19 evaporator. Kemudian dikeringkan dengan freeze dryer selama lebih kurang 24
jam dan diperoleh eksrak etanol Kemala, 2012.
3.3 Pengujian Aktivitas Antioksidan EEDBB 3.3.1 Prinsip metode DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi DPPH 1,1- diphenyl-2-picryl-hidrazyl sebagai radikal bebas dalam larutan metanol sehingga
terjadi perubahan warna dari ungu menjadi kuning dengan nilai IC
50
konsentrasi sampel uji yang mampu meredam radikal bebas sebesar 50 digunakan sebagai
parameter untuk menentukan aktivitas antioksidan sampel uji tersebut.
3.3.2 Pembuatan larutan DPPH 0,5 mM
Timbang 20 mg DPPH kemudian dilarutkan dalam metanol hingga volume
100 ml Molyneux, 2004. 3.3.3 Pembuatan larutan blanko
Larutan DPPH 0,5 mM dipipet sebanyak 5 ml, kemudian dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml, dicukupkan volumenya dengan metanol sampai
garis tanda untuk mendapatkan konsentrasi 40 ppm Molyneux, 2004.
3.3.4 Pembuatan larutan induk
Sebanyak 25 mg sampel uji ekstrak kental ditimbang, dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml dilarutkan dengan metanol lalu volumenya
dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda konsentrasi 1000 ppm.
3.3.5 Pengukuran aktivitas antioksidan sampel uji dan vitamin C
Larutan induk dipipet sebanyak 3,12 ml; 6,25 ml; dan 12,5 ml ke dalam labu tentukur 25 ml untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 125
μgml, 250 μgml dan 500 μgml. ke dalam masing-masing labu tentukur ditambahkan 5 ml
larutan DPPH 0,5 mM lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis
Universitas Sumatera Utara
20 tanda, kemudian di diamkan selama 60 menit. Pengukuran dilakukan dengan alat
spektrofotometer pada panjang gelombang 516 nm Rosidah, 2008. Sebanyak 25 mg vitamin C ditimbang, dimasukkan ke dalam tentukur 25
ml dilarutkan dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda. Dipipet sebanyak 0,5 ml ke dalam labu tentukur 25 ml untuk
mendapatkan konsentrasi larutan uji 20 μgml. ke dalam masing-masing labu tentukur ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM lalu volumenya dicukupkan
dengan metanol sampai garis tanda, kemudian di diamkan selama 60 menit. Pengukuran dilakukan dengan alat spektrofotometer pada panjang gekombang
516 nm.
3.3.6 Penentuan persen peredaman
Penentuan aktivitas penangkap radikal bebas dari sampel uji menggunakan metode DPPH dengan spektrofotometer panjang gelombang 516 nm. Pengukuran
dilakukan setelah didiamkan selama 60 menit. Nilai serapan larutan DPPH sebelum dan sesudah penambahan ekstrak tersebut dihitung sebagai persen
inhibisi inhibisi dengan rumus sebagai berikut : Inhibisi =
x 100 Keterangan : A
Kontrol
= Absorbansi tidak mengandung sampel A
sampel
= Absorbansi sampel
3.3.7 Penentuan nilai IC
