3. Lapisi tutup botol dengan kertas.
4. Sterilisasi dengan menggunakan autoclave pada 121
o
C selama 15` 5.
Simpan pada temperature kamar.
1 X RBC Lysis
10 Cara membuat :
V1 .
N1 =
V2 .
N2 V1
. 10
= 100
ml .
1 10
V1 =
100 ml
V1 =
10 ml
1. Ambil 10 ml larutan 10 X RBC Lysis.
2. Tambahkan 90 ml dd H
2
O.
Larutan 1 X RBC Lysis 100 ml.
2. CELL LYSIS SOLUTION
Komposisi dan urut-urutan bahan kimia yang akan diproses untuk membuat larutan ini adalah sebagai berikut :
Cell Lysis Solution 2 M Tris-HCl
0,25 M EDTA pH 8,0 20 SDS
a. 2 M Tris-HCl
1 M Tris base ≈ 1 satuan berat molekul Tris gr dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 121,14 gr Tris dalam 1 liter dd H
2
O 2 M Tris base
≈ 2 x 121,14 gr Tris dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 242,28 gr Tris dalam 1 liter dd H
2
O Untuk
10 ml
≈ 101000 ml x 242,28 gr Tris ≈ 2,4228 gr Tris.
Universitas Sumatera Utara
Cara membuat
: 1.
Timbang 2,42 gr Tris. 2.
Tuang 8 ml ddH
2
O dulu nanti sisa ddH
2
O diberikan di akhir setelah penyetaraan pH.
3. Aduk campuran tadi dengan menggunakan stirrer stirrer diletakkan dekat dengan
pH-meter. 4.
Set Kalibrasi pH-meter antara 7 dan 9 5.
Celupkan elektroda pH-meter ke dalam larutan Tris yang masih di stirrer. 6.
Tekan tombol “Read” hasil pH=10,2
7. Teteskan 1 M HCl sampai pH larutan 8,0 dengan menggunakan pipet transfer Bila
perlu saat pH mendekati 8,0, ganti pipet transfer dengan pipet Eppendorf . 8.
Bila pH sudah 8,0, tuang larutan ke dalam tabung ukur 9.
Tambahkan ddH
2
O sampai skala 10 ml. 10.
Tuang ke dalam botol kaca khusus tempat larutan.
b. 0,25 M EDTA pH 8,0
1 M
EDTA ≈ 1 satuan berat molekul EDTA gr dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 292,2 gr EDTA dalam 1 liter dd H
2
O 0,25
M EDTA
≈ 0,25 x 292,2 gr EDTA dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 73,05 gr EDTA dalam 1 liter dd H
2
O Untuk 100 ml
≈ 1001000 ml x 73,05 gr EDTA ≈ 7,305 gr EDTA.
Cara membuat
: 1.
Timbang 7,30 gr EDTA. 2.
Tuang 80 ml ddH
2
O dulu nanti sisa ddH
2
O diberikan di akhir setelah penyetaraan pH.
3. Aduk campuran tadi dengan menggunakan stirrer stirrer diletakkan dekat dengan
pH-meter. 4.
Set Kalibrasi pH-meter antara 7 dan 9 5.
Celupkan elektroda pH-meter ke dalam larutan EDTA yang masih di stirrer. 11
Universitas Sumatera Utara
6. Tekan tombol “Read”
hasil pH=3,00 7.
Teteskan 1 M KOH sampai pH larutan 8,0 dengan menggunakan pipet transfer Bila perlu saat pH mendekati 8,0, ganti pipet transfer dengan pipet Eppendorf .
8. Bila pH sudah 8,0, tuang larutan ke dalam tabung ukur
9. Tambahkan ddH
2
O sampai skala 100 ml. 10.
Tuang ke dalam botol kaca khusus tempat larutan.
c. 10 SDS pH 7,2
