Skrining Fitokimia Metabolit Sekunder Dalam Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) Untuk Uji In Vitro Daya Hambat Pertumbuhan Aeromonas Hydrophila

Lampiran

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 1. Hasil analisis sidik ragam diameter zona hambat ekstrak daun
binahong terhadap pertumbuhan bakteri A. hydrophila
F Tabel
Sumber
Derajat
Jumlah
Kuadrat
Keragaman
Bebas
Kuadrat
Tengah
F Hitung
5% 1%
Ulangan
2
0.02
0.01

0.14
4.10 7.56
Konsentrasi
5
1206.08
241.22
3294.31**
3.33 5.64
Galat
10
0.73
0.073
Total
17
1206.84
Keterangan: ** = sangat nyata

Lampiran 1. Hasil analisis sidik ragam diameter zona hambat ekstrak daun
binahong terhadap pertumbuhan bakteri A. hydrophila
F Tabel

Derajat
Jumlah
Kuadrat
Sumber
Keragaman
Bebas
Kuadrat
Tengah
F Hitung
5% 1%
Ulangan
2
0.02
0.01
0.14
4.10 7.56
Konsentrasi
5
1206.08
241.22

3294.31**
3.33 5.64
Galat
10
0.73
0.073
Total
17
1206.84
Keterangan: ** = sangat nyata

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 2. Bahan-Bahan dalam Penelitian

Daun Binahong

Etanol 96%

FeCl3 1%, CeSO4 1%, Pereaksi LiebermannBouchard, Pereaksi Wagner,Pereaksi

Dragendroff, Pereaksi Mayer, Pereaksi
Bouchardat

Akuades

Etil Asetat

Standart β-sitosterol
dan triterpenoid

Kertas Label

Kultur Murni
Bakteri

Tissu

Blank Cakram
(OXOID

Kapas

Tryptose Soy Agar
(TSA)

Alumunium foil

Parafin

Universitas Sumatera Utara

larutan crystal violet, larutan iodine lugol,
larutan alkohol aseton, larutan safranin

Media O/F

Media MIO

Media MIO, Media O/F paraffin,
Media O/F

Media RS

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 3. Alat-Alat dalam Penelitian

Blender

Timbangan biasa

Penangas air

Gelas ukur

Tabung Reaksi

Botol kaca

Rotary evaporator

Labu takar

Bunsen

Rak Tabung Reaksi

Timbangan digital

Erlenmeyer

Pipet tetes

Corong

Mikroskop

Autoklaf Sturdy (Digital)

Universitas Sumatera Utara

Water Bath (digital)

Inkubator

Cawan Petri

Object glass

Jangka sorong

Sarung tangan & Masker

Pinset

Hockey stick

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 4. Persiapan Bahan dan Pembuatan Simplisia

Penimbangan
bahan

Bahan setelah dicuci, ditiriskan

Pengeringan bahan

Bahan yang telah kering/Simplisia Simplisia diblender

Simplisia disaring

Serbuk halus simplisia

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 5. Ekstraksi

Serbuk dimasukkan ke Erlenmeyer

Filtrat di rotary evaporator

Ekstrak ditimbang

Sampel dimaserasi
dengan Etanol 96%

Sampel disaring

Ekstrak diuapkan pelarut etanolnya

Ekstrak pekat

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 6. Skrining Fitokimia

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 7. Analisis Kriteria Bakteri

Pembuatan preparat

Uji motilitas

Uji oksidase

Pewarnaan Gram

Uji Oksidatif/Fermentatif

Uji RS

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 8. Pembuatan Media Agar Miring & Media Dasar

TSA ditimbang sesuai kebutuhan

Disterilisasi

TSA dituang ke cawan petri

Volume ditakar sesuai kebutuhan

Dimasukkan kedalam water bath

TSA dituang ke tabung reaksi

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 9. Peremajaan Bakteri

Pengambilan bakteri dari isolat murni

Penggoresan bakteri

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 10. Pembuatan Suspensi Bakteri

Bakteri dimasukkan kedalam
NaCl 0,9% steril

Penyetaraan dengan Mc. Farland

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 11. Pembuatan Larutan Uji

Ekstrak dicampur aquades

Larutan berbagai konsentrasi

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 12. Pengujian Antibakteri

Penyebaran larutan suspensi bakteri

Peletakkan kertas cakram pada media

Pengukuran zona bening

Universitas Sumatera Utara