Gambar 1. Denah sistem resirkulasi pemeliharaan udang galah Macrobrachium rosenbergii yang diberi perlakuan β-glukan 0, 0,075, 0,15,
dan 0,225 melalui pakan selama 42 hari A= Akuarium pemeliharaan, B= Bak filtrasi ; B1= Bak penampungan air kotor ;
B2= Bak filter fisik ; B3= Bak filter kimia ; B4= Bak filter biologis ; B5= Bak penampungan air bersih, C= paralon inlet, D= paralon
outlet
3.5. Parameter Pengamatan 3.5.1
Parameter Imun
Parameter imun udang yang diukur terdiri dari aktivitas phenoloxydase PO, jumlah total haemocyte THC, selml, dan Diferensial Haemocyte Count
DHC, . Prosedur pengukuran parameter imun sebagai berikut:
3.5.1.1 Aktivitas Phenoloxydase PO Liu dan Chen 2004
Aktivitas PO haemocyte diukur berdasarkan formasi dopachrome yang dihasilkan oleh L-DOPA. Sebanyak 1 ml campuran hemolymph-antikoagulan
disentrifugasi pada 1.500 rpm selama 10 menit pada temperatur 4
o
C. Supernatan dikeluarkan dan pelet disuspensikan kembali secara perlahan-lahan ke dalam 1 ml
larutan cacodylate-citrate buffer 0,01 M sodium cacodylate, 0,45 M sodium chloride, 0,10 M trisodium citrate, pH 7 dan disentrifugasi kembali. Pelet
kemudian diambil dan disuspensikan dalam 200 µl cacodylate-citrate buffer 0,01 M sodium cacodylate, 0,45 M sodium chloride, 0,10 M trisodium citrate, pH 7.
Suspensi sel sebanyak 100 µl kemudian diinkubasi dengan 50 µl trypsin 1 mgml cacodylate buffer sebagai aktivator selama 10 menit pada temperatur 25-
26
o
C. Selanjutnya ditambahkan 50 µl L-DOPA 3 mgml cacodylate buffer setelah 5 menit, dan ditambahkan 800 µl cacodylate buffer. Densitas optikal OD
5 4
3 2
1
B A
D C
diukur dengan menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 490 nm.
Larutan standar mengandung 100 µl suspensi haemocyte, 50 µl cacodylate buffer pengganti tripsin, dan 50 µl L-DOPA digunakan untuk mengukur
background aktivitas PO pada semua larutan uji. Densitas optikal OD dari aktivitas PO pada semua kondisi uji dinyatakan sebagai formasi dopachrome
dalam 50 µl haemolymph.
3.5.1.2 Perhitungan Total Haemocyte Count THC Blaxhall dan Daishley
1973
Sebanyak 0,2 ml haemolymph udang diambil dengan menggunakan syringe 1 ml yang telah berisi 100 µl antikoagulan sodium chloride 0.45 M,
glucose 0.12 M, Natrium citrate 30 mM, NaCl 0.34 M, EDTA mMm pH 4.5. Kemudian campuran haemolymph-antikoagulan divorteks hingga merata.
Campuran haemolymph-antikoagulan
tadi kemudian
diteteskan pada
haemocytometer. Selanjutnya THC dihitung di bawah mikroskop cahaya dengan pembesaran 40x.
3.5.1.3 Diferensial Haemocyte Count DHC Martin dan Graves 1985
