18 masing-masing 10 ml. Disterilkan di dalam autoclave dengan tekanan 1 atm pada
suhu 121°C selama 15 menit, setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.
3.3.3 Media EC Broth
Ditimbang media EC Broth sebanyak 37 g. Dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 2000 ml. Dilarutkan dalam 1 liter aquades. Dimasukkan magnetic
stirer. Dipanaskan di atas hot plate sampai larut. Dimasukkan media ke dalam beaker glass yang telah di sterilisasi. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang
telah berisi tabung durham dalam keadaan terbalik masing-masing 10 ml.
Disterilkan di dalam autoclave dengan tekanan 1 atm pada suhu 121°C selama 15 menit, setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.
3.4 Prosedur
3.4.1 Analisa Total Bakteri Golongan Coli Total Coliform
3.4.1.1 Tahap Pendugaan Presumtif Test
- Siapkan 5 tabung reaksi yang masing-masing berisi ± 10 ml lactose
broth double strengh 1a sd 5a, dan 10 tabung yang masing-masing berisi ± 10 ml lactose broth single strengh 5 tabung beri tanda 1b sd
5b, dan 5 tabung lagi beri tanda 1c sd 5c -
Pipet 10 ml sampel air dan masukkan kedalam tabung 1a sd 5a, 1 ml ke dalam tabung 1b sd 5b, dan 0,1 ml ke dalam tabung 1c sd 5c untuk
sampel air yang tidak diencerkan dengan menggunakan pipet steril, lakukan dekat bunsen atau lampu spiritus
- Atau masukkan 1 ml benda uji dari masing-masing pengenceran untuk
sampel air yang diencerkan seri pengenceran 10
1
, 10
1
, 10
1
dan
Universitas Sumatera Utara
19 seterusnya ke dalam tabung reaksi tersebut menggunakan pipet steril
dan lakukan dekat pembakar bunsen atau lampu spiritus -
Kocok tabung secara perlahan agar sampel air menyebar rata ke seluruh bagian media
- Inkubasi tabung reaksi berisi media dan sampel air pada suhu
temperatur 35 ± 0,5°C atau 37 ± 0,5°C selama 24 ± 2 jam -
Periksa gas yang tertangkap dalam tabung durham ditandai dengan terbentuknya gelembung udara dan hasil asam yang ditandai dengan
perubahan warna media dari ungu menjadi kuning. Adanya gelembung udara pada tabung durham asam menunjukkan tahap pendugaan positif
- Lanjutkan pengujian ke tahap penegasan jika dihasilkan, lanjutkan
inkubasi 24 jam lagi -
Lanjutkan pengujian ke tahap penegasan jika dihasilkan gas asam sesudah 24 jam inkubasi, jika tidak dihasilkan, maka sampel air tidak
mengandung total bakteri golongan koli
3.4.1.2 Tahap Penegasan Confirmatif Test
- Kocok perlahan-lahan tabung reaksi yang menghasilkan gas asam
pada tahap pendugaan -
Pindahkan sebanyak 1 atau 2 mata jarum inokulasi oose cairan dari masing – masing tabung positif gas ke dalam tabung yang berisi media
BGLB broth, lakukan dekat pembakar bunsen atau lampu spiritus -
Inkubasi tabung-tabung reaksi tersebut pada suhu 35 ± 0,5°C atau 37 ± 0,5°C selama 48 ± 3 jam
Universitas Sumatera Utara
20 -
Apabila menghasilkan gas yang ditandai dengan terbentuknya gelembung udara pada tabung durham dalam waktu 48 jam
menunjukkan kehadiran total bakteri golongan koli dalam sampel air -
Hitung jumlah tabung yang menghasilkan gelembung pada setiap seri pengenceran
- Hitung jumlah total bakteri golongan koli sebagai MPN100 ml dengan
menggunakan tabel 1 untuk 5 tabung pada lampiran
3.4.2 Analisa Total Bakteri Koli Tinja Faecal Coli 3.4.2.1
