SKRIPSI SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3',4'-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIK TERHADAP MENCIT (Mus musculus)

  

SKRIPSI

SINTESIS SENYAWA

ASAM O-(3',4'-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT

DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIK TERHADAP MENCIT

  

(Mus musculus)

ALEAYA AISHAH

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

DEPARTEMEN KIMIA FARMASI

SURABAYA

  

2016

  

LEMBAR PERSETUJUAN

PUBLIKASI KARYA ILMIAH

  Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi / karya ilmiah saya, dengan judul:

  

SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3’,4’-DIKLOROBENZOIL)-5-

NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIKNYA

PADA MENCIT (Mus musculus)

  Untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu Digital Library Perpustakaan Universitas Airlangga untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak Cipta.

  Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya buat dengan sebenarnya.

  Surabaya, 5 Februari 2016

  Aleaya Aishah 051111163 Saya yang bertanda tangan di bawah ini, Nama : Aleaya Aishah Nim : 051111163 Fakultas : Farmasi

  Menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil tugas akhir yang saya tulis dengan judul:

  

SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3’,4’-DIKLOROBENZOIL)-5-

NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIKNYA

PADA MENCIT (Mus musculus)

  adalah benar-benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila dikemudian hari diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil plagiarisme, maka saya bersedia menerima sangsi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan gelar yang saya peroleh.

  Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk dipergunakan sebagaimana mestinya.

  Surabaya, 5 Februari 2016

  Aleaya Aishah 051111163 Segala puji syukur saya panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, atas rahmat dan karuniaNya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang merupakan salah satu persyaratan untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.

  Skripsi yang berjudul “SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3’,4’- DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIK TERHADAP MENCIT (Mus musculus)” ini dapat diselesaikan atas bantuan serta dukungan banyak pihak, maka oleh karena itu penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih kepada :

  a. Dr. Bambang Tri Purwanto, M.S., Apt selaku pembimbing utama yang telah banyak memberikan bimbingan dan pengarahan dalam menyelesaikan skripsi ini

  b. Dra. Nuzul Wahyuning Diyah, Msi. Apt. selaku pembimbing serta atas perhatiannya selama penelitian untuk memberikan bimbingan, dan saran dalam menyelesaikan skripsi ini.

  c. Dr. Juni Ekowati, M.si., Apt. selaku dosen penguji atas kritik dan saran yang diberikan kepada penulis dalam perbaikan skripsi ini.

  d. Febri Annuryanti, SFarm., MSc, Apt. selaku dosen penguji atas kritik dan saran yang diberikan kepada penulis dalam perbaikan skripsi ini.

  e. Seluruh dosen di departemen Kimia Farmasi dan Kimia Medisinal atas segala bantuan, saran dan dorongan sehingga terselesaikan skripsi ini.

  f. Bu Ana Yudha, SSi., Apt. M. Pharm selaku dosen wali yang telah memberikan motivasi serta dorongan selama perkuliahan di Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.

  g. Bapak Tukidjo dan Bapak Tanto, Laboran Ruang Praktikum Kimia Medisinal, yang membantu menyiapkan alat dan bahan selama penelitian. h. Para dosen yang telah mendidik dan membimbing selama perkuliahan di Fakultas Farmasi Universitas Airlangga. i. Kedua orang tua (Mohamed Fadli dan Hasidah Hamzah) dan keluarga besar yang selalu mendoakan, memberikan dukungan dan semangat sehingga skripsi ini bisa selesai. j. Teman-teman Skripsi Nor Azrene Elena, Ivon Loretta, Alfiyah

  Sefyaningtiyas, Asyraf Solahudin dan semua teman-teman seperjuangan penelitian skripsi di Kimia Medisinal. Terima kasih atas kerja samanya. k. Terima kasih kepada teman-teman yang tidak bisa disebut satu persatu, karena telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

  Pihak-pihak lain yang belum disebutkan, terima kasih semuanya. Penulis menyadari bahwa masih banyak terdapat kekurangan dalam menyusun skripsi ini. Untuk itu segala kritik dan saran dari semua pihak sangat diharapkan demi perbaikan pada nantinya. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan, khususnya dalam pengembangan obat.

  Surabaya, 5 Februari 2016 Penulis

  

RINGKASAN

SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3’,4’-DIKLOROBENZOIL)-5-

NITROSALISILAT

DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIKNYA PADA MENCIT

  

(Mus musculus)

  Aleaya Aishah Modifikasi stuktur asam salisilat bertujuan untuk mendapatkan senyawa turunannya yang memiliki aktivitas analgesik lebih tinggi dibanding asam salisilat. Senyawa asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5- nitrosalisilat telah berhasil disintesis dan diuji aktivitas analgesiknya pada mencit (Mus musculus).

  Sintesis dalam penelitian ini adalah melakukan reaksi antara asam 5-nitrosalisilat dan 3,4-diklorobenzoil klorida. Pada struktur asam 5-nitrosalisilat, terdapat gugus -OH yang dapat bereaksi dengan 3,4- diklorobenzoil klorida. Reaksi esterifikasi akan terjadi melalui substitusi nukleofilik dan 5-nitrosalisilat akan bertindak sebagai nukleofil. Pada reaksi ini, gugus OH pada senyawa asam 5-nitrosalisilat akan bertindak sebagai nukleofil yang akan menyerang gugus karbonil pada 3,4- diklorobenzoil klorida. Pada metode ini digunakan basa piridin sebagai katalisator untuk mengikat HCl hasil reaksi sekaligus dapat berfungsi sebagai katalis supaya lebih reaktif. Hasil sintesis yang diperoleh sebesar 60 % yang berupa serbuk padatan berwarna kuning kecoklatan.

  Senyawa hasil sintesis diuji kemurniannya dengan uji jarak lebur dan kromatografi lipis tipis. Hasil uji jarak lebur senyawa hasil sintesis berbeda dengan senyawa aspirin. Begitu juga uji KLT dengan menggunakan 3 eluen yang berbeda, yaitu etil asetat : n-heksan (7 : 3), etil asetat : n-heksan: metanol (5 : 3 : 2), dan Etil asetat : metanol (6 : 4), sedangkan untuk konfirmasi struktur dilakukan dengan metode spekrofotometri ultraviolet, spektrofotometri inframerah dan

  1

  spektrometri magnet inti ( H-NMR). Hasil spektrum UV menunjukkan bahwa ada perbedaan λ antara senyawa hasil sintesis dan aspirin.

  maks

  Hasil spektrum IR pula menunjukkan bahwa senyawa hasil sintesis telah

  1

  memiliki gugus fungsi yang berbeda dari aspirin, dan hasil spektrum (

  H- NMR) menunjukkan bahwa ada perbedaan jumlah H pada senyawa hasil sintesis dan aspirin. Uji aktivitas analgesik dilakukan dengan memberikan senyawa uji dan senyawa penginduksi nyeri pada mencit secara intraperitoneal dengan metode Writhing test. Senyawa uji asam O- (3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat dengan dosis 25, 50, dan 100 mg/kg BB diinjeksi 20 menit sebelum induksi nyeri oleh larutan asam asetat 0,6 % dengan volume 0,01 ml/g BB. Setelah 5 menit pemberian induksi nyeri,diamati respon nyeri selama 30 menit. Aktivitas analgesik dapat dihitung dari frekuensi geliat berdasarkan persentase hambatan nyeri.

  Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa asam O-(3’,4’- diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat pada dosis 25 mg/kg BB mempunyai persentase hambatan nyeri sebesar 38,68 %, pada dosis 50 mg/kg BB sebesar 68,68 %, dan pada dosis 100 mg/kg BB sebesar 78,79 %. Untuk senyawa pembanding aspirin pula, pada dosis 25 mg/kg BB mempunyai persentase hambatan nyeri sebesar 32,42 %, pada dosis 50 mg/kg BB sebesar 60,99 %, dan pada dosis 100 mg/kg BB sebesar 76,92 %. Berdasarkan hasil ini, dapat disimpulkan bahwa senyawa asam O-(3’,4’- diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat mempunyai aktivitas analgesik yang lebih tinggi dibanding aspirin.

  Didapatkan hasil ED untuk O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-

  50

  nitrosalisilat sebanyak 32,93 mg/kg dan untuk asam 5-nitrosalisilat didapatkan hasil sebanyak 40,52 mg/kg. Dari hasil ini menunjukkan ED

  50

  untuk O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat lebih rendah dibandingkan dengan ED untuk 5-nitrosalisilat. Dapat disimpulkan bahwa O-(3’,4’-

  50

  diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat memiliki aktivitas analgesik lebih besar dibanding aspirin Sebagai saran, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai toksisitas senyawa hasil sentesis asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5- nitrosalisilat.

  

ABSTRACT

Synthesis and analgesic activity test of O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-

nitrosalicylic acid in mice (Mus musculus)

  Aleaya Aishah The aim of this research is to synthesize O-(3’,4’- dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic as an aspirin derivate and to examine its analgesic activity in mice. O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic was synthesized with esterification method by reacting 5-nitrosalicylic acid with 3,4-dichlorobenzoyl chloride. Tetrahydrofuran (THF) and pyridin was used as a solvent and respective catalyst. The result obtained for the synthesize of 60% in the form of yellowish/tawny powder. The resulted compound was recrystallized by using ethanol and its purity was tested by thin layer chromatography and melting point test. The structure was confirmed by UV spectrophotometry method, infrared spectrophotometry method, and HNMR spectrometry method.

  Its analgesic activity was tested with Writhing test method. The percentages of pain-inhibition for O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5- nitrosalicylic for the dose 25mg/kg body-weight was 38,68%, for 50 mg/kg body-weight was 68,68% and for 100 mg/kg body-weight was 78,79%. On the other hand, the percentages of pain-inhibition for the standard compound aspirin for the dose 25mg/kg body-weight was 32,42%, for 50 mg/kg body-weight was 60,99% and for 100 mg/kg body- weight was 76,92%. In conclusion, the aspirin derivate that was synthesized which is O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic have higher analgesic activity than aspirin.

  The ED

  50 for O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic is 32,93

  mg/kg and for 5-nitrosalicylic acid is 40,52 mg/kg. The ED

  50 of O-(3’,4’-

  dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic is lower than ED of 5-nitrosalicylic

  50

  acid. This showed that O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic have higher analgesic activity than aspirin.

  Keyword: synthesis, O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic, analgesic activity, ED

  50

  DAFTAR ISI Halaman

  HALAMAN SAMPUL…………………………………..................... i LEMBAR PENGESAHAN……………………………….................. ii HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ILMIAH…................... iii HALAMAN PERNYATAAN BUKAN HASIL PLAGIARISME……….. ..................................................... iv KATA PENGANTAR……………………………………................. v RINGKASAN……………………………………………................. vii ABSTRACT………………………………………………................ ix DAFTAR ISI…………………………………………….....................x DAFTAR TABEL………………………………………................... xiv DAFTAR GAMBAR …………………………………..................... xv DAFTAR LAMPIRAN………………………………….................. xvii

  BAB 1 PENDAHULUAN...................................................................1

  1.1 Latar Belakang...................................................................1

  1.2 RumusanMasalah...............................................................4

  1.3 Tujuan Penelitian ...............................................................5

  1.4 Manfaat Penelitian .............................................................5

  BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA...........................................................6

  2.1 Tinjauan Tentang Nyeri......................................................6

  2.2 Tinjauan Tentang Analgesik.................................................6

  2.3 Tinjauan Tentang Turunan Asam Salisilat............................7

  2.4 Tinjauan Tentang Aspirin.....................................................8

  2.5 Tinjauan Tentang Reaksi Asilasi.........................................11

  2.6 Tinjauan Tentang Bahan Reagen Untuk Sintesis...................10

  2.6.1 Tinjauan tentang Asam 5-nitrosalisilat.....................10

  2.6.2 Tinjauan tentang 3,4-diklorobenzoil klorida............10

  2.6.3 Tinjauan Tentang Tetrahidrofuran...........................10

  2.6.4 Tinjauan Tentang Piridin.........................................10

  2.7 Tinjauan Tentang Kemurnian Senyawa Hasil Sintesis......................................................................11

  2.7.1 Tinjauan Tentang Jarak Lebur.................................11

  2.7.2 Tinjauan Tentang Kromatografi Lapis Tipis............11

  2.8 Tinjauan Tentang Identifikasi Struktur...............................12

  2.8.1 Tinjauan Tentang Spektrofotometer UV-Vis...........12

  2.8.2 Tinjauan Tentang Spektrofotometer Inframerah..............................................................12

  2.8.3 Tinjauan Tentang Spektrometer Resonansi Magnet Inti............................................12

  2.9 Tinjauan Tentang Metode Pengujian Aktivitas Analgesik...........................................................13

  2.9.1 Metode Stimulasi Panas..........................................................13

  2.9.2 Metode Stimulasi Listrik.....................................13

  2.9.3 Metode Stimulasi Mekanikal...............................14

  2.9.4 Metode Stimulasi Kimiawi..................................14

  BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL............................................15

  3.1 Kerangka Konseptual....................................................15

  BAB 4 METODE PENELITIAN....................................................18

  4.1 Alat dan Bahan Penelitian.............................................18

  4.1.1 Bahan Kimia......................................................18

  4.1.2 Alat....................................................................18

  4.2 Hewan Coba.................................................................18

  4.3 Kerangka Operasional Sintesis......................................19

  4.4 Prosedur Sintesis Senyawa Asam

  O

• (3',4'-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat.........................20

  4.5 Analisis Senyawa Asam

  O

• (3',4'-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat.........................21

  4.5.1 Pemeriksaan Organoleptis..................................21

  4.6 Uji Kemurnian Senyawa Hasil Sintesis.........................21

  4.6.1 Uji Jarak Lebur...................................................21

  4.6.2 Analisis dengan Kromatografi Lapis Tipis....................................21

  4.7 Pemeriksaan Identifikasi Struktur ...............................21

  4.7.1 Analisis Dengan Spektrofotometer UV-Vis................................21

  4.7.2 Analisis Dengan Spektrofotometer Inframerah...........................22

  4.7.3 Identifikasi Senyawa Dengan Spektrometer Resonansi Magnet Inti......................................22

  4.8 Prosedur Uji Aktivitas Analgesik................................22

  4.8.1 Persiapan Hewan Coba....................................22

  4.8.2 Pembuatan Larutan Asam Asetat 0,6% dan Musilago CMC Na 0,5%....................23

  4.8.3 Perhitungan Dosis...............................................23

  4.8.4 Pembuatan Sediaan suspensi Senyawa Uji.........24

  4.8.5 Pemberian Senyawa Uji.....................................25

  4.8.6 Pelaksanaan Uji Aktivitas..................................25

  4.9 Analisis Data.............................................................28

  4.9.1 Penentuan Persen Hambatan Nyeri...................28

  4.9.2 Uji Anova.........................................................28

  4.9.3 Penentuan ED

  50 ............................................... 29

  BAB 5 HASIL PENELITIAN……………………………..........30

  5.1 Hasil Penelitian …………........................................30

  5.1.1 Hasil Sintesis Senyawa Asam O-(3',4'-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat.......30

  5.2 Analisis Senyawa Hasil Sintesis…………..........…30

  5.2.1 Pemeriksaan Organoleptis…………….…...30

  5.2.2 Uji Kemurnian dengan Penentuan jarak Lebur………….................30

  5.2.3 Uji Kemurnian dengan Kromatografi Lapis Tipis…........................ 31

  5.3 Identifikasi Struktur Hasil Sintesis……………….31

  5.3.1 Identifikasi Struktur dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis………... 31

  5.3.2 Identifikasi Struktur dengan Metode Spektrofotometri Infra Merah (IR)…………………….......... 33

  5.3.3 Identifikasi Struktur dengan Metode Spektrometer Resonansi Magnet Inti…………………………….…..34

  5.4 Uji Aktivitas Analgesik……………………..........37

  5.4.1 Penentuan Frekuensi Geliat…………........37

  5.4.2 Analisis Data dengan Uji ANOVA…….....38

  5.4.3 Perhitungan Persentase Hambatan Nyer.....38

  BAB 6 PEMBAHASAN…………………………………..... 40 BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN…………………….. 44

  7.1 Kesimpulan…………………………………............ 45

  7.2 Saran………………………………………………….45 DAFTAR PUSTAKA .............................................................46

  50 Aktivitas Analgesik Senyawa Hasil Sintesis....................39

  5.6 Karakteristik Spektrum

  5.9 ED

  O

  5.8 Persentase Hambatan Nyeri Kelompok Senyawa Uji

  O

  5.7 Frekuensi Geliat Pada Kelompok Uji

  Senyawa Hasil Sintesis…………......................................…..... 36

  1 H-NMR

  Senyawa Asam 5-nitrosalisilat .................................................. 35

  DAFTAR TABEL Halaman

  1 H-NMR

  5.5 Karakteristik Spektrum

  5.4 Karakteristik Spektrum IR Senyawa Asam 5-nitrosalisilat dan senyawa hasil sintesis……………….. 34

  5.3 Nilai Rf Senyawa Hasil Sintesis................................................….37

  5.2 Hasil Pemeriksaan Jarak Lebur...................................................30

  5.1 Hasil Pemeriksaan Organoleptis.................................................30

  4.1 Konversi Dosis Hewan Coba ke HED berdasarkan BSA ........................................................................23

• (3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat, Kelompok Senyawa Pembanding aspirin, dan Kelompok Kontrol CMC Na 0,05%....................................................................... 37
• (3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat dan Kelompok Senyawa Pembanding Aspirin........………..... 38

  DAFTAR GAMBAR Halaman

  1.1 Struktur Turunan Asam Salisilat................................................2

  2.1 Mekanisme Reaksi Asilasi........................................................ 9

  3.1 Skema Kerangka Konseptual................................................................................17

  4.1 Kerangka Operasional Sintesis................................................ 19

  4.2 Reaksi Sintesis Senyawa

  O

• (3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat.................................. 20

  4.1 Bagan Uji Aktivitas....................................................................................27

  5.1 Spektrum UV-Vis Senyawa Asam 5-nitrosalisilat Dalam Etanol………......................................................................... 32

  5.2 Spektrum UV-Vis Senyawa Asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5

• nitrosalisilat Dalam Etanol……………............................... 32

  5.3 Spektrum Inframerah Senyawa Asam 5-nitrosalisilat Dalam Plat KBr……………………………………………….......… 33

  5.4 Spektrum Inframerah Senyawa Asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat Dalam Plat KBr……………………..........................……….....…....33

  1

  5.5 Spektrum H-NMR Senyawa Asam 5-nitrosalisilat Dalam Pelarut DMSO-D6………………………………....... 35

  5.6 Spektrum

  1 H-NMR Senyawa

  Asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat Dalam Pelarut DMSO-D6……..………………......................…......…. 36

  5.7 Grafik Hubungan Antara log Dosis dan % Hambatan Nyeri Untuk Senyawa Aspirin...................………………..................... 39

  5.8 Grafik Hubungan Antara log Dosis dan % Hambatan Nyeri Untuk Senyawa Uji..........................………………………….... 39