Tahap oksidasi Kadar Protein

16

2.5 Kadar Serat Kasar

Kertas saring dipanaskan di dalam oven selama satu jam pada suhu 110°C, kemudian didinginkan selama 30 menit di dalam desikator dan ditimbang X1. Kertas saring tersebut kemudian dipasang pada labu Buchner dan dihubungkan pada vacumm pump untuk mempercepat penyaringan. Bahan sebanyak 0,5 g A dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 250 ml, kemudian ditambahkan dengan 50 ml H 2 SO 4 0,3 N dan dipanaskan di atas hot plater selama 30 menit. Sebanyak 25 ml NaOH 1,5 N ditambahkan kelarutan tadi dan dipanaskan kembali selama 30 menit. Larutan dan bahan yang sudah dipanaskan disaring dan dituangkan ke dalam labu Buchner, kemudian di bilas berturut turut dengan 50 ml air panas, 50 ml H 2 SO 4 0,3 N, 50 ml air panas lagi, lalu 25 ml aseton. Cawan porselen dipanaskan di dalam oven pada suhu 105-110°C selama 1 jam lalu didinginkan. Kertas saring dimasukkan ke dalam cawan porselin kemudian dipanaskan di dalam oven pada suhu 105-110°C selama 1 jam, didinginkan di dalam desikator selama 15-30 menit dan ditimbang X2. Cawan kemudian dipanaskan di dalam tanur pada suhu 600°C hingga berwarna putih atau menjadi abu kurang lebih 4 jam, selanjutnya didinginkan di dalam desikator selama 15-30 menit dan ditimbang X3. Kandungan serat kasar tersebut dihitung dengan menggunakan rumus :

2.6 Kandungan Asam Lemak

2.6.1 Ekstraksi Lemak Metode Folch

Sampel dihancurkan dengan blender dan ditimbang sebanyak 15 g. Setelah itu, sampel ditambah dengan 100 ml campuran kloroform-metanol 2:1 dan dihomogenisasi selama 5 menit. Homogenat dipisahkan dengan cara penyaringan dan hasil saringannya dipindahkan ke dalam labu pemisah 200-300 ml, lalu ditambahkan 10 ml MgCl 2 0,03 M, dikocok kuat selama 1 menit, Setelah tercampur merata, labu di isi gas nitrogen dan ditutup rapat. Campuran tersebut dibiarkan selama satu malam pada suhu kamar sampai terjadi dua lapisan cairan. Lapisan atas dibuang dan lapisan bawah dipisahkan ke dalam labu didih yang sudah diketahui bobotnya. Larutan tersebut dikeringkan dalam keadaan vacuum. Lemak yang terkumpul ditimbang.

2.6.2 Saponifikasi

Lemak hasil minyak 50 mg-5 g dimasukkan ke dalam labu didih 100 ml, kemudian ditambahkan 1-2 ml KOH 50, etanol 15 ml, 2-3 butir batu didih, dan hidroquinon 5 dari lemak kasar. Refluks campuran tersebut pada suhu 80°C selama 30-60 menit untuk saponifikasi, Setelah dingin pindahkan ke dalam corong pemisah 200-300 ml dan ditambahkan 40 ml aquades dan 30 ml heksan. Selanjutnya dikocok selama satu menit sampai terjadi dua lapisan cairan. Lapisan atas dibuang dan lapisan bawah dipindahkan ke dalam corong pemisah lainnya lalu diminyaksi dengan heksan 40 ml. Larutan di kocok selama satu menit sampai terjadi dua lapisan cairan. Lapisan atas dibuang dan lapisan bawah dipindahkan ke dalam corong pemisah, kemudian ditambahkan heksan 50 ml, 2-3 tetes metal jingga dan 10 ml HCl 2 N dan dikocok lagi selama satu menit sampai terjadi dua lapisan cairan. Lapisan bawah dibuang dan lapisan atas dicuci dengan aquades 3-5