Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Biji Pepaya (Carica papaya L.) Terhadap Profil Lipid pada Tikus Putih (Rattus novergicus) Dislipidemia
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL
BIJI PEPAYA (Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID
PADA TIKUS PUTIH (Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
KIKI RAWITRI
101501143
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2014
Universitas Sumatera Utara
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL
BIJI PEPAYA (Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID
PADA TIKUS PUTIH (Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
KIKI RAWITRI
101501143
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2014
Universitas Sumatera Utara
PENGESAHAN SKRIPSI
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL
BIJI PEPAYA (Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID
PADA TIKUS PUTIH (Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
OLEH:
KIKI RAWITRI
NIM 101501143
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: 28 Agustus 2014
Pembimbing I,
Panitia Penguji,
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt.
NIP 197806032005012004
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.
NIP 195103261978022001
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt.
NIP 197806032005012004
Pembimbing II,
Marianne, S.Si., M.Si., Apt.
NIP 198005202005012006
Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt.
NIP 195304031983032001
Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt.
NIP 195006121980032001
Medan,
Oktober 2014
Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
Dekan,
Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.
NIP 195311281983031002
Universitas Sumatera Utara
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis ucapkan kepada Allah SWT atas segala limpahan
rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan
penyusunan skripsi yang berjudul “Pengaruh Pemberian
Ekstrak Etanol Biji
Pepaya (Carica papaya L.) Terhadap Profil Lipid pada Tikus Putih (Rattus
novergicus) Dislipidemia”. Skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu syarat
mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera
Utara.
Penulis menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya Kepada Bapak
Dekan Fakultas Farmasi Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., yang telah
memberikan fasilitas kepada penulis sehingga dapat menyelesaikan pendidikan.
Kepada Ibu Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Aswita Hafni
Lubis, M.Si., Apt., yang telah membimbing penulis dengan sabar sehingga
penulisan skripsi ini dapat diselesaikan. Kepada Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si.,
Apt., Ibu Marianne, S.Si., M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt.,
selaku dosen penguji yang telah memberikan saran, arahan, kritik dan masukan
kepada penulis dalam penyelesaian skripsi ini. Kepada Ibu Dra. Juanita
Tanuwijaya, M.Si., Apt., selaku penasehat akademik yang telah memberikan
nasehat dan arahan kepada penulis selama masa perkuliahan dan Bapak/Ibu
Pembantu Dekan, Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU atas ilmu
yang telah diberikan
Penulis juga ingin menyampaikan rasa terima kasih serta penghargaan
yang tulus dan tak terhingga kepada orangtua tersayang Ayahanda Pariyo dan
Universitas Sumatera Utara
Ibunda Nuryani atas doa dan dukungan baik moril maupun materil, adik-adik
tersayang Muhammad Sundoro dan Nayla Azizah, kerabat-kerabat, sahabat, dan
teman-teman Farmasi Klinis dan Komunitas stambuk 2010 atas motivasi dan
segala bantuan dalam penyelesaian skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari
kesempurnaan. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang
membangun dari semua pihak demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di
bidang Farmasi.
Medan, 28 Agustus 2014
Penulis,
Kiki Rawitri
NIM 101501143
Universitas Sumatera Utara
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL BIJI PEPAYA
(Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID PADA TIKUS PUTIH
(Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
Abstrak
Dislipidemia merupakan salah satu faktor resiko utama penyakit
kardiovaskular (PKV). Dislipidemia ditandai dengan abnormalitas pada profil
lipid dalam darah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian
ekstrak etanol biji pepaya (Carica papaya L.) terhadap parameter profil lipid yaitu
kadar kolesterol total, trigliserida, LDL (Low Density Lipoprotein), dan HDL
(High Density Lipoprotein) pada tikus dislipidemia.
Pada penelitian ini dilakukan pemeriksaan karakteristik, skrining fitokimia
simplisia dan ekstrak etanol biji pepaya, dan pengujian ekstrak etanol biji pepaya
terhadap profil lipid. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan
post-test only control group design terhadap 20 ekor tikus wistar yang kemudian
dibagi secara acak dalam 5 kelompok. Ekstrak etanol biji pepaya diberikan secara
per oral dengan dosis 200 mg/kg bb dan 400 mg/kg bb. Simvastatin dosis 0,9
mg/kg bb diberikan secara per oral sebagai kontrol positif. Kuning telur puyuh 1%
berat badan dan propiltiourasil dosis 9 mg/kg bb diberikan secara per oral sebagai
kontrol pembanding. Pemberian pakan biasa dan air minum sebagai kontrol
normal. Kadar profil lipid dalam darah diukur dengan metode kolorimetri
enzimatik. Data dianalisis dengan uji One way Anova dan dilanjutkan dengan uji
post hoc Tukey untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan. Analisis statistik
ini menggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi
15.
Hasil karakterisasi simplisia biji pepaya diperoleh kadar air 7,26%, kadar
abu total 8,74%, kadar abu tidak larut asam 1,07%, kadar sari larut dalam air
16,84%, dan kadar sari larut dalam etanol 11,01%. Hasil karakterisasi ekstrak
etanol biji pepaya diperoleh kadar air 9,95%, kadar abu total 1,62%, kadar abu
tidak larut asam 0,25%, kadar sari larut dalam air 64,26%, dan kadar sari larut
dalam etanol 70,85%. Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak etanol biji
pepaya menunjukkan adanya senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, saponin,
glikosida, dan steroid/triterpenoid.
Hasil pengujian terhadap profil lipid pada tikus dislipidemia menunjukkan
bahwa dibandingkan dengan kontrol pembanding, pemberian ekstrak etanol biji
pepaya dosis 200 mg/kg bb dan 400 mg/kg bb secara bermakna (p < 0,05) dapat
menurunkan kadar kolesterol total dengan rata-rata 60,25 mg/dl; 54,25 mg/dl;
kadar trigliserida 73 mg/dl; 54,25 mg/dl; dan kadar LDL 4,5 mg/dl; 5,25 mg/dl.
Hanya dosis 200 mg/kg bb yang tidak memberikan perbedaan yang bermakna
dengan kontrol normal. Kadar HDL tidak mengalami peningkatan pada pemberian
kedua dosis ekstrak etanol biji pepaya.
Dari penelitian ini disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol biji
pepaya dapat menurunkan kadar kolesterol total, kadar trigliserida, dan kadar
LDL, tetapi tidak dapat meningkatkan kadar HDL pada tikus dislipidemia.
Kata kunci: Ekstrak etanol biji pepaya, profil lipid, propiltiourasil
Universitas Sumatera Utara
EFFECT OF ETHANOL EXTRACT OF PAPAYA SEEDS
(Carica papaya L.) ON LIPID PROFILE IN RATS (Rattus novergicus)
DYSLIPIDEMIA
Abstract
Dyslipidemia is a major risk factor for cardiovascular disease (CVD).
Dyslipidemia is characterized by abnormalities in blood lipid profiles. This study
aims to determine the effect of ethanol extract of papaya seeds (Carica papaya L.)
on lipid profile parameters, namely total cholesterol, triglycerides, LDL (Low
Density Lipoprotein), and HDL (High Density Lipoprotein) dyslipidemia in rats.
This study examination of characteristic, phytochemical screening of
simplicia and ethanol extract of papaya seeds, and testing of ethanol extract of
papaya seeds on lipid profile. This study uses an experimental method with posttest only control group design with 20 Wistar rats were then divided randomly
into 5 groups. Ethanol extract of papaya seeds administered orally at a dose of 200
mg/kg bw and 400 mg/kg bw. Simvastatin dose of 0.9 mg/kg bw administered
orally as a positive control. Quail egg yolk 1% body weight and propylthiouracil
dose of 9 mg/kg bw administered orally as a control for comparison. Regular
feeding and water drinking as normal controls. Levels of serum lipid profiles were
measured by enzymatic colorimetric method. Data were analyzed by One way
ANOVA followed by Tukey's post hoc test to see significant differences among
treatments. The statistical analysis using SPSS (Statistical Product and Service
Solutions) version 15.
The characterization results obtained simplicia of papaya seeds moisture
content of 7.26%, 8.74% total ash content, acid insoluble ash content of 1.07%,
levels of water-soluble extract 16.84%, and levels of soluble extract in ethanol
11.01 %. The results of the characterization of ethanol extract of papaya seeds
obtained 9.95% moisture content, total ash content of 1.62%, acid insoluble ash
content of 0.25%, levels of water-soluble extract 64.26%, and levels of soluble
extract in ethanol 70.85%. Results of phytochemical screening of simplicia and
ethanol extract of papaya seeds showed the presence of compounds alkaloids,
flavonoids, tannins, saponins, glycosides, and steroids/triterpenoids.
The test results showed that the lipid profile compared with the control
comparison, ethanol extract of papaya seeds dose of 200 mg/kg bw and 400
mg/kg bw were significantly (p < 0.05) can lower total cholesterol by an average
of 60.25 mg/dl; 54.25 mg/dl; triglyceride levels of 73 mg/dl; 54.25 mg/dl; and
LDL levels of 4.5 mg/dl; 5.25 mg/dl. Just a dose of 200 mg/kg bw which does not
provide any significant difference from normal controls. HDL levels are not
increased in both dose administration of ethanol extract of papaya seeds.
The conclusion of this study indicated ethanol extract of papaya seeds can
lower total cholesterol, triglycerides, and LDL levels, but can not increase HDL
levels in dyslipidemia rats.
Keywords: Ethanol extract of papaya seeds, lipid profile, propylthiouracil
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL .................................................................................................
i
HALAMAN JUDUL ............................................................................
ii
PENGESAHAN SKRIPSI ....................................................................
iii
KATA PENGANTAR ..........................................................................
iv
ABSTRAK ...........................................................................................
vi
ABSTRACT .........................................................................................
vii
DAFTAR ISI ........................................................................................
viii
DAFTAR TABEL .................................................................................
xiii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................
xiv
DAFTAR LAMPIRAN .........................................................................
xv
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................
1
1.1 Latar Belakang ........................................................................
1
1.2 Rumusan Masalah ...................................................................
4
1.3 Hipotesis .................................................................................
4
1.4 Tujuan Penelitian .....................................................................
5
1.5 Manfaat Penelitian ...................................................................
5
1.6 Kerangka Pikir ........................................................................
6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..........................................................
7
2.1 Uraian Tumbuhan ....................................................................
7
2.1.1
Sejarah Tumbuhan .......................................................
7
2.1.2
Sistematika Tumbuhan .................................................
7
2.1.3
Nama Daerah ...............................................................
7
Universitas Sumatera Utara
2.1.4 Morfologi Tumbuhan ...................................................
8
2.1.5
Kandungan Biji Pepaya ................................................
9
2.1.6
Manfaat Tumbuhan ......................................................
9
2.2 Ekstraksi .................................................................................
10
2.3 Propiltiourasil ..........................................................................
13
2.4 Simvastatin .............................................................................
15
2.5 Telur Puyuh .............................................................................
16
2.6 Profil lipid ...............................................................................
17
2.7 Lipid Plasma ...........................................................................
18
2.7.1
Lipoprotein ..................................................................
18
2.7.2 Apolipoprotein .............................................................
21
2.7.3 Kolesterol ....................................................................
22
2.7.4 Trigliserida ..................................................................
24
2.8 Metabolisme Lipoprotein ........................................................
24
2.8.1 Jalur Metabolisme Eksogen ..........................................
25
2.8.2 Jalur Metabolisme Endogen .........................................
26
2.8.3 Jalur Reverse Cholesterol Transport ............................
26
2.9 Dislipidemia ............................................................................
27
2.9.1 Definisi ........................................................................
27
2.9.2 Klasifikasi Dislipidemia ...............................................
27
2.8.3 Kadar lipid Serum Normal ...........................................
28
BAB III METODE PENELITIAN ........................................................
29
3.1 Alat dan Bahan Penelitian .......................................................
29
3.1.1 Alat Penelitian .............................................................
29
Universitas Sumatera Utara
3.1.2
Bahan Penelitian ..........................................................
30
3.1.3 Komposisi Reagensia pada Pengukuran Kadar Profil
Lipid pada serum ..........................................................
30
3.2 Hewan Penelitian ....................................................................
30
3.3 Penyiapan Bahan Tumbuhan ...................................................
31
3.3.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan ...................................
31
3.3.2 Identifikasi Tumbuhan .................................................
31
3.3.3 Pembuatan Simplisia Biji Pepaya .................................
31
3.4 Pembuatan Pereaksi .................................................................
32
3.4.1 Pereaksi Mayer ............................................................
32
3.4.2 Pereaksi Dragendorff ...................................................
32
3.4.3 Pereaksi Bouchardat .....................................................
32
3.4.4 Pereaksi Molisch ..........................................................
32
3.4.5 Pereaksi Asam Klorida 2 N ..........................................
32
3.4.6 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ......................................... .....
33
3.4.7 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N .................................
33
3.4.8 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M ................................
33
3.4.9 Pereaksi Besi (III) Klorida 1% .....................................
33
3.4.10 Pereaksi Liebermann-Burchard .....................................
33
3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak ...................
33
3.5.1 Pemeriksaan Makroskopik ...........................................
34
3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik ............................................
34
3.5.3 Penetapan Kadar Air ....................................................
34
3.5.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air .........................
35
3.5.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol ....................
35
Universitas Sumatera Utara
3.5.6 Penetapan Kadar Abu Total .........................................
35
3.5.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam .....................
36
3.6 Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia dan Ekstrak ....................
36
3.6.1 Pemeriksaan Alkaloida ................................................
36
3.6.2 Pemeriksaan Flavonoida ....................................... .........
37
3.6.3 Pemeriksaan Tanin .......................................................
37
3.6.4 Pemeriksaan Glikosida .................................................
38
3.6.5 Pemeriksaan Saponin ...................................................
38
3.6.6 Pemeriksaan Steroida/Triterpenoida ..............................
38
3.7 Tahap Persiapan Penelitian .....................................................
39
3.7.1 Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Pepaya .........................
39
3.7.2 Pembuatan Diet Kuning Telur ......................................
39
3.7.3 Pembuatan Larutan Propiltiourasil 0,1% ......................
40
3.7.4 Pembuatan Suspensi Simvastatin 0,01% .......................
40
3.7.5 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Biji Pepaya 4% b/v
40
3.8 Tahap Pengujian ......................................................................
40
3.8.1 Pemilihan dan Penyiapan Hewan Uji ......................
40
3.8.2 Perlakuan Terhadap Hewan Uji ....................................
41
3.8.3 Metode Pengukuran profil lipid serum ( Kolesterol
Total, trigliserida, HDL, dan LDL) ...............................
42
3.8.3.1 Pengukuran Kadar Kolesterol Total ................
42
3.8.3.2 Pengukuran Kadar Trigliserida .......................
43
3.8.3.3 Pengukuran Kadar Kolesterol-HDL ................
45
3.8.3.4 Pengukuran Kadar Kolesterol-LDL ................
46
3.9 Analisis Data ...........................................................................
46
Universitas Sumatera Utara
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................
47
4.1
Hasil Identifikasi Tumbuhan .................................................
47
4.2
Hasil Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak .............................
47
4.3
Hasil Skrining Serbuk Simplisia dan Ekstrak ........................
49
4.4
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya Terhadap Kadar
Kolesterol Total pada Tikus ..................................................
50
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya Terhadap Kadar
Trigliserida pada Tikus .........................................................
53
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji pepaya Terhadap Kadar
HDL pada Tikus ...................................................................
56
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya Terhadap Kadar
LDL pada Tikus ....................................................................
58
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN ..............................................
61
5.1
Kesimpulan ...........................................................................
61
5.2
Saran .....................................................................................
63
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................
64
LAMPIRAN .........................................................................................
68
4.5
4.6
4.7
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1
Kandungan Protein dan Lemak pada Beberapa Ternak Unggas 16
Tabel 2.2 Karakteristik Lipoprotein Plasma ........................................
19
Tabel 2.3 Jenis-Jenis Apolipoprotein .................................................
22
Tabel 2.4 Kadar Lipid Serum Normal .................................................
28
Tabel 3.1 Jumlah Sampel, Standar, dan Reagensia Kolesterol yang
dibutuhkan dalam Pengukuran Kadar Kolesterol Total ........
43
Tabel 3.2
Jumlah Sampel, Standar dan Reagensia Trigliserida yang
dibutuhkan dalam Pengukuran Kadar Trigliserida ...............
44
Tabel 3.3 Prosedur Presipitasi HDL ....................................................
45
Tabel 3.4
Jumlah Sampel, Standar, dan Reagensia Kolesterol yang
dibutuhkan dalam Pengukuran Kadar HDL .........................
45
Tabel 4.1 Hasil Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol Biji Pepaya
48
Tabel 4.2 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Etanol Biji
Pepaya ................................................................................
50
Tabel 4.3 Hasil Rata-Rata Kadar Kolesterol Total (mg/dl) pada Tikus
Setelah Perlakuan 21 Hari ...................................................
50
Tabel 4.4 Hasil Rata-Rata Kadar Trigliserida (mg/dl) Serum Tikus
Setelah Perlakuan 21 Hari ...................................................
54
Tabel 4.5 Hasil Rata-Rata Kadar HDL (High Density Lipoprotein)
(mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari ..................
56
Tabel 4.6 Hasil Rata-Rata Kadar LDL (Low Density Lipoprotein)
(mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari ..................
58
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.1
Diagram Kerangka Pikir Penelitian ................................
6
Gambar 2.1
Struktur Propiltiourasil ...................................................
13
Gambar 2.2
Efek Hormon Tiroid pada Metabolisme Lipid ................
14
Gambar 2.3
Struktur Simvastatin .......................................................
15
Gambar 2.4
Struktur Lipoprotein .......................................................
19
Gambar 2.5
Jalur Biosintesis Kolesterol ............................................
23
Gambar 4.1
Diagram Rata-Rata Kadar Kolesterol Total (mg/dl)
Serum Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari ..........................
51
Diagram Rata-Rata Kadar Trigliserida (mg/dl) Serum
Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari .....................................
54
Diagram Rata-Rata Kadar HDL (High Density
Lipoprotein) (mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21
Hari ................................................................................
57
Diagram Rata-Rata Kadar LDL (Low Density
Lipoprotein) (mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21
Hari ................................................................................
59
Gambar 4.2
Gambar 4.3
Gambar 4.4
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1.
Hasil Identifikasi Tumbuhan ..........................................
69
Lampiran 2.
Tumbuhan Pepaya (Carica papaya L.) ...........................
70
Lampiran 3.
Karakteristik Biji Pepaya ................................................
71
Lampiran 4.
Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia Biji
Pepaya ...........................................................................
72
Bagan Pembuatan, Skrining Fitokimia dan Karakterisasi
Serbuk Simplisia ............................................................
73
Bagan Pembuatan, Skrining Fitokimia dan Karakterisasi
Ekstrak ...........................................................................
74
Lampiran 7.
Bagan Kerja Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya ........
75
Lampiran 8.
Bagan Kerja Pengambilan Darah Tikus ..........................
76
Lampiran 9.
Bagan Kerja Pengukuran Kadar Kolesterol Total ............
77
Lampiran 10. Bagan Kerja Pengukuran Kadar Trigliserida ...................
78
Lampiran 11. Bagan Kerja Pengukuran Kadar High Density
Lipoprotein (HDL) .........................................................
79
Lampiran 12. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristisasi Simplisia
Biji Pepaya .....................................................................
80
Lampiran 13. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristisasi Ekstrak
Etanol Biji Pepaya ..........................................................
85
Lampiran 14. Contoh Perhitungan Dosis ..............................................
90
Lampiran 15. Data Hasil Pengukuran Profil Lipid pada Tikus ..............
93
Lampiran 16. Hasil Analisis ANOVA Kadar Profil Lipid pada Tikus ...
94
Lampiran 17. Alat dan Bahan ............................................ ..................
103
Lampiran 18. Hewan Percobaan ...........................................................
106
Lampiran 5.
Lampiran 6.
Universitas Sumatera Utara
BIJI PEPAYA (Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID
PADA TIKUS PUTIH (Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
KIKI RAWITRI
101501143
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2014
Universitas Sumatera Utara
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL
BIJI PEPAYA (Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID
PADA TIKUS PUTIH (Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
KIKI RAWITRI
101501143
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2014
Universitas Sumatera Utara
PENGESAHAN SKRIPSI
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL
BIJI PEPAYA (Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID
PADA TIKUS PUTIH (Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
OLEH:
KIKI RAWITRI
NIM 101501143
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: 28 Agustus 2014
Pembimbing I,
Panitia Penguji,
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt.
NIP 197806032005012004
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.
NIP 195103261978022001
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt.
NIP 197806032005012004
Pembimbing II,
Marianne, S.Si., M.Si., Apt.
NIP 198005202005012006
Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt.
NIP 195304031983032001
Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt.
NIP 195006121980032001
Medan,
Oktober 2014
Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
Dekan,
Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.
NIP 195311281983031002
Universitas Sumatera Utara
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis ucapkan kepada Allah SWT atas segala limpahan
rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan
penyusunan skripsi yang berjudul “Pengaruh Pemberian
Ekstrak Etanol Biji
Pepaya (Carica papaya L.) Terhadap Profil Lipid pada Tikus Putih (Rattus
novergicus) Dislipidemia”. Skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu syarat
mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera
Utara.
Penulis menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya Kepada Bapak
Dekan Fakultas Farmasi Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., yang telah
memberikan fasilitas kepada penulis sehingga dapat menyelesaikan pendidikan.
Kepada Ibu Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Aswita Hafni
Lubis, M.Si., Apt., yang telah membimbing penulis dengan sabar sehingga
penulisan skripsi ini dapat diselesaikan. Kepada Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si.,
Apt., Ibu Marianne, S.Si., M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt.,
selaku dosen penguji yang telah memberikan saran, arahan, kritik dan masukan
kepada penulis dalam penyelesaian skripsi ini. Kepada Ibu Dra. Juanita
Tanuwijaya, M.Si., Apt., selaku penasehat akademik yang telah memberikan
nasehat dan arahan kepada penulis selama masa perkuliahan dan Bapak/Ibu
Pembantu Dekan, Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU atas ilmu
yang telah diberikan
Penulis juga ingin menyampaikan rasa terima kasih serta penghargaan
yang tulus dan tak terhingga kepada orangtua tersayang Ayahanda Pariyo dan
Universitas Sumatera Utara
Ibunda Nuryani atas doa dan dukungan baik moril maupun materil, adik-adik
tersayang Muhammad Sundoro dan Nayla Azizah, kerabat-kerabat, sahabat, dan
teman-teman Farmasi Klinis dan Komunitas stambuk 2010 atas motivasi dan
segala bantuan dalam penyelesaian skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari
kesempurnaan. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang
membangun dari semua pihak demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di
bidang Farmasi.
Medan, 28 Agustus 2014
Penulis,
Kiki Rawitri
NIM 101501143
Universitas Sumatera Utara
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL BIJI PEPAYA
(Carica papaya L.) TERHADAP PROFIL LIPID PADA TIKUS PUTIH
(Rattus novergicus) DISLIPIDEMIA
Abstrak
Dislipidemia merupakan salah satu faktor resiko utama penyakit
kardiovaskular (PKV). Dislipidemia ditandai dengan abnormalitas pada profil
lipid dalam darah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian
ekstrak etanol biji pepaya (Carica papaya L.) terhadap parameter profil lipid yaitu
kadar kolesterol total, trigliserida, LDL (Low Density Lipoprotein), dan HDL
(High Density Lipoprotein) pada tikus dislipidemia.
Pada penelitian ini dilakukan pemeriksaan karakteristik, skrining fitokimia
simplisia dan ekstrak etanol biji pepaya, dan pengujian ekstrak etanol biji pepaya
terhadap profil lipid. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan
post-test only control group design terhadap 20 ekor tikus wistar yang kemudian
dibagi secara acak dalam 5 kelompok. Ekstrak etanol biji pepaya diberikan secara
per oral dengan dosis 200 mg/kg bb dan 400 mg/kg bb. Simvastatin dosis 0,9
mg/kg bb diberikan secara per oral sebagai kontrol positif. Kuning telur puyuh 1%
berat badan dan propiltiourasil dosis 9 mg/kg bb diberikan secara per oral sebagai
kontrol pembanding. Pemberian pakan biasa dan air minum sebagai kontrol
normal. Kadar profil lipid dalam darah diukur dengan metode kolorimetri
enzimatik. Data dianalisis dengan uji One way Anova dan dilanjutkan dengan uji
post hoc Tukey untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan. Analisis statistik
ini menggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi
15.
Hasil karakterisasi simplisia biji pepaya diperoleh kadar air 7,26%, kadar
abu total 8,74%, kadar abu tidak larut asam 1,07%, kadar sari larut dalam air
16,84%, dan kadar sari larut dalam etanol 11,01%. Hasil karakterisasi ekstrak
etanol biji pepaya diperoleh kadar air 9,95%, kadar abu total 1,62%, kadar abu
tidak larut asam 0,25%, kadar sari larut dalam air 64,26%, dan kadar sari larut
dalam etanol 70,85%. Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak etanol biji
pepaya menunjukkan adanya senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, saponin,
glikosida, dan steroid/triterpenoid.
Hasil pengujian terhadap profil lipid pada tikus dislipidemia menunjukkan
bahwa dibandingkan dengan kontrol pembanding, pemberian ekstrak etanol biji
pepaya dosis 200 mg/kg bb dan 400 mg/kg bb secara bermakna (p < 0,05) dapat
menurunkan kadar kolesterol total dengan rata-rata 60,25 mg/dl; 54,25 mg/dl;
kadar trigliserida 73 mg/dl; 54,25 mg/dl; dan kadar LDL 4,5 mg/dl; 5,25 mg/dl.
Hanya dosis 200 mg/kg bb yang tidak memberikan perbedaan yang bermakna
dengan kontrol normal. Kadar HDL tidak mengalami peningkatan pada pemberian
kedua dosis ekstrak etanol biji pepaya.
Dari penelitian ini disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol biji
pepaya dapat menurunkan kadar kolesterol total, kadar trigliserida, dan kadar
LDL, tetapi tidak dapat meningkatkan kadar HDL pada tikus dislipidemia.
Kata kunci: Ekstrak etanol biji pepaya, profil lipid, propiltiourasil
Universitas Sumatera Utara
EFFECT OF ETHANOL EXTRACT OF PAPAYA SEEDS
(Carica papaya L.) ON LIPID PROFILE IN RATS (Rattus novergicus)
DYSLIPIDEMIA
Abstract
Dyslipidemia is a major risk factor for cardiovascular disease (CVD).
Dyslipidemia is characterized by abnormalities in blood lipid profiles. This study
aims to determine the effect of ethanol extract of papaya seeds (Carica papaya L.)
on lipid profile parameters, namely total cholesterol, triglycerides, LDL (Low
Density Lipoprotein), and HDL (High Density Lipoprotein) dyslipidemia in rats.
This study examination of characteristic, phytochemical screening of
simplicia and ethanol extract of papaya seeds, and testing of ethanol extract of
papaya seeds on lipid profile. This study uses an experimental method with posttest only control group design with 20 Wistar rats were then divided randomly
into 5 groups. Ethanol extract of papaya seeds administered orally at a dose of 200
mg/kg bw and 400 mg/kg bw. Simvastatin dose of 0.9 mg/kg bw administered
orally as a positive control. Quail egg yolk 1% body weight and propylthiouracil
dose of 9 mg/kg bw administered orally as a control for comparison. Regular
feeding and water drinking as normal controls. Levels of serum lipid profiles were
measured by enzymatic colorimetric method. Data were analyzed by One way
ANOVA followed by Tukey's post hoc test to see significant differences among
treatments. The statistical analysis using SPSS (Statistical Product and Service
Solutions) version 15.
The characterization results obtained simplicia of papaya seeds moisture
content of 7.26%, 8.74% total ash content, acid insoluble ash content of 1.07%,
levels of water-soluble extract 16.84%, and levels of soluble extract in ethanol
11.01 %. The results of the characterization of ethanol extract of papaya seeds
obtained 9.95% moisture content, total ash content of 1.62%, acid insoluble ash
content of 0.25%, levels of water-soluble extract 64.26%, and levels of soluble
extract in ethanol 70.85%. Results of phytochemical screening of simplicia and
ethanol extract of papaya seeds showed the presence of compounds alkaloids,
flavonoids, tannins, saponins, glycosides, and steroids/triterpenoids.
The test results showed that the lipid profile compared with the control
comparison, ethanol extract of papaya seeds dose of 200 mg/kg bw and 400
mg/kg bw were significantly (p < 0.05) can lower total cholesterol by an average
of 60.25 mg/dl; 54.25 mg/dl; triglyceride levels of 73 mg/dl; 54.25 mg/dl; and
LDL levels of 4.5 mg/dl; 5.25 mg/dl. Just a dose of 200 mg/kg bw which does not
provide any significant difference from normal controls. HDL levels are not
increased in both dose administration of ethanol extract of papaya seeds.
The conclusion of this study indicated ethanol extract of papaya seeds can
lower total cholesterol, triglycerides, and LDL levels, but can not increase HDL
levels in dyslipidemia rats.
Keywords: Ethanol extract of papaya seeds, lipid profile, propylthiouracil
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL .................................................................................................
i
HALAMAN JUDUL ............................................................................
ii
PENGESAHAN SKRIPSI ....................................................................
iii
KATA PENGANTAR ..........................................................................
iv
ABSTRAK ...........................................................................................
vi
ABSTRACT .........................................................................................
vii
DAFTAR ISI ........................................................................................
viii
DAFTAR TABEL .................................................................................
xiii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................
xiv
DAFTAR LAMPIRAN .........................................................................
xv
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................
1
1.1 Latar Belakang ........................................................................
1
1.2 Rumusan Masalah ...................................................................
4
1.3 Hipotesis .................................................................................
4
1.4 Tujuan Penelitian .....................................................................
5
1.5 Manfaat Penelitian ...................................................................
5
1.6 Kerangka Pikir ........................................................................
6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..........................................................
7
2.1 Uraian Tumbuhan ....................................................................
7
2.1.1
Sejarah Tumbuhan .......................................................
7
2.1.2
Sistematika Tumbuhan .................................................
7
2.1.3
Nama Daerah ...............................................................
7
Universitas Sumatera Utara
2.1.4 Morfologi Tumbuhan ...................................................
8
2.1.5
Kandungan Biji Pepaya ................................................
9
2.1.6
Manfaat Tumbuhan ......................................................
9
2.2 Ekstraksi .................................................................................
10
2.3 Propiltiourasil ..........................................................................
13
2.4 Simvastatin .............................................................................
15
2.5 Telur Puyuh .............................................................................
16
2.6 Profil lipid ...............................................................................
17
2.7 Lipid Plasma ...........................................................................
18
2.7.1
Lipoprotein ..................................................................
18
2.7.2 Apolipoprotein .............................................................
21
2.7.3 Kolesterol ....................................................................
22
2.7.4 Trigliserida ..................................................................
24
2.8 Metabolisme Lipoprotein ........................................................
24
2.8.1 Jalur Metabolisme Eksogen ..........................................
25
2.8.2 Jalur Metabolisme Endogen .........................................
26
2.8.3 Jalur Reverse Cholesterol Transport ............................
26
2.9 Dislipidemia ............................................................................
27
2.9.1 Definisi ........................................................................
27
2.9.2 Klasifikasi Dislipidemia ...............................................
27
2.8.3 Kadar lipid Serum Normal ...........................................
28
BAB III METODE PENELITIAN ........................................................
29
3.1 Alat dan Bahan Penelitian .......................................................
29
3.1.1 Alat Penelitian .............................................................
29
Universitas Sumatera Utara
3.1.2
Bahan Penelitian ..........................................................
30
3.1.3 Komposisi Reagensia pada Pengukuran Kadar Profil
Lipid pada serum ..........................................................
30
3.2 Hewan Penelitian ....................................................................
30
3.3 Penyiapan Bahan Tumbuhan ...................................................
31
3.3.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan ...................................
31
3.3.2 Identifikasi Tumbuhan .................................................
31
3.3.3 Pembuatan Simplisia Biji Pepaya .................................
31
3.4 Pembuatan Pereaksi .................................................................
32
3.4.1 Pereaksi Mayer ............................................................
32
3.4.2 Pereaksi Dragendorff ...................................................
32
3.4.3 Pereaksi Bouchardat .....................................................
32
3.4.4 Pereaksi Molisch ..........................................................
32
3.4.5 Pereaksi Asam Klorida 2 N ..........................................
32
3.4.6 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ......................................... .....
33
3.4.7 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N .................................
33
3.4.8 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M ................................
33
3.4.9 Pereaksi Besi (III) Klorida 1% .....................................
33
3.4.10 Pereaksi Liebermann-Burchard .....................................
33
3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak ...................
33
3.5.1 Pemeriksaan Makroskopik ...........................................
34
3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik ............................................
34
3.5.3 Penetapan Kadar Air ....................................................
34
3.5.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air .........................
35
3.5.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol ....................
35
Universitas Sumatera Utara
3.5.6 Penetapan Kadar Abu Total .........................................
35
3.5.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam .....................
36
3.6 Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia dan Ekstrak ....................
36
3.6.1 Pemeriksaan Alkaloida ................................................
36
3.6.2 Pemeriksaan Flavonoida ....................................... .........
37
3.6.3 Pemeriksaan Tanin .......................................................
37
3.6.4 Pemeriksaan Glikosida .................................................
38
3.6.5 Pemeriksaan Saponin ...................................................
38
3.6.6 Pemeriksaan Steroida/Triterpenoida ..............................
38
3.7 Tahap Persiapan Penelitian .....................................................
39
3.7.1 Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Pepaya .........................
39
3.7.2 Pembuatan Diet Kuning Telur ......................................
39
3.7.3 Pembuatan Larutan Propiltiourasil 0,1% ......................
40
3.7.4 Pembuatan Suspensi Simvastatin 0,01% .......................
40
3.7.5 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Biji Pepaya 4% b/v
40
3.8 Tahap Pengujian ......................................................................
40
3.8.1 Pemilihan dan Penyiapan Hewan Uji ......................
40
3.8.2 Perlakuan Terhadap Hewan Uji ....................................
41
3.8.3 Metode Pengukuran profil lipid serum ( Kolesterol
Total, trigliserida, HDL, dan LDL) ...............................
42
3.8.3.1 Pengukuran Kadar Kolesterol Total ................
42
3.8.3.2 Pengukuran Kadar Trigliserida .......................
43
3.8.3.3 Pengukuran Kadar Kolesterol-HDL ................
45
3.8.3.4 Pengukuran Kadar Kolesterol-LDL ................
46
3.9 Analisis Data ...........................................................................
46
Universitas Sumatera Utara
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................
47
4.1
Hasil Identifikasi Tumbuhan .................................................
47
4.2
Hasil Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak .............................
47
4.3
Hasil Skrining Serbuk Simplisia dan Ekstrak ........................
49
4.4
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya Terhadap Kadar
Kolesterol Total pada Tikus ..................................................
50
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya Terhadap Kadar
Trigliserida pada Tikus .........................................................
53
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji pepaya Terhadap Kadar
HDL pada Tikus ...................................................................
56
Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya Terhadap Kadar
LDL pada Tikus ....................................................................
58
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN ..............................................
61
5.1
Kesimpulan ...........................................................................
61
5.2
Saran .....................................................................................
63
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................
64
LAMPIRAN .........................................................................................
68
4.5
4.6
4.7
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1
Kandungan Protein dan Lemak pada Beberapa Ternak Unggas 16
Tabel 2.2 Karakteristik Lipoprotein Plasma ........................................
19
Tabel 2.3 Jenis-Jenis Apolipoprotein .................................................
22
Tabel 2.4 Kadar Lipid Serum Normal .................................................
28
Tabel 3.1 Jumlah Sampel, Standar, dan Reagensia Kolesterol yang
dibutuhkan dalam Pengukuran Kadar Kolesterol Total ........
43
Tabel 3.2
Jumlah Sampel, Standar dan Reagensia Trigliserida yang
dibutuhkan dalam Pengukuran Kadar Trigliserida ...............
44
Tabel 3.3 Prosedur Presipitasi HDL ....................................................
45
Tabel 3.4
Jumlah Sampel, Standar, dan Reagensia Kolesterol yang
dibutuhkan dalam Pengukuran Kadar HDL .........................
45
Tabel 4.1 Hasil Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol Biji Pepaya
48
Tabel 4.2 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Etanol Biji
Pepaya ................................................................................
50
Tabel 4.3 Hasil Rata-Rata Kadar Kolesterol Total (mg/dl) pada Tikus
Setelah Perlakuan 21 Hari ...................................................
50
Tabel 4.4 Hasil Rata-Rata Kadar Trigliserida (mg/dl) Serum Tikus
Setelah Perlakuan 21 Hari ...................................................
54
Tabel 4.5 Hasil Rata-Rata Kadar HDL (High Density Lipoprotein)
(mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari ..................
56
Tabel 4.6 Hasil Rata-Rata Kadar LDL (Low Density Lipoprotein)
(mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari ..................
58
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.1
Diagram Kerangka Pikir Penelitian ................................
6
Gambar 2.1
Struktur Propiltiourasil ...................................................
13
Gambar 2.2
Efek Hormon Tiroid pada Metabolisme Lipid ................
14
Gambar 2.3
Struktur Simvastatin .......................................................
15
Gambar 2.4
Struktur Lipoprotein .......................................................
19
Gambar 2.5
Jalur Biosintesis Kolesterol ............................................
23
Gambar 4.1
Diagram Rata-Rata Kadar Kolesterol Total (mg/dl)
Serum Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari ..........................
51
Diagram Rata-Rata Kadar Trigliserida (mg/dl) Serum
Tikus Setelah Perlakuan 21 Hari .....................................
54
Diagram Rata-Rata Kadar HDL (High Density
Lipoprotein) (mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21
Hari ................................................................................
57
Diagram Rata-Rata Kadar LDL (Low Density
Lipoprotein) (mg/dl) Serum Tikus Setelah Perlakuan 21
Hari ................................................................................
59
Gambar 4.2
Gambar 4.3
Gambar 4.4
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1.
Hasil Identifikasi Tumbuhan ..........................................
69
Lampiran 2.
Tumbuhan Pepaya (Carica papaya L.) ...........................
70
Lampiran 3.
Karakteristik Biji Pepaya ................................................
71
Lampiran 4.
Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia Biji
Pepaya ...........................................................................
72
Bagan Pembuatan, Skrining Fitokimia dan Karakterisasi
Serbuk Simplisia ............................................................
73
Bagan Pembuatan, Skrining Fitokimia dan Karakterisasi
Ekstrak ...........................................................................
74
Lampiran 7.
Bagan Kerja Pengujian Ekstrak Etanol Biji Pepaya ........
75
Lampiran 8.
Bagan Kerja Pengambilan Darah Tikus ..........................
76
Lampiran 9.
Bagan Kerja Pengukuran Kadar Kolesterol Total ............
77
Lampiran 10. Bagan Kerja Pengukuran Kadar Trigliserida ...................
78
Lampiran 11. Bagan Kerja Pengukuran Kadar High Density
Lipoprotein (HDL) .........................................................
79
Lampiran 12. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristisasi Simplisia
Biji Pepaya .....................................................................
80
Lampiran 13. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristisasi Ekstrak
Etanol Biji Pepaya ..........................................................
85
Lampiran 14. Contoh Perhitungan Dosis ..............................................
90
Lampiran 15. Data Hasil Pengukuran Profil Lipid pada Tikus ..............
93
Lampiran 16. Hasil Analisis ANOVA Kadar Profil Lipid pada Tikus ...
94
Lampiran 17. Alat dan Bahan ............................................ ..................
103
Lampiran 18. Hewan Percobaan ...........................................................
106
Lampiran 5.
Lampiran 6.
Universitas Sumatera Utara