Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid Biji Mahoni (Swietenia mahagoni Jacq.) yang Berpotensi sebagai Antioksidan

ISOLASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID BIJI
MAHONI (Swietenia mahagoni Jacq.) YANG BERPOTENSI
SEBAGAI ANTIOKSIDAN

ZULIA HAJLI

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011

ii

ABSTRAK
ZULIA HAJLI. Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid Biji Mahoni (Swietenia
mahagoni Jacq.) yang Berpotensi sebagai Antioksidan. Dibimbing oleh DUDI
TOHIR dan GUSTINI SYAHBIRIN.
Biji mahoni daun kecil (Swietenia mahagoni Jacq.) mengandung senyawa
flavonoid yang memiliki potensi sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan
mengisolasi senyawa flavonoid biji mahoni yang memberikan aktivitas

antioksidan yang tinggi. Aktivitas antioksidan ditentukan dengan menggunakan
metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil. Ekstrak etil asetat biji mahoni difraksionasi
dengan menggunakan kromatografi lapis tipis preparatif dengan eluen etil asetatmetanol (1:1) dan menghasilkan 4 fraksi. Ekstrak etil asetat memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai konsentrasi hambat 50% (IC50) sebesar 117.73 mg L-1.
Fraksi teraktif dari biji mahoni ialah fraksi 3 dengan IC50 sebesar 65.18 mg L-1,
tetapi aktivitasnya masih lebih kecil dari butil hidroksitoluena (BHT) sebesar 4.70
mg L-1. Uji kemurnian fraksi 3 menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT) menghasilkan satu puncak dengan waktu retensi 14.079 menit dan uji
golongan flavonoid menunjukkan senyawa flavonol atau flavon. Spektrum
inframerah fraksi 3 menunjukkan gugus fungsi OH, C=O, C-O, dan CH alifatik.

ABSTRACT
ZULIA HALI. Isolation of Flavonoid Compounds from Mahogany’s Seed
(Swietenia mahagoni Jacq.) Potential as An Antioxidant. Supervised by DUDI
TOHIR and GUSTINI SYAHBIRIN.
Small-leaves mahogany’s seed (Swietenia mahagoni Jacq.) contains
flavonoid compounds which are potential as an antioxidant. The purpose of this
research is to isolate flavonoid compounds from mahogany’s seed which give
high antioxidant activity. Antioxidant activity was determined by using 1,1diphenyl-2-picrylhydrazyl method. Ethyl acetate extract of mahogany’s seed was
fractionated using preparative thin layer chromatography with ethyl acetatemethanol (1:1) as eluent, resulting 4 fractions. Ethyl acetate extract had

antioxidant activity with the 50% inhibition concentration (IC50) value of about
117.73 mg L-1. The most active fraction of mahogany’s seed was the third fraction
with the IC50 value of 65.18 mg L-1, but the activity was still lower than butyl
hydroxytoluene 4.70 mg L-1. Purity assay of this fraction by high performance
liquid chromatography (HPLC) resulted one peak with retention time of 14.079
minutes and flavonoid group assay showed flavonol or flavone compound. The
infrared spectrum of the third fraction showed that it had OH, C=O, C-O, and
aliphatic CH functional groups.

i

ISOLASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID BIJI
MAHONI (Swietenia mahagoni Jacq.) YANG BERPOTENSI
SEBAGAI ANTIOKSIDAN

ZULIA HAJLI

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada

Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
ii

Judul : Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid Biji Mahoni (Swietenia mahagoni
Jacq.) yang Berpotensi sebagai Antioksidan
Nama : Zulia Hajli
NIM : G44086025

Disetujui
Pembimbing I,

Pembimbing II,

Drs Dudi Tohir, MS

NIP 19571104 198903 1 001

Dr Gustini Syahbirin, MS
NIP 19600819 198903 2 001

Diketahui
Ketua Departemen,

Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 19501227 197603 2 002

Tanggal lulus:

iii

PRAKATA
Puji dan syukur ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat dan karunia-Nya,
sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah yang berjudul “Isolasi
Senyawa Golongan Flavonoid Biji Mahoni (Swietenia mahagoni Jacq.) yang
Berpotensi sebagai Antioksidan” yang dilaksanakan sejak bulan Oktober 2010 di

Laboratorium Kimia Organik Departemen Kimia FMIPA IPB.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Drs. Dudi Tohir, MS dan Dr.
Gustini Syahbirin, MS selaku pembimbing yang telah memberikan pengarahan
dan bimbingannya kepada penulis. Penulis juga mengucapkan terima kasih
kepada orang tua, Bapak Abdul Jalil dan Ibu Halimah Damanik atas didikan, doa,
dan kasih sayangnya yang tiada terkira, serta untuk seluruh keluarga besar di
rumah, terima kasih atas dukungan dan dorongannya.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Bapak Sabur, Mba Nia, Ibu
Yenni Karmila, dan Ibu Siti Robiah, atas bantuan yang diberikan. Tak lupa,
ungkapan terima kasih penulis kepada teman-teman kosan (Nanda, Asih, Ayu, dan
Femy), seluruh rekan peneliti di Laboratorium Kimia Organik (Ina, Saki, Dinda,
Ela, Wulan, Yogi, Arif, Farid, dan Risal), serta teman-teman Ekstensi Kimia
angkatan 2008 atas bantuan, motivasi, diskusi, dan kebersamaan selama penulis
menempuh studi dan menjalankan penelitian.
Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat.

Bogor, Oktober 2011

Zulia Hajli

iv

RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Bunut, Sumatra Utara pada tanggal 24 Juli 1988 dari
Bapak Abdul Jalil dan Ibu Halimah Damanik. Penulis merupakan anak pertama
dari tiga bersaudara. Penulis menyelesaikan studi di SMAN 1 Kisaran, Sumatra
Utara pada tahun 2005. Pada tahun yang sama penulis diterima di Institut
Pertanian Bogor (IPB) melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI)
program Diploma Institut Pertanian Bogor program keahlian Analisis Kimia.
Tahun 2008, penulis mengikuti kegiatan praktik lapangan di PT Sucofindo
(Persero) Cibitung, Bekasi bagian Hasil Industri dan Pertanian, laboratorium
Makanan dan Minuman dan menyelesaikan laporan akhir dengan judul Analisis
Kuantitatif Beberapa Jenis Pewarna Sintetis pada Makanan dan Minuman dengan
Spektrofotometri. Pada tahun yang sama penulis diterima di program
penyelenggaraan khusus Sarjana Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam IPB.

v

DAFTAR ISI

Halaman
DAFTAR TABEL ............................................................................................. vii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... vii
PENDAHULUAN ............................................................................................... 1
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat ........................................................................................... 2
Kadar Air .................................................................................................... 2
Isolasi Flavonoid ........................................................................................ 2
Uji Aktivitas Antioksidan .......................................................................... 3
Uji Fitokimia ............................................................................................. 3
Uji Golongan Flavonoid ............................................................................. 3
Uji Kemurnian dengan KCKT .................................................................... 3
Identifikasi Fraksi Aktif .............................................................................. 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air .................................................................................................... 4
Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid.......................................................... 4
Aktivitas Antioksidan ................................................................................. 5
Fitokimia dan Golongan Flavonoid ............................................................. 5
Analisis Spektrum Inframerah..................................................................... 6

SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan .................................................................................................... 7
Saran .......................................................................................................... 7
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 7
LAMPIRAN ........................................................................................................ 9

vi

DAFTAR TABEL
Halaman
1 Aktivitas antioksidan........................................................................................ 5
2 Fitokimia ekstrak etil asetat .............................................................................. 5
3 Golongan flavonoid ekstrak etil asetat dan fraksi 3........................................... 5

DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Struktur senyawa limonoid, yaitu swietenolida (a) dan 2-hidroksi-3-Otigloilswietenolida (b). ..................................................................................... 1
2 Biji mahoni daun kecil. .................................................................................... 1
3 Noda pemisahan di bawah lampu UV 254 nm: KLT (a), KLT preparatif (b)
dengan eluen etil asetat-metanol (1:1).............................................................. 4

4 KLT 2 dimensi fraksi 3 dengan eluen 1 etanol-etil asetat-heksana (3:2:0.5) dan
eluen 2 metanol-etil asetat (1:1) ....................................................................... 6
5 Kromatogram fraksi 3 ...................................................................................... 6
6 Spektrum inframerah fraksi 3 ........................................................................... 6

DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian ................................................................................... 10
2 Kadar air serbuk biji mahoni .......................................................................... 11
3 Rendemen hasil ekstraksi ............................................................................... 11
4 Kromatogram pencarian eluen terbaik ............................................................ 12
5 Hasil uji aktivitas antioksidan......................................................................... 13

vii

1

PENDAHULUAN
Tumbuhan obat asli Indonesia sampai saat
ini masih banyak digunakan oleh masyarakat

dalam pengobatan berbagai jenis penyakit.
Pengetahuan tentang tanaman berkhasiat obat
berdasarkan
pada
pengalaman
dan
keterampilan yang diwariskan turun-temurun.
Salah satu tanaman yang biasa digunakan
sebagai obat tradisional adalah biji mahoni
daun kecil (Swietenia mahagoni Jacq.).
Mahoni daun kecil merupakan famili
Meliaceae, lazim ditanam di tepi jalan sebagai
pohon pelindung. Secara tradisional, bijinya
berkhasiat sebagai obat tekanan darah tinggi,
kencing manis, perangsang nafsu makan, obat
rematik, demam, masuk angin, encok, dan
eksim (Dalimartha 2007).
Beberapa penelitian telah dilakukan untuk
penelusuran kandungan aktif dan bioaktivitas
yang dimiliki biji mahoni. Biji mahoni

mengandung senyawa bioaktif yang bersifat
toksik terhadap larva udang Artemia salina
Leach dan berpotensi sebagai obat (Sianturi
2001). Fraksi aktif biji mahoni dapat
menghambat pertumbuhan Saccharomyces
cerevisiae (Putri 2004). Ekstrak metanol,
heksana, dan etil asetat biji mahoni terbukti
mampu menghambat pertumbuhan bakteri
Escherichia coli dan Bacillus subtilis
(Haryanti 2002). Menurut Setiani (2009), biji
mahoni juga dapat menghambat pertumbuhan
sel kanker payudara T47D dengan nilai
konsentrasi hambat 50% (IC50) sebesar 49.12
ppm dan mengandung senyawa alkaloid serta
steroid/triterpenoid.
Ekstrak metanol batang kayu famili
Meliaceae mengandung terpenoid yang
bersifat toksik pada ikan Oryzias latipes pada
konsentrasi 5 ppm dan dapat menghambat
aktivitas bakteri Gram positif pada konsentrasi
5–20 ppm (Mulholland et al 1998). Ekstrak
etanol dari biji mahoni Afrika mengandung
tetranortriterpenoid dan berpotensi sebagai
insektisida (Govindachari & Kumari 1998).
Shahidur et al. (2009) melaporkan bahwa
ekstrak metanol biji mahoni mengandung 2
jenis senyawa limonoid, yaitu swietenolida
dan 2-hidroksi-3-O-tigloilswietenolida, dan
memiliki aktivitas sebagai antibakteri
(Gambar 1). Ekstrak kasar metanol biji
mahoni berpotensi sebagai antimikrob yang
dapat menghambat pertumbuhan Candida
albicans,
Staphylococcus
aureus,
Pseudomonas aeroginosa, Streptococcus
faecalis, dan Proteus mirabillase (Sahgal et
al. 2009). Selain itu, ekstrak metanol-air (3:2)
biji mahoni berpotensi menurunkan kadar gula

darah pada tikus dalam 21 hari (Debasis et al.
2010)

(a)

(b)
Gambar 1 Struktur senyawa limonoid, yaitu
swietenolida (a) dan 2-hidroksi-3O-tigloilswietenolida (b).
Kandungan senyawa kimia biji mahoni
(Gambar 2) di antaranya flavonoid, saponin,
alkaloid, steroid/triterpenoid, dan tanin
(Sianturi 2001; Haryanti 2002; Setiani 2009).
Flavonoid diketahui mampu berperan
menangkap radikal bebas atau sebagai
antioksidan alami (Amic et al. 2003; Lugasi et
al. 2003).

Gambar 2 Biji mahoni daun kecil.
Antioksidan merupakan senyawa yang
mampu menghambat oksidasi molekul lain.

2

Penggunaan antioksidan alami pada saat ini
menjadi alternatif yang dipilih karena terdapat
kekhawatiran
terhadap
efek
samping
antioksidan sintetik. Antioksidan alami
mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan
yang disebabkan oleh spesies oksigen reaktif
dan mampu menghambat penyakit degeneratif
(Sunarni et al. 2007). Tanaman (buah,
sayuran, tanaman herbal, dan lainnya)
mengandung senyawa yang dapat menangkap
molekul radikal bebas, contohnya senyawa
fenolik (flavonoid, asam fenolat, kuinon, dan
tanin) (Harnly et al. 2006).
Khasiat biji mahoni yang mengandung
flavonoid sebagai antioksidan perlu diuji
secara ilmiah. Penelitian ini bertujuan
mengisolasi,
mengidentifikasi
golongan
flavonoid, dan menguji aktivitas antioksidan.
Selain itu, dilakukan juga analisis gugus
fungsi senyawa yang terkandung dalam biji
mahoni
menggunakan
spektrofotometer
inframerah transformasi Fourier (FTIR).
Potensi antioksidan penangkap radikal
ditentukan menggunakan radikal 1,1-difenil2-pikrilhidrazil (DPPH). Metode uji ini dipilih
karena sederhana, cepat, dan peka untuk
evaluasi aktivitas antioksidan dari senyawa
bahan alam (Hanani et al. 2005). Senyawa
yang aktif sebagai antioksidan akan mereduksi
radikal
bebas
DPPH
menjadi
difenilpikrilhidrazina (Amic et al. 2003). Uji
kemurnian fraksi aktif
menggunakan
kromatografi lapis tipis (KLT) 2 dimensi dan
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).
Flavonoid yang merupakan komponen fenolik
memberikan serapan pada panjang gelombang
240 dan 270 nm, dan antara 320 dan 380 nm.
Pada KCKT, digunakan detektor ultraviolet
(UV) atau UV-tampak (Lee 2000).
Spektrofotometer FTIR merupakan cara
paling sederhana dalam menentukan golongan
senyawa. Spektrum FTIR dapat menunjukkan
adanya beberapa gugus fungsi yang
merupakan pita-pita khas yang teramati dalam
spektrum senyawaan fenolik (Silverstein et al.
2005).

BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah biji
mahoni yang diambil dari Kebun Raya
Purwodadi Jawa Timur, etanol 70%, metanol,
etanol 96%, akuades, kloroform, eter,
NH4OH, H2SO4 2M, FeCl3 1%, anhidrida
asetat, amil alkohol, serbuk Mg, HCl pekat,
CH3COONa, Na2CO3, CH3COOPb, H2SO4

pekat, butil hidroksitoluena (BHT), etil asetat,
NaOH 0.1 N, n-heksana, HCl 2 N, DPPH,
pereaksi Mayer, Wagner, Dragendorf, dan
Lieberman-Buchard.
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan
kaca yang biasa digunakan di laboratorium,
KLT preparatif, pelat KLT GF254, penguap
putar,
spektrofotometer
UV-Tampak
Pharmaspec 1700 Shimadzu, KCKT 20
AD.Prominance UFLC Shimadzu, dan
spektrofotometer FTIR Bruker Trensor 37.
Kadar Air
Diagram alir penelitian ditunjukkan pada
Lampiran 1. Cawan porselen dikeringkan
pada suhu 105 oC selama 3 jam. Cawan
kemudian didinginkan dalam eksikator dan
ditimbang bobot keringnya. Sampel ditimbang
sebanyak 3 g dimasukkan ke dalam cawan
tersebut dan dipanaskan di dalam oven dengan
suhu 105 oC selama 3 jam. Setelah itu, cawan
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang
sampai bobotnya konstan.
Isolasi Flavonoid (Markham 1988)
Serbuk biji mahoni direndam dengan
etanol 70% selama 24 jam pada suhu kamar.
Ekstrak yang diperoleh disaring dan ampasnya
direndam kembali dengan etanol 70%
beberapa kali sampai ampas tidak berwarna
kuning. Filtratnya dipekatkan dengan penguap
putar.
Ekstrak etanol biji mahoni dipartisi dengan
n-heksana, kemudian dihidrolisis dengan HCl
2 N pada suhu 100 °C selama 60 menit.
Ekstrak etanol biji mahoni terhidrolisis
dipartisi dengan etil asetat. Fraksi etil asetat
dikumpulkan dan dipekatkan dengan penguap
putar, lalu difraksionasi dengan KLT
preparatif. Pemilihan eluen terbaik dilakukan
dengan menggunakan pelat KLT GF254
sebagai fase diam.
Eluennya ialah berbagai macam pelarut
yang berbeda kepolarannya, yaitu aseton, eter,
heksana, metanol, dan etil asetat. Noda
pemisahan dideteksi di bawah lampu UV 254
nm. Setiap fraksi dikerok, dilarutkan dengan
etanol 70%, kemudian dipekatkan dan diuji
aktivitas antioksidannya. Fraksi teraktif
dianalisis
gugus
fungsinya
dengan
spektrofotometer
FTIR
dan
diuji
kemurniannya menggunakan KLT 2 dimensi
dan KCKT.

3

Uji Aktivitas Antioksidan (Blois 1958 diacu
dalam Hanani et al. 2005)

ditambahkan larutan FeCl3 1%. Hasil positif
ditunjukkan oleh warna hijau kehitaman.

Larutan ekstrak dibuat dengan konsentrasi
10, 30, 50, 70, dan 90 mg L-1. Sebanyak 4.5
mL larutan ekstrak dimasukkan ke dalam
tabung reaksi dan ditambahkan 1.5 mL larutan
DPPH 0.1 mM dalam etanol. Campuran
diinkubasi pada suhu 37 °C selama 30 menit,
lalu diukur serapannya pada panjang
gelombang 515 nm. BHT dengan konsentrasi
2, 4, 6, 8, dan 10 mg L-1 digunakan sebagai
kontrol positif. Kemudian nilai IC50 dihitung
menggunakan rumus persamaan regresi.

Flavonoid
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas dan dididihkan selama 5 menit.
Setelah itu, disaring dan filtratnya digunakan
untuk pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi lalu ditambahkan 0.5 g serbuk
Mg, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL amil alkohol,
dan dikocok kuat. Uji positif flavonoid
menghasilkan warna kuning atau jingga pada
lapisan amil alkohol.
Uji Golongan Flavonoid (Harborne 1987)

Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Alkaloid
Sebanyak 0.1 g ekstrak dilarutkan dalam
10 mL CHCl3 dan 4 tetes NH4OH. Larutan
disaring, filtratnya dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup, dan dikocok dengan 10
tetes H2SO4 2 M. Lapisan asam dipisahkan ke
dalam tabung reaksi yang lain, lalu diteteskan
pada lempeng tetes dan ditambahkan pereaksi
Mayer, Wagner, dan Dragendorf. Timbulnya
endapan, berturut-turut berwarna putih,
cokelat, dan merah jingga, menunjukkan
keberadaan alkaloid.
Saponin
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas dan dididihkan selama 5 menit.
Setelah itu, disaring dan filtratnya digunakan
untuk pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup kemudian dikocok
selama 10 detik dan didiamkan selama 10
menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan
terbentuknya buih yang stabil.
Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak 0.1 g ekstrak dilarutkan dengan
25 mL etanol panas (50 °C). Larutan disaring
dalam pinggan porselen dan diuapkan sampai
kering. Residu ditambahkan eter dan ekstrak
eter dipindahkan ke lempeng tetes untuk
ditambahkan 3 tetes anhidrida asetat dan 1
tetes H2SO4 pekat (uji Lieberman-Buchard).
Warna merah atau ungu menunjukkan
kandungan triterpenoid, sedangkan warna
hijau atau biru menunjukkan kandungan
steroid.
Tanin
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas, dididihkan selama 5 menit, dan
disaring. Sebagian filtrat yang diperoleh

Sebanyak 0.5 g ekstrak dilarutkan dengan
10 mL metanol-HCl 1 N (1:1) dan dipanaskan
pada suhu 95 °C selama 1 jam. Setelah itu,
didinginkan dan disaring, lalu filtratnya
diekstraksi dengan etil asetat.
Antosianidin
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan 3 tetes CH3COONa lalu diamati,
kemudian ditambahkan 3 tetes FeCl3 dan
diamati
lagi.
Antosianidin
dengan
CH3COONa memberikan warna merah atau
ungu dan bila ditambahkan FeCl3 menjadi
biru.
Uji lainnya, sebanyak 1 mL ekstrak etil
asetat ditambahkan Na2CO3 lalu diamati.
Antosianidin memberikan warna ungu, biru,
atau hijau.
Flavon, Kalkon, Auron, dan Flavonol
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan 3 tetes CH3COOPb lalu diamati
warnanya. Flavon memberikan warna jingga
hingga krem, kalkon jingga tua, dan auron
merah.
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat juga
ditambahkan 3 tetes NaOH 0.1 N lalu diamati
warnanya. Flavon memberikan warna kuning,
flavonol memberikan warna kuning, jingga
hingga krem, dan kalkon memberikan warna
krem hingga merah tua.
Uji Kemurnian dengan KCKT
(Hertog et al. 1992)
Ekstrak sampel (fraksi yang memiliki
aktivitas antioksidan tertinggi) disaring
dengan syringe filter 0.45µm dan diinjeksikan
ke dalam kolom. Fase gerak yang digunakan
adalah asetonitril 25% dalam KH2PO4 0.025
M (pH 2.4). Laju alirnya sebesar 0.9
mL/menit. Sampel yang akan diidentifikasi

4

akan melewati kolom Nova_pak C18, yang
memiliki dimensi (150 × 3.9 mm ID).
Detektor yang digunakan diatur pada 370 nm
dan oven pada suhu 30 °C .
Identifikasi Fraksi Aktif
Padatan fraksi teraktif dicampurkan
dengan 200 mg KBr. Campuran tersebut
kemudian dibuat pelet dan dilakukan analisis
spektrum FTIR.

HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Penentuan kadar air berguna untuk
menyatakan kandungan zat dalam tumbuhan
sebagai persen bahan keringnya. Selain itu,
penentuan kadar air berfungsi untuk
mengetahui ketahanan sampel terhadap
penyimpanan (Harjadi 1993). Sampel yang
baik disimpan dalam jangka waktu yang
panjang adalah yang memiliki kadar air
kurang dari 10% (Winarno 1992).
Kandungan air dalam serbuk biji mahoni
dihilangkan dengan pemanasan pada suhu 105
°C. Air yang terikat secara fisik akan
dihilangkan dengan pemanasan pada suhu
100–105 °C (Harjadi 1993). Kadar air rerata
biji mahoni sebesar 4.82% (Lampiran 2).
Kadar air yang didapat kurang dari 10%, hal
ini menunjukkan bahwa sampel dapat
disimpan dalam waktu yang relatif lama.

Pemisahan senyawa flavonoid dari ekstrak
etanol 70% dilakukan dengan ekstraksi caircair. Sebelum dilakukan pemisahan flavonoid,
ekstrak etanol dipartisi dengan n-heksana
terlebih dahulu untuk menghilangkan lemak
yang mungkin ikut terekstraksi. Setelah itu,
ekstrak
bebas-lemak
dihidrolisis
menggunakan asam. Hidrolisis dilakukan
untuk memecah flavonoid ke dalam bentuk
aglikonnya. Hasil hidrolisis dipartisi dengan
etil asetat untuk memisahkan aglikon
flavonoid dengan gulanya (Markham 1988).
Aglikon
umumnya
mempunyai
daya
antioksidan dan penangkap radikal lebih
tinggi daripada glikosida flavonoid, sebab
pada glikosida flavonoid gugus hidroksil
fenolik yang merupakan gugus aktif
antioksidan maupun penangkap radikal telah
mengikat gugus gula (Cholisoh & Utami
2008).
Pemisahan aglikon flavonoid pada ekstrak
etil asetat dilakukan dengan KLT preparatif
dengan menggunakan eluen terbaik dari
berbagai jenis pelarut yang berbeda
kepolarannya (Lampiran 4). Perbandingan
eluen yang menghasilkan pemisahan terbaik
menggunakan eluen metanol-etil asetat (1:1).
Noda dideteksi di bawah lampu UV 254 nm
dan diperoleh 4 noda. Nilai Rf untuk fraksi 1,
2, 3, dan 4 berturut-turut ialah 0.55; 0.76;
0.85; dan 0.91 (Gambar 3).
F4
Rf 0.91
F3
Rf 0.85

Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid
Tahap pertama isolasi senyawa flavonoid
adalah maserasi dengan menggunakan etanol
70%. Etanol 70% digunakan sebagai pelarut
karena bersifat polar sehingga dapat
mengekstraksi senyawa flavonoid. Flavonoid
merupakan senyawa polar karena mempunyai
sejumlah gugus hidroksil baik yang terikat
ataupun yang tidak terikat gula (Markham
1988). Selain itu, aktivitas antioksidan
tanaman obat dalam etanol 70% lebih tinggi
dibandingkan dengan beberapa pelarut lainnya
(Macari et al. 2006). Maserasi dilakukan
berulang kali sampai filtrat tidak berwarna
kuning lagi, sehingga dapat dianggap semua
senyawa yang berbobot molekul rendah telah
terekstraksi (Harbone 1987). Ekstrak kasar
yang diperoleh dipekatkan dengan penguap
putar. Rendemen ekstrak kasar yang didapat
dari 200.02 g serbuk biji mahoni sebesar
15.35% (Lampiran 3).

F2
Rf 0.76
F1
Rf 0.55

(a)

(b)

Gambar 3 Noda pemisahan di bawah lampu
UV 254 nm: KLT (a), KLT
preparatif (b) dengan eluen etil
asetat-metanol (1:1).
Fraksi 1 berinteraksi kuat dengan fase
diam sehingga bergerak lebih lambat jika
dibandingkan
dengan
fraksi
lainnya.
Sementara fraksi 2, 3, dan 4 berinteraksi lebih
lemah sehingga akan lebih lama tertinggal
dalam eluen. Dalam hal ini, metanol menahan
ekstrak yang bersifat polar dan terpisah

5

dengan yang bersifat semipolar. Dalam sistem
kromatografi, senyawa akan bergerak cepat
terbawa oleh eluen karena memiliki sifat
kepolaran yang hampir sama dengan eluen.
Setiap fraksi dikerok dan dilarutkan dengan
etanol hingga mencukupi untuk uji kualitatif,
uji aktivitas antioksidan, dan analisis senyawa
golongan flavonoid.
Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan diukur menggunakan
radikal DPPH dan dinyatakan dengan IC50,
yaitu bilangan yang menunjukkan konsentrasi
ekstrak yang mampu menghambat aktivitas
radikal sebesar 50% (Molyneux 2004).
Aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat dan
keempat fraksi hasil KLT preparatif
ditunjukkan pada Lampiran 5.
Ekstrak etil asetat mempunyai nilai IC50
sebesar 117.73 mg L-1. Fraksi 3 (F3)
memperlihatkan aktivitas antioksidan tertinggi
dengan nilai IC50 sebesar 65.18 mg L-1.
Semakin rendah nilai IC50, semakin tinggi
aktivitas antioksidannya (Molyneux 2004).
Radikal bebas diharapkan dapat ditangkap
oleh senyawa antioksidan hanya dengan
konsentrasi yang kecil.
Kontrol positif yang digunakan ialah BHT.
Dalam industri, BHT digunakan sebagai zat
aditif antioksidan pada makanan, kosmetik,
farmasi, produk karet, dan sebagainya. Fungsi
BHT hampir sama seperti vitamin E, yaitu
sebagai
zat
yang
mencegah
reaksi
autooksidasi atau oksidasi yang disebabkan
oleh O2 dari udara (Sudirman 2011).
Nilai IC50 BHT yang didapat sebesar 4.7
mg L-1. Aktivitas antioksidan F3 masih lebih
kecil bila dibandingkan dengan aktivitas
antioksidan BHT tersebut (Tabel 1).
Walaupun demikian, F3 memiliki aktivitas
antioksidan yang kuat, karena mempunyai
IC50 kurang dari 200 mg L-1 (Hanani et al.
2005).
Tabel 1 Aktivitas antioksidan
Larutan Uji
BHT
Ekstrak etil asetat
F1
F2
F3
F4

IC50 (mg L-1)
4.7
117.73
149.77
93.11
65.18
94.41

Salah satu senyawa yang memiliki
aktivitas antioksidan yang kuat ialah
flavonoid. Reaksi yang terjadi antara senyawa

flavonoid dan DPPH meliputi pemberian atom
hidrogen dari senyawa flavonoid untuk
mereduksi radikal DPPH. Hal tersebut dapat
terjadi disebabkan adanya lebih dari satu
gugus hidroksil pada struktur molekulnya
(Sunarni et al. 2007). Radikal bebas DPPH
akan ditangkap oleh senyawa flavonoid dan
flavonoid akan dioksidasi oleh radikal bebas
menghasilkan bentuk radikal yang lebih stabil
dengan kereaktifan yang rendah. Flavonoid
mendonorkan radikal hidrogen dari cincin
aromatiknya untuk mengurangi radikal bebas
yang bersifat toksik, dan menghasilkan radikal
flavonoid yang terstabilkan resonans dan tidak
toksik (Amic et al. 2003).
Fitokimia dan Golongan Flavonoid
Uji fitokimia dilakukan pada ekstrak etil
asetat (Tabel 2) dan uji golongan flavonoid
dilakukan pada ekstrak etil asetat dan fraksi
teraktif F3 (Tabel 3). Ekstrak etil asetat biji
mahoni didapati positif saponin dan flavonoid.
Uji golongan flavonoid pada ekstrak etil asetat
dan F3 positif adanya golongan flavon atau
flavonol.
Tabel 2 Fitokimia ekstrak etil asetat
Uji fitokimia
Alkaloid
Saponin
Flavonoid
Triterpenoid
Steroid
Tanin

Ekstrak etil asetat
+
+
-

Keterangan: (+) menunjukkan senyawa terkandung
dalam ekstrak etil asetat, (-) menunjukkan
sebaliknya

Tabel 3

Golongan flavonoid ekstrak etil
asetat dan fraksi 3

Ekstrak
Golongan
Fraksi 3
etil asetat
flavonoid
Krem
CH3COOPb
Krem (+)
Flavon
(++)
Kuning
Kuning
Flavonol,
NaOH 0.1 N
(++)
(+)
flavon
Jingga
Kuning
H2SO4 pekat
(+++)
(++)
Kuning
Kuning
CH3COONa
(+)
(+)
CH3COONa
Jingga
Jingga
+ FeCl3
(++)
(+++)
Kuning
Tidak
Na2CO3
(+++)
berwarna
Keterangan: (+) menunjukkan tingkat intensitas warna
Pereaksi

6

Tingkat kemurnian F3 diuji dengan
melakukan KLT 2 dimensi. Kromatogram
dihasilkan dengan menggunakan eluen terbaik
dan menghasilkan 1 noda tunggal (Gambar 4).
Hasil KCKT juga memperlihatkan puncak
tunggal dengan waktu retensi 14.079 menit
(Gambar 5), maka fraksi yang didapat diduga
sudah murni. Puncak kromatogram yang
didapat melebar. Hal ini disebabkan
konsentrasi dari senyawa yang terkandung
kecil sehingga puncak tidak tajam dan puncak
pelarut lebih terlihat daripada puncak senyawa
dalam fraksi 3.

Eluen 1
Eluen 2

Gambar 4 KLT 2 dimensi fraksi 3 dengan
eluen 1 etanol-etil asetatheksana (3:2:0.5) dan eluen 2
metanol-etil asetat (1:1).

Analisis Spektrum Inframerah
Analisis spektrum inframerah (Gambar 6)
dengan menggunakan pelet KBr pada F3
menunjukkan adanya beberapa gugus fungsi.
Menurut Silverstein et al. (2005), pita-pita
khas yang teramati dalam spektrum
senyawaan fenolik berasal dari vibrasi ulur
O-H dan ulur C-O. Vibrasi ulur O-H dari F3
terlihat melebar di daerah 3500–3200 cm-1
dengan puncak serapan di 3429.76 cm-1.
Vibrasi ini menunjukkan adanya gugus O-H
yang membentuk ikatan hidrogen.
Serapan pada bilangan gelombang 1062.70
cm-1 menunjukkan adanya gugus C-O. Vibrasi
ulur C-O dalam senyawaan fenolik
menghasilkan pita kuat di daerah 1260–1050
cm-1. Serapan pada bilangan gelombang
2925.26 dan 2855.91 cm-1 menunjukkan
vibrasi ulur C-H di dalam gugus CH alifatik.
Pita-pita khas yang menunjukkan adanya
gugus C=O dihasilkan oleh vibrasi ulur di
daerah 1870–1540 cm-1. Spektrum FTIR F3
menunjukkan serapan pita ulur C=O
heterosiklik pada 1604.63 cm-1. Gugus C=O
pada umumnya berada pada di daerah 1700
cm-1, tetapi pada F3 mengalami pergeseran
yang dapat disebabkan oleh pengaruh gugus
fungsi OH yang berada disebelah C=O. Gugus
C=O juga terdapat di daerah vibrasi ulur 1604
cm-1 pada ekstrak Chrysanthemum parthenium
yang mengandung senyawa flavonoid
(Shafaghat & Salimi 2008).

Gambar 5 Kromatogram fraksi 3.

2855.91
2925.26
3429.79

1062.70
1604.63

Gambar 6 Spektrum inframerah fraksi 3.

7

SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Rendemen ekstrak etanol 70% biji mahoni
sebesar 15.35%. Ekstrak etil asetat memiliki
aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 sebesar
117.73 mg L-1. Fraksi 3 (Rf 0.85; eluen
metanol-etil asetat 1:1) memiliki aktivitas
antioksidan tertinggi dibandingkan dengan
ketiga fraksi lainnya dengan IC50 sebesar
65.18 mg L-1. Uji golongan flavonoid pada
fraksi 3 menunjukkan flavon atau flavonol.
Hasil spektrum inframerah memperlihatkan
bahwa senyawa tersebut mempunyai gugus
fungsi OH, C=O, C–O dan CH alifatik.
Saran
Perlu dilakukan analisis lebih lanjut
dengan menggunakan resonans magnetik inti
1
H, 13C, dan spektrometer massa untuk
memastikan struktur senyawa dalam fraksi 3.

Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata K, Soediro I, penerjemah;
Niksolihin S, editor. Bandung: ITB.
Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Harnly JM, Doherty RF, Beecher GR, Holden
JM, Haytowitz DB, Bhagwat S, Gebhardt
S. 2006. Flavonoid content of U.S. fruits,
vegetables, and nuts. J Agric Food Chem
54:9966-9977.
Haryanti F. 2002. Isolasi senyawa antibakteri
dari biji mahoni (Swietenia mahagoni
Jacq.)
[skripsi].
Bogor:
Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Pertanian Bogor.
Hertog MGL, Hollman PCH, Venema DP.
1992. Optimization of a quantitative
HPLC determination of potentially
anticarcinogenic flavonoid in vegetables
and fruits. Agric Food 40:1591-1598.

DAFTAR PUSTAKA

Lee HS. 2000. HPLC Analysis of Phenolic
Compounds. Di dalam: Food Analysis by
HPLC. Nollet LML, editor. New York:
Marcel Dekker.

Amic D, Beslo D, Trinajstic N, Davidovic.
2003. Structure-radical scavenging activity
relationships of flavonoids. Croatia Chem
Acta 76:55-61.

Lugasi A, Hovari J, Sagi KV, Biro L. 2003.
The role of antioxidant phytonutrients in
the prevention of diseases. Acta Biol
Szeged 47:119-125.

Cholisoh Z, Utami W. 2008. Aktivitas
penangkap radikal ekstrak etanol 70 % biji
jengkol
(Archidendron
jiringa).
Pharmacon 9:33-40.

Macari PdAT, Portela CN, Polhit AM. 2006.
Antioxidant, cytotoxic, and UVBabsorbing activity of Maynetus guyanensis
Klotzch (Celastraceae) bark extract. Acta
Amazonica 36:513-518.

Dalimartha S. 2007. Atlas Tumbuhan Obat
Indonesia, Jilid 2. Jakarta: Trubus
Agriwidya.
Debasis De, Chatterjee K, Ali KM, Bera TK,
Ghosh D. 2010. Antidiabetic potentiality
of the aqueous-methanolic extract of seed
of Swietenia mahagoni (L.) Jacq. in
streptozotocin-induced diabetic male
albino
rat:
A
correlative
and
antihyperlipidemic activities. EvidenceBased Complementary and Alternative
Med 2011:1-11.
Govindachari TR, Kumari GNK. 1998.
Tetranortriterpenoid
from
Khaya
senegalensis. Phytochemistry 47:14231425.
Hanani E, Abdul M, Ryany S. 2005.
Identifikasi senyawa antioksidan dalam
Callyspongia sp dari Kepulauan Seribu.
Maj Ilmu Kefarmasian 2:127-133.

Markham KR. 1988. Cara Mengidentifikasi
Flavonoid. Padmawinata K, penerjemah.
Bandung:
ITB.
Terjemahan
dari:
Techniques of Flavonoid of Identification.
Molyneux P. 2004. The use of stable free
radical diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH)
for estimazing antioxidant activity.
Songklanakarin J Sci Technol 26:211-219.
Mulholland DA, Iourine S, Taylor DAH.
1998. Sesquiterpenoids from Dysoxylum
schiffnerri. Phytochemistry 47:1421-1422.
Putri NE. 2004. Inhibisi fraksi aktif biji
mahoni pada pertumbuhan Saccharomyces
cerevisiae sebagai uji antikanker [skripsi].
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.

8

Sahgal G, Ramanathan S, Sasidharan S, Mordi
MN, Ismail S, Mansor SM. 2009.
Phytochemical and antimicrobial activity
of Swietenia mahagoni crude methanolic
seed extract. Tropical Biol 26:274-279.
Setiani RFC. 2009. Sitotoksisitas fraksi aktif
biji mahoni (Swietenia mahagoni) pada sel
kanker payudara T47D [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Shafagat A, Salimi F. 2008. Extraction and
determining of chemical structure of
flavonoids in Tanacetum parthenium (L.)
Schultz. Bip. from Iran. J Sci IAU 18:3942.
Shahidur R, Azad C, Husne-Ara A, Sheikh
ZR, Mohammad SA, Lutfun N, Satyajit
DS. 2009. Antibacterial activity of two
limonoids from Swietenia mahagoni
against multiple-drug-resistant (MDR)
bacterial strains. J Nat Med 63:41-45.

Sianturi AHM. 2001. Isolasi dan fraksinasi
senyawa bioaktif dari biji mahoni
(Swietenia mahagoni Jacq.) [skripsi].
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Silverstein RM, Webster FX, Kiemle DJ.
2005. Spectrometric Identification of
Organic Compounds Ed ke-7. New York:
J Wiley.
Sudirman S. 2011. Aktivitas antioksidan dan
komponen bioaktif kangkung air (Ipomea
aquatica Forsk.) [skripsi]. Fakultas
Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut
Pertanian Bogor.
Sunarni T, Pramono S, Asmah R. 2007.
Flavonoid antioksidan penangkap radikal
dari daun kepel Stelechocarpus burahol
(BI.) Hook f. & Th. Maj Farmasi
Indonesia 18:111-116.
Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: Gramedia.

9

LAMPIRAN

10

Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Serbuk biji mahoni
Penetapan kadar air
Ekstraksi dengan etanol 70%

Residu

Ekstrak etanol
Partisi dengan n-heksana

Fraksi n-heksana

Fraksi etanol
Hidrolisis HCl
Fraksi etanol terhidrolisis
Partisi dengan
etil asetat

Uji golongan flavonoid
dan antioksidan

Fraksi etil asetat

Fraksi etanol

Fraksionasi (KLTp)
Fraksi 1

Fraksi 2

Fraksi 3

Fraksi 4

Uji antioksidan

Fraksi teraktif
Uji golongan flavonoid
KLT 2 dimensi, KCKT, FTIR
Senyawa golongan flavonoid

10

11

Lampiran 2 Kadar air serbuk biji mahoni
Ulangan
1
2
3
Rata-rata

Bobot cawan
kosong
(g)
29.6484
28.8422
29.5506

Bobot cawan
+ contoh
(g)
32.5115
31.6977
32.4144

Bobot
contoh
(g)
3.0065
3.0001
3.0077

Contoh perhitungan:

Lampiran 3 Rendemen hasil ekstraksi
Bobot serbuk biji mahoni (W contoh)
Bobot ekstrak (W ekstrak)
Kadar air

Contoh perhitungan :

= 200.02 g
= 29.23 g
= 4.82%

Bobot contoh
kering
(g)
2.8631
2.8555
2.8608

Kadar air
(%b/b)
4.77
4.82
4.88
4.82

12

Lampiran 4 Kromatogram pencarian eluen terbaik

(a)

(h)

(b)

(c)

(i)

(j)

(d)

(k)

(e)

(f)

(l)

(g)

(m)

Keterangan: metanol (a), aseton (b), eter (c), n-heksana (d), etil asetat (e), MeOHEtOAc (1:3) (f), (3:1) (g), (1:6) (h), (6:1) (i), (1:9) (j), (9:1) (k), (2:3)
(l), (3:2) (m)

13

Lampiran 5 Hasil uji aktivitas antioksidan
a) BHT
Konsentrasi
(mg/L)
2
4
6
8
10

ln
% Inhibisi
konsentrasi
0.6931
18.93
1.3863
48.83
1.7918
56.7
2.0794
67.72
2.3026
75.1

b) Etil asetat
Konsentrasi
(mg/L)
10
30
50
70
90

ln
konsentrasi
2,3026
3,4012
3,912
4,2485
4,4998

% Inhibisi
4,92
17,78
28,23
32,45
56,68

14

Lanjutan Lampiran 5
c) F1
Konsentrasi
(mg/L)
10
30
50
70
90

ln
konsentrasi
2.3026
3.4012
3.912
4.2485
4.4998

% Inhibisi
6.84
16.19
25.71
34.62
49.39

d) F2
Konsentrasi
(mg/L)
10
30
50
70
90

ln
konsentrasi
2.3026
3.4012
3.912
4.2485
4.4998

% Inhibisi
26.52
40.69
44.53
47.57
47.77

15

Lanjutan Lampiran 5
e) F3
Konsentrasi
(mg/L)
10
30
50
70
90

ln
konsentrasi
2.3026
3.4012
3.912
4.2485
4.4998

% Inhibisi
19.84
46.76
48.99
48.78
50.81

f) F4
Konsentrasi
(mg/L)
10
30
50
70
90

ln
konsentrasi
2,3026
3,4012
3,912
4,2485
4,4998

% Inhibisi
45,34
47,77
48,79
49,39
49,8

ABSTRAK
ZULIA HAJLI. Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid Biji Mahoni (Swietenia
mahagoni Jacq.) yang Berpotensi sebagai Antioksidan. Dibimbing oleh DUDI
TOHIR dan GUSTINI SYAHBIRIN.
Biji mahoni daun kecil (Swietenia mahagoni Jacq.) mengandung senyawa
flavonoid yang memiliki potensi sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan
mengisolasi senyawa flavonoid biji mahoni yang memberikan aktivitas
antioksidan yang tinggi. Aktivitas antioksidan ditentukan dengan menggunakan
metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil. Ekstrak etil asetat biji mahoni difraksionasi
dengan menggunakan kromatografi lapis tipis preparatif dengan eluen etil asetatmetanol (1:1) dan menghasilkan 4 fraksi. Ekstrak etil asetat memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai konsentrasi hambat 50% (IC50) sebesar 117.73 mg L-1.
Fraksi teraktif dari biji mahoni ialah fraksi 3 dengan IC50 sebesar 65.18 mg L-1,
tetapi aktivitasnya masih lebih kecil dari butil hidroksitoluena (BHT) sebesar 4.70
mg L-1. Uji kemurnian fraksi 3 menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT) menghasilkan satu puncak dengan waktu retensi 14.079 menit dan uji
golongan flavonoid menunjukkan senyawa flavonol atau flavon. Spektrum
inframerah fraksi 3 menunjukkan gugus fungsi OH, C=O, C-O, dan CH alifatik.

ABSTRACT
ZULIA HALI. Isolation of Flavonoid Compounds from Mahogany’s Seed
(Swietenia mahagoni Jacq.) Potential as An Antioxidant. Supervised by DUDI
TOHIR and GUSTINI SYAHBIRIN.
Small-leaves mahogany’s seed (Swietenia mahagoni Jacq.) contains
flavonoid compounds which are potential as an antioxidant. The purpose of this
research is to isolate flavonoid compounds from mahogany’s seed which give
high antioxidant activity. Antioxidant activity was determined by using 1,1diphenyl-2-picrylhydrazyl method. Ethyl acetate extract of mahogany’s seed was
fractionated using preparative thin layer chromatography with ethyl acetatemethanol (1:1) as eluent, resulting 4 fractions. Ethyl acetate extract had
antioxidant activity with the 50% inhibition concentration (IC50) value of about
117.73 mg L-1. The most active fraction of mahogany’s seed was the third fraction
with the IC50 value of 65.18 mg L-1, but the activity was still lower than butyl
hydroxytoluene 4.70 mg L-1. Purity assay of this fraction by high performance
liquid chromatography (HPLC) resulted one peak with retention time of 14.079
minutes and flavonoid group assay showed flavonol or flavone compound. The
infrared spectrum of the third fraction showed that it had OH, C=O, C-O, and
aliphatic CH functional groups.

i

1

PENDAHULUAN
Tumbuhan obat asli Indonesia sampai saat
ini masih banyak digunakan oleh masyarakat
dalam pengobatan berbagai jenis penyakit.
Pengetahuan tentang tanaman berkhasiat obat
berdasarkan
pada
pengalaman
dan
keterampilan yang diwariskan turun-temurun.
Salah satu tanaman yang biasa digunakan
sebagai obat tradisional adalah biji mahoni
daun kecil (Swietenia mahagoni Jacq.).
Mahoni daun kecil merupakan famili
Meliaceae, lazim ditanam di tepi jalan sebagai
pohon pelindung. Secara tradisional, bijinya
berkhasiat sebagai obat tekanan darah tinggi,
kencing manis, perangsang nafsu makan, obat
rematik, demam, masuk angin, encok, dan
eksim (Dalimartha 2007).
Beberapa penelitian telah dilakukan untuk
penelusuran kandungan aktif dan bioaktivitas
yang dimiliki biji mahoni. Biji mahoni
mengandung senyawa bioaktif yang bersifat
toksik terhadap larva udang Artemia salina
Leach dan berpotensi sebagai obat (Sianturi
2001). Fraksi aktif biji mahoni dapat
menghambat pertumbuhan Saccharomyces
cerevisiae (Putri 2004). Ekstrak metanol,
heksana, dan etil asetat biji mahoni terbukti
mampu menghambat pertumbuhan bakteri
Escherichia coli dan Bacillus subtilis
(Haryanti 2002). Menurut Setiani (2009), biji
mahoni juga dapat menghambat pertumbuhan
sel kanker payudara T47D dengan nilai
konsentrasi hambat 50% (IC50) sebesar 49.12
ppm dan mengandung senyawa alkaloid serta
steroid/triterpenoid.
Ekstrak metanol batang kayu famili
Meliaceae mengandung terpenoid yang
bersifat toksik pada ikan Oryzias latipes pada
konsentrasi 5 ppm dan dapat menghambat
aktivitas bakteri Gram positif pada konsentrasi
5–20 ppm (Mulholland et al 1998). Ekstrak
etanol dari biji mahoni Afrika mengandung
tetranortriterpenoid dan berpotensi sebagai
insektisida (Govindachari & Kumari 1998).
Shahidur et al. (2009) melaporkan bahwa
ekstrak metanol biji mahoni mengandung 2
jenis senyawa limonoid, yaitu swietenolida
dan 2-hidroksi-3-O-tigloilswietenolida, dan
memiliki aktivitas sebagai antibakteri
(Gambar 1). Ekstrak kasar metanol biji
mahoni berpotensi sebagai antimikrob yang
dapat menghambat pertumbuhan Candida
albicans,
Staphylococcus
aureus,
Pseudomonas aeroginosa, Streptococcus
faecalis, dan Proteus mirabillase (Sahgal et
al. 2009). Selain itu, ekstrak metanol-air (3:2)
biji mahoni berpotensi menurunkan kadar gula

darah pada tikus dalam 21 hari (Debasis et al.
2010)

(a)

(b)
Gambar 1 Struktur senyawa limonoid, yaitu
swietenolida (a) dan 2-hidroksi-3O-tigloilswietenolida (b).
Kandungan senyawa kimia biji mahoni
(Gambar 2) di antaranya flavonoid, saponin,
alkaloid, steroid/triterpenoid, dan tanin
(Sianturi 2001; Haryanti 2002; Setiani 2009).
Flavonoid diketahui mampu berperan
menangkap radikal bebas atau sebagai
antioksidan alami (Amic et al. 2003; Lugasi et
al. 2003).

Gambar 2 Biji mahoni daun kecil.
Antioksidan merupakan senyawa yang
mampu menghambat oksidasi molekul lain.

2

Penggunaan antioksidan alami pada saat ini
menjadi alternatif yang dipilih karena terdapat
kekhawatiran
terhadap
efek
samping
antioksidan sintetik. Antioksidan alami
mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan
yang disebabkan oleh spesies oksigen reaktif
dan mampu menghambat penyakit degeneratif
(Sunarni et al. 2007). Tanaman (buah,
sayuran, tanaman herbal, dan lainnya)
mengandung senyawa yang dapat menangkap
molekul radikal bebas, contohnya senyawa
fenolik (flavonoid, asam fenolat, kuinon, dan
tanin) (Harnly et al. 2006).
Khasiat biji mahoni yang mengandung
flavonoid sebagai antioksidan perlu diuji
secara ilmiah. Penelitian ini bertujuan
mengisolasi,
mengidentifikasi
golongan
flavonoid, dan menguji aktivitas antioksidan.
Selain itu, dilakukan juga analisis gugus
fungsi senyawa yang terkandung dalam biji
mahoni
menggunakan
spektrofotometer
inframerah transformasi Fourier (FTIR).
Potensi antioksidan penangkap radikal
ditentukan menggunakan radikal 1,1-difenil2-pikrilhidrazil (DPPH). Metode uji ini dipilih
karena sederhana, cepat, dan peka untuk
evaluasi aktivitas antioksidan dari senyawa
bahan alam (Hanani et al. 2005). Senyawa
yang aktif sebagai antioksidan akan mereduksi
radikal
bebas
DPPH
menjadi
difenilpikrilhidrazina (Amic et al. 2003). Uji
kemurnian fraksi aktif
menggunakan
kromatografi lapis tipis (KLT) 2 dimensi dan
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).
Flavonoid yang merupakan komponen fenolik
memberikan serapan pada panjang gelombang
240 dan 270 nm, dan antara 320 dan 380 nm.
Pada KCKT, digunakan detektor ultraviolet
(UV) atau UV-tampak (Lee 2000).
Spektrofotometer FTIR merupakan cara
paling sederhana dalam menentukan golongan
senyawa. Spektrum FTIR dapat menunjukkan
adanya beberapa gugus fungsi yang
merupakan pita-pita khas yang teramati dalam
spektrum senyawaan fenolik (Silverstein et al.
2005).

BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah biji
mahoni yang diambil dari Kebun Raya
Purwodadi Jawa Timur, etanol 70%, metanol,
etanol 96%, akuades, kloroform, eter,
NH4OH, H2SO4 2M, FeCl3 1%, anhidrida
asetat, amil alkohol, serbuk Mg, HCl pekat,
CH3COONa, Na2CO3, CH3COOPb, H2SO4

pekat, butil hidroksitoluena (BHT), etil asetat,
NaOH 0.1 N, n-heksana, HCl 2 N, DPPH,
pereaksi Mayer, Wagner, Dragendorf, dan
Lieberman-Buchard.
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan
kaca yang biasa digunakan di laboratorium,
KLT preparatif, pelat KLT GF254, penguap
putar,
spektrofotometer
UV-Tampak
Pharmaspec 1700 Shimadzu, KCKT 20
AD.Prominance UFLC Shimadzu, dan
spektrofotometer FTIR Bruker Trensor 37.
Kadar Air
Diagram alir penelitian ditunjukkan pada
Lampiran 1. Cawan porselen dikeringkan
pada suhu 105 oC selama 3 jam. Cawan
kemudian didinginkan dalam eksikator dan
ditimbang bobot keringnya. Sampel ditimbang
sebanyak 3 g dimasukkan ke dalam cawan
tersebut dan dipanaskan di dalam oven dengan
suhu 105 oC selama 3 jam. Setelah itu, cawan
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang
sampai bobotnya konstan.
Isolasi Flavonoid (Markham 1988)
Serbuk biji mahoni direndam dengan
etanol 70% selama 24 jam pada suhu kamar.
Ekstrak yang diperoleh disaring dan ampasnya
direndam kembali dengan etanol 70%
beberapa kali sampai ampas tidak berwarna
kuning. Filtratnya dipekatkan dengan penguap
putar.
Ekstrak etanol biji mahoni dipartisi dengan
n-heksana, kemudian dihidrolisis dengan HCl
2 N pada suhu 100 °C selama 60 menit.
Ekstrak etanol biji mahoni terhidrolisis
dipartisi dengan etil asetat. Fraksi etil asetat
dikumpulkan dan dipekatkan dengan penguap
putar, lalu difraksionasi dengan KLT
preparatif. Pemilihan eluen terbaik dilakukan
dengan menggunakan pelat KLT GF254
sebagai fase diam.
Eluennya ialah berbagai macam pelarut
yang berbeda kepolarannya, yaitu aseton, eter,
heksana, metanol, dan etil asetat. Noda
pemisahan dideteksi di bawah lampu UV 254
nm. Setiap fraksi dikerok, dilarutkan dengan
etanol 70%, kemudian dipekatkan dan diuji
aktivitas antioksidannya. Fraksi teraktif
dianalisis
gugus
fungsinya
dengan
spektrofotometer
FTIR
dan
diuji
kemurniannya menggunakan KLT 2 dimensi
dan KCKT.

2

Penggunaan antioksidan alami pada saat ini
menjadi alternatif yang dipilih karena terdapat
kekhawatiran
terhadap
efek
samping
antioksidan sintetik. Antioksidan alami
mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan
yang disebabkan oleh spesies oksigen reaktif
dan mampu menghambat penyakit degeneratif
(Sunarni et al. 2007). Tanaman (buah,
sayuran, tanaman herbal, dan lainnya)
mengandung senyawa yang dapat menangkap
molekul radikal bebas, contohnya senyawa
fenolik (flavonoid, asam fenolat, kuinon, dan
tanin) (Harnly et al. 2006).
Khasiat biji mahoni yang mengandung
flavonoid sebagai antioksidan perlu diuji
secara ilmiah. Penelitian ini bertujuan
mengisolasi,
mengidentifikasi
golongan
flavonoid, dan menguji aktivitas antioksidan.
Selain itu, dilakukan juga analisis gugus
fungsi senyawa yang terkandung dalam biji
mahoni
menggunakan
spektrofotometer
inframerah transformasi Fourier (FTIR).
Potensi antioksidan penangkap radikal
ditentukan menggunakan radikal 1,1-difenil2-pikrilhidrazil (DPPH). Metode uji ini dipilih
karena sederhana, cepat, dan peka untuk
evaluasi aktivitas antioksidan dari senyawa
bahan alam (Hanani et al. 2005). Senyawa
yang aktif sebagai antioksidan akan mereduksi
radikal
bebas
DPPH
menjadi
difenilpikrilhidrazina (Amic et al. 2003). Uji
kemurnian fraksi aktif
menggunakan
kromatografi lapis tipis (KLT) 2 dimensi dan
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).
Flavonoid yang merupakan komponen fenolik
memberikan serapan pada panjang gelombang
240 dan 270 nm, dan antara 320 dan 380 nm.
Pada KCKT, digunakan detektor ultraviolet
(UV) atau UV-tampak (Lee 2000).
Spektrofotometer FTIR merupakan cara
paling sederhana dalam menentukan golongan
senyawa. Spektrum FTIR dapat menunjukkan
adanya beberapa gugus fungsi yang
merupakan pita-pita khas yang teramati dalam
spektrum senyawaan fenolik (Silverstein et al.
2005).

BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah biji
mahoni yang diambil dari Kebun Raya
Purwodadi Jawa Timur, etanol 70%, metanol,
etanol 96%, akuades, kloroform, eter,
NH4OH, H2SO4 2M, FeCl3 1%, anhidrida
asetat, amil alkohol, serbuk Mg, HCl pekat,
CH3COONa, Na2CO3, CH3COOPb, H2SO4

pekat, butil hidroksitoluena (BHT), etil asetat,
NaOH 0.1 N, n-heksana, HCl 2 N, DPPH,
pereaksi Mayer, Wagner, Dragendorf, dan
Lieberman-Buchard.
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan
kaca yang biasa digunakan di laboratorium,
KLT preparatif, pelat KLT GF254, penguap
putar,
spektrofotometer
UV-Tampak
Pharmaspec 1700 Shimadzu, KCKT 20
AD.Prominance UFLC Shimadzu, dan
spektrofotometer FTIR Bruker Trensor 37.
Kadar Air
Diagram alir penelitian ditunjukkan pada
Lampiran 1. Cawan porselen dikeringkan
pada suhu 105 oC selama 3 jam. Cawan
kemudian didinginkan dalam eksikator dan
ditimbang bobot keringnya. Sampel ditimbang
sebanyak 3 g dimasukkan ke dalam cawan
tersebut dan dipanaskan di dalam oven dengan
suhu 105 oC selama 3 jam. Setelah itu, cawan
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang
sampai bobotnya konstan.
Isolasi Flavonoid (Markham 1988)
Serbuk biji mahoni direndam dengan
etanol 70% selama 24 jam pada suhu kamar.
Ekstrak yang diperoleh disaring dan ampasnya
direndam kembali dengan etanol 70%
beberapa kali sampai ampas tidak berwarna
kuning. Filtratnya dipekatkan dengan penguap
putar.
Ekstrak etanol biji mahoni dipartisi dengan
n-heksana, kemudian dihidrolisis dengan HCl
2 N pada suhu 100 °C selama 60 menit.
Ekstrak etanol biji mahoni terhidrolisis
dipartisi dengan etil asetat. Fraksi etil asetat
dikumpulkan dan dipekatka