Pemeriksaan Bakteri Escherichia Coli pada Air Minum dari Kabupaten Balige Menggunakan Metode MPN (Most Probable Number)

Lampiran 1.Tabel Hasil Percobaan
Sampel

Air Minum Isi
Ulang

Nomor
Sampel

Tes
Pendugaan

216/B/AM

530

Tes
penegasan
300

MPN

7.8

34
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 2.Flowsheet
Pembuatan Media Lactose Broth Single
←Ditimbang seksama media Lactose BrothSebanyak 13gr.
← Dimasukkan ke dalam beker gelas,
← Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
← Dimasukkanmagnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut
← Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang Berisi tabung
durham masing-masing 10 ml
← Disterilkan di dalan oven dengan tekanan 1 atm pada
suhu1210C Selama 15 menit
← Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan
kering.
Hasil

35
Universitas Sumatera Utara

Pembuatan Media Lactose Broth Double
←Ditimbang seksama media Lactose Brot
Sebanyak 26 gr.
← Dimasukkan ke dalam beker gelas,
← Dilarutkan dalam 500 ml aquadest.
← Dimasukkanmagnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut
← Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang
Berisi tabung durham masing-masing 5 ml
← Disterilkan di dalan oven dengan tekanan atm padasuhu
1210C selama 15 menit.
← Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan

kering.

Hasil

36
Universitas Sumatera Utara

Pembuatan Media Brilliant Green Lactose Broth Single
←Ditimbang seksama media
Broth sebanyak 40 gr.

Brilliant Green Lactose

← Dimasukkan ke dalam beker gelas.
← Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
← Dimasukkanmagnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut.
← Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung
durham masing-masing 10 mL.
← Disterilkan di dalan oven dengan tekanan 1 atm pada
suhu 1210C selama 15 menit.
← Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan
kering.

Hasil

37
Universitas Sumatera Utara

Pembuatan Media Tryptone
←Ditimbang seksama media Tryptone sebanyak 15 gr.
← Dimasukkan ke dalam beker gelas.
← Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
← Dimasukkan magnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut.
← Dimasukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing 10
mL.
← Disterilkan di dalan oven dengan tekanan atm pada
suhu 1210C selama 15 menit.
← Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan
kering.
Hasil

38

Universitas Sumatera Utara

Uji Pendugaan
←Pada tes Pendugaan digunakan media Lactose broth.
Tes pendugaan dilakukandengan 2 cara :single dan double
← Single :
← 13 gram Lactose Broth dalam 1000 ml aquadest
← Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan tabung Durham
dengan posisi terbalik. 10 tabung diisi dengan masing
masing 10 ml media.
← Double :
← 26 gram Lactode Broth dalam 500 ml aquadest.
← Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan
tabungdurham dengan posisi terbalik. 5 tabung diisi dengan
masing-masing 5ml.
Hasil

39
Universitas Sumatera Utara

Sampel
←Masukkan sampel yang sudah dihomogenkan secara aseptik ke
dalam masing-masing tabung LB.
← Tabung lalu di goyang-goyang agar homogen.
← Inkubasikan pada inkubator pada suhu 350C selama 2x24 jam.
Reaksi dinyatakan positif bila terbentuk gas dalam tabung durham.
← Kemudian tabung-tabung yang positif dilanjutkan ke tes penegasan.

Hasil

40
Universitas Sumatera Utara

Sampel
←Tabung yang dinyatakan positif pada uji pendugaan, diinokulasikan
ke dalam tabung yang berisi media Tryptone. Masing-masing diisi
satu sampai dua ose yang pengerjaannya dilakukan secara aseptis.
← Diinkubasi pada suhu 440C selama 2x24 jam
← Setalah 48 jam, ditambahkan larutan kovaks sebanyak 0.5 ml dan
Dinyatakan positif jika terbentuk cincin merah

←Tabung yang positif dicocokan dengan tabel MPN

Hasil

41
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 3. Permenkes Nomor 492/MENKES/PER/IV/2010

42
Universitas Sumatera Utara

43
Universitas Sumatera Utara

44
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 4.Tabel Perkiraan Terdekat (MPN)
Tabel MPN

Nilai MPN dan LK (Limit Kepercayaan) 95% untuk kombinasi 5 tabung 10 ml,
5 tabung 1 ml, dan 5 tabung 0,1 ml
5 Tabung
10
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1

1
1
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3

3

1 0.1
0 0
0 1
1 0
1 1
2 0
2 1
3 0
0 0
0 1
0 2
1 0
1 1
1 2
2 0
2 1
3 0
3 1

4 0
0 0
0 1
0 2
1 0
1 1
1 2
2 0
2 1
2 2
3 0
3 1
4 0
0 0
0 1
0 2
1 0
1 1
1 2
2 0

MPN/g
1600

58
70
100
100
150
70
100
150
220
400
700

400
440
710
710
1,100
710
1100
1700
2600
4600
–

46
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 5.Gambar Media

Media Lactose Broth (LB)

Media Tryptone Water

Media Lactose Broth (LB) Double Strenght dan Single Strenght

47
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 6.Gambar Sampel

48
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 7.Gambar Alat Inkubator

Inkubator Suhu 35ºC

Inkubator Suhu 44ºC

49
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 8.Gambar Alat Sterilisasi

Autoklaf

Oven

50
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 9.Gambar Hasil Uji Pendugaan dan Uji Penegasan

Media Lactose Broth sebelum ditambahkan sampel untuk uji pendugaan.

Hasil uji penegasan sebelum ditambahkan pereaksi kovacs.

Hasil uji penegasan setelah ditambahkan pereaksi kovacs

51
Universitas Sumatera Utara

Lampiran 10.Gambar Pereaksi KOVAC’S

52
Universitas Sumatera Utara