Uji hepatoprotektif dekokta herba seledri terhadap aktivitas serum ALT pada tikus betina galur wistar terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

UJI HEPATOPROTEKTIF DEKOKTA HERBA SELEDRI TERHADAP
AKTIVITAS SERUM ALT PADA TIKUS BETINA GALUR WISTAR
TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi

Oleh:
Paulina Dewi Rosari
NIM : 158114100

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2019

i

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

iii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

HALAMAN PERSEMBAHAN

"Mintalah, maka akan diberikan kepadamu; carilah, maka kamu akan mendapat;
ketoklah, maka pintu akan dibukakan bagimu.”
(Matius 7:7)

"Aku tahu, bahwa Engkau sanggup melakukan segala sesuatu, dan tidak ada
rencana-Mu yang gagal.”

(Ayub 42:2)

"I never dreamed about success, I worked for it."
(Estee Lauder)

Karya ini kupersembahkan untuk
1. Tuhan Yesus dan Bunda Maria, sumber kekuatan dan harapanku.
2. Orangtuaku, Bapak Sutriyana dan Ibu Endang.
3. Saudaraku, Mas Resky dan keluarga kecilnya Mbak Regina dan Eizel.
4. Sahabat-sahabatku Alberta, Claresta, Retha, Inge, Krisna, Wisnu, dan
Aldo.
5. serta Almamaterku, Universitas Sanata Dharma.

iv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

v

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

vi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PRAKATA

Puji dan syukur penulis haturkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa, atas
limpahan

rahmat,

kasih,

dan

penyertaan-Nya,

menyelesaikan skripsi dengan judul “Uji

sehingga

penulis

dapat

Hepatoprotektif Dekokta Herba

Seledri Terhadap Aktivitas Serum ALT Pada Tikus Betina Galur Wistar
Terinduksi Karbon Tetraklorida” ini dengan lancar. Skripsi ini dibuat sebagai
salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) di Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Skripsi ini tidak akan terselesaikan dengan baik tanpa bimbingan,
dukungan dan bantuan dari banyak pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini
dengan hati yang tulus penulis ingin menyampaikan terimakasih kepada:
1.

Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma (USD).

2.

Ibu Dr. Christine Patramurti, Apt. selaku Ketua Program Studi Fakultas
Farmasi USD.

3.

Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP.Ph.D., selaku dosen pembimbing, atas
perhatian, dukungan, bimbingan dan ilmu yang sangat berharga, serta
atas waktu yang telah diluangkan untuk mendampingi penulis selama
proses penelitian hingga penyusunan skripsi.

4.

Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku dosen penguji, atas kritik
dan saran serta arahan yang membangun, yang mendukung kelancaran
penelitian ini.

5.

Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku dosen penguji, atas kritik
dan saran serta arahan yang membangun, yang mendukung kelancaran
penelitian ini.

6.

Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc., selaku Kepala Laboratorium
Fakultas Farmasi USD, yang telah memberikan izin penggunaan dan
fasilitas laboratorium.

vii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

7.

Bapak Christianus Heru Setiawan, M.Sc.,

Apt. selaku Dosen

Pembimbing Akademik, atas bimbingan dan dukungan kepada penulis
selama masa studi.
8.

Bapak Heru Purwanto, Bapak Kayatno, Bapak Suparjiman, Bapak
Yohanes Wagiran, Bapak Markus Suparlan, Bapak Bima Windura, dan
Bapak Musrifin selaku laboran di laboratorium Fakultas Farmasi USD,
serta Bapak Lilik selaku laboran di Patologi Fakultas Kedokteran Hewan
UGM atas bantuannya selama proses penelitian berlangsung.

9.

Lembaga-lembaga UGM yaitu LPPT unit I dan IV, Biologi Farmasi,
Komisi Etik Fakultas Kedokteran, dan CEBU (Pusat Epidemiologi dan
Biostatistik Unit), yang telah membantu dalam hal penyediaan hewan uji,
pemeriksaan sampel darah, dan penerbitan dokumen-dokumen.

10.

Keluargaku, Papa, Mama, Mas Resky, Mbak Regina dan Eizel yang

selalu memberikan dukungan dan doa, sehingga aku selalu semangat
dalam menyelesaikan skripsi ini.

11.

Sahabatku, Indri, Erin, Aldha, Ratih, dan Rossi. Sahabat-sahabat di
bangku kuliah, Alberta, Claresta, Retha, Inge, Krisna, Wisnu, dan Aldo.
Teman KKN Hana, Mak Cik, Elva, Emma, Yansen, dan Adi, atas
semangat, hiburan, dukungan, kenangan dan pengalaman yang berharga.

12.

Teman FSM C 2015 atas semua kenangan dan dinamika selama ini.

13.

Kakak-kakak tingkatku, kak Monica, kak Noni, dan kak Eustachia yang
dengan sabar mengajariku dan menanggapi pertanyaan-pertanyaanku.

14.

Semua pihak yang terlibat dan membantu penulis baik secara langsung
maupun tidak langsung.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini memiliki banyak kelemahan dan

kekurangan. Oleh karena itu, dengan segenap hati penulis memohon maaf atas
segala kesalahan serta terbuka oleh adanya kritik dan saran yang membangun.
Akhir kata, semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat khususnya di bidang
Farmasi, serta bagi semua pihak.
Yogyakarta, 8 Januari 2019
Penulis

viii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................................i
LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................. iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .............................................................................iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................................. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ...............................................................vi
PRAKATA ............................................................................................................ vii
DAFTAR ISI ...........................................................................................................ix
DAFTAR TABEL ...................................................................................................xi
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiii
ABSTRAK ............................................................................................................xiv
ABSTRACT ............................................................................................................. xv
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
METODE PENELITIAN......................................................................................... 2
Bahan .............................................................................................................. 3
Alat ................................................................................................................. 3
Tahap Penelitian ............................................................................................. 3
Pengumpulan Tanaman ......................................................................... 3
Determinasi Tanaman ........................................................................... 4
Pembuatan Simplisia Herba Seledri ...................................................... 4

Pengayakan Serbuk Simplisia Herba Seledri ........................................ 4
Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Herba Seledri .......................... 4
Pembuatan Dekokta Herba Seledri (DHS) ............................................ 5
Uji KLT Sampel DHS ........................................................................... 5
Pemeliharaan Hewan Uji....................................................................... 6
Uji Pendahuluan .................................................................................... 6
Penetapan Dosis DHS ............................................................... 7

ix

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Pengelompokkan dan Perlakuan Hewan Uji ............................. 7
Pengukuran Aktivitas Serum ALT ........................................................ 7
Pengumpulan dan Analisis Data secara Statistik .................................. 8
Perhitungan Persen Hepatoprotektif ..................................................... 8
HASIL DAN PEMBAHASAN................................................................................ 8
Pengumpulan Tanaman .................................................................................. 8
Determinasi Tanaman ..................................................................................... 9
Penetapan Kadar Air ....................................................................................... 9
Hasil Uji KLT Sampel DHS ........................................................................... 9
Hasil Uji Pendahuluan ................................................................................... 11

Hasil Uji Pengaruh Pemberian DHS ............................................................ 14
Kontrol Negatif ................................................................................... 16
Kontrol Hepatotoksik .......................................................................... 17
Kontrol DHS ....................................................................................... 17
Kelompok Perlakuan Jangka Panjang DHS ........................................ 18
KESIMPULAN ...................................................................................................... 20
SARAN .................................................................................................................. 21
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 21
LAMPIRAN ........................................................................................................... 24
BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................... 47

x

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR TABEL

Tabel I.

Harga Rf Bercak Hasil Elusi pada UV 365 nm .............................. 11

Tabel II.

Purata

Aktivitas

Serum

ALT

Setelah

Pemejanan

Karbon

Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48 .......................................... 12
Tabel III.

Hasil Uji T Berpasangan Terhadap Aktivitas Serum ALT Setelah
Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48 ........... 12

Tabel IV.

Purata Aktivitas Serum ALT pada Kelompok Kontrol dan
Kelompok Perlakuan Dosis DHS ................................................... 15

Tabel V.

Persen Hepatoprotektif Kelompok Perlakuan DHS Dosis 0,5; 1;
dan 2 g/kgBB .................................................................................. 15

Tabel VI.

Hasil Uji Post Hoc Tukey pada Kelompok Kontrol dan Kelompok
Perlakuan DHS. .............................................................................. 16

xi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Hasil Elusi Sampel DHS pada UV 365 nm .................................... 11

Gambar 2.

Histogram Purata Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon
Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48 .......................................... 13

Gambar 3.

Histogram Purata Aktivitas Serum ALT pada Kelompok Kontrol
dan Kelompok Perlakuan Dosis DHS ............................................ 15

Gambar 4.

Herba Seledri .................................................................................. 29

Gambar 5.

Simplisia Herba Seledri .................................................................. 29

Gambar 6.

Serbuk Simplisia Herba Seledri ..................................................... 29

Gambar 7.

Pembuatan DHS ............................................................................. 31

Gambar 8.

DHS ................................................................................................ 31

Gambar 9.

Hasil Elusi Sampel DHS pada UV 365 nm .................................... 32

Gambar 10.

Hasil Elusi dan Pengukuran Rf Sampel DHS pada Cahaya Ruang
(tanpa UV) ...................................................................................... 32

Gambar 11.

Pemeliharaan Hewan Uji ................................................................ 33

Gambar 12.

Pemberian DHS secara Peroral ...................................................... 33

Gambar 13.

Pemejanan Karbon Tetraklorida secara Intraperitoneal ................. 34

Gambar 14.

Pengambilan Darah melalui Vena orbitalis Mata Tikus ................ 34

xii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Ethical Clearance dari Komisi Etik Fakultas Kedokteran
UGM ............................................................................................. 25
Lampiran 2.

Surat Keterangan Pengambilan Herba Seledri dari CV. Merapi
Farma Herbal .................................................................................. 26

Lampiran 3.

Surat Determinasi Herba Seledrii dari Departemen Biologi Farmasi
Fakultas Farmasi UGM .................................................................. 27

Lampiran 4. Surat Keterangan Analisa Data di CE&BU Fakultas Kedokteran
UGM ............................................................................................... 28
Lampiran 5.

Herba Seledri dan Simplisia Herba Seledri .................................... 29

Lampiran 6.

Penetapan kadar air serbuk Simplisia Herba Seledri menggunakan
Moisture balance ............................................................................ 30

Lampiran 7.

Pembuatan DHS ............................................................................. 31

Lampiran 8.

Uji KLT Sampel DHS .................................................................... 32

Lampiran 9.

Prosedur Penelitian terhadap Hewan Uji........................................ 33

Lampiran 10. Hasil

Analisis

Statistik

Aktivitas

Serum

ALT

pada

Uji

Pendahuluan ................................................................................... 35
Lampiran 11. Hasil Analisis Statistik Aktivitas Serum ALT pada Kelompok
Kontrol dan Perlakuan DHS ........................................................... 37
Lampiran 12. Hasil Uji T Berpasangan terhadap Aktivitas Serum ALT Setelah
Pemejanan Karbon Tetraklorida pada jam ke 0, 24 dan 48............ 42
Lampiran 13. Hasil Uji Post Hoc Tukey pada Kelompok Kontrol dan Kelompok
Perlakuan DHS ............................................................................... 43
Lampiran 14. Perhitungan Penetapan Peringkat Dosis DHS ................................ 44
Lampiran 15. Perhitungan Persen Efek Hepatoprotektif ...................................... 45
Lampiran 16. Perhitungan Konversi Dosis DHS untuk Manusia ......................... 46

xiii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ABSTRAK
Tanaman seledri diketahui mengandung senyawa apiin yang merupakan
flavonoid. Senyawa flavonoid termasuk ke dalam senyawa antioksidan yang dapat
menangkal radikal bebas penyebab kerusakan hati. Tujuan penelitian ini adalah
untuk membuktikan efek hepatoprotektif Dekokta Herba Seledri (DHS) dengan
pemberian ekstrak secara jangka panjang yaitu 6 hari pada tikus betina galur
Wistar terinduksi CCl4. Jenis penelitian ini merupakan penelitian eksperimental
murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Hewan uji yang digunakan
yaitu 30 tikus dibagi ke dalam 6 kelompok secara acak (n=5). Kelompok I
(Kontrol Hepatotoksik), diberikan CCl4 dosis 2 ml/kgBB i.p. Kelompok II
(Kontrol negatif) diberikan olive oil 2 ml/kgBB secara i.p. Kelompok III (Kontrol
DHS), diberikan DHS dosis tertinggi yaitu 2 g/kgBB p.o. selama enam hari
berturut-turut dan kelompok IV, V dan VI (kelompok perlakuan) diberikan DHS
masing-masing dengan dosis 0,5;1; dan 2 g/kgBB selama enam hari berturut-turut
dan pada hari ke tujuh dipejankan CCl4 2 ml/kgBB secara i.p. Kelompok I dan II
dilakukan pencuplikan darah pada hari kedua; kelompok III pada hari ketujuh;
kelompok IV, V dan VI pada hari ke delapan atau pada jam ke-24 setelah
pemejanan CCl4. Kemudian dilakukan pula uji KLT untuk melihat apakah apiin
dapat tersari pada dekokta.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa Dekokta Herba Seledri (DHS) dosis
0,5; 1 dan 2 g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif dengan menurunkan aktivitas
serum ALT pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Dosis efektif DHS sebagai
hepatoprotektor adalah 1 g/kgBB.
Kata Kunci : Jangka panjang, seledri, dekokta, CCl4, ALT, KLT seledri.

xiv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ABSTRACT
Celery plants are known that contain apiin compounds which are
flavonoids. Flavonoid are included as antioxidant compounds that can
scavenging free radicals that cause liver damage. The purpose of this study was
to prove the hepatoprotective effect of Celery Herb Decoction (DHS) by
administering a long-term extracts for 6 days to female Wistar rats induced by
CCl4. This type of research was purely experimental study with randomized
complete direct sampling design. The research use 30 rats that divided randomly
into 6 groups (n = 5). Group I (Hepatotoxic Control), was given CCl4 dose of 2
ml/kgBW i.p. Group II (negative control) was given 2 ml/kgBW olive oil i.p.Group
III (DHS Control), was given the highest dose of DHS that is 2 g/kgBW p.o. for six
days. and groups IV, V and VI (treatment group) were given DHS each with a
dose 0.5; 1; and 2 g/kgBW for six days and on the seventh day was given CCl4 2.0
ml/ kgBW i.p. Blood sample from group I and II were obtained on the second day;
group III on the seventh day; groups IV, V and VI on the eighth day or at 24 hours
after CCl4 treatment. TLC test was also carried out to see that apiin can be
detected on the decoction or not.
The results showed that Celery Herb Decoction (DHS) dose 0.5; 1 and 2 g
/kgBB have a hepatoprotective effect by reducing activity of serum ALT in carbon
tetrachloride-induced rats. The effective dose of DHS as a hepatoprotector is 1 g /
kgBB.
Keywords : Long term period, celery, decoction, CCl4, ALT, TLC of celery.

xv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PENDAHULUAN
Hati merupakan organ atau kelenjar terbesar pada tubuh (Wibowo dan
Paryana, 2009). Hati memiliki fungsi sebagai agen pemetabolisme dan
detoksifikasi xenobiotic dalam tubuh kita. Oleh karena fungsinya tersebut, organ
hati memiliki potensi besar mengalami kerusakan (Hodgson, 2010).
Radikal bebas adalah molekul yang kehilangan elektron, dan selalu
berusaha mengambil elektron dari molekul atau sel lain (Ramadan, 2015). Bila
radikal bebas jumlahnya berlebihan di dalam tubuh, maka akan menciptakan
ketidakseimbangan antara molekul radikal bebas dan antioksidan endogen.
Akibatnya tubuh tidak dapat menetralisirnya dan terbentuklah stres oksidatif yang
dapat merusak struktur sel, jaringan dan organ (Musarofah, 2015).
Penyakit hati masih menjadi masalah di negara-negara maju maupun
berkembang seperti Indonesia. Gangguan kesehatan yang kini menjadi perhatian
adalah perlemakan hati non alkoholik atau Non Alcoholic Fatty Liver Disease
(NAFLD). Dilaporkan prevalensi NAFLD di ASIA mencapai 15% sampai 45%.
(Farrel et al., 2013) dan ditemukan pada seperempat dari total populasi Asia (Fan
et al., 2017). Penelitian mengenai epidemiologi penyakit NAFLD di kawasan
Asia menunjukkan bahwa angka prevalensi NAFLD di Indonesia mencapai 30%,
lebih tinggi bila dibandingkan dengan Korea Selatan (18%) dan Malaysia (17%)
(Moghaddasifar et al., 2016).
Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang banyak digunakan sebagai
model toksisitas kimia yang diinduksi oleh radikal bebas (Olson, 2018). Di dalam
tubuh, Karbon tetraklorida akan diubah menjadi radikal triklorometil (CCl3•), dan
radikal triklorometil peroksi (CCl3O2•) oleh enzim CYP (Cytocrome P450).
Senyawa radikal ini dapat menginduksi terjadinya perokidasi lipid dan kerusakan
sel sentrilobular hati (Hodgson, 2010).
Enzim yang dihasilkan oleh hati umumnya digunakan sebagai penanda
atau alat diagnosis terhadap adanya kerusakan dalam sel hati. Adanya akumulasi
lemak atau cedera pada hati biasanya dapat menyebabkan perubahan biokimia
darah diantaranya peningkatan kadar Alanine Aminotransferase ALT (Hodgson,
2010).

1

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Kandungan flavonoid yang terdapat pada seledri, merupakan antioksidan
yang berpotensi sebagai agen hepatoprotektor. Hal tersebut dibuktikan dari
penelitian yang dilakukan oleh Abdou et al. (2012) dimana pemberian seledri
mampu memberikan efek kuratif pada organ hati yang terinduksi hepatotoksin
CCl4 secara oral, yang ditunjukkan dengan peningkatan kadar soluble protein,
DNA, dan RNA sebanyak kurang lebih 2 kali lipat dibandingkan dengan
kelompok CCl4 setelah pemberian CCl4 + ekstrak etanol seledri maupun CCl4 +
tanaman seledri yang dikonsumsi secara langsung. Menurut Abdou et al. (2012)
hal ini dikaitkan dengan kemungkinan aktivitas seledri untuk merangsang
biosintesis antioksidan enzim.
Dekokta dipilih sebagai metode ekstraksi karena dalam pengolahan obat
herbal, masyarakat umumnya menggunakan teknik perasan, seduhan maupun
perebusan (Haryono, 2009). Selain itu metode ini dipilih karena senyawa
flavonoid sendiri merupakan senyawa yang mudah larut dalam air. Sifat kelarutan
ini dipengaruhi oleh gugusan OH pada strukturnya yang menyebabkan flavonoid
memiliki sifat polar dan dapat larut dalam pelarut polar (Nollet et al., 2018).
Selain itu, berdasarkan penelitian Prichatin dan Widiyastuti (2010) didapatkan
bahwa metode infusa berhasil menyari flavonoid total yang diukur dengan
spektrofotometri UV-Vis. Hasil dari penelitian tersebut

menunjukkan bahwa

kadar flavonoid total infusa seledri pada organ daun yaitu sebesar 0,51% ± 0,063,
pada organ batang yaitu sebesar 0,07 ± 0,015 dan pada organ bunga yaitu sebesar
0,14 ± 0,037. Penelitian ini menggunakan sediaan dekokta, dimana hal tersebut
dimaksudkan untuk memperlama kontak antara serbuk simplisia dengan pelarut
sehingga diharapkan senyawa flavonoid yang tersari lebih banyak dibandingkan
dengan sediaan infusa.
Berdasarkan uraian di atas, penelitian ini perlu dilakukan untuk
mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang DHS yaitu selama 6 hari
terhadap aktivitas ALT pada tikus betina galur Wistar terinduksi CCl4.
METODE PENELITIAN
Penelitian yang dilakukan adalah penelitian eksperimental murni dengan
rancangan acak lengkap pola searah. Pemberian tiga peringkat dosis DHS yaitu
2

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(0,5 ; 1 ; dan 2 g/kgBB) dilakukan secara jangka panjang yaitu selama 6 hari
berturut-turut untuk dilihat pengaruhnya terhadap aktifitas serum ALT pada tikus
betina terinduksi karbon tetraklorida.
Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah herba seledri (Apium
graveolens L., dengan hewan uji yaitu tikus putih (Rattus novergicus) betina galur
Wistar berumur 2-3 bulan dan bobot 150-250 gram, yang diperoleh dari
Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Unit Pengembangan Hewan
Percobaan (LPPT UGM Unit 4). Bahan untuk uji KLT yaitu sitroborat, Toluene
(Merck), 1-butanol (Merck), asam asetat (Merck), akuades, selulosa, serta bahan
yang digunakan untuk uji hepatoprotektif yaitu karbon tetraklorida (Merck), olive
oil (Bertolli), akuades, reagen ALT (Dyasis®) yang terdiri dari reagen 1 (Tris pH
7,5 ; L-alanine ; Lactat dehydrogenase (LDH)) reagen 2 (2-Oxoglutarate ;
NADH).
Alat
Alat yang digunakan dalam preparasi DHS diantaranya yaitu timbangan
analitik (Mettler Toledo), pisau, oven, mesin penyerbuk, ayakan nomor mesh 50,
panci enamel, penangas air, termometer, corong, gelas ukur, gelas beaker, labu
erlenmeyer, labu takar, batang pengaduk, pipet

tetes, penangas, Moisture

Balance (Mettler Toledo), kain flannel, kertas saring, stopwatch, sendok.
Alat yang digunakan untuk uji KLT diantaranya yaitu chamber, oven,
lampu UV 365 nm, kertas saring, pipet volume, penjepit, timbangan analitik
(Mettler Toledo), gelas beaker, gelas ukur, labu takar, corong pisah, pipet tetes,
batang pengaduk.
Alat yang digunakan untuk uji hepatoprotektif diantaranya yaitu
timbangan analitik (Mettler Toledo), gelas beaker, gelas ukur, pipet volume 10 ml
dan 5 ml, pipet tetes, spuit injeksi oral, spuit injeksi intraperitoneal, syringe 1 dan
5 cc (Terumo), pipa kapiler hematokrit (Brand), tabung eppendorf.
TAHAPAN PENELITIAN
Pengumpulan Tanaman
3

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Pada penelitian ini, tanaman yang digunakan untuk pengujian efek
hepatoprotektif adalah herba seledri. Herba seledri dikumpulkan dari perkebunan
di Magelang Jawa Tengah dan diperoleh melalui CV. Merapi Farma Herbal
Kaliurang, Yogyakarta.
Determinasi Tanaman
Herba seledri yang sudah dikumpulkan kemudian dilakukan determinasi
oleh determinator di Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas
Gadjah Mada Yogyakarta.
Pembuatan Simplisia Herba Seledri
Pertama, dilakukan penimbangan herba seledri kemudian dilakukan
sortasi basah pada tanaman herba seledri dengan cara menghilangkan pengotor
dan bagian lain yang tidak diinginkan, seperti menghilangkan daun yang busuk,
kuning atau kering. Selanjutnya dilakukan perajangan dan pemisahan bagian
daun, batang dan akar untuk mempermudah pengeringan. Setelah itu dilakukan
pencucian sesingkat mungkin dengan menggunakan air bersih yang mengalir,
untuk menghilangkan pengotor yang ada. Setelah dicuci, daun seledri ditiriskan
dalam wadah yang berlubang. Setelah itu dilakukan penimbangan. Selanjutnya
dilakukan pengeringan herba seledri dengan menggunakan oven pada suhu 400C
selama 14 x24 jam. Kemudian dilakukan sortasi kering dengan cara memisahkan
benda-benda asing (bagian tanaman atau pengotor yang tidak diinginkan). Setelah
itu dilakukan penyerbukan dengan menggunakan blender.
Pengayakan Serbuk Simplisia Herba Seledri
Dilakukan pengayakan dengan ayakan nomor mesh 50, mengacu pada
penelitian Majidah et al. (2014).
Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Herba Seledri
Tujuan dari penetapan kadar air adalah untuk memenuhi persyaratan
serbuk simplisia yang baik, dimana kadar air yang baik menurut Depkes RI
(2008) adalah

tidak lebih dari 10%. Dengan kadar air kurang dari 10%

diharapkan dapat mencegah kontaminasi mikroba sehingga kualitas serbuk

4

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

simplisia dapat terjaga. Penetapan kadar air dilakukan dengan menggunakan alat
moisture balance, dengan suhu pengeringan yang digunakan yaitu 1200C. Cara
mengukur kadar air dengan moisture balance adalah dengan meletakkan sejumlah
5 gram sampel pada pan, kemudian tutup moisture balance dan tunggu hingga
alat berbunyi yang menandakan bahwa proses pengukuran kadar air telah selesai.
Selanjutnya dilakukan pencatatan kadar air yang terukur pada alat dan replikasi
sebanyak tiga kali.
Pembuatan Dekokta Herba Seledri (DHS)
DHS dibuat dengan cara menimbang sebanyak 10 gram serbuk kering
herba seledri dan dimasukkan ke dalam panci enamel kemudian dibasahi dengan
pelarut akuades sebanyak dua kali bobot serbuk yang digunakan yaitu 20 mL.
Serbuk yang sudah dibasahi dengan 20 mL akuades di dalam panci enamel
kemudian ditambahkan akuades sebanyak 100 mL. Setelah itu dipanaskan selama
30 menit terhitung pada saat suhu mencapai 900C. Setelah 30 menit, campuran
diambil dan diperas menggunakan kain flannel, untuk mendapatkan hasil perasan
100 mL dapat ditambahkan akuades panas melalui ampas hingga diperoleh
volume DHS yang dikehendaki yaitu 100 mL (BPOM RI, 2012).
Uji KLT Sampel DHS
Prosedur ini mengacu pada Depkes RI (2010). Pertama-tama
dicampurkan fase gerak yang digunakan yaitu Toluene : 1-butanol : asam asetat :
akuades (2:2:1:5 v/v) dibuat dalam 100 mL sehingga didapatkan volume Toluene
: 1-butanol : asam asetat : akuades (20 mL:20 mL:10 mL:50mL) di dalam labu
ukur kemudian dituangkan ke corong pisah. Setelah itu, campuran didiamkan
selama semalam, kemudian diambil lapisan atasnya. Setelah itu masukkan lapisan
atas fase gerak tadi ke dalam chamber. Setelah itu masukkan kertas saring hingga
menyelimuti seluruh dinding chamber, kemudian tutup chamber. Tunggu hingga
kertas saring terbasahi secara menyeluruh yang menandakan bahwa chamber
sudah dalam kondisi jenuh. Sambil menunggu chamber jenuh, dilakukan aktivasi
plat KLT untuk mengurangi kadar air yang terdapat pada plat yaitu dengan
memanaskan plat pada suhu 1000C sekitar 30 menit (Rubiyanto, 2017). Setelah 30

5

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

menit plat diangin-anginkan selama kurang lebih 2 menit, selanjutnya dilakukan
penotolan larutan dekokta secara langsung ke plat KLT yang sudah dibuat,
kemudian plat dimasukkan dalam chamber yang sudah jenuh, ditunggu hingga
elusi selesai. Setelah itu plat dikeluarkan dari chamber dan diangin-anginkan
hingga agak mengering, kemudian dilakukan penyemprotan dengan pereaksi
sitroborat dan dilakukan pengeringan dengan menggunakan oven pada suhu 1000
C selama 5-10 menit. Dilihat bercak yang terbentuk di bawah sinar UV 365 nm,
kemudian dilakukan penghitungan Rf dengan pembanding Rf teoritis standar
apiin yaitu 0,30 (Depkes RI, 2010).
Pemeliharaan Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini yaitu tikus putih (Rattus
norvegicus) betina galur Wistar usia 2-3 bulan dan bobot 150-250 gram. Tikus
diperoleh

dari

Laboratorium

Penelitian

dan

Pengujian

Terpadu

Unit

Pengembangan Hewan Percobaan (LPPT UGM Unit 4). Dipilih sejumlah 30 ekor
tikus dengan kriteria sebagai berikut yaitu, bergerak aktif, tidak terlihat sakit dan
tidak cacat secara fisik. Sejumlah 30 ekor tikus tersebut kemudian diaklimatisasi
di Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma, selama kurang lebih satu minggu. Aklimatisasi ini bertujuan agar
tikus uji yang digunakan pada penelitian dapat menyesuaikan diri dengan
lingkungan barunya. Ruangan dikondisikan dengan suhu 22±30C dengan siklus
penerangan 12 jam terang 12 jam gelap, serta selalu dijaga kebersihannya. Hewan
uji ditempatkan di dalam kandang plastik berukuran kurang lebih 30 x 20 x 10
cm, dengan alas berupa sekam dan penutup berupa kawat strimin. Dalam satu
kandang berisi 2-3 ekor tikus. Tikus diberi pakan pelet dan air minum secara ad
libitum. Prosedur pengujian pada hewan uji telah mendapatkan persetujuan dari
Komisi Etik Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada dengan nomor
kelaikan etik KE/FK/1295/EC/2018. Surat tersebut dapat dlihat pada Lampiran 1.
Uji Pendahuluan
Dosis hepatotoksik pada penelitian ini mengacu pada penelitian yang
dilakukan oleh Janakat and Al-Merie (2002), yaitu 2 ml/kgBB dalam olive oil

6

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(1:1) secara i.p sehingga didapatkan konsentasi larutan 50 %. Waktu pencuplikan
darah dilakukan melalui orientasi dengan 5 ekor tikus dan 3 selang waktu
pencuplikan yaitu jam ke-0, 24, dan 48 setelah pemejanan karbon tetraklorida.
Darah tikus diambil melalui pembuluh sinus orbitalis mata. Waktu dimana ALT
menunjukkan aktivitas tertinggi, ditetapkan sebagai waktu pencuplikan darah
tikus.
-

Penetapan dosis DHS
Tiga peringkat dosis didapatkan berdasarkan volume maksimal

pemberian yang dapat diberikan pada lambung tikus sehingga didapatkan dosis
maksimal yaitu 2 g/kgBB. Dua peringkat dosis lainnya diperoleh dengan
menurunkan dua kali dari dosis awal, sehingga didapatkan dosis 0,5; 1 dan 2
g/kgBB. Perhitungan penetapan dosis DHS dapat dilihat pada Lampiran 14.
-

Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji
Sejumlah 30 ekor tikus dibagi secara acak ke dalam 6 kelompok

perlakuan. Masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus. Kelompok I
(Kontrol hepatotoksik), diberikan CCl4 dosis 2 ml/kgBB secara i.p. Kelompok II
(Kontrol negatif), diberikan pelarut CCl4 yaitu olive oil 2ml/kgBB sebanyak 1 kali
secara i.p. Kelompok III (Kontrol DHS), diberikan DHS dosis tertinggi yaitu 2
g/kgBB secara p.o. selama 6 hari berturut-turut. Kelompok IV, V dan VI
(Kelompok perlakuan) diberikan DHS masing-masing dengan dosis 0,5;1; dan 2
g/kgBB diberikan secara p.o. selama 6 hari berturut-turut kemudian pada hari
ketujuh dipejankan CCl4 dosis 2 ml/kgBB secara i.p. Darah diambil dari sinus
orbitalis mata tikus. Kelompok I dan II dilakukan pencuplikan darah pada hari
kedua; kelompok III pada hari ketujuh; kelompok IV, V dan VI pada hari ke
delapan atau pada jam ke-24 setelah pemejanan karbon tetraklorida
Pengukuran Aktivitas Serum ALT
Pengukuran aktivitas serum ALT dilakukan di Laboratorium Penelitian
dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada. Pengukuran dilakukan dengan
metode fotometrik enzimatik menggunakan alat Spectrophotometer Microlab-300.
Serum yang didapat dari hasil sentrifugasi darah selama 2 menit dengan putaran

7

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

12.000 rpm akan diambil sebanyak 100 μl, kemudian ditambahkan dengan reagen
mix sebanyak 1000 μl (campuran reagen 1 dan reagen 2 dengan perbandingan 4 :
1, sehingga didapatkan reagen 1 sebanyak 800 μL dan reagen 2 sebanyak 200 μL)
kemudian dicampur hingga homogen dan didiamkan selama 1 menit, setelah itu
dilakukan pengukuran absorbansi la rutan pada panjang gelombang 340 nm.
Pengumpulan dan Analisis Data secara Statistik
Data yang dikumpulkan dalam penelitian ini adalah kadar ALT tikus
betina galur Wistar. Data kemudian dianalisis oleh Pusat Kajian CE&BU
Yogyakarta, dengan menggunakan IBM SPSS Statistics 22 Lisensi UGM. Untuk
data pendahuluan dilakukan analisisis statistic berupa Uji T Berpasangan karena
sampel uji berasal dari subjek yang sama yang dilakukan beberapa kali pengujian
kadar ALT yaitu pada jam ke-0, 24 dan 48. Untuk data kontrol dan perlakuan
DHS, data dianalisis menggunakan Shapiro-Wilk untuk mengetahui normalitas
pada masing-masing kelompok. Jika nilai (p>0,05) maka sebaran data dikatakan
normal. Apabila data terdistribusi normal dan variasinya sama, dilanjutkan dengan
analisis ANOVA satu arah dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui
perbedaan dari masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan uji Scheffe untuk
melihat perbedaan masing-masing kelompok apakah bermakna (p0,05). Bila sebaran tidak normal, dilakukan uji Kruskal-Wallis
dengan Post Hoc Mann-Whitney untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan
antar kelompok.
-

Perhitungan persen hepatoprotektif diperoleh berdasarkan rumus:
} x 100%

{1-

HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengumpulan Tanaman
Pada penelitian ini, tanaman yang digunakan untuk pengujian efek
hepatoprotektif adalah herba seledri. Herba seledri diperoleh melalui CV. Merapi
Farma Herbal Kaliurang, Yogyakarta, dengan kriteria diantaranya berwarna hijau
segar, tidak berlubang, tidak busuk, dan berusia sekitar 3-4 bulan.

8

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman dilakukan di Fakultas Biologi Universitas Gadjah
Mada Yogyakarta. Determinasi bertujuan untuk memastikan kebenaran identitas
tanaman yang digunakan pada penelitian. Hasil determinasi menunjukkan bahwa
tanaman yang digunakan dalam penelitian ini benar merupakan herba seledri yang
termasuk ke dalam suku Apiaceae dengan nama ilmiah Apium graveolens L. Surat
hasil determinasi herba seledri dapat dilihat pada Lampiran 2.
Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan dengan menggunakan alat moisture
balance. Alat ini bekerja dengan prinsip gravimetri yaitu dengan menghitung
selisih antara bobot serbuk sesudah tahap akhir pengeringan pada Moisture
balance dengan yang belum dikeringkan. Tahap akhir pengeringan adalah ketika
sampel sudah tidak menunjukkan adanya fluktuasi berat. Setelah dilakukan tiga
kali replikasi diperoleh rata-rata kadar air simplisa herba seledri yaitu sebesar
6,62% sehingga serbuk simplisia herba seledri yang dibuat dapat dikatakan sudah
memenuhi syarat serbuk simplisia yang baik yaitu memiliki kadar air 0,05), selanjutnya dianalisis
menggunakan Levene Test menunjukkan variasi homogen (p>0,05). Kemudian
dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA dan Post Hoc Tukey. Hasil uji statistik
post hoc Tukey dapat dilihat pada Tabel VI.
Tabel VI. Hasil Uji Post Hoc Tukey pada Kelompok Kontrol dan Kelompok
Perlakuan DHS.
Kelompok

Kontrol
Negatif

Kontrol
Negatif
Kontrol
Hepatotoksik

Kontrol
Hepatotoksik
BB
(p= 0,000)

Kontrol
DHS
BTB
(p= 1,000)
BB
(p= 0,000)

DHS 0,5
g/kgBB
BTB
(p= 0,164)
BB
(p= 0,000)
BTB
(p= 0,093)

DHS 1
g/kgBB
BTB
(p= 0,841)
BB
(p= 0,000)
BTB
(p= 0,683)
BTB
(p= 0,773)

DHS 2
g/kgBB
BTB
(p= 0,437)
BB
(p= 0,000)
BTB
(p= 0,286)
BTB
(p= 0,989)
BTB
(p= 0,980)

BB
(p= 0,000)
BTB
BB
Kontrol DHS
(p= 1,000)
(p= 0,000)
BTB
BB
BTB
DHS 0,5
(p= 0,164)
(p= 0,000)
(p= 0,093)
g/kgBB
BTB
BB
BTB
BTB
DHS 1
(p= 0,841)
(p= 0,000)
(p= 0,683)
(p= 0,773)
g/kgBB
BTB
BB
BTB
BTB
BTB
DHS 2
(p= 0,437)
(p= 0,000)
(p= 0,286)
(p= 0,989)
(p= 0,980)
g/kgBB
Keterangan : BB = Berbeda Bermakna (p0,05).

Kontrol Negatif
Pada kelompok kontrol negatif, hewan uji diberikan pelarut karbon
tetraklorida yaitu olive oil dengan dosis 2ml/kgBB secara i.p. Tujuan dari
perlakuan ini adalah untuk memberikan gambaran terkait kondisi normal hati
tikus. Pemberian olive oil diharapkan tidak berpengaruh terhadap kenaikan
aktivitas serum ALT, sehingga apabila terjadi peningkatan aktivitas serum ALT
adalah dikarenakan efek dari CCl4. Berdasarkan hasil pengukuran serum ALT
pada kelompok kontrol negatif didapatkan aktivitas serum ALT sebesar 40,04 ±
2,28 U/L. Gomes (2015) melaporkan bahwa pemberian olive oil 2ml/kgBB pada
jam ke-0 dan 24 menunjukkan hasil yang tidak berbeda bermakna, hal ini
menujukkan bahwa olive oil sebagai pelarut tidak memberikan pengaruh terhadap
kenaikan aktivitas serum ALT. Pelaporan tersebut juga didukung oleh penelitian
Feng et al. (2010) dimana pemberian olive oil tidak menyebabkan kenaikan
aktivitas serum ALT serta tidak menunjukkan adanya perubahan histopatologi
hati.

16

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Kontrol Hepatotoksik
Pada kelompok kontrol hepatotoksik, hewan uji dipejankan CCl4
2ml/kgBB dalam olive oil dengan perbandingan 1:1 secara i.p. Kemudian
pencuplikan darah dilakukan 24 jam setelah pemejanan. Tujuan dari perlakuan ini
adalah untuk memberikan gambaran aktivitas enzim ALT saat terjadi kerusakan
hati. Berdasarkan analisis statistik ditunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang
bermakna (p= 0,000) antara aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksik (86,72 ±
8,70 U/L) dengan kontrol negatif (40,04 ± 2,28 U/L). Terjadi peningkatan

aktivitas serum ALT pada kelompok kontrol hepatotoksik sebanyak 2,2 kali dari
kontrol negatif. Hal tersebut kurang sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh
Zimmerman (1999), dimana steatosis atau nekrosis yang diakibatkan oleh karbon
tetraklorida ditandai dengan naiknya kadar ALT sebanyak 3 kali lipat dari nilai
normal. Oleh karena itu untuk melihat apakah hati tikus sudah mengalami tanda
steatosis atau kerusakan, diperlukan uji pendukung yaitu uji histopatologi yang
merupakan uji standar untuk melihat apakah sudah terjadi kerusakan pada hati
(Wu et al., 2018).
Karbon tetraklorida atau CCl4 merupakan senyawa kimia yang dapat
membentuk radikal bebas di dalam tubuh. CCl4 akan dimetabolisme oleh enzim
CYP2E1 dan membentuk senyawa radikal triklorometil dan triklorometil peroksi
(Hodgson, 2010). Senyawa hasil metabolisme inilah yang menyebabkan
kerusakan pada sel hati melalui inisiasi peroksidasi lipid, yang diikuti dengan
kenaikan Ca2+ intraseluler, deplesi GSH, dan pelepasan ion besi. (Halliwell and
Gutteridge, 2015). Adanya kerusakan pada sel hati, dapat menyebabkan bocornya
ALT ke ruang ekstraseluler dan plasma darah, sehingga kadarnya di darah akan
meningkat (Aulbach and Amuzie, 2017).
Kontrol DHS
Pada kelompok kontrol DHS, hewan uji diberikan DHS dosis tertinggi
yaitu 2 g/kgBB selama 6 hari berturut-turut. Tujuan dari perlakuan ini adalah
untuk mengetahui pengaruh pemberian DHS terhadap aktivitas serum ALT.
Berdasarkan analisis statistik pengukuran serum ALT pada kelompok kontrol
DHS (38,34 ± 2,21 U/L) didapatkan hasil yang berbeda tidak bermakna (p=
17

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

1,000) dengan kontrol negatif (40,04 ± 2,28 U/L) dan menunjukkan hasil yang
berbeda bermakna (p= 0,000) dengan kontrol hepatotoksik (86,72 ± 8,70 U/L). Ha