Karakterisasi Simplisia Dan Uji Sitotoksisitas Ekstrak Bunga Tumbuhan Brokoli (Brassica oleracea L. var. botrytis L.) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST)

(1)

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI SITOTOKSISITAS

EKSTRAK BUNGA TUMBUHAN BROKOLI (Brassica

oleracea L. var. botrytis L.) DENGAN METODE

BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BST)

SKRIPSI

OLEH: SRI KURNIASIH

NIM 091524021

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

(2)

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI SITOTOKSISITAS

EKSTRAK BUNGA TUMBUHAN BROKOLI (Brassica

oleracea L. var. botrytis L.) DENGAN METODE

BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BST)

SKRIPSI

Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara

OLEH: SRI KURNIASIH

NIM 091524021

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

(3)

PENGESAHAN SKRIPSI

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI SITOTOKSISITAS EKSTRAK BUNGA TUMBUHAN BROKOLI (Brassica oleracea L. var. botrytis L.)

DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BST) OLEH:

SRI KURNIASIH NIM 091524021

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara Pada tanggal: Juli 2011

Pembimbing I, Panitia Penguji,

Dr. M. Pandapotan Nst, MPS., Apt. Dr. Marline Nainggolan, MS., Apt. NIP 194908111976031001 NIP 195709091985112001

Pembimbing II,

Dr. M. Pandapotan Nst, MPS., Apt. NIP 194908111976031001

Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt. NIP 195304031983032001

Drs. Panal Sitorus, M.Si., Apt. NIP 195310301980031002

Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt. NIP 195006121980032001

Disahkan Oleh: Dekan Fakultas Farmasi,

Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. NIP 195311281983031002

(4)

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kehadirat Allah, karena limpahan rahmat kasih dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini yang berjudul ”Karakterisasi Simplisia Dan Uji Sitotoksisitas Ekstrak Bunga Tumbuhan Brokoli (Brassica oleracea L. var. botrytis L.) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST)”. Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Terimakasih dan penghargaan yang tulus kepada Ayahanda dan Ibunda tercinta, Geger Handoko dan Parjiem, yang tiada hentinya berkorban dengan tulus ikhlas bagi kesuksesan penulis, juga kepada Adikku-adikku tersayang (Lili Handayani, Puji Lestari dan Dina Agustina) yang selalu setia memberi doa, dorongan dan semangat.

Pada kesempatan ini penulis juga mengucapkan terima kasih yang tulus dan ikhlas kepada:

1. Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi USU Medan yang telah memberikan fasilitas sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan.

2. Bapak Dr. M. Pandapotan, MPS., Apt. dan Dra. Aswita Hafni lubis, M.Si, Apt. selaku pembimbing yang telah memberikan waktu, bimbingan dan nasihat selama penelitian hingga selesainya penyusunan skripsi ini.

3. Ibu Dr. Marline Nainggolan, MS., Apt., Bapak Drs. Panal Sitotus., Apt., dan Ibu Dra. Erly Sitompul, M.Si, Apt. selaku dosen penguji yang telah

(5)

memberikan kritik, saran dan arahan kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

4. Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU Medan yang telah mendidik selama perkuliahan dan Ibu Dra. Azizah Nasution, M.Sc, Apt. selaku penasehat akademis yang telah memberikan bimbingan kepada penulis selama ini.

5. Ibu kepala Laboratorium Farmakognosi yang telah memberikan bantuan dan fasilitas selama penulis melakukan penelitian.

6. Sahabat-sahabatku Ten Tuwin, Dedek Soerya, kak Ida, Dora, Mellisa, Juwita, Agnes, Taqin, Denny yang telah memberi bantuan, dukungan dan motivasi. Rekan-rekan farmasi ekstensi stambuk 2009, senior dan junior mahasiswa fakultas farmasi serta teman-teman yang tidak dapat disebutkan satu persatu.

Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih belum sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk penyempurnaannya. Harapan saya semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan kefarmasian.

Medan, Juli 2011

Penulis

(6)

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI SITOTOKSITAS EKSTRAK BUNGA TUMBUHAN BROKOLI (Brassica oleracea L. var. botrytis L.)

DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BST) ABSTRAK

Tumbuhan brokoli (Brassica oleracea L. var. botrytis L.) suku Brassicaceae merupakan tumbuhan yang bunganya digunakan sebagai sayuran dan oleh masyarakat dikenal pula sebagai obat antikanker. Brokoli disebutkan kaya akan senyawa yang bersifat antikanker seperti indol dan glukosinolat. Bunga brokoli yang dikukus memiliki aktivitas antikanker yang lebih tinggi dibandingkan dengan bunga brokoli mentah. Tujuan penelitian ini adalah untuk memperoleh informasi mengenai karakteristik simplisia bunga brokoli dan untuk mengetahui harga LC50 dari bunga brokoli segar, bunga brokoli kukus dan simplisia. Karakterisasi simplisia bunga brokoli dilakukan dengan pemeriksaan kadar air, kadar sari yang larut dalam air, kadar sari yang larut dalam etanol, kadar abu total dan kadar abu yang tidak larut dalam asam. Ekstrak bunga brokoli diperoleh secara maserasi dengan menggunakan pelarut kloroform dan etanol. Terhadap masing-masing ekstrak diuji aktivitas sitotoksisitasnya terhadap larva

Artemia salina Leach. Data diolah menggunakan analisis regresi linear untuk

memperoleh harga LC50.

Hasil pemeriksaan makroskopik menunjukkan simplisia bunga brokoli merupakan kuncup-kuncup bunga kering, berbentuk bulat, berkeriput. Simplisia berwarna hijau kekuningan hingga hijau kecoklatan, berbau khas dan tidak berasa. Hasil pemeriksaan mikroskopik dari serbuk simplisia menunjukkan adanya epidermis, xilem dengan penebalan bentuk spiral, jaringan gabus, kristal Ca oksalat bentuk prisma, stomata tipe anisositik, rambut penutup dan serbuk sari.

Hasil karakterisasi simplisia memberikan kadar air 6,64%, kadar sari yang larut dalam air 26,65%, kadar sari larut dalam etanol 13,59%, kadar abu total 7,50%, kadar abu yang tidak larut dalam asam 0,37%.

Hasil uji sitotoksisitas dari ekstrak klorofom dan etanol dari bunga brokoli segar, bunga brokoli yang dikukus dan brokoli simplisia menunjukkan adanya aktivitas sitotoksisitas terhadap larva Artemia salina Leach dengan nilai LC50 berturut-turut 138,04 µg/ml; 93,32 µg/ml; 117,49 µg/ml; 35,48 µg/ml; 186,21 µg/ml dan 112,98 µg/ml.

Kata kunci: Brassica oleraceae L. var. botrytis L., ekstrak, karakterisasi, Artemia

(7)

SIMPLEX CHARACTERIZATION AND THE TEST OF CYTOTOXICITY EFFECT OF BROCCOLI FLOWER (Brassica oleraceae L. var. botrytis L.) EXTRACT BY USING THE BRINE SHRIMP LETHALITHY TEST (BST)

ABSTRACT

Broccoli (Brassica oleraceae L. var. botrytis L.) of the family Brassicaceae is a vegetable and its flowers are believed to have anticancer activity. Broccoli is rich in compounds such as indole and glucosinolate. Steamed broccoli flowers had a higher anticancer activity than the raw broccoli flowers. The purpose of the sudy was to obtain information about the charactheries of the broccoli flowers and to know the LC50 of fresh broccoli flowers, steamed broccoli flowers and the dried one. Characterization of simplex the broccoli flowers is includes the determination of the water content, water soluble extractive, ethanol-soluble extractive, total ash value and acid inethanol-soluble ash value. The broccoli flowers was extracted by maceration method using chloroform and ethanol as solvents. The cytotoxicity activity of each extract was tested on the Artemia salina Leach. To obtain the LC50, the datas were analyzed using linear regression analysis.

The results of macroscopic examination showed the simplex of broccoli flowers are dried flower buds, round, wrinkled. The simplex colours was brownish green, had a specific smell and no taste.

The result of microscopic examination of the simplex powder showed the pressnae of epidermis, spiral vessel, periderm, Ca oxalate prism, stomata anisositic type, hair cover and grains.

The result of simplex characterization gave the water content 6.64%, the water soluble extractive 26.65%, the ethanol-soluble extractive 13.59%, the total ash value 7.50% and the acid insoluble ash value 0.37%.

The result of the cytotoxicity activity of the chloroform and ethanol extract of fresh broccoli flowers, steamed broccoli flower and broccoli simplex showed cytotoxicity activity killed larvae of Artemia salina Leach with LC50 values were 138.04 ug/ml, 93.32 ug/ml; 117 , 49 ug/ ml, 35.48 ug/ml 186.21 ug/ml and 112.98 ug/ml consequtively.

Keywords: Brassica oleraceae L. var. botrytis L., extract, characterization,

(8)

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ... i

LEMBAR PENGESAHAN ... .. ... ii

KATA PENGANTAR ... ... iii

ABSTRAK ... v

ABSTRACT ... vi

DAFTAR ISI ... vii

DAFTAR TABEL ... viii

DAFTAR LAMPIRAN ... ix

BAB I. PENDAHULUAN ... 1

1.1 Latar Belakang ... 1

1.2 Perumusan Masalah ... 3

1.3 Hipotesis ... 3

1.4 Tujuan Penelitian ... 3

1.5 Manfaat Penelitian ... ... 4

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ... 5

2.1 Uraian Tumbuhan ... 5

2.1.1 Sistematika Tumbuhan ... 5

2.1.2 Sinonim Tumbuhan ... 5

2.1.3 Nama Daerah ... 5

2.1.4 Daerah Tumbuh ... 5

2.1.5 Morfologi Tumbuhan ... 6

2.1.6 Kandungan Kimia ... 8

(9)

2.2 Ekstraksi ... 8

2.3 Artemia salina ... 11

2.4 Uji Aktivitas Biologi ... 13

2.4.1 Brine Shrimp Lethality Test ... 13

2.4.2 Metode Potato Disk ... 14

2.4.3 Uji Terhadap Lemna minor L. ... 15

2.4.4 Uji Terhadap cell line ... 15

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ... 16

3.1 Alat-alat ... 16

3.2 Bahan-bahan ... 16

3.3 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan Tumbuhan ... 17

3.3.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan ... 17

3.3.2 Identifikasi Tumbuhan ... 17

3.3.3 Pengolahan Bahan Tumbuhan ... 17

3.4 Lokasi Penelitian ... 17

3.5 Pembuatan Larutan Pereaksi ... 18

3.5.1 Larutan Kloralhidrat 70% b/b ... 18

3.5.2 Air-kloroform ... 18

3.6 Pemeriksaan Makroskopik Bahan Tumbuhan Segar ... 18

3.6.1 Bunga Brokoli Segar ... 18

3.6.2 Bunga Brokoli yang Dikukus ... 18

3.7 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia ... 18

3.7.1 Pemeriksaan Makroskopik ... 18

3.7.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 19

3.7.3 Penetapan Kadar Air ... 19

(10)

3.7.5 Penetapan Kadar Sari yang Larut dalam Etanol.. 20

3.7.6 Penetapan Kadar Abu Total ... 21

3.7.7 Penetapan Kadar Abu yang Tidak Larut dalam Asam ... 21

3.8 Pembuatan Ekstrak ... 22

3.8.1 Bahan Tumbuhan Segar ... 22

3.8.2 Bahan Tumbuhan yang Dikukus ... 23

3.8.3 Simplisia ... 23

3.9 Uji Sitotoksisitas ... 24

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 26

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 26

4.2 Hasil Makroskopik Bahan Tumbuhan Segar ... 26

4.3 Hasil Karakterisasi Simplisia ... 26

4.4 Hasil Ekstraksi ... 28

4.5 Hasil Uji Sitotoksisitas ... 28

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 30

5.1 Kesimpulan ... 30

5.2 Saran ... 30

DAFTAR PUSTAKA ... 31

(11)

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

3.1Hasil karakterisasi simplisia ... 27 3.2Hasil ekstraksi bahan... 28 3.3Hasil Uji Sitotoksisitas ... 28

(12)

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 33

2. Gambar Bunga Brokoli ... 34

3. Gambar Mikroskopik Serbuk Simplisia Bunga Brokoli ... 37

4. Perhitungan Pemeriksaan Karakteristik Serbuk Simplisia ... 38

5. Bagan Kerja ... 43

6. Data Persen Kematian Nauplii ... 48

(13)

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI SITOTOKSITAS EKSTRAK BUNGA TUMBUHAN BROKOLI (Brassica oleracea L. var. botrytis L.)

DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BST) ABSTRAK

Artemia salina Leach. Data diolah menggunakan analisis regresi linear untuk

memperoleh harga LC50.

Kata kunci: Brassica oleraceae L. var. botrytis L., ekstrak, karakterisasi, Artemia

(14)

SIMPLEX CHARACTERIZATION AND THE TEST OF CYTOTOXICITY EFFECT OF BROCCOLI FLOWER (Brassica oleraceae L. var. botrytis L.) EXTRACT BY USING THE BRINE SHRIMP LETHALITHY TEST (BST)

ABSTRACT

The results of macroscopic examination showed the simplex of broccoli flowers are dried flower buds, round, wrinkled. The simplex colours was brownish green, had a specific smell and no taste.

The result of microscopic examination of the simplex powder showed the pressnae of epidermis, spiral vessel, periderm, Ca oxalate prism, stomata anisositic type, hair cover and grains.

Keywords: Brassica oleraceae L. var. botrytis L., extract, characterization,

(15)

BAB I PENDAHULUAN

1.1Latar Belakang

Di dunia ini banyak terdapat tumbuhan yang bermanfaat sebagai obat. Indonesia merupakan salah satu negara yang memiliki beraneka ragam tumbuhan, yang sebagian besar dari tumbuhan tersebut belum dimanfaatkan secara maksimal sebagai tanaman obat. Sayur-sayuran juga memegang peranan penting dalam menunjang kesehatan dan kebugaran tubuh, sebab dalam sayur-sayuran terkandung berbagai macam vitamin, mineral, serat pangan dan antioksidan. Salah satu contoh sayuran yang memiliki banyak manfaat adalah brokoli.

Tumbuhan brokoli (Brassica oleracea L. var. botrytis L.) suku Brassicaceae merupakan tumbuhan yang bunganya digunakan sebagai sayuran yang sering dikonsumsi oleh masyarakat dengan kandungan nutrisi protein, lemak, karbohidrat, vitamin C, serat, kalium, kalsium, dan karoten (Wibowo, 2010).

Dari penelitian yang telah dilakukan sebelumnya diperoleh hasil bahwa brokoli memiliki aktivitas antioksidan sedang (nilai IC50 124,44 ppm pada ekstrak etanol). Hasil skrining fitokomia yang dilakukan menunjukkan bahwa brokoli mengandung senyawa alkaloid, glikosida, saponin, flavonoid dan steroid/triterpenoid (Marliani, 2010). Flavonoid merupakan senyawa yang banyak terkandung di dalam brokoli yang dipercaya berfungsi sebagai antioksidan. Mengkonsumsi makanan yang mengandung antioksidan tinggi dapat mengurangi risiko terkena kanker. Aktivitas antioksidan selain dapat mencegah proses

(16)

autooksidasi yang menghasilkan radikal bebas juga dapat menekan proliferasi (perbanyakan) sel kanker (Gusyana, 2010).

Brokoli disebut kaya akan senyawa yang bersifat antikanker seperti indol, glukosinolat dan ditioltion. Selain itu sayuran ini juga mengandung karotenoid (yaitu senyawa provitamin A) yang turut berkhasiat untuk melawan kanker. Hal tersebut kemungkinan karena adanya kandungan klorofil sehingga dengan demikian brokoli sangat potensial untuk obat kanker (Wirakusumah, 2000). Disebutkan pula bunga brokoli yang dikukus memiliki aktivitas antikanker yang lebih tinggi dibandingkan dengan bunga brokoli mentah (Anonima, 2011).

Dalam pencarian obat-obatan untuk kanker perlu dilakukan suatu uji pendahuluan. Salah satu uji pendahuluan yang mudah dilakukan adalah metode

Brine shrimp Lethality Test (BST) menggunakan larva (nauplii) udang laut Artemia salina Leach. Metode ini sangat mudah dilakukan, cepat, murah dan

hasilnya dapat dipercaya (McLaughlin and Lingling, 1998).

Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti tertarik untuk melakukan karakterisasi simplisia dan melakukan uji pendahuluan sitotoksisitas terhadap ekstrak bunga brokoli menggunakan metode BST, dimana ekstrak diperoleh dengan cara maserasi menggunakan pelarut kloroform dan etanol 96% dari bunga brokoli segar, bunga brokoli kukus dan simplisia bunga brokoli. Perlakuan tersebut didasarkan pada cara masyarakat dalam mengkonsumsi brokoli dan pembuatan simplisia bertujuan untuk persiapan bila brokoli akan dibuat dalam bentuk sediaan obat. Pemilihan pelarut bertujuan untuk mendapatkan distribusi senyawa berdasarkan tingkat kepolaran pelarut yang digunakan sehingga dapat diketahui pada ekstrak mana yang memiliki nilai LC50 lebih tinggi.

(17)

1.2 Perumusan Masalah

1. Monografi bunga brokoli belum terdapat pada Materia Medika Indonesia sehingga belum diketahui karakteristiknya.

2. Dari ekstrak yang diperoleh, ekstrak manakah yang memiliki sitotoksisitas lebih tinggi di antara ekstrak kloroform dan ekstrak etanol 96% dari bunga brokoli segar, bunga brokoli kukus dan simplisia bunga brokoli?

1.3 Hipotesis

1. Karakteristik simplisia bunga brokoli dapat ditentukan dengan menggunakan prosedur yang terdapat di Materia Medika Indonesia.

2. Ekstrak dari bunga brokoli kukus memiliki aktivitas sitotoksisitas yang lebih tinggi bila dibandingkan dengan ekstrak dari bunga brokoli segar dan simplisia bunga brokoli

1.4Tujuan Penelitian

1. Untuk memperoleh informasi mengenai karakteristik simplisia dari bunga brokoli yang dapat digunakan sebagai acuan untuk standarisasi simplisia. 2. Untuk mengetahui perbedaan sitotoksisitas dari ekstrak kloroform dan etanol

96% dari bunga brokoli baik yang dikukus, segar maupun simplisia terhadap larva Artemia salina Leach.

(18)

1.5Manfaat Penelitian

1. Menambah informasi tentang karakteristik simplisia dari bunga brokoli

2. Memberi informasi tentang adanya perbedaan aktivitas sitotoksisitas dari ekstrak bunga brokoli yang segar, dikukus dan simplisia.

(19)

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Tumbuhan

2.1.1 Sistematika Tumbuhan Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta Sub divisi : Angiospermae Kelas : Dicotyledoneae

Ordo

Suku : Brassicaceae Genus : Brassica

Spesies : Brassica oleracea L. var. botrytis L. (Cahyono, 2001). 2.1.2 Sinonim Tumbuhan

Brassica oleracea var. botrytis subvar. Cymosa, Brassica botrytis Miller, Brassica oleracea var botrytis cauliflora, Brassica oleracea L. var. italica Plenck

2.1.3 Nama Daerah

Indonesia : Brokoli (Dalimartha, 1999). 2.1.4 Daerah Tumbuh

Brokoli (Brassica oleracea L. var. botrytis L.) merupakan tanaman sayuran subtropik yang banyak dibudidayakan di Eropa dan Asia. Tanaman brokoli termasuk tanaman musim dingin, sehingga cocok ditanam pada daerah pegunungan (dataran tinggi) yang beriklim sejuk. Di Indonesia, tanaman brokoli sebagai sayuran dibudidayakan secara luas pada daerah tinggi seperti Bukit Tinggi

(20)

(Sumatera Barat), Karo (Sumatera Utara), Pangalengan (Jawa Barat) dan Sumber Brantas (Jawa Timur). Di Indonesia sayuran brokoli telah dikenal sejak abad ke-15, yaitu mulai penjajahan Belanda, sehingga lebih dikenal sebagai sayuran Eropa. Melalui kultivasi yang dilakukan telah dihasilkan jenis brokoli yang beragam, seperti kaelan (kale), brokoli (cabbage), brokoli umbi (kohlrabi), brokoli bunga (cauliflower), brokoli (broccoli) dan brokoli tunas. Meskipun kelihatannya sangat berbeda namun merupakan spesies yang sama (Muslim, 2010).

Pada mulanya bunga brokoli dikenal sebagai sayuran daerah beriklim dingin (sub tropis), sehingga di Indonesia cocok ditanam di dataran tinggi antara 1.000 – 2.000 meter dari atas permukaan laut (dpl) yang suhu udaranya dingin dan lembab. Kisaran temperatur optimum untuk pertumbuhan produksi sayuran ini antara 15,5 - 18°C dan maksimum 24°C. Setelah beberapa negara di kawasan Asia berhasil menciptakan varietas-varietas unggul baru yang tahan terhadap temperatur tinggi (panas), maka brokoli dapat ditanam di dataran menengah sampai tinggi (Rukmana, 1994). Tanaman brokoli termasuk kedalam tanaman sayuran semusim atau berumur pendek. Tanaman brokoli hanya dapat berproduksi satu kali dan setelah itu akan mati (Cahyono, B., 2001).

2.1.5 Morfologi Tumbuhan

Brokoli memiliki tangkai daun agak panjang dan helai daun berlekuk-lekuk panjang. Tangkai bunga brokoli lebih panjang dan lebih besar dibandingkan dengan kubis bunga. Massa bunga brokoli tersusun secara kompak membentuk bulatan berwarna hijau tua, hijau kebiru-biruan, kuning atau putih dengan diameter antara 15-20 cm atau lebih (Rukmana, 1994; Cahyono, 2001).

(21)

Bentuk tanaman ini selintas mirip dengan kubis bunga. Hanya saja kepala bunganya tersusun atas kuntum-kuntum bunga dan tangkainya berdaging tebal. Tergantung varietasnya, warna kepala bunga ada empat macam yaitu hijau, ungu, putih dan hijau muda. Pada ketiak daun muncul juga kepala bunga yang lebih kecil dan akan keluar bila kepala bunga utama telah dipangkas atau dipanen. Kepala bunga utama dan samping serta tangkai berdaging tebal merupakan bagian-bagian yang biasa digunakan atau dimakan.

Pada kondisi lingkungan yang sesuai, massa bunga brokoli dapat tumbuh memanjang menjadi tangkai bunga yang penuh dengan kuntum bunga, tiap bunga terdiri atas 4 helai kelopak bunga (calyx), 4 helai daun mahkota bunga (corolla), 6 helai benang sari yang komposisinya 4 memanjang dan 2 pendek. Bakal buah terdiri atas 2 ruang dan setiap ruang berisi bakal biji (Rukmana, 1994; Cahyono, 2001).

Biji brokoli memiliki bentuk dan warna yang hampir sama, yaitu bulat kecil berwarna coklat sampai kehitaman. Biji tersebut dihasilkan oleh penyerbukan sendiri ataupun silang dengan bantuan sendiri ataupun serangga. Buah yang terbentuk seperti polong-polongan tetapi ukurannya kecil, ramping dan panjangnya sekitar 3-5 mm (Rukmana, 1994).

Sistem perakaran relatif dangkal, dapat menembus kedalaman 60-70 cm. Akar yang baru tumbuh berukuran 0,5 mm, tetapi setelah berumur 1-2 bulan sistem perakaran menyebar ke samping pada kedalaman antara 20-30 cm (Rukmana, 1994). Dengan perakaran yang dangkal tersebut, tanaman brokoli dapat tumbuh dengan baik apabila ditanam pada tanah yang gembur dan berpori (Cahyono, 2001).

(22)

2.1.6 Kandungan Kimia

Brokoli mengandung air, protein, lemak, karbohidrat, serat, kalsium, zat besi, vitamin (A, C, E, tiamin, riboflavin, nikotinamid), beta karoten dan glutation. Selain itu brokoli mengandung senyawa sianohidroksibutena (CHB), sulforafan dan iberin yang merangsang pembentukan glutation (Dalimartha, 1999). Selain itu dari proses biosintesis di dalam brokoli juga dihasilkan 3,3-diindolilmetana (DIM) (Anonima, 2011).

2.1.7 Manfaat

Brokoli berkhasiat mempercepat penyembuhan penyakit serta mencegah dan menghambat perkembangan sel-sel kanker di dalam tubuh. Terutama penyakit kanker yang berkaitan dengan hormon, seperti kanker payudara pada wanita dan kanker prostat yang mengancam pria.

Manfaat lainnya brokoli mampu mencegah serangan stroke. Tanaman ini sangat baik dikonsumsi penderita kencing manis. Kandungan kromium dan seratnya dapat mengatur kadar gula darah. Brokoli memperkuat sel-sel tulang sehingga dapat mencegah penyakit pengeroposan tulang (osteoporosis) di usia tua (Dalimartha, 1999). Brokoli juga dapat mencegah migrain, penyakit maag dan dapat meningkatkan kekuatan otak. Selain itu dapat juga digunakan sebagai antibiotik karena kandungan sulforafannya bisa membunuh bakteri yang kebal antibiotik (Anonima, 2011).

2.2 Ekstraksi

Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan kandungan senyawa kimia dari jaringan tumbuhan maupun hewan. Sebelum ekstraksi dilakukan biasanya

(23)

bahan-bahan dikeringkan terlebih dahulu kemudian dihaluskan pada derajat kehalusan tertentu (Harborne, 1987).

Menurut Ditjen POM (2000), beberapa metode ekstraksi yang sering digunakan dalam berbagai penelitian antara lain yaitu:

A. Cara dingin 1. Maserasi

Maserasi adalah proses penyarian simplisia dengan cara perendaman menggunakan pelarut dengan sesekali pengadukan pada temperatur kamar. Maserasi yang dilakukan pengadukan secara terus-menerus disebut maserasi kinetik sedangkan yang dilakukan pengulangan panambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan terhadap maserat pertama dan seterusnya disebut remaserasi. Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari dan tidak mengandung zat yang mudah mengembang dalam cairan penyari.

2. Perkolasi

Perkolasi adalah proses penyarian simplisia dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahap pengembangan bahan, tahap perendaman antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) terus-menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan. B. Cara panas

1. Refluks

Refluks adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan alat pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang

(24)

relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga bahan dapat terekstraksi sempurna.

2. Digesti

Digesti adalah proses penyarian dengan pengadukan kontinu pada temperatur lebih tinggi daripada temperatur ruangan, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50°C.

3. Sokletasi

Sokletasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut yang selalu baru, dilakukan dengan menggunakan alat soklet sehingga menjadi ekstraksi kontinu dengan pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik. 4. Infundasi

Infundasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada temperatur 90°C selama 15 menit. Infundasi adalah proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari kandungan zat aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Penyarian dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang. Oleh karena itu sari yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam.

5. Dekoktasi

Dekoktasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada temperatur 90°C selama 30 menit.

(25)

2.3 Artemia salina

Artemia merupakan zooplankton yang diklasifikasikan ke dalam filum

Arthropoda dan kelas Crustaceae. Secara lengkap sistematika artemia dapat dijelaskan sebagai berikut:

Filum : Arthropoda Kelas : Crustaceae Subkelas : Branchiophoda Ordo : Anostraca Famili : Artemiidae Genus : Artemia

Spesies : Artemia salina Leach

Artemia merupakan jenis larva udang yang hidup dalam air yang berkadar

garam tinggi. Artemia adalah spesies yang sangat tua yang tidak mengalami perubahan sejak 100 juta tahun lalu. Artemia ini sangat populer di Amerika Serikat, Inggris dan negara-negara lain yang biasanya dijadikan hewan peliharaan untuk anak-anak dan didistribusikan dalam bentuk siste yang kering (Anonimb, 2011).

Pada kondisi alamiah, Artemia hidup di danau–danau dan perairan bersalinitas tinggi. Oleh karena itu, Artemia disebut juga udang renik asin (brine

shrimp). Secara fisik, Artemia tidak mempunyai pertahanan tubuh, oleh karena itu

kemampuan hidup di danau dengan salinitas tinggi merupakan sistem pertahanan alamiah Artemia terhadap musuh-musuh pemangsanya. Artemia dapat tumbuh baik pada temperatur 25-30 oC.

(26)

Telur Artemia ada dua jenis yaitu telur berkulit tipis, dimana jenis telur ini akan segera menetas, dan telur yang berkulit tebal (siste), dimana jenis telur ini bisa tetap bertahan dalam keadaan kering. Siste ini bisa disimpan selama beberapa tahun dan akan menetas ketika mereka ditempatkan dalam air. Telur yang tebal akan diproduksi ketika tubuh Artemia kekurangan air dan konsentrasi garam air laut meningkat (Anonimb, 2011).

Apabila telur Artemia (udang laut) yang kering direndam dalam air laut, akan menetas dalam waktu 24-36 jam. Dari dalam cangkang keluar larva yang disebut dengan istilah nauplii. Dalam perkembangan selanjutnya, nauplii akan mengalami 15 kali perubahan bentuk (metamorfosis). Setiap kali mengalami perubahan bentuk merupakan satu tingkatan. Tahapan perkembangan pertama disebut instar I, bentuk lonjong dengan panjang sekitar 0,4 mm dan beratnya 15 mikrogram. Warnanya kemerah-merahan karena masih banyak mengandung cadangan makanan. Oleh karena itu masih belum memerlukan makanan.

Setelah 24 jam menetas, nauplii akan berubah menjadi instar II. Pada tingkat ini nauplii mulai mempunyai mulut, saluran pencernaan dan dubur. Oleh karena itu mereka mulai mencari makanan dan bersamaan dengan itu cadangan makanannya pun mulai habis. Artemia mempunyai cara makan dengan jalan menyaring makanannya atau filter feeder. Selama perubahan bentuk terjadi,

nauplii akan mengalami perubahan mata majemuk, antena dan kaki. Setelah

menjadi instar XV, kakinya sudah lengkap 11 pasang maka nauplii telah berubah menjadi nauplii Artemia dewasa. Proses ini berlangsung antara 1-3 minggu.

(27)

dewasa dapat hidup sampai 6 bulan dan bertelur 4-5 kali. Setiap kali bertelur dapat menghasilkan 50-300 butir telur (Mudjiman, 1989).

2.4 Uji Aktivitas Biologis

Dewasa ini penelitian terhadap senyawa aktif dari bahan alam sangat digalakkan. Tetapi banyak bahan-bahan obat alami yang telah diisolasi, dikarakterisasi dan dipublikasikan tanpa dilanjutkan dengan uji aktivitas biologi. Aktivitas biologi tumbuhan tersebut tidak diketahui hingga bertahun-tahun. Hal ini disebabkan karena pencarian untuk senyawa yang memiliki aktivitas farmakologi sering menggunakan uji aktivitas dengan biaya yang mahal. Hambatan biaya ini mempengaruhi kegiatan farmakologis. Oleh karena itu dibutuhkan suatu uji aktivitas yang secara umum sederhana, mudah dan murah namun dapat dipercaya dan dapat mendeteksi adanya senyawa yang mempunyai aktivitas biologi secara luas yang terdapat pada ekstrak, fraksi dan isolat. Beberapa uji pendahuluan yang memenuhi syarat-syarat di atas antara lain: Metode Potato Disk, Brine Shrimp Lethality Test (BST) dan Uji terhadap Lemna

minor L (McLaughlin and Lingling, 1998).

2.4.1 Brine Shrimp Lethality Test

Senyawa bioaktif hampir selalu toksik pada dosis tinggi. Oleh karena itu kematian hewan percobaan pada pengujian suatu ekstrak dapat digunakan sebagai skrining awal terhadap ekstrak tumbuhan yang mempunyai bioaktivitas dan juga untuk mengetahui komponen zat aktifnya.

Salah satu organisme yang dapat digunakan untuk pengujian tersebut adalah udang laut (brine shrimp). Brine shrimp test sudah digunakan dalam

(28)

berbagai pengujian yaitu untuk menganalisa residu pestisida, mikotoksin, polutan pada air sungai, anastetik, toksin dinoflagelata senyawa yang berupa morfin, toksisitas pada dispersan minyak. Dalam fraksinasi yang diarahkan dengan bioassay, metode brine shrimp telah digunakan untuk memonitor fraksi aktif mikotoksin dan antibiotik pada ekstrak jamur (Meyer et al, 1982).

Artemia salina Leach adalah sejenis udang air asin. Telurnya merupakan

makanan ikan tropis dan telur tersebut dapat dijumpai di toko-toko yang menjual ikan hias tropis dengan nama brine shrimp eggs. Telur ini dapat bertahan selama bertahun-tahun dalam keadaan kering. Setelah ditempatkan dalam larutan air laut, telur-telur akan menetas dalam menetas dalam waktu 48 jam dan menghasilkan sejumlah nauplii. Nauplii Artemia salina Leach ini dapat dipakai sebagai hewan percobaan untuk mendeteksi senyawa-senyawa yang memiliki aktivitas biologi (McLaughlin and Lingling, 1998).

2.4.2 Metode Potato Disk (menghambat tumor crown gall)

Crown gall adalah penyakit tumor pada tumbuhan yang ditimbulkan oleh

strain yang spesifik dari bakteri gram negatif Agrobacterium tumefaciens. Terdapat kesamaan antara mekanisme terjadinya tumor pada tumbuhan dan pada hewan, senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan tumor pada tumbuhan juga dapat berfungsi sebagai antitumor pada hewan. Uji ini merupakan uji pendahuluan yang sederhana untuk menemukan senyawa antikanker dari bahan alami. Penghambatan pertumbuhan crown gall tumor pada potato disk oleh ekstrak alami, menunjukkan bahwa ekstrak bahan alami tersebut memiliki aktivitas biologi (Mclaughlin and Lingling , 1998).

(29)

2.4.3 Uji Terhadap Lemna minor L.

Lemna minor L. adalah tumbuhan monokotil yang hidup di daerah

perairan. Pada kondisi normal, kondisi ini secara langsung menghasilkan anak daun. Jika ekstrak bahan alami dapat menghambat pertumbuhan dari anak daun tumbuhan Lemna minor L., maka ekstrak bahan alami tersebut dianggap juga dapat berkhasiat sebagai antitumor (McLaughlin and Lingling, 1998).

2.4.4 Uji Terhadap cell line

Bahan alami yang telah dinyatakan aktif pada uji pendahuluan, selanjutnya dilakukan uji pada tahap berikutnya yaitu uji cell line. Uji ini menggunakan sel-sel kanker secara in vitro, zat-zat antikanker diuji langsung terhadap sel kanker. Contoh-contoh cell line yang banyak digunakan dalam pengujian zat-zat antikanker antara lain L-1210 (leukimia pada tikus), S-256 (sarcoma pada manusia) (McLaughlin and Lingling, 1998).

(30)

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

Metode yang digunakan adalah metode eksperimental meliputi pengumpulan dan pengolahan bahan, pemeriksaan karakteristik simplisia, pembuatan ekstrak dan uji sitotoksisitas ekstrak bunga brokoli menggunakan larva

Artemia salina Leach.

3.1 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas laboratorium, kertas saring, aluminium foil, kaca penutup, kaca objek, vial, bejana penetasan telur Artemia salina Leach, lampu 18 watt (Hannochs), cawan berdasar rata, botol bersumbat, krusen tang, seperangkat alat penetapan kadar air, desikator, mikroskop (Olympus), oven listrik (Stork), penguap vakum putar (Heidolph VV 2000), neraca analitik (Vibra AJ), dandang, freeze dryer, hot plate dan penangas air.

3.2 Bahan-bahan

Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah bunga brokoli, telur Artemia salina Leach, garam laut, ragi, aqua bidestilata, akuades, Na-CMC.

Bahan-bahan kimia yang digunakan yang berkualitas pro analisa produksi E-Merck yaitu kloroform, toluen dan etanol 96%. Bahan kimia berkualitas teknis yaitu etanol 96%.

(31)

3.3 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan Tumbuhan 3.3.1 Pengumpulan bahan tumbuhan

Pengumpulan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif (sengaja) yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan yang digunakan adalah bunga brokoli segar yang diambil dari pasar Sambu Jl. Sutomo, Medan.

3.3.2 Identifikasi tumbuhan

Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI). Hasil identifikasi dapat dilihat di lampiran 1 halaman 33.

3.3.3 Pengolahan bahan tumbuhan

Bahan tumbuhan yang digunakan adalah bunga brokoli sebanyak 8 kg. Bunga brokoli dibersihkan dari bagian yang tidak diinginkan, lalu dicuci di bawah air mengalir hingga bersih, ditiriskan kemudian ditimbang beratnya. Setelah itu bunga brokoli dipotong-potong bagian kuncup bunganya. Pada perlakuan yang dikukus, bunga brokoli dikukus selama 5 menit dan untuk pembuatan simplisia bunga brokoli dikeringkan di lemari pengering pada suhu ±40 0C hingga kering, yaitu jika simplisia tersebut diremas akan hancur,. Setelah kering, ditimbang beratnya kemudian diblender sampai menjadi serbuk.

3.4 Lokasi Penelitian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan.

(32)

3.5 Pembuatan Larutan Pereaksi 3.5.1 Larutan Kloralhidrat 70% b/b

Sebanyak 50 gram kloralhidrat ditimbang dan dilarutkan dalam 20 ml air suling (Ditjen POM, 1995).

3.5.2 Air-Kloroform

Sebanyak 2,5 ml kloroform dikocok dengan air suling, ditambahkan air suling hingga 1000 ml (Ditjen POM, 1995).

3.6Pemeriksaan Makroskopik Bahan Tumbuhan Segar 3.6.1 Bunga brokoli segar

Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, warna, bau dan rasa bunga brokoli.

3.6.2 Bunga brokoli yang dikukus

Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, warna, bau dan rasa bunga brokoli.

3.7 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik dan mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari yang larut dalam air, penetapan kadar sari yang larut dalam etanol, penetapan kadar abu total dan penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam.

3.7.1Pemeriksaan makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, warna, bau dan rasa simplisia bunga brokoli.

(33)

3.7.2 Pemeriksaan mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia dengan cara menaburkan serbuk simplisia di atas kaca objek yang telah ditetesi dengan kloralhidrat kemudian ditutup dengan kaca penutup, setelah itu dilihat di bawah mikroskop. Sebagai pembanding, untuk melihat susunan anatomis maka diperiksa juga penampang melintang bahan segar. Hasil pemeriksaan mikroskopik dapat dilihat pada lampiran 3 halaman 37.

3.7.3 Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluen) (WHO, 1998).

Cara kerja:

1. Penjenuhan toluen

Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu alas bulat, didestilasi selama 2 jam. Kemudian toluen didinginkan selama 30 menit dan volume air pada tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. 2. Penetapan kadar air simplisia

Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama dimasukkan ke dalam labu yang berisi toluen tersebut, lalu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetesan perdetik, sampai sebagian air terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan hingga 4 tetes perdetik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan dingin sampai suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah

(34)

sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Perhitungan kadar air dapat dihitung dengan rumus:

% kadar air = 100%

(g) sampel Berat

(ml) air Volume

Perhitungan penetapan kadar air dapat dilihat pada lampiran 4 halaman 38. 3.7.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air

Sebanyak 5 gram serbuk simplisia yang telah dikeringkan di udara dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml air-kloroform dalam labu bersumbat sambil berkali-kali dikocok selama 6 jam pertama kemudian dibiarkan selama 18 jam lalu disaring. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan penguap berdasar rata yang telah ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105 0C sampai bobot tetap. Kadar sari larut dalam air dihitung dengan persen terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1995).

Perhitungan kadar sari yang larut dalam air dapat dihitung dengan rumus:

% Kadar Sari Larut Dalam Air =

20 100 simplisia berat

sari berat

× x 100%

Perhitungan kadar sari yang larut dalam air dapat dilihat pada lampiran 4 halaman 39. 3.7.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol

Sebanyak 5 gram serbuk simplisia yang telah dikeringkan di udara dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol 96%, sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap berdasar rata yang telah ditara dan sisanya dipanaskan pada suhu

(35)

105 0C sampai bobot tetap. Kadar sari larut dalam etanol dihitung dalam persen terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1995).

Perhitungan kadar sari yang larut dalam etanol dapat dihitung dengan rumus:

% Kadar Sari Larut Dalam Etanol =

20 100 simplisia berat

sari berat

× x 100%

Perhitungan kadar sari yang larut dalam etanol dapat dilihat pada lampiran 4 halaman 40.

3.7.6 Penetapan kadar abu total

Sebanyak 2 g serbuk simplisia yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan ke dalam cawan porselen yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan pada suhu 500–600 °C selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1995).

Perhitungan kadar abu total dapat dihitung dengan rumus:

% Kadar Abu Total =

20 100 simplisia berat

abu berat

× x 100%

Perhitungan kadar abu total dapat dilihat pada lampiran 4 halaman 41. 3.7.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam

Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu total dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring dipijarkan sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1995).

(36)

Perhitungan kadar abu yang tidak larut asam dapat dihitung dengan rumus:

% Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam =

20 100 simplisia berat

abu berat

× x 100%

Perhitungan kadar abu yang tidak larut dalam asam dapat dilihat pada lampiran 4 halaman 42.

3.8 Pembuatan Ekstrak

3.8.1 Pembuatan ekstrak dari bahan tumbuhan segar

Sebanyak 100 g bahan tumbuhan segar yang telah dipotong-potong, dihaluskan dalam lumpang. Kemudian dimasukkan ke dalam wadah tertutup rapat, lalu dimaserasi dengan 750 ml pelarut kloroform selama 5 hari terlindung dari cahaya matahari sambil sering diaduk, lalu diserkai, diperas dengan kain flanel. Lalu ampas ditambahkan cairan penyari secukupnya sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 1000 ml, kemudian didiamkan selama 2 hari dan dienap tuang. Maserat diuapkan dengan bantuan alat penguap rotary evaporator pada temperatur tidak lebih dari 40 0C dan di freeze dryer sampai diperoleh ekstrak kental (Ditjen POM, 1979). Selanjutnya ampas dikeluarkan dari wadah maserasi dan dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Maserasi dengan penyari etanol dilakukan dengan cara yang sama. Bagan pembuatan ekstrak dapat dilihat pada lampiran 5 halaman 44.

3.8.2 Pembuatan ekstrak dari bahan tumbuhan yang dikukus

Sebanyak 100 g bahan tumbuhan segar yang telah dipotong-potong, dikukus selama 5 menit, lalu diangkat dan ditiriskan. Selanjutnya dihaluskan dalam lumpang. Kemudian dimasukkan ke dalam wadah tertutup rapat, lalu

(37)

matahari sambil sering diaduk, lalu diserkai, diperas dengan kain flanel. Lalu ampas ditambahkan cairan penyari secukupnya sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 1000 ml, kemudian didiamkan selama 2 hari dan dienap tuang. Maserat diuapkan dengan bantuan alat penguap rotary evaporator pada temperatur tidak lebih dari 40 0C dan difreeze dryer sampai diperoleh ekstrak kental (Ditjen POM, 1979). Selanjutnya ampas dikeluarkan dari wadah maserasi dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Maserasi dengan penyari etanol dilakukan dengan cara yang sama. Bagan pembuatan ekstrak dapat dilihat pada lampiran 5 halaman 45. 3.8.3 Pembuatan ekstrak dari simplisia

Sebanyak 100 gram simplisia yang telah diserbukkan dimasukkan ke dalam wadah tertutup, lalu dimaserasi dengan 750 ml pelarut kloroform selama 5 hari terlindung dari cahaya matahari sambil sering diaduk, lalu diserkai, diperas dengan kain flanel. Lalu ampas ditambahkan cairan penyari secukupnya sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 1000 ml, kemudian didiamkan selama 2 hari dan dienap tuang. Maserat diuapkan dengan bantuan alat penguap rotary evaporator pada temperatur tidak lebih dari 40 0C dan difreeze dryer sampai diperoleh ekstrak kental (Ditjen POM, 1979). Selanjutnya ampas dikeluarkan dari wadah maserasi dikeringkan dengan cara diangin-anginkan selama 1 jam. Maserasi dengan penyari etanol dilakukan dengan cara yang sama. Bagan pembuatan ekstrak dapat dilihat pada lampiran 5 halaman 46.

(38)

3.9 Uji Sitotoksisitas

Metode ini dilakukan terhadap ekstrak kloroform dan ekstrak etanol dari bunga brokoli segar, bunga brokoli kukus dan simplisia menggunakan larva

Artemia salina Leach, yaitu sebagai berikut:

Disiapkan air laut buatan dengan melarutkan 38 gram garam laut dengan air dua kali penyulingan dicukupkan hingga 1 liter, kemudian disaring. Bejana penetasan disekat menjadi dua bagian, yaitu bagian yang besar dan bagian yang kecil, lalu diberi lubang pada sekatnya. Setelah air laut buatan dimasukkan ke dalam bejana, telur Artemia salina Leach ditaburkan ke dalam bagian yang kecil kemudian bagian atasnya ditutup dengan aluminium foil sedangkan bagian yang besar dibiarkan terbuka menghadap lampu. Setelah 48 jam, telur akan menetas menjadi larva dan siap digunakan untuk hewan uji. Disiapkan larutan uji yang terdiri dari ekstrak kloroform dan ekstrak etanol dengan konsentrasi: 1000, 100 dan 10 bpj, disiapkan 3 vial untuk masing-masing konsentrasi larutan uji sehingga semuanya menjadi 9 vial dan 1 vial untuk kontrol. Larutan induk I dibuat dengan menimbang 50 mg ekstrak lalu dilarutkan dengan pelarut yang sesuai sampai 5 ml sehingga diperoleh konsentrasi 10.000 bpj. Dari larutan induk I dipipet 0,5 ml lalu diencerkan sampai 5 ml sehingga diperoleh larutan induk II dengan konsentrasi 1000 bpj. Dari larutan induk II dipipet 0,5 ml lalu diencerkan sehingga diperoleh konsentrasi 100 bpj. Dari konsentrasi 100 bpj dipipet 0,5 ml lalu diencerkan sampai 5 ml sehingga diperoleh konsentrasi 10 bpj. Dimasukkan masing-masing larutan uji ke dalam vial, lalu pelarutnya dibiarkan menguap seluruhnya. Pada ekstrak kloroform dan kontrolnya ditambahkan 1 ml suspensi Na-CMC. Dimasukkan kira-kira 3 ml air laut buatan ke dalam masing-masing vial.

(39)

Dimasukkan 10 ekor larva Artemia salina Leach, lalu ditambahkan air laut buatan sampai 5 ml. Ditambahkan 1 tetes suspensi ragi sebagai makanannya kemudian semua vial diletakkan di bawah cahaya lampu. Setelah 24 jam dihitung jumlah larva yang mati (Meyer, et al, 1982). Data dianalisis dengan Analisa regresi linear untuk menentukan LC50. Bagan uji sitotoksisitas dapat dilihat pada lampiran 5 halaman 47 dan perhitungan nilai LC50 dapat dilihat pada lampiran 7 halaman 50.

(40)

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan

Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor menunjukkan bahwa bahan termasuk suku Brassicaceae, spesies

Brassica oleracea L. var. botrytis L.

4.2 Hasil Makroskopik Bahan Tumbuhan Segar

Hasil pemeriksaan makroskopik dari bunga brokoli segar berbentuk bulat, berwarna hijau, berbau khas dan tidak berasa. Hasil pemeriksaan makroskopik bunga brokoli yang dikukus berbentuk bulat, berwarna lebih hijau dari bunga segar, berbau khas dan rasanya agak manis.

4.3 Hasil Karakterisasi Simplisia

Hasil makroskopik simplisia bunga brokoli menunjukkan simplisia bunga brokoli merupakan kuncup-kuncup bunga kering, berbentuk bulat, berkeriput. Simplisia berwarna hijau kekuningan hingga hijau kecoklatan, berbau khas dan tidak berasa.

Hasil pemeriksaan mikroskopik dari serbuk simplisia menunjukkan adanya epidermis, xilem dengan penebalan bentuk spiral, jaringan gabus, kristal Ca oksalat bentuk prisma, stomata tipe anisositik, rambut penutup dan serbuk sari.

(41)

Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia

No. Parameter Hasil (%)

Hasil penelitian sebelumnya (%)

1 Kadar air 6,64 5,33

2 Kadar sari yang larut dalam air 26,65 29,02 3 Kadar sari yang larut dalam etanol 13,59 12,09

4 Kadar abu total 7,50 0,80

5 Kadar abu yang tidak larut dalam asam 0,37 0,22

Hasil penetapan kadar air simplisia bunga brokoli memenuhi persyaratan Materia Medika Indonesia yaitu tidak melebihi 10%. Penetapan kadar air simplisia berfungsi untuk mengetahui apakah simplisia sudah memenuhi persyaratan simplisia yang baik. Kadar air yang melebihi persyaratan memungkinkan terjadinya pertumbuhan jamur. Kadar sari yang larut dalam air sebanyak 26,65% dan kadar sari yang larut dalam etanol sebanyak 13,59%. Hasil ini menunjukkan bahwa bunga brokoli mengandung lebih banyak senyawa yang larut dalam air yaitu senyawa metabolit primer dibandingkan senyawa yang larut di dalam etanol yaitu senyawa metabolit sekunder. Penetapan kadar abu total untuk mengetahui kadar zat anorganik yang terdapat pada simplisia, sedangkan penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam untuk mengetahui kadar zat anorganik yang tidak larut dalam asam.

(42)

4.4 Hasil Ekstraksi

Ekstraksi bahan pada setiap perlakuan dilakukan dengan cara maserasi secara bertingkat, mula-mula menggunakan pelarut kloroform dan dilanjutkan dengan pelarut etanol 96%. Dimana masing-masing perlakuan bahan yang digunakan sebanyak 100 g.

Tabel 4.2 Hasil ekstraksi bahan

No. Perlakuan

Hasil ekstrak (g)

Pelarut kloroform Pelarut etanol 96%

1. Bunga brokoli segar 0,675 2,896

2. Bunga brokoli kukus 1,024 2,591

3. Simplisia bunga brokoli 4,730 19,676

4.5 Hasil Uji Sitotoksisitas Tabel 4.3 Hasil Uji Sitotoksisitas

No. Perlakuan Ekstrak LC50 (µg/ml)

1. Bunga brokoli segar

Kloroform 138,04

Etanol 96% 93,32

2. Bunga brokoli segar dikukus

Kloroform 117,49

Etanol 96% 35,48

3. Bunga brokoli kering

Kloroform 186,21

Etanol 96% 112,98

Harga LC50 yang diperoleh dari hasil uji sitotoksisitas ekstrak kloroform dan ekstrak etanol pada bunga brokoli segar, bunga brokoli kukus dan brokoli

(43)

simplisia menunjukkan bahwa ekstrak tersebut bersifat toksik terhadap Artemia

salina Leach. Ekstrak dikatakan bersifat toksik atau memiliki aktivitas biologi

terhadap Artemia salina Leach (Brine shrimp) apabila memiliki harga LC50 <1000 µg/ml (Meyer, 1982).

Pada penelitian ini didapatkan bahwa ekstrak bunga brokoli mempunyai potensi sitotoksisitas akut. Hal tersebut berkaitan dengan senyawa glikosida dan flavonoid yang terkandung di dalamnya (Marliani, 2010), dimana pada kadar tertentu senyawa tersebut dapat memiliki potensi sitotoksisitas sehingga dapat menyebabkan kematian larva.

Hasil uji sitotoksisitas di atas menunjukkan bahwa pada ekstrak etanol pada brokoli yang dikukus memiliki harga LC50 yang lebih tinggi bila dibandingkan dengan ekstrak yang lain. Hal ini dikarenakan pada ekstrak etanol terlarut senyawa flavonoid dan glikosida, dimana senyawa yang bertindak sebagai antikanker di dalam brokoli adalah sulforafan yang terikat dengan senyawa gula dalam bentuk glukosinolat. Efek antikanker dari brokoli menurun jika dikonsumsi mentah. Brokoli yang tidak dimasak membuat zat antikankernya sukar diserap tubuh. Namun efek brokoli akan meningkat jika dikukus terlebih dahulu sebelum dikonsumsi (Anonim, 2011). Untuk mendapatkan efek yang maksimal, pengukusan brokoli dilakukan pada air mendidih selama 3-5 menit (Anonim, 2010).

(44)

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Pemeriksaan makroskopik dari simplisia bunga brokoli menunjukkan simplisia bunga brokoli merupakan kuncup-kuncup bunga kering, berbentuk bulat, berkeriput. Simplisia berwarna hijau kekuningan hingga hijau kecoklatan, berbau khas dan tidak berasa.

Pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia bunga brokoli memberikan hasil kadar air 6,64%, kadar sari yang larut dalam air 26,65%, kadar sari yang larut dalam etanol 13,59%, kadar abu total 7,50 % dan kadar abu yang tidak larut dalam asam 0,37%.

Hasil uji sitotoksisitas dari ekstrak kloroform dan etanol dari bunga brokoli segar, bunga brokoli yang dikukus dan brokoli simplisia menunjukkan adanya aktivitas biologi terhadap larva Artemia salina Leach yaitu dengan nilai LC50 berturut-turut 138,04 µg/ml; 93,32 µg/ml; 117,49 µg/ml; 35,48 µg/ml; 186,21 µg/ml dan 112,98 µg/ml.

5.2 Saran

Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk melakukan pengujian lebih lanjut menggunakan ekstrak bunga brokoli terhadap sel kanker secara in vitro dan

(45)

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. (2010). Maksimalkan Kekuatan Anti Kanker Brokoli. Kompas. Tanggal akses 20 Januari 2011. www.gpdimaranatha.org.htm

Anonima. (2011). Health Secret of Broccoli. PT Elex Media Komputindo, Jakarta. Halaman 25, 77.

Anonimb. (2011). Artemia salina. Tanggal akses 08 Juni 2011. www.wikipedia.org.

Cahyono, B. (2001). Kubis Bunga dan Broccoli. Kanisius, Yogyakarta. Halaman 12-14.

Dalimartha, S., (1999). Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid 2. Niaga Swadaya, Jakarta. Halaman 25-26.

Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Departemen Kesehatan RI. Jakarta. Halaman 33.

Ditjen POM. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Departemen Kesehatan RI. Jakarta. Halaman 297, 302, 321, 325.

Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan RI, Jakarta. Halaman 10-11.

Gusyana, D. (2010). Menghalau Kanker dengan Brokoli Isothiocyanates &

Sulforaphane. Tanggal akses 20 Januari 2011. www.netsains.com

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa

Tumbuhan. Terjemahan K. Padmawinata. Edisi II. ITB Press, Bandung.

Halaman

Marliani, R. (2010). Karakterisasi Simplisia, Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas

Antioksidan Ekstrak Etanol Dan Fraksi n-Heksan, Etil Asetat, Dan Etanol Bunga Tumbuhan Brokoli (Brassica oleracea L. var. botrytis L.).

Skripsi-S1, Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan. Halaman 37-38.

McLaughlin, J.L., and Lingling L., R. (1998). The Use Of Biological Assays To

Evaluate Botanicals. Drug Information Journal, Volume 32. Pages 514.

Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Nichols,D.E., Jacobsen,L.B., Mclaughlin,J.L. (1982).

Brine Shrimp: A Convenient General Bioassay far Active Plant Constituents, Plant Medica Journal. Pages 31 - 35.

(46)

Mudjiman, A. (1989). Udang Renik Air Asin (Artemia salina). Bhratara, Jakarta. Halaman 15-18.

Muslim, A. (2010). Budidaya Kubis Bunga & Perbanyakan Brokoli secara Kultur

Jaringan. Tanggal akses 16 Mei 2011. www://bloginvitro.blogspot.com

Rukmana, R.(1994). Brokoli. Kanisius, Yogyakarta. halaman 15, 26.

Wibowo, E. (2010). Memetik Manfaat Hebat Brokoli. Tanggal akses 20 Januari 2011. www.go4healthylife.com

Wirakusumah, E.S. (2000). Buah dan Sayuran untuk Terapi. Cetakan ke VI. Penebar Swadaya, Jakarta. Halaman 73-74.

World Health Organization. (1998). Quality Control Methods For Medicinal

(47)

(48)

Lampiran 2. Gambar Bunga Brokoli

(49)

Lampiran 2 (lanjutan)

(50)

Lampiran 2 (lanjutan)

D Keterangan:

A: bunga brokoli segar B: bunga brokoli kukus

C: simplisia bunga brokoli (Brassicae oleraceae flos) D: serbuk simplisia bunga brokoli

(51)

Lampiran 3. Gambar mikroskopik serbuk simplisia bunga brokoli

Gambar. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia, 1. Epidermis, 2. Rambut penutup, 3. Xilem dengan penebalan bentuk spiral, 4. Stomata tipe anisositik, 5. Kristal Ca oksalat bentuk prisma, 6. Serbuk sari, 7. Jaringan gabus.

Gambar. Hasil pemeriksaan penampang meliuntang bunga brokoli segar, 1. Kutikula, 2. Epidermis atas, 3. Jaringan spons, 4. Xilem dengan bentuk penebalan spiral, 5. Kristal Ca oksalat bentuk prisma, 6. Epidermis bawah, 7. Rambut penutup, 8. Stomata tipe anisositik.

1 2

7 6

3 1 2

8 7 6 5

(52)

Lampiran 4. Perhitungan Pemeriksaan Karakterisasi Serbuk Simplisia Bunga Brokoli

1. Perhitungan Kadar Air

% kadar air = 100%

(g) sampel Berat

(ml) air Volume

× 1. Berat Sampel : 5,0070 g

Volume Air : 0,3 ml % Kadar Air =

2. Berat Sampel : 5,0130 g Volume Air : 0,3 ml % Kadar Air =

3. Berat Sampel : 5,0200 g Volume Air : 0,4 ml

% Kadar Air =

(53)

Lampiran 4 (lanjutan)

2. Perhitungan Kadar Sari Yang Larut Dalam Air

% Kadar Sari Larut Dalam Air = x 100%

1. Berat simplisia = 5,0200 g Berat sari = 0,2690 g

% Kadar Sari Larut Dalam Air = x 100% = 26,79%

2. Berat simplisia = 5,0260 g Berat sari = 0,2550 g

% Kadar Sari Larut Dalam Air = x 100% = 25,40%

3. Berat simplisia = 5,0260 g Berat sari = 0,2790 g

% Kadar Sari Larut Dalam Air = x 100% = 27,76%

% Kadar sari larut dalam air rata-rata =

(54)

Lampiran 4 (lanjutan)

3. Perhitungan Kadar Sari Yang Larut Dalam Etanol

% Kadar Sari Larut Dalam Etanol = x 100%

1. Berat simplisia = 5,0450 g Berat sari = 0,1410 g

% Kadar Sari Larut Dalam Etanol = x 100% = 13,97%

2. Berat simplisia = 5,0380 g Berat sari = 0,1310 g

% Kadar Sari Larut Dalam Etanol = x 100% = 13,20%

3. Berat simplisia = 5,0400 g Berat sari = 0,1370 g

% Kadar Sari Larut Dalam Etanol = x 100% = 13,59%

% Kadar Sari Larut Dalam Etanol rata-rata=

(55)

Lampiran 4 (lanjutan)

4. Perhitungan Kadar Abu Total

% Kadar Abu Total = x 100%

1. Berat simplisia = 2,0004 g Berat abu = 0,1546 g

% Kadar Abu Total = x 100% = 7,73%

2. Berat simplisia = 2,0004 g Berat abu = 0,1519 g

% Kadar Abu Total = x 100% = 7,59%

3. Berat simplisia = 2,0003 g Berat abu = 0,1439 g

% Kadar Abu Total = x 100% = 7,19%

(56)

Lampiran 4 (lanjutan)

5. Perhitungan Kadar Abu Yang Tidak Larut Dalam Asam % Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam = x 100%

1. Berat simplisia = 2,0004 g Berat abu = 0,0072 g

% Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam= 100% = 0,36%

2. Berat simplisia = 2,0004 g Berat abu = 0,0075 g

% Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam = 100% = 0,37%

3. Berat simplisia = 2,0003 g Berat abu = 0,0074 g

% Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam = x 100% = 0,37%

% Kadar Abu Yang Tidak Larut Dalam Asam rata-rata

(57)

Lampiran 5. Bagan kerja a. Bagan pengolahan bahan

dibersihkan dari pengotor dicuci dengan air kran mengalir ditiriskan

dipotong-potong ditimbang

dikeringkan di dalam lemari pengering dengan suhu ±40 0C ditimbang

dihaluskan dengan menggunakan blender

Simplisia bunga brokoli

Serbuk simplisia bunga brokoli

Ekstraksi Karakterisasi simplisia :

- Pemeriksaan makroskopik - Pemeriksaan mikroskopik - Kadar air

- Kadar sari larut dalam etanol - Kadar sari larut dalam air - Kadar abu total

- Kadar abu tidak larut dalam asam Bunga brokoli segar

(58)

Lampiran 5 (lanjutan)

b. Bagan ekstraksi bunga brokoli segar secara maserasi

dihaluskan di dalam lumpang

dimaserasi dengan 750 ml kloroform selama 5 hari disaring

ditambahkan kloroform hingga filtrat yang diperoleh 1000 ml disaring

dikeringkan dengan cara digabung dengan filtrat I

diangin-anginkan didiamkan selama 2 hari

dimaserasi dengan 750 ml lalu dienap tuang

etanol selama 5 hari disaring

dipekatkan

diuapkan

ditambahkan etanol hingga

filtrat yang diperoleh 1000 ml difreeze dryer

disaring

digabung dengan filtrat I

didiamkan selama 2 hari lalu dienap tuang

dipekatkan

difreeze dryer

100 g bunga brokoli

Ampas Filtrat kloroform

Ampas

residu Maserat kloroform

Ekstrak kental kloroform Ampas

Ampas

residu Maserat etanol

Ekstrak kental etanol

Ekstrak kloroform kering Filtrat kloroform

Filtrat etanol

Filtrat etanol Uji BST

(59)

Lampiran 5 (lanjutan)

c. Bagan ekstraksi bunga brokoli kukus secara maserasi

dikukus selama 5 menit, ditiriskan dihaluskan di dalam lumpang

dimaserasi dengan 750 ml kloroform selama 5 hari disaring

ditambahkan kloroform hingga filtrat yang diperoleh 1000 ml disaring

dikeringkan dengan cara digabung dengan filtrat I

diangin-anginkan didiamkan selama 2 hari

dimaserasi dengan 750 ml lalu dienap tuang

etanol selama 5 hari disaring

dipekatkan

diuapkan

ditambahkan etanol hingga

filtrat yang diperoleh 1000 ml difreeze dryer

disaring

digabung dengan filtrat I

didiamkan selama 2 hari lalu dienap tuang

dipekatkan

difreeze dryer

100 g bunga brokoli

Ampas Filtrat kloroform

Ampas

residu Maserat kloroform

Ekstrak kental kloroform Ampas

Ampas

residu Maserat etanol

Ekstrak kental etanol

Ekstrak kloroform kering Filtrat kloroform

Filtrat etanol

Filtrat etanol Uji BST

(60)

Lampiran 5 (lanjutan)

e. Bagan ekstraksi bunga brokoli simplisia secara maserasi

dimaserasi dengan 750 ml kloroform selama 5 hari disaring

ditambahkan kloroform hingga filtrat yang diperoleh 1000 ml disaring

dikeringkan dengan cara digabung dengan filtrat I

diangin-anginkan didiamkan selama 2 hari

dimaserasi dengan 750 ml lalu dienap tuang

etanol selama 5 hari disaring

dipekatkan

diuapkan

ditambahkan etanol hingga

filtrat yang diperoleh 1000 ml difreeze dryer

disaring

digabung dengan filtrat I

didiamkan selama 2 hari lalu dienap tuang

dipekatkan

difreeze dryer

100 g bunga brokoli

Ampas Filtrat kloroform

Ampas

residu Maserat kloroform

Ekstrak kental kloroform Ampas

Ampas

residu Maserat etanol

Ekstrak kental etanol

Ekstrak kloroform kering

Uji BST

Filtrat kloroform

Filtrat etanol

Filtrat etanol Uji BST

(61)

Lampiran 5 (lanjutan)

f. Bagan uji sitotoksisitas

dilarutkan denngan pelarut yang sesuai sampai 5 ml

dipipet 0,5 ml dipipet 0,5 ml dipipet 0,5 ml

dicukupkan sampai 5 ml dicukupkan sampai 5 ml dicukupkan

sampai 5 ml

dipipet 0,5 ml dipipet 0,5 ml

dicukupkan sampai 5 ml dicukupkan

sampai 5 ml

dipipet 0,5 ml

dicukupkan

sampai 5 ml

diuapkan pelarutnya

ditambahkan air laut buatan sebanyak 3 ml dimasukkan 10 ekor larva udang Artemia salina ditambahkan air laut buatan hingga 5 ml ditambahkan 1 tetes suspensi ragi

dibiarkan di bawah sinar lampu selama 24 jam dihitung jumlah larva yang mati

50 mg ekstrak

Larutan konsentrasi 103 µg/ml

Larutan konsentrasi 102 µg/ml

Larutan konsentrasi 10 µg/ml

ekstrak kering

(62)

Lampiran 6. Data Persen Kematian Nauplii

Ekstrak kloroform bunga brokoli segar No Konsentr

asi (µg/ml) Jumlah nauplii yang mati Jumlah nauplii yang hidup % kematian

nauplii % kematian rata-rata P1 P2 P3 P1 P2 P3 P1 P2 P3

1 10 1 1 0 9 9 10 10 10 0 6,67

2 100 2 2 3 8 8 7 20 20 30 23,33

3 1000 10 10 10 0 0 0 100 100 100 100

4 Kontrol 0 10 0 0

Ekstrak etanol bunga brokoli segar No Konsentr

asi (µg/ml) Jumlah nauplii yang mati Jumlah nauplii yang hidup % kematian

nauplii % kematian rata-rata P1 P2 P3 P1 P2 P3 P1 P2 P3

1 10 2 1 2 8 9 8 20 10 20 16,67

2 100 3 4 4 7 6 6 30 40 40 36,67

3 1000 10 10 10 0 0 0 100 100 100 100

4 Kontrol 0 10 0 0

Ekstrak kloroform bunga brokoli kukus No Konsentr

asi (µg/ml) Jumlah nauplii yang mati Jumlah nauplii yang hidup % kematian

nauplii % kematian rata-rata P1 P2 P3 P1 P2 P3 P1 P2 P3

1 10 1 0 1 9 10 9 10 0 10 6,67

2 100 4 4 2 6 6 8 40 40 20 33,33

3 1000 10 10 10 0 0 0 100 100 100 100

(63)

Lampiran 6 (lanjutan)

Ekstrak etanol bunga brokoli kukus No Konsentr

asi (µg/ml) Jumlah nauplii yang mati Jumlah nauplii yang hidup % kematian

nauplii % kematian rata-rata P1 P2 P3 P1 P2 P3 P1 P2 P3

1 10 2 3 3 8 7 7 20 30 30 26,67

2 100 7 7 8 3 3 2 70 70 80 73,33

3 1000 10 10 10 0 0 0 100 100 100 100

4 Kontrol 0 10 0 0

Ekstrak koroform bunga brokoli simplisia No Konsentr

asi (µg/ml) Jumlah nauplii yang mati Jumlah nauplii yang hidup % kematian

nauplii % kematian rata-rata P1 P2 P3 P1 P2 P3 P1 P2 P3

1 10 1 0 0 9 10 10 10 0 0 3,33

2 100 3 3 2 7 7 8 30 30 20 26,67

3 1000 9 8 9 1 2 1 90 80 90 86,67

4 Kontrol 0 10 0 0

Ekstrak etanol bunga brokoli simplisia No Konsentr

asi (µg/ml) Jumlah nauplii yang mati Jumlah nauplii yang hidup % kematian

nauplii % kematian rata-rata P1 P2 P3 P1 P2 P3 P1 P2 P3

1 10 0 0 1 10 10 9 0 0 10 3,33

2 100 5 7 4 5 3 6 50 70 40 53,33

3 1000 10 9 7 0 1 3 100 90 70 86,67

(64)

Lampiran 7. Perhitungan Uji Sitotoksisitas 1. Perhitungan Persentase Kematian

Persentase Kematian = X100% Total

kontrol Tes−

Tes = Jumlah kematian nauplii larutan uji Kontrol = Jumlah kematian nauplii larutan kontrol Total = Jumlah nauplii yang digunakan

2. Perhitungan Harga LC50

Menggunakan Analisa Regresi Linear.

2.1. Perhitungan harga LC50 dari ekstrak kloroform bunga brokoli segar Konsentrasi yang digunakan adalah 10, 100 dan 1000 µg/ml

No. Log konsentrasi (X)

% kematian rata-rata

(Y) XY X

1 1 6,67 6,67 1

2 2 23,33 46,66 4

3 3 100 300 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 130

Ῡ=43,33

∑XY =

353,33

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n

X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 130 . 6 33 , 353 2 − −

(65)

Lampiran 7 (lanjutan)

12 14

260 33 , 353

−− =

2 33 , 93

= 46,665 b = Ῡ - a

= 43,33 – 46,665 x 2 = 43,33 – 93,33 = -50

Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 46,665X - 50 Untuk Y = 50

50 = 46,665X - 50

X =

665 , 46

100

= 2,14

(66)

Lampiran 7 (lanjutan)

2.2 Perhitungan harga LC50 dari ekstrak etanol bunga brokoli segar Konsentrasi yang digunakan adalah 10, 100 dan 1000 µg/ml No. Log konsentrasi

(X)

% kematian rata-rata

(Y) XY X

1 1 16,67 16,67 1

2 2 36,67 73,34 4

3 3 100 300 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 153,34 ฀ = 51,11

∑XY =

390,01

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n

X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 34 , 153 . 6 01 , 390 2 − − = 12 14 68 , 306 01 , 390 − − = 2 33 , 83 = 41,665 b = Ῡ - a

= 51,11 – (41,665 x 2) = -32,22

(67)

Lampiran 7 (lanjutan) Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 41,665X – 32,22 Untuk Y = 50

50 = 41,665X – 32,22

X =

665 , 41

22 , 82

= 1,97

(68)

Lampiran 7 (lanjutan)

2.3 Perhitungan harga LC50 ekstrak kloroform brokoli kukus Konsentrasi yang digunakan adalah 10, 100 dan 1000 µg/ml

No. Log konsentrasi (X)

% kematian rata-rata

(Y) XY X

1 1 6,67 6,67 1

2 2 33,33 66,66 4

3 3 100 300 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 140 ฀ = 46,67

∑XY =

373,33

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n

X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 140 . 6 33 , 373 2 − − = 12 14 280 33 , 373 −− = 2 33 , 93 = 46,665 b = Ῡ - a

= 46,67 – (46,665 x 2) = 46,67 – 93,33 = -46,66

(69)

Lampiran 7 (lanjutan) Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 46,665X – 46,66 Untuk Y = 50

50 = 46,665X – 46,66

X =

665 , 46

66 , 96

= 2,07

(70)

Lampiran 7 (lanjutan)

2.4 Perhitungan harga LC50 dari ekstrak etanol brokoli kukus Konsentrasi yang digunakan adalah 10, 100 dan 1000 µg/ml

No. Log konsentrasi (X)

% kematian rata-rata

(Y) XY X

1 1 26,67 26,67 1

2 2 73,33 146,66 4

3 3 100 300 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 200

฀ = 66,67

∑XY =

473,34

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n

X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 200 . 6 34 , 473 2 − − = 12 14 400 33 , 473 −− = 2 34 , 73 = 36,67 b = Ῡ - a

= 66,67 – (36,67 x 2) = 66,67 – 73,34 = -6,67

(71)

Lampiran 7 (lanjutan) Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 36,67X – 6,67 Untuk Y = 50

50 = 36,67X – 6,67

X =

67 , 36

67 , 56

= 1,55

(72)

Lampiran 7 (lanjutan)

2.5 Perhitungan harga LC50 dari ekstrak kloroform brokoli simplisia Konsentrasi yang digunakan adalah 10, 100 dan 1000 µg/ml

No. Log konsentrasi (X)

% kematian rata-rata

(Y) XY X

1 1 3,33 3,33 1

2 2 26,67 53,34 4

3 3 86,67 260,01 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 116,67 ฀ = 38,89

∑XY =

316,68

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n

X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 67 , 116 . 6 68 , 316 2 − − = 12 14 34 , 233 68 , 316 − − = 2 34 , 83 = 41,67 b = Ῡ - a

= 38,89 – (41,67 x 2) = 38,89 – 83,34 = -44,45

(73)

Lampiran 7 (lanjutan) Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 41,67X – 44,45 Untuk Y = 50

50 = 41,67X – 44,45

X =

67 , 41

45 , 94

= 2,27

(74)

Lampiran 7 (lanjutan)

2.6 Perhitungan harga LC50 dari ekstrak etanol brokoli simplisia Konsentrasi yang digunakan adalah 10, 100 dan 1000 µg/ml

No. Log konsentrasi (X)

% kematian rata-rata

(Y) XY X

1 1 3,33 3,33 1

2 2 53,33 106,66 4

3 3 86,67 260,01 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 143,33

฀ = 47,78 ∑XY = 370

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n

X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 33 , 143 . 6 370 2 − − = 12 14 66 , 286 370 − − = 2 34 , 83 = 41,67 b = Ῡ - a

= 47,78 – (41,67 x 2) = 47,78 – 83,34 = -35,56

(75)

Lampiran 7 (lanjutan) Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 41,67X – 35,56 Untuk Y = 50

50 = 41,67X – 35,56

X =

67 , 41

56 , 85

= 2,053

(1)

2 2 73,33 146,66 4

3 3 100 300 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 200 ฀ = 66,67

∑XY = 473,34

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 200 . 6 34 , 473 2 − − = 12 14 400 33 , 473 −− = 2 34 , 73 = 36,67 b = Ῡ - a

= 66,67 – (36,67 x 2) = 66,67 – 73,34 = -6,67

(2)

Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 36,67X – 6,67 Untuk Y = 50

50 = 36,67X – 6,67

X =

67 , 36

67 , 56

= 1,55

(3)

2 2 26,67 53,34 4

3 3 86,67 260,01 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 116,67 ฀ = 38,89

∑XY = 316,68

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 67 , 116 . 6 68 , 316 2 − − = 12 14 34 , 233 68 , 316 − − = 2 34 , 83 = 41,67 b = Ῡ - a

= 38,89 – (41,67 x 2) = 38,89 – 83,34 = -44,45

(4)

Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 41,67X – 44,45 Untuk Y = 50

50 = 41,67X – 44,45

X =

67 , 41

45 , 94

= 2,27

(5)

2 2 53,33 106,66 4

3 3 86,67 260,01 9

∑X = 6 = 2

∑Y = 143,33

฀ = 47,78 ∑XY = 370

∑X2 = 14

Persamaan garis regresi linear : Y = aX + b Y = konsentrasi kematian

X = log konsentrasi

a =

(

)

( )

X /n X /n Y X XY 2 2

∑

∑ ∑

− − =

(

)

( )

6 /3 14 3 / 33 , 143 . 6 370 2 − − = 12 14 66 , 286 370 − − = 2 34 , 83 = 41,67 b = Ῡ - a

= 47,78 – (41,67 x 2) = 47,78 – 83,34 = -35,56

(6)

Maka persamaan garis regresi Y = aX + b

= 41,67X – 35,56 Untuk Y = 50

50 = 41,67X – 35,56

X =

67 , 41

56 , 85

= 2,053