Deteksi Protein C-myc Pada Jaringan Uterus Mencit (Mus musculus L.) Dengan Metode
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS
MENCIT (Mus musculus L.) DENGAN METODE
IMUNOHISTOKIMIA
SKRIPSI
RISKI OKTAVIANTI SIMANJUNTAK
110805006
DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2016
1
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS
MENCIT (Mus musculus L.) DENGAN METODE
IMUNOHISTOKIMIA
SKRIPSI
Penelitian ini diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat
mencapai gelar Sarjana Sains
RISKI OKTAVIANTI SIMANJUNTAK
110805006
DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2016
2
PERSETUJUAN
Judul
: Deteksi Protein C-myc Pada Jaringan Uterus Mencit
(Mus musculus L.) Dengan Metode
Imunohistokimia
Kategori
: Skripsi
Nama
: Riski Oktavianti Simanjuntak
Nomor Induk Mahasiswa : 110805006
Program Studi
: Sarjana (S1) Biologi
Departemen
: Biologi
Fakultas
: Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Sumatera Utara
Disetujui di
Medan, Februari 2016
Komisi Pembimbing:
Pembimbing II
Pembimbing I
Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M. Biomed
NIP.196602091992031003
Dr. Salomo Hutahaean, M.Si
NIP. 196510111995011001
Disetujui Oleh
Departemen Biologi FMIPA USU
Ketua,
Dr. Nursahara Pasaribu, M.Sc
NIP. 19630123 199003 2 001
i
PERNYATAAN
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS MENCIT (Mus
musculus L.) DENGAN METODE IMUNOHISTOKIMIA
SKRIPSI
Saya mengakui bahwa skripsi ini adalah hasil karya sendiri. Kecuali beberapa
kutipan dan ringkasan yang masing-masing disebutkan sumbernya.
Medan, Februari 2016
RISKI OKTAVIANTI SIMANJUNTAK
110805006
ii
PENGHARGAAN
Puji dan syukur penulis ucapkan Kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah
memberikan rahmat dan kasih-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi
yang berjudul “Deteksi Protein C-myc Pada Jaringan Uterus Mencit (Mus
musculus L.) Dengan Metode Imunohistokimia” dibuat sebagai salah satu
syarat untuk meraih gelar sarjana sains pada departemen Biologi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara, Medan.
Penulis mengucapkan terimakasih sebesar-besarnya kepada Bapak
Dr.Salomo Hutahaean M.Si selaku dosen pembimbing 1 dan Bapak
Prof.Dr.Syafruddin Ilyas M.Biomed selaku dosen pembimbing 2 atas segala
bimbingan, arahan, waktu dan kesabaran yang telah diberikan kepada penulis
selama menyelesaikan skripsi ini. Terimakasih juga kepada Ibu Masitta Tanjung
S.Si, M.Si selaku dosen penguji 1 dan Ibu Dr. Saleha Hannum M.Si selaku dosen
penguji 2 atas segala masukan dan arahan yang telah diberikan sehingga penulisan
skripsi ini dapat diselesaikan.
Penulis juga mengucapkan banyak terimakasih kepada Ibu Dr.Nursahara
Pasaribu M.Sc selaku Ketua Departemen Biologi FMIPA USU. Ibu Dr.Saleha
Hannum M.Si selaku selaku sekretaris Departemen Biologi FMIPA USU dan Ibu
Dr.Nursahara Pasaribu M.Sc selaku dosen Pembimbing Akademik yang telah
banyak memberikan arahan dan motivasi mulai dari awal perkuliahan hingga
penulisan skripsi ini. Bang Erwin dan Kak Ros selaku staf pegawai di Departemen
Biologi. Kepada Laboratorium Genetika dan Laboratorium Struktur Hewan
FMIPA USU yang telah membantu dalam proses penelitian hingga selesai.
Terimakasih juga penulis ucapkan yang sebesar-besarnya kepada keluarga
besar khususnya Ayah dan Ibu tercinta Ramlan Simanjuntak dan Rusmina
Hutagalung atas segala doa, dukungan, semangat, materi, serta kasih sayang yang
selalu ada untuk penulis. Terimakasih kepada abang, kakak dan adik terkasih
yang selalu memberikan motivasi, arahan, kasih sayang dan semangat kepada
penulis. Terimakasih juga kepada Febby Dina, Titis Juniati, Dedeck Silalahi,
Romida Feronika dan Ahmad Zais sebagai sahabat yang telah memberikan waktu
untuk bertukar pikiran dan berdiskusi selama penelitian berlangsung serta teman
seperjuangan stambuk 2011 yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih mempunyai kekurangan
disebabkan keterbatasan kemampuan dan pengetahuan yang penulis miliki,
walaupun penulis sudah berusaha untuk yang terbaik. Oleh sebab itu dengan
kerendahan hati, penulis menerima kritik dan saran yang membangun demi
kesempurnaan penulisan ini.
Medan, Februari 2016
Penulis
iii
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS MENCIT (Mus
musculus L.) DENGAN METODE IMUNOHISTOKIMIA
ABSTRAK
Kanker adalah penyakit disebabkan banyak faktor, salah satunya mutasi protein
siklus sel yaitu protein c-myc. Protein c-myc merupakan master regulator dari
metabolisme sel dan proliferasi. Protein c-myc sering dikaitkan dengan kanker.
Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi protein c-myc pada jaringan. Jaringan
dipilih berdasarkan dengan teori davies yaitu umur evolusi jaringan yang lebih
muda lebih rentan terhadap penyakit kanker demikian sebaliknya, maka dipilih
jaringan uterus mencit (Mus musculus L.) yang umur evolusinya lebih muda
dibandingan dengan jaringan ovarium mencit (Mus musculus L.). Metode yang
digunakan adalah metode imunohistokimia yaitu adanya ikatan antigen antibodi
yang direaksikan dengan kit imunohistokimia untuk menimbulkan warna coklat
pada jaringan yang terekspresi protein c-myc. Hasil menunjukkan bahwa pada
jaringan uterus protein c-myc diekspresikan di lamina propia (stroma) antar
kelenjar dan tingkat ekspresinya lebih tinggi dengan skor 2.5 merupakan ekspresi
sedang, sedangkan pada ovarium protein c-myc diekspresikan di sel teka, sel
granulosa dan oosit dengan tingkat ekspresi 1.75 yang merupakan ekspresi
rendah.
Kata Kunci: imunohistokimia, protein c-myc, protoonkogen
iv
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS MENCIT (Mus
musculus L.) DENGAN METODE IMUNOHISTOKIMIA
ABSTRACT
Cancer is a kind of disease caused by many factors, one of them is cell cycle
protein mutation namely c-myc protein. C-myc protein is the master regulator of
cell metabolism and proliferation. The c-myc protein is generally linked with
cancer. This research aims to detect the c-myc protein on the tissue. the tissues are
selected based on davies’ theory, namely the lifespan of younger tissue are more
susceptible to cancer and vice versa, that’s why uterine tissue of mice (Mus
musculus L) are chosen in which its evolution lifespan is more easily compared
than ovarium tissue of mice (Mus musculus L.) The method applied is
immunohistochemistry namely the antibody antigen binding reacted with
immunohistochemistry kit to cause the brown color on the tissue expressed c-myc
protein. The obtained result showed that c-myc protein in the uterine tissue is
expressed in lamina propria (stroma) between the gland and the level of
expression is higher with a score of 2.5 is a medium expression, whereas on the
ovary, c-myc protein is expressed in theca cells, granulosa cells and oocytes with
expression levels 1.75 which is low expression.
Kata Kunci: Protooncogene, c-myc protein, immunohistochemistry.
v
DAFTAR ISI
Halaman
i
ii
iii
iv
v
vi
viii
ix
PERSETUJUAN
PERNYATAAN
PENGHARGAAN
ABSTRAK
ABSTRACT
DAFTAR ISI
DAFTAR GAMBAR
DAFTAR LAMPIRAN
BAB 1. PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
1.2. Permasalahan
1.3. Tujuan Penelitian
1.4. Hipotesis
1.5. Manfaat Penelitian
1
1
2
2
2
3
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Penyakit Kanker
2.2. Anatomi Uterus
2.3. Anatomi Ovarium
2.4. Faktor Resiko Kanker Uterus dan Ovarium
2.5. Mekanisme Molekuler Terbentuk Sel Kanker
2.6. Protein C-myc
2.7. Imunohistokimia
4
4
5
5
6
7
8
9
BAB 3. BAHAN DAN METODE
3.1.Waktu dan Tempat
3.2. Alat dan Bahan
3.3. Prosedur Penelitian
3.3.1. Pemeliharaan Hewan Uji
3.3.2. Pembuatan Preparat Jaringan
3.3.3. Pewarnaan Jaringan Dengan Hematoksilin-Eosin
3.3.4. Metode Imunohistokimia
3.3.5. Skoring
10
10
10
10
10
11
11
12
13
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
14
vi
4.1. Mikroanatomi Uterus Mencit (Mus musculus L.) Dengan Pewarnaan
14
Hematoksilin-Eosin
4.2. Mikroanatomi Ovarium Mencit (Mus musculus L.) Dengan Pewarnaan
Hematoksilin-Eosin
4.3. Ekspresi Protein C-myc Pada Jaringan Uterus dan Ovarium Mencit
(Mus musculus L.) Dengan Metode Imunohistokimia
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
5.2. Saran
15
DAFTAR PUSTAKA
22
LAMPIRAN
24
vii
17
21
21
21
DAFTAR GAMBAR
Nomor
Gambar
4.1.
4.2.
4.3.
4.4.
Judul
Mikroanatomi Uterus Mencit (Mus musculus L.)
Mikroanatomi Ovarium Mencit (Mus musculus L.)
Ekspresi Protein c-myc di Jaringan Uterus dan Ovarium
Grafik Skoring Ekspresi Protein c-myc Pada Jaringan
Uterus dan Ovarium
viii
Halaman
14
15
17
19
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor
Lampiran
1.
2.
Judul
Foto Alat dan Kerja
Data Dan Hasil Analisis Ekspresi Protein c-myc
ix
Halaman
24
27
MENCIT (Mus musculus L.) DENGAN METODE
IMUNOHISTOKIMIA
SKRIPSI
RISKI OKTAVIANTI SIMANJUNTAK
110805006
DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2016
1
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS
MENCIT (Mus musculus L.) DENGAN METODE
IMUNOHISTOKIMIA
SKRIPSI
Penelitian ini diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat
mencapai gelar Sarjana Sains
RISKI OKTAVIANTI SIMANJUNTAK
110805006
DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2016
2
PERSETUJUAN
Judul
: Deteksi Protein C-myc Pada Jaringan Uterus Mencit
(Mus musculus L.) Dengan Metode
Imunohistokimia
Kategori
: Skripsi
Nama
: Riski Oktavianti Simanjuntak
Nomor Induk Mahasiswa : 110805006
Program Studi
: Sarjana (S1) Biologi
Departemen
: Biologi
Fakultas
: Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Sumatera Utara
Disetujui di
Medan, Februari 2016
Komisi Pembimbing:
Pembimbing II
Pembimbing I
Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M. Biomed
NIP.196602091992031003
Dr. Salomo Hutahaean, M.Si
NIP. 196510111995011001
Disetujui Oleh
Departemen Biologi FMIPA USU
Ketua,
Dr. Nursahara Pasaribu, M.Sc
NIP. 19630123 199003 2 001
i
PERNYATAAN
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS MENCIT (Mus
musculus L.) DENGAN METODE IMUNOHISTOKIMIA
SKRIPSI
Saya mengakui bahwa skripsi ini adalah hasil karya sendiri. Kecuali beberapa
kutipan dan ringkasan yang masing-masing disebutkan sumbernya.
Medan, Februari 2016
RISKI OKTAVIANTI SIMANJUNTAK
110805006
ii
PENGHARGAAN
Puji dan syukur penulis ucapkan Kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah
memberikan rahmat dan kasih-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi
yang berjudul “Deteksi Protein C-myc Pada Jaringan Uterus Mencit (Mus
musculus L.) Dengan Metode Imunohistokimia” dibuat sebagai salah satu
syarat untuk meraih gelar sarjana sains pada departemen Biologi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara, Medan.
Penulis mengucapkan terimakasih sebesar-besarnya kepada Bapak
Dr.Salomo Hutahaean M.Si selaku dosen pembimbing 1 dan Bapak
Prof.Dr.Syafruddin Ilyas M.Biomed selaku dosen pembimbing 2 atas segala
bimbingan, arahan, waktu dan kesabaran yang telah diberikan kepada penulis
selama menyelesaikan skripsi ini. Terimakasih juga kepada Ibu Masitta Tanjung
S.Si, M.Si selaku dosen penguji 1 dan Ibu Dr. Saleha Hannum M.Si selaku dosen
penguji 2 atas segala masukan dan arahan yang telah diberikan sehingga penulisan
skripsi ini dapat diselesaikan.
Penulis juga mengucapkan banyak terimakasih kepada Ibu Dr.Nursahara
Pasaribu M.Sc selaku Ketua Departemen Biologi FMIPA USU. Ibu Dr.Saleha
Hannum M.Si selaku selaku sekretaris Departemen Biologi FMIPA USU dan Ibu
Dr.Nursahara Pasaribu M.Sc selaku dosen Pembimbing Akademik yang telah
banyak memberikan arahan dan motivasi mulai dari awal perkuliahan hingga
penulisan skripsi ini. Bang Erwin dan Kak Ros selaku staf pegawai di Departemen
Biologi. Kepada Laboratorium Genetika dan Laboratorium Struktur Hewan
FMIPA USU yang telah membantu dalam proses penelitian hingga selesai.
Terimakasih juga penulis ucapkan yang sebesar-besarnya kepada keluarga
besar khususnya Ayah dan Ibu tercinta Ramlan Simanjuntak dan Rusmina
Hutagalung atas segala doa, dukungan, semangat, materi, serta kasih sayang yang
selalu ada untuk penulis. Terimakasih kepada abang, kakak dan adik terkasih
yang selalu memberikan motivasi, arahan, kasih sayang dan semangat kepada
penulis. Terimakasih juga kepada Febby Dina, Titis Juniati, Dedeck Silalahi,
Romida Feronika dan Ahmad Zais sebagai sahabat yang telah memberikan waktu
untuk bertukar pikiran dan berdiskusi selama penelitian berlangsung serta teman
seperjuangan stambuk 2011 yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih mempunyai kekurangan
disebabkan keterbatasan kemampuan dan pengetahuan yang penulis miliki,
walaupun penulis sudah berusaha untuk yang terbaik. Oleh sebab itu dengan
kerendahan hati, penulis menerima kritik dan saran yang membangun demi
kesempurnaan penulisan ini.
Medan, Februari 2016
Penulis
iii
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS MENCIT (Mus
musculus L.) DENGAN METODE IMUNOHISTOKIMIA
ABSTRAK
Kanker adalah penyakit disebabkan banyak faktor, salah satunya mutasi protein
siklus sel yaitu protein c-myc. Protein c-myc merupakan master regulator dari
metabolisme sel dan proliferasi. Protein c-myc sering dikaitkan dengan kanker.
Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi protein c-myc pada jaringan. Jaringan
dipilih berdasarkan dengan teori davies yaitu umur evolusi jaringan yang lebih
muda lebih rentan terhadap penyakit kanker demikian sebaliknya, maka dipilih
jaringan uterus mencit (Mus musculus L.) yang umur evolusinya lebih muda
dibandingan dengan jaringan ovarium mencit (Mus musculus L.). Metode yang
digunakan adalah metode imunohistokimia yaitu adanya ikatan antigen antibodi
yang direaksikan dengan kit imunohistokimia untuk menimbulkan warna coklat
pada jaringan yang terekspresi protein c-myc. Hasil menunjukkan bahwa pada
jaringan uterus protein c-myc diekspresikan di lamina propia (stroma) antar
kelenjar dan tingkat ekspresinya lebih tinggi dengan skor 2.5 merupakan ekspresi
sedang, sedangkan pada ovarium protein c-myc diekspresikan di sel teka, sel
granulosa dan oosit dengan tingkat ekspresi 1.75 yang merupakan ekspresi
rendah.
Kata Kunci: imunohistokimia, protein c-myc, protoonkogen
iv
DETEKSI PROTEIN C-MYC PADA JARINGAN UTERUS MENCIT (Mus
musculus L.) DENGAN METODE IMUNOHISTOKIMIA
ABSTRACT
Cancer is a kind of disease caused by many factors, one of them is cell cycle
protein mutation namely c-myc protein. C-myc protein is the master regulator of
cell metabolism and proliferation. The c-myc protein is generally linked with
cancer. This research aims to detect the c-myc protein on the tissue. the tissues are
selected based on davies’ theory, namely the lifespan of younger tissue are more
susceptible to cancer and vice versa, that’s why uterine tissue of mice (Mus
musculus L) are chosen in which its evolution lifespan is more easily compared
than ovarium tissue of mice (Mus musculus L.) The method applied is
immunohistochemistry namely the antibody antigen binding reacted with
immunohistochemistry kit to cause the brown color on the tissue expressed c-myc
protein. The obtained result showed that c-myc protein in the uterine tissue is
expressed in lamina propria (stroma) between the gland and the level of
expression is higher with a score of 2.5 is a medium expression, whereas on the
ovary, c-myc protein is expressed in theca cells, granulosa cells and oocytes with
expression levels 1.75 which is low expression.
Kata Kunci: Protooncogene, c-myc protein, immunohistochemistry.
v
DAFTAR ISI
Halaman
i
ii
iii
iv
v
vi
viii
ix
PERSETUJUAN
PERNYATAAN
PENGHARGAAN
ABSTRAK
ABSTRACT
DAFTAR ISI
DAFTAR GAMBAR
DAFTAR LAMPIRAN
BAB 1. PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
1.2. Permasalahan
1.3. Tujuan Penelitian
1.4. Hipotesis
1.5. Manfaat Penelitian
1
1
2
2
2
3
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Penyakit Kanker
2.2. Anatomi Uterus
2.3. Anatomi Ovarium
2.4. Faktor Resiko Kanker Uterus dan Ovarium
2.5. Mekanisme Molekuler Terbentuk Sel Kanker
2.6. Protein C-myc
2.7. Imunohistokimia
4
4
5
5
6
7
8
9
BAB 3. BAHAN DAN METODE
3.1.Waktu dan Tempat
3.2. Alat dan Bahan
3.3. Prosedur Penelitian
3.3.1. Pemeliharaan Hewan Uji
3.3.2. Pembuatan Preparat Jaringan
3.3.3. Pewarnaan Jaringan Dengan Hematoksilin-Eosin
3.3.4. Metode Imunohistokimia
3.3.5. Skoring
10
10
10
10
10
11
11
12
13
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
14
vi
4.1. Mikroanatomi Uterus Mencit (Mus musculus L.) Dengan Pewarnaan
14
Hematoksilin-Eosin
4.2. Mikroanatomi Ovarium Mencit (Mus musculus L.) Dengan Pewarnaan
Hematoksilin-Eosin
4.3. Ekspresi Protein C-myc Pada Jaringan Uterus dan Ovarium Mencit
(Mus musculus L.) Dengan Metode Imunohistokimia
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
5.2. Saran
15
DAFTAR PUSTAKA
22
LAMPIRAN
24
vii
17
21
21
21
DAFTAR GAMBAR
Nomor
Gambar
4.1.
4.2.
4.3.
4.4.
Judul
Mikroanatomi Uterus Mencit (Mus musculus L.)
Mikroanatomi Ovarium Mencit (Mus musculus L.)
Ekspresi Protein c-myc di Jaringan Uterus dan Ovarium
Grafik Skoring Ekspresi Protein c-myc Pada Jaringan
Uterus dan Ovarium
viii
Halaman
14
15
17
19
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor
Lampiran
1.
2.
Judul
Foto Alat dan Kerja
Data Dan Hasil Analisis Ekspresi Protein c-myc
ix
Halaman
24
27