32
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari sampai dengan bulan Maret 2011. Adapun tempat penelitian dilakukan di
Laboratorium Kimia Instrument dan Fisika Pusat Laboratorium Terpadu UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.2 Metode Pengambilan Data
Metode pengambilan data spektra ini meliputi penggunaan spektroskopi FTIR dan spektroskopi Uv-Visible.
3.2.1 Spektroskopi FTIR
•
Alat :
1. Spektrofotometer FTIR Spectrum One Perkin Elmer
3.1a 3.1b
Gambar 3.1 Penampang Spektroskopi FTIR a tampak depan b tampak atas
2.
spatula
33 3.
lumping agate vibrating ball mill
Gambar 3.2 Penampang lumping agate dan spatula
4. Handy press
Gambar 3.3 Penampang handy press
34 5.
Kbr disc holder
3.4a 3.4b
Gambar 3.4 Disc Holder apenampang disc holder b Tempat pemasangan disc holder pada spektroskopi FTIR
•
Bahan:
Gambar 3.5 Botol serbuk Kbr dan sample darah setelah mengalami proses freeze draying
1. Serbuk Kbr
2. Sample darah manusia dengan kadar glukosa 99 mldl dalam darah
telah melalui proses freeze draying
35 3.
Sample darah manusia dengan kadar glukosa 108 mldl dalam darah telah melalui proses freeze draying
4. Sample darah manusia dengan kadar glukosa 136 mldl dalam darah
telah melalui proses freeze draying
•
Freeze draying sebagian sample darah
3.6 a 3.6 b
3.6 c 3.6 d
Gambar 3.6 Freeze draying aTabung freeze b Tutup tabung freeze c Vacum
tube d screen control
36
1 Simpan sample darah dalam freeze dengan suhu -43º c
2 Masukkan sample darah kedalam vacum tube untuk proses drying
menghilangkan kadungan air dalam sample
•
Menentukan nilai absorbansi
1 Siapkan sample darah yang telah melalui proses freeze drying
2 Siapkan serbuk Kbr
3 Gerus dan campur 0,5-1 mgram tiap sample dengan serbuk kbr kering
dengan menggunakan lumping agate vibrating ball mill hingga benar- benar tercampur homogeny.
4 Masukkan campuran tersebut kedalam pencetak khusus menggunkan
spatula 5
Hubungkan pencetak dengan handy press 6
Lepaskan tongkang handy press lalu keluarkan cakram Kbr 7
Masukkan cakram kedalam Kbr disc holder, kemudian rekam spectrum absorbansi tiap sample darah
3.2.2 Spektroskopi UV-Visible
•
Alat :
1. Spektrofotometer UV-Vis Lambda 25 Perkin Elmer
37
3.7a 3.7b
Gambar 3.7 Spektoskopi UV-Vis a penampang spektoskopi UV-Vis b Tempat kuvet dalam spektroskopi Uv-Vis
2. Tabung reaksi
3. Pipet tetes volume
4. Rak tabung reaksi
5. Labu ukur
6. Kuvet quartz
•
Bahan:
3.8a 3.8b
38
3.8c 3.8d
Gambar 3.8 Bahan uji spektoskopi UV-VisaSample darah dengan berbagai konsentrasi bMemasukkan sample darah ke dalam kuvet cSample darah dalam
kuvet dMeletakkan kuvet berisi sample darah kedalam spektroskopi Uv-vis
1. Aquadest
2. Sample darah manusia dengan kadar glukosa 99 mldl dalam darah
3. Sample darah manusia dengan kadar glukosa 108 mldl dalam darah
4. Sample darah manusia dengan kadar glukosa 136 mldl dalam darah
•
Kalibrasi Alat Spektrofotometer UV-Vis
1 Nyalakan alat Spektrofotometer selama ± 15 menit untuk menstabilakan
sumber cahaya dan fotodetektor. 2
Siapkan aquades, masukkan kedalam kuvet yang telah diberihkan sebelumnya dengan tissue.
3 Pilih menu aplikasi wavelength scan. Lakukan kalibrasi dengan
menggunakan larutan Aquades minimal 2 kali menekan tombol autozerro.
39
setting nilai absorbansi = 0 setting nilai transmitansi = 100 larutan sample tidak mengabsorpsi
cahaya yang diberikan •
Menentukan panjang gelombang yang memiliki nili absorbansi maximum λ
max
.
19
1 Pertama-tama tentukan range panjang gelombang yang akan digunakan
untuk sample yang tidak berwarna, gunakan range panjang gelombang sinar UV: 180-400nm
2 Masukan sample 1 glukosa 99 mldl dalam darah ke dalam kuvet yang
kering dan bersih. 3
Lakukan scanning panjang gelombang maksimum untuk sample 1 hingga dihasilkan nilai λ
max.
4 Buatlah grafik hubungan antara nilai absorbansi sebagai fungsi panjang
gelombang 5
Tentukan panjang gelombang maksimum untuk sample yang lain glukosa 108 mldl dan 136 mldl dalam darah. Tiap sample telah melalui
pengenceran 16 kali setiap 0.05 ml
19
Buku petunjuk spektroskopi Parkin Elmer lambda 25
40
Gambar 3.9 Tahapan penelitian Proses pengambilan
sampel darah Uji kadar glukosa
sampel darah
sample darah dengan kadar
glukosa 99 mgdl
sample darah dengan kadar
glukosa 108 mgdl
sample darah dengan kadar
glukosa 136 mgdl
Uji sampel darah dengan alat
Spektroskopi FTIR
Spektroskopi UV-Visible
41
Gambar 3.10 Flowcart pengambilan data Spektroskopi UV-Vis Spektroskopi
UV-Visible
Sample darah siap uji ?
Tidak Ya
Lakukan pengenceran
terhadap sampel darah
Masukkan sample siap uji kedalam
spektroskopi UV-Vis
Proses Scaning
Hasil rekam grafik spectra pada layar
komputer
Hasil spectra bagus ?
Ya
FINISH Tidak
Start
42
Gambar 3.11 Flowcart pengambilan data Spektroskopi FTIR Spektroskopi
FTIR
Sample darah siap uji ?
Tidak Ya
Lakukan proses Freeze drying pada
tiap sampel darah Masukkan sample darah
siap uji darah+serbuk Kbr tercampur
homogen kedalam pencetak cakram
Proses Scaning Cakram sampel uji
tercipta
Masukkan cakram ke dalam Kbr Disc holder
Ya
FINISH Buat cakram Kbr dengan
cara gerus sampel darah kering dengan serbuk Kbr
Sampel darah+serbuk Kbr
sudah tercampur homogen ?
Tidak
Hasil spectra FTIR pada layar komputer
Start
43
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Spektroskopi FITR