Uji Aktivitas Antibakteri Hasil Hidrolisis Enzimatis Minyak Kelapa Murni Terhadap Salmonella typhi dan Salmonella typhimurium Secara In-vitro dan In-vivo
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI HASIL HIDROLISIS ENZIMATIS
MINYAK KELAPA MURNI TERHADAP SALMONELLA TYPHI DAN
SALMONELLA TYPHIMURIUM SECARA IN-VITRO DAN IN-VIVO
Abstrak
Salmonellosis merupakan salah satu penyakit zoonosis yang disebabkan
oleh bakteri patogen Salmonella melalui kontaminasi silang makanan (foodborne
disease). Pengobatan Salmonellosis menggunakan antibiotik selain mengoreksi
dehidrasi dan gangguan elektrolit.Minyak kelapa murni (Virgin Coconut Oil,
VCO) mempunyai potensi medis seperti sifat antibakteri, antivirus, dan antijamur
dari kandungan asam lemak rantai sedang (Medium Chain Fatty Acid, MCFA),
khususnya asam laurat (C12:0) atau dalam bentuk monogliserida (monolaurin
atau ML) yang terdapat didalamnya. Tujuan penelitian ini adalah untukmenguji
aktivitas antibakteri hasil hidrolisis enzimatis VCO (VCOH) yang menghasilkan
kombinasiasam laurat dan monolaurin terhadap Salmonella secara in-vitro dan invivo yang diharapkan memberikan efek sinergis.
Sampel VCO yang digunakan adalahPalem Mustika VCO-Virgin Coconut
Oilyang diproduksi oleh Siti Nurbaya, Sumatera Barat. VCO dihidrolisis dengan
enzim lipase (LIPOZYME® TL IM) selama 18 jam dengan interval waktu
pengamatan nilai bilangan asam setiap 2 jam. VCOH yang mempunyai nilai
bilangan asam yang optimal, selanjutnya diuji aktivitas antibakterinya terhadap
Salmonella secara in-vitrodilakukan dengan metode difusi agar menggunakan
pencadang kertas (6 mm, Oxoid) dengan mengamati zona hambat. Zona hambat
yang paling baik, selanjutnya digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri
VCOH terhadap Salmonella secara in-vivo pada mencit galur mus musculus yang
diinfeksikan dengan S. typhimurium, diamati tanda-tanda klinis dan dihitung
jumlah koloni dalam feses mencit serta perubahan histopatologi jaringan hati dan
limpa.Aktivitas antibakteri bahan uji dibandingkan dengan kontrol positif, negatif
dan pembanding kloramfenikol. Hasil pengujian dianalisis statistik dengan
analisis variansi (ANAVA; α0,05) dan dilanjutkan dengan uji Post HocDuncan
untuk melihat perbedaan nilai rata-rata signifikan antar kelompok perlakuan.
Nilai bilangan asam yang konstan diperoleh pada masa inkubasi setelah 14
jam. Hasil hidrolisis enzimatis VCO menunjukkan bahwa waktu hidrolisis optimal
adalah 14 jam. Hasil pengujian aktivitas antibakteri VCOH terhadap S. typhi
(ATCC 00786) dan S. typhimurium (ATCC 14028) secara in-vitro menunjukkan
adanya daya hambat dengan peningkatan konsentrasi. Konsentrasi 1000 μl/ml
menunjukkan daya hambat paling baik 13,900±0,3033 mm terhadap S. typhi dan
14,333±0,6623 mm terhadap S. typhimurium. Secara in-vivo, mencit sebelumnya
diinfeksi S.typhimurium kemudiandiberi bahan uji.Mencit yang dipajankan
dengan bahan uji menunjukkan penurunan jumlah koloni bakteri dalam feses
mencit. Tanda klinis dan kerusakan histologis jarang dijumpai pada mencit yang
diberi bahan uji, sedangkankelompok yang tidak diobati dan kelompok
pembanding menunjukkan adanya tanda-tanda klinis diare, berat badan menurun
dan kerusakan histopatologis pada hati dan limpa. Dapat disimpulkan bahwa hasil
hidrolisis enzimatis VCO memiliki potensi sebagai anti-Salmonella .
Kata kunci: antibakteri, minyak kelapa murni (VCO), enzimatis,Salmonella
viii
Universitas Sumatera Utara
IN-VITRO AND IN-VIVO ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF
ENZYMATIC HYDROLYSIS OF VIRGIN COCONUT OILAGAINST
SALMONELLA TYPHI AND SALMONELLA TYPHIMURIUM
Abstract
Salmonellosis is a zoonotic disease caused by pathogenic bacteria
Salmonella which the route of infection is usually through cross-contamination of
food (foodborne disease). Treatment of Salmonellosis commonly used antibiotics
in addition to correcting dehydration and electrolyte disturbances. Virgin Coconut
Oil (VCO) has the medical potential such as antibacterial, antiviral, and antifungal
activity of its medium chain fatty acids (MCFAs), particularly lauric acid (C12: 0)
in its monoglycerides form (monolaurin or ML). The aim of this study was to
examine the in-vitro and in-vivo antibacterial activity of the enzymatic hydrolysis
of VCO (VCOH)which generates a combination of lauric acid and monolaurin
against Salmonella which are expected to provide a synergistic effect.
The sample of VCOthatin this study wasPalem Mustika VCO-Virgin
Coconut Oil, produced by Siti Nurbaya, West Sumatra. VCO was hydrolyzed by
enzyme lipase (Lipozyme® TL IM) for 18 hours with interval observation time of
free fatty acids value every 2 hours.VCOH which has the optimum free fatty acid
value, then investigated the in-vitro antibacterial activity of VCOH against
Salmonellaby diffusion agar method using the paper discs (6 mm, Oxoid)by
observing the zone of inhibition.The best inhibitory zone, then used for
investigated in-vivo antibacterial activity of VCOHagainst Salmonella was
examined in a S. typhimurium infection mice mus musculus model, clinical signs
were observed and counted the number of colonies S. typhimurium from feces and
histopathological changes in liver and spleen tissue.Antibacterial activity of
VCOHwas compared with the positive control, negative control and comparison of
chloramphenicol. Data were analyzed statistically with analysis of variance
(ANOVA; α 0,05), followed by Duncan's Post Hoc test to see the difference in the
average value significantly between treatment groups.
The fatty acids value was obtained constant after incubation for 14 hours.
The result of enzymatic hydrolysis VCO show that the optimum hydrolysis time
was 14 hours. The in-vitroantibacterial activity of VCOHagainst S.typhi (ATCC
00786) andS.typhimurium (ATCC 14028) was found to have inhibition with
increased concentration. The concentration of1000μl/ml showed the best
inhibition of the 13.900 ± 0.3033 mm to S.typhi and 14.333 ± 0.6623 mm to
S.typhimurium. In in-vivo, mice were initially infected with S. typhimurium and
then withVCOH. The feces of miceshowed a decrease in the number of colonies S.
typhimurium in the feces. Clinical signs and histological damage were rarely
observed in treated mice, whereas the untreated group and the comparison group
showed clinical signs of diarrhea, weight loss and histological damage in the liver
and spleen. It can be concluded that the results of this study indicate that the
enzymatic hydrolysis of VCO has potential as an anti-Salmonella .
Key word: antibacterial, Virgin Coconut Oil (VCO), enzymatic,Salmonella
ix
Universitas Sumatera Utara
MINYAK KELAPA MURNI TERHADAP SALMONELLA TYPHI DAN
SALMONELLA TYPHIMURIUM SECARA IN-VITRO DAN IN-VIVO
Abstrak
Salmonellosis merupakan salah satu penyakit zoonosis yang disebabkan
oleh bakteri patogen Salmonella melalui kontaminasi silang makanan (foodborne
disease). Pengobatan Salmonellosis menggunakan antibiotik selain mengoreksi
dehidrasi dan gangguan elektrolit.Minyak kelapa murni (Virgin Coconut Oil,
VCO) mempunyai potensi medis seperti sifat antibakteri, antivirus, dan antijamur
dari kandungan asam lemak rantai sedang (Medium Chain Fatty Acid, MCFA),
khususnya asam laurat (C12:0) atau dalam bentuk monogliserida (monolaurin
atau ML) yang terdapat didalamnya. Tujuan penelitian ini adalah untukmenguji
aktivitas antibakteri hasil hidrolisis enzimatis VCO (VCOH) yang menghasilkan
kombinasiasam laurat dan monolaurin terhadap Salmonella secara in-vitro dan invivo yang diharapkan memberikan efek sinergis.
Sampel VCO yang digunakan adalahPalem Mustika VCO-Virgin Coconut
Oilyang diproduksi oleh Siti Nurbaya, Sumatera Barat. VCO dihidrolisis dengan
enzim lipase (LIPOZYME® TL IM) selama 18 jam dengan interval waktu
pengamatan nilai bilangan asam setiap 2 jam. VCOH yang mempunyai nilai
bilangan asam yang optimal, selanjutnya diuji aktivitas antibakterinya terhadap
Salmonella secara in-vitrodilakukan dengan metode difusi agar menggunakan
pencadang kertas (6 mm, Oxoid) dengan mengamati zona hambat. Zona hambat
yang paling baik, selanjutnya digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri
VCOH terhadap Salmonella secara in-vivo pada mencit galur mus musculus yang
diinfeksikan dengan S. typhimurium, diamati tanda-tanda klinis dan dihitung
jumlah koloni dalam feses mencit serta perubahan histopatologi jaringan hati dan
limpa.Aktivitas antibakteri bahan uji dibandingkan dengan kontrol positif, negatif
dan pembanding kloramfenikol. Hasil pengujian dianalisis statistik dengan
analisis variansi (ANAVA; α0,05) dan dilanjutkan dengan uji Post HocDuncan
untuk melihat perbedaan nilai rata-rata signifikan antar kelompok perlakuan.
Nilai bilangan asam yang konstan diperoleh pada masa inkubasi setelah 14
jam. Hasil hidrolisis enzimatis VCO menunjukkan bahwa waktu hidrolisis optimal
adalah 14 jam. Hasil pengujian aktivitas antibakteri VCOH terhadap S. typhi
(ATCC 00786) dan S. typhimurium (ATCC 14028) secara in-vitro menunjukkan
adanya daya hambat dengan peningkatan konsentrasi. Konsentrasi 1000 μl/ml
menunjukkan daya hambat paling baik 13,900±0,3033 mm terhadap S. typhi dan
14,333±0,6623 mm terhadap S. typhimurium. Secara in-vivo, mencit sebelumnya
diinfeksi S.typhimurium kemudiandiberi bahan uji.Mencit yang dipajankan
dengan bahan uji menunjukkan penurunan jumlah koloni bakteri dalam feses
mencit. Tanda klinis dan kerusakan histologis jarang dijumpai pada mencit yang
diberi bahan uji, sedangkankelompok yang tidak diobati dan kelompok
pembanding menunjukkan adanya tanda-tanda klinis diare, berat badan menurun
dan kerusakan histopatologis pada hati dan limpa. Dapat disimpulkan bahwa hasil
hidrolisis enzimatis VCO memiliki potensi sebagai anti-Salmonella .
Kata kunci: antibakteri, minyak kelapa murni (VCO), enzimatis,Salmonella
viii
Universitas Sumatera Utara
IN-VITRO AND IN-VIVO ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF
ENZYMATIC HYDROLYSIS OF VIRGIN COCONUT OILAGAINST
SALMONELLA TYPHI AND SALMONELLA TYPHIMURIUM
Abstract
Salmonellosis is a zoonotic disease caused by pathogenic bacteria
Salmonella which the route of infection is usually through cross-contamination of
food (foodborne disease). Treatment of Salmonellosis commonly used antibiotics
in addition to correcting dehydration and electrolyte disturbances. Virgin Coconut
Oil (VCO) has the medical potential such as antibacterial, antiviral, and antifungal
activity of its medium chain fatty acids (MCFAs), particularly lauric acid (C12: 0)
in its monoglycerides form (monolaurin or ML). The aim of this study was to
examine the in-vitro and in-vivo antibacterial activity of the enzymatic hydrolysis
of VCO (VCOH)which generates a combination of lauric acid and monolaurin
against Salmonella which are expected to provide a synergistic effect.
The sample of VCOthatin this study wasPalem Mustika VCO-Virgin
Coconut Oil, produced by Siti Nurbaya, West Sumatra. VCO was hydrolyzed by
enzyme lipase (Lipozyme® TL IM) for 18 hours with interval observation time of
free fatty acids value every 2 hours.VCOH which has the optimum free fatty acid
value, then investigated the in-vitro antibacterial activity of VCOH against
Salmonellaby diffusion agar method using the paper discs (6 mm, Oxoid)by
observing the zone of inhibition.The best inhibitory zone, then used for
investigated in-vivo antibacterial activity of VCOHagainst Salmonella was
examined in a S. typhimurium infection mice mus musculus model, clinical signs
were observed and counted the number of colonies S. typhimurium from feces and
histopathological changes in liver and spleen tissue.Antibacterial activity of
VCOHwas compared with the positive control, negative control and comparison of
chloramphenicol. Data were analyzed statistically with analysis of variance
(ANOVA; α 0,05), followed by Duncan's Post Hoc test to see the difference in the
average value significantly between treatment groups.
The fatty acids value was obtained constant after incubation for 14 hours.
The result of enzymatic hydrolysis VCO show that the optimum hydrolysis time
was 14 hours. The in-vitroantibacterial activity of VCOHagainst S.typhi (ATCC
00786) andS.typhimurium (ATCC 14028) was found to have inhibition with
increased concentration. The concentration of1000μl/ml showed the best
inhibition of the 13.900 ± 0.3033 mm to S.typhi and 14.333 ± 0.6623 mm to
S.typhimurium. In in-vivo, mice were initially infected with S. typhimurium and
then withVCOH. The feces of miceshowed a decrease in the number of colonies S.
typhimurium in the feces. Clinical signs and histological damage were rarely
observed in treated mice, whereas the untreated group and the comparison group
showed clinical signs of diarrhea, weight loss and histological damage in the liver
and spleen. It can be concluded that the results of this study indicate that the
enzymatic hydrolysis of VCO has potential as an anti-Salmonella .
Key word: antibacterial, Virgin Coconut Oil (VCO), enzymatic,Salmonella
ix
Universitas Sumatera Utara