AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA DAUN Moringa oleifera TERHADAP Escherichia coli DENGAN METODE BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
RIRIN PUSPITA
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI
n-HEKSANA DAUN Moringa oleifera
TERHADAP Escherichia coli DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
2016
ii
iii
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim.
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokaatuh
Alhamdullillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan
rahmat, taufik, serta hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya
tulis yang berbentuk skripsi ini sesuai dengan waktu yang telah direncanakan.
Shalawat serta salam semoga senantiasa tercurahkan kepada Nabi Muhammad
SAW beserta seluruh keluarga dan sahabatnya yang selalu istiqamah membantu
perjuangan beliau dalam mensyiarkan ajaran islam di muka bumi ini. Berkat
rahmat dan karunia-Nya sehingga kami dapat menyelesaikan tugas akhir yang
berjudul “AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA DAUN
Moringa oleifera TERHADAP Escherichia coli DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI”. Tugas akhir ini merupakan syarat terakhir yang harus
ditempuh untuk menyelesaikan pendidikan pada jenjang Strata Satu (S1), pada
Jurusan Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Malang.
Penulisan skripsi ini, dapat terselesaikan tentunya berkat bimbingan dan
bantuan dari berbagai pihak, baik berupa moril maupun materil. Oleh karena itu
pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya
kepada :
1. Siti Rofida, S.Si., Apt. sebagai Pembimbing I dan Ahmad Shobrun Jamil,
S.Si., M.P. sebagai Pembimbing II yang dengan tulus ikhlas dan penuh
kesabaran, membimbing dan memberi dorongan moral maupun materi
kepada penulis sehingga skripsi ini dapat diselesaikan.
2. Sovia Aprina Basuki, S.Farm.,M.Farm., Apt. dan Engrid Juni Astuti,
M.Farm., Apt. sebagai Tim Penguji yang memberikan saran dan kritik yang
membangun terhadap skripsi yang telah penulis kerjakan.
3. Yoyok Bekti Prasetyo, M.Kep., Sp.Kom selaku Dekan Fakultas Ilmu
Kesehatan, Nailis Syifa, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku Ketua Program Studi
Farmasi, semua Dosen Farmasi dan Kepala laboratoriun serta laboran di
Universitas Muhammadiyah Malang yang telah memberikan waktu untuk
mengajarkan ilmu-ilmu yang sangat bermanfaat.
iv
4. Kedua orang tua tercinta Bapak H. Darianto dan Ibu Hj. Siti Mukalimah, atas
doa yang selalu dipanjatkan untuk kesuksesan anaknya, atas curahan kasih
sayang yang tiada hentinya, serta segala bentuk motivasi yang telah diberikan
kepada penulis selama menempuh pendidikan sampai di tingkat perguruan
tinggi.
5. Kakak tersayang mbak Fitria Nuf Fadilah dan mas Khoirul Hadi Mustofa
serta adik tercinta Lucky Abdillah yang tak henti-hentinya memberikan
semangat, motivasi, doa, dan dukungan moril maupun materil.
6.
Teman-teman seperjuangan dalam penelitian Tri Rahmi, Fanny Rochmah,
Ninuk, Ainun, Renny, Yuanita, mbak Fatilah dan mbak Reska yang telah
membantu selama penyusunan dan penyelesaian skripsi ini.
7. Teman-teman farmasi 2012 khususnya Dzati, Sherly, Ridha, Rahma,
Churoida, Navisa, Evy, Rosida Fajrin, Ayu Linda, Mustika, Siska, Venny,
Fudho, Fifi, Angga. Semoga kita jadi orang yang sukses dan berguna dimasa
depan.
8. Untuk sahabatku Qisthi Almusawwamah, Mbak Anggun, Dawam, Fadli,
Dannis, Darul Pojok, Jazomers dan HIMABU Malang atas dukungannya
selama ini.
9. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu, yang telah
memberikan bantuannya, baik moril maupun material.
Tentunya sebagai manusia tidak pernah luput dari kesalahan, penulis
menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu saran
dan kritik yang membangun dari semua pihak sangat diharapkan demi
penyempurnaan selanjutnya. Akhirnya hanya kepada Allah SWT kita kembalikan
semua urusan dan semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak,
khususnya bagi penulis dan para pembaca pada umumnya. Aammiin Ya Rabbal
‘Alamain
Wassalamu’alaikum, warohmatullahi wabarokaatuh
Malang, Juni 2016
Penulis,
Ririn Puspita
v
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iv
RINGKASAN ........................................................................................................ vi
ABSTRAK ........................................................................................................... viii
DAFTAR ISI........................................................................................................... x
DAFTAR TABEL................................................................................................ xiii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................................xv
BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1
1.1 Latar Belakang............................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah.......................................................................................4
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................4
1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................................4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................5
2.1 Daun Kelor (Moringa oleifera) ..................................................................5
2.1.1 Klasifikasi ................................................................................................5
2.1.2 Morfologi Daun .......................................................................................5
2.1.3 Kandungan Kimia....................................................................................6
2.1.4 Manfaat dan Aktivitas Biologis Daun Kelor ...........................................6
2.2 Escherichia coli ..........................................................................................7
2.2.1 Taksonomi ...............................................................................................7
2.2.2 Morfologi dan Identifikasi.......................................................................7
2.2.3 Patognesis ................................................................................................8
2.2.4 Terapi.......................................................................................................9
2.3 Kloramfenikol...........................................................................................10
2.4 Aktivitas Antibakteri Senyawa Metabolit Sekunder ................................11
2.4.1 Alkaloid .................................................................................................11
2.4.2 Flavonoid ...............................................................................................11
2.4.3 Tanin ......................................................................................................12
2.4.4 Terpenoid...............................................................................................13
2.4.5 Quinon ...................................................................................................14
2.5 Ekstraksi ...................................................................................................14
x
2.5.1 Maserasi.................................................................................................15
2.5.2 Pelarut Maserasi.....................................................................................18
2.5.3 Kromatografi Lapis Tipis ......................................................................19
2.6 Uji Kepekaan Terhadap Aktivitas Antimikroba Secara In Vitro..............21
2.6.1 Metode Difusi ........................................................................................21
2.6.2 Metode Dilusi Tabung ...........................................................................21
2.6.3 Metode Bioautografi..............................................................................22
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL................................................................25
3.1 Bagan Kerangka Konseptual ....................................................................25
3.2 Uraian Kerangka Konseptual....................................................................26
BAB IV METODE PENELITIAN ........................................................................28
4.1 Lokasi Penelitian ......................................................................................28
4.2 Alat Penelitian ..........................................................................................28
4.2.1 Pembuatan Serbuk Simplisia .................................................................28
4.2.2 Proses Ekstraksi .....................................................................................28
4.2.3 Pengujian Bioautografi ..........................................................................28
4.2.4 Identifikasi Profil KLT ..........................................................................29
4.3 Bahan Penelitian .......................................................................................29
4.3.1 Bahan Uji ...............................................................................................29
4.3.2 Proses Ekstraksi .....................................................................................29
4.3.3 Pengujian Bioautografi ..........................................................................29
4.3.4 Identifikasi Senyawa dengan KLT ........................................................30
4.4 Sterilisasi Alat dan Bahan.........................................................................30
4.4.1 Sterilisasi Kering ...................................................................................30
4.4.2 Sterilisasi Basah.....................................................................................31
4.5 Metode Penelitian .....................................................................................31
4.5.1 Rancangan Penelitian.............................................................................31
4.5.2 Kerangka Operasional ...........................................................................32
4.6 Variabel Penelitian....................................................................................32
4.6.1 Variabel Bebas.......................................................................................32
4.6.2 Variabel Terikat .....................................................................................33
4.7 Definisi Operasional .................................................................................33
xi
4.8 Prosedur Kerja ..........................................................................................33
4.8.1 Pembuatan Simplisia .............................................................................33
4.8.2 Proses Ekstraksi Bahan Uji dengan Pelarut n-Heksana.........................33
4.8.3 Pemisahan Senyawa dengan KLT .........................................................36
4.8.4 Identifikasi Komponen Senyawa ...........................................................36
4.8.5 Preparasi Media .....................................................................................37
4.8.6 Preparasi Bakteri....................................................................................37
4.8.7 Pengujian Bioautografi ..........................................................................38
4.8.8 Analisis Data..........................................................................................40
BAB V HASIL PENELITIAN ..............................................................................41
5.1 Determinasi Daun Moringa oleifera.........................................................41
5.2 Persiapan Serbuk Simplisia ......................................................................41
5.3 Persiapan Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera................................42
5.3.1 Ekstraksi Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera .............................42
5.3.2 Karakteristik Fisik Fraksi n-Heksana ....................................................44
5.4 Optimasi Fase Gerak Fraksi n-Heksana ...................................................44
5.5 Identifikasi Golongan Senyawa yang Terdapat pada Fraksi n-Heksana ..44
5.5.1 Identifikasi Senyawa Alkaloida.............................................................44
5.5.2 Identifikasi Senyawa Antrakuinon ........................................................45
5.5.3 Identifikasi Senyawa Flavonoid ............................................................46
5.5.4 Identifikasi Senyawa Polifenol ..............................................................47
5.5.5 Identifikasi Senyawa Terpenoid ............................................................47
5.6 Uji Antibakteri Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera terhadap
Bakteri Escherichia coli .................................................................................49
BAB VI PEMBAHASAN......................................................................................51
BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN..............................................................59
7.1 Kesimpulan ...............................................................................................59
7.2 Saran .........................................................................................................59
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................60
Lampiran ................................................................................................................64
xii
DAFTAR TABEL
Tabel
Halaman
V.1 Karakteristik derajat halus simplisia daun M.oleifera .................................. 41
V.2 KLT fraksi n-heksana daun M.oleifera dengan eluen n-heksana : etil-asetat :
asam format ................................................................................................... 48
V.3 Uji antibakteri fraksi n-heksana daun M.oleifera terhadap bakteri Escherichia
coli ................................................................................................................. 49
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar
Halaman
2.1 Tanaman Moringa oleifera.............................................................................. 5
2.2 Rumus struktur Kloramfenikol...................................................................... 11
2.3 Rumus struktur umum Alkaloid .................................................................... 11
2.4 Rumus struktur umum Flavanoid .................................................................. 12
2.5 Rumus struktur umum Tanin......................................................................... 12
2.6 Rumus struktur umum Terpenoid.................................................................. 13
2.7 Rumus Struktur Umum Quinon ...................................................................... 14
2.8 Skema Bioautografi kontak ........................................................................... 23
2.9 Skema Bioautografi langsung........................................................................ 24
2.10 Skema Bioautografi imersi ............................................................................ 24
3.1 Bagan Kerangka Konseptual ..........................................................................25
4.1 Skema Kerangka Operasional ........................................................................32
4.2 Bagan Alir Proses Esktraksi Daun M. oleifera dengan pelarut n-Heksana....35
4.3 Bagan Prosedur Pengujian Boautografi..........................................................39
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
Halaman
1. Daftar riwayat hidup ...................................................................................... 64
2. Surat pernyataan............................................................................................. 65
3. Surat determinasi tanaman ............................................................................. 66
4. Sertifikat bakteri............................................................................................. 67
5. Perhitungan .................................................................................................... 79
6. Data pengukuran zona hambat uji bioautografi ............................................. 70
7. Pengujian bioautografi ................................................................................... 71
8. Pewarnaan bakteri Gram negatif (Escherichia coli) ...................................... 74
9. Perhitungan jumlah koloni dengan colony counter........................................ 75
10.Gambar alat dan bahan ..........................................................................................76
xv
60
DAFTAR PUSTAKA
Abdallah, E.M. 2015. Antibacterial Properties of Leaf Extracts of Moringa oleifera
Lam. Growing in Sundan. Journal of Advantaces in Medical and
Pharmacheutical Sciences Vol. 5 No. 1 p. 1-5
Anonim. 2009. Martindale The Complete Drug Reference. London : Pharmacheutical
Press.
Anonim. 2011. Pedoman Penggunaan Antibiotik. Jakarta : Peraturan Menteri
Kesehatan
Anonim. 2011. Farmakologi dan Terapi edisi 5.Jakarta : Balai Penerbit FK-UI.
AOAC. 2002. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for
Dietary Supplements and Botanicals. AOAC International Gaithersburg, No.
12-19, pp 1-38.
Artati, Enny. 2007. Pengaruh Kecepatan Putar Pengadukan Dan Suhu Operasi
Pada Ekstraksi Tanin Dari Jambu Mete Dengan Pelarut Aseton. Surakarta :
Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Vol. 6 No. 1 33-38
Bipin, Anita, dkk. 2014. A Comprehensive Working, Principles and Applications of
Thin Layer Chromatography. Research Journal of Pharmaceutical 0975-8585.
Cowan, M.M., 1999. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology
Reviews. Vol. 12 No. 4, p. 564–582.
Dahot, M.U. (1988): Vitamin contents of flowers and seeds of M. oleifera. Pak. J.
Biochem. 21:1 – 24.
Departemen Kesehatan RI.2000. Parameter Standart Umum Ekstrak Tumbuhan Obat
Cetakan pertama. Jakarta : Direktorat Jendral Pengawas Obat dan Makanan.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2011. Farmakope Herbal Indonesia.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dewanjee, Saikat.,Gangopadhyay, Moumita., Bhattacharya, Niloy., Khanra,
Ritu.,Dua, T.K., 2014. Bioautographyanditsscopeinthe field ofnatural product
chemistry. Journal of Pharmacheutical Analysis.
Fauzana, D.L., 2010. Perbandingan Metode Maserasi, Remaserasi, Perkolasi dan
Reperkolasi Terhadap Rendemen Ekstrak Temulawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb.). Bogor : Skripsi Program Sarjana.
Fuglie, L. J. 2001. The Miracle Tree (The Multiple Atribute of Moringa). Senegal:
CWS Dakkar.
61
Gandjar, Ibnu Gholib. 2012. Analisis Obat Secara Spektrofotometri dan
Kromatografi. Yogyakarta : Pustaka Pelajar
Gyawali, R., Ibrahim, S. A.. 2014. Natural Product as antimicrobial agents. Food
Control : Elsevier.
Harborne, J.B., 1996. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuha. Bandung : ITB Press.
Hardiyanthi, Febry. 2015. Pemanfaatan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kelor
(Moringa oleifera) dalam sediaan Hand and Body Cream. Jakarta : Skripsi
Program Sarjana.
Hernanti. 2009. Aspek Pengeringan dalam Mempertahankan Kandungan Metabolit
Sekunder pada Tanaman Obat. Bogor : Balai Besar Penelitian dan
Pengembangan Pascapanen Pertanian.
Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E. A.,. 1996. Mikrobiologi Kedokteran Ed. 20.
Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran.
Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E. A.,. 2012. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi
25. Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
Jayaraj, M., 2013. Antidiabetic Efficiency of Moringa oleifera and Solanum nigrum.
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science.
Katzung, B.G. 1998. Basic and Clinical Pharmacology Ed. 7th. USA: Prentice Hall
Inc, Appleton & Lange. p.743-745.
Kirana, Rahardja. 2008. Obat-Obat Penting Ed. 6. Jakarta : PT. Gramedia.
Krisnadi, A dudi. 2015. Moringa oleifera. Majalah Kelor Super Nutrisi Ed. Kelima
revisi.
Lenny, Sovia. 2006. Senyawa Terpenoida dan Steroida. Medan : Karya Ilmiah
Leone, A., Spada, A., Battezzati, A., Schiraldi, A., Aristil, J., Bertoli, S. 2015.
Cultivation,
Genetic,
Ethnopharmacology,
Phytochemistry,
and
Pharmacology of Moringa oleifera leaves : An Overeview. International
Journal of Molecular Sciences Vol 16 p. 12791-12835
M, Choma, dkk 2010. Bioautography detection in thin-layer chromatography.
Journal of Chromatography A : Elsevier.
Majidah, D., Fatmawati, D.W.A., Gunadi, A., 2014. Daya Antibakteri Ekstrak Daun
Seledri (Apium graveolens L.) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans
sebagai Alternatif Obat Kumur. Jember : Artikel Ilmiah Hasil Penelitian
Mahasiswa.
62
Ma’mun, dkk. 2006.Teknik Pembuatan Simplisia Dan Ekstrak Purwoceng. Laporan
Pelaksanaan Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik.
Moyo, Busani, dll. 2012. Antimicrobial activities of Moringa oleifera Lam leaf
extracts. African Journal of Biotechnology Vol. 11 (11), pp. 2797-2802.
Narwal, S. 2009. Identification and Characterization of Allechemical/Natural
Product. USA : Science Publishers.
Onyekaba TU, Omojate CG and Anowi FC. 2013. Phytochemical screening and
investigations of antibacterial activities of various fractions of the ethanol
leaves extract of Moringa oleifera Lam (Moringaceae). International
Journal of Pharmaceutical, Chemical and Biological Sciences Vol. 3 No. 3
p. 962-973.
Patra, J.K., Kim, E.S, dkk. 2014. Antibacterial effect of crude extract and metabolites
of phytolacca americana on pathgens responsible forperiodontal inflamatory
diseaseand dental caries. BMC Complementary and Alternative Medicine
Vo. 14 No.343
Pratiwi, sylvia T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Penerbit erlangga : Jakarta
Rostinawati, Tina 2008. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Bunga Rosella
(Hibiscus Sabdariffa L.) Terhadap Escherichia Coli, Salmonella Typhi dan
Staphylococcus Aureus dengan Metode Difusi Agar. Bandung :Laporan
Penelitian Dosen muda. Lembaga Penelitian UniversitasPadjadjaran.
Rustaman,dkk.2000. Analisis Fitokimia Tumbuhan di Kawasan Gunung Simpang
Sebagai Penelaahan Keanekaragaman Hayati. Bandung : Lembaga Penelitian
Universitas Padjadjaran.
Sarker, S.D., Latif, Z., Gray, A.I., 2006. Natural Products Isolation Edisi ke-2.
Humana Press.
Samun. 2008. Koefisien Transfer Massa Volumetris Ekstraksi Zat Warna Alami dari
Rimpang Kunyit (Kurkuminoi D) di Dalam Tangki Berpengaduk. Surakarta :
Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Vol. 7 No. 1. 17 – 21
Simbolan, J.M., M. Simbolan., N. Katharina. 2007.
Kelor.Yogyakarta: Kanisius
Cegah Malnutrisi dengan
Verbitsky SM, McChesney JD, Gourdin GT, Ikenouve LM. 2007. Methods and
compositions for detecting active components using bioluminescent bacteria
and thin chromatography. USPTO Patent Application 20070184514.
Vibhut SK, dkk. 2014. Synthesis of Silver Nanoparticles from Moringa oleifera :
Formulation and Evaluation againts Candida albicans. Indo Americans
Journal of Pharmacheutical Research.
63
Vinatoru, Mircea. 2001. An Overview of the Ultrasonically Assisted Extraction of
Bioactive Principles from Herbs. Elsevier : Ultrasonic Sonochemistry.
Vinoth, B., Manivasagaperumal, R., dan Balamurugan, S. 2012. Phytochemical
Analysis and Antibacterial Activity of Moringa Oleifera Lam. International
Journal of Research in Biological Sciences.
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Escherichia coli atau yang disebut dengan E.coli merupakan bakteri yang
dapat ditemukan pada saluran pencernaan manusia. Bakteri ini termasuk dalam
enterobacteria Gram negatif yang merupakan flora normal pada usus besar
manusia. Bakteri pada usus berperan dalam sintesis vitamin K, konversi pigmenpigmen empedu dan asam empedu, penyerapan zat-zat makanan dan hasil
pemecahannya, serta perlawanan terhadap mikroorganisme patogen. Pada
umumnya, bakteri yang ditemukan oleh Theodor Escherich ini tidak berbahaya,
tetapi E.coli dapat menyebabkan berbagai penyakit seperti diare, infeksi saluran
kemih dan meningitis jika jumlahnya berlebih di dalam saluran cerna dan juga
disebabkan oleh beberapa jenis E.coli yang dikelompokkan berdasarkan ciri khas
dan
sifat
virulensinya
(Enterohemoragik
seperti
E.coli),
ETEC
EPEC
(Enterotoksigenik
(Enteropatogenik
E.coli),
E.coli),
EHEC
EAEC
(Enteroagregatif E.coli) dan EIEC (enteroinvasif E.coli) (Jawetz, 1996).
Infeksi merupakan salah satu masalah kesehatan yang paling banyak
dijumpai di masyarakat. Salah satu obat yang digunakan untuk mengatasi
penyakit infeksi adalah dengan menggunakan antibiotik. Antibiotik ialah zat yang
dihasilkan oleh suatu mikroba, terutama fungi, yang dapat menghambat atau
membasmi mikroba lain, sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil.
Antibiotik pertama kali ditemukan pada tahun 1928 oleh dr. Alexander Fleming
dan mulai dikembangkan pada permulaan Perang Dunia II di tahun 1941 karena
ketika itu obat-obat antimikroba sangat diperlukan untuk mengatasi infeksi luka
akibat peperangan. Kemudian para peneliti mulai mengembangkan penemuannya
sehingga menghasilan zat-zat lain baik secara sintesis ataupun semisintesis. Tetapi
hanya sedikit zat yang dapat digunakan sebagai obat karena terkait dengan
toksisitasnya terhadap manusia (Kirana, 2008).
Hasil penelitian Antimicrobial Resistant (AMRIN-Study) terbukti dari
2494 penduduk di Indonesia, 43% Escherichia coli resisten terhadap berbagai
jenis antibiotik antara lain: ampisilin (34%), kotrimoksazol (29%) dan
1
2
kloramfenikol (25%). Hasil penelitian 781 pasien yang dirawat di rumah sakit
didapatkan 81% Escherichia coli resisten terhadap berbagai jenis antibiotik, yaitu
ampisilin (73%), kotrimoksazol (56%), kloramfenikol (43%), siprofloksasin
(22%), dan gentamisin (18%) (Permenkes, 2011).
Penggunaan antibiotik yang semakin luas menyebabkan prevalensi
resistensi antibiotik oleh bakteri sangat meningkat. Penggunaan antibiotik pada
makanan ternak juga merupakan salah satu penyebab resistensi bakteri terhadap
antibiotik. Beberapa bakteri yang ada di hewan ternak yaitu Salmonella, E.coli
dan Campylobacter yang mana bersimbiosis dengan sapi dan ayam. Cara
mengatasi resistensi yaitu dengan menaikkan dosisnya atau mengganti dengan
antibiotik baru. Kasus resistensi yang meluas memaksa para peneliti untuk
mencari dan mengembangkan antibiotik baru agar memperoleh obat yang efektif
dalam mengobati penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri patogen. Seiring
dengan perkembangan ilmu pengetahuan, telah banyak antibiotik berasal dari
tanaman yang berhasil ditemukan dan digunakan dalam dunia pengobatan
(Permenkes, 2011 dan Kirana, 2008).
Indonesia merupakan negara yang dikenal memiliki kekayaan sumber
daya alam yang melimpah dan beraneka ragam. Berbagai tanaman berkhasiat di
indonesia telah dimanfaatkan untuk kepentingan pengobatan. Salah satunya yaitu
kelor atau Moringa oleifera. Kelor dikenal sebagai salah satu tanaman yang paling
banyak manfaatnya. Tanaman kelor juga dikenal sebagai tanaman obat berkhasiat
dengan memanfaatkan seluruh bagian dari tanaman kelor mulai dari daun, kulit
batang, biji, hingga akarnya (Simbolan et al, 2007). Salah satunya yaitu daun,
daun kelor memiliki kandungan betakaroten melebihi wortel, mengandung
protein melebih kacang polong, lebih banyak mengandung vitamin C dibanding
jeruk, kandungan kalsiumnya melebihi susu, mengandung zat besi lebih banyak
dari bayam dan kandung kaliumnya lebih banyak dari pada pisang. Selain itu,
penelitian yang dilakukan oleh Dahot (1998) melaporkan bahwa dalam ekstrak
daun kelor mengandung protein dengan berat molekul rendah yang mempunyai
aktivitas antibakteri dan antijamur, sedangkan pada penelitian yang dilakukan
oleh Meitzer dan Martin (2000), daun kelor yang dilarutkan dalam air dapat
digunakan untuk antibiotika. Daun kelor mengandung senyawa metabolit
3
sekunder seperti minyak atsiri, polifenol, dan saponin yang memiliki potensi
sebagai antibakteri dan antifungi.
Senyawa metabolit sekunder adalah senyawa yang disintesis oleh suatu
makhluk hidup bukan untuk memenuhi kebutuhan dasarnya, akan tetapi untuk
mempertahankan diri dalam berinteraksi dengan ekosistem. Senyawa metabolit
sekunder yang terdapat pada daun kelor meliputi fenol dan senyawa fenolik,
alkaloid dan minyak astiri (essential oils) memiliki sifat antibakteri. Tanin pada
daun kelor berperan sebagai pendenaturasi protein serta mencegah proses
pencernaan bakteri, sedangkan flavonoid yaitu senyawa yang mudah larut dalam
air untuk kerja antibakteri dan antivirus (Moyo et al, 2012 dan Flugie, 2001)
Penelitian yang dilakukan Moyo, et al. (2012) menunjukkan adanya
aktivitas antibakteri dari ekstrak aseton daun kelor terhadap beberapa bakteri
Gram negatif diantaranya yaitu Escherichia coli. Pada konsentrasi 5 mg/ml
ekstrak aseton daun kelor dapat menghambat aktivitas bakteri E.coli. Selain itu,
menurut penelitian yang dilakukan Vinoth (2012) menunjukkn hasil bahwa pada
fraksi kloroform dan fraksi etanol daun kelor dengan metode diffusi agar
menunjukkan aktivitas antibakteri yaitu dengan adanya zona hambat sebesar 6
mm dan 8 mm terhadap E.coli. Pada penelitian ini juga ditunjukkan bahwa pada
fraksi kloroform terdapat senyawa metabolit sekunder yang terekstraksi yaitu
alkaloid, saponin dan tanin sedangkan pada ekstrak etanol yaitu flavanoid, tanin,
glikosida dan terpenoid.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, diketahui bahwa dengan
perbedaan pelarut yang digunakan untuk mengekstraksi akan memberikan
perbedaan terhadap senyawa yang akan terekstraksi. Oleh sebab itu dalam
melakukan ekstraksi perlu dipertimbangkan pelarut yang akan digunakan. Prinsip
kelarutan adalah “like dissolve like”, yaitu pelarut
polar
akan melarutkan
senyawa polar, demikian juga sebaliknya pelarut non-polar akan melarutkan
senyawa
non-polar dan
pelarut organik akan melarutkan senyawa organik
(Rostinawati, 2008).
Pada penelitian pengembangan daun kelor sebagai antibakteri ini,
dilakukan ekstraksi bertingkat secara berturut-turut menggunakan pelarut nheksana, etil asetat dan etanol. Hal ini bertujuan agar senyawa yang terdapat pada
4
daun kelor terpisah berdasarkan kepolarannya. Pada fraksi n-heksana dilakukan
pengujian aktivitas antibakteri dengan metode bioautografi, yaitu suatu metode
sederhana gabungan antara teknik kromatografi lapis tipis dan respon dari
mikroorganisme yang diuji berdasarkan aktifitas biologi dari suatu analit yang
digunakan untuk pengujian antibakteri. Bioautografi dapat digunakan untuk
menemukan senyawa antibakteri yang baru, kontrol kualitas antibakteri dan untuk
mendeteksi golongan senyawa yang di analisa.
Berdasarkan uraian diatas, maka pada penelitian ini akan dilakukan
pengujian aktivitas antibakteri fraksi n-heksana dari daun kelor terhadap
Escherichia coli dan akan diketahui senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri
paling besar dengan metode bioautografi.
1.2 Rumusan Masalah
1. Berapakah diagonal zona hambat dari komponen senyawa yang terdapat pada
fraksi n-heksana Moringa oleifera dengan metode bioautografi?
2. Apa saja golongan senyawa yang terdapat pada fraksi n-heksana Moringa
oleifera ?
1.3 Tujuan Penelitian
1. Untuk mendapatkan data zona hambat dari komponen senyawa yang terdapat
pada fraksi n-heksana Moringa oleifera dengan metode bioautografi terhadap
pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
2. Untuk mendapatkan data golongan senyawa yang terdapat dalam fraksi nheksana Moringa oleifera.
1.4 Manfaat Penelitian
1. Memberikan informasi tentang golongan senyawa yang terdapat pada fraksi nheksana Moringa oliefera dan mengetahui golongan senyawa aktif yang dapat
memberikan zona hambat terbesar pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
2. Penelitian ini dapat memberikan informasi bahwa Moringa oleifera dapat
digunakan sebagai bahan alami alternatif penanganan penyakit infeksi yang
aman dan ramah lingkungan.
RIRIN PUSPITA
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI
n-HEKSANA DAUN Moringa oleifera
TERHADAP Escherichia coli DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
2016
ii
iii
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim.
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokaatuh
Alhamdullillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan
rahmat, taufik, serta hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya
tulis yang berbentuk skripsi ini sesuai dengan waktu yang telah direncanakan.
Shalawat serta salam semoga senantiasa tercurahkan kepada Nabi Muhammad
SAW beserta seluruh keluarga dan sahabatnya yang selalu istiqamah membantu
perjuangan beliau dalam mensyiarkan ajaran islam di muka bumi ini. Berkat
rahmat dan karunia-Nya sehingga kami dapat menyelesaikan tugas akhir yang
berjudul “AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA DAUN
Moringa oleifera TERHADAP Escherichia coli DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI”. Tugas akhir ini merupakan syarat terakhir yang harus
ditempuh untuk menyelesaikan pendidikan pada jenjang Strata Satu (S1), pada
Jurusan Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Malang.
Penulisan skripsi ini, dapat terselesaikan tentunya berkat bimbingan dan
bantuan dari berbagai pihak, baik berupa moril maupun materil. Oleh karena itu
pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya
kepada :
1. Siti Rofida, S.Si., Apt. sebagai Pembimbing I dan Ahmad Shobrun Jamil,
S.Si., M.P. sebagai Pembimbing II yang dengan tulus ikhlas dan penuh
kesabaran, membimbing dan memberi dorongan moral maupun materi
kepada penulis sehingga skripsi ini dapat diselesaikan.
2. Sovia Aprina Basuki, S.Farm.,M.Farm., Apt. dan Engrid Juni Astuti,
M.Farm., Apt. sebagai Tim Penguji yang memberikan saran dan kritik yang
membangun terhadap skripsi yang telah penulis kerjakan.
3. Yoyok Bekti Prasetyo, M.Kep., Sp.Kom selaku Dekan Fakultas Ilmu
Kesehatan, Nailis Syifa, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku Ketua Program Studi
Farmasi, semua Dosen Farmasi dan Kepala laboratoriun serta laboran di
Universitas Muhammadiyah Malang yang telah memberikan waktu untuk
mengajarkan ilmu-ilmu yang sangat bermanfaat.
iv
4. Kedua orang tua tercinta Bapak H. Darianto dan Ibu Hj. Siti Mukalimah, atas
doa yang selalu dipanjatkan untuk kesuksesan anaknya, atas curahan kasih
sayang yang tiada hentinya, serta segala bentuk motivasi yang telah diberikan
kepada penulis selama menempuh pendidikan sampai di tingkat perguruan
tinggi.
5. Kakak tersayang mbak Fitria Nuf Fadilah dan mas Khoirul Hadi Mustofa
serta adik tercinta Lucky Abdillah yang tak henti-hentinya memberikan
semangat, motivasi, doa, dan dukungan moril maupun materil.
6.
Teman-teman seperjuangan dalam penelitian Tri Rahmi, Fanny Rochmah,
Ninuk, Ainun, Renny, Yuanita, mbak Fatilah dan mbak Reska yang telah
membantu selama penyusunan dan penyelesaian skripsi ini.
7. Teman-teman farmasi 2012 khususnya Dzati, Sherly, Ridha, Rahma,
Churoida, Navisa, Evy, Rosida Fajrin, Ayu Linda, Mustika, Siska, Venny,
Fudho, Fifi, Angga. Semoga kita jadi orang yang sukses dan berguna dimasa
depan.
8. Untuk sahabatku Qisthi Almusawwamah, Mbak Anggun, Dawam, Fadli,
Dannis, Darul Pojok, Jazomers dan HIMABU Malang atas dukungannya
selama ini.
9. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu, yang telah
memberikan bantuannya, baik moril maupun material.
Tentunya sebagai manusia tidak pernah luput dari kesalahan, penulis
menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu saran
dan kritik yang membangun dari semua pihak sangat diharapkan demi
penyempurnaan selanjutnya. Akhirnya hanya kepada Allah SWT kita kembalikan
semua urusan dan semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak,
khususnya bagi penulis dan para pembaca pada umumnya. Aammiin Ya Rabbal
‘Alamain
Wassalamu’alaikum, warohmatullahi wabarokaatuh
Malang, Juni 2016
Penulis,
Ririn Puspita
v
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iv
RINGKASAN ........................................................................................................ vi
ABSTRAK ........................................................................................................... viii
DAFTAR ISI........................................................................................................... x
DAFTAR TABEL................................................................................................ xiii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................................xv
BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1
1.1 Latar Belakang............................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah.......................................................................................4
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................4
1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................................4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................5
2.1 Daun Kelor (Moringa oleifera) ..................................................................5
2.1.1 Klasifikasi ................................................................................................5
2.1.2 Morfologi Daun .......................................................................................5
2.1.3 Kandungan Kimia....................................................................................6
2.1.4 Manfaat dan Aktivitas Biologis Daun Kelor ...........................................6
2.2 Escherichia coli ..........................................................................................7
2.2.1 Taksonomi ...............................................................................................7
2.2.2 Morfologi dan Identifikasi.......................................................................7
2.2.3 Patognesis ................................................................................................8
2.2.4 Terapi.......................................................................................................9
2.3 Kloramfenikol...........................................................................................10
2.4 Aktivitas Antibakteri Senyawa Metabolit Sekunder ................................11
2.4.1 Alkaloid .................................................................................................11
2.4.2 Flavonoid ...............................................................................................11
2.4.3 Tanin ......................................................................................................12
2.4.4 Terpenoid...............................................................................................13
2.4.5 Quinon ...................................................................................................14
2.5 Ekstraksi ...................................................................................................14
x
2.5.1 Maserasi.................................................................................................15
2.5.2 Pelarut Maserasi.....................................................................................18
2.5.3 Kromatografi Lapis Tipis ......................................................................19
2.6 Uji Kepekaan Terhadap Aktivitas Antimikroba Secara In Vitro..............21
2.6.1 Metode Difusi ........................................................................................21
2.6.2 Metode Dilusi Tabung ...........................................................................21
2.6.3 Metode Bioautografi..............................................................................22
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL................................................................25
3.1 Bagan Kerangka Konseptual ....................................................................25
3.2 Uraian Kerangka Konseptual....................................................................26
BAB IV METODE PENELITIAN ........................................................................28
4.1 Lokasi Penelitian ......................................................................................28
4.2 Alat Penelitian ..........................................................................................28
4.2.1 Pembuatan Serbuk Simplisia .................................................................28
4.2.2 Proses Ekstraksi .....................................................................................28
4.2.3 Pengujian Bioautografi ..........................................................................28
4.2.4 Identifikasi Profil KLT ..........................................................................29
4.3 Bahan Penelitian .......................................................................................29
4.3.1 Bahan Uji ...............................................................................................29
4.3.2 Proses Ekstraksi .....................................................................................29
4.3.3 Pengujian Bioautografi ..........................................................................29
4.3.4 Identifikasi Senyawa dengan KLT ........................................................30
4.4 Sterilisasi Alat dan Bahan.........................................................................30
4.4.1 Sterilisasi Kering ...................................................................................30
4.4.2 Sterilisasi Basah.....................................................................................31
4.5 Metode Penelitian .....................................................................................31
4.5.1 Rancangan Penelitian.............................................................................31
4.5.2 Kerangka Operasional ...........................................................................32
4.6 Variabel Penelitian....................................................................................32
4.6.1 Variabel Bebas.......................................................................................32
4.6.2 Variabel Terikat .....................................................................................33
4.7 Definisi Operasional .................................................................................33
xi
4.8 Prosedur Kerja ..........................................................................................33
4.8.1 Pembuatan Simplisia .............................................................................33
4.8.2 Proses Ekstraksi Bahan Uji dengan Pelarut n-Heksana.........................33
4.8.3 Pemisahan Senyawa dengan KLT .........................................................36
4.8.4 Identifikasi Komponen Senyawa ...........................................................36
4.8.5 Preparasi Media .....................................................................................37
4.8.6 Preparasi Bakteri....................................................................................37
4.8.7 Pengujian Bioautografi ..........................................................................38
4.8.8 Analisis Data..........................................................................................40
BAB V HASIL PENELITIAN ..............................................................................41
5.1 Determinasi Daun Moringa oleifera.........................................................41
5.2 Persiapan Serbuk Simplisia ......................................................................41
5.3 Persiapan Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera................................42
5.3.1 Ekstraksi Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera .............................42
5.3.2 Karakteristik Fisik Fraksi n-Heksana ....................................................44
5.4 Optimasi Fase Gerak Fraksi n-Heksana ...................................................44
5.5 Identifikasi Golongan Senyawa yang Terdapat pada Fraksi n-Heksana ..44
5.5.1 Identifikasi Senyawa Alkaloida.............................................................44
5.5.2 Identifikasi Senyawa Antrakuinon ........................................................45
5.5.3 Identifikasi Senyawa Flavonoid ............................................................46
5.5.4 Identifikasi Senyawa Polifenol ..............................................................47
5.5.5 Identifikasi Senyawa Terpenoid ............................................................47
5.6 Uji Antibakteri Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera terhadap
Bakteri Escherichia coli .................................................................................49
BAB VI PEMBAHASAN......................................................................................51
BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN..............................................................59
7.1 Kesimpulan ...............................................................................................59
7.2 Saran .........................................................................................................59
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................60
Lampiran ................................................................................................................64
xii
DAFTAR TABEL
Tabel
Halaman
V.1 Karakteristik derajat halus simplisia daun M.oleifera .................................. 41
V.2 KLT fraksi n-heksana daun M.oleifera dengan eluen n-heksana : etil-asetat :
asam format ................................................................................................... 48
V.3 Uji antibakteri fraksi n-heksana daun M.oleifera terhadap bakteri Escherichia
coli ................................................................................................................. 49
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar
Halaman
2.1 Tanaman Moringa oleifera.............................................................................. 5
2.2 Rumus struktur Kloramfenikol...................................................................... 11
2.3 Rumus struktur umum Alkaloid .................................................................... 11
2.4 Rumus struktur umum Flavanoid .................................................................. 12
2.5 Rumus struktur umum Tanin......................................................................... 12
2.6 Rumus struktur umum Terpenoid.................................................................. 13
2.7 Rumus Struktur Umum Quinon ...................................................................... 14
2.8 Skema Bioautografi kontak ........................................................................... 23
2.9 Skema Bioautografi langsung........................................................................ 24
2.10 Skema Bioautografi imersi ............................................................................ 24
3.1 Bagan Kerangka Konseptual ..........................................................................25
4.1 Skema Kerangka Operasional ........................................................................32
4.2 Bagan Alir Proses Esktraksi Daun M. oleifera dengan pelarut n-Heksana....35
4.3 Bagan Prosedur Pengujian Boautografi..........................................................39
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
Halaman
1. Daftar riwayat hidup ...................................................................................... 64
2. Surat pernyataan............................................................................................. 65
3. Surat determinasi tanaman ............................................................................. 66
4. Sertifikat bakteri............................................................................................. 67
5. Perhitungan .................................................................................................... 79
6. Data pengukuran zona hambat uji bioautografi ............................................. 70
7. Pengujian bioautografi ................................................................................... 71
8. Pewarnaan bakteri Gram negatif (Escherichia coli) ...................................... 74
9. Perhitungan jumlah koloni dengan colony counter........................................ 75
10.Gambar alat dan bahan ..........................................................................................76
xv
60
DAFTAR PUSTAKA
Abdallah, E.M. 2015. Antibacterial Properties of Leaf Extracts of Moringa oleifera
Lam. Growing in Sundan. Journal of Advantaces in Medical and
Pharmacheutical Sciences Vol. 5 No. 1 p. 1-5
Anonim. 2009. Martindale The Complete Drug Reference. London : Pharmacheutical
Press.
Anonim. 2011. Pedoman Penggunaan Antibiotik. Jakarta : Peraturan Menteri
Kesehatan
Anonim. 2011. Farmakologi dan Terapi edisi 5.Jakarta : Balai Penerbit FK-UI.
AOAC. 2002. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for
Dietary Supplements and Botanicals. AOAC International Gaithersburg, No.
12-19, pp 1-38.
Artati, Enny. 2007. Pengaruh Kecepatan Putar Pengadukan Dan Suhu Operasi
Pada Ekstraksi Tanin Dari Jambu Mete Dengan Pelarut Aseton. Surakarta :
Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Vol. 6 No. 1 33-38
Bipin, Anita, dkk. 2014. A Comprehensive Working, Principles and Applications of
Thin Layer Chromatography. Research Journal of Pharmaceutical 0975-8585.
Cowan, M.M., 1999. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology
Reviews. Vol. 12 No. 4, p. 564–582.
Dahot, M.U. (1988): Vitamin contents of flowers and seeds of M. oleifera. Pak. J.
Biochem. 21:1 – 24.
Departemen Kesehatan RI.2000. Parameter Standart Umum Ekstrak Tumbuhan Obat
Cetakan pertama. Jakarta : Direktorat Jendral Pengawas Obat dan Makanan.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2011. Farmakope Herbal Indonesia.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dewanjee, Saikat.,Gangopadhyay, Moumita., Bhattacharya, Niloy., Khanra,
Ritu.,Dua, T.K., 2014. Bioautographyanditsscopeinthe field ofnatural product
chemistry. Journal of Pharmacheutical Analysis.
Fauzana, D.L., 2010. Perbandingan Metode Maserasi, Remaserasi, Perkolasi dan
Reperkolasi Terhadap Rendemen Ekstrak Temulawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb.). Bogor : Skripsi Program Sarjana.
Fuglie, L. J. 2001. The Miracle Tree (The Multiple Atribute of Moringa). Senegal:
CWS Dakkar.
61
Gandjar, Ibnu Gholib. 2012. Analisis Obat Secara Spektrofotometri dan
Kromatografi. Yogyakarta : Pustaka Pelajar
Gyawali, R., Ibrahim, S. A.. 2014. Natural Product as antimicrobial agents. Food
Control : Elsevier.
Harborne, J.B., 1996. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuha. Bandung : ITB Press.
Hardiyanthi, Febry. 2015. Pemanfaatan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kelor
(Moringa oleifera) dalam sediaan Hand and Body Cream. Jakarta : Skripsi
Program Sarjana.
Hernanti. 2009. Aspek Pengeringan dalam Mempertahankan Kandungan Metabolit
Sekunder pada Tanaman Obat. Bogor : Balai Besar Penelitian dan
Pengembangan Pascapanen Pertanian.
Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E. A.,. 1996. Mikrobiologi Kedokteran Ed. 20.
Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran.
Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E. A.,. 2012. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi
25. Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
Jayaraj, M., 2013. Antidiabetic Efficiency of Moringa oleifera and Solanum nigrum.
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science.
Katzung, B.G. 1998. Basic and Clinical Pharmacology Ed. 7th. USA: Prentice Hall
Inc, Appleton & Lange. p.743-745.
Kirana, Rahardja. 2008. Obat-Obat Penting Ed. 6. Jakarta : PT. Gramedia.
Krisnadi, A dudi. 2015. Moringa oleifera. Majalah Kelor Super Nutrisi Ed. Kelima
revisi.
Lenny, Sovia. 2006. Senyawa Terpenoida dan Steroida. Medan : Karya Ilmiah
Leone, A., Spada, A., Battezzati, A., Schiraldi, A., Aristil, J., Bertoli, S. 2015.
Cultivation,
Genetic,
Ethnopharmacology,
Phytochemistry,
and
Pharmacology of Moringa oleifera leaves : An Overeview. International
Journal of Molecular Sciences Vol 16 p. 12791-12835
M, Choma, dkk 2010. Bioautography detection in thin-layer chromatography.
Journal of Chromatography A : Elsevier.
Majidah, D., Fatmawati, D.W.A., Gunadi, A., 2014. Daya Antibakteri Ekstrak Daun
Seledri (Apium graveolens L.) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans
sebagai Alternatif Obat Kumur. Jember : Artikel Ilmiah Hasil Penelitian
Mahasiswa.
62
Ma’mun, dkk. 2006.Teknik Pembuatan Simplisia Dan Ekstrak Purwoceng. Laporan
Pelaksanaan Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik.
Moyo, Busani, dll. 2012. Antimicrobial activities of Moringa oleifera Lam leaf
extracts. African Journal of Biotechnology Vol. 11 (11), pp. 2797-2802.
Narwal, S. 2009. Identification and Characterization of Allechemical/Natural
Product. USA : Science Publishers.
Onyekaba TU, Omojate CG and Anowi FC. 2013. Phytochemical screening and
investigations of antibacterial activities of various fractions of the ethanol
leaves extract of Moringa oleifera Lam (Moringaceae). International
Journal of Pharmaceutical, Chemical and Biological Sciences Vol. 3 No. 3
p. 962-973.
Patra, J.K., Kim, E.S, dkk. 2014. Antibacterial effect of crude extract and metabolites
of phytolacca americana on pathgens responsible forperiodontal inflamatory
diseaseand dental caries. BMC Complementary and Alternative Medicine
Vo. 14 No.343
Pratiwi, sylvia T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Penerbit erlangga : Jakarta
Rostinawati, Tina 2008. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Bunga Rosella
(Hibiscus Sabdariffa L.) Terhadap Escherichia Coli, Salmonella Typhi dan
Staphylococcus Aureus dengan Metode Difusi Agar. Bandung :Laporan
Penelitian Dosen muda. Lembaga Penelitian UniversitasPadjadjaran.
Rustaman,dkk.2000. Analisis Fitokimia Tumbuhan di Kawasan Gunung Simpang
Sebagai Penelaahan Keanekaragaman Hayati. Bandung : Lembaga Penelitian
Universitas Padjadjaran.
Sarker, S.D., Latif, Z., Gray, A.I., 2006. Natural Products Isolation Edisi ke-2.
Humana Press.
Samun. 2008. Koefisien Transfer Massa Volumetris Ekstraksi Zat Warna Alami dari
Rimpang Kunyit (Kurkuminoi D) di Dalam Tangki Berpengaduk. Surakarta :
Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Vol. 7 No. 1. 17 – 21
Simbolan, J.M., M. Simbolan., N. Katharina. 2007.
Kelor.Yogyakarta: Kanisius
Cegah Malnutrisi dengan
Verbitsky SM, McChesney JD, Gourdin GT, Ikenouve LM. 2007. Methods and
compositions for detecting active components using bioluminescent bacteria
and thin chromatography. USPTO Patent Application 20070184514.
Vibhut SK, dkk. 2014. Synthesis of Silver Nanoparticles from Moringa oleifera :
Formulation and Evaluation againts Candida albicans. Indo Americans
Journal of Pharmacheutical Research.
63
Vinatoru, Mircea. 2001. An Overview of the Ultrasonically Assisted Extraction of
Bioactive Principles from Herbs. Elsevier : Ultrasonic Sonochemistry.
Vinoth, B., Manivasagaperumal, R., dan Balamurugan, S. 2012. Phytochemical
Analysis and Antibacterial Activity of Moringa Oleifera Lam. International
Journal of Research in Biological Sciences.
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Escherichia coli atau yang disebut dengan E.coli merupakan bakteri yang
dapat ditemukan pada saluran pencernaan manusia. Bakteri ini termasuk dalam
enterobacteria Gram negatif yang merupakan flora normal pada usus besar
manusia. Bakteri pada usus berperan dalam sintesis vitamin K, konversi pigmenpigmen empedu dan asam empedu, penyerapan zat-zat makanan dan hasil
pemecahannya, serta perlawanan terhadap mikroorganisme patogen. Pada
umumnya, bakteri yang ditemukan oleh Theodor Escherich ini tidak berbahaya,
tetapi E.coli dapat menyebabkan berbagai penyakit seperti diare, infeksi saluran
kemih dan meningitis jika jumlahnya berlebih di dalam saluran cerna dan juga
disebabkan oleh beberapa jenis E.coli yang dikelompokkan berdasarkan ciri khas
dan
sifat
virulensinya
(Enterohemoragik
seperti
E.coli),
ETEC
EPEC
(Enterotoksigenik
(Enteropatogenik
E.coli),
E.coli),
EHEC
EAEC
(Enteroagregatif E.coli) dan EIEC (enteroinvasif E.coli) (Jawetz, 1996).
Infeksi merupakan salah satu masalah kesehatan yang paling banyak
dijumpai di masyarakat. Salah satu obat yang digunakan untuk mengatasi
penyakit infeksi adalah dengan menggunakan antibiotik. Antibiotik ialah zat yang
dihasilkan oleh suatu mikroba, terutama fungi, yang dapat menghambat atau
membasmi mikroba lain, sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil.
Antibiotik pertama kali ditemukan pada tahun 1928 oleh dr. Alexander Fleming
dan mulai dikembangkan pada permulaan Perang Dunia II di tahun 1941 karena
ketika itu obat-obat antimikroba sangat diperlukan untuk mengatasi infeksi luka
akibat peperangan. Kemudian para peneliti mulai mengembangkan penemuannya
sehingga menghasilan zat-zat lain baik secara sintesis ataupun semisintesis. Tetapi
hanya sedikit zat yang dapat digunakan sebagai obat karena terkait dengan
toksisitasnya terhadap manusia (Kirana, 2008).
Hasil penelitian Antimicrobial Resistant (AMRIN-Study) terbukti dari
2494 penduduk di Indonesia, 43% Escherichia coli resisten terhadap berbagai
jenis antibiotik antara lain: ampisilin (34%), kotrimoksazol (29%) dan
1
2
kloramfenikol (25%). Hasil penelitian 781 pasien yang dirawat di rumah sakit
didapatkan 81% Escherichia coli resisten terhadap berbagai jenis antibiotik, yaitu
ampisilin (73%), kotrimoksazol (56%), kloramfenikol (43%), siprofloksasin
(22%), dan gentamisin (18%) (Permenkes, 2011).
Penggunaan antibiotik yang semakin luas menyebabkan prevalensi
resistensi antibiotik oleh bakteri sangat meningkat. Penggunaan antibiotik pada
makanan ternak juga merupakan salah satu penyebab resistensi bakteri terhadap
antibiotik. Beberapa bakteri yang ada di hewan ternak yaitu Salmonella, E.coli
dan Campylobacter yang mana bersimbiosis dengan sapi dan ayam. Cara
mengatasi resistensi yaitu dengan menaikkan dosisnya atau mengganti dengan
antibiotik baru. Kasus resistensi yang meluas memaksa para peneliti untuk
mencari dan mengembangkan antibiotik baru agar memperoleh obat yang efektif
dalam mengobati penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri patogen. Seiring
dengan perkembangan ilmu pengetahuan, telah banyak antibiotik berasal dari
tanaman yang berhasil ditemukan dan digunakan dalam dunia pengobatan
(Permenkes, 2011 dan Kirana, 2008).
Indonesia merupakan negara yang dikenal memiliki kekayaan sumber
daya alam yang melimpah dan beraneka ragam. Berbagai tanaman berkhasiat di
indonesia telah dimanfaatkan untuk kepentingan pengobatan. Salah satunya yaitu
kelor atau Moringa oleifera. Kelor dikenal sebagai salah satu tanaman yang paling
banyak manfaatnya. Tanaman kelor juga dikenal sebagai tanaman obat berkhasiat
dengan memanfaatkan seluruh bagian dari tanaman kelor mulai dari daun, kulit
batang, biji, hingga akarnya (Simbolan et al, 2007). Salah satunya yaitu daun,
daun kelor memiliki kandungan betakaroten melebihi wortel, mengandung
protein melebih kacang polong, lebih banyak mengandung vitamin C dibanding
jeruk, kandungan kalsiumnya melebihi susu, mengandung zat besi lebih banyak
dari bayam dan kandung kaliumnya lebih banyak dari pada pisang. Selain itu,
penelitian yang dilakukan oleh Dahot (1998) melaporkan bahwa dalam ekstrak
daun kelor mengandung protein dengan berat molekul rendah yang mempunyai
aktivitas antibakteri dan antijamur, sedangkan pada penelitian yang dilakukan
oleh Meitzer dan Martin (2000), daun kelor yang dilarutkan dalam air dapat
digunakan untuk antibiotika. Daun kelor mengandung senyawa metabolit
3
sekunder seperti minyak atsiri, polifenol, dan saponin yang memiliki potensi
sebagai antibakteri dan antifungi.
Senyawa metabolit sekunder adalah senyawa yang disintesis oleh suatu
makhluk hidup bukan untuk memenuhi kebutuhan dasarnya, akan tetapi untuk
mempertahankan diri dalam berinteraksi dengan ekosistem. Senyawa metabolit
sekunder yang terdapat pada daun kelor meliputi fenol dan senyawa fenolik,
alkaloid dan minyak astiri (essential oils) memiliki sifat antibakteri. Tanin pada
daun kelor berperan sebagai pendenaturasi protein serta mencegah proses
pencernaan bakteri, sedangkan flavonoid yaitu senyawa yang mudah larut dalam
air untuk kerja antibakteri dan antivirus (Moyo et al, 2012 dan Flugie, 2001)
Penelitian yang dilakukan Moyo, et al. (2012) menunjukkan adanya
aktivitas antibakteri dari ekstrak aseton daun kelor terhadap beberapa bakteri
Gram negatif diantaranya yaitu Escherichia coli. Pada konsentrasi 5 mg/ml
ekstrak aseton daun kelor dapat menghambat aktivitas bakteri E.coli. Selain itu,
menurut penelitian yang dilakukan Vinoth (2012) menunjukkn hasil bahwa pada
fraksi kloroform dan fraksi etanol daun kelor dengan metode diffusi agar
menunjukkan aktivitas antibakteri yaitu dengan adanya zona hambat sebesar 6
mm dan 8 mm terhadap E.coli. Pada penelitian ini juga ditunjukkan bahwa pada
fraksi kloroform terdapat senyawa metabolit sekunder yang terekstraksi yaitu
alkaloid, saponin dan tanin sedangkan pada ekstrak etanol yaitu flavanoid, tanin,
glikosida dan terpenoid.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, diketahui bahwa dengan
perbedaan pelarut yang digunakan untuk mengekstraksi akan memberikan
perbedaan terhadap senyawa yang akan terekstraksi. Oleh sebab itu dalam
melakukan ekstraksi perlu dipertimbangkan pelarut yang akan digunakan. Prinsip
kelarutan adalah “like dissolve like”, yaitu pelarut
polar
akan melarutkan
senyawa polar, demikian juga sebaliknya pelarut non-polar akan melarutkan
senyawa
non-polar dan
pelarut organik akan melarutkan senyawa organik
(Rostinawati, 2008).
Pada penelitian pengembangan daun kelor sebagai antibakteri ini,
dilakukan ekstraksi bertingkat secara berturut-turut menggunakan pelarut nheksana, etil asetat dan etanol. Hal ini bertujuan agar senyawa yang terdapat pada
4
daun kelor terpisah berdasarkan kepolarannya. Pada fraksi n-heksana dilakukan
pengujian aktivitas antibakteri dengan metode bioautografi, yaitu suatu metode
sederhana gabungan antara teknik kromatografi lapis tipis dan respon dari
mikroorganisme yang diuji berdasarkan aktifitas biologi dari suatu analit yang
digunakan untuk pengujian antibakteri. Bioautografi dapat digunakan untuk
menemukan senyawa antibakteri yang baru, kontrol kualitas antibakteri dan untuk
mendeteksi golongan senyawa yang di analisa.
Berdasarkan uraian diatas, maka pada penelitian ini akan dilakukan
pengujian aktivitas antibakteri fraksi n-heksana dari daun kelor terhadap
Escherichia coli dan akan diketahui senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri
paling besar dengan metode bioautografi.
1.2 Rumusan Masalah
1. Berapakah diagonal zona hambat dari komponen senyawa yang terdapat pada
fraksi n-heksana Moringa oleifera dengan metode bioautografi?
2. Apa saja golongan senyawa yang terdapat pada fraksi n-heksana Moringa
oleifera ?
1.3 Tujuan Penelitian
1. Untuk mendapatkan data zona hambat dari komponen senyawa yang terdapat
pada fraksi n-heksana Moringa oleifera dengan metode bioautografi terhadap
pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
2. Untuk mendapatkan data golongan senyawa yang terdapat dalam fraksi nheksana Moringa oleifera.
1.4 Manfaat Penelitian
1. Memberikan informasi tentang golongan senyawa yang terdapat pada fraksi nheksana Moringa oliefera dan mengetahui golongan senyawa aktif yang dapat
memberikan zona hambat terbesar pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
2. Penelitian ini dapat memberikan informasi bahwa Moringa oleifera dapat
digunakan sebagai bahan alami alternatif penanganan penyakit infeksi yang
aman dan ramah lingkungan.