11
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1. Waktu dan tempat
Penelitian ini telah dilaksanakan pada Juni 2015 sampai dengan Juni 2016 di Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
dan Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara, Medan.
3.2. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini ialah Fourier Transform Infrared Spectroscopy FT-IR Spectroscopy, Scanning Electron Microscopy
SEM, spektrofotometer, neraca analitik, shaker dan vortex. Adapun bahan yang digunakan ialah Nutrient Agar NA, Nutrient Broth NB, Mineral Salt Medium
Broth MSMB, Plate Count Agar PCA, glukosa, lembaran plastik Low Density Pholyethylene LDPE dan Xylene
3.3. Metode Penelitian 3.3.1. Pengambilan Sampel
Sampel tanah diambil dari Tempat Pembuangan Akhir TPA Namo Bintang, Kecamatan Medan Tuntungan pada 3 titik menggunakan sekop pada ke
dalaman 3-5 cm dan dimasukkan ke dalam plastik steril Kavitha et al. 2014.
3.3.2. Isolasi Bakteri
Sampel tanah diambil sebanyak 1 gram, dimasukkan ke dalam 20 mL media Nutrient Broth NB steril dan diinkubasi pada shaker selama 1 x 24 jam
dengan kecepatan 120 rpm. Larutan diambil dengan pipet mikro sebanyak 1mL dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi pertama berisi 9 mL aquades steril,
selanjutnya dilakukan pengenceran sampai didapatkan pengenceran 10
-8
,dari pengenceran 10
-6
,10
-7
dan 10
-8
diambil 0,1 mL dan diratakan dengan menggunakan hockey stick pada media Nutrient Agar NA. Media NA yang
Universitas Sumatera Utara
12
sudah diinokulasikan dengan larutan bakteri diinkubasi selama 1x24 jam. Koloni- koloni yang berbeda kemudian dimurnikan untuk mendapatkan koloni tunggal
dan dikarakterisasi Zusfahair et al. 2007.
3.3.3. Pembuatan Bubuk LDPE
Biji LDPE dimasukkan ke dalam larutan xylene kemudian dididihkan selama 15 menit. Gumpalan LDPE yang terbentuk kemudian disiram dengan etil-
alkohol untuk menghilangkan xylene, setelah etil-alkohol dan xylene menguap, gumpalan LDPE dikeringkan dengan oven pada suhu 40-50
selama satu malam. Gumpalan LDPE yang sudah kering dipotong-potong menjadi bagian
kecil dan dihaluskan hingga terbentuk bubuk LDPE.
3.3.4. Lembar Tipis LDPE
Lembaran plastik yang digunakan dalam penelitian ini adalah plastik komersial yang berlabel LDPE.
3.3.5. Skrining Awal Bakteri Pendegradasi LDPE
Koloni tunggal yang sudah diperoleh kemudian diambil dengan menggunakan ose dan dibuat inokulumnya dengan kekeruhan yang sama dengan
larutan standar Mcfarland 0,5. Inokulum yang sudah dibuat diambil 2 mL kemudian dimasukkan ke dalam 50 mL media MSMB Mineral Salt Medium
Broth yang telah ditambahkan 0,5 glukosa dan bubuk LDPE sebagai sumber karbon, lalu diinkubasi pada shaker dengan kecepatan 120 rpm pada suhu ambient
selama 4 minggu. Pengukuran pertumbuhan dilakukan setiap minggu dengan mengukur nilai Optical Density OD dan menghitung jumlah koloni Hussein et
al. 2015.
3.3.6. Karakterisasi Bakteri