MASI A DHARMA TA KAN RADIK H) DAN AKSI AIR E

  

UJI A AKTIVITAS S ANTIOKS SIDAN MEN NGGUNAK KAN RADIK KAL

1,1-DIFE ENIL-2-PIK KRILHIDRA AZIL (DPPH H) DAN

  

PENETAPA AN KANDU UNGAN FE ENOLIK TO OTAL FRA AKSI AIR E EKSTRAK

Ocimum san nctum L.)

  ETANOLI

  IK DAUN S SELASIH (O

SKRIPSI

  Diaju ukan untuk M Memenuhi Sa alah Satu Sy yarat Memp peroleh Gela ar Sarjana Fa armasi (S. Fa arm.)

  Progra am Studi Far rmasi Oleh:

  Damianus L D Listyanta Edh hi Sambada NIM M: 07811405

  52 FAKUL LTAS FARM MASI

  

UN NIVERSITA AS SANATA A DHARMA A

YO GYAKART TA

2011

  

UJI A AKTIVITAS S ANTIOKS SIDAN MEN NGGUNAK KAN RADIK KAL

1,1-DIFE ENIL-2-PIK KRILHIDRA AZIL (DPPH H) DAN

  

PENETAPA AN KANDU UNGAN FE ENOLIK TO OTAL FRA AKSI AIR E EKSTRAK

Ocimum san nctum L.)

  ETANOLI

  IK DAUN S SELASIH (O

SKRIPSI

  Diaju ukan untuk M Memenuhi Sa alah Satu Sy yarat Memp peroleh Gela ar Sarjana Fa armasi (S. Fa arm.)

  Progra am Studi Far rmasi Oleh:

  D Damianus L Listyanta Edh hi Sambada NIM M: 07811405

  52 FAKUL LTAS FARM MASI

  

UN NIVERSITA AS SANATA A DHARMA A

YO GYAKART TA

2011

  

HALAMAN PERSEMBAHAN

“Mereka masih ada. Mungkin akan tetap begitu. Tapi aku terbiasa abaikan mereka. Dan mereka akan menyerah. Bukankah begitu juga dengan mimpi -mimpi buruk kita?” /’Tapi mereka menghantuimu.’/ “Mereka masa laluku. Semua orang dihantui masa lalu.” Pembicaraan John Nash

  (penderita schizophrenia pertama peraih nobel tahun 1994) dengan Hansen (rekan John Nash di Princeton University) dalam film Beautifull Mind.

  “Segala perkara dapat kutanggung di dalam Dia yang memberi kekuatan kepadaku”, Filipi 4:13

   

  “Rasa malas itu seharusnya “Jika yang lebih baik bagimu - digunakan untuk membangun masih mungkin, mengapakah pribadi manusia yang lebih engkau berhenti pada yang baik bukan semestinya untuk cukup?” Disampaikan oleh menjatuhkan pribadi

  Mario Teguh dalam MT

  manusia, misal: malas

  Golden Point:

  membuang waktu yang MENUNTUT = MEMINTA menjauhkan kita dari tujuan

• KESUNGGUHAN awal kita hidup,”

  D. L. Edhi Sambada

   

  (28 September 2010)

    Skripsi ini aku persembahkan kepada: Ibu, Bapak, keluarga besarku (Sastro Tinoyo dan Hadi Sumarto) sebagai ungkapan rasa hormat dan baktiku, perempuan yang membuat aku yakin analogi semesta ini tak terbatas, semua sahabat, teman, dan almamaterku.

KATA PENGANTAR

  Puji dan syukur kepada Tuhan karena berkat rahmat dan anugerah-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Antioksidan

  

Menggunakan Radikal 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) dan Penetapan

Kandungan Fenolik Total Fraksi Air Ekstrak Etanolik Daun Selasih

(Ocimum Sanctum L.)” sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana

Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  Dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini penulis telah mendapat banyak bantuan dan dukungan dari berbagai pihak sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:

  1. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. sebagai Dosen Pembimbing yang telah membimbing penulis baik dalam penelitian maupun dalam penyusunan skripsi ini.

  2. Yohanes Dwiatmaka, M.Si. sebagai Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini.

  3. Lucia Wiwid Wijayanti, M.Si. sebagai Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini.

  4. Segenap dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  5. Teman-teman dan sahabatku, Andy Kurniawan dan Yosafat Rubbyanto Widodo, kelas B angkatan 2007, dan kelas FST A angkatan 2007, terima kasih atas bantuan dan kerjasamanya beserta segala suka duka yang telah dilewati bersama dalam penelitian ini.

  6. Koleta Stefani Sarinastiti yang selalu mendoakan dan mendorong agar skripsi ini cepat untuk diselesaikan.

  7. Tim tenis Prambanan (Somatso), pemuda Karangnongko (SKS), dan Paroki Kalasan, yang telah memberi dorongan agar skripsi ini cepat diselesaikan serta membantu penulis di saat ingin meluapkan emosi di lapangan tenis.

  8. Semua pihak yang telah memberi dukungan dan bantuan yang tidak dapat disebutkan satu-persatu.

  Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari sempurna baik dalam hal isi, maupun bahasa. Oleh karena itu, saran dan kritik yang membangun sangat penulis harapkan untuk menyempurnakan skripsi ini. Akhir kata, penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan menjadi sumbangan dalam perkembangan ilmu pengetahuan.

  Yogyakarta, Januari 2011 Penulis

  

DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................... ii HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................... iv LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI

  KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS .............. v KATA PENGANTAR ...................................................................................... vi PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................... viii DAFTAR ISI .................................................................................................... ix DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiv DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xvi DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xviii

  INTISARI ........................................................................................................ xix

  

ABSTRACT ........................................................................................................ xx

  BAB I PENDAHULUAN ................................................................................. 1 A. Latar Belakang Masalah ............................................................................... 1 B. Perumusan Masalah ..................................................................................... 4 C. Keaslian Penelitian ....................................................................................... 5 D. Manfaat Penelitian ....................................................................................... 6 E. Tujuan Penelitian ......................................................................................... 7

  BAB II PENELAAHAN PUSTAKA................................................................. 8 A. Selasih .......................................................................................................... 8 1. Keterangan botani selasih (Ocimum sanctum Linn.) ............................... 8 2. Deskripsi .................................................................................................. 9 3. Kandungan kimia dan kegunaan selasih .................................................. 9 B. Senyawa Fenolik .......................................................................................... 11 C. Antioksidan .................................................................................................. 16 1. Radikal bebas ........................................................................................... 16 2. Definisi antioksidan ................................................................................. 17

  3. Mekanisme antioksidan ........................................................................... 18

  4. Penggolongan antioksidan ....................................................................... 19

  5. Manfaat antioksidan ................................................................................ 21

  6. Metode pengujian aktivitas antioksidan .................................................. 21

  D. Metode DPPH .............................................................................................. 24

  E. Ekstraksi ....................................................................................................... 25

  F. Kesahihan Metode Analisis.......................................................................... 30

  G. Kesalahan dalam Metode Analisis ............................................................... 32

  1. Kesalahan sistemik .................................................................................. 33

  2. Kesalahan tidak sistemik ......................................................................... 34

  H. Landasan Teori ............................................................................................. 34

  I. Hipotesis ....................................................................................................... 36

  BAB III METODOLOGI PENELITIAN........................................................... 37 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .................................................................. 37 B. Variabel ........................................................................................................ 37 1. Variabel bebas ......................................................................................... 37 2. Variabel tergantung ................................................................................. 37 3. Variabel pengacau ................................................................................... 37 C. Definisi Operasional ................................................................................... 37 1. Ekstrak etanolik daun selasih .................................................................. 37 2. Fraksi air .................................................................................................. 37

  3. Persen inhibition concentration (%IC) .................................................... 37

  4. Persen inhibition concentration 50 (IC ) ............................................... 38

  50 D. Bahan dan Alat Penelitian ............................................................................ 38

  1. Bahan penelitian ...................................................................................... 38

  2. Alat penelitian .......................................................................................... 38

  E. Tatacara Penelitian ....................................................................................... 39

  1. Determinasi tumbuhan ............................................................................. 39

  2. Pengumpulan bahan ................................................................................. 39

  3. Preparasi sampel ...................................................................................... 39

  4. Pembuatan larutan pembanding dan uji ................................................. 40

  5. Uji pendahuluan ...................................................................................... 40

  6. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan ............................................... 42

  7. Uji aktivitas antioksidan .......................................................................... 42 8.

  Penetapan kandungan fenolik total .......................................................... 44 F. Analisis Hasil ............................................................................................... 46

  BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 48 A. Hasil Determinasi Tumbuhan ...................................................................... 48 B. Hasil Pengumpulan Bahan ........................................................................... 48 C. Hasil Preparasi Sampel ................................................................................ 50 D. Hasil Uji Pendahuluan ................................................................................. 56 1. Uji fenolik ................................................................................................ 56

  2. Uji pendahuluan aktivitas antioksidan ..................................................... 57

  E. Hasil Optimasi Metode Uji Antioksidan ...................................................... 58

  1. Penentuan OT metode uji aktivitas antioksidan ...................................... 59

  2. Penentuan λ maksimum metode uji aktivitas antioksidan ....................... 60

  F. Hasil Validasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan ....................................... 62

  1. Akurasi metode uji aktivitas antioksidan ................................................. 64

  2. Presisi metode uji aktivitas antioksidan ................................................... 66

  3. Linearitas metode uji aktivitas antioksidan ............................................. 66

  4. Spesifisitas metode uji aktivitas antioksidan ........................................... 67

  G. Hasil Estimasi Aktivitas Antioksidan dengan Radikal DPPH ..................... 67

  H. Hasil Optimasi Metode Penetapan Kandungan Fenolik Total ..................... 73

  1. Penentuan OT penetapan kandungan fenolik total .................................. 73

  2. Penentuan λ maksimum penetapan kandungan fenolik total ................... 74

  I. Hasil Validasi Metode Penetapan Kandungan Fenolik Total ...................... 74 1.

  Akurasi penetapan kandungan fenolik total ........................................... 75 2. Presisi penetapan kandungan fenolik total ............................................. 76 3. Linearitas penetapan kandungan fenolik total........................................ 77 4. Spesifisitas penetapan kandungan fenolik total ..................................... 77 J. Hasil Estimasi Kandungan Fenolik Total .................................................... 77

  BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................... 81 A. Kesimpulan .................................................................................................. 81 B. Saran ............................................................................................................. 81 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 82 LAMPIRAN ....................................................................................................... 89 BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 108

  DAFTAR TABEL

  Halaman Tabel I. Mayoritas golongan senyawa fenolik pada tumbuhan (Mann,

  

et al., 1994) ......................................................................................... 12

  Tabel II. Beberapa macam Reactive Oxygen Species (ROS) dan antioksidan yang menetralkannya (Percival, M., 1998) ...................... 17 Tabel III. Tingkat kekuatan antioksidan dengan metode DPPH ......................... 25 Tabel IV. Rentang akurasi yang masih dapat diterima........................................ 31 Tabel V. Rentang KV yang masih dapat diterima ............................................. 32 Tabel VI. Hasil %Recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan rutin ................. 65 Tabel VII. Hasil %Recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan fraksi air .......... 65 Tabel VIII. Hasil %IC rutin menggunakan radikal DPPH ................................... 69 Tabel IX. Hasil %IC fraksi air ekstrak etanolik daun selasih menggunakan radikal DPPH ............................................................. 69 Tabel X. Hasil nilai IC fraksi air ekstrak etanolik daun selasih dan

  50 rutin ....................................................................................................

  70 Tabel XI. Penggolongan tingkat kekuatan antioksidan rutin dan fraksi air ekstrak etanolik daun selasih ........................................................ 72 Tabel XII. Hasil %Recovery dan %CV penetapan kandungan fenolik total ....................................................................................................

  76

  Tabel XIII. Hasil absorbansi berbagai seri konsentrasi asam galat ...................... 79 Tabel XIV. Hasil absorbansi fraksi air ................................................................. 80 Tabel XV. Hasil kandungan fenolik total fraksi air ............................................ 80

  DAFTAR GAMBAR

  Halaman Gambar 1. Reaksi pembentukan dan penggabungan radikal fenoksil (a,

  b, c, dan d adalah radikal fenoksil) (Bruneton, 1999) ....................... 13 Gambar 2. Oksidasi rutin (dos Santos, Mazo, dan Cavalheiro, 2008) .................. 15 Gambar 3. Perubahan warna larutan pada reaksi radikal DPPH dengan antioksidan (Witt , Lalk, Hager, dan Voigt, 2010) ............... 25 Gambar 4. Skema jalannya penelitian ................................................................. 47 Gambar 5. Hasil uji fenolik (A = kontrol negatif [blanko], B = kontrol positif [asam galat], dan C = larutan uji [fraksi air ekstrak etanolik daun selasih]) ....................................................................... 57

  Gambar 6. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan (A = kontrol negatif, B = kontrol positif [rutin], dan C = larutan uji [fraksi air ekstrak etanolik daun selasih]) ..................................................... 57

  Gambar 7. Grafik penentuan OT rutin ................................................................. 59 Gambar 8. Grafik penentuan OT fraksi air .......................................................... 60 Gambar 9. Gugus kromofor dan auksokrom DPPH ............................................ 61 Gambar 10. Spektra panjang gelombang maksimum DPPH pada tiga seri konsentrasi (keterangan: konsentrasi A = 0,080 mM; B =

  0,048 mM; C = 0,016 mM)................................................................ 62 Gambar 11. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan rutin ....................................................................................................

  63

  Gambar 12. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan fraksi air ekstrak etanolik daun selasih ........................................................ 64 Gambar 13. Struktur rutin (dos Santos, et al., 2008) ........................................... 68 Gambar

  14. Donasi proton senyawa antioksidan ke radikal DPPH (Prakash, et al., 2010) ...................................................................... 70

  Gambar 15. Grafik penentuan OT penetapan kandungan fenolik total ................. 73 Gambar 16. Spektra panjang gelombang maksimum senyawa berwarna biru pada tiga seri konsentrasi asam galat (keterangan: konsentrasi asam galat A = 50 µg/mL; B = 100 µg/mL; C = 150 µg/mL) ...................................................................................... 74

  Gambar 17. Kurva persamaan regresi linear antara konsentrasi asam galat dengan absorbansi ................................................................... 75 Gambar 18. Struktur asam galat (Eslami, Pasanphan, Wagner, dan

  Buettner, 2010) ................................................................................. 78 Gambar 19. Reaksi senyawa fenol dengan pereaksi Folin-Ciocalteu ................... 79

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Halaman Lampiran 1. Surat pengesahan determinasi tanaman selasih .............................. 89 Lampiran 2. Gambar tanaman selasih dari daerah goa Selarong

  (Yogyakarta) ................................................................................... 90 Lampiran 3. Perhitungan rendemen .................................................................... 90 Lampiran 4. Data penimbangan bahan ................................................................ 91 Lampiran 5. Data perhitungan konsentrasi DPPH, larutan pembanding, dan larutan uji ................................................................................ 92 Lampiran 6. Scanning pengkoreksi ..................................................................... 94 Lampiran 7. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan ...................................... 99 Lampiran 8. Uji aktivitas antioksidan menggunakan radikal DPPH .................. 101 Lampiran 9. Perhitungan nilai IC fraksi air ekstrak etanolik daun

  50

  selasih dan rutin .............................................................................. 102 Lampiran 10. Uji statistik aktivitas antioksidan dengan

  PASW Statistics 18 .......................................................................... 103 Lampiran 11. Penimbangan untuk uji kandungan fenolik total ......................... 104 Lampiran 12. Optimasi penentuan kandungan fenolik total .............................. 104 Lampiran 13. Penentuan kandungan fenolik total .............................................. 106

  

INTISARI

  Antioksidan merupakan senyawa yang menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas. Akibatnya, kerusakan sel oleh radikal bebas dapat dihambat. Selasih diketahui memiliki senyawa fenolik. Senyawa tersebut beraktivitas antioksidan. Penelitian ini dilakukan untuk menentukan aktivitas antioksi dan serta kandungan fenolik total fraksi air ekstrak etanolik daun selasih. Pengujian aktivitas antioksidan menggunakan radikal 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) dan dinyatakan dengan nilai Inhibition Concentration 50 (IC ).

  50 Keberadaan senyawa beraktivitas antioksidan akan mengubah warna larutan

  DPPH dari ungu menjadi kuning. DPPH memiliki λ maksimum di 515,5 nm. Ketika elektronnya berpasangan oleh keberadaan senyawa antioksidan, maka absorbansinya menurun secara stokiometri sesuai jumlah elektron yang diambil.

  Kandungan fenolik total ditentukan dengan metode Folin-Ciocalteu dan dinyatakan dengan nilai massa ekuivalen asam galat (mg ekivalen asam galat per g fraksi air). Senyawa fenolik akan dioksidasi oleh pereaksi fenol Folin-Ciocalteu dalam suasana basa sehingga terbentuk larutan dengan warna biru. Larutan tersebut memiliki

  λ maksimum di 750 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi air ekstrak etanolik daun selasih mempunyai aktivitas antioksidan kuat dengan nilai IC sebesar 50,93±0,76 µg/mL. Kandungan fenolik total sebesar

  50 5,04±0,03 mg ekivalen asam galat per g fraksi air.

  

Kata kunci: fraksi air ekstrak etanolik daun Ocimum sanctum L., antioksidan,

DPPH, kandungan fenolik total.

  

ABSTRACT

Antioxidants are compounds that inhibit oxidation reactions by binding

free radicals. Consequently, cell damage by free radicals can be inhibited. Holy

basil is known to have phenolic compounds. This research was conducted to

determine the activity and content of phenolic antioxidants and total the water

fraction from ethanolic extract of holy basil leaves. Tests for antioxidant activity

using the radical DPPH, expressed as Inhibition Concentration 50 (IC ). The

  50

presence of antioxidant compound, will change colour of DPPH from purple to

yellow. DPPH has a

  λ maximum at 515,5 nm. When the electron pairs by the

presence of antioxidant compounds, the absorbance decreases as stochiometric.

Total phenolics content determined by the Folin-Ciocalteu method, expressed as

mg equivalent gallic acid per g of water fraction. Phenolics compound will

oxidated by Folin-Ciocalteu reagent in alkaline conditions, formed blue solution.

The solution has a maximum λ at 750 nm. The results showed that the water

fraction from ethanolic extract of holy basil leaves have strong antioxidant

activity with IC value of 50,93±0,76 µg/mL. Total phenolic content of 5,04±0,03

  50 mg equivalent gallic acid per g water fraction.

  

Keywords: water fraction from ethanolic extract of Ocimum sanctum L. leaves,

antioxidant, DPPH, total phenolic content  

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Tanpa disadari, dalam tubuh manusia terbentuk radikal bebas secara terus

  menerus, baik melalui proses metabolisme sel normal maupun akibat respon terhadap pengaruh dari luar tubuh, seperti paparan polusi lingkungan, ultraviolet, dan asap rokok. Radikal bebas adalah atom atau molekul yang memiliki elektron tidak berpasangan (unpaired electron). Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan, dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul sekitarnya misalnya protein, asam lemak tak jenuh, dan lipoprotein, serta unsur DNA termasuk karbohidrat. Dari molekul-molekul target tersebut, yang paling rentan terhadap serangan radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh. Senyawa radikal bebas di dalam tubuh dapat merusak asam lemak tak jenuh ganda pada membran sel sehingga dinding sel menjadi rapuh, merusak basa DNA sehingga mengacaukan sistem genetika, dan berlanjut pada pembentukan sel kanker (Salganik, 2001; Winarsi, 2007). Selain itu radikal bebas dalam tubuh dapat memicu munculnya berbagai penyakit degeneratif, seperti kardiovaskuler, penuaan dini (Palmer dan Kitchin, 2010), dan osteoporosis akibat dari perusakan sel secara oksidatif (Winarsi, 2007).

  Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron (electron donor) atau reduktan. Dengan kata lain, antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas.

  Akibatnya, kerusakan sel oleh radikal bebas dapat dihambat (Winarsi, 2007). Penambahan antioksidan ke dalam formulasi makanan juga efektif mengurangi oksidasi lemak yang menyebabkan ketengikan, toksisitas, dan destruksi biomolekul makanan (Decker, 1998).

  Sumber antioksidan dapat berasal dari alam maupun hasil sintesis. Antioksidan alam seperti vitamin C, vitamin E, dan flavonoid terbukti aman dikonsumsi oleh manusia (Winarsi, 2007), sedangkan antioksidan sintesis seperti

  

butyl hydroxy anisol (BHA), propil galat (PG), tert-butyl hydroquinone (tBHQ)

  mempunyai efektivitas yang tinggi tetapi dapat menyebabkan kanker melalui mutasi pada DNA (Malkinson, 1999; Gharavi, Haggarty, dan El-Kadi, 2007). Hal inilah yang menyebabkan adanya penelitian eksplorasi sumber antioksidan alam yang berasal dari tumbuhan.

  Selasih digunakan bijinya oleh masyarakat Indonesia sebagai bahan campuran minuman yang bersifat menenangkan (Solikhah, 2007). Selain itu, selasih digunakan untuk mengirim bunga di kuburan yang disertakan dalam rangkaian bunga pada adat Jawa. Di India selasih disebut sebagai “Queen of

  

Herbs.” Hal ini dikarenakan selasih di India telah lama digunakan dalam

  pengobatan Ayurveda dan memiliki kemampuan adaptogen yang sangat poten (Miller dan Miller, 2003). Peneliti sangat tertarik dengan selasih karena di India selasih telah lama dimanfaatkan sebagai tanaman obat sedangkan di Indonesia belum ditemukan penelitian tentang potensi selasih dalam pengobatan.

  Kandungan senyawa fenolik selasih berupa eugenol, cirsilineol,

  

isothymusin, isothymonin, asam rosmarinat, orientin, dan vicenin. Akan tetapi

  tetap terdapat perbedaan komposisi maupun jumlah senyawa bioaktif dalam selasih sebagai akibat pembibitan pada daerah yang berbeda (Wangcharoen dan Morasuk, 2007 a). Dalam suatu penentuan aktivitas antioksidan telah diketahui bahwa senyawa yang menyebabkan aktivitas antioksidan berupa senyawa fenolik.

  Kesimpulan ini diperoleh karena terdapat hubungan yang langsung antara aktivitas antioksidan suatu tumbuhan dengan kandungan total fenoliknya (Aqil, Ahmad, dan Mehmood, 2006). Oleh karena adanya kandungan senyawa fenolik pada selasih, maka penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan kandungan total senyawa fenolik dari selasih.

  Mayoritas senyawa fenolik mempunyai sejumlah gugus hidroksil yang tak tersulih, atau terhubung dengan suatu gula. Oleh karena itu senyawa tersebut merupakan senyawa polar sehingga larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, n-butanol, aseton, dimetilsulfoksida, dimetilformamida, air, dan lain-lain (Markham, 1988). Pemilihan penggunaan ekstrak etanolik (76%) didasarkan dari adanya senyawa fenolik yang lebih larut dalam pelarut polar, dari keamanan ekstrak etanolik yang dihasilkan daripada menggunakan penyari metanol, dan dari penelitian Wangcharoen dan Morasuk (2007 a & b). Penelitian tersebut menggunakan penyari etanol 76% untuk menghasilkan aktivitas antioksidan yang efektif dan efisien dari daun selasih. Pemilihan fraksi air didasarkan pada keamanan konsumsi fraksi yang dihasilkan. Selain itu, didasarkan pada penelitian sejenis oleh Widodo (2011) yang telah menentukan aktivitas antioksidan dari fraksi etil asetat daun selasih yang kepolarannya lebih rendah daripada air sehingga peneliti ingin memperoleh informasi aktivitas antioksidan daun selasih dari fraksi yang lebih polar daripada etil asetat.

  Metode yang digunakan untuk menentukan aktivitas antioksidan dalam penelitian ini adalah metode DPPH. Tujuan metode ini adalah untuk meneliti parameter konsentrasi yang ekuivalen memberikan 50% efek aktivitas antioksidan (IC ). Metode DPPH merupakan metode yang mudah, cepat, dan sensitif untuk

  50

  pengujian aktivitas antioksidan senyawa tertentu atau ekstrak tanaman (Koleva, van Beek, Linssen, de Groot, dan Evstatieva, 2002; Prakash, Rigelhof, dan Miller, 2010). Pada penentuan kandungan total fenolik digunakan metode Folin- Ciocalteau. Metode ini umum digunakan sebagai standar penentuan kandungan fenolik total setara massa ekivalen asam galat pada uji aktivitas aktivitas antioksidan sumber tumbuhan (Aqil, et al., 2006).

B. Perumusan Masalah

  1. Berapakah nilai aktivitas antioksidan fraksi air ekstrak etanolik daun selasih dengan menggunakan radikal bebas DPPH yang dinyatakan dengan IC ?

  50

  2. Berapakah kandungan fenolik total fraksi air ekstrak etanolik daun selasih yang dinyatakan dengan massa ekivalen asam galat?

C. Keaslian Penelitian

  Sejauh pengamatan penulis, penelitian tentang uji aktivitas antioksidan menggunakan radikal DPPH dan penetapan kandungan fenolik total daun selasih (Ocimum sanctum L.) pernah dilakukan oleh:

  1. Aqil, et al., 2006, dengan judul “Antioxidant and Free Radical Scavenging Properties of Twelve Traditionally Used Indian Medicinal.” Penelitian ini menggunakan daun selasih dalam bentuk serbuk kering untuk diekstrak dengan metanol 98%. Ekstrak metanolik inilah yang kemudian dijadikan bahan uji.

  2. Wangcharoen dan Morasuk, 2007 a, dengan judul “Antioxidant Capacity and Phenolic Content of Holy Basil.” Penelitian ini menggunakan daun selasih dari pasar di Chiangmai (Thailand) dan diolah menjadi ekstrak etanolik (60%) dari daun selasih sebagai bahan ujinya.

  3. Wangcharoen dan Morasuk, 2007 b, dengan judul “Antioxidant Capacity and Phenolic Content of Some Thai Culinary Plants.” Penelitian ini menggunakan ekstrak etanolik (18%, 36%, 57%, 76%, dan 95%) daun selasih sebagai bahan ujinya.

4. Veeru, Kishor, dan Meenakshi, 2009, “Screening of Medicinal Plant

  Extracts for Antioxidant Activity.” Penelitian ini menguji ekstrak metanolik daun selasih.

5. Widodo, 2011, dengan judul “Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan

  Radikal 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil (DPPH) dan Penetapan Kandungan Fenolik Total Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Daun Selasih (Ocimum sanctum L.).” Penelitian ini menguji fraksi etil asetat ekstrak etanolik daun selasih.

  Perbedaan antara penelitian ini dengan penelitian sebelumnya adalah bahwa pada penelitian ini daun selasih dipanen dari daerah Goa Selarong, Yogyakarta (RT 1/RW 3 Pedukuhan Kentolan Lor, Kelurahan Gowasari, Kecamatan Pajangan, Kabupaten Bantul) dan dalam keadaan segar diolah untuk didapatkan fraksi air ekstrak etanolik (76%) daun selasih kemudian diuji aktivitas antioksidan menggunakan radikal DPPH dan ditetapkan kandungan fenolik totalnya.

D. Manfaat Penelitian 1.

  Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan pada perkembangan ilmu pengetahuan dalam bidang farmasi, khususnya tentang aktivitas antioksidan fraksi air ekstrak etanolik daun selasih dengan menggunakan radikal DPPH dan kandungan fenolik total fraksi air ekstrak etanolik daun selasih.

2. Manfaat praktis

  Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi bagi penelitian lebih lanjut maupun masyarakat luas mengenai aktivitas antioksidan alami dan kandungan fenolik daun selasih.

E. Tujuan Penelitian 1.

  Tujuan umum Tujuan umum penelitian ini adalah menguji aktivitas antioksidan menggunakan radikal bebas DPPH dan menetapkan kandungan fenolik total fraksi air ekstrak etanolik daun selasih.

2. Tujuan khusus a.

  Mengetahui nilai aktivitas antioksidan fraksi air ekstrak etanolik daun selasih dengan menggunakan radikal bebas DPPH yang dinyatakan dengan IC .

  50 b.

  Mengetahui kandungan fenolik total fraksi air ekstrak etanolik daun selasih yang dinyatakan dalam massa ekivalen asam galat.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Selasih 1. Keterangan botani selasih (Ocimum sanctum Linn.) Tumbuhan selasih termasuk dalam familia Lamiaceae (Kartesz, 2010). Sinonim: O. tenuiflorum L., Geniosporum tenuiflorum (L.) Merr. Moschosma tenuiflorum (L.) Heynhold, Ocimum album Blanco, O. anisodorum Muell., O. brachiatum sensu Hasskarl (non Blume), O. flexuosum sensu Blanco, O. frutescens sensu Burm. f. (non L.), O. gratissimum sensu Lour (non L.), O.

  

hirsutum Benth., O. inodorum. Burm. f., O. monachorum L., O. nelsonii, Zipp ex

Span., O. sanctum L. var. hirsute (Benth.) Hook.f., O. villosum Roxb., O.

virgatum Blanco , O. virgatum, O. tomentosum Lam., Lumnitzera tenuiflora (L.)

  Spreng., Plectranthus monachorum (L.) Spreng., P. striatus sensu Meschler et Hosseus. (non Benth.) (Anton, et al., 2009).

  Nama daerah: Sumatera: selaseh. Jawa: telasih, solasih, atau selasih. Sulawesi: kukuru atau amping (Wijayakusuma, 2005).

  Common name: Inggris: holy basil, sacred basil, monks basil, Perancis:

basilic sacré, basilica thailandais, Jerman: heiliges basilikum, königsbasilikum,

indisches basilikum, dan Italia: basilico sacro (Anton, et al., 2009).

2. Deskripsi

  Selasih merupakan tanaman semusim yang tumbuh tegak, bercabang banyak dibagian atas dan berbau harum. Batang tumbuhan ini berwarna kecoklatan, bersegi empat. Daunnya tunggal, letaknya berhadapan, bertangkai yang panjangnya 0,5-2 cm. Helai daunnya berbentuk bulat telur sampai memanjang, permukaan daunnya berambut halus dengan bintil-bintil kelonjar, tulang daunnya menyirip, tepi daunnya bergerigi, panjangnya 3,5-7,5 cm dan lebar 1,5-2,5 cm, warnanya hijau tua. Bunganya berwarna putih atau lembayung, tersusun dalam tandan yang panjangnya 5-30 cm, keluar diujung percabangan.

  Bijinya keras, berwarna coklat tua, dan bila dimasukkan ke dalam air akan mengembang seperti selai. Tinggi tumbuhan itu mencapai 50-80 cm, tumbuh baik di tempat yang lembab dan teduh. Selasih tumbuh liar di tepi-tepi jalan, sawah kering, hutan jati, dan tepi ladang atau dapat juga ditanam di pekarangan rumah.

  Tumbuhan ini dapat ditemukan di daerah dataran rendah sampai ketinggian 450 meter, kadang-kadang ditanam sampai 1.100 meter diatas permukaan laut (Wijayakusuma, 2005).

  3. Kandungan kimia dan kegunaan selasih Selasih telah lama digunakan oleh masyarakat Indonesia sebagai bahan campuran minuman yang bersifat menenangkan (Solikhah, 2007).

  Aktivitas antioksidan dari komponen dalam selasih merupakan alasan utama kenapa selasih mempunyai aktivitas farmakologi. Senyawa fenolik yang terdapat dalam selasih adalah fenolik berupa eugenol, cirsilineol, isothymusin,

  

isothymonin, asam rosmarinat, orientin, dan vicenin. Dalam selasih juga terkandung zinc yang dapat berperan juga sebagai antioksidan yang berasal dari mineral. Bagaimanapun juga wajar bila terdapat perbedaan komposisi maupun kandungan senyawa bioaktif dalam selasih sebagai akibat pembibitan pada daerah yang berbeda (Wangcharoen dan Morasuk, 2007 a). Laporan penelitian Aqil, et al, (2006) bahwa yang bertanggung jawab atas aktivitas antioksidan ekstrak metanol daun selasih adalah senyawa fenol, glikosida, dan saponin. Ramesh dan Satakopan (2010), melaporkan bahwa dalam ekstrak 50% hidroalkoholik daun selasih mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, glikosida, fenol, tanin, senyawa thiol, dan terpenoid.

  Selasih juga memiliki kandungan asam ursolat yang memiliki peran sebagai antiinflamasi dan anti tumor (Aggarwal, Danda, dan Bokyung, 2008).

  Tumbuhan ini telah lama digunakan orang-orang di benua Asia dalam pengobatan tradisional, misalnya untuk mengobati penyakit maag, diare, sakit kepala, dan batuk (Wangcharoen dan Morasuk, 2007 a).

  Dalam fraksi n-butanol ekstrak etanolik daun selasih telah ditemukan 3 senyawa baru, yaitu ocimarin, ocimumosida A, dan ocimumosida B.

  Ocimumosida A dan ocimumosida B memiliki aktivitas antistres (Maurya, Akanksha, Gupta, Singh, Srivastava, dan Palit, 2007; Henson, 2008). Selama situasi stres, kebutuhan energi suatu organisme meningkat, sehingga dapat menghasilkan radikal bebas. Radikal bebas dapat menyebabkan oksidasi dari asam nukleat dan protein. Radikal bebas juga dapat merusakkan biomembran, hasil dari peningkatan peroksidasi lipid. Selama proses ini, stres oksidatif dapat diminimalkan dengan senyawa adaptogen atau antioksidan (Kenjale, Shah, dan Sathaye, 2007).

  Wangcharoen dan Morasuk (2007a) melaporkan bahwa kandungan fenolik total fraksi air ekstrak etanolik (57%) daun selasih sebesar 12,60±1,02 mg untuk selasih putih dan 19,46±1,97 mg untuk selasih merah ekivalen asam galat per g fraksi air.

  B.

  

Senyawa Fenolik

  Senyawa fenolik adalah substansi organik yang terdiri dari senyawa aromatik dengan substituen hidroksil. Senyawa induk adalah fenol tetapi kebanyakan senyawa fenolik merupakan polifenol. Sumber senyawa fenolik sangat sedikit pada sumber hewani akan tetapi sangat melimpah pada sumber tumbuhan. Diantara 8000 senyawa polifenol tumbuhan yang diketahui, golongan yang terbanyak adalah flavonoid (Mann, Davidson, Hobbs, Banthorpe, dan Harborne, 1994).

• C

  

2 Biflavonoid Amentoflavon

n (C

  Antrakuinon Emodin

  15 C 6 -C 3 -C

  6 Flavonoid Kuersetin

  Isoflavonoid Genistein

  18 (C 6 -C 3 )

  2 Lignan Podofilotoksin 30 (C 6 -C 3 -C 6 )

  6

  14 C 6 -C 2 -C

  3

  )

  n

  Lignin (C

  6 ) n Catechol melanin

  (C

  6 -C 3 -C 6 ) n Flavolan

  

6 Stilben Asam lunularat

  

6 Xanton Mangiferin

  Sejauh ini senyawa fenolik tumbuhan merupakan golongan mayoritas senyawa yang bertindak sebagai antioksidan atau penangkap radikal bebas. Hal ini menjadikan sangat beralasan untuk mendeterminasikan jumlah kandungan total fenolik pada ekstrak tanaman yang telah dipilih (Veeru, et al., 2009).

  8 C

  Tabel I. Mayoritas golongan senyawa fenolik pada tumbuhan (Mann, et al., 1994) Jumlah atom karbon Rangka dasar Golongan Contoh

  6 C

  6 Fenol Catechol

  Benzokuinon 2,6-Dimetoksibenzokuinon

  7 C 6 -C

  

1 Asam Fenol p-Hidroksibenzoat

  6

  13 C 6 -C 1 -C

  2 Asetofenon 3-Asetil-6-metoksibenzaldehid

  Asam fenilasetat p-Hidroksifenilasetat

  9 C 6 -C

  3 Asam hidroksisinamat Kafeat

  Fenilpropen Eugenol Kumarin Aeskuletin Isokumarin Bergenin Kromon Eugenin

  10 C 6 -C

  4 Naftokuinon Plumbagin

• C

Senyawa fenolik merupakan sumber antioksidan alami yang aman digunakan sehingga menjadi senyawa bioaktif dari suatu tumbuhan. Oleh karena itu, perhatian peneliti telah tertuju pada identifikasi tumbuhan yang memiliki aktivitas antioksidan yang dapat digunakan untuk konsumsi manusia sehari-hari (Ebrahimzadeh, Pourmorad, dan Hafezi, 2007). Aktivitas antioksidan dari senyawa fenolik didapatkan dengan cara mereduksi radikal untuk tidak terjadinya reaksi samping yang merugikan. Mekanismenya melalui kemampuan gugus fenol menangkap radikal bebas dengan memberikan atom hidrogennya melalui proses transfer elektron, sehingga senyawa fenolik berubah menjadi radikal fenoksil. Radikal fenoksil ini terstabilkan oleh adanya efek resonansi (Bruneton, 1999; Marxen, Vanselow, Lippemeier, Hintze, Ruser, dan Hansen, 2007). _{OH O O O O}

• ₊ R R R R R _{-e, -H a b c d R}

  O O OH _{O R R} R _{H H O OH c+ d} R _R

Gambar 1. Reaksi pembentukan dan penggabungan radikal fenoksil (a, b, c,

dan d adalah radikal fenoksil) (Bruneton, 1999)

  Sifat kimiawi dari senyawa fenolik alam sangat rumit. Faktanya sebagian besar senyawa tersebut berbentuk konjugat dalam tumbuhan, prinsip konjugasinya dengan residu gula yang terhubung dengan satu atau lebih senyawa fenolik. Mayoritas senyawa fenolik dapat diekstraksi dengan metanol atau kloroform (Mann, et al., 1994). Golongan yang terbanyak dari senyawa fenolik adalah flavonoid. Karena mempunyai sejumlah gugus hidroksil yang tak tersulih, atau suatu gula, flavonoid merupakan senyawa polar. Pada umumnya flavonoid larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol, aseton, dimetilsulfoksida, dimetilformamida, air, dan lain-lain. Adanya gula yang terikat pada flavonoid (bentuk umum yang ditemukan) cenderung menyebabkan flavonoid lebih mudah larut dalam air dan dengan demikian campuran pelarut di atas dengan air merupakan pelarut yang lebih baik untuk glikosida. Sebaliknya, aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavon, dan flavonol yang termetoksilasi cenderung lebih mudah larut dalam pelarut seperti eter dan kloroform (Markham, 1988).

  Senyawa fenolik dalam suatu sampel secara kualitatif dan kuantitatif dapat ditentukan menggunakan metode Folin-Ciocalteu (Veeru, et al., 2009). Metode ini memakai reagen fenol asam fosfomolibdat-fosfotungstat yang biasa disebut reagen fenol Folin-Ciocalteu. Prinsip metode ini adalah dengan adanya senyawa yang dapat mereduksi reagen fenol Folin-Ciocalteu, akan menyebabkan terbentuk senyawa yang berwarna biru. Intensitas warna biru yang terbentuk proporsional dengan jumlah senyawa yang dapat mereduksi dan dapat dideteksi dengan spektrofotometer dengan rentang panjang gelombang 500-750 nm (Abul-Fadl, 1949).

  Contoh senyawa fenolik yang sering diteliti adalah rutin dan asam galat. Rutin sering digunakan sebagai pembanding aktivitas antioksidan bahan tumbuhan karena telah banyak diteliti tentang aktivitas antioksidannya (Armala, 2009; Sunardi, 2007).

  Rutin Produk teroksidasi

  Gambar 2. Oksidasi rutin (dos Santos, Mazo, dan Cavalheiro, 2008)

  Sedangkan asam galat sering digunakan dalam berbagai jurnal ilmiah pengujian kandungan fenolik total sebagai ekivalen terhadap kandungan fenolik total bahan tumbuhan yang diuji (Javanmardi, Stushnoff, Locke, dan Vivanco, 2003; Wangcharoen dan Morasuk, 2007 a&b; Dehpour, et al., 2009; Inglett, Rose, Chen, Stevenson, dan Biswas, 2009; Veeru, et al., 2009).