Isolasi Dan Identifikasi Senyawa Steroid Triterpenoid Dari Sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
Lampiran 1. Hasil identifikasi sponge
49
Lampiran 2. Gambar sponge Suberites diversicolor Becking & Lim yang segar
50
Lampiran 3. Gambar simplisia dan serbuk sponge Suberites diversicolor Becking
& Lim
Simplisia sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
51
Lampiran 3 (Lanjutan)
Serbuk sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
52
Lampiran 4. Gambar miroskopik serbuk simplisia sponge Suberites diversicolor
Becking & Lim
Spikula
Keterangan gambar:
1. Spikula megasklera monoaxon tipe substylostyle
53
Lampiran 5. Bagan kerja penelitian
Sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
dipisahkan dari pengotor
dicuci dengan air kran mengalir
ditiriskan
ditimbang
Berat sponge Suberites diversicolor Becking & Lim = 2,2 kg
dipotong-potong
dikeringkan
dalam
lemari
pengering dengan suhu 40-50oC
selama 6 hari
ditimbang
Berat sponge Suberites diversicolor Becking & Lim = 400 g
dihaluskan dengan blender
Serbuk sponge
Karakterisasi
Isolatsimplisia
murni
serbuk
-Pemeriksaan makroskopik
dan mikroskopik
-Penetapan kadar air
-Penetapan kadar sari yang
larut dalam air
-Penetapan kadar sari yang
larut dalam etanol
-Penetapan kadar abu total
-Penetapan kadar abu yang
tidak larut dalam asam
Pemeriksaan
senyawa kimia
- Alkaloid
- Flavonoid
- Saponin
- Tanin
- Glikosida
- Steroid/
Triterpenoid
Pembuatan ekstrak
n-heksan
dianalisis
estrak secara
KLT
diKLT
preparatif
Isolat
di KLT satu
arah dan dua
arah
Isolat murni
diidentifikasi
secara
spektrofotometri
UV dan IR
Spektrum
54
Lampiran 6. Bagan pembuatan ekstrak n-heksan simplisia sponge Suberites
diversicolor Becking & Lim
Serbuk sponge
(280 g)
dimasukkan ke dalam sebuah bejana
ditambahkan sebanyak 75 bagian
n-heksan
ditutup
dibiarkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya sambil sering diaduk
diserkai dan diperas
Ampas
Maserat
dicuci
ampas
dengan
n-heksan dan disaring hingga
diperoleh 100 bagian
Maserat
dipindahkan ke dalam bejana tertutup
dibiarkan di tempat sejuk, terlindung dari cahaya
selama 2 hari
dienap tuangkan atau saring
Maserat
dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu
tidak lebih dari 40°C
Ekstrak kental
n-heksan
55
Lampiran 7. Bagan isolasi senyawa steroid/triterpenoid dari ekstrak n-heksan
sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
Ekstrak n-heksan
diKLT
preparatif
dengan fase diam silika
gel GF254, fase gerak nheksan-etilasetat (70:30)
disemprot
dengan
Lieberrmann-Burchard
diKLT, fase gerak:
n-heksan–etilasetat dengan
berbagai perbandingan, fase
diam
silika
gel
60
F254,
penampak
bercak
Liebermann-Burchard
s
Kromatogram
Bagian yang tidak disemprot
dikerok
dimasukkan ke dalam vial
direndam dengan metanol
selama 1 malam
disaring
Filtrat
diuapkan hingga kering
ditambahkan
sedikit
metanol dingin
dimasukkan ke dalam
lemari pendingin
Isolat
diuji kemurnian dengan
KLT satu arah dan dua
arah
Isolat murni
diidentifikasi
dengan
spektrofotometer UV dan IR
Spektrum
56
Lampiran 8. Kromatogram KLT ekstrak n-heksan sponge Suberites diversicolor
Becking & Lim
bp
bp
mu
bp
bp
mu
mu
bp
mu
hm
mu
mu
b
hm
mu
hm
mu
ht
mu
hm
mu
hm
hm
b
hm
tp
a
tp
b
tp
tp
c
d
tp
e
Keterangan: Fase gerak: n-heksan-etilasetat, a. (90:10); b. (80:20); c.(70:30); d;
(60:40); e. (50:50), fase diam: silika gel 60 F254, penampak bercak:
Liebermann-Burchard, tp = titik penotolan, hm = hijau muda, mu =
merah ungu, b = biru, ht = hijau tua, bp = batas pengembangan.
57
Lampiran 9. Kromatogram hasil KLT preparatif
bp
tp
Keterangan: Penampak bercak Liebermann-Burchard, fase diam: silika gel 60
GF254, fase gerak: n-heksan-etilasetat (70:30), tp = titik penotolan,
bp = batas pengembangan.
58
Lampiran 10. Kromatogram isolat hasil KLT preparatif
bp
tp
Keterangan: Penampak bercak Liebermann-Burchard, fase diam: silika gel 60
F254, fase gerak: n-heksan-etilasetat (70:30), tp = titik penotolan,
bp = batas pengembangan
59
Lampiran 11. Kromatogram hasil KLT dua arah dari isolat murni
A2
bp2
bp 1
A1
tp
Keterangan: A1= arah pengembangan pertama, A2 = arah pengembangan kedua,
penampak bercak Liebermann–Burchard, fase gerak I: n-heksan–
etilasetat (70:30), fase gerak II: toluen-etilasetat (80:20), fase diam
silika gel 60 F254, tp = titik pentotolan, bp1= arah pengembangan 1,
bp2= arah pengembangan 2.
60
Lampiran 12. Spektrum ultraviolet dari isolat murni sponge Suberites
diversicolor Becking & Lim
a 3.50
b
s
o
r 0.500/
div
b
a
n
s
i
0.00
200.0
50/div
Panjang gelombang (nm)
61
400.0
Lampiran 13. Spektrum IR isolat murni sponge Suberites diversicolor Becking
& Lim
%T
105
90
75
60
4000
3500
3000
2500
2000
1500
Bilangan gelombang (1/cm)
62
1000
500
Lampiran 14. Perhitungan Hasil Penetapan Kadar
a. Perhitungan hasil penetapan kadar air
Kadar air =
Volume air (ml )
Berat sampel (g)
x100%
1. Sampel 1
Berat sampel
= 5,004 g
Volume air
= 0,2 ml
Kadar air
=
0,2
5,004
x100%
= 3,99%
2. Sampel 2
Berat sampel
= 5,006 g
Volume air
= 0,1 ml
Kadar air
0,1
= 5,006 x100%
= 1,99 %
3. Sampel 3
Berat sampel
= 5,004 g
Volume air
= 0,1 ml
Kadar air
=
0,1
5,004
x100%
= 1,99% v�b
Kadar air rata – rata
=
3,99% + 1,99% + 1,99%
3
= 2,65% v�b
63
Lampiran 14.(Lanjutan)
b. Perhitungan hasil penetapan kadar sari yang larut dalam air
Kadar sari yang larut dalam air =
berat sari
berat simplisia
x
100
20
x100%
1. Kadar sari yang larut dalam air I
Berat cawan
= 47,8147 g
Berat cawan + berat sari
= 48,0404 g
Berat sampel
= 5,0030 g
Berat sari
= 0,2257 g
Kadar sari yang larut dalam air
=
0,2245
5,0030
x
100
20
x 100%
= 22,55%
2. Kadar sari yang larut dalam air II
Berat cawan
= 47,8150 g
Berat cawan + berat sari
= 48,0558 g
Berat sampel
= 5,0035 g
Berat sari
= 0,2408 g
Kadar sari yang larut dalam air
=
0,2408
5,0035
x
100
= 24,06%
3. Kadar sari larut dalam air III
Berat cawan
= 47,8154 g
Berat cawan + berat sari
= 48,0303 g
Berat sampel
= 5,0040 g
Berat sari
= 0,2149 g
64
20
x100%
Lampiran 14.(Lanjutan)
Kadar sari yang larut dalam air
=
0,2149
5,0040
x
100
20
x100%
= 21,47%
Kadar sari yang larut dalam air rata – rata
=
22,55% + 24,06% + 21,47%
3
= 22,69%
c. Perhitungan hasil penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
d.
e. sari yang larut dalam etanol = berat sari x 100 x 100%
Kadar
berat simplisia
20
1. Kadar sari yang larut dalam etanol I
Berat cawan
= 47,8138 g
Berat cawan + berat sari
= 47,9809 g
Berat sampel
= 5,0045 g
Berat sari
= 0,1671 g
Kadar sari yang larut dalam etanol
=
0,1671 100
x
x100%
5,0045 20
= 16,69%
2. Kadar sari yang larut dalam etanol II
Berat cawan
= 47,8103 g
Berat cawan + berat sari
= 47,9769 g
Berat sampel
= 5,0050 g
Berat sari
= 0,1625 g
Kadar sari yang larut dalam etanol
=
0,1625 100
x
x100%
5,0050 20
= 16,58%
3. Kadar sari yang larutdalam etanol III
Berat cawan
= 47,8105 g
Berat cawan + berat sari
= 47,9730 g
Berat sampel
= 5,0055 g
Berat sari
= 0,1625 g
65
Lampiran 14.(lanjutan)
Kadar sari yang larut dalam etanol
=
0,1625 100
x
x100%
5,0055 20
= 16,23%
16,69%+16,58%+16,23%
Kadar sari yang larut dalam etanol rata-rata =
3
=16,5%
d. Perhitungan hasil penetapan kadar abu total
Kadar abu total
=
berat abu
berat simplisia
x 100%
1. Sampel I
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,5107 g
Kadar abu total
=
0,5107
2,0020
x100%
= 25,50%
2. Sampel II
Berat simplisia
= 2,0022 g
Berat abu
= 0,526 g
Kadar abu total
=
0,526
2,0022
x100%
= 26,27%
3. Sampel III
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,5002 g
Kadar abu total
=
0,5002
2,0020
x100%
= 25,58%
66
Lampiran 14.(lanjutan)
Kadar abu total rata-rata
=
25,50% + 26,27% + 24,9%
3
= 25,58%
e. Perhitungan hasil penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
Kadar abu tidak larut dalam asam
=
berat abu
x100%
berat simplisia
1. Sampel I
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,0773 g
Kadar abu tidak larut asam =
0,0773
2,0020
x 100%
= 3,86%
2. Sampel II
Berat simplisia
= 2,0022 g
Berat abu
= 0,1087 g
Kadar abu tidak larut asam
= 2,0022 x 100%
0,1087
= 5,38%
3.Sampel III
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,0237 g
Kadar abu tidak larut asam
=
0,0237
2,0020
x100%
= 1,18%
Kadar abu tidak larut asam rata-rata =
3,86% + 5,38 % + 1,18%
3
= 3,47%
67
49
Lampiran 2. Gambar sponge Suberites diversicolor Becking & Lim yang segar
50
Lampiran 3. Gambar simplisia dan serbuk sponge Suberites diversicolor Becking
& Lim
Simplisia sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
51
Lampiran 3 (Lanjutan)
Serbuk sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
52
Lampiran 4. Gambar miroskopik serbuk simplisia sponge Suberites diversicolor
Becking & Lim
Spikula
Keterangan gambar:
1. Spikula megasklera monoaxon tipe substylostyle
53
Lampiran 5. Bagan kerja penelitian
Sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
dipisahkan dari pengotor
dicuci dengan air kran mengalir
ditiriskan
ditimbang
Berat sponge Suberites diversicolor Becking & Lim = 2,2 kg
dipotong-potong
dikeringkan
dalam
lemari
pengering dengan suhu 40-50oC
selama 6 hari
ditimbang
Berat sponge Suberites diversicolor Becking & Lim = 400 g
dihaluskan dengan blender
Serbuk sponge
Karakterisasi
Isolatsimplisia
murni
serbuk
-Pemeriksaan makroskopik
dan mikroskopik
-Penetapan kadar air
-Penetapan kadar sari yang
larut dalam air
-Penetapan kadar sari yang
larut dalam etanol
-Penetapan kadar abu total
-Penetapan kadar abu yang
tidak larut dalam asam
Pemeriksaan
senyawa kimia
- Alkaloid
- Flavonoid
- Saponin
- Tanin
- Glikosida
- Steroid/
Triterpenoid
Pembuatan ekstrak
n-heksan
dianalisis
estrak secara
KLT
diKLT
preparatif
Isolat
di KLT satu
arah dan dua
arah
Isolat murni
diidentifikasi
secara
spektrofotometri
UV dan IR
Spektrum
54
Lampiran 6. Bagan pembuatan ekstrak n-heksan simplisia sponge Suberites
diversicolor Becking & Lim
Serbuk sponge
(280 g)
dimasukkan ke dalam sebuah bejana
ditambahkan sebanyak 75 bagian
n-heksan
ditutup
dibiarkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya sambil sering diaduk
diserkai dan diperas
Ampas
Maserat
dicuci
ampas
dengan
n-heksan dan disaring hingga
diperoleh 100 bagian
Maserat
dipindahkan ke dalam bejana tertutup
dibiarkan di tempat sejuk, terlindung dari cahaya
selama 2 hari
dienap tuangkan atau saring
Maserat
dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu
tidak lebih dari 40°C
Ekstrak kental
n-heksan
55
Lampiran 7. Bagan isolasi senyawa steroid/triterpenoid dari ekstrak n-heksan
sponge Suberites diversicolor Becking & Lim
Ekstrak n-heksan
diKLT
preparatif
dengan fase diam silika
gel GF254, fase gerak nheksan-etilasetat (70:30)
disemprot
dengan
Lieberrmann-Burchard
diKLT, fase gerak:
n-heksan–etilasetat dengan
berbagai perbandingan, fase
diam
silika
gel
60
F254,
penampak
bercak
Liebermann-Burchard
s
Kromatogram
Bagian yang tidak disemprot
dikerok
dimasukkan ke dalam vial
direndam dengan metanol
selama 1 malam
disaring
Filtrat
diuapkan hingga kering
ditambahkan
sedikit
metanol dingin
dimasukkan ke dalam
lemari pendingin
Isolat
diuji kemurnian dengan
KLT satu arah dan dua
arah
Isolat murni
diidentifikasi
dengan
spektrofotometer UV dan IR
Spektrum
56
Lampiran 8. Kromatogram KLT ekstrak n-heksan sponge Suberites diversicolor
Becking & Lim
bp
bp
mu
bp
bp
mu
mu
bp
mu
hm
mu
mu
b
hm
mu
hm
mu
ht
mu
hm
mu
hm
hm
b
hm
tp
a
tp
b
tp
tp
c
d
tp
e
Keterangan: Fase gerak: n-heksan-etilasetat, a. (90:10); b. (80:20); c.(70:30); d;
(60:40); e. (50:50), fase diam: silika gel 60 F254, penampak bercak:
Liebermann-Burchard, tp = titik penotolan, hm = hijau muda, mu =
merah ungu, b = biru, ht = hijau tua, bp = batas pengembangan.
57
Lampiran 9. Kromatogram hasil KLT preparatif
bp
tp
Keterangan: Penampak bercak Liebermann-Burchard, fase diam: silika gel 60
GF254, fase gerak: n-heksan-etilasetat (70:30), tp = titik penotolan,
bp = batas pengembangan.
58
Lampiran 10. Kromatogram isolat hasil KLT preparatif
bp
tp
Keterangan: Penampak bercak Liebermann-Burchard, fase diam: silika gel 60
F254, fase gerak: n-heksan-etilasetat (70:30), tp = titik penotolan,
bp = batas pengembangan
59
Lampiran 11. Kromatogram hasil KLT dua arah dari isolat murni
A2
bp2
bp 1
A1
tp
Keterangan: A1= arah pengembangan pertama, A2 = arah pengembangan kedua,
penampak bercak Liebermann–Burchard, fase gerak I: n-heksan–
etilasetat (70:30), fase gerak II: toluen-etilasetat (80:20), fase diam
silika gel 60 F254, tp = titik pentotolan, bp1= arah pengembangan 1,
bp2= arah pengembangan 2.
60
Lampiran 12. Spektrum ultraviolet dari isolat murni sponge Suberites
diversicolor Becking & Lim
a 3.50
b
s
o
r 0.500/
div
b
a
n
s
i
0.00
200.0
50/div
Panjang gelombang (nm)
61
400.0
Lampiran 13. Spektrum IR isolat murni sponge Suberites diversicolor Becking
& Lim
%T
105
90
75
60
4000
3500
3000
2500
2000
1500
Bilangan gelombang (1/cm)
62
1000
500
Lampiran 14. Perhitungan Hasil Penetapan Kadar
a. Perhitungan hasil penetapan kadar air
Kadar air =
Volume air (ml )
Berat sampel (g)
x100%
1. Sampel 1
Berat sampel
= 5,004 g
Volume air
= 0,2 ml
Kadar air
=
0,2
5,004
x100%
= 3,99%
2. Sampel 2
Berat sampel
= 5,006 g
Volume air
= 0,1 ml
Kadar air
0,1
= 5,006 x100%
= 1,99 %
3. Sampel 3
Berat sampel
= 5,004 g
Volume air
= 0,1 ml
Kadar air
=
0,1
5,004
x100%
= 1,99% v�b
Kadar air rata – rata
=
3,99% + 1,99% + 1,99%
3
= 2,65% v�b
63
Lampiran 14.(Lanjutan)
b. Perhitungan hasil penetapan kadar sari yang larut dalam air
Kadar sari yang larut dalam air =
berat sari
berat simplisia
x
100
20
x100%
1. Kadar sari yang larut dalam air I
Berat cawan
= 47,8147 g
Berat cawan + berat sari
= 48,0404 g
Berat sampel
= 5,0030 g
Berat sari
= 0,2257 g
Kadar sari yang larut dalam air
=
0,2245
5,0030
x
100
20
x 100%
= 22,55%
2. Kadar sari yang larut dalam air II
Berat cawan
= 47,8150 g
Berat cawan + berat sari
= 48,0558 g
Berat sampel
= 5,0035 g
Berat sari
= 0,2408 g
Kadar sari yang larut dalam air
=
0,2408
5,0035
x
100
= 24,06%
3. Kadar sari larut dalam air III
Berat cawan
= 47,8154 g
Berat cawan + berat sari
= 48,0303 g
Berat sampel
= 5,0040 g
Berat sari
= 0,2149 g
64
20
x100%
Lampiran 14.(Lanjutan)
Kadar sari yang larut dalam air
=
0,2149
5,0040
x
100
20
x100%
= 21,47%
Kadar sari yang larut dalam air rata – rata
=
22,55% + 24,06% + 21,47%
3
= 22,69%
c. Perhitungan hasil penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
d.
e. sari yang larut dalam etanol = berat sari x 100 x 100%
Kadar
berat simplisia
20
1. Kadar sari yang larut dalam etanol I
Berat cawan
= 47,8138 g
Berat cawan + berat sari
= 47,9809 g
Berat sampel
= 5,0045 g
Berat sari
= 0,1671 g
Kadar sari yang larut dalam etanol
=
0,1671 100
x
x100%
5,0045 20
= 16,69%
2. Kadar sari yang larut dalam etanol II
Berat cawan
= 47,8103 g
Berat cawan + berat sari
= 47,9769 g
Berat sampel
= 5,0050 g
Berat sari
= 0,1625 g
Kadar sari yang larut dalam etanol
=
0,1625 100
x
x100%
5,0050 20
= 16,58%
3. Kadar sari yang larutdalam etanol III
Berat cawan
= 47,8105 g
Berat cawan + berat sari
= 47,9730 g
Berat sampel
= 5,0055 g
Berat sari
= 0,1625 g
65
Lampiran 14.(lanjutan)
Kadar sari yang larut dalam etanol
=
0,1625 100
x
x100%
5,0055 20
= 16,23%
16,69%+16,58%+16,23%
Kadar sari yang larut dalam etanol rata-rata =
3
=16,5%
d. Perhitungan hasil penetapan kadar abu total
Kadar abu total
=
berat abu
berat simplisia
x 100%
1. Sampel I
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,5107 g
Kadar abu total
=
0,5107
2,0020
x100%
= 25,50%
2. Sampel II
Berat simplisia
= 2,0022 g
Berat abu
= 0,526 g
Kadar abu total
=
0,526
2,0022
x100%
= 26,27%
3. Sampel III
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,5002 g
Kadar abu total
=
0,5002
2,0020
x100%
= 25,58%
66
Lampiran 14.(lanjutan)
Kadar abu total rata-rata
=
25,50% + 26,27% + 24,9%
3
= 25,58%
e. Perhitungan hasil penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
Kadar abu tidak larut dalam asam
=
berat abu
x100%
berat simplisia
1. Sampel I
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,0773 g
Kadar abu tidak larut asam =
0,0773
2,0020
x 100%
= 3,86%
2. Sampel II
Berat simplisia
= 2,0022 g
Berat abu
= 0,1087 g
Kadar abu tidak larut asam
= 2,0022 x 100%
0,1087
= 5,38%
3.Sampel III
Berat simplisia
= 2,0020 g
Berat abu
= 0,0237 g
Kadar abu tidak larut asam
=
0,0237
2,0020
x100%
= 1,18%
Kadar abu tidak larut asam rata-rata =
3,86% + 5,38 % + 1,18%
3
= 3,47%
67