Skrining Fitokimia dan Analisa Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Biji Durian (Durio zibethinus) Dalam Ekstrak Metanol dan N-heksan Chapter III V

BAB 3
METODOLOGI PENELITIAN

3.1. Alat-alat

-

Beaker glass

1000 ml

Pyrex

-

Erlenmeyer

1000 ml

Pyrex

-

Maserator

-

Labu didih

1000 ml

Buchi

-

Labu rotap

1000 ml

Buchi

-

Rotaryevaporator

-

Kain penyaring

-

Tabung reaksi

-

Rak tabung reaksi

-

Pipet tetes

-

Corong kaca

-

Kertas saring biasa

-

Plat KLT

-

Bejana KLT

-

Lampu UV

-

Gelas ukur

-

Neraca analitis

-

Labu ukur

-

Spatula

-

Gunting

-

Penggaris

Buchi R 210

Pyrex

Pyrex

G60

Silika gel

100 ml

Pyrex
Ohause

100 ml

Pyrex

Kenko
30 cm

Butterfly

Universitas Sumatera Utara

-

Pensil

-

Pingseet

2B

3.2.Bahan-bahan

-

KI (S)

-

I2 (S)

-

HgCl2(S)

-

BiNO3(S)

-

Asam nitrat

-

Serbuk Logam Mg

-

HCl

-

NaOH 10 %

-

FeCl 1 %

-

Aquadest

-

Metanol

Teknis

-

N-heksan

Teknis

-

Etanol

Teknis

-

H2SO4

p.a (E.merck)

-

Anhidrida asetat

p.a (E.merck)

-

Etil asetat

-

Aseton

p.a (E.merck)

-

Butanol

Teknis

-

Amonia

p.a (E.merk)

-

Biji durian

p.a (E.merck)

p.a (E.merck)

Universitas Sumatera Utara

3.3. Prosedur kerja

3.3.1. Persiapan dan Ekstraksi sampel

Biji Durian dibersihkan dari partikel pengotor, dicuci dengan air sampai bersih, dipotong
kecil-kecil sehalus mungkin, dikeringkan di dalam ruangan, kemudian di belender sampai
berbentuk serbuk.Sebanyak 2158.12 g serbuk biji Durian diekstraksi maserasi berulang di
dalam maserator yang telah dilapisi kain penyaring dengan menggunakan pelarut n-heksan
selama 7 x 24 jam dan disaring. Residu kemudian dimasrasi lagi dengan menggunakan
pelarut metanol selama 9 x 24 jam dan disaring. Selanjutnya ekstrak yang diperoleh di
pekatkan dengan alat rotaryevaporator dan dihitung % rendemen sampel yang dinyatakan
dalam satuan b/b.

3.3.2. Pembuatan Pereaksi

a. pembuatan pereaksi wagner
Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang dan dilarutkan dalam aquadest, ditambahkan iodium
sebanyak 2 g dimasukkan kedalam labu takar 100 ml dan dicukupkan dengan aquadest
sampai garis batas.

b. pembuatan pereaksi meyer
Sebanyak 1,4 g raksa (II) klorida ditimbang dan dilarutkan dalam aquadest hingga 60 ml.
Pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 g kalium iodida lalu dilarutkan dalam 10 ml aquadest.
Kemudian dicampur di dalam labu takar 100 ml diencerkan sampai garis batas.

Universitas Sumatera Utara

c. pembuatan pereakasi dragendorff
Sebanyak 0,8 g bismut (III) nitrat ditimbang dan dilarutkan dala 20 ml asam nitrat pekat.
Pada wadah lain ditimbang sebanyak 27,2 g kalium iodida lalu dilarutkan dalam 50 ml
aquadest, kemudian kedua larutan dicampurkan dan didiamkan sampai memisah sempurna.
Larutan yang jernih diambil dimasukkan kedalam labu takar 100 ml diencerkan dengan
aquadest sampai garis batas.

d. pembuatan FeCl3 1 %
Sebanyak 1 g FeCl3(s) dilarutkan dalam aquadest kemudian dimasukkan kedalam labu takar
100 ml diencerkan dengan aquadest sampai garis batas.

e. pembuatan NaOH 10%
Sebanyak 10 g NaOH pelet dilarutkan dengan aquadest kemudian dimasukkan kedalam labu
takar 100 ml diencerkan dengan aquadest sampai garis batas.

3.3.3. Analisa Skrining Fitokimia

a. Uji alkaloid
Uji alkaloid dilakukan dengan menggunakan pereaksi meyer, wagner, dan dragendorff.
Ekstrak pekat metanol sampel

sebanyak 1 ml dilarutkan dengan 3 ml metanol dan

dimasukkan kedalam 3 tabung reaksi. tabung 1 ditambahkan 3 tetes pereaksi meyer , tabung 2
ditambahkan 3 tetes pereaksi wagner, dan tabung 3 ditambahkan 3 tetes pereaksi dragendorff.
Dilakukan hal yang sama untuk ekstrak pekat n-heksan sampel.tebentuknya endapan
menunjukkan adanya alkaloid.

Universitas Sumatera Utara

b. Uji flavonoid
Uji flavonoid dilakukan dengan menggunakan pereaksi NaOH 10%, dan serbuk Mg + HCl (p).
Ekstrak pekat metanol sampel sebanyak 1 ml dilarutkan dengan 3 ml metanol panas dan
dimasukkan kedalam 2 tabung reaksi. Tabung 1 ditambahkan 3 tetes NaOH 10 % terjadinya
perubahan warna menjadi biru violet menunjukkan adanya flavonoid, tabung 2 ditambahkan
serbuk Mg + 3 tetes HCl(p) terjadinya perubahan warna merah sampai jingga menunjukkan
hasil yang positif. Dilakukan hal yang sama untuk ekstrak pekat n-heksan sampel.

c. Uji tanin
Uji tanin dilakukan menurut Marlinda (Sangi et al.,2012). dengan cara melarutkan Ekstrak
pekat metanol sampel dengan metanol dan dimasukkan sebanyak 1ml kedalam tabung reaksi.
Kemudian ditambahkan 2-3 tetes larutan FeCl31 %. Hasil positif ditunjukkan dengan
terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau. Dilakukan hal yang sama untuk ekstrak pekat
n-heksan sampel.

d. Uji steroid dan terpenoid
Uji steroid dan terpenoid dilakukan dengan cara Ekstrak pekat metanol sampel sebanyak 1 ml
dilarutkan

dalam 2 ml metanol dan dimasukkan kedalam 2 tabung reaksi. Tabung 1

ditambahkan pereaksi lieberman burchard (anhidrida asetat + H2SO4(P)) terbentuknya
endapan coklat, larutan merah, jingga atau ungu menunjukkan adanya terpenoid sedangkan
terbentuknya warna hijaumenunjukkan adanya steroid. tabung 2ditambahakan pereaksi
salkowsky yaitu H2SO4(p) sebanyak 3 tetes terbentuknya endapan atau larutan merah
menunjukkan adanya terpenoid, Dilakukan hal yang sama untuk ekstrak pekat n-heksan
sampel.

Universitas Sumatera Utara

e. Uji saponin
Uji saponin dilakukandengan melarutkan ekstrak pekat metanol sampel dengan etanol
kemudian dimasukkan 2 ml kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 3 ml aquadest panas,
kemudian dikocok kuat-kuat. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil.

3.3.4. Analisa Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Analisis dengan KLT, dilakukan dengan menotolkan sampel pada fase diam (silika gel G60)
yang telah dipreparasi. Penotolan dilakukan sedikit demi sedikit hingga totolan cukup tebal
(Mardyaningsih et al.,2014).

a. Uji alkaloid
Elusi dilakukan dengan etil aseat : metanol : air dengan perbandingan ( 100 : 16,5 : 13,5) dan
diamati dengan lampu UV kemudian plat disemprot dengan pereaksi dragendorff.

b. Uji flavonoid dan tanin
Elusi dilakukan dengan butanol : asam asetat : air dengan perbandingan (3:1:1).dan diamati
dibawah lampu uv kemudian pelat disemprot dengan amonia.

c. Uji steroid dan terpenoid
Elusi dilakukan dengan n-heksan : etil asetat dengan perbandingan (6:4) dan diamati dibawah
lampu uv.

Universitas Sumatera Utara

BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil

Perhitungan % rendemen sampel yang dinyatakan dalam satuan b/b.
% Rendemen sampel =

berat hasil akhir (g)
berat sampel (g)

× 100 %

10.7686 �

% Rendemen ekstrak n − heksan = 2158 .12 g × 100 % = 0.49 %
% Rendemen ekstrak metanol =

41.3977 g
× 100 % = 1.91 %
2158.12 g

Berikut adalah hasil % rendemen sampel yang dituliskn pada tabel 4.1
Tabel 4. 1. Berat kering, berat kental dan % rendemen ekstrak N-heksan dan Metanol
biji Durian.

Biji Durian
Ekstrak sampel

Sampel kering (g)

Sampel kental (g)

% rendemen

N-heksan

2158.12 g

10.7686 g

0.49 %

Metanol

2158.12 g

41.3977 g

1.91 %

Universitas Sumatera Utara

Hasil analisa skrining fitokimia dapat dibuktikan adanya golongan senyawa metabolit
sekunder pada sampel Biji Durian baik dalam ekstrak Metanol maupun N-heksan yang
ditunjukkan pada tabel 4.2 dan 4.3.

Tabel 4.2. Hasil skrining fitokimia ekstrak Metanol biji Durian
Kandungan Kimia

Metode Pengujian

Hasil

Keterangan

Alkaloid

Dragendorff

Endapan jingga

+

Meyer

Endapan putih

+

Wangner

Endapan coklat

+

serbuk Mg + HCl(p)

Larutan jingga

+

NaOH 10 %

Tidak ada prubahan

-

Tanin

FeCl3 1 %

hitam kebiruan

+

Steroid dan

Lieberman Burchard

Endapan coklat dan

+

Flavonoid

Terphenoid

Saponin

Warna hijau
Salkowsky

larutan merah

+

Aquadest

Membentuk buih

+

Keterangan : (+) = ada, (-) = tidak ada

Universitas Sumatera Utara

Tabel 4.3. Hasil skrining fitokimia ekstrak N- heksan biji Durian

Kandungan Kimia

Metode Pengujian

Alkaloid

Dragendorff

Tidak ada perubahn

-

Meyer

Tidak adaperubahan

-

Wangner

Tidak ada perubahan

-

Serbuk Mg + HCl(p)

Tidak ada perubahan

-

NaOH 10 %

Tidak ada perubahan

-

Tanin

FeCl3 5 %

Tidak ada perubahan

-

Steroid dan

Lieberman Burchard

Endapan coklat

+

Terphenoid

Salkowsky

larutan merah

+

Saponin

Aquadest panas

Tidak ada perubahan

-

Flavonoid

Hasil

Keterangan

Keterangan : (+) = ada, (-) = tidak ada

Hasil uji penegasan dengan analisa kromatografi lapis tipis ditunjukkan pada tabel 4.4
berikut adalah perhitungan penentuan harga Rf pada setiap senyawa yang menunjukkan hasil
positif pada analisa skrining fitokimia.

harga Rf =

1. Alkaloid
4.8

�� = 8.2 = 0.58

Jarak noda
Jarak pelarut

3. Flavonoid
4.6

�� = 6.1 = 0.75

Universitas Sumatera Utara

2. Steroid dan terpenoid ekstrak metanol
�� =

4.7
6

4. Steroid dan terpenoid ekstrak n-heksan
�� =

= 0.78

4.7
6

= 0.78

Tabel 4.4. Hasil uji kromatografi lapis tipis (KLT) ekstrak Metanol dan N-heksan biji
Durian.

Ekstrak sampel

Kandungan kimia

Rf

Tambah pereaksi

Keterangan

Ekstrak Metanol

Alkaloid

0.58

Coklat jingga

+

Flavonoid

0.75

Kuning

+

Steroid dan terpenoid

0.78

-

+

Ekstrak N-heksan Steroid dan terpenoid

0.78

-

+

Keterangan : (+) = ada, (-) = tidak ada

4.2. Pembahasan

Berdasarkan data tabel 4.1 pengamatan % rendemen sampel yang dinyatakan dalam satuan
b/b. Diperoleh hasilbiji Durian dengan pelarut n-heksandiperoleh ekstrak encer berwarna
kuning, Dengan rendemen 0.49%. sedangkan Hasil ekstrak metanol diperoleh cairan
berwarna merah bata, dengan rendemen 1.91%. diperoleh lebih banyak % rendemen ekstrak
metanol karena senyawa yang terdapat pada biji Durian lebih banyak bersifat polar
dibandingkan dengan senyawa non polarnya. Hasil skrining fitokimia pada tabel 4.2 dan 4.3
menunjukkan bahwa biji Durian positif mengandung senyawa metabolit sekunder seperti
alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, steroid, dan terpenoid.
Identifikasi alkaloid, Hasilpada uji meyer ditandai dengan terbentuknya endapan
putih. endapan tersebut adalah kompleks kalium-alkaloid. Pada pembuatan pereaksi meyer,
larutan merkurium(II) klorida ditambah kalium iodida akan bereaksi membentuk endapan

Universitas Sumatera Utara

merah merkurium(II) iodida. Jika kalium iodida yang di tambahkan berlebih maka akan
terbentuk kalium tetraiodomerkurat(II). Alkaloid mengandung atom nitrogen yang
mempunyai pasangan elektron bebas sehingga dapat digunakan untuk membentuk ikatan
kovalen koordinat dengan ion logam. Pada uji alkaloid dengan pereaksi meyer, diperkirakan
nitrogen pada alkaloid akan bereaksi dengan ion logam k+ dari kalium tetraiodomerkurat(II)
membentuk kompleks kalium- alkaloid yang mengendap.

Gambar 4.1. Reaksi Alkaloid dengan Pereaksi Mayer

Hasil positif alkaloid pada uji wagner ditandai dengan terbentuknya endapan coklat.
Diperkirakan endapan tersebut adalah kalium-alkaloid. Pada pembuatan pereaksi wagner,
iodin bereaksi dengan ion I- dari kalium iodida menghasilkan ion I3- yang berwarna coklat.
Pada uji wagner, ion logam K+ akan membentuk ikatan kovalen koordinat dengan nitrogen
pada alkaloid membentuk kompleks kalium-alkaloid yang mengendap.

Gambar 4.2. Reaksi Alkaloid dengan Pereaksi wagner

Universitas Sumatera Utara

Hasil positif alkaloid pada uji dragendorff ditandai dengan terbentuknya endapan
coklat muda sampai kuning (jingga). Endapan tersebut adalah kalium-alkaloid. Pada
pembuatan pereaksi dragendorff, bismut nitrat dilarutkan dalam HCl agar tidak terjadi reaksi
hidrolisis karena garam-garam bismut mudah terhidrolisis membentuk ion bismutil (BiO+).
Agar ion Bi3+ tetap berada dalam larutan, maka larutan itu ditambah asam sehingga
kesetimbangan akan bergeser ke arah kiri. Selanjutnya ion Bi3+ dari bismut nitrat bereaksi
dengan kalium iodida membentuk endapan hitam Bismut(III) iodida berlebih membentuk
kalium tetraiodobismutat. Pada uji alkaloid dengan pereaksi dragendorff, nitrogen digunakan
untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan K+ yang merupakan ion logam.

Gambar 4.3. Reaksi Alkaloid dengan Pereaksi Dragendorff
Hasil identifikasi flavonoid menggunakan uji wilstater menunjukkan warna jingga
yang berarti positif adanya flavonoid. Mangnesium dan asam klorida pada uji Wilstater
bereaksi membentuk gelembung-gelembung yang merupakan Gas H2, sedangkan logam Mg
dan HCl(p)pada uji ini akan bereaksi dengan gugus hidroksil (OH) yang terdapat pada struktur
flavonoid sehingga terbentuk perubahan warna menjadi merah muda atau jingga.

Universitas Sumatera Utara

Mg(s) + 2HCl

MgCl2 + H2

+ Mg(s) + HCl

+ Mg+

ClCl-

O-Mg-Cl + HCl

Gambar 4.4. Reaksi Flavonoid dengan Pereaksi Serbuk Mg + HCl

Hasil identifikasi tanin dengan penambahan larutan FeCl3 1 % yaitu terjadi perubahan
warna biru kehitaman atau hijau kehitaman yang menunjukkan adanya tanin (Tarigan et al.,
2008).pada penambahan pereaksi FeCl3 1 % diperkirakan larutan pereaksi ini dapat bereaksi
dengan salah satu gugus hidroksil yang ada pada senyawa tanin. Pereaksi FeCl3 dapat
dipergunakan secara luas untuk mengidentifikasi senyawa fenol termasuk tanin.

O-Fe Cl
Cl
+ FeCl3

+ HCl

Gambar 4.5. Reaksi uji tanin dengan pereaksi FeCl3
Hasil Identifikasi terpenoid dan steroid pada ekstrak metanol dan ekstrak n-heksan
yaitu terjadinya perubahan warna merah pada uji dengan pereaksi salkowsky. Dan
terbentuknya endapan coklat saat ditambahkan dengan anhidrida asetatserta terlihat warna
hijau saat larutan H2SO4(P)diteteskan pada pelat tetes. Perubahan warna seperti diatas

Universitas Sumatera Utara

dikarenakan terjadinya oksidasi pada golongan senyawa terpenoid atau steroid melalui
pembentukan ikatan rangkap terkonjugasi.

Gambar 4.6. Reaksi terpenoid dengan pereaksi Lieberman Burchard

HasilIdentifikasi saponin menggunakan aquadest panas menujnjukkan bahwa ekstrak
metanol biji Durian positif mengandung saponin. hal ini ditandai dengan terbentuknya busa
yang stabil yang dapat bertahan lama. Terbentuknya busa pada uji ini menunjukkan adanya
glikosida yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam air yang terhidrolisis
menjadi glukosa dan senyawa lainnya.

Gambar 4.7. Reaksi Hidrolisis Saponin dengan Air.

Hasil skrining fitokimia yang telah dilakukan menunjukkan bahwa dalam sampel
ekstrak metanol biji Durian mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, steroid dan
terpenoid dan ekstrak n-heksan biji durian mengandung steroid dan terpenoid.

Universitas Sumatera Utara

Prosedur uji dengan KLT dilakukan untuk lebih menegaskan hasil yang didapat dari
uji skrining fitokimia. Karena berfungsi sebagai penegasan, maka uji KLT hanya dilakukan
untuk golongan senyawa yang menunjukkan hasil positif pada skrining fitokimia.
Berdasarkan tabel 4.4 Hasil analisa KLT (kromatografi lapis tipis) ekstrak metanol biji
Durian mengandung alkaloid dengan Rf 0.58, flavonoid dan tanin dengan Rf 0.75, steroid
dan terpenoid dengan Rf 0.78 dan ekstrak n-heksan biji Durian mengandung steroid dan
terpenoid dengan Rf 0.78.
Hasil uji KLT menegaskan bahwa dalam sampel ekstrak metanol mengandung
alkaloid, flavonoid dan tanin, steroid dan terpenoidDan ekstrak n-heksan mengandung steroid
dan terpenoid.

Universitas Sumatera Utara

BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

1. % rendemen sampel biji Durian dengan pelarut n-heksandiperoleh ekstrak encer
berwarna kuning, Dengan rendemen 0.49%. sedangkan Hasil ekstrak metanol
diperoleh cairan berwarna merah bata, dengan rendemen 1.91%. diperoleh lebih
banyak % rendemen ekstrak metanol karena senyawa yang terdapat pada biji Durian
lebih banyak bersifat polar dibandingkan dengan senyawa non polarnya.
2. Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak metanol biji Durian (Durio
zibethinus) mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, steroid dan terpenoid.
Dan ekstrak N-heksan biji Durian mengandung steroid dan terpenoid.
3. Hasil analisa KLT (kromatografi lapis tipis) ekstrak metanol biji Durian mengandung
alkaloid dengan Rf 0.58, flavonoid dan tanin dengan Rf 0.75, steroid dan terpenoid
dengan Rf 0.78 dan ekstrak n-heksan biji Durian mengandung steroid dan terpenoid
dengan Rf 0.78.

5.2. Saran

Untuk penelitian selanjutnya disarankan untuk melakukan analisa pemisahan dan
pemanfaatan komponen kimia/senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, tanin,
saponin, steroid dan terpenoid yang terkandung di dalam biji durian.

Universitas Sumatera Utara