Validasi metode dan penetapan kadar kuersetin total dalam daun teh segar (Camellia sinensis O.K.), teh hijau dan teh hitam menggunakan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) fase terbalik - USD Repository

  

VALIDASI METODE DAN PENETAPAN KADAR KUERSETIN TOTAL

DALAM DAUN TEH SEGAR ( Camellia sinensis O.K), TEH HIJAU DAN

TEH HITAM MENGGUNAKAN METODE

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) FASE TERBALIK

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhin Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

  Program Studi Farmasi Oleh :

  Anastasia Filipa Veritas da Silva NIM : 088114060

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2012

  

VALIDASI METODE DAN PENETAPAN KADAR KUERSETIN TOTAL

DALAM DAUN TEH SEGAR ( Camellia sinensis O.K), TEH HIJAU DAN

TEH HITAM MENGGUNAKAN METODE

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) FASE TERBALIK

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhin Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

  Program Studi Farmasi Oleh :

  Anastasia Filipa Veritas da Silva NIM : 088114060

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2012

HALAMAN PERSEMBAHAN

  

"Karena itu Aku berkata kepadamu: Janganlah kuatir akan hidupmu, akan apa

yang hendak kamu makan atau minum, dan janganlah kuatir pula akan tubuhmu,

akan apa yang hendak kamu pakai. Bukankah hidup itu lebih penting dari pada

makanan dan tubuh itu lebih penting dari pada pakaian? (Matius 6:25)

  

Sebab itu janganlah kamu kuatir akan hari besok, karena hari besok mempunyai

kesusahannya sendiri. Kesusahan sehari cukuplah untuk sehari." (Matius 6:34)

Serahkanlah segala kekuatiranmu kepada-Nya, sebab Ia yang memelihara kamu.

  (I Petrus 5:7) “Aku akan menyertai engkau; Aku tidak akan membiarkan engkau dan tidak akan meninggalkan engkau” (Yos 1:5b)

  K upersembahkan karyaku ini untuk : Papa mama tersayang K akakku tersayang Advent dan Viany Adikku tersayang Vano Sahabat dan teman-temanku K amu, dia dan mereka Almamater yang kubanggakan

  

PRAKATA

  Puji syukur ke hadirat Tuhan Yesus Kristus atas segala kasih dan karunianya sehingga penelitian yang berjudul “Validasi Metode dan Penetapan Kadar Kuersetin Total dalam Daun Teh Segar (Camellia sinensis O.K.), Teh Hijau, dan Teh Hitam dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) Fase Terbalik” dapat terlaksana dengan baik.

  Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada pihak-pihak yang telah membantu pelaksanaan penelitian ini:

  1. Ipang Djunarko, M. Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Sanata Dharma, Yogyakarta.

  2. C. M. Ratna Rini Nastiti, M. Pharm., Apt. selaku Kepala Program Studi Fakutas Farmasi Sanata Dharma yang telah memberikan ijin penelitian di dalam lingkungan fakultas farmasi.

  3. Prof. Dr. Sri Noegrohati, Apt selaku dosen pembimbing yang telah memberikan informasi, bimbingan, pengarahan, saran, dan koreksi selama pelaksanaan penelitian.

  4. Dr. Ir. Ngadiman, M. Si selaku dosen pembimbing lapangan atas bimbingan, saran, dan koreksi selama proses pengambilan sampel.

  5. Yohanes Dwiatmaka, M Si dan Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si selaku dosen penguji atas pengarahan, informasi, saran, dan koreksi selama pelaksanaan penelitian ini.

  6. Mas Bimo, Pak Parlan dan Pak Kethul yang telah banyak membantu selama penulis melakukan penelitian.

  7. Semua pihak di PT Pagilaran atas bantuannya dalam proses pengambilan sampel.

  8. Seluruh dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah memberikan ilmu selama masa kuliah.

  9. Bapak Sanjaya dan Angelia Puspita, S.Farm, Apt. yang telah banyak membantu dalam penyusunan skripsi dan sumbangan ilmu yang telah diberikan selama penulis melakukan penelitian.

  10. Gregorius da Silva, Maria Anastasia Iing Susilowati, orang tua yang selalu memahami dan memberikan motivasi sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan sampai menjadi seorang sarjana dengan pribadi yang kuat dan tegar.

  11. Fransiskus Borgias Adventus da Silva, Maria Stella Viany da Silva, dan Silvester Rosario Valentino da Silva yang selalu memberikan dorongan semangat dan doa terutama saat kejenuhan datang.

  12. Teman seperjuangan Alfonsus Heppy Rosario Dwiyoga, Adi Wirasaputra, dan Paulus Setya Dharma atas suka duka, bantuan, serta dukungannya selama ini.

  13. Sahabat-sahabat penulis Ayen, Gina, Tia, Paulina, Tiwi, Putri, Arni, Betty , Efa, Ida, Vita atas bantuan, semangat, dukungan, dan doanya.

  14. Arni, Putri, Betty, Shafiera, Wilda untuk warna-warni pengalaman yang kita buat dari masa SMF.

  15. Teman-teman kelompok antistress Vica, Seco, Dimbek, Usy, Sasa, Ike, Yuni, Elisa, Novi untuk keceriaan, semangat dan masukan selama penelitian.

  16. Teman-teman kost Alma mbak Nia, Tika, Winda, dan Venti atas keceriaannya dan yang diberikan selama ini.

  17. Teman-teman KKN kelompok 19 Anggit, Mas Kresna, Cik Lita, Fany, Sari, Blesta, Ayu, Gita untuk keceriaan, semangat dan dukungan selama ini.

  18. Teman-teman angkatan 2008 khususnya FST A terima kasih atas bantuan, kenangan, dukungan, dan semua kebersamaan saat kuliah.

  19. Kamu, dia, dan mereka yang telah memberikan doa, semangat dan warna dalam kehidupan penulis.

  Penulis menyadari masih terdapat kekurangan dalam penelitian ini. Oleh karena itu Penulis sangat mengharapkan kritik, saran, dan pendapat dari berbagai pihak guna penyempurnaan penelitian ini di masa datang. Akhir kata semoga penelitian ini dapat memberikan manfaat kepada semua pihak. Atas perhatiannya penulis ucapkan terima kasih.

  Penulis

  

DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL...................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING............................................. ii HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN..................................................................... iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA......................................................... v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA.......... vi PRAKATA...................................................................................................... vii DAFTAR ISI................................................................................................... x DAFTAR TABEL........................................................................................... xvi DAFTAR GAMBAR...................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN................................................................................... xvii

  INTISARI....................................................................................................... xx

  

ABSTRACT .................................................................................................... xxi

BAB I PENDAHULUAN...............................................................................

  1 A. Latar Belakang....................................................................................

  1 B. Rumusan Masalah...............................................................................

  3 C. Keaslian Penelitian..............................................................................

  3 D. Tujuan.................................................................................................

  4 E. Manfaat...............................................................................................

  4 1. Manfaat Teoritis...........................................................................

  4 2. Manfaat Praktis............................................................................

  4 BAB II PENELAAHAN PUSTAKA.............................................................

  5

  A. Kuersetin.............................................................................................

  5 B. Teh......................................................................................................

  6 1. Keterangan Botani........................................................................

  6 2. Deskripsi Tanaman......................................................................

  6 3. Kandungan Kimia........................................................................

  6 4. Jenis Teh......................................................................................

  7 C. Ekstraksi..............................................................................................

  14 1. Ekstrak..........................................................................................

  14 2. Ekstraksi........................................................................................

  14 3. Soxhlet..........................................................................................

  14 4. Cairan Penyari...............................................................................

  15 5. Solid Phase Extraction..................................................................

  15 D. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi......................................................

  17 1. Definisi dan Instrumentasi...........................................................

  17 2. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif..............................................

  19 E. Landasan Teori....................................................................................

  19 F. Hipotesis.............................................................................................

  21 BAB III METODE PENELITIAN.................................................................

  22 A. Jenis dan Rancangan Penelitian..........................................................

  22 B. Variabel Penelitian..............................................................................

  22 C. Definisi Operasional...........................................................................

  22 D. Bahan-bahan Penelitian......................................................................

  23 E. Alat-alat Penelitian..............................................................................

  23

  F. Tata Cara Penelitian............................................................................

  23 1. Pengambilan dan Pembuatan Sampel...........................................

  24 2. Penetapan Kadar Air dan Kadar Abu............................................

  24 3. Pembuatan Larutan Penyari..........................................................

  25 4. Ekstraksi dan clean-up..................................................................

  25 5. Pembuatan Fase Gerak.................................................................

  26 6. Pembuatan Larutan Baku Kuersetin.............................................

  26 7. Pembuatan Kurva Baku Kuersetin................................................

  27 8. Penetapan nilai % recovery...........................................................

  27 9. Penetapan Kadar Kuersetin dalam Sampel...................................

  28 G. Analisis Hasil......................................................................................

  28 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN........................................................

  30 A. Pengambilan dan Pembuatan Sampel.................................................

  31 B. Penetapan Kadar Air dan Kadar Abu..................................................

  31 C. Ekstraksi dan Hidrolisis......................................................................

  33 D. Clean-up..............................................................................................

  36 E. Pembuatan Fase Gerak........................................................................

  37 F. Analisis Kualitatif Kuersetin...............................................................

  38 G. Validasi Metode..................................................................................

  42 1. Akurasi..........................................................................................

  43 2. Linearitas dan Limit of Quantitation.............................................

  44 H. Penetapan Kadar Kuersetin dalam Daun Teh Segar, Teh Hijau, dan Teh Hitam...........................................................................................

  45

  BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.........................................................

  48 A. Kesimpulan.........................................................................................

  48 B. Saran...................................................................................................

  48 DAFTAR PUSTAKA.....................................................................................

  49 LAMPIRAN....................................................................................................

  52 BIOGRAFI PENULIS.................................................................................... 111

  

DAFTAR TABEL

  Tabel I. Jumlah flavonol teh...................................................................... 7 Tabel II. Hasil penetapan kadar abu........................................................... 32 Tabel III. Hasil penetapan kadar air............................................................. 32 Tabel IV. Data peningkatan tinggi peak pada t R Kuersetin.......................... 41 Tabel V. Rata-rata %recovery..................................................................... 43 Tabel VI. Nilai Koefisien Korelasi............................................................... 44 Tabel VII. Nilai Limit of Quantitation (LOQ)............................................... 45 Tabel VIII. Kadar kuersetin dalam daun teh segar, teh hijau dan teh hitam... 46 Tabel IX. Kesalahan random........................................................................ 47 Tabel X. Kesalahan sistematik.................................................................... 47

  

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Struktur kuersetin.....................................................................

  5 Gambar 2. Struktur flavonol......................................................................

  7 Gambar 3. Proses pelayuan........................................................................

  9 Gambar 4. Proses penggulungan...............................................................

  9 Gambar 5. Proses pengeringan..................................................................

  10 Gambar 6. Skematik prosedur SPE..........................................................

  16 Gambar 7. Peralatan KCKT......................................................................

  18 Gambar 8. Reaksi hidrolisis dengan HCL.................................................

  35 Gambar 9. Kromatogram baku kuersetin dan sampel................................

  38 Gambar 10. Kromatogram sampel yang telah dispiking..............................

  40 Gambar 11. Gugus polar dan nonpolar kuersetin........................................

  41 Gambar 12. Gugus auksokrom dan kromofor pada kuersetin.....................

  42

  

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Sertifikat analisis kuersetin..........................................

  53 Lampiran 2. Surat Determinasi.......................................................

  54 Lampiran 3. Penimbangan sampel teh segar....................................

  55 Lampiran 4. Penimbangan sampel teh hijau....................................

  56 Lampiran 5. Penimbangan sampel teh hitam.....................................

  57 Lampiran 6. Penimbangan kuersetin yang ditambahkan kedalam sampel teh segar dari awal proses.................................

  58 Lampiran 7. Penimbangan kuersetin yang ditambahkan kedalam sampel teh hijau dari awal proses................................

  58 Lampiran 8. Penimbangan kuersetin yang ditambahkan kedalam sampel teh hitam dari awal proses...............................

  59 Lampiran 9. Penimbangan kuersetin yang ditambahkan kedalam sampel teh segar dari proses clean-up...........................

  60 Lampiran 10. Penimbangan kuersetin yang ditambahkan kedalam sampel teh hijau dari proses clean-up..........................

  61 Lampiran 11. Penimbangan kuersetin yang ditambahkan kedalam sampel teh hitam dari proses clean-up..........................

  61 Lampiran 12. Data kadar air............................................................

  62 Lampiran 13. Data kadar abu teh segar..............................................

  62 Lampiran 14. Data kadar abu teh hijau..............................................

  63 Lampiran 15. Data kadar abu teh hitam.............................................

  64

  Lampiran 16. Kromatogram sampel teh segar tanpa adisi...................

  64 Lampiran 17. Kromatogram sampel teh segar dengan adisi kuersetin dari awal proses..........................................................

  67 Lampiran 18. Kromatogram sampel teh segar dengan adisi kuersetin dari proses clean-up......................................................

  71 Lampiran 19. Kromatogram sampel teh hijau tanpa adisi..........................................................................

  75 Lampiran 20. Kromatogram sampel teh hijau dengan adisi kuersetin dari awal proses.........................................................

  78 Lampiran 21. Kromatogram sampel teh hijau dengan adisi kuersetin dari proses clean-up...................................................

  82 Lampiran 22. Kromatogram sampel teh hitam tanpa adisi...................

  86 Lampiran 23. Kromatogram sampel teh hitam dengan adisi kuersetin dari awal proses...........................................................

  88 Lampiran 24. Kromatogram sampel teh hitam dengan adisi kuersetin dari proses clean-up.......................................................

  92 Lampiran 25. Data kadar kuersetin teh segar dan contoh perhitungan kadar kuersetin...........................................................

  96 Lampiran 26. Data kadar kuersetin teh hijau dan contoh perhitungan kadar kuersetin...........................................................

  97 Lampiran 27. Data kadar kuersetin teh hitam dan contoh perhitungan kadar kuersetin..........................................................

  99 Lampiran 28. Data recovery untuk keseluruhan proses penetapan

  kadar kuersetin dalam teh segar.................................. 100 Lampiran 29. Data recovery untuk keseluruhan proses penetapan kadar kuesetin dalam teh hijau.................................... 101 Lampiran 30. Data recovery untuk keseluruhan proses penetapan kadar kuesetin dalam teh hitam..................................... 102 Lampiran 31. Data recovery untuk proses clean-up sampel teh segar............................................................................ 103 Lampiran 32. Data recovery untuk proses clean-up sampel teh hijau................................................................................ 104 Lampiran 33. Data recovery untuk proses clean-up sampel teh hitam........................................................................... 105 Lampiran 34. Kurva hubungan konsentrasi vs AUC teh segar untuk keseluruhan proses......................................................... 106 Lampiran 35. Kurva hubungan konsentrasi vs AUC teh hijau untuk keseluruhan proses......................................................... 106 Lampiran 36. Kurva hubungan konsentrasi vs AUC teh hitam untuk keseluruhan proses......................................................... 107 Lampiran 37. Kurva hubungan konsentrasi vs AUC teh segar untuk proses clean-up.............................................................. 108 Lampiran 38. Kurva hubungan konsentrasi vs AUC teh hijau untuk proses clean-up............................................................. 108 Lampiran 39. Kurva hubungan konsentrasi vs AUC teh hitam untuk proses clean-up.............................................................. 109

  Lampiran 40. Random error.................................................................. 109 Lampiran 41. Systematic error.............................................................. 110

  

INTISARI

  Telah dilakukan penelitian tentang validasi metode dan penetapan kadar kuersetin total dalam daun teh segar, teh hijau dan teh hitam untuk mengetahui kadar kuersetin dalam daun teh segar, teh hijau dn teh hitam.

  Ekstraksi dilakukan dengan soxhletasi dilanjutkan proses clean-up yang dilakukan dengan solid phase extraction. Kemudian kuersetin dianalisis dengan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) Fase Terbalik. Validasi metode dilihat dari parameter % recovery dan penetapan kadar kuersetin total dilakukan berdasarkan analisis data AUC sampel dan kurva baku kuersetin.

  Dari penelitian ini diketahui kadar kuersetin dalam teh hijau dan te hitam berturut-turut yakni 1431,8863 µg/g dan 2201,1904 µg/g. Nilai % recovery keseluruhan proses untuk daun teh segar, teh hijau dan teh hitam berturut-turut yakni 119,79%, 98,57% dan 102,40% dan nilai %recovery untuk proses clean-up berturut-turut yakni 141,55%, 108,92% dan 135,78%. Berdasarkan hasil tersebut proses clean-up pada daun teh segar dan teh hitam tidak memiliki akurasi yang baik.

  Kata kunci : kuersetin, daun teh segar, teh hijau, teh hitam, KCKT fase terbalik.

  

ABSTRACT

  Has been done research on validation of analytical procedure and determination of total quercetin in fresh tea leaves, green tea and black tea to determine quercetin in the fresh tea leaves, green tea and black.

  Extraction is done by soxhletasi and clean-up process is done by solid phase extraction method. Then analyzed by of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Reversed phase. Seen from the parameter validation method is % recovery and the determination of total quercetin based on AUC data analysis of samples and standard curve of quercetin.

  Of this study green tea and black tea containing quercetin total 1431,8863 µg/g and 2201,1904 µg/g. Overall recovery process for fresh tea leaves, green tea and black tea respectively are 119,79%, 98,57% and 102,40% and recovery for clean-up respectvely are 141,55%, 108,92% and 135,78%. Based on these results the clean-up process for fresh tea leaves and black tea does not have good accuray.

  Key word : Quercetin, fresh tea leaves, green tea, black tea, HPLC reversed phase

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Teh merupakan salah satu minuman yang dekat dengan kehidupan kita

  sehari-hari, yang sering dikonsumsi sebagai minuman penyegaran. Tidak hanya sebagai minuman kesegaran tetapi teh telah lama diyakini khasiatnya bagi kesehatan tubuh karena kandungan antioksidan di dalamnya. Ada banyak jenis teh yang diperdagangkan seperti teh wangi, teh hitam dan teh hijau.

  Berdasarkan pengolahannya, teh dibedakan menjadi teh hijau dan teh hitam. Teh hijau dibuat dengan cara non-fermentasi. Pada proses pengolahan tersebut terjadi inaktivasi enzim oksidase atau fenolase yang ada dalam pucuk daun teh segar, sehingga oksidasi enzimatik terhadap kandungan fenol dapat dicegah. Sebaliknya teh hitam dibuat dengan cara fermentasi dengan memanfaatkan terjadinya oksidasi enzimatik terhadap kandungan polifenol teh.

  Di dalam teh terdapat banyak kandungan senyawa aktif yang memiliki manfaat positif bagi masyarakat. Zat bioaktif yang utama terdapat dalam teh, adalahgolongan flavonoid. Berdasarkan struktur dan konformasi cincin C molekul dasarnya, flavonoid dapat digolongkan menjadi 6 kelas, yaitu flavon, flavanon, isoflavon, flavonol, flavanol dan antosianin. Adapun jenis flavonoid utamayang ditemukan pada teh adalah flavanol dan flavonol. (Hartoyo, 2003). Flavonol dalam daun teh terutama kuersetin. Kuersetin dalam tanaman terdapat dalam berbagai bentuk glikosida dan dapat pula bentuk aglikonnya (Erlund, 2002). Kuersetin memiliki banyak manfaat bagi kesehatan antara lain sebagai antioksidan, antikanker, antiinflamasi, antiplatelet, dan antihistamin. Menurut Hartoyo (cit., Septianingrum, dkk 2009) terdapat perbedaan kadar fenol pada teh hijau dengan teh hitam. Perbedaan ini disebabkan karena terdapat perbedaan dalam proses pengolahannya. Karena perbedaan inilah maka dilakukan penetapan kadar kuersetin dalam teh hijau, dan teh hitam untuk mengetahui kadar kuersetin dalam daun teh segar, teh hijau dan teh hitam serta untuk mengetahui apakah proses pengeringan memiliki pengaruh terhadap kadar kuersetin.

  Saat ini, KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel (Gandjar dan Rohman, 2007). KCKT memiliki kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang sensitif sehingga KCKT menjadi suatu sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). Metode KCKT bersifat selektif dan sensitif sehingga cocok digunakan dalam analisis kuantitatif beberapa senyawa secara simultan (Khopkar, 1990). Kelebihan metode KCKT inilah yang dimanfaatkan oleh peneliti untuk memisahkan kuersetin dari senyawa-senyawa yang memiliki kepolaran yang mirip dengan kuersetin di dalam daun teh, teh hijau dan teh hitam.

B. Rumusan Masalah

  Permasalahan yang dapat dirumuskan berdasarkan latar belakang tersebut yakni berapakah kadar kuersetin dalam daun teh segar, teh hijau dan teh hitam?

C. Keaslian Penelitian

  Berbagai penelitian terhadap kuersetin telah banyak dilakukan, mulai dari proses ekstraksi, isolasi, aktivitas farmakologisnya. Penelitian dengan judul “HPLC–UV And GC–MS Characterization Of The Flavonol Aglycons Quercetin,

  

Kaempferol, And Myricetin In Tomato Pastes And Other Tomato-Based Products ”

  pernah dilakukan untuk mengidentifikasi dan mengkuantifikasi lima flavonoid dalam tomat (Tokusoglu, 2003). Penetapan kadar flavonoid total terhitung sebagai kuersetin pernah dilakukan dengan menggunakan metode kolometri dalam teh hijau dan teh hitam [merk X] (Pertiwi, 2006). Namun penetapan kadar kuersetin aglikon dalam daun teh segar, teh hijau, dan teh hitam dengan menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik belum pernah dilakukan sebelumnya.

  D. Tujuan Mengetahui kadar kuersetin dalam daun teh segar, teh hijau, dan teh hitam.

  E. Manfaat

  1. Manfaat teoritis

  Memberikan informasi mengenai kandungan kuersetin yang memiliki banyak khasiat dalam tanaman yang telah mengalami pengolahan seperti proses pengeringan, proses fermentasi.

  2. Manfaat praktis

  Memberikan informasi mengenai proses penetapan kadar kuersetin dengan menggunakan metode yang valid.

  

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA A. Kuersetin Gambar 1. Struktur kuersetin Kuersetin merupakan senyawa berwarna kuning dan menjadi anhydrat

  pada suhu 95 - 97° C. Kuersetin larut dalam asam asetat glasial, dalam larutan

aqueous alkaline dan praktis tidak larut dalam air (The Merck Index, 1989).

  Kuersetin memiliki gugus fungsi karbonil dan hidroksil sehingga dapat membentuk kompleks dengan beberapa ion logam (Makasheva, 2005).Kuersetin memiliki banyak manfaat bagi kesehatan manusia antara lain antioksidan, antiinflamasi, antiplatelet, antikanker, antivirus, dan antihistamin (Paulsen, 2003).

  Banyak tanaman yang mengandung kuersetin antara lain brokoli, wortel, bawang merah, bawang putih, paprika, buncis, bunga kol, dan teh (Miean dan Mohamed, 2000). Kuersetin dalam tanaman terdapat dalam berbagai bentuk glikosida dan dapat pula bentuk aglikonya (Erlund, 2002). Flavonoid yang secara umum terdapat sebagai glikosida, jika dihidrolisis dengan asam dalam suasana panas akan menghasilkan suatu aglikon dan sebagian kecil gula (Cuppett, 1998).

  B. Teh

  1. Keterangan Botani

  Menurut Steenis (2002), tanaman teh termasuk dalam famili theaceae dengan spesies Camellia sinensis O.K.

  2. DeskripsiTanaman :

  Tanaman teh berbentuk pohon. Tingginya biasanya mencapai belasan meter. Namun, tanaman teh diperkebunan selalu dipangkas untuk memudahkan pemetikan sehingga tingginya 70 cm. Mahkota tanaman teh berbentuk jorong atau agak bulat telur terbalik. Tepi daun bergerigi, daun tunggal dan letaknya hampir berseling. Tulang daun menyirip, permukaan atas daun muda berbulu halus sedangkan permukaan bawahnya bulunya hanya sedikit. Permukaan daun tua halus dan tidak berbulu lagi. Bunga teh berwarna putih dengan serbuk sari berwarna kuning. Tanaman teh mengalami pertumbuhan tunas yang silih berganti.

  Tunas tumbuh pada ketiak atau bekas ketiak daun. Tunas yang tumbuh kemudian diikuti dengan pembentukan daun. Tunas baru pada teh memiliki daun kuncup (Nazaruddin dan paimin, 1993).

  3. Kandungan Kimia

  Daun teh memiliki banyak kandungan senyawa kimia yang merupakan zat bioaktif. Zat bioaktif yang ada dalam teh, terutama merupakan golongan flavonoid. Adapun flavonoid yang ditemukan pada teh terutama berupa flavanol dan flavonol (Hartoyo, 2003). Flavonol utama yang ada di dalam daun teh adalah kuersetin, kaempferol dan myrycetin. Flavonol ini, terutama terdapat dalam bentuk glikosidanya (berikatan dengan molekul gula) dan sedikit dalam bentuk aglikonnya.

  Tabel I. Jumlah Flavonol Teh (Hartoyo, 2003)

  Jumlah (g/kg) Jenis Flavonol

  Teh Hijau Teh Hitam Myricetin 0,83 – 1,59 0,24 – 0,52 Quercetin 1,79 – 4,05 1,04 – 3,03

  Kaempferol 1,56 – 3,31 1,72 – 2,31

  

Gambar 2. Gambar struktur flavonol

  Selain flavonoid, daun teh juga mengandung alkaloid purin (metil santin): kafein, teobromin, teofilin; katekin : epikatekin, epigaloketekin, epigalokatekin galat, teaflavin, tearubigen; derivat asam kafeat: asam klorogenat dan teogalin; minyak atsiri : linalool (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 2010).

4. Jenis teh

  Ada tiga tipe utama pengolahan teh, yaitu teh hijau, teh oolong, dan teh hitam. Secara umum teh hijau merupakan teh yang tidak difermentasi, teh oolong merupakan teh yang mengalami fermentasi sebagian dan teh hitam merupakan teh yang mengalami fermentasi penuh (Panuju, 2009). a. Teh Hijau.Daun teh di dikeringkan dari daun Camellia sinensis. Teh hijau dibuat dengan cara menginaktivasi enzim oksidase atau fenolase yang ada dalam pucuk daun teh segar, dengan cara pemanasan atau penguapan menggunakan uap panas, sehingga oksidasi enzimatik dapat dicegah. Aktivitas antioksidan teh hijau enam kali lebih besar dibanding teh hitam (Gruenwald dkk, 2007).

  Proses pengolahan teh hijau di kebun PT. PAGILARAN, Samigaluh, Kulonprogo terdiri dari proses pemetikan, pelayuan, penggulungan, pengeringan, sortasi dan pengepakan.

  1. Pemetikan Pemetikan adalah pemungutan hasil pucuk tanaman teh yang memenuhi syarat-syarat pengolahan.Pengambilan pucuk dilakukan dengan sistem p+2 yakni tumbuhnya dua helai daun setelah peko. Proses pemetikan ini dilakukan jika tanaman sudah berumur 18 bulan karena pada umur ini dianggap kandungan dalam daun teh sudah optimal.

  2. Pelayuan Pucuk teh yang telah dipetik selanjutnya dilakukan proses pelayuan. Daun teh yang telah dipetik dilayukan dengan melewatkan daun tersebut pada silinder panas sekitar 5-8 menit dengan suhu 90-100° C. Tujuan dilakukannya proses pelayuan yakni untuk menginaktivasi enzim polifenol oksidase yang ada dalam daun teh itu sendiri, sehingga dapat dicegah terjadinya proses oksidasi serta menurunkan kandungan air dalam pucuk menjadi 60-70% (Syah, 2006).

  Gambar 3. Proses pelayuan

  3. Penggulungan Pucuk teh yang telah melalui proses pelayuan selanjutnya dilakukan penggulungan dengan mesin roller press selama 10-14 menit. Lamanya proses penggulungan ini tergantung dari jenis pucuknya. Proses penggulungan ini dilakukan untuk memecah sel-sel daun sehingga cairan di dalam sel keluar di permukaan daun sehingga seduhan teh yang dihasilkan memiliki rasa yang lebih sepet (Syah, 2006).

  Gambar 4. Proses penggulungan

  4. Pengeringan Proses ini dilakukan dengan menggunakan alat repeat roll dengan suhu 70- 80° C selama 2,5 – 3 jam. Proses pengeringan dilakukan untuk mengurangi kadar air dalam pucuk teh yang sudah digulung hingga kadar air tersisa kurang lebih 2%. Selain itu proses pengeringan juga dilakukan untuk memperkuat bentuk dan aroma dari teh hijau.

  Gambar 5. Proses pengeringan

  5. Sortasi Teh yang berasal dari proses pengeringan masih bercampur baik bentuk maupun ukurannya. Selain itu teh juga masih mengandung debu, tangkai daun, dan kotoran lain yang akan sangat berpengaruh pada mutu teh nantinya, sehingga diperlukan proses sortasi. Proses sortasi dilakukan secara manual.

  Proses ini dilakukan dengan memisahkan daun teh yang rusak dan tangkai daunnya.

  6. Pengemasan dan pengepakan Teh Hijau yang telah mengalami sortasi selanjutnya di lakukan proses pengemasan. b. Teh Hitam. Teh hitam merupakan teh yang berasal dari pucuk daun teh segar yang dibiarkan sebelum digulung, kemudian daun-daun tersebut dibiarkan selama beberapa jam sebelum dipanaskan dan dikeringkan. Selama itu, enzim yang terdapat pada daun-daun teh akan mengkatalisis reaksi oksidasi senyawa-senyawa yang ada dalam teh sehingga menghasilkan warna, rasa, dan aroma (Hartoyo, 2003).Selama proses oksidasi, adanya enzim pada teh mengubah beberapa polifenol yang memiliki aktivitas terapetik menjadi senyawa yang kurang aktif (Gruenwald, 2007).

  Proses pengolahan teh hitam di kebun PT. PAGILARAN, Batang terdiri dari proses pemetikan, pelayuan, penggulungan atau penggilingan , fermentasi, pengeringan, sortasi dan pengepakan.

  1. Pemetikan Pemetikan adalah pemungutan hasil pucuk tanaman teh yang memenuhi syarat-syarat pengolahan (Arifin, 2009).

  2. Pelayuan Daun-daun teh yang telah dipetik dari kebun segera dibawa ke pabrik dan kemudian dimulai proses pelayuan yang dilakukan dalam withering truck selama 10 – 18 jam. Hal ini dilakukan untuk mengurangi kadar air dari daun teh serta untuk membantu proses pengeringan agar lebih cepat, serta membuat daun teh agar lebih lentur dan mudah digulung, sehingga memudahkan proses penggulungan. Pada proses pelayuan, selama 1 – 2 jam pertama daun teh yang telah dihamparkan dalam withering truck dialiri dengan udara dingin (suhu 24° C) dan selama 10 – 18 jam berikutnya dialiri dengan udara panas

  (suhu 28° C). Setiap 2 – 3 jam sekali tumpukan daun teh diaduk agar pelayuan berlangsung sempurna pada setiap petikan daun teh (Haryanto, 2012).

  3. Penggulungan dan penggilingan Proses penggulungan dilakukan dengan menggunakan mesin open top roller selama ± 40 menit. Tujuan proses penggulungan ini adalah untuk meremas, menggulung dan merobek sel sehingga cairan didalam sel keluar ke permukaan daun sehingga air menempel di permukaan. Daun teh yang telah mengalami tahap sampai tahap penggulungan berwarna hitam kecoklatan.Kelembapan di ruangan penggulungan ini harus diatur dengan menggunakan humidifier untuk menghambat proses oksidasi, sehingga proses oksidasi terjadi dalam waktu yang tepat. Kelembapan diatur sebesar 90 - 95° dan suhu ruangan 20 - 22° C.Dari hasil penggulungan, selanjutnya dimasukkan kedalam rotary roll breaker untuk proses pengayakan. Dari proses ini dihasilkan teh hitam dengan kualitas no. 1. Serbuk yang masih kasar dimasukkan kembali ke dalam rotorvane untuk dipotong dengan menggunakan pisau tumpul sehingga cairan yang masih ada dalam sel keluar ke permukaan.

  4. Fermentasi Proses fermentasi terjadi di ruang oksidasi.Tujuan proses oksidasi ini yakni untuk menjaga kestabilan dan membentuk rasa asli dari teh hitam. Warna akhir produk yang dihasilkan yakni hitam.

  Ruang oksidasi diatur sedemikian karena pada tahap ini merupakan tahap pengendali mutu teh hitam yang dihasilkan. Teh hitam didiamkan dalam ruangan oksidasi selama minimal 2 jam, maksimal 3 jam. Dilakukan selama 2-3 jam karena jika kurang dari 2 jam ataupun lebih dari 3 jam dapat terjadi kerusakan pada teh hitam.

  5. Pengeringan Tujuan dari proses pengeringan ini adalah untuk mengurangi kadar air hingga kadar air dalam teh hitam kurang lebih 3%. Proses pengeringan ini dilakukan selama 22 – 23 menit. Suhu selama proses pengeringan yakni 100 °C pada waktu dimasukkan ke dalam mesin pengering dan 50 °C pada waktu keluar dari mesin pengering. Penurunan suhu ini dilakukan agar teh hitam yang dihasilkan tidak gosong, sehingga hasilnya menjadi tidak baik.

  6. Sortasi kering Proses sortasi ini dilakukan berdasarkan warna, kasar halusnya serbuk teh hitam yang dihasilkan, berat jenis.

  7. Pengepakan Setelah selesai proses sortasi, dilanjutkan ke tahap pengepakan.

  Pada proses pembuatan teh hitam, glikosida kuersetin tidak mengalami oksidasi, hal ini terjadi karena ketidakmampuan kuersetin untuk mengalami oksidasi yang mungkin disebabkan karena kelarutan bentuk aglikonnya yang sangat rendah dalam air (Gruenwald, 2007).

C. Ekstraksi

  1. Ekstrak

  Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian sehingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995).

  2. Ekstraksi

  Ekstraksi adalah proses pemisahan satu atau lebih komponen dari suatu campuran homogen menggunakan pelarut cair (solven) sebagai separating agent (Harborne, 1987).Pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat dapat dipermudah dengan mengetahui terlebih dahulu zat aktif yang dikandung simplisia (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1986).

3. Soxhlet

  Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Penyarian dengan soxhletasi menggunakan larutan yang dipanaskan terus menerus sehingga zat aktif yang tidak tahan pemanasan kurang cocok (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 2000).

  4. Cairan Penyari

  Senyawa fenolik umumnya diekstraksi menggunakan air, metanol, etanol aseton, etil asetat maupun kombinasi dari pelarut-pelarut tersebut. Keberadaannya yang tertempel dengan gula cenderung untuk menyebabkan senyawa fenolik lebih larut dalam air, dan dengan demikian kombinasi pelarut diatas dengan air cocok untuk glikosida. Sebaliknya, aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon, dan flavonol cenderung untuk lebih larut dalam pelarut non-aquaeous (Escribano dan Santos, 2010).

  5. Solid-Phase Extraction Solid Phase Extraction merupakan alternatif metode yang cepat, mudah,

  dan ekonomis karena secara signifikan mngurangi volume pelarut organik yang dibutuhkan. SPE digunakan untuk mengekstrak senyawa dari cairan matriks dan dapat juga digunakan sebagai metode pemurnian / fraksinasi(Escribano dan Santos, 2010).

  Keunggulan SPE dibandingkan dengan ekstraksi cair-cair adalah:

  a. Proses ekstraksi lebih sempurna

  b. Pemisahan analit dari pengganggu yang mungkin ada menjadi lebih efisien

  c. Mengurangi pelarut organik yang digunakan

  d. Fraksi analit yang diperoleh lebih mudah dikumpulkan (Gandjar dan Rohman, 2009).

  Ada 4 tahap dalam prosedur SPE, yaitu:

  a. Pengkondisian. Cartridge (Penjerap) dialiri dengan pelarut sampel untuk membasahi permukaan penjerap dan untuk menciptakan nilai pH yang sama, sehingga perubahan-perubahan kimia yang tidak diharapkan ketika sampel dimasukkan dapat dihindari.

  b. Retensi (tertahannya) sampel.Larutan sampel yang dilewatkan ke cartridge baik untuk menahan analit yang dituju, sementara komponen lain terelusi atau untuk menahan komponen yang tidak diharapkan sementara analit yang dituju terelusi.

  c. Pembilasan. Tahap ini penting untuk menghilangkan seluruh komponen yang tidak tertahan oleh penjerap selama tahap retensi.

  d. Elusi. Tahap ini merupakan tahap akhir untuk mengambil analit yang dituju jika analit tersebut tertahan pada penjerap (Rohman, 2009).

  Gambar 6. Skematik prosedur SPE D. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi 1. Definisi dan Instrumentasi

  Menurut Hendayana (2006), Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) adalah teknik pemisahan campuran senyawa berdasarkan interaksi dengan fase diam di bawah aliran fase gerak, dimana fase gerak dialirkan dengan bantuan tekanan menuju kolom secara cepat dan dideteksi dengan detektor yang sesuai.

  Ada dua fase dalam kromatografi yaitu fase normal dan fase terbalik. Fase normal apabila fase diam lebih polar dari fase gerak, sedangkan fase terbalik yaitu apabila fase diam lebih non polar dari fase geraknya (Munson, 1991).

  Menurut Harris (2011), komposisi pokok dari instrumentasi KCKT yakni kolom, sistem penghantar pelarut, katup penginjeksian sampel, detektor, dan perekam atau komputer untuk menampilkan hasil pemisahan.

  a. Kolom.Kolom merupakan bagian KCKT yangmana terdapat fase diam untuk berlangsungnya proses pemisahan solut/analit (Rohman, 2009).

  Oktadesil silika (ODS atau C

  18 ) merupakan fase diam yang paling

  banyak digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran yang rendah, sedang, maupun tinggi. Oktil atau rantai alkil yang lebih pendek lagi lebih sesuai untuk solut yang polar (Rohman, 2009).

  Kolom kromatografi dapat dipanaskan untuk mengurangi kekentalan dari pelarut. Kekentalan pelarut yang berkurang ini mengakibatkan tekanan menurun atau mempercepat aliran (Harris, 2011).

  b. Wadah fase gerak. Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing (penghilangan gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama di pompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis. Adanya pengotor dalam reagen dapat menyebabkan gangguan pada sistem kromatografi. Adanya partikel yang kecil dapat berkumpul dalam kolom atau dalam tabung yang sempit, sehingga dapat mengakibatkan suatu kekosongan pada kolom atau tabung tersebut. Karenanya, fase gerak sebelum digunakan harus disaring terlebih dahulu untuk menghindari partikel-partikel kecil ini (Gandjar dan Rohman, 2007).