships Among Dose,
Effectiveness, and Side Effects. CHEST, Volume 126, pp. 234S-264S.
Peters, R. J. et al., 2003. Effects of Aspirin Dose When Used Alone or in Combination with
Clopidogrel in Patients with Acute Coronary Syndromes. Circulation, Volume 108, pp.
1682-1687.
Purohit, A., Joshi, K., Kotru, B. & Kotru, S., 2013. Effect of Indian Propolis on
Hematological Parameters in Experimentally Induced Hyperlipidemic Male Albino
Rabbits. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 6(1), pp. 17-19.
Rodvien, R. & Mielke, Jr., C. H., 1976. Role of Platelets in Hemostasis and Thrombosis. The
Western Journal of Medicine, Volume 125, pp. 181-186.
Sheu, J. R. et al., 2004. Mechanisms involved in the antiplatelet activity of rutin, a glycoside
of the flavonol quercetin, in human platelets. Journal of Agricultural and Food
Chemistry , 52(14), pp. 4414-4418.
Szczesna, T., 2006. Long-Chain Fatty Acids Composition of Honeybee-Collected Pollen.
Journal of Apicultural Science, 50(2), pp. 65-79.
Thornton, P. & Douglas, J., 2010. Coagulation in Pregnancy. Best Practice and Research.
Clinical Obstetrics & Gynaecology, 24(3), pp. 339-352.
Tortora, G. J., 2009. Principles of Anatomy and Physiology. 12 ed. Danvers: John Wiley &
Sons, Inc.
43
Vane, J. R., 1971. Inhibition of prostaglandin synthesis as a mechanism of action for aspirinlike drugs. Nature New Biology, 231(25), pp. 232-235.
Verkerk, R., 2009. Can The Failing Western Medical Paradigm be Shifted Using the
Principle of Sustainability. ACNEM Journal, Volume 28, pp. 4-10.
Wagh, V. D., 2013. Propolis: A Wonder Bees Product and Its Parmacological Potentials.
Advances in Pharmacological Sciences, pp. 1-11.
Walker, P. & Crane, E., 1987. Constituents of Propolis. Apidologie, 18(4), pp. 327-334.
World
Health
Available
Organization,
at:
[Accessed 28 May 2015].
n.d.
NCD
Mortality
and
Morbidity.
[Online]
http://www.who.int/gho/ncd/mortality_morbidity/en/
21
BAB 3
KERANGKA KONSEP DAN DEFINISI OPERASIONAL
3.1. Kerangka Konsep Penelitian
Berdasarkan tujuan penelitian yang telah dipaparkan sebelumnya, maka
kerangka konsep dalam penelitian ini adalah :
Variabel Independen
Variabel dependen
Pemberian Aspirin, Propolis,
dan
Bee
Pollen
sebagai
Waktu perdarahan pada mencit
antiplatelet
3.2. Definisi Operasional
3.2.1. Definisi
Aspirin adalah obat dalam kelompok salisilat dan merupakan salah satu jenis
dari obat antiplatelet.
Propolis adalah produk resin sarang lebah yang mengandung cairan
tumbuhan yang bercampur dengan lilin yang dihasilkan oleh lebah dan oleh
lebah digunakan sebagai perekat.
Bee Pollen adalah serbuk sari bunga jantan yang diambil oleh lebah dan
digunakan sebagai makanan pokok dari seluruh koloni lebah madu.
Waktu perdarahan pada mencit diukur dengan menggunakan Metode Tail
Bleeding. Ekor mencit dipotong menggunakan pisau bedah, kemudian
dihitung waktu mulai dari darah pertama menetes hingga tetesan darah
berhenti. Darah diisap menggunakan kertas saring/kertas tissue dengan tanpa
menyentuh bagian ekor yang terluka.
22
3.2.2. Cara Ukur
Menggunakan Metode Tail Bleeding
3.2.3. Alat Ukur
Pisau bedah (scalpel)
Kapas alkohol
Kertas saring/kertas tissue
Stopwatch
3.2.4. Skala Pengukuran
Rasio
3.3. Hipotesis
1. Waktu perdarahan pada ekor mencit dengan pemberian Propolis lebih
panjang atau sama dengan pemberian Aspirin
2. Waktu perdarahan pada ekor mencit dengan pemberian Bee Pollen lebih
panjang dibandingkan dengan kelompok plasebo
23
BAB 4
METODE PENELITIAN
4.1. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain penelitian
randomized post test only control group design dengan teknik single-blind. Penelitian
menggunakan hewan coba yang dibagi menjadi 4 kelompok.
K1
R
S
K2
K3
K4
O1
O2
O3
O4
Keterangan :
S
= Sampel
R
= Randomisasi
K1
= Kelompok hewan kontrol (-)
K2
= Kelompok perlakuan dengan pemberian Aspirin per oral selama 12 hari
K3
= Kelompok perlakuan dengan pemberian Propolis per oral selama 12 hari
K4
= Kelompok perlakuan dengan pemberian Bee Pollen per oral selama 12 hari
O1
= Hasil pengamatan kelompok kontrol (-)
O2
= Hasil pengamatan kelompok perlakuan dengan pemberian Aspirin
O3
= Hasil pengamatan kelompok perlakuan dengan pemberian Propolis
O4
= Hasil pengamatan kelompok perlakuan dengan pemberian bee pollen
24
4.2. Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian ini akan dilakukan di Laboratorium Farmakologi Departemen
Farmakologi dan Terapetik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
Penelitian direncanakan dimulai pada September – Desember 2015. Penelitian akan
dilakukan setelah mendapat persetujuan Ethical Clearance dari Komisi Etik Fakultas
Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
4.3. Populasi dan Sampel Penelitian
Pada penelitian ini akan digunakan mencit jantan (mus musculus), galur Double
Distsch Webster umur : 2-3 bulan (dewasa), berat badan 20-30 gram, sehat, belum
pernah digunakan untuk penelitian lain. Mencit diperoleh dari Laboratorium FMIPA
Biologi USU Medan. Jumlah hewan coba perkelompok ditentukan dengan rumus
menurut Federer (1963), sebagai berikut:
(t-1)(n-1) ≥ 15
Keterangan :
n
= besar sampel
t
= jumlah kelompok hewan coba
Maka besar sampel yang dibutuhkan adalah :
(t-1)(n-1) ≥ 15
(4-1)(n-1) ≥ 15
(n-1) ≥ 5
n ≥ 6
Berdasarkan rumus Federer tersebut, dibutuhkan sampel sebanyak minimal 6
ekor hewan coba pada masing-masing kelompok. Dengan penambahan perkiraan drop
out sebesar 10%, maka besar sampel minimal yang diperlukan untuk tiap kelompok
adalah 7 hewan coba.
25
Berdasarkan jumlah sampel minimal yang diperbolehkan secara statistik dan
tidak melanggar prinsip 3 R ( Reduction, Replacement, Refinement ) dalam penelitian
hewan coba, maka jumlah sampel yang diambil menjadi 8 ekor untuk tiap-tiap
kelompok. Jadi jumlah seluruh hewan coba yang dibutuhkan sebanyak 32 ekor.
Pemilihan sampel dan pengelompokannya dilakukan menggunakan randomisasi
sederhana (simple random sampling), dimana pada setiap 32 ekor sampel yang
memenuhi kriteria inklusi yang telah ditentukan akan diberi nomor, untuk kemudian
dibagi menjadi 4 kelompok yang sama besar dengan bantuan program komputer
(https://www.randomizer.org/)
4.4. Kriteria Inklusi, Eksklusi dan Drop Out
4.4.1. Kriteria Inklusi :
1. Mencit (mus musculus) galur Double Distsch Webster, jantan, umur : 2-3
bulan, berat badan : 20-30 gram.
2. Mencit sehat, bergerak aktif, dan berasal dari kelompok yang sama.
4.4.2. Kriteria Eksklusi
1. Mencit sebelumnya telah mendapatkan intervensi obat.
4.4.3. Kriteria Drop Out
1. Mencit mati dalam periode penelitian.
4.5. Cara Kerja dan Alur Penelitan
4.5.1. Pengambilan Bahan
Pada Penlitian ini bahan-bahan produk perlebahan yang digunakan adalah :
Aspirin (@ BAYER)
Propolis (@ High Desert Indonesia - HDI)
Bee Pollen (@ High Desert Indonesia - HDI)
26
4.5.2. Persiapan dan Pemeliharaan hewan Coba
Sebelum penelitian dilakukan, adaptasi hewan di lokasi dengan cahaya 12 jam
siklus jadwal gelap, diet yang standar yaitu makan dan minum ad libitum. Makanan
yang dikonsumsi berasal dari Charoen Pokhpand. Hewan coba dipelihara dalam suhu
25 ± 10 º C, kelembaban relatif 60 %. Mencit dipelihara selama masa penelitian, berat
badan ditimbang sebelum dan sesudah percobaan.
4.5.3. Cara Kerja
Mencit jantan (mus musculus) jantan, galur DDW, sehat ,badan : 20-30 gram,
dibagi menjadi 4 kelompok :
1.
Mencit normal sebagai kontrol (-)
2.
Mencit dengan pemberian Aspirin namun tidak diberi intervensi (kontrol +)
3.
Mencit dengan pemberian Propolis per oral selama 12 hari
4.
Mencit dengan pemberian Bee Pollen per oral selama 12 hari
Dilakukan pemberian pada mencit mulai hari pertama penelitian pendahuluan selama
12 hari menurut Tabel Dosis Konversi.
Dosis pemberian :
1.
Aspirin
: 10,4 mg/kgBB mencit/hari
2.
Propolis
: 65 mg/kgBB mencit/hari
3.
Bee Pollen : 68 mg/kgBB mencit/hari
Setelah 12 hari, seluruh hewan coba mencit dilakukan pengukuran dengan Metode Tail
Bleeding sebagai berikut :
1.
Bersihkan daerah yang akan dilakukan insisi (ekor mencit) dengan kapas
alkohol.
2.
Pertama, ekor mencit dipotong menggunakan pisau bedah dan biarkan darah
keluar dengan bebas. Saat darah mulai keluar jalankan stopwatch.
27
3.
Isap darah yang keluar dengan kertas saring/kertas tissue setiap setengah
menit sampai darah berhenti mengalir (jangan sampai kertas saring/kertas
tissue menyentuh luka). Hentikan stopwatch saat darah tidak dapat diisap
lagi. Catat waktunya.
Tabel 4.1. Konversi perhitungan dosis (Laurence & Bacharach, 1964) secara per oral
Mencit
Tikus
Marmut Kelinci
20gram 200 gr 400 gr
Mencit
20gram
Tikus
200 gr
Marmut
400 gr
Kelinci
1,5 kg
Kucing
2 kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
1,5 kg
Kucing
Kera
Anjing
Manusia
2 kg
4 kg
12 kg
70 kg
1.0
7.0
12.25
27.8
29.7
64.1
124.2
387.9
0.14
1.0
1.74
3.9
4.2
9.2
17.8
56.0
0.08
0.57
1.0
2.25
2.4
5.2
10.2
31.5
0.04
0.25
0.44
1.0
1.08
2.4
4.5
14.2
0.03
0.23
0.41
0.92
1.0
2.2
4.1
13.0
0.016
0.11
0.19
0.42
0.45
1.0
1.9
6.1
0.008
0.06
0.1
0.22
0.24
0.52
1.0
3.1
0.0026
0.018
0.031
0.07
0.076
0.16
0.32
1.0
28
4.6. Analisis Data
Data yang didapat akan dianalisis dengan ANOVA searah menggunakan
program komputer bila data parametrik terdistribusi normal. Apabila data tidak
terdistribusi normal maka data yang diambil non parametrik dan diuji dengan KruskallWallis. Suatu perbedaan dinyatakan signifikan bila p < 0.05.
29
BAB 5
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
5.1. Hasil Penelitian
5.1.1.Deskripsi Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakologi, Departemen Farmakologi
dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara (FK USU), Medan.
Lokasi ini dipilih dengan mempertimbangkan kelengkapan sarana dan fasilitas
pendukung yang cukup baik untuk menunjang keberhasilan dari penelitian ini.
Penelitian dilaksanakan di ruang Laboratorium Farmakologi yang terletak di lantai 1
gedung Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara. Gedung
Farmakologi Universitas Sumatera Utara berada di Jalan Universitas No. 1, Kampus
Universitas Sumatera Utara, Kelurahan Padang Bulan, Kecamatan Medan Baru,
Medan dengan batas wilayah :
Batas Utara : Gedung Abdul Hakim Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
Batas Selatan : Departemen Ilmu Gizi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara
Batas Timur : Jalan Universitas, Kampus Universitas Sumatera Utara.
Batas Barat : Fakultas Keperawatan Universitas Sumatera Utara.
5.1.2.Karakteristik Sampel dan Analisa Deskriptif Hasil Penelitian
Dalam penelitian ini, sampel yang digunakan adalah 32 ekor mencit jantan galur
Double Distsch Webster (DDW). Kemudian sampel dibagi menjadi 4 kelompok secara
randomisasi sederhana. Sampel selanjutnya diberikan obat/zat yang berbeda selama 12
hari. Setelah 12 hari, sampel diberikan perlakuan invasif berupa pemotongan bagian
ekor dan dilakukan pengukuran waktu perdarahan dalam satuan detik. Data rerata
waktu perdarahan pada kelompok plasebo, kelompok dengan pemberian aspirin,
30
kelompok dengan pemberian propolis, dan kelompok dengan pemberian bee pollen
dapat dilihat pada Tabel 5.1 di bawah ini.
Tabel 5.1. Rerata Waktu Perdarahan pada Empat Kelompok Sampel dalam
Satuan Detik
Kelompok
Pemberian
N
Rerata Waktu
Standar
Perdarahan
Deviasi
Plasebo
8
106,1 detik
33,6 detik
Aspirin
8
442,9 detik
171,9 detik
Propolis
8
310,1 detik
91 detik
Bee Pollen
8
203 detik
67 detik
Berdasarkan hasil penelitian pada Tabel 5.1 di atas, kelompok dengan rerata
waktu perdarahan terpanjang adalah kelompok dengan pemberian Aspirin, yaitu
442,9±171,9 detik. Sedangkan kelompok dengan rerata waktu perdarahan terpendek
adalah kelompok plasebo atau kelompok dengan tanpa pemberian, yaitu 106,1±33,6
detik.
Gambar 5.1. Grafik Waktu Perdarahan Berdasarkan Kelompok Pemberian
500
450
400
350
detik
300
250
200
150
100
50
0
Perlakuan
Plasebo
Aspirin
Propolis
Bee Pollen
31
5.1.3.Uji Normalitas Data
Pada penelitian ini, uji normalitas yang digunakan adalah uji Shapiro-Wilk. Data
dinyatakan terdistribusi normal jika p value > 0,05 dan dinyatakan tidak terdistribusi
normal jika p value < 0,05. Hasil komputasi uji normalitas pada penelitian ini dapat
dilihat pada tabel 5.2 di bawah.
Tabel 5.2. Normalitas Data pada Empat Kelompok Pemberian dengan Uji
Shapiro-Wilk
Kelompok
Statistik
df
Sig.
Plasebo
0,935
8
0,560
Aspirin
0,904
8
0,316
Propolis
0,910
8
0,352
Bee Pollen
0,970
8
0,896
Pemberian
Berdasarkan hasil komputasi uji normalitas pada Tabel 5.2, diperoleh nilai signifikansi
untuk kelompok plasebo sebesar 0,560, untuk kelompok dengan pemberian Aspirin
sebesar 0,316, untuk kelompok dengan pemberian Propolis sebesar 0,352, dan untuk
kelompok Bee Pollen sebesar 0,896. Karena nilai signifikansi pada keempat kelompok
pemberian lebih besar dari 0,05, maka dapat disimpulkan bahwa data terdistribusi
normal.
5.1.4.Uji Homogenitas Data
Untuk kebutuhan analisis, maka data yang akan dianalisis harus memenuhi
asumsi yang mendasari ANOVA yaitu bahwa varian dari beberapa populasi adalah
sama (homogen). Jika nilai signifikansi < 0,05, maka dikatakan bahwa varian dari dua
atau lebih kelompok populasi data adalah tidak sama. Sedangkan jika nilai signifikansi
> 0,05, maka dikatakan bahwa varian dari dua atau lebih kelompok populasi data
32
adalah sama (homogen). Hasil komputasi uji homogenitas pada penelitian ini dapat
dilihat pada Tabel 5.3 di bawah.
Tabel 5.3. Homogenitas Data pada Empat Kelompok Pemberian
Levene
Statistic
2,805
df1
df2
Sig.
3
28
0,058
Berdasarkan hasil komputasi uji homogenitas pada tabel di atas, diperoleh p value
sebesar 0,058, dimana 0,058 > 0,05. Dari hasil tersebut dapat diketahui bahwa empat
kelompok populasi data pada penelitian ini memiliki varian yang sama (homogen)
sehingga memenuhi asumsi yang mendasari ANOVA.
5.1.5.Uji Komparabilitas
Uji komparabilitas bertujuan membandingkan rerata waktu perdarahan pada
kelompok plasebo, kelompok dengan pemberian Aspirin, kelompok dengan pemberian
Propolis, dan kelompok dengan pemberian Bee Pollen. Berdasarkan hasil uji
normalitas dan homogenitas, data pada penelitian ini diketahui terdistribusi normal dan
memiliki varian yang sama (homogen), maka analisis komparatif yang digunakan
adalah uji untuk data parametrik yaitu One Way ANOVA. Hasil analisis dengan uji One
Way ANOVA disajikan pada Tabel 5.4 di bawah.
Tabel 5.4. Uji One Way ANOVA Rerata Waktu Perdarahan
Kelompok
Subjek
df
Antara kelompok
3
Didalam kelompok
28
F
Sig.
15,397
0,000
33
Berdasarkan hasil pada tabel di atas, didapatkan nilai p value sebesar 0,000. Oleh
karena itu, maka dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan rerata waktu perdarahan
pada keempat kelompok pemberian (p0,05). Berdasarkan hal ini,
hipotesis peneliti yang menyatakan bahwa “Waktu perdarahan pada ekor
mencit dengan pemberian Bee Pollen lebih panjang dibandingkan dengan
kelompok plasebo” tidak dapat diterima. Meskipun tidak terbukti berbeda
39
secara statistik, namun rerata waktu perdarahan pada kelompok pemberian Bee
Pollen lebih panjang 96,9 detik dibandingkan rerata kelompok plasebo.
6.2. Saran
Beberapa hal yang dapat disarankan berdasarkan hasil penelitian yang telah
dilakukan antara lain :
1. Melihat hasil penelitian ini yang membuktikan adanya efek antiplatelet dari
Propolis terhadap memanjangnya waktu perdarahan pada mencit, diharapakan
supaya penelitian ini dapat terus dikembangkan untuk dapat digunakan sebagai
agen antiagregasi platelet pada manusia dengan didukung oleh bukti-bukti
ilmiah yang valid.
2. Untuk efek antiagregasi platelet dari Bee Pollen, diharapkan adanya penelitian
lebih lanjut pada hewan coba dengan jumlah sampel hewa coba yang lebih besar
dan dosis yang lebih tinggi untuk dapat mencapai hasil yang diharapkan.
3. Secara keseluruhan, untuk penelitian selanjutnya agar dapat menggunakan
faktor-faktor lain yang mungkin dapat mempengaruhi panjangnya waktu
perdarahan pada hewan coba selain efektivitas antiplatelet zat/obat yang diuji
coba. Contohnya seperti berat badan dan usia hewan coba, serta tingkat stress
dari hewan coba saat diberi perlakuan yang bisa menyebabkan bias terhadap
hasil penelitian.
5
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Hemostasis dan Platelet
2.1.1. Hemostasis
Istilah hemostasis berarti mencegah terjadinya kehilangan darah (Guyton & Hall,
2006). Secara lebih spesifik, hemostasis merupakan proses pembentukan gumpalan
darah (blood clot) pada dinding pembuluh darah yang mengalami kerusakan dan
berguna
untuk
mencegah
terjadinya
kehilangan
darah
sementara
tetap
mempertahankan darah dalam kondisi cair di dalam sistem vaskuler. Sekumpulan
mekanisme kompleks yang saling berhubungan bekerja untuk menjaga keseimbangan
antara proses koagulasi dan antikoagulasi (Barrett, et al., 2012).
Proses hemostasis terjadi dengan melibatkan interaksi yang kompleks dari
dinding pembuluh darah, platelet, sistem koagulasi, dan fibrinolisis (Thornton &
Douglas, 2010). Hemostasis dapat dicapai dengan beberapa cara : konstriksi pembuluh
darah, pembentukan sumbatan platelet, pembentukan blood clot akibat terjadinya
penggumpalan darah, dan yang terakhir terbentuknya jaringan fibrosa pada gumpalan
darah tadi untuk menutup daerah yang rusak pada pembuluh secara permanen (Guyton
& Hall, 2006). Walaupun terkesan rumit dan seolah bertahap, interaksi komponen
hemostasis ini sebenarnya saling berpaut dan berkerja secara efisien untuk
menghentikan perdarahan (Rodvien & Mielke, Jr., 1976).
Ketika pembuluh darah mengalami kerusakan, beberapa mekanisme akan
teraktivasi untuk melakukan kompensasi. Jika pembuluh tersebut memiliki lapisan
otot, maka vasokonstriksi terjadi. Selanjutnya, di setiap pembuluh darah, jika
antarmuka antara darah dan pembuluh mengalami perubahan seperti saat ruptur, maka
akan menyebabkan terjadinya perlekatan platelet pada struktur subintima yang baru
terpapar. Platelet yang melekat ini selanjutnya melepaskan ADP (adenosine
6
diphosphate) dan menyebabkan platelet-platelet yang lain ikut melepaskan lebih
banyak ADP, sehingga terjadilah agregasi platelet yang pada akhirnya membentuk
sumbatan platelet (Rodvien & Mielke, Jr., 1976). Sumbatan platelet ini sangat efektif
untuk mencegah terjadinya kehilangan darah pada pembuluh darah dengan diameter
yang relatif kecil. Terbentuknya benang-benang fibrin pada tahapan pengumpalan
darah selanjutnya akan membuat sumbatan platelet ini menjadi lebih kuat. Sumbatan
platelet sendiri dapat menghentikan perdarahan secara sempurna jika kerusakan yang
terjadi pada pembuluh darah tidak mencakup area yang terlalu luas (Tortora, 2009).
Selanjutnya, proses pembentukan gumpalan atau sumbatanan sekunder secara
definitif dilakukan oleh suatu proses yang disebut jalur koagulasi. Pada jalur ini,
interaksi sejumlah protein yang dikenal sebagai faktor penggumpalan bersama dengan
platelet dan jaringan berkerja untuk membentuk jaring (benang-benang) fibrin yang
menstabilkan gumpalan darah. Secara klasik, proses ini terjadi dalam dua jalur yaitu
intrinsik dan ekstrinsik dimana terdapat perbedaan pada inisiasinya walaupun
sebenarnya kedua jalur ini berkerja secara paralel (Palta, et al., 2014).
Ketika proses perbaikan dinding pembuluh darah selesai dan pada akhirnya
digantikan oleh jaringan fibrosa, gumpalan yang telah terbentuk juga akan menghilang.
Proses pembersihan gumpalan ini berlangsung paralel dengan pembentukannya
sehingga berfungsi juga untuk membatasi ukuran gumpalan. Plasminogen yang
terjebak dalam gumpalan darah nantinya akan diaktifkan oleh aktivatornya (tPA atau
u-PA) menjadi plasmin yang memiliki kemampuan untuk mengurai bekuan fibrin
menjadi FDP (fibrin degradation product) dan D-dimer (Colvin, 2004).
Sebagai kesimpulan, hemostasis adalah suatu proses fisiologis yang kompleks
untuk mempertahankan tingkat fluiditas darah melalui mekanisme koagulasi dan
antikoagulasi yang ada dalam tubuh. Ketidakseimbangan dari dua komponen ini
merupakan penyebab terjadinya perdarahan atau trombosis. Proses ini perlu dimengerti
untuk
dapat
memperkirakan
konsekuensi
patologis
dan
klinis
diimplementasikannya suatu intervensi farmakologis (Palta, et al., 2014).
.
sebelum
7
Gambar 2.1. Respon alami darah terhadap perubahan pada dinding pembuluh
darah
2.1.2. Platelet
Platelet, atau juga dikenal dengan trombosit, adalah sel-sel bergranula yang
bersirkulasi dan merupakan mediator penting pada proses hemostasis karena
membentuk agregat di tempat cedera pembuluh darah. Sel ini tidak memiliki nukleus
dan berdiameter 2-4 µm. Jumlahnya sekitar 300.000/µL darah dan pada keadaan
normal mempunyai waktu-paruh sekitar 4 hari. Megakariosit, yaitu sel raksasa di
sumsum tulang, membentuk platelet dengan cara mengeluarkan secuil sitoplasma ke
dalam sirkulasi. Antara 60% dan 75% platelet yang telah dilepas dari sumsum tulang
berada di dalam peredaran darah, sedangkan sisanya sebagian besar terdapat di dalam
limpa. Pengangkatan limpa (splenektomi) menyebabkan peningkatan hitung platelet
(trombositosis).
Platelet mempunyai suatu cincin mikrotubulus di sekeliling tepinya dan
invaginasi (lekukan) membran yang luas dengan sistem saluran kompleks yang
berhubungan dengan cairan ekstrasel. Membran selnya mengandung reseptor untuk
8
kolagen, ADP, faktor dinding pembuluh von Willebrand, dan fibrinogen.
Sitoplasmanya mengandung aktin, miosin, glikogen, lisosom, dan dua macam granula
: (1) granula padat, mengandung senyawa-senyawa nonprotein yang akan disekresikan
sebagai respons terhadap aktivasi platelet, mencakup serotonin, ADP, serta nukleotida
adenine lainnya, dan (2) granula α, yang mengandung protein sekresi selain hidrolase
lisosom. Protein tersebut meliputi faktor-faktor penggumpalan dan platelet-derived
growth factor (PDGF). PDGF juga dibentuk oleh makrofag dan sel endotel. Senyawa
ini merupakan dimer yang tersusun dari polipeptida subunit A dan B. PDGF ditemukan
baik sebagai senyawa bentuk homodimer (AA dan BB) maupun heterodimer (AB).
PDGF merangsang penyembuhan luka dan merupakan mitogen kuat bagi otot polos
vaskular. Platelet maupun dinding pembuluh darah mengandung faktor von Willebrand
yang berperan pada proses adhesi dan mengendalikan kadar faktor VIII dalam
sirkulasi.
Bila dinding pembuluh darah cedera, platelet akan melekat ke kolagen dan faktor
von Willebrand yang terpapar di dinding pembuluh melalui reseptor di membrane
platelet. Faktor von Willebrand adalah suatu molekul yang sangat besar yang
dihasilkan sel endotel. Perlekatan menyebabkan aktivasi platelet yang mengeluarkan
isi granulanya. ADP yang dibebaskan bekerja pada reseptor ADP platelet untuk
meningkatkan akumulasi platelet (agregasi platelet). Manusia memiliki paling sedikit
tiga jenis reseptor ADP platelet : P2Y1, P2Y2, dan P2X1. Reseptor-reseptor ini jelas
merupakan objek yang menarik untuk penelitian obat, dan beberapa inhibitor baru
tampaknya memberi harapan pada pengobatan serangan jantung dan stroke. Proses
agregasi ini juga dirangsang oleh platelet-activating factor (PAF), yakni suatu sitokin
yang disekresi oleh neutrophil dan monosit serta oleh platelet. Senyawa ini juga
memiliki aktivitas inflamasi. PAF merupakan eter fosfolipid, 1-alkil-2-asetilgliseril-3fosforilkolin, yang dibentuk dari lipid membrane. Senyawa ini bekerja melalui reseptor
terkait-protein G untuk meningkatkan produksi derivate asam arakidonat, termasuk
Tromboksan A2.
9
Pembentukan platelet diatur oleh berbagai faktor perangsang koloni (CSF) yang
mengontrol produksi megakariosit, serta trombopoietin, yakni suatu faktor protein
yang beredar di dalam darah. Faktor ini, yang mempermudah pematangan
megakariosit, dibentuk secara konstan oleh hati dan ginjal, dan platelet memiliki
reseptor untuk trombopoietin. Akibatnya, bila jumlah platelet rendah, trombopoietin
yang terikat akan berkurang dan lebih banyak tersedia untuk merangsang pembentukan
platelet. Sebaliknya, bila jumlah platelet tinggi, lebih banyak trombopoietin yang
terikat dan hanya sedikit yang bebas. Hal ini merupakan suatu bentuk kontrol umpanbalik pada pembentukan platelet. Bagian terminal-amino pada molekul trombopoietin
memiliki kemampuan untuk merangsang platelet, sedangkan bagian terminal-karboksil
mengandung banyak residu karbohidrat dan berperan pada ketersediaan trombopoietin
(Ganong, 2008).
2.1.3. Peran Platelet dalam Proses Hemostasis
Adanya kerusakan pada dinding pembuluh darah mengaktivasi platelet untuk
memulai proses penggumpalan, atau seperti yang telah diuraikan sebelumnya, proses
hemostasis. Platelet yang bersifat dinamis dapat segera diaktifkan atau dihambat oleh
beberapa stimulus endogen maupun eksogen, dan memulai proses hemostasis primer
dengan melengketkan dirinya pada dinding pembuluh darah yang mengalami
kerusakan. Reseptor GPIb-V-IX dan GPIa-IIa dan komponen-komponen subndotel
seperti vWf dan kolagen saling berinteraksi untuk memediasi proses ini (Gambar 2.2.).
Pengikatan ligan pada reseptor GP mengubah bentuk platelet dan memicu pelepasan
granul-granulnya, yang pada akhirnya membentuk agregarasi yang juga dikenal
dengan “sumbatan platelet” atau “trombus putih” (Gambar 2.3.).
Platelet memulai perubahan bentuknya dengan pembentukan pseudopoda ketika
konsentrasi Ca2+ intrasel melebihi suatu ambang tertentu. Selama proses perubahan ini,
terjadi pemaparan dan pengaktivan reseptor fibrinogen platelet (GPIIb/IIIa), dan proses
agregasi platelet terinisiasi. Proses ini disebut juga sebagai agregasi primer yang mana
bersifat reversible. Namun demikian, platelet yang sedang berada dalam fase istirahat
10
Gambar 2.2. Ilustrasi fungsi vWf pada proses perlekatan platelet
Gambar 2.3. Proses aktivasi platelet
tidak bisa berikatan dengan fibrinogen. Jalur tromboksan asam arakidonat adalah jalur
yang penting dalam aktivasi platelet (Gambar 2.4.).
ADP adalah aktivator platelet yang juga penting. P2Y12, yang merupakan
reseptor spesifik ADP, terdapat pada membrane platelet bersama dengan protein-G
inhibitory dan memediasi pelepasan Ca2+ yang diinduksi oleh ADP, menghambat
adenylate cyclase dan mengaktivasi reseptor GPIIb/IIIa yang menyebabkan agregasi
11
Gambar 2.4. Jalur biosintesis tromboksan
platelet. Tromboksan A2, ADP, dan substansi-substansi lain seperti serotonin
dilepaskan dari platelet yang teraktivasi, dan menyediakan umpan balik positif yang
penting dan memperkuat gumpalan kaya-platelet untuk menginisiasi proses agregasi
sekunder yang bersifat ireversibel (Gambar 2.5.). (Ghoshal & Bhattacharyya, 2014) .
Gambar 2.5. Ilustrasi jalur hemostasis
Respon pada platelet dilipatgandakan melalui substansi-substansi yang
dilepaskan oleh granul-granul platelet yang merekrut platelet-platelet lain serta sel-sel
darah. Sumbatan platelet yang terbentuk pada hemostasis primer relatif tidak stabil.
12
Jalur/kaskade penggumpalan darah dan pembentukan thrombin serta fibrin
memperpanjang hemostasis sekunder. Selama proses aktivasi platelet, lapisan
fosfolipid membran platelet menjadi bermuatan negatif, sehingga memfasilitasi
aktivasi proses penggumpalan (mis. FV, FVIIIa, FIXa, dan FX). Pengikatan kompleks
protrombinase (FXa, FVa, Ca2+, dan protrombin) pada membrane platelet terjadi pada
tahap ini. Proses aktivasi platelet selanjutnya diinisiasi oleh pembentukan trombin.
Kaskade ini pada akhirnya akan membentuk “trombus merah” yang akan memperkuat
gumpalan darah (Munnix, et al., 2009).
Lapisan endotel pembuluh darah yang utuh melepaskan dua antiagregasi utama,
yaitu prostasiklin (PGI2) dan nitric oxide (NO). Kedua substansi ini mencegah
terbentuknya trombus di dalam pembuluh darah (Gryglewski, et al., 1988).
2.2. Aspirin
Aspirin telah dievaluasi secara teliti penggunaannya sebagai obat antiplatelet.
Dalam sebuah penelitian meta-analisis dengan lebih dari 100 percobaan secara random
pada pasien dengan risiko tinggi, aspirin telah terbukti dapat mencegah kematian akibat
penyakit vaskuler hingga 15% dan mencegah kejadian vaskuler yang tidak fatal hingga
mencapai 30% (Patrono, et al., 2004).
2.2.1. Farmakokinetik
Asam salisilat adalah asam organik sederhana dengan pKa 3,0. Aspirin
(Acetylsalicylic Acid : ASA) mempunyai pKa 3,5. Salisilat cepat diabsorbsi dari
lambung dan usus halus bagian atas, menghasilkan kadar puncak dalam plasma dalam
waktu 1-2 jam. Aspirin diabsorbsi begitu saja dan cepat dihidrolisis (waktu-paruh
serum 15 menit) menjadi asam asetat dan salisilat oleh esterase dalam jaringan dan
darah. Salisilat terikat pada albumin, tetapi ikatan dan metabolisme salisilat dapat
menjadi jenuh sehingga fraksi yang tidak terikat meningkat seiring meningkatnya
konsentrasi total. Di luar kandungan dalam tubuh total sebesar 600 mg, peningkatan
13
dosis salisilat meningkatkan konsentrasi salisilat secara tidak proporsional. Seiring
meningkatnya dosis aspirin, waktu-paruh eliminasi salisilat meningkat dari 3-5 jam
(untuk dosis 600 mg/hari) menjadi 12-16 jam (dosis >3,6 g/hari). Alkalinisasi urine
meningkatkan laju ekskresi salisilat bebas dan konjugatnya yang larut dalam air
(Katzung, 2012).
2.2.2. Mekanisme Kerja
2.2.2.1.Efek antiplatelet
Aspirin menghambat agregasi platelet melalui asetilasi reversibel dan inaktivasi
COX, menyebabkan penghambatan produksi TxA2 (Corazzi, et al., 2005). Platelet
dewasa normal pada manusia hanya mengekspresikan COX-1 karena platelet tidak
memiliki nukleus, sehingga tidak mampu mensintesis enzim secara de novo. Hal ini
menyebabkan efek aspirin pada platelet bersifat permanen. Dengan demikian, efek
kardioprotektif aspirin dicapai melalui gangguan terhadap fungsi platelet yang
bergantung pada tromboksan A2 secara permanen dan ireversibel, sehingga dapat
menurunkan tingkat kejadian trombosis arteri akut.
2.2.2.2.Efek Lainnya
Aspirin
dalam
penggunaan
klinis
tidak
hanya
digunakan
sebagai
antiplatelet,namun juga sebagai antiinflamasi, analgesik, dan juga antipiretik.
Sebagai antiinflamasi, aspirin merupakan penghambat nonselektif untuk kedua
isoform COX, tapi salisilat lebih tidak efektif dalam menghambat isoform tersebut.
Salisilat nonterasetilasi dapat bekerja sebagai penangkap radikal oksigen. Aspirin
secara ireversibel menghambat COX dan menghambat agregasi platelet, sementara
salisilat non-terasetilasi tidak.
Sebagai analgesik, aspirin paling efektif meredakan nyeri dengan intensitas
ringan sampai sedang melalui efeknya pada peradangan dank arena aspirin
kemungkinan menghambat rangsang nyeri pada lokasi subkortikal
14
Sedangkan efek antipiretik aspirin mungkin diperantarai baik oleh inhibisi
COX di susunan saraf pusat maupun oleh inhibisi interleukin-1 (yang dilepaskan dari
makrofag selama episode inflamasi) (Katzung, 2012).
2.2.3.Efek Simpang
Pada dosis biasa, efek simpang aspirin yang utama adalah gangguan lambung
(intoleransi) dan ulkus lambung serta duodenum. Hepatotoksisitas, asma, ruam, dan
toksisitas ginjal lebih jarang terjadi. Peningkatan perdarahan fekal yang berhubungan
dengan sosis, rutin disebabkan oleh pemberian aspirin, meskipunt terjadi beberapa
adaptasi mukosa pada banyak pasien sehingga perdarahan kembali ke nilai dasar dalam
waktu 4-6 minggu.
Pada dosis yang lebih tinggi, pasien dapat mengalami salisilisme seperti muntah,
tinnitus, pendengaran berkurang, dan vertigo, yang dapat dipulihkan dengan
menurunkan dosis. Dosis salisilat yang besar tetap menyebabkan hiperpnea melalui
efek langsung pada medula oblongata. Pada kadar salisilat yang toksik, alkalosis
respiratorik diikuti oleh asidosis metabolic (akumulasi salisilat), depresi pernapasan,
dan bahkan dapat terjadi kardiotoksisitas dan intoleransi glukosa. Penggunaan aspirin
dikontraindikasikan pada pasien hemophilia.
Overdosis salisilat merupakan suatu kegawatdaruratan medis dan membutuhkan
tindakan rawat inap (Katzung, 2012).
2.3. Propolis
Propolis merupakan suatu campuran alami yang dihasilkan oleh lebah Apis
mellifera dari zat-zat yang dikumpulkan dari beberapa bagian tumbuhan, tunas, dan
eksudat. Kata propolis berasal dari bahasa Yunani, dimana kata pro berarti ‘tempat
masuk’ dan polis berarti ‘komunitas’ atau ‘kota’, dimana artinya produk alami ini
digunakan dalam pertahanan sarang lebah. Istilah lain dari propolis adalah bee glue
(lem lebah). Sesuai dengan sifatnya yang lunak dan fungsinya secara mekanis, lebah
15
Apis mellifera menggunakan propolis untuk mengonstruksi dan memperbaiki sarang
mereka, misalnya untuk menutup celah dan retakan serta merapikan dinding sarang
bagian dalam (Burdock, 1998) dan sebagai sawar pelindung daripada pemangsa
eksternal seperti ular, cicak, dan sebagainya, atau untuk melindungi dari angin dan
hujan. Lebah Apis mellifera mengumpulkan propolis dari tumbuh-tumbuhan yang
berbeda pada zona dengan iklim dan temperatur yang berbeda.
Sejak masa lalu, propolis telah digunakan secara luas oleh manusia, terutama
dalam pengobatan tradisional untuk menyembuhkan beberapa penyakit. Penduduk
Mesir Kuno menggunakan propolis untuk membalsami mayat-mayat mereka. Suku
Inca menggunakan propolis sebagai agen antipiretik. Tabib-tabib Romawi dan Yunani
menggunakannya sebagai desinfektan mulut dan sebagai antiseptik dan obat
penyembuh pada penanganan luka, diresepkan untuk terapi topikal pada luka
permukaan kulit maupun mukosa (Bankova, et al., 2000). Karena aktivitas
antibakterinya, propolis menjadi sangat popular di Eropa antara abad ke-17 dan abad
ke-20.
Penelitian ilmiah pertama terhadap propolis dipublikasikan pada tahun 1908
termasuk kandungan kimia dan komposisinya. Karena efeknya sebagai antiplatelet,
antimikrobial, antiviral, dan antioksidan, propolis digunakan secara luas pada obatobatan untuk manusia dan hewan, farmakologi, dan kosmetik (Wagh, 2013).
2.3.1.Karakteristik dan Komposisi
2.3.1.1.Karakteristik
Propolis (lem lebah) merupakan bahan liat dan kaku yang mengandung resin,
memiliki bau aromatik, pada suhu di bawah 15oC akan mengeras, menjadi liat dan
lengket pada suhu 36oC, dan akan meleleh menjadi cairan yang lekat pada suhu 6070oC. Berat jenisnya bervariasi tergantng dari jenis tanaman yang dikoleksi yaitu
berkisar dari 1,1112 sampai 1,136. Propolis tidak larut dalam air, sedikit larut dalam
terpentin, sebagian larut dalam alkohol, dan mudah larut dalam eter dan kloroform.
16
2.3.1.2.Komposisi
Propo
Nama
: Muhammad Luthfi
Tempat, Tanggal Lahir
: Lhokseumawe, 5 November 1994
Agama
: Islam
Alamat
: Jln. Dr. Hamzah No. 4
(Samping Mesjid Dakwah Kampus USU)
Medan Baru, Medan – 20154
Riwayat Pendidikan
:
1. TK RA Nurul Hilal Bireuen (1998-2000)
2. SD Negeri 21 Bireuen (2000-2003 & 2004-2006)
3. SD Sekolah Indonesia Bangkok (2003-2004)
4. SMP Negeri 1 Bireuen (2006-2009)
5. SMAS Fatih Bilingual School Banda Aceh (2009-2012)
6. Fakultas Kedokteran USU Medan (2012-sekarang)
LAMPIRAN 1. Dosis Konversi
DOSIS KONVERSI
1.
Aspirin
Dosis aspirin yang digunakan pada manusia adalah 80 mg per hari. Adapun
konversi dosis pada manusia dengan berat 70 kg ke mencit 20 gram adalah 0,0026
(Laurence & Bacharach, 1964).
Perhitungan dosis konversi:
80 mg/hari x 0,0026 : 20 x 1000 = 10,4 mg/kgBB mencit/hari
Dosis aspirin untuk mencit : 10,4 mg/kgBB mencit/hari.
2.
Propolis
Dosis propolis yang digunakan pada manusia adalah 500 mg per hari. Adapun
konversi dosis pada manusia dengan berat 70 kg ke mencit 20 gram adalah 0,0026
(Laurence & Bacharach, 1964).
Perhitungan dosis konversi:
500 mg x 0,0026 : 20 x 1000 = 65 mg/kgBB mencit/hari
Dosis propolis untuk mencit : 65 mg/kgBB mencit/hari.
3.
Bee Pollen
Dosis bee pollen yang digunakan pada manusia adalah 520 mg per hari. Adapun
konversi dosis pada manusia dengan berat 70 kg ke mencit 20 gram adalah 0,0026.
(Laurence & Bacharach, 1964).
Perhitungan dosis konversi:
520 mg/hari x 0,0026 : 20 x 1000 = 68 mg/kgBB mencit/hari
Dosis bee pollen untuk mencit : 68 mg/kgBB mencit/hari.
Dosis yang diberikan pada kelompok perlakuan akan diencerkan 0,5 ml sesuai
dengan kapasitas lambung mencit.
LAMPIRAN 2. Data Penelitian
Mencit
plasebo1
plasebo2
plasebo3
plasebo4
plasebo5
plasebo6
plasebo7
plasebo8
aspirin1
aspirin2
aspirin3
aspirin4
aspirin5
aspirin6
aspirin7
aspirin8
propolis1
propolis2
propolis3
propolis4
propolis5
propolis6
propolis7
propolis8
beepollen1
beepollen2
beepollen3
beepollen4
beepollen5
beepollen6
beepollen7
beepollen8
Kelompok Pemberian Waktu Perdarahan (detik)
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Plasebo
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Aspirin
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Propolis
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
Bee Pollen
118
114
100
40
103
91
158
125
507
468
470
352
232
452
789
273
269
196
327
312
245
434
248
450
133
228
277
209
299
207
103
168
LAMPIRAN 3. Hasil Analisa Data SPSS
40
DAFTAR PUSTAKA
Baigent, C., Sudlow, C., Collins, R. & Peto, R., 2002. Collaborative Meta-Analysis of
Randomised Trials of Antiplatelet Therapy for Prevention of Death, Myocardial
Infarction, and Stroke in High Risk Patients. British Medical Journal, Volume 324, pp.
71-86.
Bankova, V. S., Castro, S. L. D. & Marcucci, M. C., 2000. Propolis: Recent Advances in
Chemistry and Plant Origin. Apidologie, Volume 31, pp. 3-15.
Barrett, K. E., Boitano, S., Barman, S. M. & Brooks, H. L., 2012. Ganong's Review of
Medical Physiology. 24th ed. New York: McGraw-Hill.
Burdock, G. A., 1998. Review of the Biological Properties and Toxicity of Bee Propolis
(Propolis). Food and Chemical Toxicology, Volume 36, pp. 347-363.
Castro, S. L. D., 2001. Propolis: Biological and Pharmacological Activities. Therapeutic
Uses of this Bee-product. ARBS Annual Review of Biomedical Sciences, Volume 3, pp.
49-83.
Chen, T.-G.et al., 2007. Antiplatelet Activity of Caffeic Acid Phenethyl Ester is Mediated
through a Cyclic GMP-Dependent Pathway in Human Platalets. Chinese Journal of
Physiology, 50(3), pp. 121-126.
Colvin, B., 2004. Physiology of Haemostasis. Vox Sanguinis, 87(Suppl. 1), pp. 43-46.
Corazzi, T. et al., 2005. Direct and Irreversible Inhibition of Cyclooxygenase-1 by
Nitroaspirin (NCX 4016). The Journal of Pharmacology and Experimental
Therapeutics, 315(3), pp. 1331-1337.
Choi, E.-M., 2007. Antinociceptive and Antiinflamatory Activities of Pine (Pinus densiflora)
Pollen Extract. Phytotherapy Research, 21(5), pp. 471-475.
41
Doutremepuich, C., Aguejouf, O., Desplat, V. & Eizayaga, F. X., 2011. Paradoxical Effect
of Aspirin. Thrombosis, Volume 2012.
Farnesi, A. P. et al., 2009. Effects of Stingless Bee and Honey Bee Propolis on Four Species
of Bacteria. Genetics and Molecular Research, 8(2), pp. 635-640.
Ganong, W. F., 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. 22 ed. Jakarta: Penerbit Buku
Kedokteran EGC.
Ghoshal, K. & Bhattacharyya, M., 2014. Overview of Platelet Physiology: Its Hemostatic
and Nonhemostatic Role in Disease Pathogenesis. The Scientific World Journal, pp. 116.
Gryglewski, R. J., Botting, R. M. & Vane, J. R., 1988. Mediators Produced by the Endothelial
Cell. Hypertension, Volume 12, pp. 530-548.
Guyton, A. C. & Hall, J. E., 2006. Textbook of Medical Physiology. 11th ed. Philadelphia:
Elsevier Inc.
Hsiao, G. et al., 2007. Vharacterization of a Novel and Potent Collagen Antagonist, Caffeic
Acid Phenethyl Ester, in Human Platelets: in vitro and in vivo Studies. Cardiovascular
Research, Volume 75, pp. 782-792.
Katzung, B. G. ed., 2012. In: Farmakologi Dasar & Klinik. Jakarta: Penerbit Buku
Kedokteran EGC.
Koc, A. N., Silici, S., Sariguzel-Mutlu, F. & Sagdic, O., 2007. Antifungal Activity of Propolis
in Four Different Fruit Juices. Foot Technology. Biotechnology, 45(1), pp. 57-61.
Komosinska-Vassev, K. et al., 2015. Bee Pollen: Chemical Composition and Therapeutic
Application. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, pp. 1-6.
Kumar, N., K. K., A. M., Dang, R. & Husain, A., 2008. Antioxidant and Antimicrobial
Activity of Propolis from Tamil Nadu Zone. Journal of Medicinal Plant Research, 2(12),
pp. 361-364.
42
Liu, Y., Jennings, N. L., Dart, A. M. & Du, X.-J., 2012. Standardizing a simpler, more
sensitive and accurate tail bleeding assay in mice. World Journal of Experimental
Medicine, 2(2), pp. 30-36.
Munnix, I. C., Cosemans, J. M., Auger, J. M. & Heemskerk, J. W., 2009. Platelet Response
Heterogenity in Thrombus Formation. Thromb Haemost, Volume 102, pp. 1149-1156.
Palta, S., Saroa, R. & Palta, A., 2014. Overview of the Coagulation System. Indian Journal
of Anaesthesia, 58(5), pp. 515-523.
Patrono, C. et al., 2004. Platelet-Active Drugs: The Relationships Among Dose,
Effectiveness, and Side Effects. CHEST, Volume 126, pp. 234S-264S.
Peters, R. J. et al., 2003. Effects of Aspirin Dose When Used Alone or in Combination with
Clopidogrel in Patients with Acute Coronary Syndromes. Circulation, Volume 108, pp.
1682-1687.
Purohit, A., Joshi, K., Kotru, B. & Kotru, S., 2013. Effect of Indian Propolis on
Hematological Parameters in Experimentally Induced Hyperlipidemic Male Albino
Rabbits. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 6(1), pp. 17-19.
Rodvien, R. & Mielke, Jr., C. H., 1976. Role of Platelets in Hemostasis and Thrombosis. The
Western Journal of Medicine, Volume 125, pp. 181-186.
Sheu, J. R. et al., 2004. Mechanisms involved in the antiplatelet activity of rutin, a glycoside
of the flavonol quercetin, in human platelets. Journal of Agricultural and Food
Chemistry , 52(14), pp. 4414-4418.
Szczesna, T., 2006. Long-Chain Fatty Acids Composition of Honeybee-Collected Pollen.
Journal of Apicultural Science, 50(2), pp. 65-79.
Thornton, P. & Douglas, J., 2010. Coagulation in Pregnancy. Best Practice and Research.
Clinical Obstetrics & Gynaecology, 24(3), pp. 339-352.
Tortora, G. J., 2009. Principles of Anatomy and Physiology. 12 ed. Danvers: John Wiley &
Sons, Inc.
43
Vane, J. R., 1971. Inhibition of prostaglandin synthesis as a mechanism of action for aspirinlike drugs. Nature New Biology, 231(25), pp. 232-235.
Verkerk, R., 2009. Can The Failing Western Medical Paradigm be Shifted Using the
Principle of Sustainability. ACNEM Journal, Volume 28, pp. 4-10.
Wagh, V. D., 2013. Propolis: A Wonder Bees Product and Its Parmacological Potentials.
Advances in Pharmacological Sciences, pp. 1-11.
Walker, P. & Crane, E., 1987. Constituents of Propolis. Apidologie, 18(4), pp. 327-334.
World
Health
Available
Organization,
at:
[Accessed 28 May 2015].
n.d.
NCD
Mortality
and
Morbidity.
[Online]
http://www.who.int/gho/ncd/mortality_morbidity/en/
21
BAB 3
KERANGKA KONSEP DAN DEFINISI OPERASIONAL
3.1. Kerangka Konsep Penelitian
Berdasarkan tujuan penelitian yang telah dipaparkan sebelumnya, maka
kerangka konsep dalam penelitian ini adalah :
Variabel Independen
Variabel dependen
Pemberian Aspirin, Propolis,
dan
Bee
Pollen
sebagai
Waktu perdarahan pada mencit
antiplatelet
3.2. Definisi Operasional
3.2.1. Definisi
Aspirin adalah obat dalam kelompok salisilat dan merupakan salah satu jenis
dari obat antiplatelet.
Propolis adalah produk resin sarang lebah yang mengandung cairan
tumbuhan yang bercampur dengan lilin yang dihasilkan oleh lebah dan oleh
lebah digunakan sebagai perekat.
Bee Pollen adalah serbuk sari bunga jantan yang diambil oleh lebah dan
digunakan sebagai makanan pokok dari seluruh koloni lebah madu.
Waktu perdarahan pada mencit diukur dengan menggunakan Metode Tail
Bleeding. Ekor mencit dipotong menggunakan pisau bedah, kemudian
dihitung waktu mulai dari darah pertama menetes hingga tetesan darah
berhenti. Darah diisap menggunakan kertas saring/kertas tissue dengan tanpa
menyentuh bagian ekor yang terluka.
22
3.2.2. Cara Ukur
Menggunakan Metode Tail Bleeding
3.2.3. Alat Ukur
Pisau bedah (scalpel)
Kapas alkohol
Kertas saring/kertas tissue
Stopwatch
3.2.4. Skala Pengukuran
Rasio
3.3. Hipotesis
1. Waktu perdarahan pada ekor mencit dengan pemberian Propolis lebih
panjang atau sama dengan pemberian Aspirin
2. Waktu perdarahan pada ekor mencit dengan pemberian Bee Pollen lebih
panjang dibandingkan dengan kelompok plasebo
23
BAB 4
METODE PENELITIAN
4.1. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain penelitian
randomized post test only control group design dengan teknik single-blind. Penelitian
menggunakan hewan coba yang dibagi menjadi 4 kelompok.
K1
R
S
K2
K3
K4
O1
O2
O3
O4
Keterangan :
S
= Sampel
R
= Randomisasi
K1
= Kelompok hewan kontrol (-)
K2
= Kelompok perlakuan dengan pemberian Aspirin per oral selama 12 hari
K3
= Kelompok perlakuan dengan pemberian Propolis per oral selama 12 hari
K4
= Kelompok perlakuan dengan pemberian Bee Pollen per oral selama 12 hari
O1
= Hasil pengamatan kelompok kontrol (-)
O2
= Hasil pengamatan kelompok perlakuan dengan pemberian Aspirin
O3
= Hasil pengamatan kelompok perlakuan dengan pemberian Propolis
O4
= Hasil pengamatan kelompok perlakuan dengan pemberian bee pollen
24
4.2. Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian ini akan dilakukan di Laboratorium Farmakologi Departemen
Farmakologi dan Terapetik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
Penelitian direncanakan dimulai pada September – Desember 2015. Penelitian akan
dilakukan setelah mendapat persetujuan Ethical Clearance dari Komisi Etik Fakultas
Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
4.3. Populasi dan Sampel Penelitian
Pada penelitian ini akan digunakan mencit jantan (mus musculus), galur Double
Distsch Webster umur : 2-3 bulan (dewasa), berat badan 20-30 gram, sehat, belum
pernah digunakan untuk penelitian lain. Mencit diperoleh dari Laboratorium FMIPA
Biologi USU Medan. Jumlah hewan coba perkelompok ditentukan dengan rumus
menurut Federer (1963), sebagai berikut:
(t-1)(n-1) ≥ 15
Keterangan :
n
= besar sampel
t
= jumlah kelompok hewan coba
Maka besar sampel yang dibutuhkan adalah :
(t-1)(n-1) ≥ 15
(4-1)(n-1) ≥ 15
(n-1) ≥ 5
n ≥ 6
Berdasarkan rumus Federer tersebut, dibutuhkan sampel sebanyak minimal 6
ekor hewan coba pada masing-masing kelompok. Dengan penambahan perkiraan drop
out sebesar 10%, maka besar sampel minimal yang diperlukan untuk tiap kelompok
adalah 7 hewan coba.
25
Berdasarkan jumlah sampel minimal yang diperbolehkan secara statistik dan
tidak melanggar prinsip 3 R ( Reduction, Replacement, Refinement ) dalam penelitian
hewan coba, maka jumlah sampel yang diambil menjadi 8 ekor untuk tiap-tiap
kelompok. Jadi jumlah seluruh hewan coba yang dibutuhkan sebanyak 32 ekor.
Pemilihan sampel dan pengelompokannya dilakukan menggunakan randomisasi
sederhana (simple random sampling), dimana pada setiap 32 ekor sampel yang
memenuhi kriteria inklusi yang telah ditentukan akan diberi nomor, untuk kemudian
dibagi menjadi 4 kelompok yang sama besar dengan bantuan program komputer
(https://www.randomizer.org/)
4.4. Kriteria Inklusi, Eksklusi dan Drop Out
4.4.1. Kriteria Inklusi :
1. Mencit (mus musculus) galur Double Distsch Webster, jantan, umur : 2-3
bulan, berat badan : 20-30 gram.
2. Mencit sehat, bergerak aktif, dan berasal dari kelompok yang sama.
4.4.2. Kriteria Eksklusi
1. Mencit sebelumnya telah mendapatkan intervensi obat.
4.4.3. Kriteria Drop Out
1. Mencit mati dalam periode penelitian.
4.5. Cara Kerja dan Alur Penelitan
4.5.1. Pengambilan Bahan
Pada Penlitian ini bahan-bahan produk perlebahan yang digunakan adalah :
Aspirin (@ BAYER)
Propolis (@ High Desert Indonesia - HDI)
Bee Pollen (@ High Desert Indonesia - HDI)
26
4.5.2. Persiapan dan Pemeliharaan hewan Coba
Sebelum penelitian dilakukan, adaptasi hewan di lokasi dengan cahaya 12 jam
siklus jadwal gelap, diet yang standar yaitu makan dan minum ad libitum. Makanan
yang dikonsumsi berasal dari Charoen Pokhpand. Hewan coba dipelihara dalam suhu
25 ± 10 º C, kelembaban relatif 60 %. Mencit dipelihara selama masa penelitian, berat
badan ditimbang sebelum dan sesudah percobaan.
4.5.3. Cara Kerja
Mencit jantan (mus musculus) jantan, galur DDW, sehat ,badan : 20-30 gram,
dibagi menjadi 4 kelompok :
1.
Mencit normal sebagai kontrol (-)
2.
Mencit dengan pemberian Aspirin namun tidak diberi intervensi (kontrol +)
3.
Mencit dengan pemberian Propolis per oral selama 12 hari
4.
Mencit dengan pemberian Bee Pollen per oral selama 12 hari
Dilakukan pemberian pada mencit mulai hari pertama penelitian pendahuluan selama
12 hari menurut Tabel Dosis Konversi.
Dosis pemberian :
1.
Aspirin
: 10,4 mg/kgBB mencit/hari
2.
Propolis
: 65 mg/kgBB mencit/hari
3.
Bee Pollen : 68 mg/kgBB mencit/hari
Setelah 12 hari, seluruh hewan coba mencit dilakukan pengukuran dengan Metode Tail
Bleeding sebagai berikut :
1.
Bersihkan daerah yang akan dilakukan insisi (ekor mencit) dengan kapas
alkohol.
2.
Pertama, ekor mencit dipotong menggunakan pisau bedah dan biarkan darah
keluar dengan bebas. Saat darah mulai keluar jalankan stopwatch.
27
3.
Isap darah yang keluar dengan kertas saring/kertas tissue setiap setengah
menit sampai darah berhenti mengalir (jangan sampai kertas saring/kertas
tissue menyentuh luka). Hentikan stopwatch saat darah tidak dapat diisap
lagi. Catat waktunya.
Tabel 4.1. Konversi perhitungan dosis (Laurence & Bacharach, 1964) secara per oral
Mencit
Tikus
Marmut Kelinci
20gram 200 gr 400 gr
Mencit
20gram
Tikus
200 gr
Marmut
400 gr
Kelinci
1,5 kg
Kucing
2 kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
1,5 kg
Kucing
Kera
Anjing
Manusia
2 kg
4 kg
12 kg
70 kg
1.0
7.0
12.25
27.8
29.7
64.1
124.2
387.9
0.14
1.0
1.74
3.9
4.2
9.2
17.8
56.0
0.08
0.57
1.0
2.25
2.4
5.2
10.2
31.5
0.04
0.25
0.44
1.0
1.08
2.4
4.5
14.2
0.03
0.23
0.41
0.92
1.0
2.2
4.1
13.0
0.016
0.11
0.19
0.42
0.45
1.0
1.9
6.1
0.008
0.06
0.1
0.22
0.24
0.52
1.0
3.1
0.0026
0.018
0.031
0.07
0.076
0.16
0.32
1.0
28
4.6. Analisis Data
Data yang didapat akan dianalisis dengan ANOVA searah menggunakan
program komputer bila data parametrik terdistribusi normal. Apabila data tidak
terdistribusi normal maka data yang diambil non parametrik dan diuji dengan KruskallWallis. Suatu perbedaan dinyatakan signifikan bila p < 0.05.
29
BAB 5
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
5.1. Hasil Penelitian
5.1.1.Deskripsi Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakologi, Departemen Farmakologi
dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara (FK USU), Medan.
Lokasi ini dipilih dengan mempertimbangkan kelengkapan sarana dan fasilitas
pendukung yang cukup baik untuk menunjang keberhasilan dari penelitian ini.
Penelitian dilaksanakan di ruang Laboratorium Farmakologi yang terletak di lantai 1
gedung Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara. Gedung
Farmakologi Universitas Sumatera Utara berada di Jalan Universitas No. 1, Kampus
Universitas Sumatera Utara, Kelurahan Padang Bulan, Kecamatan Medan Baru,
Medan dengan batas wilayah :
Batas Utara : Gedung Abdul Hakim Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
Batas Selatan : Departemen Ilmu Gizi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara
Batas Timur : Jalan Universitas, Kampus Universitas Sumatera Utara.
Batas Barat : Fakultas Keperawatan Universitas Sumatera Utara.
5.1.2.Karakteristik Sampel dan Analisa Deskriptif Hasil Penelitian
Dalam penelitian ini, sampel yang digunakan adalah 32 ekor mencit jantan galur
Double Distsch Webster (DDW). Kemudian sampel dibagi menjadi 4 kelompok secara
randomisasi sederhana. Sampel selanjutnya diberikan obat/zat yang berbeda selama 12
hari. Setelah 12 hari, sampel diberikan perlakuan invasif berupa pemotongan bagian
ekor dan dilakukan pengukuran waktu perdarahan dalam satuan detik. Data rerata
waktu perdarahan pada kelompok plasebo, kelompok dengan pemberian aspirin,
30
kelompok dengan pemberian propolis, dan kelompok dengan pemberian bee pollen
dapat dilihat pada Tabel 5.1 di bawah ini.
Tabel 5.1. Rerata Waktu Perdarahan pada Empat Kelompok Sampel dalam
Satuan Detik
Kelompok
Pemberian
N
Rerata Waktu
Standar
Perdarahan
Deviasi
Plasebo
8
106,1 detik
33,6 detik
Aspirin
8
442,9 detik
171,9 detik
Propolis
8
310,1 detik
91 detik
Bee Pollen
8
203 detik
67 detik
Berdasarkan hasil penelitian pada Tabel 5.1 di atas, kelompok dengan rerata
waktu perdarahan terpanjang adalah kelompok dengan pemberian Aspirin, yaitu
442,9±171,9 detik. Sedangkan kelompok dengan rerata waktu perdarahan terpendek
adalah kelompok plasebo atau kelompok dengan tanpa pemberian, yaitu 106,1±33,6
detik.
Gambar 5.1. Grafik Waktu Perdarahan Berdasarkan Kelompok Pemberian
500
450
400
350
detik
300
250
200
150
100
50
0
Perlakuan
Plasebo
Aspirin
Propolis
Bee Pollen
31
5.1.3.Uji Normalitas Data
Pada penelitian ini, uji normalitas yang digunakan adalah uji Shapiro-Wilk. Data
dinyatakan terdistribusi normal jika p value > 0,05 dan dinyatakan tidak terdistribusi
normal jika p value < 0,05. Hasil komputasi uji normalitas pada penelitian ini dapat
dilihat pada tabel 5.2 di bawah.
Tabel 5.2. Normalitas Data pada Empat Kelompok Pemberian dengan Uji
Shapiro-Wilk
Kelompok
Statistik
df
Sig.
Plasebo
0,935
8
0,560
Aspirin
0,904
8
0,316
Propolis
0,910
8
0,352
Bee Pollen
0,970
8
0,896
Pemberian
Berdasarkan hasil komputasi uji normalitas pada Tabel 5.2, diperoleh nilai signifikansi
untuk kelompok plasebo sebesar 0,560, untuk kelompok dengan pemberian Aspirin
sebesar 0,316, untuk kelompok dengan pemberian Propolis sebesar 0,352, dan untuk
kelompok Bee Pollen sebesar 0,896. Karena nilai signifikansi pada keempat kelompok
pemberian lebih besar dari 0,05, maka dapat disimpulkan bahwa data terdistribusi
normal.
5.1.4.Uji Homogenitas Data
Untuk kebutuhan analisis, maka data yang akan dianalisis harus memenuhi
asumsi yang mendasari ANOVA yaitu bahwa varian dari beberapa populasi adalah
sama (homogen). Jika nilai signifikansi < 0,05, maka dikatakan bahwa varian dari dua
atau lebih kelompok populasi data adalah tidak sama. Sedangkan jika nilai signifikansi
> 0,05, maka dikatakan bahwa varian dari dua atau lebih kelompok populasi data
32
adalah sama (homogen). Hasil komputasi uji homogenitas pada penelitian ini dapat
dilihat pada Tabel 5.3 di bawah.
Tabel 5.3. Homogenitas Data pada Empat Kelompok Pemberian
Levene
Statistic
2,805
df1
df2
Sig.
3
28
0,058
Berdasarkan hasil komputasi uji homogenitas pada tabel di atas, diperoleh p value
sebesar 0,058, dimana 0,058 > 0,05. Dari hasil tersebut dapat diketahui bahwa empat
kelompok populasi data pada penelitian ini memiliki varian yang sama (homogen)
sehingga memenuhi asumsi yang mendasari ANOVA.
5.1.5.Uji Komparabilitas
Uji komparabilitas bertujuan membandingkan rerata waktu perdarahan pada
kelompok plasebo, kelompok dengan pemberian Aspirin, kelompok dengan pemberian
Propolis, dan kelompok dengan pemberian Bee Pollen. Berdasarkan hasil uji
normalitas dan homogenitas, data pada penelitian ini diketahui terdistribusi normal dan
memiliki varian yang sama (homogen), maka analisis komparatif yang digunakan
adalah uji untuk data parametrik yaitu One Way ANOVA. Hasil analisis dengan uji One
Way ANOVA disajikan pada Tabel 5.4 di bawah.
Tabel 5.4. Uji One Way ANOVA Rerata Waktu Perdarahan
Kelompok
Subjek
df
Antara kelompok
3
Didalam kelompok
28
F
Sig.
15,397
0,000
33
Berdasarkan hasil pada tabel di atas, didapatkan nilai p value sebesar 0,000. Oleh
karena itu, maka dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan rerata waktu perdarahan
pada keempat kelompok pemberian (p0,05). Berdasarkan hal ini,
hipotesis peneliti yang menyatakan bahwa “Waktu perdarahan pada ekor
mencit dengan pemberian Bee Pollen lebih panjang dibandingkan dengan
kelompok plasebo” tidak dapat diterima. Meskipun tidak terbukti berbeda
39
secara statistik, namun rerata waktu perdarahan pada kelompok pemberian Bee
Pollen lebih panjang 96,9 detik dibandingkan rerata kelompok plasebo.
6.2. Saran
Beberapa hal yang dapat disarankan berdasarkan hasil penelitian yang telah
dilakukan antara lain :
1. Melihat hasil penelitian ini yang membuktikan adanya efek antiplatelet dari
Propolis terhadap memanjangnya waktu perdarahan pada mencit, diharapakan
supaya penelitian ini dapat terus dikembangkan untuk dapat digunakan sebagai
agen antiagregasi platelet pada manusia dengan didukung oleh bukti-bukti
ilmiah yang valid.
2. Untuk efek antiagregasi platelet dari Bee Pollen, diharapkan adanya penelitian
lebih lanjut pada hewan coba dengan jumlah sampel hewa coba yang lebih besar
dan dosis yang lebih tinggi untuk dapat mencapai hasil yang diharapkan.
3. Secara keseluruhan, untuk penelitian selanjutnya agar dapat menggunakan
faktor-faktor lain yang mungkin dapat mempengaruhi panjangnya waktu
perdarahan pada hewan coba selain efektivitas antiplatelet zat/obat yang diuji
coba. Contohnya seperti berat badan dan usia hewan coba, serta tingkat stress
dari hewan coba saat diberi perlakuan yang bisa menyebabkan bias terhadap
hasil penelitian.
5
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Hemostasis dan Platelet
2.1.1. Hemostasis
Istilah hemostasis berarti mencegah terjadinya kehilangan darah (Guyton & Hall,
2006). Secara lebih spesifik, hemostasis merupakan proses pembentukan gumpalan
darah (blood clot) pada dinding pembuluh darah yang mengalami kerusakan dan
berguna
untuk
mencegah
terjadinya
kehilangan
darah
sementara
tetap
mempertahankan darah dalam kondisi cair di dalam sistem vaskuler. Sekumpulan
mekanisme kompleks yang saling berhubungan bekerja untuk menjaga keseimbangan
antara proses koagulasi dan antikoagulasi (Barrett, et al., 2012).
Proses hemostasis terjadi dengan melibatkan interaksi yang kompleks dari
dinding pembuluh darah, platelet, sistem koagulasi, dan fibrinolisis (Thornton &
Douglas, 2010). Hemostasis dapat dicapai dengan beberapa cara : konstriksi pembuluh
darah, pembentukan sumbatan platelet, pembentukan blood clot akibat terjadinya
penggumpalan darah, dan yang terakhir terbentuknya jaringan fibrosa pada gumpalan
darah tadi untuk menutup daerah yang rusak pada pembuluh secara permanen (Guyton
& Hall, 2006). Walaupun terkesan rumit dan seolah bertahap, interaksi komponen
hemostasis ini sebenarnya saling berpaut dan berkerja secara efisien untuk
menghentikan perdarahan (Rodvien & Mielke, Jr., 1976).
Ketika pembuluh darah mengalami kerusakan, beberapa mekanisme akan
teraktivasi untuk melakukan kompensasi. Jika pembuluh tersebut memiliki lapisan
otot, maka vasokonstriksi terjadi. Selanjutnya, di setiap pembuluh darah, jika
antarmuka antara darah dan pembuluh mengalami perubahan seperti saat ruptur, maka
akan menyebabkan terjadinya perlekatan platelet pada struktur subintima yang baru
terpapar. Platelet yang melekat ini selanjutnya melepaskan ADP (adenosine
6
diphosphate) dan menyebabkan platelet-platelet yang lain ikut melepaskan lebih
banyak ADP, sehingga terjadilah agregasi platelet yang pada akhirnya membentuk
sumbatan platelet (Rodvien & Mielke, Jr., 1976). Sumbatan platelet ini sangat efektif
untuk mencegah terjadinya kehilangan darah pada pembuluh darah dengan diameter
yang relatif kecil. Terbentuknya benang-benang fibrin pada tahapan pengumpalan
darah selanjutnya akan membuat sumbatan platelet ini menjadi lebih kuat. Sumbatan
platelet sendiri dapat menghentikan perdarahan secara sempurna jika kerusakan yang
terjadi pada pembuluh darah tidak mencakup area yang terlalu luas (Tortora, 2009).
Selanjutnya, proses pembentukan gumpalan atau sumbatanan sekunder secara
definitif dilakukan oleh suatu proses yang disebut jalur koagulasi. Pada jalur ini,
interaksi sejumlah protein yang dikenal sebagai faktor penggumpalan bersama dengan
platelet dan jaringan berkerja untuk membentuk jaring (benang-benang) fibrin yang
menstabilkan gumpalan darah. Secara klasik, proses ini terjadi dalam dua jalur yaitu
intrinsik dan ekstrinsik dimana terdapat perbedaan pada inisiasinya walaupun
sebenarnya kedua jalur ini berkerja secara paralel (Palta, et al., 2014).
Ketika proses perbaikan dinding pembuluh darah selesai dan pada akhirnya
digantikan oleh jaringan fibrosa, gumpalan yang telah terbentuk juga akan menghilang.
Proses pembersihan gumpalan ini berlangsung paralel dengan pembentukannya
sehingga berfungsi juga untuk membatasi ukuran gumpalan. Plasminogen yang
terjebak dalam gumpalan darah nantinya akan diaktifkan oleh aktivatornya (tPA atau
u-PA) menjadi plasmin yang memiliki kemampuan untuk mengurai bekuan fibrin
menjadi FDP (fibrin degradation product) dan D-dimer (Colvin, 2004).
Sebagai kesimpulan, hemostasis adalah suatu proses fisiologis yang kompleks
untuk mempertahankan tingkat fluiditas darah melalui mekanisme koagulasi dan
antikoagulasi yang ada dalam tubuh. Ketidakseimbangan dari dua komponen ini
merupakan penyebab terjadinya perdarahan atau trombosis. Proses ini perlu dimengerti
untuk
dapat
memperkirakan
konsekuensi
patologis
dan
klinis
diimplementasikannya suatu intervensi farmakologis (Palta, et al., 2014).
.
sebelum
7
Gambar 2.1. Respon alami darah terhadap perubahan pada dinding pembuluh
darah
2.1.2. Platelet
Platelet, atau juga dikenal dengan trombosit, adalah sel-sel bergranula yang
bersirkulasi dan merupakan mediator penting pada proses hemostasis karena
membentuk agregat di tempat cedera pembuluh darah. Sel ini tidak memiliki nukleus
dan berdiameter 2-4 µm. Jumlahnya sekitar 300.000/µL darah dan pada keadaan
normal mempunyai waktu-paruh sekitar 4 hari. Megakariosit, yaitu sel raksasa di
sumsum tulang, membentuk platelet dengan cara mengeluarkan secuil sitoplasma ke
dalam sirkulasi. Antara 60% dan 75% platelet yang telah dilepas dari sumsum tulang
berada di dalam peredaran darah, sedangkan sisanya sebagian besar terdapat di dalam
limpa. Pengangkatan limpa (splenektomi) menyebabkan peningkatan hitung platelet
(trombositosis).
Platelet mempunyai suatu cincin mikrotubulus di sekeliling tepinya dan
invaginasi (lekukan) membran yang luas dengan sistem saluran kompleks yang
berhubungan dengan cairan ekstrasel. Membran selnya mengandung reseptor untuk
8
kolagen, ADP, faktor dinding pembuluh von Willebrand, dan fibrinogen.
Sitoplasmanya mengandung aktin, miosin, glikogen, lisosom, dan dua macam granula
: (1) granula padat, mengandung senyawa-senyawa nonprotein yang akan disekresikan
sebagai respons terhadap aktivasi platelet, mencakup serotonin, ADP, serta nukleotida
adenine lainnya, dan (2) granula α, yang mengandung protein sekresi selain hidrolase
lisosom. Protein tersebut meliputi faktor-faktor penggumpalan dan platelet-derived
growth factor (PDGF). PDGF juga dibentuk oleh makrofag dan sel endotel. Senyawa
ini merupakan dimer yang tersusun dari polipeptida subunit A dan B. PDGF ditemukan
baik sebagai senyawa bentuk homodimer (AA dan BB) maupun heterodimer (AB).
PDGF merangsang penyembuhan luka dan merupakan mitogen kuat bagi otot polos
vaskular. Platelet maupun dinding pembuluh darah mengandung faktor von Willebrand
yang berperan pada proses adhesi dan mengendalikan kadar faktor VIII dalam
sirkulasi.
Bila dinding pembuluh darah cedera, platelet akan melekat ke kolagen dan faktor
von Willebrand yang terpapar di dinding pembuluh melalui reseptor di membrane
platelet. Faktor von Willebrand adalah suatu molekul yang sangat besar yang
dihasilkan sel endotel. Perlekatan menyebabkan aktivasi platelet yang mengeluarkan
isi granulanya. ADP yang dibebaskan bekerja pada reseptor ADP platelet untuk
meningkatkan akumulasi platelet (agregasi platelet). Manusia memiliki paling sedikit
tiga jenis reseptor ADP platelet : P2Y1, P2Y2, dan P2X1. Reseptor-reseptor ini jelas
merupakan objek yang menarik untuk penelitian obat, dan beberapa inhibitor baru
tampaknya memberi harapan pada pengobatan serangan jantung dan stroke. Proses
agregasi ini juga dirangsang oleh platelet-activating factor (PAF), yakni suatu sitokin
yang disekresi oleh neutrophil dan monosit serta oleh platelet. Senyawa ini juga
memiliki aktivitas inflamasi. PAF merupakan eter fosfolipid, 1-alkil-2-asetilgliseril-3fosforilkolin, yang dibentuk dari lipid membrane. Senyawa ini bekerja melalui reseptor
terkait-protein G untuk meningkatkan produksi derivate asam arakidonat, termasuk
Tromboksan A2.
9
Pembentukan platelet diatur oleh berbagai faktor perangsang koloni (CSF) yang
mengontrol produksi megakariosit, serta trombopoietin, yakni suatu faktor protein
yang beredar di dalam darah. Faktor ini, yang mempermudah pematangan
megakariosit, dibentuk secara konstan oleh hati dan ginjal, dan platelet memiliki
reseptor untuk trombopoietin. Akibatnya, bila jumlah platelet rendah, trombopoietin
yang terikat akan berkurang dan lebih banyak tersedia untuk merangsang pembentukan
platelet. Sebaliknya, bila jumlah platelet tinggi, lebih banyak trombopoietin yang
terikat dan hanya sedikit yang bebas. Hal ini merupakan suatu bentuk kontrol umpanbalik pada pembentukan platelet. Bagian terminal-amino pada molekul trombopoietin
memiliki kemampuan untuk merangsang platelet, sedangkan bagian terminal-karboksil
mengandung banyak residu karbohidrat dan berperan pada ketersediaan trombopoietin
(Ganong, 2008).
2.1.3. Peran Platelet dalam Proses Hemostasis
Adanya kerusakan pada dinding pembuluh darah mengaktivasi platelet untuk
memulai proses penggumpalan, atau seperti yang telah diuraikan sebelumnya, proses
hemostasis. Platelet yang bersifat dinamis dapat segera diaktifkan atau dihambat oleh
beberapa stimulus endogen maupun eksogen, dan memulai proses hemostasis primer
dengan melengketkan dirinya pada dinding pembuluh darah yang mengalami
kerusakan. Reseptor GPIb-V-IX dan GPIa-IIa dan komponen-komponen subndotel
seperti vWf dan kolagen saling berinteraksi untuk memediasi proses ini (Gambar 2.2.).
Pengikatan ligan pada reseptor GP mengubah bentuk platelet dan memicu pelepasan
granul-granulnya, yang pada akhirnya membentuk agregarasi yang juga dikenal
dengan “sumbatan platelet” atau “trombus putih” (Gambar 2.3.).
Platelet memulai perubahan bentuknya dengan pembentukan pseudopoda ketika
konsentrasi Ca2+ intrasel melebihi suatu ambang tertentu. Selama proses perubahan ini,
terjadi pemaparan dan pengaktivan reseptor fibrinogen platelet (GPIIb/IIIa), dan proses
agregasi platelet terinisiasi. Proses ini disebut juga sebagai agregasi primer yang mana
bersifat reversible. Namun demikian, platelet yang sedang berada dalam fase istirahat
10
Gambar 2.2. Ilustrasi fungsi vWf pada proses perlekatan platelet
Gambar 2.3. Proses aktivasi platelet
tidak bisa berikatan dengan fibrinogen. Jalur tromboksan asam arakidonat adalah jalur
yang penting dalam aktivasi platelet (Gambar 2.4.).
ADP adalah aktivator platelet yang juga penting. P2Y12, yang merupakan
reseptor spesifik ADP, terdapat pada membrane platelet bersama dengan protein-G
inhibitory dan memediasi pelepasan Ca2+ yang diinduksi oleh ADP, menghambat
adenylate cyclase dan mengaktivasi reseptor GPIIb/IIIa yang menyebabkan agregasi
11
Gambar 2.4. Jalur biosintesis tromboksan
platelet. Tromboksan A2, ADP, dan substansi-substansi lain seperti serotonin
dilepaskan dari platelet yang teraktivasi, dan menyediakan umpan balik positif yang
penting dan memperkuat gumpalan kaya-platelet untuk menginisiasi proses agregasi
sekunder yang bersifat ireversibel (Gambar 2.5.). (Ghoshal & Bhattacharyya, 2014) .
Gambar 2.5. Ilustrasi jalur hemostasis
Respon pada platelet dilipatgandakan melalui substansi-substansi yang
dilepaskan oleh granul-granul platelet yang merekrut platelet-platelet lain serta sel-sel
darah. Sumbatan platelet yang terbentuk pada hemostasis primer relatif tidak stabil.
12
Jalur/kaskade penggumpalan darah dan pembentukan thrombin serta fibrin
memperpanjang hemostasis sekunder. Selama proses aktivasi platelet, lapisan
fosfolipid membran platelet menjadi bermuatan negatif, sehingga memfasilitasi
aktivasi proses penggumpalan (mis. FV, FVIIIa, FIXa, dan FX). Pengikatan kompleks
protrombinase (FXa, FVa, Ca2+, dan protrombin) pada membrane platelet terjadi pada
tahap ini. Proses aktivasi platelet selanjutnya diinisiasi oleh pembentukan trombin.
Kaskade ini pada akhirnya akan membentuk “trombus merah” yang akan memperkuat
gumpalan darah (Munnix, et al., 2009).
Lapisan endotel pembuluh darah yang utuh melepaskan dua antiagregasi utama,
yaitu prostasiklin (PGI2) dan nitric oxide (NO). Kedua substansi ini mencegah
terbentuknya trombus di dalam pembuluh darah (Gryglewski, et al., 1988).
2.2. Aspirin
Aspirin telah dievaluasi secara teliti penggunaannya sebagai obat antiplatelet.
Dalam sebuah penelitian meta-analisis dengan lebih dari 100 percobaan secara random
pada pasien dengan risiko tinggi, aspirin telah terbukti dapat mencegah kematian akibat
penyakit vaskuler hingga 15% dan mencegah kejadian vaskuler yang tidak fatal hingga
mencapai 30% (Patrono, et al., 2004).
2.2.1. Farmakokinetik
Asam salisilat adalah asam organik sederhana dengan pKa 3,0. Aspirin
(Acetylsalicylic Acid : ASA) mempunyai pKa 3,5. Salisilat cepat diabsorbsi dari
lambung dan usus halus bagian atas, menghasilkan kadar puncak dalam plasma dalam
waktu 1-2 jam. Aspirin diabsorbsi begitu saja dan cepat dihidrolisis (waktu-paruh
serum 15 menit) menjadi asam asetat dan salisilat oleh esterase dalam jaringan dan
darah. Salisilat terikat pada albumin, tetapi ikatan dan metabolisme salisilat dapat
menjadi jenuh sehingga fraksi yang tidak terikat meningkat seiring meningkatnya
konsentrasi total. Di luar kandungan dalam tubuh total sebesar 600 mg, peningkatan
13
dosis salisilat meningkatkan konsentrasi salisilat secara tidak proporsional. Seiring
meningkatnya dosis aspirin, waktu-paruh eliminasi salisilat meningkat dari 3-5 jam
(untuk dosis 600 mg/hari) menjadi 12-16 jam (dosis >3,6 g/hari). Alkalinisasi urine
meningkatkan laju ekskresi salisilat bebas dan konjugatnya yang larut dalam air
(Katzung, 2012).
2.2.2. Mekanisme Kerja
2.2.2.1.Efek antiplatelet
Aspirin menghambat agregasi platelet melalui asetilasi reversibel dan inaktivasi
COX, menyebabkan penghambatan produksi TxA2 (Corazzi, et al., 2005). Platelet
dewasa normal pada manusia hanya mengekspresikan COX-1 karena platelet tidak
memiliki nukleus, sehingga tidak mampu mensintesis enzim secara de novo. Hal ini
menyebabkan efek aspirin pada platelet bersifat permanen. Dengan demikian, efek
kardioprotektif aspirin dicapai melalui gangguan terhadap fungsi platelet yang
bergantung pada tromboksan A2 secara permanen dan ireversibel, sehingga dapat
menurunkan tingkat kejadian trombosis arteri akut.
2.2.2.2.Efek Lainnya
Aspirin
dalam
penggunaan
klinis
tidak
hanya
digunakan
sebagai
antiplatelet,namun juga sebagai antiinflamasi, analgesik, dan juga antipiretik.
Sebagai antiinflamasi, aspirin merupakan penghambat nonselektif untuk kedua
isoform COX, tapi salisilat lebih tidak efektif dalam menghambat isoform tersebut.
Salisilat nonterasetilasi dapat bekerja sebagai penangkap radikal oksigen. Aspirin
secara ireversibel menghambat COX dan menghambat agregasi platelet, sementara
salisilat non-terasetilasi tidak.
Sebagai analgesik, aspirin paling efektif meredakan nyeri dengan intensitas
ringan sampai sedang melalui efeknya pada peradangan dank arena aspirin
kemungkinan menghambat rangsang nyeri pada lokasi subkortikal
14
Sedangkan efek antipiretik aspirin mungkin diperantarai baik oleh inhibisi
COX di susunan saraf pusat maupun oleh inhibisi interleukin-1 (yang dilepaskan dari
makrofag selama episode inflamasi) (Katzung, 2012).
2.2.3.Efek Simpang
Pada dosis biasa, efek simpang aspirin yang utama adalah gangguan lambung
(intoleransi) dan ulkus lambung serta duodenum. Hepatotoksisitas, asma, ruam, dan
toksisitas ginjal lebih jarang terjadi. Peningkatan perdarahan fekal yang berhubungan
dengan sosis, rutin disebabkan oleh pemberian aspirin, meskipunt terjadi beberapa
adaptasi mukosa pada banyak pasien sehingga perdarahan kembali ke nilai dasar dalam
waktu 4-6 minggu.
Pada dosis yang lebih tinggi, pasien dapat mengalami salisilisme seperti muntah,
tinnitus, pendengaran berkurang, dan vertigo, yang dapat dipulihkan dengan
menurunkan dosis. Dosis salisilat yang besar tetap menyebabkan hiperpnea melalui
efek langsung pada medula oblongata. Pada kadar salisilat yang toksik, alkalosis
respiratorik diikuti oleh asidosis metabolic (akumulasi salisilat), depresi pernapasan,
dan bahkan dapat terjadi kardiotoksisitas dan intoleransi glukosa. Penggunaan aspirin
dikontraindikasikan pada pasien hemophilia.
Overdosis salisilat merupakan suatu kegawatdaruratan medis dan membutuhkan
tindakan rawat inap (Katzung, 2012).
2.3. Propolis
Propolis merupakan suatu campuran alami yang dihasilkan oleh lebah Apis
mellifera dari zat-zat yang dikumpulkan dari beberapa bagian tumbuhan, tunas, dan
eksudat. Kata propolis berasal dari bahasa Yunani, dimana kata pro berarti ‘tempat
masuk’ dan polis berarti ‘komunitas’ atau ‘kota’, dimana artinya produk alami ini
digunakan dalam pertahanan sarang lebah. Istilah lain dari propolis adalah bee glue
(lem lebah). Sesuai dengan sifatnya yang lunak dan fungsinya secara mekanis, lebah
15
Apis mellifera menggunakan propolis untuk mengonstruksi dan memperbaiki sarang
mereka, misalnya untuk menutup celah dan retakan serta merapikan dinding sarang
bagian dalam (Burdock, 1998) dan sebagai sawar pelindung daripada pemangsa
eksternal seperti ular, cicak, dan sebagainya, atau untuk melindungi dari angin dan
hujan. Lebah Apis mellifera mengumpulkan propolis dari tumbuh-tumbuhan yang
berbeda pada zona dengan iklim dan temperatur yang berbeda.
Sejak masa lalu, propolis telah digunakan secara luas oleh manusia, terutama
dalam pengobatan tradisional untuk menyembuhkan beberapa penyakit. Penduduk
Mesir Kuno menggunakan propolis untuk membalsami mayat-mayat mereka. Suku
Inca menggunakan propolis sebagai agen antipiretik. Tabib-tabib Romawi dan Yunani
menggunakannya sebagai desinfektan mulut dan sebagai antiseptik dan obat
penyembuh pada penanganan luka, diresepkan untuk terapi topikal pada luka
permukaan kulit maupun mukosa (Bankova, et al., 2000). Karena aktivitas
antibakterinya, propolis menjadi sangat popular di Eropa antara abad ke-17 dan abad
ke-20.
Penelitian ilmiah pertama terhadap propolis dipublikasikan pada tahun 1908
termasuk kandungan kimia dan komposisinya. Karena efeknya sebagai antiplatelet,
antimikrobial, antiviral, dan antioksidan, propolis digunakan secara luas pada obatobatan untuk manusia dan hewan, farmakologi, dan kosmetik (Wagh, 2013).
2.3.1.Karakteristik dan Komposisi
2.3.1.1.Karakteristik
Propolis (lem lebah) merupakan bahan liat dan kaku yang mengandung resin,
memiliki bau aromatik, pada suhu di bawah 15oC akan mengeras, menjadi liat dan
lengket pada suhu 36oC, dan akan meleleh menjadi cairan yang lekat pada suhu 6070oC. Berat jenisnya bervariasi tergantng dari jenis tanaman yang dikoleksi yaitu
berkisar dari 1,1112 sampai 1,136. Propolis tidak larut dalam air, sedikit larut dalam
terpentin, sebagian larut dalam alkohol, dan mudah larut dalam eter dan kloroform.
16
2.3.1.2.Komposisi
Propo