a. 1,45 M NH
4
Cl
1 M NH
4
Cl ≈ 1 satuan berat molekul NH
4
Cl gr dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 53,5 gr NH
4
Cl dalam 1 liter dd H
2
O 1,45
M NH
4
Cl ≈ 1,45 x 53,5 gr NH
4
Cl dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 77,575 gr NH
4
Cl dalam 1 liter dd H
2
O Untuk 100 ml
≈ 1001000 ml x 77,575 gr NH
4
Cl ≈ 7,7575 gr NH
4
Cl. Cara
membuat :
1. Timbang 7,76 gr NH
4
Cl dalam sebuah gelas ukur dengan menggunakan timbangan digital pada saat gelas ukur di atas timbangan dan zat NH
4
Cl belum dimasukkan ke dalamnya, timbangan harus dikalibrasi sampai menunjukkan angka 0,00 .
2. Tuang 100 ml ddH
2
O menggunakan tabung ukur ke dalam gelas ukur tadi. 3.
Aduk campuran tadi dengan menggunakan stirrer. 4.
Bila larutan sudah homogen, tuang ke dalam botol kaca khusus tempat larutan.
b. 100 mM KHCO
3
1 M
KHCO
3
≈ 1 satuan berat molekul KHCO
3
gr dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 100,12 gr KHCO
3
dalam 1 liter dd H
2
O 100 mM KHCO
3
≈ 0,1 M KHCO
3
0,1 M KHCO
3
≈ 0,1 x 100,12 gr KHCO
3
dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 10,012 gr KHCO
3
dalam 1 liter dd H
2
O Untuk 100 ml
≈ 1001000 ml x 10,012 gr KHCO
3
≈ 1,0012 gr KHCO
3
. Cara
membuat :
1. Timbang 1,00 gr KHCO
3
. 2.
Tuang 100 ml ddH
2
O. 3.
Aduk campuran tadi dengan menggunakan stirrer. 4.
Bila larutan sudah homogen, tuang ke dalam botol kaca khusus tempat larutan. 8
Universitas Sumatera Utara
c. 100 mM EDTA pH 8,0
1 M
EDTA ≈ 1 satuan berat molekul EDTA gr dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 292,2 gr EDTA dalam 1 liter dd H
2
O 100 mM EDTA
≈ 0,1 M EDTA 0,1 M EDTA
≈ 0,1 x 292,2 gr EDTA dalam 1 liter dd H
2
O ≈ 29,22 gr EDTA dalam 1 liter dd H
2
O Untuk 100 ml
≈ 1001000 ml x 29,22 gr EDTA ≈ 2,922 gr EDTA.
Cara membuat
: 1.
Timbang 2,92 gr EDTA. 2.
Tuang 80 ml ddH
2
O dulu nanti sisa ddH
2
O diberikan di akhir setelah penyetaraan pH.
3. Aduk campuran tadi dengan menggunakan stirrer stirrer diletakkan dekat dengan
pH-meter. 4.
Set Kalibrasi pH-meter antara 7 dan 9 Celupkan elektroda pada lar. standar pH=7
tekan tombol Cal pH=7,00;
Celupkan elektroda pada lar. Standar pH=9 tekan tombol Cal
pH=9,03 5.
Celupkan elektroda pH-meter ke dalam larutan EDTA yang masih di stirrer. 6.
Tekan tombol “Read” hasil pH=3,00
7. Teteskan 1 M KOH sampai pH larutan 8,0 dengan menggunakan pipet transfer
Bila perlu saat pH mendekati 8,0, ganti pipet transfer dengan pipet Eppendorf . 8.
Bila pH sudah 8,0, tuang larutan ke dalam tabung ukur 9.
Tambahkan ddH
2
O sampai skala 100 ml. 10.
Tuang ke dalam botol kaca khusus tempat larutan.
10 X RBC Lysis
100 ml 1,45 M NH
4
Cl + 100 ml 100 mM KHCO
3
+ 100 ml EDTA pH 8,0
1. Campurkan ke-3 larutan yang sudah dibuat tadi dalam sebuah botol larutan.
2. Tempelkan label pada botol.
9
Universitas Sumatera Utara
3. Lapisi tutup botol dengan kertas.
4. Sterilisasi dengan menggunakan autoclave pada 121
o
C selama 15` 5.
Simpan pada temperature kamar.
1 X RBC Lysis
10 Cara membuat :
V1 .
N1 =
V2 .
N2 V1
. 10
= 100
ml .
1 10
V1 =
100 ml
V1 =
10 ml
1. Ambil 10 ml larutan 10 X RBC Lysis.
2. Tambahkan 90 ml dd H
2
O.
Larutan 1 X RBC Lysis 100 ml.
2. CELL LYSIS SOLUTION
Kategori