Efektivitas Ekstrak Kunyit (Curcoma longa) Terhadap Bakteri Porphyromonas gingivalis Secara In Vitro

LAMPIRAN

Tests of Normalityb,c,d,e,f

kel

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk Statistic Df Sig. Statistic df Sig.

koloni2 6,25% .246 5 .200* .956 5 .077

kontrol + .152 5 .200* .990 5 .978

a. Lilliefors Significance Correction

*. This is a lower bound of the true significance.

b. koloni2 is constant when kel = 100%. It has been omitted. c. koloni2 is constant when kel = 50%. It has been omitted. d. koloni2 is constant when kel = 25%. It has been omitted. e. koloni2 is constant when kel = 12,5%. It has been omitted. f. koloni2 is constant when kel = Kontrol -. It has been omitted.

Descriptivesa,b,c,d,e

Kel Statistic Std. Error

koloni2 6,25% Mean 9.20 .663

95% Confidence Interval for Mean

Lower Bound 7.36 Upper Bound 11.04

5% Trimmed Mean 9.22

Median 9.00

Variance 2.200

Std. Deviation 1.483

Minimum 7

Maximum 11

Range 4

Interquartile Range 2

Skewness -.552 .913

Kurtosis .868 2.000

kontrol + Mean 132.60 2.064

95% Confidence Interval for Mean

Lower Bound 126.87 Upper Bound 138.33

5% Trimmed Mean 132.56

Median 132.00

Variance 21.300

Std. Deviation 4.615

Minimum 127

Maximum 139

Range 12

Interquartile Range 8

Skewness .350 .913

Kurtosis -.450 2.000

a. koloni2 is constant when kel = 100%. It has been omitted. b. koloni2 is constant when kel = 50%. It has been omitted. c. koloni2 is constant when kel = 25%. It has been omitted. d. koloni2 is constant when kel = 12,5%. It has been omitted. e. koloni2 is constant when kel = Kontrol -. It has been omitted. NPAR TESTS

/K-W=koloni2 BY kel(1 7) /MISSING ANALYSIS.

NPar Tests

Notes

Output Created 29-Mar-2016 09:35:16

Comments

Input Data C:\Users\User\Documents\LAMORA

FKG.sav Active Dataset DataSet1 Filter <none> Weight <none> Split File <none>

N of Rows in Working Data File 35

Missing Value Handling Definition of Missing User-defined missing values are treated as missing.

Cases Used Statistics for each test are based on all cases with valid data for the variable(s) used in that test.

Syntax NPAR TESTS

/K-W=koloni2 BY kel(1 7) /MISSING ANALYSIS.

Resources Processor Timea 00:00:00.000

Elapsed Time 00:00:00.000

Number of Cases Allowed 112347

a. Based on availability of workspace memory.

[DataSet1] C:\Users\User\Documents\LAMORA FKG.sav

Kruskal-Wallis Test

Ranks

kel N Mean Rank

koloni2 100% 5 13.00

50% 5 13.00

25% 5 13.00

12,5% 5 13.00

6,25% 5 28.00

Kontrol - 5 13.00

kontrol + 5 33.00

Total 35

Test Statisticsa,b koloni2 Chi-Square 33.708

df 6

Asymp. Sig. .000 a. Kruskal Wallis Test

NPar Tests

Kruskal-Wallis Test

Ranks

kel N Mean Rank

koloni2 100% 5 13.00

50% 5 13.00

25% 5 13.00

12,5% 5 13.00

6,25% 5 28.00

Kontrol - 5 13.00

kontrol + 5 33.00

Total 35

Test Statisticsa,b koloni2 Chi-Square 33.708

Df 6

Asymp. Sig. .000 a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 100% 5 5.50 27.50

50% 5 5.50 27.50

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 100% 5 5.50 27.50

25% 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 100% 5 5.50 27.50

12,5% 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 100% 5 3.00 15.00

6,25% 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.795

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 100% 5 5.50 27.50

Kontrol - 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 100% 5 3.00 15.00

kontrol + 5 8.00 40.00

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.785

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 50% 5 5.50 27.50

25% 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

NPar Test

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 50% 5 5.50 27.50

12,5% 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 50% 5 3.00 15.00

6,25% 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Wilcoxon W 15.000

Z -2.795

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 50% 5 5.50 27.50

Kontrol - 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

koloni2 50% 5 3.00 15.00

kontrol + 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.785

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 25% 5 5.50 27.50

12,5% 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 25% 5 3.00 15.00

6,25% 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.795

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 25% 5 5.50 27.50

Kontrol - 5 5.50 27.50

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 25% 5 5.50 27.50

Kontrol - 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 25% 5 3.00 15.00

kontrol + 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.785

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 12,5% 5 3.00 15.00

6,25% 5 8.00 40.00

Total 10

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.795

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 12,5% 5 5.50 27.50

Kontrol - 5 5.50 27.50

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 12,5% 5 3.00 15.00

kontrol + 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.785

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 6,25% 5 8.00 40.00

Kontrol - 5 3.00 15.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.795

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 6,25% 5 3.00 15.00

kontrol + 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.619

Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: kel NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 Kontrol - 5 3.00 15.00

Ranks

kel N Mean Rank Sum of Ranks

koloni2 Kontrol - 5 3.00 15.00

kontrol + 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

koloni2

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.785

Asymp. Sig. (2-tailed) .005 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties.

DAFTAR PUSTAKA

1. Fatinos S.Panagos, Robin M.David. Gingival Disease- Their Etiologi Prevention and Treatment. INTECH Open acess Publisher; 2011: 2-87.

2. Preshaw P. Etiology of Periodontal disease. In: Newmen MG, Takei HH, Klokkwvold PR, Carranza FA. Eds. Carranza’s Clinical Periodontology, 11th

ed. Philadelphia:St. Louis Elsevier, 2012:193-98

3. Shalu Bathia. Periodontal Revisited. New Dehli:Jaypee Brothers Medical Publisher(P) LTD 2011:65-70.

4. Shantipriya Reddy. Essential Of Clinical Periodontology and Periodontis. New delhi: Jaypee Brothers Medical Publisher (P) LTD 2011:65-70.

5. Shagenobu kimura, Pathogenesis and Treatment of Periodontitis: INTECH Open acess Publisher 2011; 2-8.

6. Debby J. Suhanda.Gambaran Kebutuhan Perawatan Periodontal Pada Perokok Di Desa Matungkas Kecamatan Dimembe.2015;3(1):108-09.

7. Melak Aris Wahyukundari. Perbedaan Kadar MMF-8 Setelah Skalling dan Pemberian Tetrasiklin pada gingival crevicular Fluid Periodontitis Kronis. J PDGI 2008; 58(1): 1-6. 8. C.Aswini Somu. Efficiancy Of Herbal Of Herbal Extract Gel In The Treatment Of

Gingivitis: A clinical Study.J Ayur Integr Med 2012; 3(2) : 85-90.

9. H Nilofer Farjana, SC Chandrasekaran, Bagadvad Gita. Effect of Oral Curcoma Gel In Gingivitis Management. J Clin Diagn Res 2014;8(12): 1-5.

10. Pertamuan Simanjumlah, STUDI Kimia dan Farmakologi Tanaman Kunyit Sebagai Tubuhan Obat Serba Guna.J Kimia Mulawarna 2011;9(1):1-5.

11. Raja Nivetha, Karthigeyan, Asuwks. The Efeect Of Natural Product Oral Health.Asian J Pharm Cli Res 2015; 7(1):1-4.

12. Madhu bhatia, Shisha sanesh. Anoval Therapatic Approachfor the Treatment of Periodontic by Curcumin. J Clin Diagram 2014;8(12):1-5.

13. S.Subasree, Karthikeyan,Sri Pradhas, Effect Of Tumeric on Oral Health. Int J Pharm Sci Health Care 2014;2(1):1-9.

14. H.S Grover, Himashhu Deswal, Amit Bhardwaj. Curcumin A medical Plant and Its Effect In Medicine and Dentistry.Int J Contemporary Dental and Medical Review 2015;3(1):1-3.

15. Sana Mukhtar. Antibacterial Activity Of Aqueous And Ethanololic Exracts Of Garlic Cinnamon And Turmeric Against Escherichia Coli And Basillus Subtilitis. J Applied Biology and Pharmaceutical Technology 2012;3(1):131-136.

16. Akmane. Anaerobic Bacteria in Subject with Chronic Periodontitis and Periodontal Health. JOHCD 2009;3(3):49-51

17. Reshman Suvarna. Antibacterial Activity of Tumeric Against Entrococus Feacealis.Int J Curr.microbio 2014;3(2): 448-504.

18. Praveenkumar S. Mandroli. An in-vitro Evaluation of Antibacterial Activity Of Curcumin Against Comman Endodontic Bacteria. J Pharm Sci 2013;3(10):106-108.

19. Universal taxonomic service. Taxon: porphromonas gingivalis.

20. Astir I. periodontitis kronis. Htt://www.scribd.com/doc/134494473/A (januari 28 2016). 21. Muborokah S.outer membrane protein 49,4 Kda dari Porphromonas gingivalis

merupakan protein Hemaglutinin dan Adhesin terhadap Netrofil. J Kedokteraan Brawijaya 2009;25(2):49-59.

22. Alexa M.G The impact of virulence factors of Porphyromonas Gingivalis on wound healing in vitro. J oral microbiology 2015; 7(1):1-8.

23. Morten Enerson. Porphyromonas gingivalis Fimbriae. Journal of oral microbiology;2013:1-8.

24. BM Eley.TD Monson Periodontics Fifth Edition Wright IMPRINTED of Elevier Ltd: 2004, 8-10.

25. Valerie Clerhugh. Aradna Tugnait. Periodontology at a Glance: Willey Blackwell Publication; 2009:1-3.

26. Dakshita Jay Sharma. Comparision of Antibacterial Effect of Propolis,Neem, Tea Tree Oil, turmeric and Sodium Hypochrite. On Candida Albicans Biofilm.J Pharm Biomed science 2015;5(6):469-74.

27. Amita. Comparative Evalution Of 0.1% Turmeric Mouthwash With 0.2% Chlorohexide Gluconate In Prevention Of Plaque And Gingivitis A Clinical And Microbiological Study. J Ind Soc 2012; 16(3):386-391.

28. Nayyar Nadhini. Comparative evaluation of 1% Curcumin solution and 0.2% Chlorhexidine Irrigation As An Adjunct To Scaling And Root Planing In Management Of Chronic Periodontitis: A clinico-microbiological study. JPBMS 2012;14(5):1-7.

29. Sruthma. Effectiveness Of Sub Gingival Irrigation An Indigenous 1% Curcumin Solution On Clinical Microbiology Parameter Chronic Periodontitis Patients: A Pilot And Rondamized Clinical Trial. CCD 2013;4(2):185-191.

30. Sandeep A. Lawande. Therapeutic Application Of Tumeric In Dentistry A Promising Future. J Pharm Biomed Sci 2013; 27(27): 580-91.

31.Sharmila Devi,Prassanah Neelkantan. Curcoma Pharmacological Action and Its Role in Dentistry,APJRC;9(1):1-4.

32. Tiwarani Ranjana,Trisaathi. Theraupathic Effect Of Haridra In General Oral Health.AYUSHARA 2014;1(2):40-5.

33. S.Subasree, Karthikeyan,Sri Pradhas, Effect Of Tumeric on Oral Health. International Journal Of Pharmacuetical Science And Health Care 2014;2(1):1-9.

34. Ashok Kumar Population,Bangrahan Pagala. Extraction Of Curcumin From Tumeric Root.IJRIS 2015;2(1):1-11.

35. Nita Chainani. Safety Inflammatary Activity Of Curcumin A component Of Tumeric.JACM2003;9(1):101-08.

36. Prianca Madi Reddi. A Touch Of Tumeric Examming an Ayuvedic Tresure.Science Research 2013;3(1): 91-5.

37. Duggi Shrishali, Handrak Harish, Handrak Ravichandra. Tumeric Natural Preceious Medicine. Asia J Pharm Clin Res.2013;6(1):1-7.

38.Prof. (Dr) Mithra. Evaluation of Antimicrobial Activity of Aqueous and Hydro- Alcoholic Curcoma Longa Extract against Endodontic Pathogens. J Pharm 2012; 2(2): 192-198.

39.Shagufta Naz. Antibacterial Activity of Curcuma Longa Variety against Different Strain Of Bacterial. Pak J Bot 2010 ;42(1): 455-62.

40.Najah A.Mohammed. Evaluation Of Antimicrobial Activity of Curcumin against Two Oral Bacteria. Auto Contr Intel Sys 2015;3(1-2):18-20.

BAB 3

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini adalah penelitian kuasi eksperimental laboratorium dengan rancangan penelitian post test only control group design dan dilaksanakan secara in vitro.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian 3.2.1 Tempat Penelitian :

1. Laboratorium Obat Tradisional Fakultas Farmasi USU 2. Laboratorium Biologi Oral Universitas Airlangga 3.2.2 Waktu Penelitian : Januari 2016-Februari 2016

3.3 Sampel dan Besar Sampel Penelitian 3.3.1 Sampel Penelitian

Koloni Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 yang telah diisolasi dan dibiakkan dalam media Nutrient Agar (NA).

3.3.2 Besar Sampel Penelitian

Penentuan besar sampel dilakukan berdasarkan SOP (Standard Operational Procedure) di Laboratorium Biologi Oral Universitas Airlangga. Jumlah pengulangan yang dilakukan pada penelitian ini menggunakan rumus Federer yaitu:

Keterangan:

t = jumlah kelompok perlakuan dalam penelitian r = banyak replikasi (perlakuan ulang)

Pada penelitian ini dilakukan 5 perlakuan, yakni ekstrak kunyit dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25%. Oleh karena itu, banyak replikasi pada penelitian ini adalah sebagai berikut:

(t-1)(r-1) ≥ 15 (5-1)(r-1) ≥ 15 4 (r-1) ≥ 15 r-1 ≥ 3,75 r ≥ 4,75

Jumlah perlakuan ulang (r) yang digunakan dalam penelitian ini adalah 5 kali perulangan.

a. Penentuan nilai KHM

− Kelompok I : ekstrak dengan konsentrasi 100% = 5 sampel

− Kelompok II : ekstrak dengan konsentrasi 50% = 5 sampel

− Kelompok III : ekstrak dengan konsentrasi 25% = 5 sampel

− Kelompok IV : ekstrak dengan konsentrasi 12,5% = 5 sampel

− Kelompok V : ekstrak dengan konsentrasi 6,25% = 5 sampel

− Kelompok VI : kontrol Mc Farland = 5 sampel Jumlah sampel = 30 sampel

b. Penentuan nilai KBM

− Kelompok I : ekstrak dengan konsentrasi 100% = 5 sampel

− Kelompok II : ekstrak dengan konsentrasi 50% = 5 sampel

− Kelompok III : ekstrak dengan konsentrasi 25% = 5 sampel

− Kelompok IV : ekstrak dengan konsentrasi 12,5% = 5 sampel

− Kelompok V : ekstrak dengan konsentrasi 6,25% = 5 sampel

− Kelompok VI : kontrol Mc Farland = 5 sampel Jumlah sampel = 30 sampel

3.4 Variabel Penelitian 3.4.1 Variabel Bebas

− Ekstrak kunyit dengan pelarut etanol konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25%.

3.4.2 Variabel Tergantung

− Pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis pada media Nutrient Agar (NA) dengan pengukuran nilai KHM dan KBM

3.4.3 Variabel Terkendali − Asal kunyit

− Konsentrasi etanol yang digunakan (96%)

− Cara ekstraksi

− Suspensi Porphyromonas gingivalis ATCC 33277

− Media pertumbuhan Nutrient Agar (NA)

− Suhu yang digunakan untuk menumbuhkan Porphyromonas gingivalis (37oC)

− Cara pengeringan

− Waktu pengeringan

− Waktu pengamatan bakteri

− Lingkungan tempat kunyit ditanam 3.4.4 Variabel Tak Terkendali − Keseragaman kondisi kunyit

− Pola pemeliharaan kunyit

− Lama penyimpanan kunyit

− Lama pengiriman dan suhu saat pengiriman kunyit ke laboratorium

3.5 Definisi Operasional

No. Variabel Definisi Operasional Cara Ukur Skala Ukur Alat Ukur

1

Ekstrak kunyit dengan konsentrasi

100%

Ekstrak yang didapatkan dengan melarutkan 1 gram ekstrak kunyit

Sesuai SOP dari Laboratorium Biologi Oral UNAIR Rasio Electronic Balance, Gelas Ukur 2 Ekstrak kunyit dengan konsentrasi 50%

Ekstrak yang didapatkan dengan melarutkan ½ dari ekstrak kunyit konsentrasi 100% Mikropipet 3 Ekstrak kunyit dengan konsentrasi 25%

Ekstrak yang didapatkan dengan melarutkan ½ dari ekstrak kunyit konsentrasi 50% 4 Ekstrak Kunyit dengan konsentrasi 12,5%

Ekstrak yang didapatkan dengan melarutkan ½ dari ekstrak kunyit konsentrasi 25% 5 Ekstrak Kunyit dengan konsentrasi 6,25%

Ekstrak yang didapatkan dengan melarutkan ½ dari ekstrak kunyit konsentrasi 12,5

6

KHM (Kadar Hambat Minimal)

Konsentrasi minimal bahan coba yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri setelah diinkubasi selama 24 jam dan tidak tumbuh koloni bakteri pada media pembenihan dengan menggunakan metode dilusi Dalam satuan CFU/ml (Colony Forming Unit/Suspensi) Rasio Spektrofotometer 7 KBM (Kadar Bunuh Minimal)

Konsentrasi minimal bahan coba yang dapat membunuh bakteri setelah dilakukan uji dilusi selama 24 jam, dengan cara menghitung jumlah koloni bakteri pada media padat dengan menggunakan metode Drop Plate Mills Mesra

Kaca Pembesar

3.6Bahan dan Alat Penelitian 3.6.1 Bahan Penelitian

− Kunyit sebanyak 1500 gram

− Pelarut etanol 96% sebanyak 5 liter (Kimia Farma, Indonesia)

− Suspensi Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 (UNAIR, Indonesia)

− Media Nutrient Agar (UNAIR)

− NaCl 0,9% 1 liter (Kimia Farma, Indonesia)

3.6.2 Alat Penelitian − Lemari pengering

− Kertas perkamen

− Aluminium foil 1 gulungan

− Blender (Panasonic, Japan)

− Perkolator

− Kapas (Bio Panca, Indonesia)

− Kertas saring (Whatman no.42, England)

− Vaccum Rotary Evaporator (Heidolph VV 2000, Germany)

− Erlenmeyer (Pyrex, USA)

− Destilator

− Lemari penyimpan petri

− Piring petri (Pyrex, Japan)

− Inkubator CO2 (Sanyo, Japan)

− Autoklaf (Tomy, Japan)

− Electronic Balance (Ohyo JP2 6000, Japan)

− Vortex/whirli mixer (Iwaki model TM 100, Japan)

− Pipet mikro dan tips(Gilson, France)

− Kaca Pembesar (Ootsuka ENV-CL, Japan)

− Ose dan spi

3.7 Proses Pengambilan dan Pengolahan Data 3.7.1 Proses Pembuatan Ekstrak kunyit

1. _{Kunyit diseleksi kemudian dicuci bersih dengan air mengalir dan ditiriskan}

2. Kunyit yang telah dicuci ditimbang sebanyak 4 kg dengan alat penimbang dan dicatat berat basahnya.

3. Kunyit dikeringkan dengan menggunakan kertas alas perkamen di dalam lemari pengering dengan suhu 40 °C sampai kering.

Gambar 4. Pengering dengan suhu 40 ° sampai kering.

4. Kunyit yang sudah kering ditimbang kembali dan dihaluskan dengan blender sampai menjadi serbuk, lalu diletakkan dalam wadah tertutup.

Gambar 5. Kunyit diblender sampai menjadi serbuk.

3.7.2 Pembuatan Ekstrak

1. Simplisia ditimbang sebanyak 350 gram lalu ditambahkan etanol 96% sebanyak 3 liter untuk perendaman. Kemudian simplisia disimpan dalam\ wadah tertutup dan didiamkan selama 1 jam pada suhu 25 °C sambil sesekali diaduk dengan menggunakan spatula.

Gambar 6. Penambahan etanol 96% dan didiamkan pada wadah yang tutup.

2. Massa dipindahkan sedikit demi sedikit ke dalam perkolator dengan hati-hati sambil sesekali ditekan, di bawah perkolator diletakkan kapas yang telah dibasahi etanol dan dilapisi kertas saring, kemudian dituangkan etanol 96% sampai hampir penuh.

3. Perkolator ditutup dengan aluminium foil serta dibiarkan selama 24 jam.

.

Gambar 7. Proses perkolator.

4. Kran perkolator menetes dengan kecepatan 20 tetes/menit (1ml/menit), perkolat ditampung dalam botol.

Gambar 8. Kran perkolator menetes dengan kecepatan 20 tetes/menit.

6. Prosedur penampungan perkolat dilakukan sampai perkolat yang dihasilkan jernih. Semua perkolat digabung dan disaring,

7. Setelah itu sisa air diuapkan dengan menggunakan Vacuum Rotary Evaporator pada tekanan 1 ATM dengan termperatur ≤ 40˚C. Hasil akhir yang didapat adalah ekstrak kunyit

Gambar 9. Proses kental ekstrak kunyit.

3.7.2 Prosedur Pengenceran Bahan Coba (Ekstrak Kunyit)

Sebelum dilakukan pengenceran, tabung steril disediakan kemudian diberi label sesuai dengan konsentrasinya. Dalam hal ini, setiap tabung diberi label 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%. Setiap tabung diisi dengan media BHIB dengan volume 5 ml. Pada tabung 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25% diisi dengan media BHIB. Pada tabung berlabel 100% diisi dengan 10 ml ekstrak kunyit, selanjutnya diambil 5 ml dari tabung tersebut dan dipindahkan ke tabung berlabel 50%. Volume tabung yang berlabelkan 50% menjadi 10 ml dengan

penipisannya adalah: 5/10 = ½ = 50%. Setelah itu, diambil 5 ml dari tabung berlabel 50%, kemudian dimasukkan ke tabung berlabel 25% sehingga penipisannya adalah ¼ = 25%. Setelah itu, diambil 5 ml dari tabung berlabel 25%, kemudian dimasukkan ke tabung berlabel 12,5% sehingga penipisannya adalah 1/8 = 12,5%. Setelah itu, diambil 5 ml dari tabung berlabel 12,5%, kemudian dimasukkan ke tabung berlabel 6,25% sehingga penipisannya adalah 1/16 = 6,25%.

3.7.3 Pembuatan Media Bakteri

Sebelum spesimen dibiakkan, dibuat media NA, sebanyak 12 gram bubuk yang dilarutkan ke dalam 240 ml aquadest untuk 40 petri (20 ml/petri), lalu dipanaskan di atas tungku pemanas magnetik sampai mendidih. Kemudian media yang telah masak, disterilkan di dalam autoklaf selama 15 menit dengan tekanan udara 2 ATM, suhu 121°C. Setelah disterilkan, media disimpan di dalam lemari pendingin. Jika akan digunakan kembali, media dipanaskan kembali hingga mendidih, lalu dituangkan ke dalam masing-masing petri dan dibiarkan hingga dingin.

Gambar 10. Nutrient Agar (NA) 3.7.4 Pembiakan Spesimen

Kegiatan pembiakan spesimen dilakukan dalam suasana anaerob pada inkubator CO2. Porphyromonas gingivalis yang digunakan adalah specimen stem cell Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 yang telah dibiakkan secara murni pada media NA yang telah disiapkan pada prosedur sebelumnya dalam suasana anaerob. Sebanyak 1-2 ose dari biakan murni bakteri uji yang telah dikultur dan tumbuh dengan subur disuspensikan dengan menggunakan larutan NaCl 0,9% sampai diperoleh kekeruhan sesuai standar 0,5 Mc Farland atau sebanding dengan jumlah bakteri 1 x 108 CFU/ml.

Kontrol 0,5 Mc Farland diperoleh dengan pencampuran 0,05 ml Barium Klorida Dihidrat (BaCl2•2H2O) 1,175% dengan 9,95 ml Asam Sulfat (H2SO4) 1%. Kontrol ini menghasilkan suspensi bakteri dengan jumlah sekitar 1x108CFU/ml. Penggunaan kontrol 0,5 Mc Farland berdasarkan standar kekeruhan yang sesuai dalam penelitian bakteri.34

3.7.5 Pembuatan Kontrol Positif

Kontrol positif yang digunakan adalah suspensi bakteri yang telah disiapkan pada prosedur sebelumnya. Suspensi bakteri tersebut diambil sebanyak 2 ml dengan menggunakan mikropipet dan dimasukkan ke dalam microplate.

3.7.6 Penentuan KHM Bahan Coba

Bahan coba ekstrak kunyit yang dipakai terdiri dari konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25%. Dari masing-masing konsentrasi tersebut diambil sebanyak 1 ml lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian diberi label sesuai konsentrasinya. Selanjutnya diambil 1 ml suspensi bakteri yang telah dipersiapkan sebelumnya dengan menggunakan mikropipet lalu dimasukkan ke dalam masing-masing tabung bahan coba yang telah diberi label kemudian divorteks. Lalu tabung-tabung tersebut diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam pada inkubator CO2 dan diamati kekeruhan yang terjadi dan membandingkan tabung-tabung tersebut dengan kontrol untuk menentukan nilai KHM dari masing-masing bahan coba. Tabung dengan kekeruhan yang mulai tampak jernih untuk setiap kelompok perlakuan merupakan KHM yaitu konsentrasi minimal ekstrak atau bahan uji apapun yang mampu menghambat pertumbuhan Porphyromonas gingivalis dalam media perbenihan setelah diikubasi 24 jam dan tidak tumbuh koloni kuman dalam perbenihan tersebut.

3.7.7 Penentuan KBM Bahan Coba

Hasil prosedur penentuan nilai KHM tidak terlihat larutan yang mulai tampak jernih sehingga semua kelompok larutan dilanjutkan dengan penghitungan jumlah koloni bakteri, yaitu pada konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25% dengan metode Spreading. Setelah itu, bahan coba dengan konsentrasi tersebut masing-masing divorteks dan diambil 50

μl untuk tiap konsentrasi lalu diteteskan ke dalam media padat (Nutrient Agar), direplikasi sebanyak 5 petri, didiamkan selama 15-20 menit sampai mengering dan diinkubasi dalam inkubator CO2 dengan suhu 370 C selama 24 jam dan media padat akan tumbuh menjadi 1 koloni bakteri. Dilakukan perhitungan jumlah koloni bakteri untuk mendapatkan nilai KBM. Perhitungannya adalah bila bentuk koloni melebar dianggap berasal dari 1 koloni, bila bentuknya 2 koloni bersinggungan dianggap sebagai 2 koloni.

Satuan yang dipakai adalah CFU (Colony Forming Unit) / ml cairan (suspensi). Setelah dihitung jumlah koloni bakteri pada masing-masing tetesan, kemudian dibuat jumlah rata-ratanya dan dikalikan dengan faktor pengenceran dan faktor pengali. Karena pada penelitian konsentrasi yang dilakukan perhitungan jumlah koloni bakteri merupakan konsentrasi awal (sebelum dilakukan dilusi) maka faktor pengenceran x 1, selain itu karena pada penetesan suspensi bahan coba dan bakteri pada media padat sebanyak 50 μl, maka hasil perhitungan harus dikali dengan faktor pengali 20 untuk mendapatkan hasil sesuai satuan standar (CFU/ml).

Gambar 12. Penanaman bakteri dan ekstrak kunyit pada Nutrient Agar.

Gambar 13. Metode Spreading pada penanaman

dan penghitungan jumlah koloni bakteri P.gingivalis.

Gambar 14. Suspensi bakteri media padat dalam inkubator

3.8 Skema Alur Penelitian

3.9 Pengolahan dan Analisis Data 3.9.1 Pengolahan Data

Pengolahan data dan tabulasi dilakukan secara komputerisasi.

3.9.2 Analisis Data

Analisis data yang digunakan pada penelitian ini adalah dengan menggunakan uji One way Anova untuk membandingan mean lebih dari dua kelompok dengan derajat kepercayaan 95%. Signifikasi statistik diperoleh jika nilai p<0,05. Uji normalitas dengan sampel kecil menggunakan uji Shapiro Wilk. Apabila tidak terdistribusi normal, maka akan digunakan uji Kruskal-Wallis.

BAB 4

HASIL PENELITIAN Pembuatan Ekstrak kunyit

Pengenceran Bahan Coba

Pembuatan Media Bakteri

Pembiakan Spesimen

Penentuan KHM Bahan Coba

Penentuan KBM Bahan Coba

4.1 Ekstrak Kunyit (Curcoma longa)

Kunyit yang digunakan diidentifikasi terlebih dahulu di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) (Lampiran 3). Kunyit dikeringkan dan dihaluskan 350 gram lalu ditambahkan etanol 96% sebanyak 3 liter untuk perendaman sehingga dihasilkan maserat cair sebanyak 2 liter diuapkan dengan vacuum rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental kunyit yang berwarna kuning sebanyak 45 gram (Gambar 1) Ekstrak disimpan di dalam botol kaca tertutup dan diletakkan dalam lemari pendingin.

Gambar 15. Ekstrak kunyit

4.2 Uji Efektifitas Antibakteri

Pengujian daya antibakteri dilakukan dengan mengamati perubahan kekeruhan pada tiap konsentrasi bahan coba (100%, 50%, 25%, 12,5% , 6,25%). Observasi terhadap KHM adalah dengan melihat tabung yang mulai berubah setelah diberi perlakuan dibandingkan dengan kontrol. Penentuan nilai KHM dengan menggunakan metode dilusi cair tidak dapat dilakukan pada penelitian ini karena kelima konsentrasi ekstrak kunyit memiliki kekeruhan dan tidak ada tabung yang terlihat jernih walaupun ekstrak kunyit efektif terhadap bakteri P.gingivalis yang telah dibuktikan dengan perhitungan visual pada media agar (Gambar 2).

Gambar 16. Hasil pengamatan metode dilusi cair

Penelitian dilanjutkan dengan menentukan nilai KBM dan KHM yang dilakukan dengan menghitung jumlah koloni bakteri mengguna metode spread pada media Nutrient Agar (steril) yang bertujuan untuk membuktikan adanya kemampuan ekstrak kunyit menghambat dan membunuh bakteri sebesar 99% - 100% pada konsentrasi terkecil. Bahan coba dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% masing-masing divorteks dan diambil 50 µl lalu diteteskan ke dalam media padat (Nutrient Agar) direplikasi 6 petri dan diinkubasi dalam inkubator CO2 dengan suhu 37oC selama 24 jam.

c d

Gambar 17. Pertumbuhan P.gingivalis pada media yang diberi ekstrak kunyit (a) 100%; (b) 50%; (c) 25%; (d) 12,5

Hasil uji bakteri pada Gambar 4.3 dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5% memperlihatkan zona bening yang berarti tidak dijumpai pertumbuhan koloni bakteri atau 0 CFU/ml. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak kunyit pada konsentrasi tersebut sudah mampu memberikan efek antibakteri, namun pada penelitian ini yang dicari adalah konsentrasi minimum.

Gambar 18. Pertumbuhan P.gingivalis pada media yang diberi ekstrak kunyit pada konsentrasi 6,25% dan diperbesar

Pada konsentrasi 6.25% dijumpai adanya pertumbuhan koloni bakteri. P.gingivalis.

a b

Gambar 19. Menunjukan kontrol positif pada replikasi pertama.

Kontrol positif yang digunakan adalah suspensi bakteri yang telah dimasukkan ke dalam tabung yang berisi Brain Heart Infusion Broth (BHIB). Hasil uji efektivitas antibakteri terhadap P.gingivalis dari 5 replikasi pada masing masing konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25% dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 1. Hasil uji efektivitas antibakteri P.gingivalis dari 5 replikasi pada masing-masing konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25%.

KONSENTRASI (%)

JUMLAH BAKTERI (CFU/ml) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4 Replikasi 5

100 0 0 0 0 0

50 0 0 0 0 0

25 0 0 0 0 0

12,5 0 0 0 0 0

6,25 10 9 7 11 9

Kontrol positif 132 135 137 129 130

Keterangan: 0 = steril, tidak ada pertumbuhan bakteri CFU/ml = Colony Forming Unit per milliliter

Pada Tabel 1. dapat dilihat bahwa pada konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5% tidak terdapat pertumbuhan bakteri P.gingivalis pada kelima replikasi. Sedangkan pada konsentrasi 6,25% terdapat pertumbuhan koloni bakteri P.gingivalis dengan pertumbuhan koloni paling besar pada replikasi keempat. Berdasarkan hasil tersebut dapat ditetapkan bahwa nilai KHM dan KBM ekstrak kunyit terhadap P.gingivalis pada penelitian ini adalah 6,25% dan 12,5%.

Shapiro wilk adalah uji normalitas yang dianjurkan apabila jumlah sampel kecil. Berdasarkan uji normalitasi secara statistik (Shapiro wilk), ditemukan bahwa distribusi data

dikategorikan tidak normal. Hasil perhitungan koloni bakteri dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5% dan kontrol negatif adalah 0 sehingga datanya tidak terdistribusi normal. Oleh karena itu analisis data yang digunakan yaitu Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney. Hasil statistik dari pengujian Kruskal-Wallis dilakukan untuk mengetahui perbedaan keefektifan konsentrasi ekstrak kunyit yang terhadap P.gingivalis dengan nilai (p=0,000). Seterusnya uji Mann-Whitney dilakukan untuk mengetahui perbedaan jumlah koloni bakteri pada masing-masing konsentrasi.

Tabel 2. Perbedaan jumlah koloni bakteri dengan ekstrak kunyit pada konsentrasi 6,25% dan kontrol positif.

Konsentrasi Jumlah Koloni Bakteri

Mean ± SD p 6,25% 9,00 ± 2 0,000* Kontrol (+) 112,60 ± 20

*Nilai P signifikan apabila p<0,05

Tabel 2 menunjukkan terdapat perbedaan jumlah koloni bakteri yang signifikan antara konsentrasi 6,25% dan kontrol positif (p=0,000). Hal ini menunjukkan ekstrak kunyit 6,25% efektif dalam menghambat bakteri P.gingivalis

Tabel 3. Perbedaan antara koloni bakteri dan setiap konsentrasi ekstrak kunyit, kontrol positif dan kontrol negatif

P 100% 50% 25% 12,5% 6,25% Kontrol

(+)

Kontrol (-)

100% 1,000 1,000 1,000 0,005* 0,005* 1,000

50% 1,000 0,005* 0,005* 0,005* 1,000

25% 0,005* 0,005* 0,005* 1,000

12,5% 0,009* 0,009* 0,005*

6,25% 0,009* 0,005*

Kontrol (+)

0,005*

Tabel 3 menunjukkan bahwa terdapat perbedaan jumlah koloni bakteri antara konsentrasi ekstrak kunyit 100% dengan 6.25% dan kontrol positif (p=0,005) dan hasilnya yang signifikan secara statistik. Hasil yang sama juga didapati pada ekstrak kunyit dengan konsentrasi 50% dengan 12,5%,6,25% dan kontrol positif (p=0,005). Perbedaan yang signifikan juga ditemukan pada konsentrasi 12,5% dengan 6,25% , 12,5% dengan kontrol positif dan 6,25% dengan kontrol positif (p=0,009).

BAB 5 PEMBAHASAN

Penelitian mengenai efektivitas ekstrak kunyit (Curcoma longa) terhadap bakteri P. gingivalis ini membuktikan bahwa ekstrak kunyit (Curcoma longa) memiliki efek antibakteri terhadap pertumbuhan P.gingivalis. Pada pengujian antibakteri setiap konsentrasi bahan coba dilakukan replikasi sebanyak 5 kali agar diperoleh hasil yang lebih akurat dan diketahui rata-rata jumlah bakteri yang tumbuh pada ekstrak kunyit dalam berbagai konsentrasi.

Konsentrasi Hambatan Minimum (KHM) merupakan konsentrasi ekstrak terendah yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme secara visual pada tabung uji.34 Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa dari semua konsentrasi bahan coba yang diuji yaitu 100%, 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% ternyata tidak dapat dilihat larutan jernih setelah diinkubasi selama 24 jam dengan menggunakan metode dilusi cair karena kelima konsentrasi ekstrak kunyit memiliki kekeruhan dan warna yang sama dengan kontrol positif sehingga pada tabung tidak ada yang terlihat jernih walaupun ekstrak kunyit efektif terhadap bakteri P.gingivalis yang dapat dibuktikan dengan perhitungan visual pada media agar. Dari hasil perhitungan media agar terdapat KHM 6,25%.

Konsentrasi Bunuh minimum (KBM) merupakan konsentrasi terendah dimana tidak terjadi pertumbuhan bakteri setelah disubkultur pada media agar dan dinkubasi 37oC selama 24 jam. Tingkat konsentrasi yang menunjukkan tidak ada pertumbuhan bakteri merupakan nilai KBM.34 Konsentrasi 100 % (sangat kental) akan secara langsung membunuh bakteri P.gingivalis karena tingginya konsentrasi antibakteri yang terkandung di dalamnya. Begitu juga yang terjadi pada kosentrasi 50%, 25% dan 12,5% tidak dijumpai pertumbuhan bakteri (steril atau 0 CFU/ml) dan pada konsentrasi 6,25% terlihat pertumbuhan bakteri .

Penelitian yang dilakukan oleh Najah A. Mohammad dkk, mengenai ekstrak kunyit (Curcoma longa) terhadap bakteri oral S.mutans dan S.pyogens menunjukkan nilai KHM sebesar 9.7 mm dan 10.2 mm. Nilai yang diperoleh berbeda dengan penelitian ini, hal tersebut mungkin disebabkan karena perbedaan jenis bakteri yang diteliti. Penelitian ini melihat efektivitas ekstrak kunyit terhadap bakteri P. gingivalis yang merupakan bakteri Gram negatif sedangkan pada penelitian Najah A. Mohammad dkk melihat pengaruh ekstrak kunyit terhadap S.mutans dan S.pyogen yang merupakan Gram positif. Perbedaan bakteri Gram positif dan negatif pada struktur dinding sel bakterinya dimana bakteri Gram

negatif lebih kompleks bila dibandingkan dengan bakteri Gram positif sehingga kemungkinan senyawa kurkumin lebih sulit untuk menghambat bakteri Gram negatif.16

Penelitian yang dilakukan oleh Sana Mukhtar dkk pada konsentrasi kunyit 100% menunjukan zone hambatan maksimal 14mm terhadap bakteri B.subtilitis dan 11mm terhadap E.coli.15 Dengan zona hambat tersebut, dapat disimpulkan bahwa kunyit memiliki efek antibakteri yang kuat terhadap kedua bakteri tersebut. Selanjutnya pada penelitian yang dilakukan oleh Praveenkumar dkk tentang efektivitas antibakteri Curcoma longa terhadap bakteri endodontik seperti Streptococcus mutans (ATCC 35668), Actinomyces viscosus (ATCC10048), Lactobacillus casei (ATCC 334), Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), Prevotella intermedia(ATCC 25611), Enterococcus faecalis (ATCC 29212) menunjukkan nilai KHM 125 μg /ml terhadap bakteri P.gingivalis dan KHM yang diperolehi pada penelitian ini sebesar 6,25%. Hasil yang diperoleh pada penelitian ini berbeda dengan penelitian Sana muktar dkk dan Pravenkumar dkk dalam metode ekstraksi kunyit. Penelitian Sana muktar dkk dan Praveenkumar dkk mengunakkan bahan pelarut aquades untuk membuat ekstraksi kunyit sedangkan pada penelitian ini digunakan bahan pelarut etanol.

Praveenkumar dkk mengunakan pelarut aquades untuk mengetahui sifat kunyit yang murni dalam perawatan saluran akar dan pada penelitian Sana muktar dkk membandingkan pelarut aquades dan etanol untuk mengetahui efek penghambatan yang maksimal kunyit terhadap bakteri. Dari hasil penelitian tersebut disimpulkan ekstraksi kunyit dengan etanol menunjukan efektivitas yang lebih baik terhadap bakteri dibanding aquades.16 Hal ini karena etanol merupakan pelarut organik yang dapat melepaskan komponen antimikroba kunyit dalam jumlah besar. Oleh karena itu pada penelitian ini digunakan etanol dan dapat memberikan efek yang baik terhadap bakteri P.gingivalis kerana dapat menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi kecil yiaitu 12,5%.

Shagufta Naz dkk melakukan penelitian dengan mengunakkan berbagai jenis kunyit yaitu Kasur, Faisalabad dan Bannu terhadap empat jenis bakteri yaitu B.subtilitis,

B.macerans, B.licheniformis dan Azotobacter.35 Penelitian tersebut menunjukkan KHM

sebesar 3,0 mm dan 20.6 mm yang dapat memperlihatkan walaupun jenisnya berbeda kunyit tetap memiliki efek antibakteri

Hasil penelitian ini berbeda dengan hasil yang diperoleh Suvarna dkk yang meneliti sifat antibakteri kunyit terhadap bakteri Entercoccus faecalis pada saluran akar.36 Pada penelitian tersebut ekstrak kunyit tidak menunjukkan sifat antibakteri dibandingkan dengan kalsium hidroksida 0.2 % dan 0.5 % serta klorheksidin 2%. Hal ini dibuktikan dengan tidak terlihatnya zona bening disekitar lingkaran dari seleruh konsentrasi yang diteliti.

Selain itu bakteri yang diteliti oleh Survarna dkk mengunakkan bakteri Gram negatif yaitu Entercoccus faecalis dan Shagufta Naz dkk melakukan penelitian dengan bakteri Gram positif B.subtilitis, B.macerans,B.licheniformis dan Azotobacter. Metode ekstraksi kunyit yang berbeda antara dua penelitian yaitu pada penelitian Shagufta dkk mengunakkan ekstraksi pelarut minyak dan pada penelitian Reshman dkk digunakan pelarut etanol sehingga memperoleh hasil yang berbeda.

Kunyit menunjukkan sifat antibakteri dengan kehadiran senyawa fenolik, minyak atsiri, kurkumin dan asid velerik. Odhav dkk melakukan penelitian bahwa mekanisma antibakteri kunyit dengan ikatan hidrophobik dan hidrogen pada komponen fenolik sehingga terjadi destruksi membran protein dan transportasi elektron ke dinding sel. Penelitian ini membuktikan bahwa ekstrak kunyit memiliki efek antibakteri terhadap bakteri P. gingivalis secara in vitro. Hal ini kemungkinan akan berbeda hasilnya di dalam jaringan periodontal, maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut sehingga kunyit dapat digunakan sebagai bahan perawatan penyakit periodontal.

BAB 6

KESIMPULAN DAN SARAN

6.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan diperoleh kesimpulan : 1. Ekstrak kunyit efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri P.gingivalis.

2. Nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak kunyit terhadap bakteri P.gingivalis sebesar 6,25% dan 12,5%

.

6.2 Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui:

1. Efektivitas bahan ini terhadap bakteri pathogen periodontal lain.

2. Mengetahui zat aktif mana yang memiliki efek antibakteri terhadap bakteri P.ginigivalis.

3. Berdasarkan KHM dan KBM yang diperoleh maka dapat dilakukan penelitian

lanjutan untuk membuat ekstrak kunyit sebagai bahan gel, bahan irigasi, pasta gigi, obat kumur, dll.

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Bakteri Porphyromonas gingivalis

Bakteri Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) merupakan bakteri anaerob Gramm negatif, non motil, assacharolytic dan terlihat berbentuk kokus sampai berbentuk batang pendek. Pembentukan fimbriae pada P.gingivalis dimediasi terutama melalui struktur filamen pada permukaan sel. Fimbrriae juga memiliki perlekatan yang sangat kuat pada sel epitel dan memiliki potensi besar menjadi virulensi.2,16,17

Secara taksonomi, bakteri ini diklasifikasi sebagai berikut:18 Kingdom : Bacteria

Filum : Bacterioedetes Kelas :Bacterioedes Ordo : Bacteriodales

Familia: Porphyromonadaceae Genus : Porphyromonas

Spesies : Porphyromonas gingivalis

Gambar 1. Bakteri Porphyromonas gingivalis.19

Habitat utama bakteri P.gingivalis adalah pada plak subgingiva di dalam sulkus gingiva atau poket periodontal. P.gingivalis adalah anggota bacteroides pigmen hitam. Organisme dari kelompok ini bervariasi warnaya dari coklat hingga hitam, dikembangkan dalam agar darah dan awalnya dikelompokkan dalam spesies tunggal.17,18 Kolonisasi P.gingivalis pada sulkus gingiva merupakan langkah pertama dalam perkembangan periodontitis kronis.3

2.2 Patogenesis terjadinya penyakit periodontal akibat bakteri Porphyromonas gingivalis

Faktor patogen P.gingivalis termasuk fimbriae, hemagglutinin, kapsul, lipopolisakarida LPS, vesikel membran luar dan pelbagai metabolik organik. Pada awalnya bakteri berkolonisasi pada lingkungan periodontal lalu menempel pada lapisan pelikel permukaan gigi.20 P.gingivalis melalui fimbriae pada permukaan bakteri kaya prolin protein ditemukan pada lapisan saliva di permukaan gigi. Melalui perlekatan fimbrianya, P.gingivalis mengikat sel-sel epitel dan fibroblas.21,22 Molekul –molekul adhesi seperti hemagglutinin dan fimbrilin terdapat P.gingivalis akan menempel pada substrata atau sel.23

Bakteri ini berperan sangat penting dalam virulensi melalui proses adhesi dengan sel penjamu serta merupakan antigen untuk mendeteksi adanya serum antibody pada penderita. P.gingivalis mampu menghambat produksi IL-8 oleh sel epitel yang dapat memberikan keuntungan bagi mikroorganisme dalam menghindari daya bunuh PMN. Enzim proteolitik seperti tripsin mampu mendegradasi kolegen, fibronektin, dan immunoglobulin. Enzim bakteri dapat memfasilitasi kerusakan jaringan dan infasi dari bakteri ke dalam jaringan penjamu.2,24

2.3 Curcoma longa (Kunyit) 2.3.1 Pengertian

Kunyit (Curcoma longa) adalah rempah-rempah kuno yang berasal dari rimpang Curcoma longa yang merupakan keluarga dari zingberacacoe yang memiliki batang pendek dengan daun lonjong besar, bulat telur, rimpangnya berbentuk piriform dan lonjong yang sering bercabang berwarna kuning kecoklatan.Tanaman tropis ini banyak terdapat di benua Asia yang secara ekstensif digunakan sebagai zat pewarna dan pengharum makanan.25 Kunyit (Curcoma longa) juga dikenal dalam bentuk serbuk dengan nama turmerik (turmeric) dan banyak digunakan untuk bahan obat. Ketika zaman agama Hindu mulai berkembang, di dalam buku tua ‘Ayurvedic’ juga dituliskan bahwa kunyit tercatat sebagai aromatika, stimulan, dan sebagai sumber zat warna merah tua. 26,27

2.3.2 Klasifikasi kunyit (Curcoma longa) Nama binomial : Curcuma longa

Kingdom : Plantae Angiosperma Monocots Commelinids Order : Zingiberales Keluarga : Zingiberaceae

Genus : Curcuma

Spesies : C. Longa 28

Gambar 2. Curcoma longa (kunyit).24

2.3.3 Komposisi

Kandungan kimia kunyit (Curcoma longa) terdiri atas karbohidrat (69,4%), protein (6,3%), lemak (5,1%), mineral (3,5%), dan air (13,1%). Kunyit juga mengandung minyak esensial yaitu α-phellandrene (1%), sabinene (0.6%), cineol (1%), borneol (0.5%), zingiberene (25%), dan sesquiterpines (53%). Minyak esensial ini dapat dihasilkan dengan proses destilasi uap dari rimpang. Pada simplisia Curcoma Longa (kunyit) terkandung senyawa dikenal sebagai kurkuminoid terdiri dari kurkumin (diferuloyl methane), demethoxycurcumin dan bisdemethoxycurcumin sebesar 60%-70%.26,27 Kurkuminoid mempunyai sifat pewarnaan kekuningan dan merupakan komponen yang aktif dalam reaksi biologis.10,29,30

2.3.4 Kegunaan Kunyit (Curcoma longa) di Bidang Kedokteran Gigi 1) Bahan deteksi plak

Bahan deteksi plak biasanya mengandung agen pewarnaan yang diformulasikan dalam larutan atau bentuk tablet Kunyit mengandung pigmentasi kuning dari yang berasal dari kurkumin.23 Chaturvedi (2010) melakukan penelitian tentang penggunaan kunyit (Curcoma longa) sebagai bahan deteksi plak yaitu dengan mengguakan pewarna kuning pigmentasi beni-koji dan bantuan pencahayaan octupus light pada panjang golombang 250-500nm pada rongga mulut untuk mendeteksi plak.26,28

2) Pit dan fissure sealent

Pit dan fisur yang dalam memudahkan terjadinya karies gigi. Penggunaan bahan fissure sealent pada permukaan gigi dapat mencegah atau mengurangi timbulnya karies gigi. Bahan fissure sealant ini dapat diproduksi dari komposisi yang mengandung monomer akrilik dengan setidaknya satu pewarna yang dipilih dari salah satu kelompok ekstrak Annatto, ekstrak kunyit , dan β- Apo-8- Carotenal.26,28

3) Efek antikariogenik

Lee dkk., mengevaluasi adanya efek inhibisi minyak esensial yang diisolasi dari

kunyit (Curcoma longa) terhadap sifat kariogenik yang dimiliki oleh Streptococcus mutans.

Hasil penelitian tersebut juga menunjukkan minyak esensial dari kunyit (Curcuma longa) dapat menghambat pertumbuhan dan produksi Streptococcus mutans pada konsentrasi 0,5-4 mg/mL. Minyak esensial kunyit (Curcuma longa) telah diamati pada konsentrasi 0,5-4 mg/ml. Hasil pengamatan menunjukkan penghambatan yang signifikan dari perlekatan Streptococcus mutans pada saliva yang dilapisi butir-butir hidroksil apatit dan menghambat pembentukan Streptococcus mutans pada konsentrasi yang lebih tinggi dari 0,5 mg/ml.26.28

4) Pencegahan plak dan perawatan penyakit periodontal

Kunyit (Curcuma longa) sebagai antiinflamasi telah diteliti dan menunjukkan penurunan derajat inflamasi yang signifikan. Bhandari dan Shankwalkar menggunakan kunyit (Curcoma longa) sebagai obat kumur dan mengevaluasikan bahwa kunyit merupakan agen antiinflamasi. 26,28

Waghmere dkk., juga menyatakan obat kumur ekstrak kunyit (Curcoma longa) yang mengandung kurkumin sebanyak 10 mg dapat dilarutkan dalam 100 mL aquades. Obat kumur ini memiliki pH 4 dan memiliki efektivitas yang sama seperti obat kumur klorheksidin glukonat. Pengobatan topikal dengan menggunakan kunyit 2% dalam bentuk gel pada pasien periodontitis kronis dapat digunakan sebagai perawatan penunjang tindakan skeling dan

penyerutan akar. Hasil perawatan tersebut menunjukkan penurunan dalam indeks plak, indeks gingiva, kedalaman poket dan peningkatan perolehan perlekatan klinis yang signifikan.26,28

Kurkumin 1% sebagai bahan irigasi subgingiva menghasilkan penurunan perdarahan probing dan inflamasi yang signifikan bila dibandingkan dengan klorheksidin dan larutan salin yang biasa digunakan sebagai terapi tambahan pada pasien periodontitis. Kunyit (Curcoma longa) juga menunjukkan penyembuhan yang lebih baik sebagai inflamasi dibanding klorheksidin dan irigasi salin dan secara selektif mengurangi mediator inflamasi, mengurangi inflamasi dan pembengkakan pembuluh darah pada jaringan ikat. Kunyit (Curcoma Longa) juga mempercepat penyembuhan luka dengan menyebabkan peningkatan fibronektin.26,29

Niyomploy menyatakan bahwa fraksi minyak poliskarida kunyit (Curcoma longa) mengambat sekitar 30% poliferasi sel fibroblas gingiva. Fraksi lain menunjukan penghambatan sel fibroblas gingiva pada 92%. 30,23,32

5) Lesi prekanker

Kunyit (Curcoma longa) memiliki peran dalam pengobatan berbagai kondisi prekanker seperti fibrosis submukosa oral, leukoplakia, dan lichen planus. Ekstrak kunyit (Curcoma longa) dan minyak esensial menunjukkan aktivitas oncopreventive secara in vitro dan in vivo. Kurkuminoid pada dosis 6000 mg perhari dapat ditoleransi dengan baik dan dapat membuktikan keberhasilan dalam mengendalikan tanda dan gejala lichen planus.26,28,33

6) Recurrent Aphthous Stomatitis (RAS)

Recurrent Aphthous Stomatitis (RAS) adalah kondisi inflamasi dengan etiologi tidak diketahui yang memengaruhi mukosa mulut. Sekitar 20% dari populasi menderita RAS. Penyakit ini terutama melibatkan permukaan mukosa nonkeratin dan terlihat ulkus yang menimbulkan kekambuhan dan rasa sakit sekitar 24-48 jam. Pasien yang menggunakan minyak kurkumin melaporkan bahwa ulkus mulai sembuh lebih awal dari kondisi inflamasi sebelumnya dan terdapat pengurangan rasa sakit. Kontrol yang dilakukan selama satu tahun telah menunjukkan bahwa tidak terjadi kekambuhan pada pasien ini.26,28,31

7) Perawatan secara lokal

Behal dkk., melakukan penelitian untuk membandingkan efektivitas kunyit (Curcoma longa) sebagai terapi secara lokal yaitu menggunakan gel 2% kunyit (Curcoma longa) setelah skeling dan penyerutan akar. Evaluasinya dilakukan terhadap plak, inflamasi gingiva, perdarahan pada probing, kedalam poket, perlekatan jaringan dan aktivitas bakteri seperti B. forsytus, P. gingivalis, T. denticola dan disimpulkan bahwa 2% gel kunyit efektif dalam perawatan poket periodontal.26,28

8) Penyembuhan luka pembedahan

Habiboallah dkk., melakukan penelitian terhadap kunyit (Curcoma longa) dan asam hiluronik terhadap penyembuhan luka pasca bedah gingiva pada anjing beagle . Hasil penelitian tersebut menunjukan terdapat perbedaan yang signifikan pada derajat inflamasi dan parameter penyembuhan lainnya pada kasus yang dirawat dengan kunyit (Curcoma longa) serta efek positif kunyit (Curcoma longa) dalam penyembuhan pasca bedah periodontal.26,28

9) Sifat antioksidan

San Miguel dkk., melakukan penelitian dan menyimpulkan bahwa kunyit (Curcoma longa) sebagai antioksidan dapat mempertahankan kesehatan rongga mulut dan melindungi fibroblas dari efek dentrimental oleh hidrogen peroxide, ethanol dan nicotine melalui pengurangan oksigen, meningkat pergerakan sel dan DNA sintesis.26,28

2.3.5 Efek Antibakteri Kunyit

Minyak curcuma juga telah diuji terhadap kultur Staphylococcus albus, S.aureus dan Bacillus typhosus, mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. albus dan S. aureus pada konsentrasi IC50 dalam 5000 ml.

B. Shankar dan Murthy dkk., menyelidiki aktivitas fraksi turmerik terhadap beberapa bakteri usus secara in vitro. Hasilnya menunjukkan bahwa daya hambat pertumbuhan total Lactobacilli adalah 4,5–90 ml alkohol, juga efektif pada 10-200 g/ml, tetapi pengambatanya tidak sama bila menggunakan turmerik secara langsung yang mempunyai daya hambat pertumbuhan bakteri S. Aureus sebesar 2,5 – 50 g/ml.10

2.3.6 Efek Antiinflamasi Kunyit

Kurkumin memiliki kemampuan untuk mengurangi peradangan akut dan kronis dengan menurunkan histamin dan meningkatkan produksi kortison secara alami melalui kelenjar adrenal. Kunyit juga mengurangi rasa sakit seperti arthritis , bursitis, tendonitis dan kekakuan sendi. Kurkumin juga hambat inflamasi dengan biosintesis prostaglandin dari asam arakidonat dan fungsi neutrofil . Kurkumin telah ditemukan untuk menjadi lebih unggul dengan plasebo dan NSAID.10

2.4 Pengujian Laboratorium untuk Mengetahui Sensitivitas Antibakteri

Daya agen antibakteri terhadap organisme dapat diukur secara kualitatif dan kuantitatif. Metode yang dapat mengukur sensitivitas antibakteri secara kualitatif adalah disc diffusion tests, sedangkan secara kuantitatif ialah dengan menguji atau menghitung Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM).

Uji in vitro ini mengindikasikan apakah konsentrasi terapeutik yang ada merupakan dosis standar dalam menghambat organisme. Hasil uji ini hanya dapat menggambarkan aktivitas obat secara in vitro, sedangkan efeknya secara in vivo tergantung pada beberapa faktor seperti kemampuan obat untuk mencapai daerah infeksi dan status imun pejamu.

Disc diffusion test merupakan metode yang paling sering digunakan dalam menguji sensitivitas suatu agen antibakteri. Pada metode ini, isolat yang akan diuji dibiakkan di suluruh permukaan agar plate kemudian diletakkan beberapa disc yang sudah mengandung agen yang akan diuji. Setelah didiamkan selama satu malam dalam suhu 37o C, zona hambat yang terbentuk pada tiap disc diukur.

Dalam menetapkan KHM dan KBM, potensi antibiotik dapat diperkirakan secara kuantitatif. Metode yang digunakan adalah tube dilution technique, yaitu menggunakan beberapa tabung reaksi yang berisi cairan nutrisi yang cocok dengan organisme yang akan diuji. Kemudian organisme disuntikkan ke dalam cairan tersebut dan diinkubasi selama 24 jam. KHM merupakan konsentrasi terendah suatu agen yang dapat menghambat pertumbuhan organisme secara in vitro. Setelah didapatkan KHM, setiap tabung yang terlihat jernih disubkultur di media agar padat untuk dapat ditentukan KBM. Konsentrasi terendah dimana tidak terjadi pertumbuhan bakteri setelah subkultur merupakan KBM.38

2.5 Kerangka Teori

Plak Bakteri

Penyakit Periodontal

Perawatan

Kimia sintesis Herbal

Ekstrak kunyit (Curcoma longa)

Kurkumin Minyak Alkaloid

atsri

Velerik asid

Turmerol

Jumlah koloni Porphyromonas gingivalis menurun

2.6 Kerangka Konsep

Variabel Bebas:

Ekstrak kunyit dengan pelarut etanol (100%,50%, 25%, 12,5%, dan 6,25%)

Variabel Terikat: Pertumbuhan bakteri

Porphyromonas gingivalis pada media Nutrient Agar (NA) dengan pengukuran nilai KHM dan KBM

Variabel Terkendali: a. Asal kunyit

b. Konsentrasi etanol yang digunakan (96%) c. Cara ekstraksi

d. Suspensi Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 e. Media pertumbuhan Nutrient

Agar (NA)

f. Suhu yang digunakan untuk menumbuhkan

Porphyromonas gingivalis (37oC)

g. Cara pengeringan h. Waktu pengeringan

i. Waktu pengamatan bakteri

Variabel Tak Terkendali: a. Keseragaman kondisi kunyit b. Pola pemeliharaan kunyit c. Lama penyimpanan kunyit d. Lama pengiriman dan suhu

saat pengiriman kunyit ke laboratorium

e. Lingkungan tempat kunyit ditanam

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Biofilm plak adalah struktur tiga dimensi yang kompleks, terdiri dari mikrokoloni bakteri yang melekat kuat pada permukaan gigi, restorasi, maupun prostetik.1,2 Plak dapat diklasifikasikan menjadi plak supragingiva dan plak subgingiva berdasarkan lokasinya pada permukaan gigi. Plak bakteri merupakan etiologi utama terjadinya gingivitis dan destruksi periodontal. Kemampuan bakteri untuk melekat pada pejamu menyebabkan terjadinya penyakit infeksi seperti gingivitis dan periodontitis. 3

Salah satu bakteri yang berperan dalam penyakit periodontal adalah Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis).4 P.gingivalis merupakan bakteri anaerob Gram negatif yang terlihat dalam patogenesis periodontitis. P.gingivalis hampir selalu ditemukan di daerah subgingiva dan persisten dalam reservoir pada permukaan mukosa seperti pada lidah dan tonsil, namun P. gingivalis jarang ditemukan dalam plak manusia yang sehat. Bakteri ini menyebabkan perubahan patalogi jaringan periodontal dengan pengaktifan respon imun dan inflamateri, serta secara langsung mempengaruhi sel-sel periodonsium. Mikroorganisme ini juga merupakan faktor resiko pada penyakit jantung koroner, infeksi paru, kelahiran bayi dengan berat badan rendah.5

Perawatan utama penyakit periodontal adalah menghilangkan faktor etiologi antara lain dengan melakukan kontrol plak dan skeling untuk mengurangi inflamasi sehingga memberi kesempatan jaringan gingiva untuk sembuh.6 Berbagai produk alami telah disebutkan dalam buku tua Ayurveda dan terdapat beberapa penelitian yang membuktikan efektifitasnya dalam menangani penyakit mulut. Produk alami tersebut adalah Curcuma longa, Astronium urundeuva, Calendula, Aloe vera, Curcuma edoaria, dan rempah-rempah lain.7,8

Kunyit (Curcuma longa) adalah rempah yang biasa digunakan sebagai bumbu masakan di negara-negara Asia dan juga sering digunakan dalam pengobatan tradisional.9,10 Kunyit memiliki senyawa bioaktif antara lain minyak aksirin, kurkumin dan demetosikurkumin, bisdemetosikurkumin, saponin, flavonoid dan polifenol. Senyawa bioaktif ini bersifat antibakteri, antijamur, pemberantas serangga dan antioksidan. Secara tradisional kunyit juga digunakan sebagai agen perasa bahan antibakteri dalam pangan.11,12 Salah satu

komposisi kunyit (Curcoma longa) yaitu kurkumin memiliki sifat antioksidan, antiinflamasi, antibakteri, antivirus, dan analgesik.13

Shagufta Naz dkk, melakukan penelitian mengenai efektivitas kunyit terhadap berbagai jenis bakteri dan memperoleh hasil yang positif.14 Sana Mukthtar dkk, melakukan penelitian membanding efektivitas kunyit dengan ekstraksi ethanol dan air terhadap bakteri Escherichia coli ATCC 25922 dan Bacillus subtilitis DSM 3256.15 Hal ini didukung pula oleh penelitian Najah A.Muhmad dimana kurkumin ditemukan efektif sebagai antibakteri terhadap dua jenis bakteri oral Streptokokus mutans dan Streptokokus pyogens dengan diameter kadar hambatan minimum (KHM) adalah 9,7 mm dan 10,2 mm.16 Seterusnya Praveenkumar dkk, melakukan penelitian terhadap pelbagai bakteri endodontik dengan kunyit dan membuktikan sifat antibakteri kunyit.17

Walaupun telah banyak penelitian mengenai penggunaan ekstrak kunyit dalam bidang kedokteran gigi sebagai antimikroba, antiinflamasi dan antioksidan, belum ada penelitian yang menunjukkan efektivitas bakteri P. gingivalis terhadap ekstrak kunyit secara in vitro. Oleh karena itu, penulis tertarik untuk melakukan penelitian tentang efektivitas ekstrak kunyit (Curcuma longa) terhadap bakteri P.gingivalis.

1.2 Rumusan Masalah

1. Apakah ekstrak kunyit efektif menghambat pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis.

2. Berapakah Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak kunyit terhadap bakteri Porphyromonas gingivalis.

1.3 Tujuan Penelitian

1. Mengetahui pengaruh ekstrak kunyit dalam menghambat pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis.

2. Mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak kunyit terhadap bakteri Porphyromonas gingivalis.

.

1.4 Hipotesis Penelitian

Ekstrak kunyit (Curcoma longa) memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P.gingivalis.

1.5 Manfaat Penelitian 1.5.1 Manfaat Teoritis

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan atau kontribusi bagi pengembangan bahan herbal dan penerapannya, khususnya di bidang perawatan penyakit periodontal.

1.5.2 Manfaat Praktis

Penelitian mengenai ekstrak kunyit (Curcuma longa) ini diharapkan dapat menjadi bahan alternatif yang digunakan sebagai terapi penunjang oleh klinis dalam melakukan perawatan periodontal.

Fakultas Kedokteran Gigi Departemen Periodonsia

2016 Ragunathan Thambysamy

Efektivitas Ekstrak Kunyit (Curcoma longa) Terhadap Bakteri Porphyromonas gingivalis Secara In Vitro.

X + 40 halaman

Plak bakteri merupakan etiologi utama terjadinya gingivitis dan destruksi periodontal. Kemampuan bakteri untuk melekat pada pejamu menyebabkan terjadinya penyakit infeksi seperti gingivitis dan periodontitis. Salah satu bakteri yang berperan dalam penyakit periodontal adalah Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis). Kunyit (Curcuma longa) adalah rempah yang biasa digunakan sebagai bumbu masakan di negara-negara Asia dan juga sering digunakan dalam pengobatan tradisional. Kunyit memiliki senyawa bioaktif yang bersifat antibakteri, antijamur, pemberantas serangga dan antioksidan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh ekstrak kunyit (Curcoma longa) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) dan mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak kunyit terhadap bakteri Porphyromonas gingivalis..

Jenis penelitian yang dilakukan adalah penelitian kuasi eksperimental laboratorium post test only control group design dan dilaksanakan secara in vitro. Sampel yang digunakan yaitu sampel Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277) yang dibiakkan dalam media Nutrient Agar (NA). Jumlah sampel yang digunakan yaitu 30 sampel dengan perulangan 5 kali. Pengujian efektivitas ekstrak kunyit terhadap Porphyromonas gingivalis dilakukan dengan metode dilusi cair dan dilusi padat. Proses pengamatan dilakukan secara visual dengan bantuan 3 pengamat. Hasil penelitian menemukan bahwa nilai KHM ekstrak kunyit terhadap Porphyromonas gingivalis adalah sebesar 6,25%, sedangkan nilai KBM sebesar 12,5% dan menunjukkan bahwa ekstrak kunyit memiliki efek antibakteri.

Kata kunci : Kunyit, antibakteri, Konsentrasi Hambat Minimum, Kadar Bakteri minimum, Porphyromonas gingivalis.

Faculty of Dentistry

Department of Periodontology 2016

Ragunathan Thambysamy

The effectiveness of Tumeric (Curcoma longa) extract towards Porphyromonas gingivalis: an In Vitro Study.

X+ 40.

The primary etiologic occurrence of gingivitis and periodontal destruction is bacterial plaque. The ability of bacteria to attach to host cause infectious diseases such as gingivitis and periodontitis. Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) is one of the bacteria involved in periodontal disease. Turmeric (Curcuma longa) is a spice commonly used as a cooking spice in asian countries and are often used in traditional medicine. Turmeric has bioactive compounds that are antibacterial , antifungal , eradication of insects and antioxidants .

The purpose of this study was to determine the effect of turmeric extract (Curcoma longa) inhibiting the growth of bacteria Porphyromonas gingivalis and determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Kill Concentration used (MBC) turmeric extract against bacteria Porphyromonas gingivalis . This study used in vitro quasi laboratory experimental with post test only control group design. The sample was 30 Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277) bred in Nutrient Agar (NA) media with 5 replication each concentration. Analyzing of the effect is done by liquid and solid dilution method with visual observation. Each observation carried out by 3 observer. Results demonstrated that extract has MIC value of 6,25% and MBC value of 12,5% against Porphyromonas gingivalis and also showed that tumeric extract has antibacterial activity.

Key words: Tumeric, antibacterial, Maximum Inhibition Concentration, Maximum Bacterial Concentration, Porphyromonas gingivalis.

EFEKTIVITAS EKSTRAK KUNYIT (Curcoma longa)

TERHADAP BAKTERI Porphyromonas gingivalis

SECARA IN VITRO

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi tugas dan melengkapi

syarat guna memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh:

RAGUNATHAN THAMBYSAMY

NIM: 120600222

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

Fakultas Kedokteran Gigi Departemen Periodonsia

2016 Ragunathan Thambysamy

Efektivitas Ekstrak Kunyit (Curcoma longa) Terhadap Bakteri Porphyromonas gingivalis Secara In Vitro.

X + 40 halaman

Plak bakteri merupakan etiologi utama terjadinya gingivitis dan destruksi periodontal. Kemampuan bakteri untuk melekat pada pejamu menyebabkan terjadinya penyakit infeksi seperti gingivitis dan periodontitis. Salah satu bakteri yang berperan dalam penyakit periodontal adalah Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis). Kunyit (Curcuma longa) adalah rempah yang biasa digunakan sebagai bumbu masakan di negara-negara Asia dan juga sering digunakan dalam pengobatan tradisional. Kunyit memiliki senyawa bioaktif yang bersifat antibakteri, antijamur, pemberantas serangga dan antioksidan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh ekstrak kunyit (Curcoma longa) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) dan mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak kunyit terhadap bakteri Porphyromonas gingivalis..

Jenis penelitian yang dilakukan adalah penelitian kuasi eksperimental laboratorium post test only control group design dan dilaksanakan secara in vitro. Sampel yang digunakan yaitu sampel Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277) yang dibiakkan dalam media Nutrient Agar (NA). Jumlah sampel yang digunakan yaitu 30 sampel dengan perulangan 5 kali. Pengujian efektivitas ekstrak kunyit terhadap Porphyromonas gingivalis dilakukan dengan metode dilusi cair dan dilusi padat. Proses pengamatan dilakukan secara visual dengan bantuan 3 pengamat. Hasil penelitian menemukan bahwa nilai KHM ekstrak kunyit terhadap Porphyromonas gingivalis adalah sebesar 6,25%, sedangkan nilai KBM sebesar 12,5% dan menunjukkan bahwa ekstrak kunyit memiliki efek antibakteri.

Kata kunci : Kunyit, antibakteri, Konsentrasi Hambat Minimum, Kadar Bakteri minimum, Porphyromonas gingivalis.

Faculty of Dentistry

Department of Periodontology 2016

Ragunathan Thambysamy

The effectiveness of Tumeric (Curcoma longa) extract towards Porphyromonas gingivalis: an In Vitro Study.

X+ 40.

The primary etiologic occurrence of gingivitis and periodontal destruction is bacterial plaque. The ability of bacteria to attach to host cause infectious diseases such as gingivitis and periodontitis. Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) is one of the bacteria involved in periodontal disease. Turmeric (Curcuma longa) is a spice commonly used as a cooking spice in asian countries and are often used in traditional medicine. Turmeric has bioactive compounds that are antibacterial , antifungal , eradication of insects and antioxidants .

The purpose of this study was to determine the effect of turmeric extract (Curcoma longa) inhibiting the growth of bacteria Porphyromonas gingivalis and determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Kill Concentration used (MBC) turmeric extract against bacteria Porphyromonas gingivalis . This study used in vitro quasi laboratory experimental with post test only control group design. The sample was 30 Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277) bred in Nutrient Agar (NA) media with 5 replication each concentration. Analyzing of the effect is done by liquid and solid dilution method with visual observation. Each observation carried out by 3 observer. Results demonstrated that extract has MIC value of 6,25% and MBC value of 12,5% against Porphyromonas gingivalis and also showed that tumeric extract has antibacterial activity.

Key words: Tumeric, antibacterial, Maximum Inhibition Concentration, Maximum Bacterial Concentration, Porphyromonas gingivalis.

PERNYATAAN PERSETUJUAN

Skripsi ini telah disetujui untuk dipertahankan di hadapan tim penguji skripsi

Pembimbing: Medan, April 2016

Tanda Tangan

Rini Octavia Nasution.,drg.,S.H.,M.Kes.,Sp.Perio ……….. NIP. : 19781002 200312 2 005

TIM PENGUJI SKRIPSI

Skripsi ini telah dipertahankan di hadapan tim penguji Pada tanggal 21 April 2016

TIM PENGUJI

KETUA: Rini Octavia Nasution.,drg.,S.H.,M.Kes.,Sp.Perio ………. NIP. : 19781002 200312 2 005

ANGGOTA:

1. Zulkarnain, drg., M.Kes ……….

2. Aini Hariyani Nasution, drg.,Sp.Perio ……….

Mengetahui,

SEKRETARIS DEPARTEMEN

Pitu Wulandari, drg., S.Psi., Sp.Perio ... NIP. 19790514 200502 2 001

KATA PENGANTAR

Puji Syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Gigi.

Rasa terima kasih yang tak terhingga penulis sampaikan kepada kedua orang tua tercinta Ayahanda Thambysamy dan Ibunda Krishnaveny, nenek tersayang Jayaletchumi, serta kakak dan adik tersayang Anusia , Rathiga yang senantiasa memberikan doa, kasih sayang, dan dukungan baik moral maupun materil untuk penulis sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.

Penulis mengucapkan terima kasih kepada Rini Octavia Nasution, drg.,S.H.,M.Kes.,Sp.Perio selaku dosen pembimbing yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran dalam memberi bimbingan dan arahan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.

Dalam penulisan skripsi ini, penulis juga telah banyak mendapat bimbingan, bantuan, motivasi serta saran-saran dari berbagai pihak. Oleh karena itu dengan kerendahan hati serta penghargaan yang tulus penulis mengucapkan terima kasih kepada:

1. Prof. Nazruddin, drg., C.Ort., Ph.D, Sp.Ort selaku Dekan Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara.

2. Pitu Wulandari,drg.,S.Psi.,Sp.Perio selaku Sekretaris Departemen Periodonsia Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara.

3. Zulkarnain, drg., M.kes dan Aini Hariyani Nasution, drg.,Sp.Perio selaku dosen penguji atas saran dan masukan sehingga skripsi ini dapat menjadi lebih baik.

4. Aditya Rachmawathi, drg.,Sp.Orto selaku dosen pembimbing akademik penulis, yang telah membina dan mengarahkan penulis selama menjalani perkuliahan di Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatra Utara.

5. Seluruh staf pengajar Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara, khususnya staf pengajar dan staf adminstrasi Departemen Periodonsia.

6. Drs. Awaluddin Saragih, M.Si., Apt. selaku Ketua Laboratorium Obat Tradisional Fakultas Farmasi Universitas Sumatra Utara dan staf pembantu yang turut membantu dan menemani dalam mengerjakan penelitian ini.

7. Dr. Muhammad Luthfi, drg., M.Kes selaku Kepala Departemen Biologi Oral Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga dan Mas Eta Radhianto selaku Staf

Laboratorium Biologi Oral Universitas Airlangga yang telah menyediakan tempat dan waktu dalam kegiatan laboratorium.

8. Ibu Maya Fitria, SKM., M.Kes selaku pengajar Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Sumatera Utara yang telah membimbing penulis dalam pengolahan data. 9. Sivakumar, Harindren dan Nirosha sebagai sahabat terbaik yang membantu dan

mendukung penulis dalam suka maupun duka dalam pembuatan skripsi ini.

10. Teman-teman tersayang: Shalini, Lamora, Tivya, Dashni,Sri Ram, Sasi, Nimal, Gwee, Darseni, Nathania, Kumaran, Ba.Punitha, Vincent, Jayu Arif Tohari yang selalu memberi doa dan dukungan kepada penulis.

11. Sahabat-sahabat dan teman-teman seperjuangan angkatan 2012 yang telah mendukung dan membantu dalam penyusunan skripsi ini

Penulis menyadari bahwa penulis masih dalam proses pembelajaran sehingga skripsi ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu kritik dan saran yang membangun dari semua pihak sangat diharapkan untuk kedepannya. Akhirnya penulis mengharapkan semoga hasil karya atau skripsi ini dapat memberikan sumbangan pikiran yang berguna bagi fakultas, pengembangan ilmu dan masyarakat.

Medan, 21 April 2016 Penulis,

( Ragunathan Thambysamy) NIM: 120600222

DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL ...

HALAMAN PERSETUJUAN... HALAMAN TIM PENGUJI SKRIPSI ... KATA PENGANTAR ...

DAFTAR ISI ... I DAFTAR GAMBAR ... II DAFTAR TABEL ... III DAFTAR LAMPIRAN ... IV BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang ... 1

1.2 Rumusan Masalah ... 2

1.3 Tujuan Penelitian ... 2

1.4 Hipotesis ... 3

1.4 Manfaat Penelitian ... 3

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Porphyromonas gingivalis ... 4

2.2 Patogenesis terjadinya penyakit periodontal akibat bakteri Porphyromonas gingivalis ... 5

2.3 Kunyit (Curcoma longa) ... 6

2.3.1 Pengertian ... 6

2.3.2 Klasifikasi Kunyit ... 6

2.3.3 Komposisi ... 7

2.3.4 Kegunaan Kunyit dalam Kedokteran Gigi ... 7

2.3.5 Efek Antibakteri Kunyit ... 10

2.3.6 Efek Antinflamasi Kunyit ... 11

2.4 Pengujian Laboratorium untuk Mengetahui Sensitivitas Antibakteri.. 11

2.5 Kerangka Teori ... 13

2.6 Kerangka Konsep ... 14

BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Jenis Penelitian... 15

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian ... 15

3.2.1 Tempat Penelitian ... 15

3.2.2 Waktu Penelitian ... 15

3.3 Sampel dan besar Sampel Penelitian 3.3.1 Sampel Penelitian ... 15

3.3.2 Besar Sampel Penelitian ... 15

3.4 Variabel Penelitian ... 17

3.5 Definisi Operasional Variabel... 18

3.6 Alat dan Bahan Penelitian ... 19

3.7.1 Proses Pembuatan Ekstrak Kunyit ... 20

3.7.2 Pembuatan Ekstrak ... 21

3.7.3 Pengeceran Bahan Coba ... 23

3.7.4 Pembuatan Media Bakteri ... 23

3.7.5 Pembiakan Spesimen ... 24

3.7.6 Pembutan Kontrol positif ... 24

3.7.7 Penentuan KHM Bahan Coba ... 24

3.7.8 Penentuan KBM Bahan Coba ... 24

3.8 Skema Alur Penelitian ... 25

3.9 Analisa Data ... 26

BAB 4 HASIL PENELITIAN 4.1 Ekstrak Kunyit ... 27

4.2. Uji Efektivitas Antibakteri ... 27

BAB 5 PEMBAHASAN ... 34

BAB 6 KESIMPULAN DAN SARAN ... 38

DAFTAR PUSTAKA ... 39 LAMPIRAN

Laboratorium Biologi Oral Universitas Airlangga yang telah menyediakan tempat dan waktu dalam kegiatan laboratorium.

8. Ibu Maya Fitria, SKM., M.Kes selaku pengajar Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Sumatera Utara yang telah membimbing penulis dalam pengolahan data. 9. Sivakumar, Harindren dan Nirosha sebagai sahabat terbaik yang membantu dan

mendukung penulis dalam suka maupun duka dalam pembuatan skripsi ini.

10. Teman-teman tersayang: Shalini, Lamora, Tivya, Dashni,Sri Ram, Sasi, Nimal, Gwee, Darseni, Nathania, Kumaran, Ba.Punitha, Vincent, Jayu Arif Tohari yang selalu memberi doa dan dukungan kepada penulis.

11. Sahabat-sahabat dan teman-teman seperjuangan angkatan 2012 yang telah mendukung dan membantu dalam penyusunan skripsi ini

Penulis menyadari bahwa penulis masih dalam proses pembelajaran sehingga skripsi ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu kritik dan saran yang membangun dari semua pihak sangat diharapkan untuk kedepannya. Akhirnya penulis mengharapkan semoga hasil karya atau skripsi ini dapat memberikan sumbangan pikiran yang berguna bagi fakultas, pengembangan ilmu dan masyarakat.

Medan, 21 April 2016 Penulis,

( Ragunathan Thambysamy) NIM: 120600222

DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL ...

HALAMAN PERSETUJUAN... HALAMAN TIM PENGUJI SKRIPSI ... KATA PENGANTAR ...

DAFTAR ISI ... I DAFTAR GAMBAR ... II DAFTAR TABEL ... III DAFTAR LAMPIRAN ... IV BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang ... 1

1.2 Rumusan Masalah ... 2

1.3 Tujuan Penelitian ... 2

1.4 Hipotesis ... 3

1.4 Manfaat Penelitian ... 3

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Porphyromonas gingivalis ... 4

2.2 Patogenesis terjadinya penyakit periodontal akibat bakteri Porphyromonas gingivalis ... 5

2.3 Kunyit (Curcoma longa) ... 6

2.3.1 Pengertian ... 6

2.3.2 Klasifikasi Kunyit ... 6

2.3.3 Komposisi ... 7

2.3.4 Kegunaan Kunyit dalam Kedokteran Gigi ... 7

2.3.5 Efek Antibakteri Kunyit ... 10

2.3.6 Efek Antinflamasi Kunyit ... 11

2.4 Pengujian Laboratorium untuk Mengetahui Sensitivitas Antibakteri.. 11

2.5 Kerangka Teori ... 13

2.6 Kerangka Konsep ... 14

BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Jenis Penelitian... 15

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian ... 15

3.2.1 Tempat Penelitian ... 15

3.2.2 Waktu Penelitian ... 15

3.3 Sampel dan besar Sampel Penelitian 3.3.1 Sampel Penelitian ... 15

3.3.2 Besar Sampel Penelitian ... 15

3.4 Variabel Penelitian ... 17

3.5 Definisi Operasional Variabel... 18

3.6 Alat dan Bahan Penelitian ... 19

3.7.1 Proses Pembuatan Ekstrak Kunyit ... 20

3.7.2 Pembuatan Ekstrak ... 21

3.7.3 Pengeceran Bahan Coba ... 23

3.7.4 Pembuatan Media Bakteri ... 23

3.7.5 Pembiakan Spesimen ... 24

3.7.6 Pembutan Kontrol positif ... 24

3.7.7 Penentuan KHM Bahan Coba ... 24

3.7.8 Penentuan KBM Bahan Coba ... 24

3.8 Skema Alur Penelitian ... 25

3.9 Analisa Data ... 26

BAB 4 HASIL PENELITIAN 4.1 Ekstrak Kunyit ... 27

4.2. Uji Efektivitas Antibakteri ... 27

BAB 5 PEMBAHASAN ... 34

BAB 6 KESIMPULAN DAN SARAN ... 38

DAFTAR PUSTAKA ... 39 LAMPIRAN

Daftar Gambar

Gambar Halaman

1. Bakteri Porphyromonas gingivalis ……….………… 4

2. Curcoma longa ………...………... 7

3. Proses Cuci ,Kering Kunyit ………...……….………… 10

4. Pengeringan Dengan Suhu 400 ……… 20

5. Blender Sampai Serbuk……….………..… 21

6. Penambahan Etanol ………..……….… … 21

7. Perkolator Yang Sudah Ditutup Aluminium Foil………. 21

8. Kran Perkolator Dibuka Dan Aliran Diarahkan Ke Botol Penampung… 22

9. Proses Kental Kunyit……… 23

10. Nutrient agar (NA) ……….. 23

11. Suspensi bakteri tabung reaksi dalam inkubator………. 24

12. Penanaman bakteri dan ekstrak kunyit pada Nutrient Agar………. 25

13. Metode Spreading pada penanaman dan penghitungan bakteri………… 25

14. Suspensi bakteri media padat dalam inkubator………. 25

15. Ekstrak kunyit………...……… 27

16. Hasil Pengamatan Metode Dilusi Cair………. 28

17. Pertumbuhan P.gingivalis pada media yang diberi ekstrak kunyit……. .. 29

18. Pertumbuhan P.gingivalis pada media yang diberi ekstrak kunyi kosentrasi 6,25% ………...………... 30

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Hasil uji efektivitas antibakteri terhadap P.gingivalis dari 5 replikasi pada konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, dan 6,25% ………. 31 2. Perbedaan jumlah koloni bakteri dengan ekstrak kunyit pada konsentrasi 6,25% dan kontrol positif ……….. 32 3. Perbedaan jumlah koloni bakteri antar konsentrasi 100%, 50%,

DAFTAR LAMPIRAN

1. Sertifikat hasil uji efektivitas ekstrak kunyit (Curcoma longa ) Terhadap Porphyromonas gingivalis secara in vitro.

2. Hasil identifikasi tanaman

3. Surat keterangan LAB obat tradisional Fakultas farmasi USU