Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Nipah (Nypa fruticans Wurmb) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan
39
Lampiran 2. Gambar tumbuhan nipah
Tumbuhan nipah
40
Lampiran 3. Gambardaun nipah segar dan simplisia serta serbuk simplisia
Daun nipah segar
Simplisia
41
Lampiran 3. (Lanjutan)
Serbuk simplisia
42
Lampiran 4. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun nipah
Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun nipah (perbesaran 10x40)
1
2
3
Keterangan:
1. Berkas pembuluh bentuk spiral
2. Stomata tipe parasitik
3. Minyak atsiri
43
Lampiran 5. Perhitungan penetapan kadar air simplisia daun nipah
Kadar air
a.
=
Volume II - Volume I
Berat sampel
= 5,034 g
Volume I
= 1,30 ml
Volume II
= 1,55 ml
Kadar air
=
b. Berat sampel
x 100%
1,55-1,30
x 100% = 4,97%
5,034
= 5,031 g
Volume I
= 1,55 ml
Volume II
= 1,85 ml
Kadar air
=
Berat sampel
= 5,015 g
Volume I
= 1,85 ml
Volume II
= 2,15 ml
Kadar air
=
Kadar air rata-rata
=
c.
Berat sampel
1,85-1,55
5,031
2,15-1,85
5,015
x 100% = 5,96%
x 100% = 5,98%
(4,97 + 5,96 + 5,98 )%
3
44
= 5,64%
Lampiran 6. Perhitungan penetapankadar sari larutdalam air simplisia daun
nipah
Kadar sari =
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel 20
a. Berat sampel = 5,023 g
Berat sari
= 0,214 g
Kadar sari
=
0,214
5,023
x
100
x 100% = 21,30%
20
b. Berat sampel = 5,008 g
Berat sari
= 0,193 g
Kadar sari
=
0,193
5,008
x
100
x 100% = 19,27%
20
c. Berat sampel = 5,042 g
Berat sari
= 0,174 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,174
5,042
x
100
20
x 100% = 17,25%
(21,30 + 19,27 + 17,25)%
3
45
= 19,27%
Lampiran 7. Perhitungan penetapankadar sarilarutdalam etanol simplisia daun
nipah
Kadar sari =
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel 20
a. Berat sampel = 5,006 g
Berat sari
= 0,176 g
Kadar sari
=
0,176
5,006
x
100
20
x100% =17,57%
b. Berat sampel = 5,012 g
Berat sari
= 0,143 g
Kadar sari
=
0,143
5,012
x
100
20
x100% = 14,26%
c. Berat sampel = 5,009 g
Berat sari
= 0,168 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,168
5,009
x
100
20
x 100% = 16,77%
(17,57 + 14,26 + 16,77)%
3
46
= 16,20%
Lampiran 8. Perhitungan penetapankadarabu total simplisia daun nipah
Kadar abu total =
Berat abu
x100%
Berat sampel
a. Berat sampel = 2,0041 g
Berat abu
= 0,1262 g
Kadar abu
=
0,1262
2,0041
x 100 % = 6,29 %
b. Berat sampel = 2,0172 g
Berat abu
= 0,1354 g
Kadar abu
=
0,1354
x 100% = 6,71%
2,0172
c. Berat sampel = 2,0080 g
Berat abu
= 0,1221 g
Kadar abu
=
0,1221
2,0080
Kadar abu total rata-rata =
x 100% = 6,08%
(6,29 + 6,71 + 6,08)%
3
47
= 6,36%
Lampiran 9. Perhitungan penetapankadarabu tidaklarutdalamasam simplisia
daun nipah
Kadar abu yang tidaklarutdalamasam =
Sampel I
Sampel II
Sampel III
Berat abu
Berat sampel
x 100%
Berat sampel = 2,0041 g
Berat abu
= 0,0361 g
Kadar abu
=
0,0361
2,0041
x 100% = 1,80 %
Berat sampel = 2,0172 g
Berat abu
= 0,0290 g
Kadar abu
=
0,0290
2,0172
x 100% = 1,44%
Berat sampel = 2,0080 g
Berat abu
= 0,0312 g
Kadar abu
=
0,0312
2,0080
x 100% = 1,55 %
Kadar abu yang tidaklarutdalamasam rata-rata =
48
(1,80 + 1,44 + 1,55)%
3
= 1,59%
Lampiran 10. Bagan kerja penelitian
Daun nipah
dicuci dari pengotor sampai bersih
ditiriskan
ditimbang berat basahnya
Simplisia
pemeriksaan organoleptis
dikeringkan pada lemari pengering
dengan suhu 40-50°
ditimbang berat keringnya
Simplisia
dihaluskan dengan blender
disimpan dalam wadah yang
tertutup rapat sebelum digunakan
Serbuk simplisia
Karakterisasi
• kadar air
• kadar sari larut dalam air
• kadar sari larut dalam
etanol
• kadar abu total
• kadar abu tidak larut
dalam asam
d l
Skrining fitokimia
senyawa golongan:
• flavonoid
• glikosida
• saponin
• tanin
• steroid/triterpenoid
49
Ekstraksi
Lampiran 10. (Lanjutan)
300 g serbuk simplisia
dimasukkan ke dalam wadah
dituangi dengan 75 bagian etanol 96% dan
ditutup
dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya,
sambil sering diaduk
diserkai dan diperas
dicuci ampas dengan cairan penyari secukupnya
hingga diperoleh 100 bagian
dipindahkan kedalam bejana bertutup
dibiarkan ditempat sejuk terlindung dari cahaya
selama 2 hari
dienap tuangkan atau disaring
Maserat
dipekatkan denganrotaryevaporator
Ekstrak kental (53,20 g)
Skrining fitokimia
Uji aktivitas antibakteri
senyawa golongan:
• flavonoid
• glikosida
• saponin
• tanin
• steroid/triterpenoid
Hasil
50
Lampiran 10. (Lanjutan)
Biakan murni bakteri
diambil dengan jarum ose steril
ditanam pada media nutrient agar miring
diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam
Stok kultur bakteri
disuspensikan dalam 10 ml media nutrient
broth steril
diukur kekeruhan suspensi bakteri
menggunakan spektrofotometer visible pada
panjang gelombang 580 nm sampai diperoleh
nilai transmitan 25%
Inokulum bakteri
dimasukkan 0,1 ml inokulum ke dalam
cawan petri
ditambahkan 15 ml media nutrient agar ke
dalam cawan petri
dihomogenkan dan dibiarkan hingga
memadat
Media padat
diletakkan pencadang kertas yang telah
direndam ke dalam larutan uji ekstrak
dengan berbagai konsentrasi dan pelarut
DMSO sebagai blanko
diinkubasi pada suhu 37oC selama 18 - 24
jam
diukur diameter daerah hambatan di sekitar
pencadang kertas dengan menggunakan
jangka sorong
Hasil
51
Lampiran 11. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak
etanol daun nipah
Diameter Daerah Hambat Pertumbuhan Bakteri (mm)
Konsentrasi
Ekstrak
(mg/ml)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
500
400
300
200
100
D1
17,8
16,7
16,2
15,4
14,2
D2
17,6
16,5
16,4
15,3
14,1
D3
17,9
16,8
16,1
15,4
14,5
D*
17,77
16,67
16,23
15,37
14,27
D1
18,5
17,2
16,3
15,6
14,8
D2
18,7
17,4
16,2
15,4
15,2
D3
18,8
16,9
16,7
15,9
15,1
D*
18,67
17,17
16,40
15,63
15,03
75
50
25
13,7
12,2
10,2
13,4
12,7
10,7
14,4
12,9
10,8
13,83
12,60
10,57
13,9
12,2
11,3
14,1
12,9
11,4
14,3
13,1
11,6
14,10
12,73
11,43
12,5
7,7
7,7
7,6
7,67
8,4
8,2
8,3
8,30
6,25
Blanko
-
-
-
-
-
-
-
-
Keterangan:
D
= Diameter daerah hambatan
1,2,3 = Perlakuan
*
= Rata-rata
= Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
52
Lampiran 12. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah
terhadap bakteri Staphylococcus aureus
200
500
300
Blanko
400
100
A
B
75
12,5
25
50
6,25
C
Blanko
D
Keterangan
A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml
B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko
C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml
D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko
53
Lampiran 13. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah
terhadap bakteri Escherichia coli
200
500
Blanko
400
100
300
A
B
12,5
75
6,25
Blanko
25
50
C
D
Keterangan
A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml
B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko
C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml
D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko
54
39
Lampiran 2. Gambar tumbuhan nipah
Tumbuhan nipah
40
Lampiran 3. Gambardaun nipah segar dan simplisia serta serbuk simplisia
Daun nipah segar
Simplisia
41
Lampiran 3. (Lanjutan)
Serbuk simplisia
42
Lampiran 4. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun nipah
Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun nipah (perbesaran 10x40)
1
2
3
Keterangan:
1. Berkas pembuluh bentuk spiral
2. Stomata tipe parasitik
3. Minyak atsiri
43
Lampiran 5. Perhitungan penetapan kadar air simplisia daun nipah
Kadar air
a.
=
Volume II - Volume I
Berat sampel
= 5,034 g
Volume I
= 1,30 ml
Volume II
= 1,55 ml
Kadar air
=
b. Berat sampel
x 100%
1,55-1,30
x 100% = 4,97%
5,034
= 5,031 g
Volume I
= 1,55 ml
Volume II
= 1,85 ml
Kadar air
=
Berat sampel
= 5,015 g
Volume I
= 1,85 ml
Volume II
= 2,15 ml
Kadar air
=
Kadar air rata-rata
=
c.
Berat sampel
1,85-1,55
5,031
2,15-1,85
5,015
x 100% = 5,96%
x 100% = 5,98%
(4,97 + 5,96 + 5,98 )%
3
44
= 5,64%
Lampiran 6. Perhitungan penetapankadar sari larutdalam air simplisia daun
nipah
Kadar sari =
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel 20
a. Berat sampel = 5,023 g
Berat sari
= 0,214 g
Kadar sari
=
0,214
5,023
x
100
x 100% = 21,30%
20
b. Berat sampel = 5,008 g
Berat sari
= 0,193 g
Kadar sari
=
0,193
5,008
x
100
x 100% = 19,27%
20
c. Berat sampel = 5,042 g
Berat sari
= 0,174 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,174
5,042
x
100
20
x 100% = 17,25%
(21,30 + 19,27 + 17,25)%
3
45
= 19,27%
Lampiran 7. Perhitungan penetapankadar sarilarutdalam etanol simplisia daun
nipah
Kadar sari =
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel 20
a. Berat sampel = 5,006 g
Berat sari
= 0,176 g
Kadar sari
=
0,176
5,006
x
100
20
x100% =17,57%
b. Berat sampel = 5,012 g
Berat sari
= 0,143 g
Kadar sari
=
0,143
5,012
x
100
20
x100% = 14,26%
c. Berat sampel = 5,009 g
Berat sari
= 0,168 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,168
5,009
x
100
20
x 100% = 16,77%
(17,57 + 14,26 + 16,77)%
3
46
= 16,20%
Lampiran 8. Perhitungan penetapankadarabu total simplisia daun nipah
Kadar abu total =
Berat abu
x100%
Berat sampel
a. Berat sampel = 2,0041 g
Berat abu
= 0,1262 g
Kadar abu
=
0,1262
2,0041
x 100 % = 6,29 %
b. Berat sampel = 2,0172 g
Berat abu
= 0,1354 g
Kadar abu
=
0,1354
x 100% = 6,71%
2,0172
c. Berat sampel = 2,0080 g
Berat abu
= 0,1221 g
Kadar abu
=
0,1221
2,0080
Kadar abu total rata-rata =
x 100% = 6,08%
(6,29 + 6,71 + 6,08)%
3
47
= 6,36%
Lampiran 9. Perhitungan penetapankadarabu tidaklarutdalamasam simplisia
daun nipah
Kadar abu yang tidaklarutdalamasam =
Sampel I
Sampel II
Sampel III
Berat abu
Berat sampel
x 100%
Berat sampel = 2,0041 g
Berat abu
= 0,0361 g
Kadar abu
=
0,0361
2,0041
x 100% = 1,80 %
Berat sampel = 2,0172 g
Berat abu
= 0,0290 g
Kadar abu
=
0,0290
2,0172
x 100% = 1,44%
Berat sampel = 2,0080 g
Berat abu
= 0,0312 g
Kadar abu
=
0,0312
2,0080
x 100% = 1,55 %
Kadar abu yang tidaklarutdalamasam rata-rata =
48
(1,80 + 1,44 + 1,55)%
3
= 1,59%
Lampiran 10. Bagan kerja penelitian
Daun nipah
dicuci dari pengotor sampai bersih
ditiriskan
ditimbang berat basahnya
Simplisia
pemeriksaan organoleptis
dikeringkan pada lemari pengering
dengan suhu 40-50°
ditimbang berat keringnya
Simplisia
dihaluskan dengan blender
disimpan dalam wadah yang
tertutup rapat sebelum digunakan
Serbuk simplisia
Karakterisasi
• kadar air
• kadar sari larut dalam air
• kadar sari larut dalam
etanol
• kadar abu total
• kadar abu tidak larut
dalam asam
d l
Skrining fitokimia
senyawa golongan:
• flavonoid
• glikosida
• saponin
• tanin
• steroid/triterpenoid
49
Ekstraksi
Lampiran 10. (Lanjutan)
300 g serbuk simplisia
dimasukkan ke dalam wadah
dituangi dengan 75 bagian etanol 96% dan
ditutup
dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya,
sambil sering diaduk
diserkai dan diperas
dicuci ampas dengan cairan penyari secukupnya
hingga diperoleh 100 bagian
dipindahkan kedalam bejana bertutup
dibiarkan ditempat sejuk terlindung dari cahaya
selama 2 hari
dienap tuangkan atau disaring
Maserat
dipekatkan denganrotaryevaporator
Ekstrak kental (53,20 g)
Skrining fitokimia
Uji aktivitas antibakteri
senyawa golongan:
• flavonoid
• glikosida
• saponin
• tanin
• steroid/triterpenoid
Hasil
50
Lampiran 10. (Lanjutan)
Biakan murni bakteri
diambil dengan jarum ose steril
ditanam pada media nutrient agar miring
diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam
Stok kultur bakteri
disuspensikan dalam 10 ml media nutrient
broth steril
diukur kekeruhan suspensi bakteri
menggunakan spektrofotometer visible pada
panjang gelombang 580 nm sampai diperoleh
nilai transmitan 25%
Inokulum bakteri
dimasukkan 0,1 ml inokulum ke dalam
cawan petri
ditambahkan 15 ml media nutrient agar ke
dalam cawan petri
dihomogenkan dan dibiarkan hingga
memadat
Media padat
diletakkan pencadang kertas yang telah
direndam ke dalam larutan uji ekstrak
dengan berbagai konsentrasi dan pelarut
DMSO sebagai blanko
diinkubasi pada suhu 37oC selama 18 - 24
jam
diukur diameter daerah hambatan di sekitar
pencadang kertas dengan menggunakan
jangka sorong
Hasil
51
Lampiran 11. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak
etanol daun nipah
Diameter Daerah Hambat Pertumbuhan Bakteri (mm)
Konsentrasi
Ekstrak
(mg/ml)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
500
400
300
200
100
D1
17,8
16,7
16,2
15,4
14,2
D2
17,6
16,5
16,4
15,3
14,1
D3
17,9
16,8
16,1
15,4
14,5
D*
17,77
16,67
16,23
15,37
14,27
D1
18,5
17,2
16,3
15,6
14,8
D2
18,7
17,4
16,2
15,4
15,2
D3
18,8
16,9
16,7
15,9
15,1
D*
18,67
17,17
16,40
15,63
15,03
75
50
25
13,7
12,2
10,2
13,4
12,7
10,7
14,4
12,9
10,8
13,83
12,60
10,57
13,9
12,2
11,3
14,1
12,9
11,4
14,3
13,1
11,6
14,10
12,73
11,43
12,5
7,7
7,7
7,6
7,67
8,4
8,2
8,3
8,30
6,25
Blanko
-
-
-
-
-
-
-
-
Keterangan:
D
= Diameter daerah hambatan
1,2,3 = Perlakuan
*
= Rata-rata
= Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
52
Lampiran 12. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah
terhadap bakteri Staphylococcus aureus
200
500
300
Blanko
400
100
A
B
75
12,5
25
50
6,25
C
Blanko
D
Keterangan
A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml
B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko
C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml
D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko
53
Lampiran 13. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah
terhadap bakteri Escherichia coli
200
500
Blanko
400
100
300
A
B
12,5
75
6,25
Blanko
25
50
C
D
Keterangan
A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml
B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko
C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml
D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko
54