AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA DAUN KELOR (Moringa oleifera) TERHADAP Staphyloccus aureus DENGAN METODE BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
TRI RAHMI
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI
n-HEKSANA DAUN KELOR (Moringa oleifera)
TERHADAP Staphyloccus aureus DENGAN
METODE BIOAUTOGRAFI
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
2016
Lembar Pengesahan
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA
DAUN KELOR (Moringa oleifera) TERHADAP
Staphyloccus aureus DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada
Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Malang
2016
Oleh :
TRI RAHMI
NIM : 201210410311187
Disetujui Oleh :
Pembimbing I
Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt
NIP UMM. 11408040453
Pembimbing II
Ahmad Shobrun Jamil, S.Si., MP
NIP UMM. 11309070469
Lembar Pengujian
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA
DAUN KELOR (Moringa oleifera) TERHADAP
Staphyloccus aureus DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
Telah Diuji dan Dipertahankan di Depan Tim Penguji
Pada Tanggal 3 Juni 2016
Oleh :
TRI RAHMI
NIM : 201210410311187
Disetujui oleh :
Penguji I
Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt.
NIP UMM. 114. 0804. 0453
Penguji III
Penguji II
Ahmad Shobrun Jamil, S.Si., M.P.
NIP UMM. 113. 0907. 0469
Penguji IV
Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt. Engrid Juni Astuti, M.Farm., Apt.
NIP UMM. 114. 0804. 0452
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokaatuh
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat, taufik, serta
hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya tulis yang berbentuk
skripsi ini sesuai dengan waktu yang telah direncanakan. Shalawat serta salam
semoga senantiasa tercurahkan kepada baginda Nabi Muhammad SAW beserta
seluruh keluarga dan sahabatnya yang selalu istiqamah membantu perjuangan
beliau dalam mensyiarkan ajaran Islam di muka bumi ini. Sehingga tugas akhir
yang berjudul “AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA DAUN
KELOR (Moringa oleifera) TERHADAP Staphylococcus aureus DENGAN
METODE BIOAUTOGRAFI” dapat diselesaikan. Tugas akhir ini merupakan
syarat terakhir yang harus ditempuh untuk menyelesaikan pendidikan pada
jenjang Strata Satu (S1), pada Jurusan Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan,
Universitas Muhammadiyah Malang.
Dalam penulisan skripsi ini tentunya banyak pihak yang telah memberikan
bantuan kepada penulis, baik berupa moril maupun materil. Oleh karena itu
penulis ingin menyampaikan ucapan terimakasih yang tiada hingganya kepada :
1. Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt. sebagai Pembimbing I dan Ahmad
Shobrun Jamil, S.Si., MP. sebagai Pembimbing II yang dengan tulus ikhlas
dan penuh kesabaran, membimbing dan memberi dorongan moral maupun
materi kepada saya sehingga skripsi ini dapat diselesaikan.
2. Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt. dan Engrid Juni Astuti,
M.Farm., Apt. sebagai Tim Penguji yang memberikan saran dan kritik yang
membangun terhadap skripsi yang telah penulis kerjakan
3. Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang, Yoyok
Bekti Prasetyo, M.Kep., Sp.Kom. atas kesempatan yang diberikan untuk
mengikuti program sarjana.
4. Nailis Syifa, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku Ketua Program Studi Farmasi atas
kesempatan yang diberikan untuk mengikuti program sarjana.
5. Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt. selaku kepala laboratorium
farmasi, yang telah memberikan kesempatan untuk menggunakan fasilitas
laboratorium dalam menyelesaikan skripsi ini.
6. dr. Desy Andari, M.Biomed selaku kepala laboratorium Biomedik PPD
UMM yang telah memberikan izin untuk menggunakan laboratorium selama
penelitian.
7. Agustin Rafikayanti, S.Farm selaku dosen wali saya yang senantiasa dengan
sabar memberikan bimbingan dan nasehat kepada saya untuk lebih baik lagi
dalam menimba ilmu.
8. Untuk kedua orang tua tercinta Bapak Rajali dan Ibu Nurul Faujiah, atas doa
yang selalu dipanjatkan untuk kesuksesan anaknya, atas curahan kasih sayang
yang tiada hentinya, serta segala bentuk motivasi yang telah diberikan kepada
penulis selama menempuh pendidikan sampai di tingkat perguruan tinggi.
9. Untuk kedua abang Ranu Wijaya dan Rizkiannur, kakak Herlina dan adikku
Dzaki Al Khawarizmi yang tak henti-hentinya memberikan semangat,
motivasi, doa, dan dukungan moril maupun materil.
10. Untuk Ronny Anggriawan yang selalu mendengar keluh kesah penulis,
memberikan bantuan serta dorongan agar lebih semangat dari awal hingga
akhir dalam meyelesaikan penelitian skripsi ini.
11. Sahabat kos 324, Siska, Kiki, Umi Fudhoh dan Evy atas segala bentuk
bantuan serta tumpangan kos dari awal kuliah hingga penyelesaian skripsi ini.
12. Teman sebimbingan dalam penelitian ini, Ririn, Fani, Ainun, Ninuk, Renny,
Ayu, Mbak Reska dan Mbak Fatilah teman seperjuangan dalam penelitian
dari awal sampai akhir atas bantuan selama penyusunan dan penyelesaian
skripsi ini.
13. Laboran-laboran Laboratorium program studi farmasi dan Laboratorium
Biomedik, Mbak Evi, Mbak Bunga, Mbak Fat dan Pak Joko atas segala
bentuk bantuan dan kerja samanya selama penelitian.
14. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu, yang telah
memberikan bantuannya, baik moril maupun material.
Tentunya sebagai manusia tidak pernah luput dari kesalahan, penulis
menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, Oleh karena itu saran
dan kritik yang membangun dari semua pihak sangat diharapkan demi
penyempurnaan selanjutnya. Akhirnya hanya kepada Allah SWT kita kembalikan
semua urusan dan semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak,
khususnya bagi penulis dan para pembaca pada umumnya. Amin Ya Rabbal
‘Alamin
Wassalamu’alaikum, warohmatullahi wabarokaatuh
Malang, 25 Juni 2016
Penulis,
Tri Rahmi
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iv
RINGKASAN ........................................................................................................ vi
ABSTRAK ........................................................................................................... viii
DAFTAR ISI ........................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xiv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xv
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xvi
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 4
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................... 4
1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................. 5
2.1 Tinjauan Kelor (Moringa Oleifera) ............................................................... 5
2.1.1 Klasifikasi ............................................................................................... 5
2.1.2 Deskripsi Umum ..................................................................................... 5
2.1.3 Morfologi ................................................................................................ 5
2.1.4 Kandungan Daun Kelor .......................................................................... 6
2.1.5 Manfaat Tanaman ................................................................................... 6
2.1.6 Aktivitas Biologi dari Moringa oleifera ................................................. 7
2.2 Tinjauan Infeksi ............................................................................................. 7
2.2.1 Etiologi.................................................................................................... 7
2.2.2 Terapi Infeksi .......................................................................................... 8
2.3 Tinjauan Bakteri Staphylococcus aureus ...................................................... 8
2.3.1 Klasifikasi dan Morfologi ....................................................................... 8
2.3.2 Patogenisitas ........................................................................................... 9
2.3.3 Pengobatan ............................................................................................ 10
2.4 Tinjauan Eritromisin.................................................................................... 10
2.5 Tinjauan Golongan Senyawa yang Memiliki Aktivitas Antibakteri ........... 11
2.5.1 Flavonoid .............................................................................................. 11
2.5.2 Polifenol dan Tanin ............................................................................... 12
2.5.3 Saponin dan Terpenoid ......................................................................... 12
2.5.4 Alkaloid ................................................................................................ 15
2.5.5 Antrakuinon .......................................................................................... 15
2.6 Tinjauan Metode Penyarian ......................................................................... 16
2.6.1 Ekstraksi................................................................................................ 16
2.6.2 Maserasi ................................................................................................ 17
2.6.3 Tinjauan Pelarut .................................................................................... 18
2.7 Kromatografi Lapis Tipis ............................................................................ 20
2.7.1 Fase Diam ............................................................................................. 21
2.7.2 Fase Gerak ............................................................................................ 21
2.8 Tinjauan Uji Kepekaan terhadap Antibakteri In Vitro ................................ 22
2.8.1 Metode Dilusi ....................................................................................... 22
2.8.2 Metode Difusi Cakram.......................................................................... 22
2.8.3 Bioautografi .......................................................................................... 23
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL ............................................................... 27
3.1 Bagan Kerangka Konseptual ....................................................................... 27
3.2 Uraian Kerangka Konseptual ...................................................................... 28
BAB IV METODE PENELITIAN ....................................................................... 30
4.1 Lokasi Penelitian ......................................................................................... 30
4.2 Alat Penelitian ............................................................................................. 30
4.2.1 Pembuatan Serbuk Simplisia ................................................................ 30
4.2.2 Proses Ekstraksi .................................................................................... 30
4.2.3 Pengujian Bioautografi ......................................................................... 30
4.2.4 Identifikasi Profil KLT ......................................................................... 30
4.3 Bahan Penelitian .......................................................................................... 31
4.3.1 Bahan Uji .............................................................................................. 31
4.3.2 Proses Ekstraksi .................................................................................... 31
4.3.3 Pengujian Bioautografi ......................................................................... 31
4.3.4 Identifikasi Profil KLT ......................................................................... 31
4.4 Sterilisasi Bahan dan Alat ........................................................................... 31
4.4.1 Sterilisasi Kering................................................................................... 32
4.4.2 Sterilisasi Basah .................................................................................... 32
4.5 Metode Penelitian ........................................................................................ 32
4.5.1 Rancangan Penelitian ............................................................................ 32
4.5.2 Kerangka Operasional........................................................................... 33
4.6 Variabel Penelitian ...................................................................................... 33
4.6.1 Variabel Bebas ...................................................................................... 33
4.6.2 Variabel Terikat .................................................................................... 33
4.7 Definisi Operasional .................................................................................... 33
4.8 Prosedur Kerja ............................................................................................. 34
4.8.1 Pembuatan Simplisia............................................................................. 34
4.8.2 Pembuatan Ekstrak Bahan Uji .............................................................. 34
4.8.3 Pemisahan Senyawa dengan KLT ........................................................ 37
4.8.4 Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder ............................................ 37
4.8.5 Preparasi Media .................................................................................... 38
4.8.6 Preparasi Bakteri ................................................................................... 38
4.8.7 Pengujian Bioautografi ......................................................................... 39
4.8.8 Analisis Data ......................................................................................... 40
BAB V HASIL PENELITIAN ............................................................................. 41
5.1 Determinasi Daun Moringa oleifera Lamk. ................................................ 41
5.2 Persiapan Serbuk Simplisia Daun Moringa oleifera Lamk......................... 41
5.3 Persiapan Fraksi n-Heksana Daun M. oleifera ............................................ 42
5.3.1 Karakteristik Fisik Fraksi n-Heksana Daun M. oleifera ....................... 43
5.4 Optimasi Fase Gerak KLT Fraksi n-Heksana Daun M. oleifera ................. 43
5.5 Identifikasi Golongan Senyawa yang Terdapat pada Fraksi n-Heksana Daun
M. oleifera.................................................................................................... 44
5.5.1 Alkaloid ................................................................................................ 44
5.5.2 Terpenoid .............................................................................................. 45
5.5.3 Flavonoid .............................................................................................. 45
5.5.4 Polifenol dan Tanin ............................................................................... 46
5.6 Uji Antibakteri Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera dengan Metode
Bioautografi terhadap Staphylococcus aureus ............................................ 48
BAB VI PEMBAHASAN ..................................................................................... 50
BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 58
7.1. Kesimpulan ................................................................................................. 58
7.2. Saran ........................................................................................................... 58
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 59
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
Halaman
1.
Daftar Riwayat Hidup .................................................................................... 63
2.
Surat Pernyataan ............................................................................................ 64
3.
Surat Determinasi Tanaman ........................................................................... 65
4.
Laporan Hasil Uji Bakteri .............................................................................. 66
5.
Perhitungan .................................................................................................... 67
6.
Hasil Penelitian .............................................................................................. 70
7.
Pewarnaan Bakteri Gram Positif Staphylococcus aureus .............................. 77
8.
Gambar Alat dan Bahan Penelitian ................................................................ 79
DAFTAR PUSTAKA
Abdallah, E. M., 2015. Antibacterial Properties of Leaf Extracts of Moringa
oleifera Lam. Growing in Sudan. Journal of Advances in Medical and
Pharmaceutical Sciences Vol. 5 No. 1 p. 1-5
Agoes, G. 2009. Teknologi Bahan Alam, Edisi Revisi dan Perluasan Cetakan 2.
Bandung : Institut Teknologi Bandung.
Ahmad, R. Z. Gholib, D., 2013. Pengujian Ekstrak Etanol, Etil Asetat Dan
Minyak Atsiri Daun Beluntas (Pluchea Indica (L) Lees.) Terhadap
Trichophyton Mentagrophytes Dan Cryptococcus Neoformans Secara In
Vitro. Bogor. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner
Anonim. 2015. Penggunaan Antibiotik Bijak dan Rasional Kurangi Beban
Penyakit Infeksi. Kemenkes RI : Depkes
AOAC. 2002. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods
for
Dietary
Supplements
and
Botanicals.
www.aoac.org/imis15_prod/AOAC_Docs/StandardsDevelopment/SLV_Gui
delines_Dietary_Supplements.pdf, diakses 25 Mei 2016.
Arista, M. 2013. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 80% dan 96% Daun Katuk
(Sauropus androgynus (L.) Merr.). Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas
Surabaya Vol. 2 No. 2 p. 1-16
Artati, E.K., dan Fadilah. 2007. Pengaruh Kecepatan Putar Pengadukan Dan
Suhu Operasi Pada Ekstraksi Tanin Dari Jambu Mete Dengan Pelarut
Aseton. Ekuilibrium Vol. 6 No. 1 p. 33-38
Auliawan, R. dan Cahyono, B., 2014. Efek Hidrolisis Ekstrak Daun Iler (Coleus
scutellarioides) terhadap Aktivitas Inhibisi Enzim α-glukosidase. Jurnal
Sains dan Matematika Vol. 22 No. 1 p. 15-19
Bipin, Anita, dkk. 2014. A Comprehensive Working, Principles and Applications
of Thin Layer Chromatography. Research Journal of Pharmaceutical 09758585
Choma, Irena M., Grzelak, E. M., 2010. Bioautography detection in thin-layer
chromatography. Journal of Chromatography A : Elsevier
Chomnawang, M.T., Surassmo, S., Nukoolkarn, V.S. and Gritsanapan, W., 2005.
Antimicrobial effects of Thai medicinal plants against acne-inducing
bacteria. Journal of Ethnopharmacology 101 p. 330-333
Cowan, M. M., 1999. Plant Product as Antimicrobial Agents. Clinical
Microbiology Review Vol. 12 No. 4 p. 564-582
Darminto, Ali, A., Dini, I., 2009. Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder
Potensial Menghambat Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophyla dari
Kulit batang Tumbuhan Aveccennia spp. Jurnal Chemica, Vol. 10 No. 2, p.
92 – 99.
Debenedetti, S. L., 2008. TLC and PC dalam Sampietro, D.A., Catalan, C.A.N.,
Vattuone, M.A., Isolation, Identification and Characterization of
Allelochemicals/Natural Products. New Hampshire : Science Publisher
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000. Parameter Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan pertama. Jakarta : Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2011. Farmakope Herbal Indonesia.
Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dewanjee, S., Gangopadhyay, M., Bhattacharya, N., Khanra, R., Dua, T. K.,
2014. Bioautography and its scope in the field of natural product chemistry.
Journal of Pharmaceutical Analysis.
Dey, P.M. and Harborne, J.B., 1991. Chapter 2: Assays for Antifungal Activity/
Chapter 3: Screening Methods for Antibacterial and Antiviral Agents from
Higher Plants. In: Methods in Plant Biochemistry. Volume 6: Assays for
Bioactivity. (Ed., K. Hostettmann). London : Academic Press.
Dirjen POM Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope
Indonesia. Edisi ke-4, Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Hal. 1083, 1084.
Dzen, S.M., Roekistiningsih., Santoso S., Winarsih S., Sumarno., Islam S.,
Noorhamdani A.S., Murwani S., Santosaningsih D., 2003. Bakteriologi
Medik. Malang : Bayumedia Publishing, hal. 131-139.
Evans, W.C. (2002). Pharmacognosy. Edisi ke-15, Formerly Reader in
Phytochemistry. UK: University of Nottingham., p 334 ; 337 ; 289
Fahey, J.W. 2005. Moringa oleifera: A Review of the Medical Evidence for Its
Nutritional, Therapeutic, and Prophylactic Properties. Part 1. Trees for life
journal.
Fauzana, D.L., 2010. Perbandingan Metode Maserasi, Remaserasi, Perkolasi dan
Reperkolasi Terhadap Rendemen Ekstrak Temulawak (Curcuma
xanthorrhiza Roxb.). Bogor : Skripsi Program Sarjana.
Gandjar, I. G., 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta : Pustaka Pelajar.
Gandjar, I. G., 2012. Analisis Obat Secara Spektrofotometri dan Kromatografi.
Yogyakarta : Pustaka Pelajar
Gritter, R. J., Bobbit J. M., dan Schwarting A. E., 1991. Pengantar Kromatografi,
Ed. 2. Terjemahan Koesasih Padmawinata. Bandung : ITB.
Gyawali, R., Ibrahim, S. A., 2014. Natural Product as antimicrobial agents. Food
Control : Elsevier
Harborne, J.B., 1987. Metode Fitokimia, Edisi ke dua. Bandung : ITB.
Haris, A, Arniati, Werorilangi, S. 2013. Uji Antibakteri Patogen Ekstrak Sponge
Menggunakan Metode High Troughput Screening (HTS) dengan indikator
MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5- diphenyltetrazolium bromide).
Makassar: Laporan Penelitian Dosen. Lembaga Penelitian Universitas
Hasanuddin.
Hasanah, A.N., Musfiroh, I., Saptarini, N. Y., Rahayu, D., 2014. Identifikasi
Rhodamin B pada Produk Pangan dan Kosmetik yang Beredar di Bandung.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia Vol. 12 No. 1 hal. 104-109
Jawetz, E.,Melnick, Y. L., Adelberg, E.A., 1995. Mikrobiologi Kedokteran, Ed.
20. Jakarta: EGC
Katzung, B.G. 1998. Basic and Clinical Pharmacology. Ed. 7th. USA: Prentice
Hall Inc, Appleton & Lange. p.743-745.
Kar, Ashutosh. 2007. Farmakognosi & Farmakobioteknologi, Ed. 2. Jakarta :
EGC
Krisnadi, A. D., 2015. Moringa oleifera. Majalah Kelor Super Nutrisi Ed. Revisi.
Kelorina.
Kusumaningtyas, E., Astuti, E., Darmono. 2008. Sensitivitas Metode Bioautografi
Kontak dan Agar Overlay dalam Penentuan Senyawa Antikapang. Jurnal
Ilmu Kefarmasian Indonesia Vol. 6 No. 2 hal. 75-79
Lenny, Sovia. 2006. Senyawa Terpenoida dan Steroida. Medan : Karya Ilmiah
Leone, A., Spada, A., Battezzati, A., Schiraldi, A., Aristil, J., Bertoli, S., 2015.
Cultivation,
Genetic,
Ethnopharmacology,
Phytochemistry,
and
Pharmacology of Moringa oleifera leaves : An Overeview. International
Journal of Molecular Sciences Vol 16 p. 12791-12835
Madigan, M., Martinko, J. and Parker, J. 2002. In: Brock Biology of
Microorganisms. Ed. 11th. International Edition.
Majidah, D., Fatmawati, D.W.A., Gunadi, A., 2014. Daya Antibakteri Ekstrak
Daun Seledri (Apium graveolens L.) terhadap Pertumbuhan Streptococcus
mutans sebagai Alternatif Obat Kumur. Jember : Artikel Ilmiah Hasil
Penelitian Mahasiswa
Mardiastuti, H.W., Karuniawati, A., Kiranassari, A., Ikaningsih, Kadarsih, R.,
2007. Emerging Resistance Pathogen: Situasi Terkini di Asia, Eropa,
Amerika Serikat, Timur Tengah dan Indonesia. Majalah Kedokteran
Indonesia, Vol. 57 No. 3 pp. 75-79
Moyo, B., Masika, J. P., Muchenje, V., 2012. Antimicrobial activities of Moringa
oleifera Lam leaf extracts. African Journal of Biotechnology Vol. 11 No.11,
p. 2797-2802
Mycek, M.J., R.A. Harvey, and P.C. Champe, 1997. Inhibitor of Cell Wall
Synthesis In: Pharmacology. Ed. 2nd. Philadelphia: Lippincott Williams &
Wikins. pp.297-310.
Ningsih, A dan Ibrahim, A. 2013. Aktifitas Antimikroba Ekstrak Fraksi N-Heksan
Daun Sungkai (Peronema Canescens.Jack) Terhadap Beberapa Bakteri
Dengan Metode Klt-Bioautografi. J. Trop. Pharm. Chem. Vol 2. No. 2.
Ojiako, E.N. 2014. Phytochemical Analysis and Antimicrobial Screening of
Moringa oleifera leaves extract. The International Journal of Engineering
And Science Vol. 3 No. 3 p. 32-35
Onyekaba TU, Omojate CG and Anowi FC. 2013. Phytochemical screening and
investigations of antibacterial activities of various fractions of the ethanol
leaves extract of Moringa oleifera lam (Moringaceae). International Journal
of Pharmaceutical, Chemical and Biological Sciences Vol. 3 No. 3 p. 962973.
Patra, J.K., Kim, E.S., Oh, K., Kim, H.J., Kim, Y., Baek, K.H., 2014.
Antibacterial effect of crude extract and metabolites of Phytolacca
americana on pathogens responsible for periodontal inflammatory diseases
and dental caries. BMC Complementary and Alternative Medicine Vol. 14
No. 343
Pourmourad, F, Hosseinimehr, S.J, Shahabimajd, N. 2006. Antioxidant Activity,
Phenol And Flavonoid Contents Of Some Selected Iranian Medicinal
Plants. African journal of Biotechnology Vol. 5(11) : 1142-1145
Pratiwi, S. T., 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta : Penerbit Erlangga.
Qolbaini, E.N., 2014. Karakterisasi dan Uji Kepekaan Terhadap Antibiotik Isolat
Bakteri Staphylococcus aureus Diisolasi dari Sapi Mastitis Subklinis.
Bogor: Tesis Program Pascasarjana.
Rohyani, I.M., Aryanti, E., dan Suripto. 2015. Kandungan fitokimia beberapa
jenis tumbuhan lokal yang sering dimanfaatkan sebagai bahan baku obat.
Pros Sem Nas Masy Biodiv Indon 1 (2): 388-391.
Ryan, K.J., J.J. Champoux, S. Falkow, J.J. Plonde, W.L. Drew, F.C. Neidhardt,
and C.G. Roy. 1994. Medical Microbiology An Introduction to Infectious
Diseases. 3rd ed. Connecticut: Appleton&Lange. p.254.
Sarker, S.D., Latif, Z., Gray, A.I., 2006. Natural Products Isolation. Edisi ke-2.
Humana Press.
Setiabudy, R. 1995. Pengantar Antimikroba. dalam: S.G. Ganiswarna, R.
Setiabudy, F.D. Suyatna, dkk. Farmakologi dan Terapi. Edisi IV. Jakarta:
Gaya Baru. hal. 571-576.
Shahriar, M., Hossain, M. I., Bahar, A. N. M., Akhter, S., Haque, A., Bhuiyan, M.
A., 2012. Preliminary Phytochemical Screening, In-Vitro Antioxidant and
Cytotoxic Activity of Five Different Extract of Moringa oleifera leaf. Journal
of Applied Pharmaceutical Science Vol. 2 No. 5 p. 65-68
Supardi, I., dan Sukamto. 1994. Mikrobiologi Dalam Pengolahan dan Keamanan
Pangan. Bandung : Penerbit Alumni.
Sweetman, S.C., 2009. Martindale The Complete Drug Reference. London
Chicago: Edisi ke-36. Pharmaceutical Press.
Verbitsky SM, McChesney JD, Gourdin GT, Ikenouve LM. 2007. Methods and
compositions for detecting active components using bioluminescent
bacteria and thin chromatography. USPTO Patent Application
20070184514.
Vinoth, B., Manivasagaperumal, R., dan Balamurugan, S. 2012. Phytochemical
Analysis and Antibacterial Activity of Moringa Oleifera Lam. International
Journal of Research in Biological Sciences.
Warsa, U.C. 1994. Staphylococcus dalam Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran
Edisi Revisi. Jakarta : Penerbit Binarupa Aksara. hal. 103-110.
WHO. 2014. Antimicrobial Resistance : global report on surveillance.
www.who.int/iris/bitstream/10665/112642/1/9789241564748_eng.pdf,
diakses 14 November 2015.
BAB I
BAB I PENDAHULUAN
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Mikroorganisme
merupakan
makhluk
hidup
yang
luas
keanekaragamannya, termasuk bakteri, fungi, protozoa dan virus (Madiganet et al,
2002). Kebanyakan mikroorganisme bersifat menguntungkan dan hampir tidak
memiliki efek negatif untuk inangnya. Namun, beberapa spesies patogenik
diketahui sangat merugikan dan berbahaya bagi manusia, tanaman dan hewan dan
menyebabkan kerugian pada aktivitas ekonomi manusia. Senyawa yang dapat
membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme patogen dikenal
sebagai antibakteri. Penelitian substansi dengan aktivitas antibakteri yang tidak
memiliki efek toksik pada hewan, tanaman dan organisme yang menguntungkan
merupakan salah satu unsur penting perlunya penelitian produk bahan alam (Dey
dan Harborne, 1991).
Dengan berjalannya waktu, terjadi perubahan pada praktik perawatan
kesehatan. Semakin banyak penderita dirawat di rumah sakit dalam jangka
panjang, sehingga pajanan terhadap antibiotik baik oral maupun parenteral
semakin meningkat. Hal ini akan menimbulkan permasalahan baru yaitu
tantangan munculnya mikroba patogen yang resisten terhadap antibiotik. Jika
dilihat kembali sejarah mulai dari penemuan penisilin pada tahun 1929 yang
kemudian digunakan secara luas di seluruh dunia pada tahun 1940-an, terutama
efektif terhadap Staphylococcus sp. dan Streptococcus sp. Namun, karena
pemakaian yang luas dan mungkin tidak rasional, timbullah galur-galur
Staphylococcus aureus (S. aureus) yang resisten terhadap penisilin. Resistensi
terhadap antibiotik ini terus meningkat pada dekade 1960 dan 1970-an
(Mardiastuti et al, 2007).
Kementrian Kesehatan Republik Indonesia mengungkapkan berdasarkan
laporan terakhir dari Badan Kesehatan Dunia (WHO) dalam Antimicrobial
Resistance : Global Report on Surveillence menunjukkan bahwa Asia Tenggara
memiliki angka tertinggi dalam kasus resistensi antibiotik di dunia, khususnya
infeksi yang disebabkan Staphylococcus aureus yang resisten terhadap Methicillin
1
2
(Kemenkes RI, 2015). Berdasarkan laporan dari beberapa wilayah dilaporkan
bahwa resistensi Staphylococcus aureus telah melebihi 20% bahkan ada yang
melebihi 80% (WHO, 2014).
Resistensi antibakteri sudah menjadi masalah global. Untuk mengatasi
masalah ini salah satunya yaitu dengan cara menemukan antibiotik baru. Hampir
20% tanaman di dunia telah dilakukan uji farmakologi atau uji biologi. Beberapa
substansi antibiotik baru telah diperkenalkan di pasaran yang bersumber dari alam
atau semi-sintesis. Pada negara berkembang, karena efesiensi biaya sebagian besar
masyarakat menggunakan obat herbal atau tanaman obat untuk pengobatan
penyakit infeksi (Vinoth et al, 2012).
Kurang lebih 80% obat-obatan yang digunakan oleh masyarakat Indonesia
berasal dari tumbuhan. Pada tumbuhan sudah dikenal mengandung berbagai
golongan senyawa kimia sebagai bahan obat yang mempunyai efek fisiologis
terhadap organisme lain. Senyawa alam hasil isolasi dari tumbuhan juga
digunakan sebagai bahan asal untuk sintesis bahan-bahan biologis aktif dan
sebagai senyawa untuk mengobati penyakit infeksi yang disebabkan oleh
Staphylococcus aureus (Supardi dan Sukamto, 1994). Salah satu tanaman yang
memiliki potensi sebagai antibakteri adalah Moringa oleifera Lam, familia
Moringaceae, atau lebih dikenal di Indonesia dengan sebutan kelor. Setelah
mengetahui jenis senyawa metabolit sekunder yang dapat memberikan aktivitas
antibakteri, ekstrak daun M. oleifera diharapkan dapat dikembangkan menjadi
bahan baku obat seperti ekstrak sambiloto dalam Androbiotik® yang digunakan
sebagai bahan baku obat antibiotik herbal.
Pada penelitian Singh, 2013, sudah dilakukan penelitian dengan metode
perbandingan kadar ekstrak terhadap ekstrak air, heksana, etanol dan metanol
daun M. Oleifera, yang diekstraksi menggunakan metode ekstraksi destilasi,
bahwa pada konsentrasi masing-masing 0,1 mg/ml hingga 20 mg/ml dengan
menggunakan metode dilusi agar mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram
negatif dan Gram positif. Pada penelitian tersebut dibuktikan pada fraksi heksana
dengan konsentrasi 10 µL dari 50mg/0,1ml menghasilkan zona hambatan sebesar
10 mm terhadap Staphylococcus aureus.
3
Berdasarkan hasil skrining fitokimia dari beberapa penelitian M. oleifera
mengandung gula sederhana, rhamnosa, dan banyak mengandung senyawa
glucosinolat dan isotiosianat selain itu pada penelitian antibakteri fraksi n-heksana
daun M. Oleifera mengandung flavonoid, tannin, karbohidrat, triterpenoid,
alkaloid dan phlobatannin (Fahey, 2005; Shahriar et al, 2012 dan Ojiako, 2014).
Pada penelitian ini akan dilakukan pengujian aktivitas fraksi n-heksana daun
M.oleifera terhadap bakteri Staphylococcus aureus. Pada proses ekstraksi
selanjutnya akan dilakukan fraksinasi M. oleifera menggunakan pelarut etil asetat
dan etanol. Pemilihan ketiga pelarut didasarkan pada fakta bahwa ketiganya
mempunyai tingkat kepolaran yang berbeda, sehingga diharapkan akan diperoleh
jenis senyawa aktif yang berbeda pula. Metode maserasi yang digunakan dalam
penelitian ini menggunakan pengadukan yang konstan, yakni 200 rpm untuk
efisiensi waktu saat proses ekstraksi (Fauzana, 2010).
Identifikasi diperlukan untuk mengetahui jenis senyawa metabolit
sekunder yang berada dalam simplisia yang dapat memberikan aktivitas
antibakteri. Pada fraksi n-heksana akan dilakukan pengujian aktivitas antibakteri
dengan metode bioautografi kontak, yaitu suatu metode sederhana gabungan
antara teknik kromatografi lapis tipis dan respon dari mikroorganisme yang diuji
berdasarkan aktivitas biologi dari suatu analit yang digunakan untuk pengujian
anti mikroba. Berdasarkan metode bioautografi kontak golongan senyawa yang
memiliki aktivitas antibakteri dapat diketahui sehingga dapat dikembangkan
menjadi bahan aktif antibiotik dari bahan alam. Bioautografi dapat digunakan
untuk menemukan senyawa anti mikroba yang baru, kontrol kualitas anti mikroba,
dan untuk mendeteksi golongan senyawa yang di analisa (Kusumaningtyas,
2008).
Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti melakukan penelitian uji
aktivitas antibakteri fraksi n-heksana daun M. oleifera terhadap pertumbuhan
Staphylococcus aureus menggunakan metode bioautografi kontak secara in vitro.
4
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka rumusan
masalahnya yaitu :
1. Bagaimanakah aktivitas antibakteri komponen senyawa aktif yang terdapat
pada fraksi n-heksana daun Moringa oleifera terhadap Staphylococcus aureus
yang dilihat dari diagonal zona hambatnya?
2. Golongan senyawa aktif apakah yang terpisah pada fraksi n-heksana daun
Moringa oleifera dan golongan senyawa apakah yang memiliki aktivitas
antibakteri terbesar terhadap Staphylococcus aureus?
1.3 Tujuan Penelitian
Tujuan dilakukan penelitian ini adalah :
1. Mendapatkan data aktivitas antibakteri komponen senyawa aktif yang terdapat
pada fraksi n-heksana daun Moringa oleifera terhadap Staphylococcus aureus
yang dilihat dari diagonal zona hambatnya.
2. Mendapatkan data golongan senyawa aktif yang terpisah pada fraksi n-heksana
daun Moringa oleifera dan golongan senyawa yang memiliki aktivitas
antibakteri tebesar terhadap Staphylococcus aureus.
1.4 Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan didapatkan data golongan senyawa
metabolit yang memiliki aktivitas antibakteri terbesar dari fraksi n-heksana daun
M. oleifera dan didapatkan data golongan senyawa apa saja yang dapat dipisahkan
dari fraksi n-heksana serta mengungkapkan potensi senyawa bioaktif yang
diproduksi oleh M. oleifera sehingga dapat dikembangkan lebih lanjut sebagai
bahan baku obat antibakteri.
TRI RAHMI
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI
n-HEKSANA DAUN KELOR (Moringa oleifera)
TERHADAP Staphyloccus aureus DENGAN
METODE BIOAUTOGRAFI
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
2016
Lembar Pengesahan
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA
DAUN KELOR (Moringa oleifera) TERHADAP
Staphyloccus aureus DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada
Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Malang
2016
Oleh :
TRI RAHMI
NIM : 201210410311187
Disetujui Oleh :
Pembimbing I
Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt
NIP UMM. 11408040453
Pembimbing II
Ahmad Shobrun Jamil, S.Si., MP
NIP UMM. 11309070469
Lembar Pengujian
AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA
DAUN KELOR (Moringa oleifera) TERHADAP
Staphyloccus aureus DENGAN METODE
BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
Telah Diuji dan Dipertahankan di Depan Tim Penguji
Pada Tanggal 3 Juni 2016
Oleh :
TRI RAHMI
NIM : 201210410311187
Disetujui oleh :
Penguji I
Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt.
NIP UMM. 114. 0804. 0453
Penguji III
Penguji II
Ahmad Shobrun Jamil, S.Si., M.P.
NIP UMM. 113. 0907. 0469
Penguji IV
Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt. Engrid Juni Astuti, M.Farm., Apt.
NIP UMM. 114. 0804. 0452
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokaatuh
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat, taufik, serta
hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya tulis yang berbentuk
skripsi ini sesuai dengan waktu yang telah direncanakan. Shalawat serta salam
semoga senantiasa tercurahkan kepada baginda Nabi Muhammad SAW beserta
seluruh keluarga dan sahabatnya yang selalu istiqamah membantu perjuangan
beliau dalam mensyiarkan ajaran Islam di muka bumi ini. Sehingga tugas akhir
yang berjudul “AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA DAUN
KELOR (Moringa oleifera) TERHADAP Staphylococcus aureus DENGAN
METODE BIOAUTOGRAFI” dapat diselesaikan. Tugas akhir ini merupakan
syarat terakhir yang harus ditempuh untuk menyelesaikan pendidikan pada
jenjang Strata Satu (S1), pada Jurusan Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan,
Universitas Muhammadiyah Malang.
Dalam penulisan skripsi ini tentunya banyak pihak yang telah memberikan
bantuan kepada penulis, baik berupa moril maupun materil. Oleh karena itu
penulis ingin menyampaikan ucapan terimakasih yang tiada hingganya kepada :
1. Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt. sebagai Pembimbing I dan Ahmad
Shobrun Jamil, S.Si., MP. sebagai Pembimbing II yang dengan tulus ikhlas
dan penuh kesabaran, membimbing dan memberi dorongan moral maupun
materi kepada saya sehingga skripsi ini dapat diselesaikan.
2. Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt. dan Engrid Juni Astuti,
M.Farm., Apt. sebagai Tim Penguji yang memberikan saran dan kritik yang
membangun terhadap skripsi yang telah penulis kerjakan
3. Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang, Yoyok
Bekti Prasetyo, M.Kep., Sp.Kom. atas kesempatan yang diberikan untuk
mengikuti program sarjana.
4. Nailis Syifa, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku Ketua Program Studi Farmasi atas
kesempatan yang diberikan untuk mengikuti program sarjana.
5. Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt. selaku kepala laboratorium
farmasi, yang telah memberikan kesempatan untuk menggunakan fasilitas
laboratorium dalam menyelesaikan skripsi ini.
6. dr. Desy Andari, M.Biomed selaku kepala laboratorium Biomedik PPD
UMM yang telah memberikan izin untuk menggunakan laboratorium selama
penelitian.
7. Agustin Rafikayanti, S.Farm selaku dosen wali saya yang senantiasa dengan
sabar memberikan bimbingan dan nasehat kepada saya untuk lebih baik lagi
dalam menimba ilmu.
8. Untuk kedua orang tua tercinta Bapak Rajali dan Ibu Nurul Faujiah, atas doa
yang selalu dipanjatkan untuk kesuksesan anaknya, atas curahan kasih sayang
yang tiada hentinya, serta segala bentuk motivasi yang telah diberikan kepada
penulis selama menempuh pendidikan sampai di tingkat perguruan tinggi.
9. Untuk kedua abang Ranu Wijaya dan Rizkiannur, kakak Herlina dan adikku
Dzaki Al Khawarizmi yang tak henti-hentinya memberikan semangat,
motivasi, doa, dan dukungan moril maupun materil.
10. Untuk Ronny Anggriawan yang selalu mendengar keluh kesah penulis,
memberikan bantuan serta dorongan agar lebih semangat dari awal hingga
akhir dalam meyelesaikan penelitian skripsi ini.
11. Sahabat kos 324, Siska, Kiki, Umi Fudhoh dan Evy atas segala bentuk
bantuan serta tumpangan kos dari awal kuliah hingga penyelesaian skripsi ini.
12. Teman sebimbingan dalam penelitian ini, Ririn, Fani, Ainun, Ninuk, Renny,
Ayu, Mbak Reska dan Mbak Fatilah teman seperjuangan dalam penelitian
dari awal sampai akhir atas bantuan selama penyusunan dan penyelesaian
skripsi ini.
13. Laboran-laboran Laboratorium program studi farmasi dan Laboratorium
Biomedik, Mbak Evi, Mbak Bunga, Mbak Fat dan Pak Joko atas segala
bentuk bantuan dan kerja samanya selama penelitian.
14. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu, yang telah
memberikan bantuannya, baik moril maupun material.
Tentunya sebagai manusia tidak pernah luput dari kesalahan, penulis
menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, Oleh karena itu saran
dan kritik yang membangun dari semua pihak sangat diharapkan demi
penyempurnaan selanjutnya. Akhirnya hanya kepada Allah SWT kita kembalikan
semua urusan dan semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak,
khususnya bagi penulis dan para pembaca pada umumnya. Amin Ya Rabbal
‘Alamin
Wassalamu’alaikum, warohmatullahi wabarokaatuh
Malang, 25 Juni 2016
Penulis,
Tri Rahmi
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iv
RINGKASAN ........................................................................................................ vi
ABSTRAK ........................................................................................................... viii
DAFTAR ISI ........................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xiv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xv
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xvi
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 4
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................... 4
1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................. 5
2.1 Tinjauan Kelor (Moringa Oleifera) ............................................................... 5
2.1.1 Klasifikasi ............................................................................................... 5
2.1.2 Deskripsi Umum ..................................................................................... 5
2.1.3 Morfologi ................................................................................................ 5
2.1.4 Kandungan Daun Kelor .......................................................................... 6
2.1.5 Manfaat Tanaman ................................................................................... 6
2.1.6 Aktivitas Biologi dari Moringa oleifera ................................................. 7
2.2 Tinjauan Infeksi ............................................................................................. 7
2.2.1 Etiologi.................................................................................................... 7
2.2.2 Terapi Infeksi .......................................................................................... 8
2.3 Tinjauan Bakteri Staphylococcus aureus ...................................................... 8
2.3.1 Klasifikasi dan Morfologi ....................................................................... 8
2.3.2 Patogenisitas ........................................................................................... 9
2.3.3 Pengobatan ............................................................................................ 10
2.4 Tinjauan Eritromisin.................................................................................... 10
2.5 Tinjauan Golongan Senyawa yang Memiliki Aktivitas Antibakteri ........... 11
2.5.1 Flavonoid .............................................................................................. 11
2.5.2 Polifenol dan Tanin ............................................................................... 12
2.5.3 Saponin dan Terpenoid ......................................................................... 12
2.5.4 Alkaloid ................................................................................................ 15
2.5.5 Antrakuinon .......................................................................................... 15
2.6 Tinjauan Metode Penyarian ......................................................................... 16
2.6.1 Ekstraksi................................................................................................ 16
2.6.2 Maserasi ................................................................................................ 17
2.6.3 Tinjauan Pelarut .................................................................................... 18
2.7 Kromatografi Lapis Tipis ............................................................................ 20
2.7.1 Fase Diam ............................................................................................. 21
2.7.2 Fase Gerak ............................................................................................ 21
2.8 Tinjauan Uji Kepekaan terhadap Antibakteri In Vitro ................................ 22
2.8.1 Metode Dilusi ....................................................................................... 22
2.8.2 Metode Difusi Cakram.......................................................................... 22
2.8.3 Bioautografi .......................................................................................... 23
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL ............................................................... 27
3.1 Bagan Kerangka Konseptual ....................................................................... 27
3.2 Uraian Kerangka Konseptual ...................................................................... 28
BAB IV METODE PENELITIAN ....................................................................... 30
4.1 Lokasi Penelitian ......................................................................................... 30
4.2 Alat Penelitian ............................................................................................. 30
4.2.1 Pembuatan Serbuk Simplisia ................................................................ 30
4.2.2 Proses Ekstraksi .................................................................................... 30
4.2.3 Pengujian Bioautografi ......................................................................... 30
4.2.4 Identifikasi Profil KLT ......................................................................... 30
4.3 Bahan Penelitian .......................................................................................... 31
4.3.1 Bahan Uji .............................................................................................. 31
4.3.2 Proses Ekstraksi .................................................................................... 31
4.3.3 Pengujian Bioautografi ......................................................................... 31
4.3.4 Identifikasi Profil KLT ......................................................................... 31
4.4 Sterilisasi Bahan dan Alat ........................................................................... 31
4.4.1 Sterilisasi Kering................................................................................... 32
4.4.2 Sterilisasi Basah .................................................................................... 32
4.5 Metode Penelitian ........................................................................................ 32
4.5.1 Rancangan Penelitian ............................................................................ 32
4.5.2 Kerangka Operasional........................................................................... 33
4.6 Variabel Penelitian ...................................................................................... 33
4.6.1 Variabel Bebas ...................................................................................... 33
4.6.2 Variabel Terikat .................................................................................... 33
4.7 Definisi Operasional .................................................................................... 33
4.8 Prosedur Kerja ............................................................................................. 34
4.8.1 Pembuatan Simplisia............................................................................. 34
4.8.2 Pembuatan Ekstrak Bahan Uji .............................................................. 34
4.8.3 Pemisahan Senyawa dengan KLT ........................................................ 37
4.8.4 Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder ............................................ 37
4.8.5 Preparasi Media .................................................................................... 38
4.8.6 Preparasi Bakteri ................................................................................... 38
4.8.7 Pengujian Bioautografi ......................................................................... 39
4.8.8 Analisis Data ......................................................................................... 40
BAB V HASIL PENELITIAN ............................................................................. 41
5.1 Determinasi Daun Moringa oleifera Lamk. ................................................ 41
5.2 Persiapan Serbuk Simplisia Daun Moringa oleifera Lamk......................... 41
5.3 Persiapan Fraksi n-Heksana Daun M. oleifera ............................................ 42
5.3.1 Karakteristik Fisik Fraksi n-Heksana Daun M. oleifera ....................... 43
5.4 Optimasi Fase Gerak KLT Fraksi n-Heksana Daun M. oleifera ................. 43
5.5 Identifikasi Golongan Senyawa yang Terdapat pada Fraksi n-Heksana Daun
M. oleifera.................................................................................................... 44
5.5.1 Alkaloid ................................................................................................ 44
5.5.2 Terpenoid .............................................................................................. 45
5.5.3 Flavonoid .............................................................................................. 45
5.5.4 Polifenol dan Tanin ............................................................................... 46
5.6 Uji Antibakteri Fraksi n-Heksana Daun Moringa oleifera dengan Metode
Bioautografi terhadap Staphylococcus aureus ............................................ 48
BAB VI PEMBAHASAN ..................................................................................... 50
BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 58
7.1. Kesimpulan ................................................................................................. 58
7.2. Saran ........................................................................................................... 58
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 59
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
Halaman
1.
Daftar Riwayat Hidup .................................................................................... 63
2.
Surat Pernyataan ............................................................................................ 64
3.
Surat Determinasi Tanaman ........................................................................... 65
4.
Laporan Hasil Uji Bakteri .............................................................................. 66
5.
Perhitungan .................................................................................................... 67
6.
Hasil Penelitian .............................................................................................. 70
7.
Pewarnaan Bakteri Gram Positif Staphylococcus aureus .............................. 77
8.
Gambar Alat dan Bahan Penelitian ................................................................ 79
DAFTAR PUSTAKA
Abdallah, E. M., 2015. Antibacterial Properties of Leaf Extracts of Moringa
oleifera Lam. Growing in Sudan. Journal of Advances in Medical and
Pharmaceutical Sciences Vol. 5 No. 1 p. 1-5
Agoes, G. 2009. Teknologi Bahan Alam, Edisi Revisi dan Perluasan Cetakan 2.
Bandung : Institut Teknologi Bandung.
Ahmad, R. Z. Gholib, D., 2013. Pengujian Ekstrak Etanol, Etil Asetat Dan
Minyak Atsiri Daun Beluntas (Pluchea Indica (L) Lees.) Terhadap
Trichophyton Mentagrophytes Dan Cryptococcus Neoformans Secara In
Vitro. Bogor. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner
Anonim. 2015. Penggunaan Antibiotik Bijak dan Rasional Kurangi Beban
Penyakit Infeksi. Kemenkes RI : Depkes
AOAC. 2002. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods
for
Dietary
Supplements
and
Botanicals.
www.aoac.org/imis15_prod/AOAC_Docs/StandardsDevelopment/SLV_Gui
delines_Dietary_Supplements.pdf, diakses 25 Mei 2016.
Arista, M. 2013. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 80% dan 96% Daun Katuk
(Sauropus androgynus (L.) Merr.). Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas
Surabaya Vol. 2 No. 2 p. 1-16
Artati, E.K., dan Fadilah. 2007. Pengaruh Kecepatan Putar Pengadukan Dan
Suhu Operasi Pada Ekstraksi Tanin Dari Jambu Mete Dengan Pelarut
Aseton. Ekuilibrium Vol. 6 No. 1 p. 33-38
Auliawan, R. dan Cahyono, B., 2014. Efek Hidrolisis Ekstrak Daun Iler (Coleus
scutellarioides) terhadap Aktivitas Inhibisi Enzim α-glukosidase. Jurnal
Sains dan Matematika Vol. 22 No. 1 p. 15-19
Bipin, Anita, dkk. 2014. A Comprehensive Working, Principles and Applications
of Thin Layer Chromatography. Research Journal of Pharmaceutical 09758585
Choma, Irena M., Grzelak, E. M., 2010. Bioautography detection in thin-layer
chromatography. Journal of Chromatography A : Elsevier
Chomnawang, M.T., Surassmo, S., Nukoolkarn, V.S. and Gritsanapan, W., 2005.
Antimicrobial effects of Thai medicinal plants against acne-inducing
bacteria. Journal of Ethnopharmacology 101 p. 330-333
Cowan, M. M., 1999. Plant Product as Antimicrobial Agents. Clinical
Microbiology Review Vol. 12 No. 4 p. 564-582
Darminto, Ali, A., Dini, I., 2009. Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder
Potensial Menghambat Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophyla dari
Kulit batang Tumbuhan Aveccennia spp. Jurnal Chemica, Vol. 10 No. 2, p.
92 – 99.
Debenedetti, S. L., 2008. TLC and PC dalam Sampietro, D.A., Catalan, C.A.N.,
Vattuone, M.A., Isolation, Identification and Characterization of
Allelochemicals/Natural Products. New Hampshire : Science Publisher
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000. Parameter Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan pertama. Jakarta : Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2011. Farmakope Herbal Indonesia.
Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dewanjee, S., Gangopadhyay, M., Bhattacharya, N., Khanra, R., Dua, T. K.,
2014. Bioautography and its scope in the field of natural product chemistry.
Journal of Pharmaceutical Analysis.
Dey, P.M. and Harborne, J.B., 1991. Chapter 2: Assays for Antifungal Activity/
Chapter 3: Screening Methods for Antibacterial and Antiviral Agents from
Higher Plants. In: Methods in Plant Biochemistry. Volume 6: Assays for
Bioactivity. (Ed., K. Hostettmann). London : Academic Press.
Dirjen POM Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope
Indonesia. Edisi ke-4, Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Hal. 1083, 1084.
Dzen, S.M., Roekistiningsih., Santoso S., Winarsih S., Sumarno., Islam S.,
Noorhamdani A.S., Murwani S., Santosaningsih D., 2003. Bakteriologi
Medik. Malang : Bayumedia Publishing, hal. 131-139.
Evans, W.C. (2002). Pharmacognosy. Edisi ke-15, Formerly Reader in
Phytochemistry. UK: University of Nottingham., p 334 ; 337 ; 289
Fahey, J.W. 2005. Moringa oleifera: A Review of the Medical Evidence for Its
Nutritional, Therapeutic, and Prophylactic Properties. Part 1. Trees for life
journal.
Fauzana, D.L., 2010. Perbandingan Metode Maserasi, Remaserasi, Perkolasi dan
Reperkolasi Terhadap Rendemen Ekstrak Temulawak (Curcuma
xanthorrhiza Roxb.). Bogor : Skripsi Program Sarjana.
Gandjar, I. G., 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta : Pustaka Pelajar.
Gandjar, I. G., 2012. Analisis Obat Secara Spektrofotometri dan Kromatografi.
Yogyakarta : Pustaka Pelajar
Gritter, R. J., Bobbit J. M., dan Schwarting A. E., 1991. Pengantar Kromatografi,
Ed. 2. Terjemahan Koesasih Padmawinata. Bandung : ITB.
Gyawali, R., Ibrahim, S. A., 2014. Natural Product as antimicrobial agents. Food
Control : Elsevier
Harborne, J.B., 1987. Metode Fitokimia, Edisi ke dua. Bandung : ITB.
Haris, A, Arniati, Werorilangi, S. 2013. Uji Antibakteri Patogen Ekstrak Sponge
Menggunakan Metode High Troughput Screening (HTS) dengan indikator
MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5- diphenyltetrazolium bromide).
Makassar: Laporan Penelitian Dosen. Lembaga Penelitian Universitas
Hasanuddin.
Hasanah, A.N., Musfiroh, I., Saptarini, N. Y., Rahayu, D., 2014. Identifikasi
Rhodamin B pada Produk Pangan dan Kosmetik yang Beredar di Bandung.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia Vol. 12 No. 1 hal. 104-109
Jawetz, E.,Melnick, Y. L., Adelberg, E.A., 1995. Mikrobiologi Kedokteran, Ed.
20. Jakarta: EGC
Katzung, B.G. 1998. Basic and Clinical Pharmacology. Ed. 7th. USA: Prentice
Hall Inc, Appleton & Lange. p.743-745.
Kar, Ashutosh. 2007. Farmakognosi & Farmakobioteknologi, Ed. 2. Jakarta :
EGC
Krisnadi, A. D., 2015. Moringa oleifera. Majalah Kelor Super Nutrisi Ed. Revisi.
Kelorina.
Kusumaningtyas, E., Astuti, E., Darmono. 2008. Sensitivitas Metode Bioautografi
Kontak dan Agar Overlay dalam Penentuan Senyawa Antikapang. Jurnal
Ilmu Kefarmasian Indonesia Vol. 6 No. 2 hal. 75-79
Lenny, Sovia. 2006. Senyawa Terpenoida dan Steroida. Medan : Karya Ilmiah
Leone, A., Spada, A., Battezzati, A., Schiraldi, A., Aristil, J., Bertoli, S., 2015.
Cultivation,
Genetic,
Ethnopharmacology,
Phytochemistry,
and
Pharmacology of Moringa oleifera leaves : An Overeview. International
Journal of Molecular Sciences Vol 16 p. 12791-12835
Madigan, M., Martinko, J. and Parker, J. 2002. In: Brock Biology of
Microorganisms. Ed. 11th. International Edition.
Majidah, D., Fatmawati, D.W.A., Gunadi, A., 2014. Daya Antibakteri Ekstrak
Daun Seledri (Apium graveolens L.) terhadap Pertumbuhan Streptococcus
mutans sebagai Alternatif Obat Kumur. Jember : Artikel Ilmiah Hasil
Penelitian Mahasiswa
Mardiastuti, H.W., Karuniawati, A., Kiranassari, A., Ikaningsih, Kadarsih, R.,
2007. Emerging Resistance Pathogen: Situasi Terkini di Asia, Eropa,
Amerika Serikat, Timur Tengah dan Indonesia. Majalah Kedokteran
Indonesia, Vol. 57 No. 3 pp. 75-79
Moyo, B., Masika, J. P., Muchenje, V., 2012. Antimicrobial activities of Moringa
oleifera Lam leaf extracts. African Journal of Biotechnology Vol. 11 No.11,
p. 2797-2802
Mycek, M.J., R.A. Harvey, and P.C. Champe, 1997. Inhibitor of Cell Wall
Synthesis In: Pharmacology. Ed. 2nd. Philadelphia: Lippincott Williams &
Wikins. pp.297-310.
Ningsih, A dan Ibrahim, A. 2013. Aktifitas Antimikroba Ekstrak Fraksi N-Heksan
Daun Sungkai (Peronema Canescens.Jack) Terhadap Beberapa Bakteri
Dengan Metode Klt-Bioautografi. J. Trop. Pharm. Chem. Vol 2. No. 2.
Ojiako, E.N. 2014. Phytochemical Analysis and Antimicrobial Screening of
Moringa oleifera leaves extract. The International Journal of Engineering
And Science Vol. 3 No. 3 p. 32-35
Onyekaba TU, Omojate CG and Anowi FC. 2013. Phytochemical screening and
investigations of antibacterial activities of various fractions of the ethanol
leaves extract of Moringa oleifera lam (Moringaceae). International Journal
of Pharmaceutical, Chemical and Biological Sciences Vol. 3 No. 3 p. 962973.
Patra, J.K., Kim, E.S., Oh, K., Kim, H.J., Kim, Y., Baek, K.H., 2014.
Antibacterial effect of crude extract and metabolites of Phytolacca
americana on pathogens responsible for periodontal inflammatory diseases
and dental caries. BMC Complementary and Alternative Medicine Vol. 14
No. 343
Pourmourad, F, Hosseinimehr, S.J, Shahabimajd, N. 2006. Antioxidant Activity,
Phenol And Flavonoid Contents Of Some Selected Iranian Medicinal
Plants. African journal of Biotechnology Vol. 5(11) : 1142-1145
Pratiwi, S. T., 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta : Penerbit Erlangga.
Qolbaini, E.N., 2014. Karakterisasi dan Uji Kepekaan Terhadap Antibiotik Isolat
Bakteri Staphylococcus aureus Diisolasi dari Sapi Mastitis Subklinis.
Bogor: Tesis Program Pascasarjana.
Rohyani, I.M., Aryanti, E., dan Suripto. 2015. Kandungan fitokimia beberapa
jenis tumbuhan lokal yang sering dimanfaatkan sebagai bahan baku obat.
Pros Sem Nas Masy Biodiv Indon 1 (2): 388-391.
Ryan, K.J., J.J. Champoux, S. Falkow, J.J. Plonde, W.L. Drew, F.C. Neidhardt,
and C.G. Roy. 1994. Medical Microbiology An Introduction to Infectious
Diseases. 3rd ed. Connecticut: Appleton&Lange. p.254.
Sarker, S.D., Latif, Z., Gray, A.I., 2006. Natural Products Isolation. Edisi ke-2.
Humana Press.
Setiabudy, R. 1995. Pengantar Antimikroba. dalam: S.G. Ganiswarna, R.
Setiabudy, F.D. Suyatna, dkk. Farmakologi dan Terapi. Edisi IV. Jakarta:
Gaya Baru. hal. 571-576.
Shahriar, M., Hossain, M. I., Bahar, A. N. M., Akhter, S., Haque, A., Bhuiyan, M.
A., 2012. Preliminary Phytochemical Screening, In-Vitro Antioxidant and
Cytotoxic Activity of Five Different Extract of Moringa oleifera leaf. Journal
of Applied Pharmaceutical Science Vol. 2 No. 5 p. 65-68
Supardi, I., dan Sukamto. 1994. Mikrobiologi Dalam Pengolahan dan Keamanan
Pangan. Bandung : Penerbit Alumni.
Sweetman, S.C., 2009. Martindale The Complete Drug Reference. London
Chicago: Edisi ke-36. Pharmaceutical Press.
Verbitsky SM, McChesney JD, Gourdin GT, Ikenouve LM. 2007. Methods and
compositions for detecting active components using bioluminescent
bacteria and thin chromatography. USPTO Patent Application
20070184514.
Vinoth, B., Manivasagaperumal, R., dan Balamurugan, S. 2012. Phytochemical
Analysis and Antibacterial Activity of Moringa Oleifera Lam. International
Journal of Research in Biological Sciences.
Warsa, U.C. 1994. Staphylococcus dalam Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran
Edisi Revisi. Jakarta : Penerbit Binarupa Aksara. hal. 103-110.
WHO. 2014. Antimicrobial Resistance : global report on surveillance.
www.who.int/iris/bitstream/10665/112642/1/9789241564748_eng.pdf,
diakses 14 November 2015.
BAB I
BAB I PENDAHULUAN
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Mikroorganisme
merupakan
makhluk
hidup
yang
luas
keanekaragamannya, termasuk bakteri, fungi, protozoa dan virus (Madiganet et al,
2002). Kebanyakan mikroorganisme bersifat menguntungkan dan hampir tidak
memiliki efek negatif untuk inangnya. Namun, beberapa spesies patogenik
diketahui sangat merugikan dan berbahaya bagi manusia, tanaman dan hewan dan
menyebabkan kerugian pada aktivitas ekonomi manusia. Senyawa yang dapat
membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme patogen dikenal
sebagai antibakteri. Penelitian substansi dengan aktivitas antibakteri yang tidak
memiliki efek toksik pada hewan, tanaman dan organisme yang menguntungkan
merupakan salah satu unsur penting perlunya penelitian produk bahan alam (Dey
dan Harborne, 1991).
Dengan berjalannya waktu, terjadi perubahan pada praktik perawatan
kesehatan. Semakin banyak penderita dirawat di rumah sakit dalam jangka
panjang, sehingga pajanan terhadap antibiotik baik oral maupun parenteral
semakin meningkat. Hal ini akan menimbulkan permasalahan baru yaitu
tantangan munculnya mikroba patogen yang resisten terhadap antibiotik. Jika
dilihat kembali sejarah mulai dari penemuan penisilin pada tahun 1929 yang
kemudian digunakan secara luas di seluruh dunia pada tahun 1940-an, terutama
efektif terhadap Staphylococcus sp. dan Streptococcus sp. Namun, karena
pemakaian yang luas dan mungkin tidak rasional, timbullah galur-galur
Staphylococcus aureus (S. aureus) yang resisten terhadap penisilin. Resistensi
terhadap antibiotik ini terus meningkat pada dekade 1960 dan 1970-an
(Mardiastuti et al, 2007).
Kementrian Kesehatan Republik Indonesia mengungkapkan berdasarkan
laporan terakhir dari Badan Kesehatan Dunia (WHO) dalam Antimicrobial
Resistance : Global Report on Surveillence menunjukkan bahwa Asia Tenggara
memiliki angka tertinggi dalam kasus resistensi antibiotik di dunia, khususnya
infeksi yang disebabkan Staphylococcus aureus yang resisten terhadap Methicillin
1
2
(Kemenkes RI, 2015). Berdasarkan laporan dari beberapa wilayah dilaporkan
bahwa resistensi Staphylococcus aureus telah melebihi 20% bahkan ada yang
melebihi 80% (WHO, 2014).
Resistensi antibakteri sudah menjadi masalah global. Untuk mengatasi
masalah ini salah satunya yaitu dengan cara menemukan antibiotik baru. Hampir
20% tanaman di dunia telah dilakukan uji farmakologi atau uji biologi. Beberapa
substansi antibiotik baru telah diperkenalkan di pasaran yang bersumber dari alam
atau semi-sintesis. Pada negara berkembang, karena efesiensi biaya sebagian besar
masyarakat menggunakan obat herbal atau tanaman obat untuk pengobatan
penyakit infeksi (Vinoth et al, 2012).
Kurang lebih 80% obat-obatan yang digunakan oleh masyarakat Indonesia
berasal dari tumbuhan. Pada tumbuhan sudah dikenal mengandung berbagai
golongan senyawa kimia sebagai bahan obat yang mempunyai efek fisiologis
terhadap organisme lain. Senyawa alam hasil isolasi dari tumbuhan juga
digunakan sebagai bahan asal untuk sintesis bahan-bahan biologis aktif dan
sebagai senyawa untuk mengobati penyakit infeksi yang disebabkan oleh
Staphylococcus aureus (Supardi dan Sukamto, 1994). Salah satu tanaman yang
memiliki potensi sebagai antibakteri adalah Moringa oleifera Lam, familia
Moringaceae, atau lebih dikenal di Indonesia dengan sebutan kelor. Setelah
mengetahui jenis senyawa metabolit sekunder yang dapat memberikan aktivitas
antibakteri, ekstrak daun M. oleifera diharapkan dapat dikembangkan menjadi
bahan baku obat seperti ekstrak sambiloto dalam Androbiotik® yang digunakan
sebagai bahan baku obat antibiotik herbal.
Pada penelitian Singh, 2013, sudah dilakukan penelitian dengan metode
perbandingan kadar ekstrak terhadap ekstrak air, heksana, etanol dan metanol
daun M. Oleifera, yang diekstraksi menggunakan metode ekstraksi destilasi,
bahwa pada konsentrasi masing-masing 0,1 mg/ml hingga 20 mg/ml dengan
menggunakan metode dilusi agar mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram
negatif dan Gram positif. Pada penelitian tersebut dibuktikan pada fraksi heksana
dengan konsentrasi 10 µL dari 50mg/0,1ml menghasilkan zona hambatan sebesar
10 mm terhadap Staphylococcus aureus.
3
Berdasarkan hasil skrining fitokimia dari beberapa penelitian M. oleifera
mengandung gula sederhana, rhamnosa, dan banyak mengandung senyawa
glucosinolat dan isotiosianat selain itu pada penelitian antibakteri fraksi n-heksana
daun M. Oleifera mengandung flavonoid, tannin, karbohidrat, triterpenoid,
alkaloid dan phlobatannin (Fahey, 2005; Shahriar et al, 2012 dan Ojiako, 2014).
Pada penelitian ini akan dilakukan pengujian aktivitas fraksi n-heksana daun
M.oleifera terhadap bakteri Staphylococcus aureus. Pada proses ekstraksi
selanjutnya akan dilakukan fraksinasi M. oleifera menggunakan pelarut etil asetat
dan etanol. Pemilihan ketiga pelarut didasarkan pada fakta bahwa ketiganya
mempunyai tingkat kepolaran yang berbeda, sehingga diharapkan akan diperoleh
jenis senyawa aktif yang berbeda pula. Metode maserasi yang digunakan dalam
penelitian ini menggunakan pengadukan yang konstan, yakni 200 rpm untuk
efisiensi waktu saat proses ekstraksi (Fauzana, 2010).
Identifikasi diperlukan untuk mengetahui jenis senyawa metabolit
sekunder yang berada dalam simplisia yang dapat memberikan aktivitas
antibakteri. Pada fraksi n-heksana akan dilakukan pengujian aktivitas antibakteri
dengan metode bioautografi kontak, yaitu suatu metode sederhana gabungan
antara teknik kromatografi lapis tipis dan respon dari mikroorganisme yang diuji
berdasarkan aktivitas biologi dari suatu analit yang digunakan untuk pengujian
anti mikroba. Berdasarkan metode bioautografi kontak golongan senyawa yang
memiliki aktivitas antibakteri dapat diketahui sehingga dapat dikembangkan
menjadi bahan aktif antibiotik dari bahan alam. Bioautografi dapat digunakan
untuk menemukan senyawa anti mikroba yang baru, kontrol kualitas anti mikroba,
dan untuk mendeteksi golongan senyawa yang di analisa (Kusumaningtyas,
2008).
Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti melakukan penelitian uji
aktivitas antibakteri fraksi n-heksana daun M. oleifera terhadap pertumbuhan
Staphylococcus aureus menggunakan metode bioautografi kontak secara in vitro.
4
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka rumusan
masalahnya yaitu :
1. Bagaimanakah aktivitas antibakteri komponen senyawa aktif yang terdapat
pada fraksi n-heksana daun Moringa oleifera terhadap Staphylococcus aureus
yang dilihat dari diagonal zona hambatnya?
2. Golongan senyawa aktif apakah yang terpisah pada fraksi n-heksana daun
Moringa oleifera dan golongan senyawa apakah yang memiliki aktivitas
antibakteri terbesar terhadap Staphylococcus aureus?
1.3 Tujuan Penelitian
Tujuan dilakukan penelitian ini adalah :
1. Mendapatkan data aktivitas antibakteri komponen senyawa aktif yang terdapat
pada fraksi n-heksana daun Moringa oleifera terhadap Staphylococcus aureus
yang dilihat dari diagonal zona hambatnya.
2. Mendapatkan data golongan senyawa aktif yang terpisah pada fraksi n-heksana
daun Moringa oleifera dan golongan senyawa yang memiliki aktivitas
antibakteri tebesar terhadap Staphylococcus aureus.
1.4 Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan didapatkan data golongan senyawa
metabolit yang memiliki aktivitas antibakteri terbesar dari fraksi n-heksana daun
M. oleifera dan didapatkan data golongan senyawa apa saja yang dapat dipisahkan
dari fraksi n-heksana serta mengungkapkan potensi senyawa bioaktif yang
diproduksi oleh M. oleifera sehingga dapat dikembangkan lebih lanjut sebagai
bahan baku obat antibakteri.