Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak n-Heksana, Etilasetat dan Etanol Daun Sembung Rambat (Mikania micrantha Kunth) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus Dan Escherichia coli
LAMPIRAN
Lampiran 1. Hasil Identifikasi Daun Sembung Rambat (Mikania micrantha
Kunth)
38
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2.Gambar Tumbuhan dan Daun Sembung Rambat (Mikania
micrantha Kunth)
Gambar Tumbuhan Sembung Rambat
Gambar Daun Sembung Rambat
39
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar Simplisia Dan Serbuk Simplisia Daun Sembung
Rambat (Mikania micrantha Kunth)
Gambar Simplisia Daun Dembung Rambat
Gambar Serbuk Simplisia Daun Sembung Rambat
40
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun sembung rambat
(Mikania micrantha Kunth) perbesaran 10 x 40
1
2
3
4
5
Keterangan:
1.
2.
3.
4.
5.
Rambut penutup uniseluler
Stomata tipe anomositik
Sel Epidermis
Palisade
Pembuluh kayu bentuk spiral
41
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5: Hasil pengukuran diameter zona hambat tiga kalipengulangan
ekstrak n-heksana, etilasetat dan etanolterhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichiacoli
a. n-heksana
Konsentrasi
(mg/ml)
500
400
300
Staphylococcus aureus
I
II
III
9,9
9,8
9,9
8,8
8,9
8,9
8,0
8,2
8,0
Escherichia coli
I
II
7,8
7,9
6,6
6,8
6,3
6,4
III
8,1
7,2
6,5
b. Ekstrak etilasetat
Konsentrasi
(mg/ml)
500
400
300
200
100
75
50
25
Staphylococcus aureus
I
II
III
26,8
26,8
26,9
24,7
25,8
25,2
22,9
23,2
22,7
18,8
19,4
18,9
15,6
16,9
16,2
14,9
14,1
14,8
10,8
10,9
10,4
8,3
7,8
8,3
Escherichia coli
I
II
24,9
24,8
23,7
23,8
19,8
21,9
17,9
18,0
14,9
15,8
13,8
14,1
8,7
9,9
7,9
7,5
III
24,9
23,8
21,9
18,0
15,8
14,1
9,9
7,7
c. Ekstrak etanol
Konsentrasi
(mg/ml)
500
400
300
200
100
75
50
25
Staphylococcus aureus
I
II
III
16,7
16,8
16,9
14,9
15,9
14,8
12,8
12,9
12,7
10,9
11,9
10,8
10,4
11,5
10,2
10,2
9,9
8,9
8,3
8,7
7,6
7,3
7,5
7,1
42
Escherichia coli
I
II
15,9
15,6
14,6
14,0
11,9
11,8
10,6
11,0
8,9
10,3
8,1
8,8
7,9
8,3
7,0
7,1
III
15,8
14,3
12,1
9,4
8,2
7,8
7,6
7,4
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6.Hasilujiaktivitas antibakteri ekstrak daunSembungRambat
(MikaniamicranthaKunth) terhadapbakteriEscherichia coli
a. Ekstrak n-heksana
500
400
200
300
Konsentrasi 500, 400, 300 dan 200mg/mL
b. Blanko
43
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6 lanjutan :
c. Ekstrak etilasetat
400
500
200
100
75
300
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
50
25
Konsentrasi 50 dan 25mg/mL
44
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6 lanjutan :
d. Ekstrak etanol
500
400
200
100
300
75
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
50
25
Konsentrasi 50 dan 25 mg/mL
Lamp[iran 7 : Hasilujiaktivitas antibakteri ekstrak daun Sembung Rambat
(MikaniamicranthaKunth) terhadapbakteriStaphylococcusaureus
45
Universitas Sumatera Utara
a. Ekstrak n-heksana
500
300
400
200
Konsentrasi 500, 400, 300 dan200mg/ml
a. Blanko
Lampiran 7 lanjutan :
b. Ekstrak etilasetat
46
Universitas Sumatera Utara
500
400
200
100
75
300
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
50
25
Konsentrasi 50 dan 25mg/mL
Lampiran 7 lanjutan :
c. Ekstraketanol
47
Universitas Sumatera Utara
500
400
200
300
100
75
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
25
50
Konsentrasi 50 dan 25 mg/mL
Lampiran 8.Perhitungankarakterisasisimplisia
1. Perhitunganpenetapankadar air simplisia
48
Universitas Sumatera Utara
%Kadar air simplisia =
No
1
2
3
volume air (ml)
x 100%
berat sampel (g)
Berat Sampel
5,0835
5,0421
5,0603
%Kadar air =
Volume awal (ml)
1,3
1,6
1,9
Volume akhir (ml)
1,6
1,9
2,2
volume akhir − volume awal
x 100%
berat sampel
1. Kadar air =
1,6 − 1,3
x 100% = 5,90%
5,0835
2. Kadar air =
1,9 − 1,6
x 100% = 5,95%
5,0421
3. Kadar air =
2,2 − 1,9
x 100% = 5,93%
5,0603
%Rata − rata kadar air =
5,90% + 5,95% + 5,93%
= 5,93%
3
2. Perhitungan kadar sari larut air
%Kadar sari larut dalam air =
berat sari (g)
100
x
x 100%
berat sampel (g)
20
49
Universitas Sumatera Utara
No
1
2
3
Berat sampel (g)
5,0066
5,0286
5,0018
Berat sari (g)
0,333
0,333
0,338
1. Kadar sari larut dalam air =
100
0,333
x
x 100% = 33,11%
20
5,0066
2. Kadar sari larut dalam air =
0,333
100
x
x 100% = 33,25%
5,0286
20
3. Kadar sari larut dalam air =
100
0,338
x
x 100% = 33,79%
20
5,0018
% Rata − rata kadar sari larut dalam air =
33,11% + 33,25% + 33,79%
= 33,38%
3
3. Perhitungan kadar sari larut etanol
%Kadar sari larut dalam etanol =
berat sari (g)
100
x
x 100%
berat sampel(g)
20
50
Universitas Sumatera Utara
No
1
2
3
Berat sampel (g)
5,0076
5,0166
5,0027
Berat sari (g)
0,286
0,280
0,269
1. Kadar sari larut dalam etanol =
100
0,286
x
x 100% = 28,56%
20
5,0076
2. Kadar sari larut dalam etanol =
0,280
100
x
x 100% = 27,91%
5,0166
20
3. Kadar sari larut dalam etanol =
100
0,269
x
x 100% = 26,88%
20
5,0027
%Rata − rata kadar sari larut dalam etanol =
28,56% + 27,91% + 26,88%
3
= 27,78%
4. Perhitunganpenetapankadarabu total
%Kadar abu total =
berat abu (g)
x 100%
berat sampel (g)
51
Universitas Sumatera Utara
NO
Berat Sampel
Berat abu (g)
1
2
3
2,0320
2,0260
2,0490
0,158
0,153
0,161
1. Kadar abu total =
0,158 (g)
x 100% = 7,78%
2,0320 (g)
2. Kadar abu total =
0,153 (g)
x 100% = 7,55%
2,026 (g)
3. Kadar abu total =
0,161 (g)
x 100% = 7,86%
2,0490 (g)
% Rata − rata kadar abu total =
7,78% + 7,55% + 7,86%
= 7,73%
3
5. Perhitunganpenetapankadarabu yang tidaklarutasam
%Kadar abu total =
berat abu (g)
x 100%
berat sampel (g)
52
Universitas Sumatera Utara
N0
1
2
3
Berat Sampel
2,0320
2,0260
2,0490
Berat abu (g)
0,019
0,017
0,24
1. Kadar abu yang tidak larut asam =
0,019 (g)
x 100% = 0,93%
2,0320 (g)
2. Kadar abu yang tidak larut asam =
0,017 (g)
x 100% = 0,84%
2,026 (g)
3. Kadar abuyang tidak larut asam =
0,024 (g)
x 100% = 1,17%
2,0490 (g)
% Rata − rata kadar abu total =
0,93% + 0,84% + 1,17%
= 0,98%
3
Lampiran 9.BaganPenelitian
Bagan skrining fitokimia dan karakterisasi serbuk simplisia
Daun Sembung Rambat
Dibersihkan dari pengotor
53
Universitas Sumatera Utara
Dicuci dengan air mengalir
Ditiriskan dan ditimbang
Dikeringkan
Simplisia
Diserbukkan
SerbukSimplisia
SkriningFitokimi
a
KarakterisasiSim
plisia
- Alkaloida
- Flavonoida
- Saponin
- Tanin
- Glikosida
- Steroida/Triterpenoida
PembuatanEkstrakn-heksana,
etilasetat dan etanol secara
maserasi
- PemeriksaanMikroskopik
- PemeriksaanMakroskopik
- Penetapan kadar air
- Penetapan kadar sari yang
larutdalametanol
- Penetapan kadar sari yang
larutdalam air
- Penetapan kadarabu total
- Penetapan kadarabu yang
tidaklarutdalamasam
Dipekatkan
dengan rotary
epavorator
Ekstrak kental
Uji aktivitas antibakteri ekstrak
n-heksan, etilasetat dan etanol
Lampiran 10.Baganpembuatanekstrakn-heksana, etilasetatdanetanol
350 g Serbuk simplisia
Daun Sembung Rambat
54
Universitas Sumatera Utara
Dimasukkan kedalam wadah kaca bermulut lebar
Ditambahkancairan penyari n-heksana
Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya
sambil sesekali diaduk
Disaring
Maserat
Ampas
Dipekatkan dengan
rotary
evaporatorpada
Diangin-anginkan dalam ruangan
Dikering bekukan
dengan freeze dryer
Dibiarkan selama 5 hari terlindung
dari cahaya sambil sesekali diaduk
Ditambahkan cairan penyari etilasetat
Disaring
Ekstrak kental
n-heksana
Maserat
Ampas
Dipekatkan dengan
rotary
evaporatorpadasuhu
Dikeringbekukan
dengan freeze dryer
Ekstrak kental
etilasetat
Ampas
Diangin-anginkan dalam ruangan
Ditambahkan cairan penyari etanol
55
Universitas Sumatera Utara
Dibiarkan selama 5 hari terlindung
dari cahaya sambil sesekali diaduk
Disaring
Ampas
Maserat
Dipekatkan dengan
rotary
evaporatorpada suhu
Dikeringbekukan
dengan freeze dryer
Ekstrak kental
etanol
Lampiran 11.Bagan uji aktivitas antibakteri dari larutan uji
Stok kultur
56
Universitas Sumatera Utara
Diambil 1 ose
Disuspensikan kedalam 10 ml media Nutrient Broth
Diukur kekeruhan pada panjang gelombang
580 nm sampai diperoleh tansmitan 25%
Inokulum bakteri
Dimasukkan 0,1ml inokulum kedalam cawan petri
Ditambahkan 20ml media media Nutrient
Agarkedalam cawan petri
Dihomogenkan dan dibiarkan memadat
Media padat
Diletakkan kertas cakram yang telah
direndam terlebih dahulu dalam larutan uji
dan blanko
Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 18-24 jam
Hasil inkubasi
Diukur diameter zona hambat disekitar
kertas cakram
Hasil
(Diameter zona hambat)
57
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 1. Hasil Identifikasi Daun Sembung Rambat (Mikania micrantha
Kunth)
38
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2.Gambar Tumbuhan dan Daun Sembung Rambat (Mikania
micrantha Kunth)
Gambar Tumbuhan Sembung Rambat
Gambar Daun Sembung Rambat
39
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar Simplisia Dan Serbuk Simplisia Daun Sembung
Rambat (Mikania micrantha Kunth)
Gambar Simplisia Daun Dembung Rambat
Gambar Serbuk Simplisia Daun Sembung Rambat
40
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun sembung rambat
(Mikania micrantha Kunth) perbesaran 10 x 40
1
2
3
4
5
Keterangan:
1.
2.
3.
4.
5.
Rambut penutup uniseluler
Stomata tipe anomositik
Sel Epidermis
Palisade
Pembuluh kayu bentuk spiral
41
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5: Hasil pengukuran diameter zona hambat tiga kalipengulangan
ekstrak n-heksana, etilasetat dan etanolterhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichiacoli
a. n-heksana
Konsentrasi
(mg/ml)
500
400
300
Staphylococcus aureus
I
II
III
9,9
9,8
9,9
8,8
8,9
8,9
8,0
8,2
8,0
Escherichia coli
I
II
7,8
7,9
6,6
6,8
6,3
6,4
III
8,1
7,2
6,5
b. Ekstrak etilasetat
Konsentrasi
(mg/ml)
500
400
300
200
100
75
50
25
Staphylococcus aureus
I
II
III
26,8
26,8
26,9
24,7
25,8
25,2
22,9
23,2
22,7
18,8
19,4
18,9
15,6
16,9
16,2
14,9
14,1
14,8
10,8
10,9
10,4
8,3
7,8
8,3
Escherichia coli
I
II
24,9
24,8
23,7
23,8
19,8
21,9
17,9
18,0
14,9
15,8
13,8
14,1
8,7
9,9
7,9
7,5
III
24,9
23,8
21,9
18,0
15,8
14,1
9,9
7,7
c. Ekstrak etanol
Konsentrasi
(mg/ml)
500
400
300
200
100
75
50
25
Staphylococcus aureus
I
II
III
16,7
16,8
16,9
14,9
15,9
14,8
12,8
12,9
12,7
10,9
11,9
10,8
10,4
11,5
10,2
10,2
9,9
8,9
8,3
8,7
7,6
7,3
7,5
7,1
42
Escherichia coli
I
II
15,9
15,6
14,6
14,0
11,9
11,8
10,6
11,0
8,9
10,3
8,1
8,8
7,9
8,3
7,0
7,1
III
15,8
14,3
12,1
9,4
8,2
7,8
7,6
7,4
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6.Hasilujiaktivitas antibakteri ekstrak daunSembungRambat
(MikaniamicranthaKunth) terhadapbakteriEscherichia coli
a. Ekstrak n-heksana
500
400
200
300
Konsentrasi 500, 400, 300 dan 200mg/mL
b. Blanko
43
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6 lanjutan :
c. Ekstrak etilasetat
400
500
200
100
75
300
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
50
25
Konsentrasi 50 dan 25mg/mL
44
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6 lanjutan :
d. Ekstrak etanol
500
400
200
100
300
75
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
50
25
Konsentrasi 50 dan 25 mg/mL
Lamp[iran 7 : Hasilujiaktivitas antibakteri ekstrak daun Sembung Rambat
(MikaniamicranthaKunth) terhadapbakteriStaphylococcusaureus
45
Universitas Sumatera Utara
a. Ekstrak n-heksana
500
300
400
200
Konsentrasi 500, 400, 300 dan200mg/ml
a. Blanko
Lampiran 7 lanjutan :
b. Ekstrak etilasetat
46
Universitas Sumatera Utara
500
400
200
100
75
300
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
50
25
Konsentrasi 50 dan 25mg/mL
Lampiran 7 lanjutan :
c. Ekstraketanol
47
Universitas Sumatera Utara
500
400
200
300
100
75
Konsentrasi 500, 400 dan 300 mg/mL
Konsentrasi 200, 100 dan 75 mg/mL
25
50
Konsentrasi 50 dan 25 mg/mL
Lampiran 8.Perhitungankarakterisasisimplisia
1. Perhitunganpenetapankadar air simplisia
48
Universitas Sumatera Utara
%Kadar air simplisia =
No
1
2
3
volume air (ml)
x 100%
berat sampel (g)
Berat Sampel
5,0835
5,0421
5,0603
%Kadar air =
Volume awal (ml)
1,3
1,6
1,9
Volume akhir (ml)
1,6
1,9
2,2
volume akhir − volume awal
x 100%
berat sampel
1. Kadar air =
1,6 − 1,3
x 100% = 5,90%
5,0835
2. Kadar air =
1,9 − 1,6
x 100% = 5,95%
5,0421
3. Kadar air =
2,2 − 1,9
x 100% = 5,93%
5,0603
%Rata − rata kadar air =
5,90% + 5,95% + 5,93%
= 5,93%
3
2. Perhitungan kadar sari larut air
%Kadar sari larut dalam air =
berat sari (g)
100
x
x 100%
berat sampel (g)
20
49
Universitas Sumatera Utara
No
1
2
3
Berat sampel (g)
5,0066
5,0286
5,0018
Berat sari (g)
0,333
0,333
0,338
1. Kadar sari larut dalam air =
100
0,333
x
x 100% = 33,11%
20
5,0066
2. Kadar sari larut dalam air =
0,333
100
x
x 100% = 33,25%
5,0286
20
3. Kadar sari larut dalam air =
100
0,338
x
x 100% = 33,79%
20
5,0018
% Rata − rata kadar sari larut dalam air =
33,11% + 33,25% + 33,79%
= 33,38%
3
3. Perhitungan kadar sari larut etanol
%Kadar sari larut dalam etanol =
berat sari (g)
100
x
x 100%
berat sampel(g)
20
50
Universitas Sumatera Utara
No
1
2
3
Berat sampel (g)
5,0076
5,0166
5,0027
Berat sari (g)
0,286
0,280
0,269
1. Kadar sari larut dalam etanol =
100
0,286
x
x 100% = 28,56%
20
5,0076
2. Kadar sari larut dalam etanol =
0,280
100
x
x 100% = 27,91%
5,0166
20
3. Kadar sari larut dalam etanol =
100
0,269
x
x 100% = 26,88%
20
5,0027
%Rata − rata kadar sari larut dalam etanol =
28,56% + 27,91% + 26,88%
3
= 27,78%
4. Perhitunganpenetapankadarabu total
%Kadar abu total =
berat abu (g)
x 100%
berat sampel (g)
51
Universitas Sumatera Utara
NO
Berat Sampel
Berat abu (g)
1
2
3
2,0320
2,0260
2,0490
0,158
0,153
0,161
1. Kadar abu total =
0,158 (g)
x 100% = 7,78%
2,0320 (g)
2. Kadar abu total =
0,153 (g)
x 100% = 7,55%
2,026 (g)
3. Kadar abu total =
0,161 (g)
x 100% = 7,86%
2,0490 (g)
% Rata − rata kadar abu total =
7,78% + 7,55% + 7,86%
= 7,73%
3
5. Perhitunganpenetapankadarabu yang tidaklarutasam
%Kadar abu total =
berat abu (g)
x 100%
berat sampel (g)
52
Universitas Sumatera Utara
N0
1
2
3
Berat Sampel
2,0320
2,0260
2,0490
Berat abu (g)
0,019
0,017
0,24
1. Kadar abu yang tidak larut asam =
0,019 (g)
x 100% = 0,93%
2,0320 (g)
2. Kadar abu yang tidak larut asam =
0,017 (g)
x 100% = 0,84%
2,026 (g)
3. Kadar abuyang tidak larut asam =
0,024 (g)
x 100% = 1,17%
2,0490 (g)
% Rata − rata kadar abu total =
0,93% + 0,84% + 1,17%
= 0,98%
3
Lampiran 9.BaganPenelitian
Bagan skrining fitokimia dan karakterisasi serbuk simplisia
Daun Sembung Rambat
Dibersihkan dari pengotor
53
Universitas Sumatera Utara
Dicuci dengan air mengalir
Ditiriskan dan ditimbang
Dikeringkan
Simplisia
Diserbukkan
SerbukSimplisia
SkriningFitokimi
a
KarakterisasiSim
plisia
- Alkaloida
- Flavonoida
- Saponin
- Tanin
- Glikosida
- Steroida/Triterpenoida
PembuatanEkstrakn-heksana,
etilasetat dan etanol secara
maserasi
- PemeriksaanMikroskopik
- PemeriksaanMakroskopik
- Penetapan kadar air
- Penetapan kadar sari yang
larutdalametanol
- Penetapan kadar sari yang
larutdalam air
- Penetapan kadarabu total
- Penetapan kadarabu yang
tidaklarutdalamasam
Dipekatkan
dengan rotary
epavorator
Ekstrak kental
Uji aktivitas antibakteri ekstrak
n-heksan, etilasetat dan etanol
Lampiran 10.Baganpembuatanekstrakn-heksana, etilasetatdanetanol
350 g Serbuk simplisia
Daun Sembung Rambat
54
Universitas Sumatera Utara
Dimasukkan kedalam wadah kaca bermulut lebar
Ditambahkancairan penyari n-heksana
Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya
sambil sesekali diaduk
Disaring
Maserat
Ampas
Dipekatkan dengan
rotary
evaporatorpada
Diangin-anginkan dalam ruangan
Dikering bekukan
dengan freeze dryer
Dibiarkan selama 5 hari terlindung
dari cahaya sambil sesekali diaduk
Ditambahkan cairan penyari etilasetat
Disaring
Ekstrak kental
n-heksana
Maserat
Ampas
Dipekatkan dengan
rotary
evaporatorpadasuhu
Dikeringbekukan
dengan freeze dryer
Ekstrak kental
etilasetat
Ampas
Diangin-anginkan dalam ruangan
Ditambahkan cairan penyari etanol
55
Universitas Sumatera Utara
Dibiarkan selama 5 hari terlindung
dari cahaya sambil sesekali diaduk
Disaring
Ampas
Maserat
Dipekatkan dengan
rotary
evaporatorpada suhu
Dikeringbekukan
dengan freeze dryer
Ekstrak kental
etanol
Lampiran 11.Bagan uji aktivitas antibakteri dari larutan uji
Stok kultur
56
Universitas Sumatera Utara
Diambil 1 ose
Disuspensikan kedalam 10 ml media Nutrient Broth
Diukur kekeruhan pada panjang gelombang
580 nm sampai diperoleh tansmitan 25%
Inokulum bakteri
Dimasukkan 0,1ml inokulum kedalam cawan petri
Ditambahkan 20ml media media Nutrient
Agarkedalam cawan petri
Dihomogenkan dan dibiarkan memadat
Media padat
Diletakkan kertas cakram yang telah
direndam terlebih dahulu dalam larutan uji
dan blanko
Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 18-24 jam
Hasil inkubasi
Diukur diameter zona hambat disekitar
kertas cakram
Hasil
(Diameter zona hambat)
57
Universitas Sumatera Utara