Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Nipah (Nypa fruticans Wurmb) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI

EKSTRAK ETANOL DAUN NIPAH (Nypa fruticans Wurmb)

TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara

OLEH:

PUJI NURANI

NIM 131524122

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI

EKSTRAK ETANOL DAUN NIPAH (Nypa fruticans Wurmb)

TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli

SKRIPSI

OLEH:

PUJI NURANI

NIM 131524122

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

PENGESAHAN SKRIPSI

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI

EKSTRAK ETANOL DAUN NIPAH (Nypa fruticans Wurmb)

TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli

OLEH:

PUJI NURANI

NIM 131524122

Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara

Pada Tanggal: 03 September 2015 Disetujui Oleh:

Pembimbing I, Panitia Penguji:

Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt. Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt.

NIP195310301980031002 NIP 195709091985112001

Pembimbing II, Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt.

NIP 195310301980031002

Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt.Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt.

NIP195006121980032001 NIP 195304031983032001

Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt. NIP 195107231982032001

Medan, Oktober 2015 Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara Pejabat Dekan,

Dr. Masfria, M.S., Apt. NIP 195707231986012001

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis ucapkan kepada Allah SWT atas segala limpahan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini. Shalawat beriring salam penulis hadiahkan kepada Rasulullah Muhammad SAW sebagai suri tauladan dalam kehidupan.

Skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara dengan judul “Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Nipah (Nypa fruticans Wurmb) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli”. Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Ibu Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Pejabat Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Bapak Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt dan Ibu Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing yang telah meluangkan waktu, memberikan bimbingan dan nasehat selama penelitian sehingga penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi ini. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt., Ibu Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan saran, arahan, kritik dan masukan kepada penulis dalam penyelesaian skripsi ini. Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada Ibu Dra. Sudarmi, M.Si., Apt., selaku penasehat akademik yang telah memberikan arahan dan bimbingan kepada penulis serta Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU yang telah mendidik penulis selama masa perkuliahan. Ucapan terima kasih penulis kepada Ibu kepala Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Mikrobiologi yang telah memberikan bantuan dan fasilitas.

Ucapan terimakasih dan penghargaan yang sebesar-besarnya kepada Ayahanda tercinta Syahrial Amir dan Ibunda tercintaAlmh. Erlina serta ucapan terima kasih penulis kepada abangnda tercinta Darma Juang, Ali Akbar, Yan Yustian, Harry Sukma dan sahabat tercinta.

Semoga Allah SWT memberikan balasan yang berlipat ganda dan pahala yang sebesar-besarnya kepada semua pihak yang telah membantu dalam penyelesaian skripsi ini. Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih jauh dari kesempurnaan. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak guna perbaikan skripsi ini. Akhir kata, penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di bidang Farmasi.

Medan, September 2015 Penulis,

Puji Nurani 131524122

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN NIPAH (Nypa fruticans Wurmb) TERHADAP

Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli ABSTRAK

Nipah (Nypa fruticans Wurmb) adalah sejenis palem (palma) yang tumbuh di lingkungan hutan bakau atau daerah pasang surut air laut. Tumbuhan nipah telah biasa dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional seperti obat sakit perut, diabetes dan obat penurun panas.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa kimia dan aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Pada penelitian ini dilakukan karakterisasi, skrining fitokimia, ekstraksi dengan pelarut etanol 96% secara maserasi pada serbuk simplisia dan uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah secara in vitro dengan metode difusi agar menggunakan pencadang kertas.

Hasil karakterisasi simplisia meliputi kadar air 5,64%, kadar sari yang larut dalam air 19,27%, kadar sari yang larut dalam etanol 16,20%, kadar abu total 6,36% dan kadar abu yang tidak larut dalam asam 1,59%. Hasil skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun nipah menunjukkan hasil yang sama yaitu adanya senyawa golongan steroid/triterpen, flavonoid, glikosida, tanin dan saponin. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 100 mg/ml, dengan diameter daerah hambat yang efektif sebesar 14,27 mm. Bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 75 mg/ml dengan diameter daerah hambat yang efektif sebesar 14,10 mm.

PHYTOCHEMICAL SCREENING AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACT NIPA LEAVES (Nypa fruticans Wurmb)

AGAINST Staphylococcus aureus AND Escherichia coli ABSTRACT

Nipa(Nypa fruticansWurmb) isa type of palm(palm) that growthin themangroveforestsor areastide. Nipa haveusuallyused astraditional medicineingredientssuch asupset stomach, diabetesandfebrifuge.

This study aims to determine the class of chemical compounds and antibacterial activity of nipa leaves ethanol extract. This research were used characterization, phytochemical screeningandextractionwith maceration was carried out by using ethanol 96% at simplex andtesting antibacterial activity nipa leaves ethanol extracts against StaphylococcusaureusandEscherichiacoli that was conducted as invitro agar diffusion method by using the paper disk.

The result of simplexcharacterization obtained water value 5.64% the water soluble extract value content19.27%, the ethanol solubleextract value 16.20%, the total ash value 6.36% and the acid insoluble ash value1.59%. The result ofphytochemical screening is steroid/triterpenoid, flavonoida, glycosida, tanninandsaponin. The resultsof antibacterial activityof nipa leaves ethanolextract caninhibit the growth of bacteria Staphylococcusaureusat concentrationof 100mg/ml, withan effectivediameter of theinhibitionareaof 14.27mm. The bacteria Escherichia coli at a concentration of 75 mg/ml, with the effective diameter of the inhibition area of 14.10 mm.

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ... i

LEMBAR PENGESAHAN ... iii

KATA PENGANTAR ... iv

ABSTRAK ... vi

ABSTRACT ... vii

DAFTAR ISI ... viii

DAFTAR TABEL ... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ... xiv

BAB I PENDAHULUAN ... 1

1.1Latar Belakang ... 1

1.2Perumusan Masalah ... 3

1.3Hipotesis ... 3

1.4Tujuan Penelitian ... 4

1.5Manfaat Penelitian ... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 5

2.1 Uraian Tumbuhan ... 5

2.1.1 Sistematika tumbuhan ... 5

2.1.2 Nama daerah ... 5

2.1.3 Morfologi tumbuhan ... 6

2.1.4 Penggunaan tumbuhan ... 6

2.1.1 Metode ekstraksi ... 8

2.3 Bakteri ... 9

2.3.1 Uraian umum ... 9

2.3.2 Staphylococcus aureus ... 11

2.3.2 Escherichia coli ... 12

2.4 Morfologi Bakteri ... 13

2.5 Fase Pertumbuhan Mikroorganisme ... 14

2.6 Pengujian Aktivitas Antimikroba ... 15

BAB III METODE PENELITIAN ... 17

3.1 Tempat Pelaksanaan Penelitian ... 17

3.2 Metode Penelitian ... 17

3.3 Alat dan Bahan ... 17

3.3.1 Alat ... 17

3.3.2 Bahan ... 18

3.4 Penyediaan Sampel ... 18

3.4.1 Pengambilan sampel ... 18

3.4.2 Identifikasi tumbuhan ... 18

3.4.3 Pengolahan sampel ... 18

3.5 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia ... 19

3.5.1 Pemeriksaan makroskopik ... 19

3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 19

3.5.3 Penetapan kadar air ... 19

3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air ... 20

3.5.6 Penetapan kadar abu total ... 20

3.5.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam ... 21

3.6 Pembuatan Larutan Pereaksi ... 21

3.6.1 Pereaksi Dragendorff ... 21

3.6.2 Pereaksi Bouchardat ... 21

3.6.3 Pereaksi Meyer ... 21

3.6.4 Pereaksi Molisch ... 22

3.6.5 Pereaksi asam klorida 2 N ... 22

3.6.6 Pereaksi asam sulfat 2 N ... 22

3.6.7 Pereaksi natrium hidroksida 2 N ... 22

3.6.8 Pereaksi Lieberman-Burchard ... 22

3.6.9 Pereaksi besi (III) klorida 1% (b/v) ... 22

3.6.10 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M ... 22

3.6.11 Pereaksi kloralhidrat ... 22

3.7 Uji Golongan Senyawa Kimia ... 23

3.7.1 Pemeriksaan alkaloid ... 23

3.7.2 Pemeriksaan glikosida ... 23

3.7.3 Pemeriksaan flavonoid ... 24

3.7.4 Pemeriksaan tanin ... 24

3.7.5 Pemeriksaan saponin ... 24

3.7.6 Pemeriksaan antrakinon ... 24

3.7.7 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ... 25

3.8 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Nipah ... 25

3.10 Pembuatan Media ... 26

3.10.1 Pembuatan media nutrien agar ... 26

3.10.2 Pembuatan media nutrien broth ... 26

3.10.3 Pembuatan agar miring ... 27

3.11 Pembiakan Bakteri ... 27

3.11.1 Pembuatan stok kultur bakteri ... 27

3.11.1.1 Bakteri Staphylococcus aureus ... 27

3.11.1.2 Bakteri Escherichia coli ... 27

3.11.2 Pembuatan inokulum bakteri ... 27

3.11.2.1 Bakteri Staphylococcus aureus ... 27

3.11.2.2 Bakteri Escherichia coli ... 28

3.12 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Daun Nipah Dengan Berbagai Konsentrasi ... 28

3.13 Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Nipah ... 28

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 29

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 29

4.2 Hasil Pemeriksaan Karakterisasi ... 29

4.2.1 Hasil pemeriksaan makroskopik ... 29

4.2.2 Hasil pemeriksaan mikroskopik ... 29

4.2.3 Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia ... 29

4.3 Hasil Ekstraksi Daun Nipah ... 30

4.4 Hasil Skrining Fitokimia ... 31

4.5 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Nipah 32

5.1 Kesimpulan ... 35

5.2 Saran ... 35

DAFTAR PUSTAKA ... 36

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

3.2 Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia daun nipah ... 30 3.4 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak

etanol daun nipah ... 31 3.5 Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah ... 32

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman 1. Hasil identifikasi tumbuhan ... 39 2. Gambar tumbuhan nipah ... 40 3. Gambar daun nipah segar, simplisia dan serbuk simplisia

daun nipah ... 41 4. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun

nipah ... 43 5. Perhitungan penetapan kadar air simplisia daun nipah ... 44 6. Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air simplisia

daun nipah ... 45 7. Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam etanol

simplisia daun nipah ... 46 8. Perhitungan penetapan kadar abu total simplisia daun

nipah ... 47 9. Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam

simplisia daun nipah ... 48 10. Bagan kerja penelitian ... 49 11. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari

ekstrak etanol daun nipah ... 52 12. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun

nipah terhadap bakteri Staphylococcus aureus ... 53 13. Gambarpengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN NIPAH (Nypa fruticans Wurmb) TERHADAP

Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli ABSTRAK

Nipah (Nypa fruticans Wurmb) adalah sejenis palem (palma) yang tumbuh di lingkungan hutan bakau atau daerah pasang surut air laut. Tumbuhan nipah telah biasa dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional seperti obat sakit perut, diabetes dan obat penurun panas.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa kimia dan aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Pada penelitian ini dilakukan karakterisasi, skrining fitokimia, ekstraksi dengan pelarut etanol 96% secara maserasi pada serbuk simplisia dan uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah secara in vitro dengan metode difusi agar menggunakan pencadang kertas.

Hasil karakterisasi simplisia meliputi kadar air 5,64%, kadar sari yang larut dalam air 19,27%, kadar sari yang larut dalam etanol 16,20%, kadar abu total 6,36% dan kadar abu yang tidak larut dalam asam 1,59%. Hasil skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun nipah menunjukkan hasil yang sama yaitu adanya senyawa golongan steroid/triterpen, flavonoid, glikosida, tanin dan saponin. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 100 mg/ml, dengan diameter daerah hambat yang efektif sebesar 14,27 mm. Bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 75 mg/ml dengan diameter daerah hambat yang efektif sebesar 14,10 mm.

PHYTOCHEMICAL SCREENING AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACT NIPA LEAVES (Nypa fruticans Wurmb)

AGAINST Staphylococcus aureus AND Escherichia coli ABSTRACT

Nipa(Nypa fruticansWurmb) isa type of palm(palm) that growthin themangroveforestsor areastide. Nipa haveusuallyused astraditional medicineingredientssuch asupset stomach, diabetesandfebrifuge.

This study aims to determine the class of chemical compounds and antibacterial activity of nipa leaves ethanol extract. This research were used characterization, phytochemical screeningandextractionwith maceration was carried out by using ethanol 96% at simplex andtesting antibacterial activity nipa leaves ethanol extracts against StaphylococcusaureusandEscherichiacoli that was conducted as invitro agar diffusion method by using the paper disk.

The result of simplexcharacterization obtained water value 5.64% the water soluble extract value content19.27%, the ethanol solubleextract value 16.20%, the total ash value 6.36% and the acid insoluble ash value1.59%. The result ofphytochemical screening is steroid/triterpenoid, flavonoida, glycosida, tanninandsaponin. The resultsof antibacterial activityof nipa leaves ethanolextract caninhibit the growth of bacteria Staphylococcusaureusat concentrationof 100mg/ml, withan effectivediameter of theinhibitionareaof 14.27mm. The bacteria Escherichia coli at a concentration of 75 mg/ml, with the effective diameter of the inhibition area of 14.10 mm.

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Masyarakat Indonesia sudah sejak zaman dahulu mengenal dan menggunakan tanaman berkhasiat obat sebagai salah satu upaya untuk menanggulangi berbagai masalah kesehatan, jauh sebelum pelayanan kesehatan formal dan obat-obatan modern menyentuh lapisan masyarakat. Pemanfaatan tumbuhan obat di Indonesia secara tradisional semakin disukai karena efek samping lebih kecil dari obat yang dibuat secara sintesis. Mahalnya obat sintesis membuat masyarakat beralih ke tumbuhan obat. Penggunaan tumbuhan obat di masyarakat terutama untuk mencegah penyakit, menjaga kesegaran tubuh maupun mengobati penyakit (Mursito, 2001).

Khasiat tanaman obat di Indonesia masih berdasarkan data empiris, sehingga perlu dibuktikan secara ilmiah. Bukti-bukti ilmiah akan lebih meningkatkan dan memantapkan masyarakat dalam menggunakan obat tradisional (Mursito, 2001).

Indonesia memiliki potensi hutan nipah terluas di dunia dengan luas 700.000 hektar. Tumbuhan nipah (Nypa fruticans Wurmb) telah biasa dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional seperti obat sakit perut, diabetes dan obat penurun panas dalam oleh masyarakat pesisir Perairan Banyuasin Sumatera Selatan. Arang dari akar nipah digunakan sebagai obat sakit gigi dan sakit kepala Ekstrak tumbuhan nipah mampu menghambat penyakit tuberkulosis, penyakit hati (liver) juga sebagai karminatif (Putri, et.al., 2012).

Masyarakat menggunakan daun muda yang masih menggulung sebagai pembungkus rokok. Bagian tulang anak daun yang masih muda digunakan untuk mengobati sariawan atau sakit tenggorokan. Pucuk daun muda yang masih menguncup digunakan sebagai obat batuk dengan cara dimemarkan dan ditumbuk lalu diperas airnya, kemudian air perasan tersebut dicampur dengan madu dan diminum (Siregar, 2012). Daun yang masih muda digunakan oleh masyarakat di daerah Labuhan Sumatera Utara sebagai obat diare, dengan cara merebus daun muda tersebut menggunakan air, lalu meminum air rebusannya.

Berdasarkan penelitian sebelumnya, ekstrak etanol daun nipah tua yang telah diformulasi menjadi sabun memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus (Guzman, et al., 2014).

Penelitian yang dilakukan oleh Bakshi (2014), ekstrak n-heksan, etil asetat, aseton dan metanol daun nipah yang diekstraksi secara sokletasi, menunjukkan adanya aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli, Agrobacterium tumefaciens, Streptococcus mutans dan Staphylococcus aureus.

Menurut Osabor (2008), nipah (Nypa fruticans Wurmb) mengandung senyawa polifenol dan tanin. Tumbuhan yang kaya akan berbagai metabolit sekunder, seperti tanin, terpenoid, alkaloid dan flavonoid telah diteliti secara in vitro memiliki sifat antimikroba.

Staphylococcus aureus dapat menghasilkan enterotoksin yang dapat menyebabkan keracunan makanan dengan menimbulkan berbagai gejala, seperti muntah, diare, mual, kejang dan kram pada abdominal serta sakit kepala (Tood, 1999). Selain bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli juga dapat menyebabkan diare dan infeksi saluran kemih (Karsinah, et.al, 1994).

Berdasarkan uraian tersebut maka dilakukan penelitian skrining fitokimia dan uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah muda (Nypa fruticans Wurmb) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Penelitian ini meliputi karakterisasi simplisia dimana persyaratannnya belum tertera di Materia Medika Indonesia, pembuatan ekstrak etanol dari simplisia secara maserasi, uji golongan senyawa kimia terhadap simplisia dan ekstrak etanol daun nipah, pembuatan larutan uji ekstrak etanol dengan berbagai konsentrasi, serta uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri gram positif yaitu Staphylococcus aureus dan bakteri gram negatif yaitu Escherichia coli.

1.2 Perumusan Masalah

Berdasarkan uraian di atas maka permasalahan pada penelitian ini adalah: 1. apakah karakteristik dari simplisia daun nipah dapat diperoleh dengan

menggunakan metode karakterisasi yang tertera pada Materia Medika Indonesia?

2. apa saja golongan senyawa yang terdapat pada daun nipah?

3. apakah ekstrak etanol daun nipah mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

1.3 Hipotesis

Berdasarkan perumusan masalah di atas maka hipotesis penelitian ini adalah: 1. karakteristik dari simplisia daun nipah dapat diperoleh dengan

menggunakan metode karakterisasi yang tertera pada Materia Medika Indonesia.

2. golongan senyawa kimia yang terdapat di dalam daun nipah adalah tanin, glikosida, steroid/triterpenoid, flavonoid dan saponin

3. ekstrak etanol daun nipah mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

1.4 Tujuan Penelitian

Adapun tujuan dari penelitian ini adalah:

1. untuk mengetahui karakteristik simplisia daun nipah.

2. untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terdapat di dalam daun nipah.

3. untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

1.5 Manfaat Penelitian

Manfaat penelitian yang dilakukan yaitu:

1. sebagai informasi tentang karakteristik simplisia, golongan senyawa kimia dan aktivitas antibakteri dari ekstrak daun nipah.

2. menambah inventaris obat-obat tradisional yang mempunyai aktivitas antibakteri.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Tumbuhan

Uraian tumbuhan meliputi, sistematika tumbuhan, nama daerah, morfologi tumbuhan, serta penggunaan tumbuhan.

2.1.1 Sistematika tumbuhan

Sistematika tumbuhan nipah menurut Tjitrosoepomo (2005), sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta Sub divisi : Angiospermae Class : Monocotyledoneae Ordo : Arecales

Famili : Arecaceae Genus : Nypa

Spesies : Nypa fruticans Wurmb. 2.1.2 Nama daerah

Pohon nipah mempunyai berbagai nama lokal di Indonesia seperti daon, daonan, nipah, bhunjok, lipa, buyuk (Sunda, Jawa), buyuk (Bali), bhunyok (Madura), bobo (Menado, Ternate, Tidore), boboro (Halmahera), palean, palenei, pelene, pulene, puleanu, pulenu, puleno, pureno, parinan, parenga, (Maluku). Nipah dikenal dengan nama attap palm (Singapura) dan nipa palm (Filipina) (Siregar, 2012).

2.1.3 Morfologi tumbuhan

Batang nipah menjalar di tanah membentuk rimpang yang terendam oleh lumpur. Hanya daunnya yang muncul di atas tanah, sehingga nipah tampak seolah-olah tak berbatang. Akar serabut dapat mencapai panjang 13 meter. Dari rimpang tumbuh daun majemuk setinggi 9 meter dengan tangkai daun sekitar 1-1,5 m. Panjang anak daun dapat mencapai 100 cm dan lebar daun 4-7 cm. Daun nipah yang masih muda berwarna kuning sedangkan yang tua berwarna hijau. Daunnya seperti susunan daun kelapa (Siregar, 2012).

Bunga nipah majemuk muncul dari ketiak daun dengan bunga betina terkumpul di ujung membentuk bola dan bunga jantan tersusun dalam malai serupa untai merah, jingga atau kuning pada cabang di bawahnya. Panjang tangkai bunga mencapai 100-170 cm. Tandan bunga inilah yang dapat disadap untuk diambil niranya (Siregar, 2012).

Buah nipah berbentuk bulat telur dan gepeng, berwarna coklat kemerahan. Panjang buahnya sekitar 13 cm dengan lebar 11 cm. Buah berkelompok membentuk bola berdiameter sekitar 30 cm, dalam satu tandan dapat terdiri antara 30-50 butir buah (Siregar, 2012)

2.1.4 Penggunaan tumbuhan

Nipah merupakan tumbuhan yang telah dimanfaatkan secara luas di kawasan Asia Tenggara. Cairan nipah yang di sadap dari tangkai bunga dikenal dengan nama nira. Cairan nipah yang telah difermentasi digunakan sebagai sirup, alkohol, cuka atau tuak yang dikonsumsi sebagai bir lokal. Daunnya dapat dibuat sebagai atap rumah. Tulang daun digunakan untuk membuat sapu lidi, keranjang, tikar dan topi. Endorsperma putih dari biji muda yang memiliki rasa manis seperti

jelly, dikonsumsi sebagai makanan ringan. Daun muda yang masih menggulung digunakan untuk pembungkus rokok (Siregar, 2012).

Nipah selain bisa dijadikan makanan, juga mempunyai khasiat untuk dijadikan obat-obatan seperti bagian tulang anak daun nipah yang masih muda dapat mengobati sariawan atau sakit tenggorokan dengan menggigit tulang daun tersebut dan menghisap airnya. Pucuk daun muda yang masih menguncup dapat digunakan sebagai obat batuk. Pucuk daun tersebut dimemarkan dan ditumbuk lalu diperas airnya, kemudian air perasan tersebut dicampur dengan madu dan diminum. Arang dari akar nipah digunakan sebagai obat sakit gigi dan sakit kepala (Siregar, 2012).

2.2 Ekstraksi

Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak larut menggunakan pelarut cair. Simplisia yang diekstraksi mengandung senyawa aktif yang dapat larut dan senyawa yang tidak dapat larut seperti serat, karbohidrat, protein dan lain-lain. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan kedalam golongan minyak atsiri, alkaloida, flavonoida dan lain-lain. Mengetahui senyawa aktif yang dikandung simplisia akan mempermudah pemilihan pelarut dengan cara yang tepat (Ditjen POM, 2000).

Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Ditjen POM, 1995).

2.2.1 Metode ekstraksi

Menurut Ditjen POM (2000), ada beberapa metode ekstraksi yaitu: 1. Cara dingin

Ekstraksi dengan cara dingin terdiri dari: a. Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstraksian simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang (kamar). Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinu (terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan maserat selanjutnya..

b. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruang. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan.

2. Cara panas

Ekstraksi dengan cara panas terdiri dari: a. Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya pada metode ini dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna.

b. Sokletasi

Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

c. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50°C.

d. Infudasi

Infudasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada temperatur 90oC selama 15 menit.

e. Dekoktasi

Dekoktasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada temperatur 90oC selama 30 menit.

2.3 Bakteri

2.3.1 Uraian umum

Nama bakteri berasal dari kata “bakterion” dari bahasa Yunani yang berarti tongkat atau batang, sekarang nama itu dipakai untuk menyebut sekelompok mikroorganisme yang bersel satu, berkembangbiak dengan pembelahan diri serta demikian kecilnya sehingga hanya tampak dengan mikroskop (Dwidjoseputro, 1978). Spesies bakteri dapat dibedakan berdasarkan morfologi (bentuk), komposisi kimia (umumnya dideteksi dengan reaksi kimia), kebutuhan nutrisi, aktivitas biokimia dan sumber energi (sinar matahari atau bahan kimia) (Pratiwi, 2008).

Pertumbuhan dan perkembangan bakteri dipengaruhi oleh : 1. Zat makanan (nutrisi)

Sumber zat makanan bagi bakteri diperoleh dari senyawa karbon, nitrogen, sulfur, fosfor, unsur logam, vitamin dan air untuk fungsi metabolik dan pertumbuhannya (Pelczar, et al., 1988).

2. Keasaman dan kebasaan (pH)

Kebanyakan bakteri patogen mempunyai pH optimum pertumbuhan antara 7,2-7,6 (Staf Pengajar FK Universitas Indonesia, 1993).

3. Temperatur

Proses pertumbuhan bakteri tergantung pada reaksi kimiawi dan laju reaksi kimia yang dipengaruhi oleh temperatur. Berdasarkan hal tersebut maka bakteri dapat diklasifikasikan sebagai berikut:

a. Bakteri psikofil, yaitu bakteri yang dapat hidup pada temperatur 0-30oC,

dengan temperatur optimum adalah 10-20oC.

b. Bakteri mesofil, yaitu bakteri yang dapat hidup pada temperatur 5-60oC,

temperatur optimum adalah 25-40oC.

c. Bakteri termofil, yaitu bakteri yang dapat hidup pada temperatur optimum adalah 55-65oC (Pelczar, et al.,1988).

4. Oksigen

a. Aerobik, yaitu bakteri yang membutuhkan oksigen dalam pertumbuhannya. b. Anaerobik, yaitu bakteri yang dapat tumbuh tanpa oksigen.

c. Anaerobik fakultatif, yaitu bakteri yang dapat tumbuh dengan oksigen ataupun tanpa oksigen.

d. Mikroaerofilik, yaitu bakteri yang dapat tumbuh baik dengan adanya sedikit oksigen (Staf Pengajar FK Universitas Indonesia, 1993).

5. Tekanan osmosa

Medium yang baik bagi pertumbuhan bakteri adalah medium isotonis terhadap isi sel bakteri (Pelczar, et al.,1988).

6. Kelembapan

Secara umum bakteri tumbuh dan berkembang biak dengan baik pada lingkungan yang lembab. Kebutuhan akan air tergantung dari jenis bakterinya (Pelczar, et al.,1988).

2.3.2 Staphylococcus aureus

Menurut Holt (1988), sistematika dari bakteri Staphylococcus aureus yaitu: Divisi : Schizophyta

Kelas : Schizomycetes Ordo : Eubacteriales Suku : Micrococcaceae Genus : Staphylococcus

Spesies : Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus termasuk dalam suku Micrococcaceae, merupakan bakteri gram positif, berbentuk bulat (kokus) atau oval dengan diameter sekitar 1

μm, terdapat tunggal dan berpasangan, secara khas membelah diri pada lebih dari

satu bidang sehingga membentuk gerombolan yang tidak teratur dan menyerupai buah anggur. Staphylococcus aureus tidak membentuk spora dan termasuk anaerob fakultatif. Tumbuh lebih cepat dan lebih banyak dalam keadaan aerobik. Staphylococcus aureus adalah bakteri mesofil dengan suhu pertumbuhan optimum

37oC. Staphylococcus aureushidup sebagai saprofit di dalam saluran-saluran

pengeluaran lendir dari tubuh manusia dan hewan seperti hidung, mulut, tenggorokan dan dapat pula dikeluarkan pada waktu batuk atau bersin (Supardi dan Sukamto, 1999).

Keracunan makanan yang disebabkan oleh enterotoksin Staphylococcus aureus dapat menimbulkan berbagai gejala. Gejala-gejala tersebut yaitu meliputi muntah, diare, mual, kejang dan kram pada abdominal serta sakit kepala (ICMSF, 1996).

2.3.3 Escherichia coli

Menurut Holt (1988), sistematika dari bakteri Escherichia coli adalah sebagai berikut:

Divisi : Schizophyta Kelas : Schizomycetes Ordo : Eubacteriales Suku : Enterobacteriaceae Genus : Escherichia

Spesies : Escherichia coli

Bakteri Escherichia coli umumnya merupakan flora normal saluran pencernaan tubuh manusia dan hewan. Escherichia coli merupakan bakteri gram negative berbentuk batang, tidak berkapsul, umumnya mempunyai fimbria dan bersifat motile. Sel Escherichia coli mempunyai ukuran panjang 2,0-6,0 μm dan lebar 1,1-1,5 μm, tersusun tunggal, berpasangan, dengan flagella peritikus (Supardi dan Sukamto, 1999).

Escherichia coli dapat memproduksi enterotoksin. Organ sasaran enterotoksin adalah usus kecil dan menyebabkan diare sebagai akibat dari pengeluaran cairan dan elektrolit (Tim Mikrobiologi FK Brawijaya, 2003).

2.4 Morfologi Bakteri

Berdasarkan morfologinya bakteri dapat dibedakan atas tiga bagian yaitu: a. Bentuk basil

Basil adalah bakteri yang mempunyai bentuk batang atau silinder dan membelah dalam satu bidang, berpasangan ataupun bentuk rantai pendek atau panjang.

Basil dapat dibedakan atas:

- Monobasil yaitu basil yang terlepas satu sama lain dengan kedua ujung tumpul. - Diplobasil yaitu basil yang bergandeng dua dan kedua ujungnya tumpul. - Streptobasil yaitu basil yang bergandengan panjang dengan kedua ujung tajam.

Adapun contoh bakteri dengan bentuk basil yaitu Eschericia coli, Bacillus anthracis, Salmonella typhimurium, Shigella dysentriae (Pelczar, et al., 1988). b. Bentuk kokus

Kokus adalah bakteri yang bentuknya seperti bola-bola kecil, ada tunggal dan ada yang berpasang-pasangan.

Bentuk kokus ini dapat dibedakan atas: - Diplokokus yaitu kokus yang bergandeng dua. - Tetrakokus yaitu kokus yang mengelompok empat.

- Stafilokokus yaitu kokus yang mengelompok dan membentuk anggur. - Streptokokus yaitu kokus yang bergandengan panjang menyerupai rantai. - Sarsina yaitu kokus yang mengelompok seperti kubus.

Adapun Contoh bakteri dengan bentuk kokus yaitu Staphylococcus aureus, Sarcina luten, Diplococcus pneumonia (Volk and Wheeler, 1993).

c.Bentuk spiral

Spiral apat dibedakan atas:

- Spiral yaitu menyerupai spiral atau lilitan.

- Vibrio yaitu bentuk batang yang melengkung berupa koma.

- Spirochaeta yaitu menyerupai bentuk spiral, bedanya dengan spiral dalam kemampuannya melenturkan dan melengkukkan tubuhnya sambil bergerak.

Adapun Contoh bateri dengan bentuk spiral yaitu Vibrio cholerae, Spirochaeta palida (Volk and Wheeler, 1993).

2.5 Fase Pertumbuhan Mikroorganisme

Ada empat macam fase pertumbuhan mikroorganisme, yaitu fase lag, fase log (fase esksponensial), fase stasioner dan fase kematian.

- Fase lag

Fase lag merupakan fase adaptasi, yaitu fase penyesuaian mikroorganisme pada suatu lingkungan baru. Waktu penyesuaian ini umumnya berlangsung selama 2 jam. Kuman belum berkembang biak dalam fase ini, tetapi aktivitas metabolismenya sangat tinggi. Fase ini merupakan persiapan untuk fase berikutnya (Staf Pengajar FK Universitas Indonesia, 1993).

- Fase log (fase esksponensial)

Fase ini merupakan fase dimana mikroorganisme tumbuh dan membelah pada kecepatan maksimum, tergantung pada genetika mikroorganisme, sifat media, dan kondisi pertumbuhan. Sel baru terbentuk dengan laju konstan dan massa yang bertambah secara eksponensial. Laju pertumbuhan akan terhambat bila

satu atau lebih nutrisi dalam kultur habis, sehingga hasil metabolisme yang bersifat racun akan tertimbun dan menghambat pertumbuhan (Pratiwi, 2008).

- Fase stationer

Pada fase ini bakteri mulai ada yang mati dan pembelahan pun terhambat seiring dengan meningkatnya bakteri, meningkat juga jumlah hasil metabolisme yang toksis. Pada saat ini terjadi jumlah bakteri yang hidup tetap sama (Staf Pengajar FK Universitas Indonesia, 1993).

- Fase kematian

Pada fase ini jumlah sel yang mati meningkat. Konsentrasi produk buangan yang bersifat toksis meningkat dan ketersediaan makanan untuk bakteri menurun. Jumlah bakteri yang mati meningkat dengan cepat. Sebagian bakteri terlihat berbeda dari bakteri yang sehat pada fase log. Perubahan morfologi bakteri juga terlihat seperti bakteri semakin panjang, terlihat bercabang, filamennya juga berubah sehingga sulit untuk diidentifikasi (Engelkirk, 2010).

2.6 Pengujian Aktivitas Antimikroba

Pengukuran aktivitas antimikroba dapat dilakukan dengan metode difusi atau dengan metode dilusi.

a. Cara difusi

Metode yang digunakan adalah cakram kertas, silinder gelas/logam dan pencetak lubang yang diletakkan pada media agar padat yang telah dicampurkan dengan mikroba uji dan zat yang bersifat antimikroba diteteskan ke dalam pencadang kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Selanjutnya

diamati adanya area (zona) jernih di sekitar pencadang yang menunjukkan tidak adanya pertumbuhan mikroba (Dzen,2003).

b. Cara dilusi

Metode ini digunakan untuk menentukan Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) dari zat antimikroba. Metode ini menggunakan satu seri tabung reaksi yang diisi media cair dan sejumlah mikroba uji. Tabung diuji dengan zat antimikroba yang telah diencerkan secara serial. Seri tabung diinkubasi pada suhu ± 37oC selama 18-24 jam dan diamati terjadinya

kekeruhan pada tabung. Selanjutnya biakan dari semua tabung yang jernih diinokulasikan pada media agar padat, diinkubasikan pada suhu ± 37oC selama

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Tempat Pelaksanaan Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

3.2 Metode Penelitian

Penelitian ini dilakukan dengan metode eksperimental. Metode penelitian meliputi pengumpulan sampel, pembuatan simplisia, pemeriksaan karakteristik simplisia, pembuatan ekstrak etanol dari simplisia secara maserasi, pengujian golongan senyawa kimia terhadap simplisia dan ekstrak etanol daun nipah, pembuatan larutan uji ekstrak etanol daun nipah dengan berbagai konsentrasi dan pengujian aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri gram positif yaitu Staphylococcus aureus dan bakteri gram negatif yaitu Escherichia coli.

3.3 Alat dan Bahan 3.3.1 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas, alumunium foil, autoklaf (Fison), blender, bunsen, cawan petri, desikator, inkubator (Memmert), jangka sorong, jarum ose, kapas steril, kertas perkamen, laminar airflow cabinet (Astec HLF 1200 L), lemari pendingin (Toshiba), lemari spengering, mikro pipet (Eppendorf), neraca analitik (Metler AE 200), oven (Gallenkomp), penangas air, pencadang kertas, pinset, pipet tetes, rotary

evaporator, spatula, seperangkat alat destilasi, spektrofotometer visible (Dynamika Halo Vis-10).

3.3.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah amil alkohol, alfa-naftol, asam asetat glasial, asam sulfat, asam klorida, aquadest, besi (III) klorida, bismuth (III) nitrat, etanol 96%, eter, iodium, isopropanol, kalium iodida, kloralhidrat, kloroform, metanol, natrium hidroksida, natrium klorida, natrium sulfat anhidrat, raksa (II) klorida, serbuk magnesium, serbuk zinkum, simplisia daun nipah (Nypa fruticans Wurmb), timbal (II) asetat. Bakteri yang digunakan adalah Staphylococcus aureus ATCC 6538dan Escherichia coli ATCC 8939.

3.4 Penyediaan Sampel 3.4.1 Pengambilan sampel

Pengumpulan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel yang digunakan adalah daun nipah muda yang berwarna kuning, yang diambil di jalan Chinghuan, Desa Payabakong, Kecamatan Medan Labuhan, Sumatera Utara. 3.4.2 Identifikasi tumbuhan

Identifikasi tumbuhan dilakukan oleh Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor.

3.4.3 Pengolahan sampel

Daun nipah yang telah dikumpulkan, dibuang lidinya, dicuci bersih dengan air mengalir, ditiriskan, lalu ditimbang berat basah, kemudian dikeringkan di dalam lemari pengering dengan suhu 40-50°C. Daun dianggap kering bila dapat diremas rapuh dan hancur, lalu ditimbang berat kering.

Kemudian diserbukkan dengan menggunakan blender, disimpan di dalam wadah kering dan terlindung dari cahaya matahari.

3.5 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia 2.5.1 Pemeriksaan makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun nipah dengan mengamati bentuk, bau, rasa dan warna.

2.5.2 Pemeriksaan mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun nipah. Serbuk simplisia ditaburkan di atas objek glass yang telah ditetesi dengan larutan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup, kemudian diamati di bawah mikroskop.

2.5.3 Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode azeotropi (destilasi toluena). Cara penetapan: kedalam labu alas bulat dimasukkan 200 ml toluena dan 2 ml air suling, lalu didestilasi selama 2 jam. Toluena dibiarkan mendingin selama 30 menit dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml, kemudian kedalam labu tersebut dimasukkan 5 g simplisia yang telah ditimbang seksama, lalu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik, hingga sebagian air terdestilasi, kemudian dinaikkan kecepatan tetesan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluena yang telah jenuh. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin sampai suhu kamar, sehingga air dan toluena memisah sempurna. Volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca

sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (WHO, 1998).

2.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air

Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml air-kloroform dalam aquadest sampai 1 liter) dengan menggunakan botol bersumbat sambil sekali-kali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam dan disaring. Sebanyak 20 ml filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Residu dipanaskan dalam oven pada suhu 105°C sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).

2.5.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol

Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 95% dengan menggunakan botol bersumbat sambil sekali-kali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam dan disaring. Sebanyak 20 ml filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Residu dipanaskan dalam oven pada suhu 105°C sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari larut dalam etanol dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).

2.5.6 Penetapan kadar abu total

Sebanyak 2 g serbuk simplisia yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan kedalam kurs porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Kurs porselin bersama isinya dipijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, dinginkan, ditimbang sampai diperoleh bobot yang tetap. Kadar abu

2.5.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam

Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu total dididihkan dengan 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, kemudian disaring dengan kertas saring, lalu dicuci dengan air panas. Residu dan kertas saring dipijarkan sampai diperoleh bobot tetap, didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).

3.6 Pembuatan Larutan Pereaksi 3.6.1 Pereaksi Dragendorff

Sebanyak 8 g bismuth (II) nitrat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam 20 ml asam nitrat pekat. Sebanyak 27,2 g kalium iodida ditimbang dan dilarutkan dalam 50 ml air suling. Kedua larutan dicampurkan dan didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan yang jernih diambil dan diencerkan dengan air suling hingga 100 ml (Depkes RI, 1980).

3.6.2 Pereaksi Bouchardat

Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam 20 ml air suling, kemudian ditambahkan sedikit demi sedikit 2 g iodium dan dicukupkan dengan air suling hingga 100 ml (Depkes RI, 1980).

3.6.3 Pereaksi Meyer

Sebanyak 1,36 g raksa (II) klorida, dilarutkan dalam 60 ml air suling, kemudian pada wadah lain sebanyak 5 g kalium iodida lalu dilarutkan dalam 10 ml air suling. Kedua larutan dicampurkan dan ditambahkan air suling hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1980).

3.6.4 Pereaksi Molisch

Sebanyak 3 g alfa-naftol ditambahkan beberapa tetes etanol kemudian dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga 100 ml (Ditjen POM, 1979).

3.6.5 Pereaksi asam klorida 2 N

Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dalam air suling hingga 100 ml (Ditjen POM, 1979).

3.6.6 Pereaksi asam sulfat 2 N

Sebanyak 5,4 ml asam sulfat pekat diencerkan dengan air suling hingga 100 ml (Ditjen POM, 1979).

3.6.7 Pereaksi natrium hidroksida 2 N

Sebanyak 8,002 g kristal natrium hidroksida dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml (Ditjen POM, 1979).

3.6.8 Pereaksi Lieberman-Burchard

Sebanyak 20 bagian asam asetat anhidrat dicampurkan dengan 1 bagian asam sulfat pekat dan 50 bagian kloroform, harus dibuat baru (Harborne, 1987). 3.6.9 Pereaksi besi (III) klorida 1% (b/v)

Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml (Ditjen POM, 1979).

3.6.10 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat dilarutkan dalam air suling bebas karbondioksida hingga 100 ml (Ditjen POM, 1979).

3.6.11 Pereaksi kloralhidrat

Sebanyak 50 g kloralhidrat dilarutkan dalam 20 ml air suling (Depkes RI, 1995).

3.7 Uji Golongan Senyawa Kimia

Skrining fitokimia serbuk simplisia meliputi pemeriksaan alkaloid, glikosida, steroid/triterpenoid, flavonoid, saponin, tanin dan glikosida antrakinon. 3.7.1 Pemeriksaan alkaloid

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat dipakai untuk uji alkaloid sebagai berikut:

a. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes larutan pereaksi Mayer akan terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau kuning.

b. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes larutan pereaksi Bouchardat, akan terbentuk endapan berwarna coklat sampai kehitaman. c. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes larutan pereaksi

Dragendorff, akan terbentuk endapan berwarna merah atau jingga.

Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dua dari tiga percobaan diatas (Depkes RI, 1995).

3.7.2 Pemeriksaan glikosida

Sebanyak 3 g serbuk simplisia, disari dengan 30 ml campuran etanol 96% dengan air suling (7:3) direfluks selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Pada 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3), dilakukan berulang sebanyak 3 kali. Kumpulan sari pelarut organik ditambahkan natrium sulfat anhidrat, disaring, kemudian diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 50°C, sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sari air dimasukkan kedalam tabung reaksi selanjutnya diuapkan

di atas penangas air, pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes larutan pereaksi molish, ditambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan menunjukkan adanya glikosida (Depkes RI, 1995).

3.7.3 Pemeriksaan flavonoid

Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, kedalam 5 ml filtrat ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna merah atau kuning jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).

3.7.4 Pemeriksaan tanin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 ml air suling lalu disaring, filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1 %. Jika terjadi warna biru atau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Fansworth, 1966). 3.7.5 Pemeriksaan saponin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik, jika terbentuk buih setinggi 1 sampai 10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).

3.7.6 Pemeriksaan antrakinon

Sebanyak 0,2 g serbuk simplisia ditambahkan 5 ml asam sulfat 2 N dipanaskan, setelah dingin ditambahkan 10 ml benzen, dikocok dan didiamkan.

Lapisan benzen dipisahkan dan disaring. Lapisan benzen dikocok dengan 2 ml natrium hidroksida 2 N, didiamkan. Lapisan air berwarna merah dan lapisan benzen tidak berwarna menunjukkan adanya antrakinon (Depkes RI, 1995).

3.7.7 Pemeriksaan steroid/triterpenoid

Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam, disaring, filtrat diuapkan dalam cawan penguap dan pada sisanya ditambahkan 20 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat (pereaksi Lieberman-Burchard). Apabila terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru kehijauan menunjukkan adanya steroida/triterpenoida (Harborne, 1987).

3.8 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Nipah

Sebanyak 300 g serbuk simplisia dimasukkan kedalam sebuah bejana, dituangi 75 bagian etanol 96%, ditutup, dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk, kemudian diserkai, dan diperas. Dicuci ampas dengan etanol 96% secukupnya hingga diperoleh 100 bagian. Dipindahkan ke dalam bejana bertutup, dibiarkan ditempat sejuk terlindung dari cahaya selama 2 hari. Dienap tuangkan atau disaring (Ditjen POM, 1979). Maserat yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator pada temperatur ± 40°C sampai diperoleh ekstrak kental.

3.9 Sterilisasi Alat

Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri ini, disterilkan terlebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat gelas disterilkan di dalam oven pada suhu 170°C selama 1-2 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Jarum ose dan pinset disterilkan dengan cara dibakar dengan nyala bunsen (Lay, 1994).

3.10 Pembuatan Media

3.10.1 Pembuatan media nutrien agar Komposisi:

Lab-lemco powder 1,0 g Yeast extract 2,0 g

Peptone 5,0 g

Sodium chloride 5,0 g

Agar 15 g

Cara Pembuatan:

Sebanyak 23 g media nutrient agar ditimbang dan dimasukkan kedalam erlenmeyer, kemudian ditambahkan air suling sebanyak 1000 ml, lalu dipanaskan sampai larut. Disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit (Oxoid, 1982).

3.10.2 Pembuatan nutrient broth Komposisi :

Lab-lemco powder 1,0 g Yeast extract 2,0 g

Peptone 5,0 g

Sodium chloride 5,0 g Cara pembuatan:

Sebanyak 13,0 g media nutrient broth yang sudah jadi ditimbang dan dilarutkan dengan air suling 1000 ml, lalu dipanaskan sampai larut sempurna. Media dimasukkan dalam erlenmeyer steril yang bertutup dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit (Oxoid, 1982).

3.10.3 Pembuatan agar miring

Sebanyak 3 ml media nutrient agar cair, yang telah dibuat dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian diletakkan pada sudut kemiringan 30-45o dan

dibiarkan hingga media memadat, kemudian disimpan di lemari pendingin (Lay, 1994).

3.11 Pembiakan Bakteri

3.11.1 Pembuatan stok kultur bakteri

3.11.1.1 Pembuatan stok kultur bakteri Staphylococcus aureus

Satu koloni bakteri Staphylococcus aureus diambil dengan menggunakan jarum ose steril lalu ditanamkan pada media nutrient agar miring dengan cara menggores, setelah itu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37°C selama 18-24 jam (Ditjen POM, 1995).

3.11.1.2 Pembuatan stok kultur bakteri Escherichia coli

Satu koloni bakteri Escherichia coli diambil dengan menggunakan jarum ose steril lalu ditanamkan pada media nutrient agar miring dengan cara menggores, setelah itu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37°C selama 18-24 jam (Ditjen POM, 1995).

3.11.2 Pembuatan inokulum bakteri

3.11.2.1 Pembuatan inokulum bakteri Staphylococcus aureus

Dari stok kultur bakteri Staphylococcus aureus yang telah tumbuh diambil dengan jarum ose steril lalu disuspensikan dalam tabung yang berisi 10 ml larutan nutrient broth. Diukur kekeruhan larutan dengan menggunakan alat spektrofotometer visible pada panjang gelombang 580 nm hingga diperoleh transmitan 25% (Ditjen POM, 1995).

3.11.2.2 Pembuatan inokulum bakteri Escherichia coli

Dari stok kultur bakteri Escherichia coli yang telah tumbuh diambil dengan jarum ose steril lalu disuspensikan dalam tabung yang berisi 10 ml larutan nutrient broth. Diukur kekeruhan larutan dengan menggunakan alat spektrofotometer visible pada panjang gelombang 580 nm hingga diperoleh transmitan 25% (Ditjen POM, 1995).

3.12 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Daun Nipah dengan Berbagai Konsentrasi

Ditimbang sebanyak 5 g ekstrak etanol daun nipah dilarutkan dengan pelarut DMSO hingga 10 ml. Konsentrasi larutan uji ekstrak etanol adalah 500 mg/ml. Dibuat pengenceran sampai diperoleh larutan uji ekstrak etanol dengan konsentrasi 400 mg/ml, 300 mg/ml, 200 mg/ml, 100 mg/ml, 75 mg/ml, 50 mg/ml, 25 mg/ml, 12,5 mg/ml dan 6,25 mg/ml.

3.13 Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Nipah

Sebanyak 0,1 ml inokulum dimasukkan ke dalam cawan petri steril, setelah itu dituang media nutrient agar sebanyak 15 ml dengan suhu 45o–50oC.

Selanjutnya dihomogenkan agar media dan suspensi bakteri tercampur rata dan dibiarkan memadat. Diletakkan pencadang kertas yang telah direndam dalam beberapa konsentrasi larutan uji ekstrak etanol di atas media padat yang telah diinokulasi bakteri. Dibiarkan 15 menit, kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37oC selama 18-24 jam, setelah itu diukur diameter daerah hambatan

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan

Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor, menunjukkan bahwa tumbuhan yang diteliti adalah Nypa fruticans Wurmb, suku Arecaceae. Hasil pemeriksaan identifikasi tumbuhan tersebut dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 39.

4.2 Hasil Pemeriksaan Karakterisasi 4.2.1 Hasil pemeriksaan makroskopik

Hasil pemeriksaan makroskopik diketahui bahwa daun nipah merupakan daun majemuk, berbentuk memanjang, panjang 117 cm, lebar 8,4 cm, permukaan licin, berwarna kuning muda, bertepi rata dan ujungnya runcing. Hasil pemeriksaan simplisia yaitu berwarna kuning kecoklatan, berbau khas dan rasanya kelat.

4.2.2 Hasil pemeriksaan mikroskopik

Hasil pemeriksaan mikroskopik terhadap serbuk simplisia daun nipah dijumpai fragmen berupa berkas pembuluh bentuk spiral, stomata tipe parasitik dan minyak atsiri. Hasil pemeriksaan mikroskopik dapat dilihat pada Lampiran 4, halaman 43.

4.2.3 Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia

Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia daun nipah dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2 Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia daun nipah

No. Parameter Hasil (%)

1. Kadar Air 5,64

2. Kadar Sari Larut Air 19,27

3. Kadar Sari Larut Etanol 16,20

4. Kadar Abu Total 6,36

5. Kadar Abu Tidak Larut Asam 1,59

Penetapan kadar air pada simplisia dilakukan untuk mengetahui jumlah air yang terdapat di dalam simplisia. Hasil yang diperoleh dari penetapan kadar air, kurang dari 10% yaitu 5,64%. Kadar air yang melebihi 10% dapat menjadi media yang baik untuk pertumbuhan jamur.

Penetapan kadar sari larut air dilakukan untuk mengetahui jumlah senyawa yang bersifat polar yang dapat tersari dalam pelarut air. Kadar sari larut air yang diperoleh adalah 19,27%. Penetapan kadar sari larut etanol dilakukan untuk mengetahui jumlah senyawa yang bersifat polar maupun non polar yang dapat tersari dalam pelarut etanol. Kadar sari larut etanol yang diperoleh adalah 16,20%.

Penetapan kadar abu total dilakukan untuk mengetahui jumlah mineral yang terdapat pada sampel. Kadar abu total yang diperoleh adalah 6,36%. Penetapan kadar abu tidak larut asam dilakukan untuk mengetahui jumlah mineral yang tidak larut dalam asam, seperti silikat. Kadar abu tidak larut asam yang diperoleh adalah 1,59%.

4.3 Hasil Ekstraksi Daun Nipah

Hasil maserasi dari 300 g serbuk simplisia daun nipah dengan pelarut etanol 96%, dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator dan diperoleh ekstrak kental 53,20 g (rendemen 17,73%).Ekstrak etanol yang diperoleh,

dilakukan skrining fitokimia dan kemudian diuji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

4.4 Hasil Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia kimia terhadap simplisia dan ekstrak etanol daun nipah dilakukan untuk mendapatkan informasi golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat di dalamnya. Adapun pemeriksaan yang dilakukan meliputi pemeriksaan golongan senyawa alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid.

Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun nipah dapat dilihat pada Tabel 4.4.

Tabel 4.4 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun nipah

No. Parameter Serbuk Simplisia Ekstrak Etanol

1. Alkaloid - -

2. Flavonoid + +

3. Glikosida + +

4. Glikosida antrakinon - -

5. Saponin + +

6. Tanin + +

7. Steroid/Triterpenoid + +

Keterangan: (+) positif = mengandung golongan senyawa (-) negatif = tidak mengandung golongan senyawa

Pada serbuk simplisia daun nipah (Nypa fruticans Wurmb) yang ditambahkan pereaksi Molish dan asam sulfat pekat akan terbentuk cincin berwarna ungu pada batas cairan menunjukkan adanya glikosida. Penambahan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik dengan adanya buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1-10 cm dan tidak hilang dengan penambahan asam klorida 2N menunjukkan adanya saponin. Penambahan pereaksi besi (III) klorida memberikan warna biru kehitaman

menunjukkan adanya senyawa tanin. Penambahan serbuk Mg, asam klorida pekat dan amil alkohol dan dibiarkan memisah memberikan warna jingga menunjukkan adanya senyawa flavonoid. Penambahan pereaksi Lieberman-Bourchard memberikan warna hijau/ungu menunjukkan adanya steroid/triterpenoid.

4.5 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Nipah

Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah dapat dilihat pada Tabel 4.5 berikut ini. Data selengkapnya dapat dilihat di Lampiran 11, halaman 52 Tabel 4.5 Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah

Konsentrasi (mg/ml)

Diameter daerah hambatan (mm)* Staphylococcus aureus Escherichia coli

500 17,77 18,67

400 16,67 17,17

300 16,23 16,40

200 15,37 15,63

100 14,27 15,03

75 13,83 14,10

50 12,60 12,73

25 10,57 11,43

12,5 7,67 8,30

6,25 - -

Blanko - -

Keterangan: * = hasil rata-rata tiga kali pengukuran - = tidak ada hambatan

Berdasarkan hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan. bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, memperlihatkan bahwa ekstrak etanol daun nipah efektif dalam menghambat pertumbuhan kedua bakteri tersebut. Menurut Depkes RI (1995), diameter daerah hambat antibakteri yang paling efektif terhadap uji antibakteri adalah 14 sampai 16 mm. Ekstrak etanol daun nipah mulai dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 100 mg/ml dengan diameter daerah hambat sebesar 14,27 mm dan bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 75 mg/ml dengan diameter daerah

hambat sebesar 14,10 mm. Konsentrasi hambat minimum bakteri Staphylococcus aureus sebesar 12,5 mg/ml dengan diameter daerah hambat 7,67 mm dan bakteri Escherichia coli sebesar 12,5 mg/ml dengan diameter daerah hambat 8,30 mm. Aktivitas suatu zat antimikroba dalam menghambat pertumbuhan atau membunuh mikroorganisme tergantung pada konsentrasi antimikroba tersebut (Tim Mikrobiologi FK Brawijaya, 2003).

Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun nipah mengandung golongan senyawa kimia berupa steroid/triterpenoid, flavonoid, saponin, glikosida dan tanin. Senyawa metabolit sekunder tersebut memiliki aktivitas antibakteri dengan mekanisme kerja yang berbeda-beda. Senyawa fenol dan polifenol merupakan kelompok metabolit sekunder terbesar yang memiliki aktivitas antibakteri, mempunyai gugus hidroksil yang melekat pada senyawa aromatik. Letak dan jumlah gugus hiroksil pada senyawa fenol mempengaruhi toksisitas mikroorganisme (Stefanovic, et al., 2012). Kombinasi senyawa fenol dapat memberikan efek sinergis dan menambah reaksi antibakteri lebih baik dibandingkan dengan senyawa tunggal. Senyawa fenol pada konsentrasi rendah mempengaruhi aktivitas enzim, sedangkan pada konsentrasi tinggi menyebabkan denaturasi protein (Hayek, et al., 2013).

Menurut Robinson (1995), flavonoid dan tanin merupakan senyawa kimia yang memiliki potensi sebagai antibakteri. Flavonoid merupakan kelompok senyawa fenol yang mempunyai kecenderungan untuk mengikat protein, sehingga mengganggu proses metabolisme bakteri, selain itu flavonoid juga berfungsi sebagai antibakteri dengan cara membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler sehingga mengganggu integritas membran sel bakteri. Sedangkan

tanin, mampu membentuk kompleks dengan ion besi. Kompleksasi dari ion besi dengan tanin dapat menjelaskan toksisitas tanin. Mikroorganisme yang tumbuh pada kondisi aerob membutuhkan ion besi untuk berbagai fungsi termasuk reduksi dari prekursor ribonukleotida DNA. Enzim reverse transkriptase dan DNA topoimerase sel bakteri tidak dapat terbentuk karena adanya pengikatan ion besi yang kuat oleh tanin (Akiyama, et al., 2001).

Mekanisme terpenoid sebagai antibakteri adalah bereaksi dengan porin (protein transmembran) pada membran luar dinding sel bakteri, membentuk ikatan polimer yang kuat sehingga mengakibatkan rusaknya porin. Senyawa terpenoid mudah larut dalam lipid, sifat inilah yang mengakibatkan senyawa ini mudah menembus dinding sel bakteri gram positif dan gram negatif (Ferawaty, 2012). Mekanisme steroid sebagai antibakteri berhubungan dengan membran lipid dan sensitivitas senyawa steroid yang dapat menyebabkan kebocoran pada liposom (Madduluri, et al., 2013).

Saponin termasuk kedalam kelompok antibakteri yang mengganggu permeabilitas membran sel bakteri. Mekanisme kerja saponin sebagai antibakteri adalah menurunkan tegangan permukaan sehingga mengakibatkan naiknya permeabilitas atau kebocoran sel dan mengakibatkan senyawa intraseluler akan keluar dari sel (Madduluri, et al., 2013).

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Hasil penelitian yang dilakukan terhadap daun nipah (Nypa fruticans Wurmb)diperoleh kesimpulan:

1. Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia daun nipah diperoleh kadar air 5,64%, kadar sari larut dalam air 19,27%, kadar sari yang larut dalam etanol 16,20%, kadar abu total 6,36% dan kadar abu yang tidak larut dalam asam 1,59%.

2. Hasil pemeriksaan skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun nipah menunjukkan adanya kandungan senyawa kimia flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid.

3. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak daun nipah mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Aktivitas antibakteri yang efektif menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 100 mg/ml dengan diameter daerah hambat sebesar 14,27 mm dan bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 75 mg/ml dengan diameter daerah hambat sebesar 14,10 mm.

5.2 Saran

Diharapkan kepadapeneliti selanjutnya untuk dapat melakukan formulasi dari ekstrak etanol daun nipah dengan mempertimbangkan uji toksisitas terlebih dahulu.

DAFTAR PUSTAKA

Akiyama, H., Fujii, K., Yamasaki, O., Oono, T., dan Iwatsuki, K. (2001). Antibacterial Action of Several Tannins Against Staphylococcus aureus. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 48(4): 487-491.

Bakshi, M., Punarbasu, C. (2014). Antimicrobial Potential of Leaf Extracts of Ten Mangrove Species From Indian Sudarban. International Journal of Pharma and Bio Science. 5(1): 294-304.

Depkes RI. (1980). Materia Medika Indonesia. Jilid IV. Cetakan Pertama. Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Hal. 94-98.

Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Cetakan Keenam. Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Hal. 247-251, 199-304, 321-325.

Difco. (1977). Difco Manual of Dehydrated Culture Media and Reagents for Microbiology and Clinical Laboratory Procedures. 9th ed. Detroit Michigan: Difco Laboratories. Hal. 32-33.

Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 9, 33.

Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 855, 896, 898, 1035.

Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 1, 10-11.

Dwidjoseputro. (1978). Dasar- Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Penerbit Djambatan. Halaman 15-17.

Dzen, S.M., Santoso, S., Roekistiningsih., dan Winarsih S. (2003). Bakteriologi Medik. Malang: Bayumedia Publishing. Hal. 31-32, 120.

Engelkirk, P.G. (2010). Burton’s Microbiology for the Health Sciences. Edisi sembilan. North America: Lippincott Williams & Wilkins. Halaman 299. Farnsworth, N. R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants,

Journal of Pharmaceutical Sciences. Volume 55. Number 3. Chicago: Reheis Chemical Company. 262-264.

Ferawaty, A.S., Agus, S., dan Delianis, P. (2012). Potensi Antibakteri Ekstrak Rumput Laut Terhadap Bakteri Penyakit Kulit Pseudomonas aerufinosa,

Staphlococcus epidermis dan Micrococcus luteus. Journal of Marine Research. 1(2):152-160

Ganiswarna, S. (1995). Farmakologi dan Terapi. Edisi 4. Jakarta: Penerbit UI. Hal. 158.

Guzman, D.E., Galicia, J.J.M., Gatuz., M.S., Santiago, M.AR., Yumul, C.S., Castro, E.J.D., Clemente, R.F., Naguiat, E.S., Hillario, D.S. (2014). Antibacterial Soap from Nypa fruticans Wurmb Ethanolic Leaf Extract. International Conference on Convergence Technology. 4(1): 55-60.

Harborne, J. B. (1987). Phytochemical Method. Terbitan Kedua. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Metode Fitokimia. Bandung: Penerbit ITB. Hal. 147.

Hayek, S. A., Gyawali, R., dan Ibrahim, S. A., (2013). Antimicrobial Natural Product. Dalam: Vilas, A. M. (ed). Microbial Pathogens and Strategies for Combating them: Science, Technology and Education. Hal. 911, 915-916. Holt, G.J., Kneg, N.R., Sneath, A.H., Starley, T.J, Witirams, T.S. (1988). 9th

edition. Bergey’s Manual Od Determinative Bacteriology. London: Williams & Wilkins Company. Halaman 187.

ICMSF. (1996). Microorganisms in Food 5: Characteristic of Microbial Phatogens. Singapore: Science Publisher. Halaman 299.

Karsinah., Lucky H.M., Suharto., dan Mardiastuti H.W. (1994). Batang Negatif Gram. Dalam: Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran. Edisi Revisi. Jakarta: Penerbit Binarupa Aksara. hal. 161-162.

Lay, W.B. (1994). Analisis Mikrobiologi di Laboratorium. Jakarta: PT. Raja Grafindo Persada. Hal. 71-73.

Madduluri, S., Rao, B. K., dan Taram, S. B. (2013). In Vitro Evaluation of Antibacterial Activity of Five Indigenous Plants Extract Againts Five Bacterial Pathogens of Human. International Journal of Pharmacy and Pharmaceuticals Science. 5(4): 683-684.

Mursito. (2001). Ramuan Tradisional Untuk Kesehatan Anak. Jakarta: Penebar Swadaya. Hal. 2.

Osabor, V.N., Egbung, G.E., Okafor, P.C. (2008). Chemical Profile of Nypa fruticans from Cross River Estuary South Eastern Nigeria. Pakistan Journal of Nutrition. 7(1): 146-150.

Oxoid. (1982). The Oxoid Manual of Culture Media, Ingredients and Other Laboratory Service. Edisi ke-5. Basingstoke: Oxoid Ltd. Hal. 20.

Pelczar, M. J dan E. C. S. Chan. (1988). Dasar- Dasar Mikrobiologi. Terjemahan: R. S.Hadioetomo, T. Imas, S. S. Tjitrosomo, dan S. L. Angka. Jakarta :Penerbit UI Press. Halaman 132-133.

Pratiwi, S.T. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal. 105 117, 140-142.

Putri, I.J., Fauziyah, Elfita. (2012). Aktivitas Antioksidan Daun dan Biji Buah Nipah (Nypa fruticans) Asal Pesisir Banyuasin Sumatera Selatan Dengan Metode DPPH. Maspari Journal. 5(1): 16-21.

Robinson, T. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung: ITB. Hal. 71-72.

Siregar, B. S. (2012). Analisis Finansial Serta Prospek Pengolahan Buah Nipah (Nypa fruticans) Menjadi Berbagai Produk Olahan. Skripsi. Medan: Departemen Kehutanan Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara. Staf Pengajar FK Universitas Indonesia. (1993). Buku Ajar Mikrobiologi

Kedokteran. Jakarta: 18-20.

Stevanofic, O., Radojevic, I., Vasic, S., dan Comic, L. (2012). Antibacterial Aktivity of Naturally Occuring Compound from Selected Plants. Dalam: Bobbarala, V. (ed). Antimicrobial Agents. Kroasia: In Tech. Hal 2-3.

Supardi, I dan Sukamto. (1999). Mikrobiologi dalam Pengolahan dan Keamanan Pangan. Bandung : Penerbit Alumni. Hal. 138-141; 175-177; 182-184. Tim Mikrobiologi FK Universitas Brawijaya. (2003). Bakteriologi Medik. Cetakan

Pertama. Malang: Bayu Media Publisher. Hal. 12, 59.

Todd, J. (1999). Infeksi Bakteri. Dalam: Behrman, R, C., Kliegman, R, M., Arvin, A, M. Ilmu Kesehatan Anak Nelson, 15(2). Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Vandepitte, J., Engback, K., Piot, P. dan Heuck, C. C. (1991). Basic Laboratory Procedures in Clinicals Bacteriology. WHO Library, Geneva.

Volk, W.A. dan Wheeler, M.F. (1993). Mikrobiologi Dasar. Jilid I. Alih Bahasa: Markam. Jakarta: Erlangga. Halaman 33-40; 218-219.

World Health Organization. (1998). Quality Control Methods for Medicinal Plants Materials. Switzerland. Hal. 31-33.

Lampiran 2. Gambar tumbuhan nipah

Lampiran 3. Gambardaun nipah segar dan simplisia serta serbuk simplisia

Daun nipah segar

Lampiran 3. (Lanjutan)

Lampiran 4. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun nipah Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun nipah (perbesaran 10x40)

1 2

3

Keterangan:

1. Berkas pembuluh bentuk spiral 2. Stomata tipe parasitik

Lampiran 5. Perhitungan penetapan kadar air simplisia daun nipah

a. Berat sampel = 5,034 g Volume I = 1,30 ml

Volume II = 1,55 ml

Kadar air = 1,55-1,30

5,034 x 100% = 4,97%

b. Berat sampel = 5,031 g Volume I = 1,55 ml

Volume II = 1,85 ml

Kadar air = 1,85-1,55

5,031 x 100% = 5,96%

c. Berat sampel = 5,015 g Volume I = 1,85 ml

Volume II = 2,15 ml

Kadar air = 2,15-1,85

5,015 x 100% = 5,98%

Kadar air rata-rata = (4,97 + 5,96 + 5,98 )%

3 = 5,64%

Kadar air = Volume II - Volume I

Lampiran 6. Perhitungan penetapankadar sari larutdalam air simplisia daun nipah

a. Berat sampel = 5,023 g Berat sari = 0,214 g

Kadar sari = 0,214 5,023

x

100

20

x

100% = 21,30%

b. Berat sampel = 5,008 g Berat sari = 0,193 g

Kadar sari = 0,193 5,008

x

100

20x 100% = 19,27%

c. Berat sampel = 5,042 g Berat sari = 0,174 g

Kadar sari = 0,174 5,042

x

100

20 x 100% = 17,25%

Kadar sari rata-rata = (21,30 + 19,27 + 17,25)%

3 = 19,27%

Kadar sari =

Berat sari

Berat sampel

x

100

Lampiran 7. Perhitungan penetapankadar sarilarutdalam etanol simplisia daun nipah

a. Berat sampel = 5,006 g Berat sari = 0,176 g

Kadar sari = 0,176 5,006

x

100

20

x

100% =17,57%

b. Berat sampel = 5,012 g Berat sari = 0,143 g

Kadar sari = 0,143 5,012

x

100

20

x

100% = 14,26% c. Berat sampel = 5,009 g

Berat sari = 0,168 g

Kadar sari = 0,168 5,009

x

100

20

x

100% = 16,77%

Kadar sari rata-rata = (17,57 + 14,26 + 16,77)%

3 = 16,20%

Kadar sari =

Berat sari

Berat sampel

x

100

Lampiran 8. Perhitungan penetapankadarabu total simplisia daun nipah

a. Berat sampel = 2,0041 g Berat abu = 0,1262 g

Kadar abu = 0,1262

2,0041 x 100 % = 6,29 %

b. Berat sampel = 2,0172 g Berat abu = 0,1354 g

Kadar abu = 0,1354

2,0172x 100% = 6,71% c. Berat sampel = 2,0080 g

Berat abu = 0,1221 g

Kadar abu = 0,1221

2,0080 x 100% = 6,08%

Kadar abu total rata-rata = (6,29 + 6,71 + 6,08)%

3 = 6,36%

Kadar abu total = Berat abu

Lampiran 9. Perhitungan penetapankadarabu tidaklarutdalamasam simplisia daun nipah

Sampel I Berat sampel = 2,0041 g

Berat abu = 0,0361 g

Kadar abu = 0,0361

2,0041 x 100% = 1,80 %

Sampel II Berat sampel = 2,0172 g

Berat abu = 0,0290 g

Kadar abu = 0,0290

2,0172 x 100% = 1,44%

Sampel III Berat sampel = 2,0080 g

Berat abu = 0,0312 g

Kadar abu = 0,0312

2,0080 x 100% = 1,55 %

Kadar abu yang tidaklarutdalamasam rata-rata = (1,80 + 1,44 + 1,55)%

3 = 1,59%

Kadar abu yang tidaklarutdalamasam

=

Berat abu

Lampiran 10. Bagan kerja penelitian

dicuci dari pengotor sampai bersih ditiriskan

ditimbang berat basahnya

pemeriksaan organoleptis

dikeringkan pada lemari pengering dengan suhu 40-50°

ditimbang berat keringnya

dihaluskan dengan blender disimpan dalam wadah yang tertutup rapat sebelum digunakan Daun nipah

Simplisia

Simplisia

Karakterisasi Skrining fitokimia Ekstraksi

•kadar air

•kadar sari larut dalam air

•kadar sari larut dalam etanol

•kadar abu total

•kadar abu tidak larut dalam asam

d l

senyawa golongan:

• flavonoid

• glikosida

• saponin

• tanin

• steroid/triterpenoid Serbuk simplisia

Lampiran 10. (Lanjutan)

dimasukkan ke dalam wadah

dituangi dengan 75 bagian etanol 96% dan ditutup

dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sering diaduk

diserkai dan diperas

dicuci ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga diperoleh 100 bagian

dipindahkan kedalam bejana bertutup

dibiarkan ditempat sejuk terlindung dari cahaya selama 2 hari

dienap tuangkan atau disaring

dipekatkan denganrotaryevaporator Maserat

Ekstrak kental (53,20 g)

senyawa golongan:

• flavonoid

• glikosida

• saponin

• tanin

•

Skrining fitokimia Uji aktivitas antibakteri 300 g serbuk simplisia

Lampiran 10. (Lanjutan)

diambil dengan jarum ose steril

ditanam pada media nutrient agar miring diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam

disuspensikan dalam 10 ml media nutrient broth steril

diukur kekeruhan suspensi bakteri

menggunakan spektrofotometer visible pada panjang gelombang 580 nm sampai diperoleh nilai transmitan 25%

dimasukkan 0,1 ml inokulum ke dalam cawan petri

ditambahkan 15 ml media nutrient agar ke dalam cawan petri

dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat

diletakkan pencadang kertas yang telah direndam ke dalam larutan uji ekstrak dengan berbagai konsentrasi dan pelarut DMSO sebagai blanko

diinkubasi pada suhu 37oC selama 18 - 24 jam

diukur diameter daerah hambatan di sekitar pencadang kertas dengan menggunakan jangka sorong

Biakan murni bakteri

Stok kultur bakteri

Inokulum bakteri

Media padat

Lampiran 11. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak etanol daun nipah

Konsentrasi Ekstrak (mg/ml)

Diameter Daerah Hambat Pertumbuhan Bakteri (mm)

Staphylococcus aureus Escherichia coli

D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*

500 17,8 17,6 17,9 17,77 18,5 18,7 18,8 18,67

400 16,7 16,5 16,8 16,67 17,2 17,4 16,9 17,17

300 16,2 16,4 16,1 16,23 16,3 16,2 16,7 16,40

200 15,4 15,3 15,4 15,37 15,6 15,4 15,9 15,63

100 14,2 14,1 14,5 14,27 14,8 15,2 15,1 15,03

75 13,7 13,4 14,4 13,83 13,9 14,1 14,3 14,10

50 12,2 12,7 12,9 12,60 12,2 12,9 13,1 12,73

25 10,2 10,7 10,8 10,57 11,3 11,4 11,6 11,43

12,5 7,7 7,7 7,6 7,67 8,4 8,2 8,3 8,30

6,25 - - - -

Blanko - - - -

Keterangan:

D = Diameter daerah hambatan 1,2,3 = Perlakuan

* = Rata-rata

Lampiran 12. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri Staphylococcus aureus

A B

C D

Keterangan

A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml

D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko 300

500

100 200

Blanko

50

400

75

25

6,25 12,5

Lampiran 13. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri Escherichia coli

A B

C D

Keterangan

A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml

D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko 500

300 400

200

100 Blanko

75

25 50

12,5

Lampiran 10. Bagan kerja penelitian

dicuci dari pengotor sampai bersih ditiriskan

ditimbang berat basahnya

pemeriksaan organoleptis

dikeringkan pada lemari pengering dengan suhu 40-50°

ditimbang berat keringnya

dihaluskan dengan blender disimpan dalam wadah yang tertutup rapat sebelum digunakan Daun nipah

Simplisia

Simplisia

Karakterisasi Skrining fitokimia Ekstraksi

• kadar air

• kadar sari larut dalam air • kadar sari larut dalam

etanol

• kadar abu total • kadar abu tidak larut

dalam asam d l

senyawa golongan: • flavonoid • glikosida • saponin • tanin

• steroid/triterpenoid Serbuk simplisia

Lampiran 10. (Lanjutan)

dimasukkan ke dalam wadah

dituangi dengan 75 bagian etanol 96% dan ditutup

dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sering diaduk

diserkai dan diperas

dicuci ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga diperoleh 100 bagian

dipindahkan kedalam bejana bertutup

dibiarkan ditempat sejuk terlindung dari cahaya selama 2 hari

dienap tuangkan atau disaring

dipekatkan denganrotaryevaporator Maserat

Ekstrak kental (53,20 g)

senyawa golongan: • flavonoid • glikosida • saponin • tanin

• steroid/triterpenoid

Skrining fitokimia Uji aktivitas antibakteri 300 g serbuk simplisia

Lampiran 10. (Lanjutan)

diambil dengan jarum ose steril

ditanam pada media nutrient agar miring diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam

disuspensikan dalam 10 ml media nutrient broth steril

diukur kekeruhan suspensi bakteri

menggunakan spektrofotometer visible pada panjang gelombang 580 nm sampai diperoleh nilai transmitan 25%

dimasukkan 0,1 ml inokulum ke dalam cawan petri

ditambahkan 15 ml media nutrient agar ke dalam cawan petri

dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat

diletakkan pencadang kertas yang telah direndam ke dalam larutan uji ekstrak dengan berbagai konsentrasi dan pelarut DMSO sebagai blanko

diinkubasi pada suhu 37oC selama 18 - 24 jam

diukur diameter daerah hambatan di sekitar pencadang kertas dengan menggunakan jangka sorong

Biakan murni bakteri

Stok kultur bakteri

Inokulum bakteri

Media padat

Lampiran 11. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak etanol daun nipah

Konsentrasi Ekstrak (mg/ml)

Diameter Daerah Hambat Pertumbuhan Bakteri (mm)

Staphylococcus aureus Escherichia coli

D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*

500 17,8 17,6 17,9 17,77 18,5 18,7 18,8 18,67 400 16,7 16,5 16,8 16,67 17,2 17,4 16,9 17,17 300 16,2 16,4 16,1 16,23 16,3 16,2 16,7 16,40 200 15,4 15,3 15,4 15,37 15,6 15,4 15,9 15,63 100 14,2 14,1 14,5 14,27 14,8 15,2 15,1 15,03 75 13,7 13,4 14,4 13,83 13,9 14,1 14,3 14,10 50 12,2 12,7 12,9 12,60 12,2 12,9 13,1 12,73 25 10,2 10,7 10,8 10,57 11,3 11,4 11,6 11,43

12,5 7,7 7,7 7,6 7,67 8,4 8,2 8,3 8,30

6,25 - - - -

Blanko - - - -

Keterangan:

D = Diameter daerah hambatan 1,2,3 = Perlakuan

* = Rata-rata

Lampiran 12. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri Staphylococcus aureus

A B

C D

Keterangan

A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml

D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko 300

500

100 200

Blanko

50

400

75

25

6,25 12,5

Lampiran 13. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nipah terhadap bakteri Escherichia coli

A B

C D

Keterangan

A : Konsentrasi 500; 400 dan 300 mg/ml B : Konsentrasi 200; 100 mg/ml dan blanko C : Konsentrasi 75; 50 dan 25 mg/ml

D : Konsentrasi 12,5; 6,25 mg/ml dan blanko 500

300 400

200

100 Blanko

75

25 50

12,5