Pola Kromatografi Dan Uji Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Dan Fraksi Kulit Buah Petai (Parkia Speciosa Hassk.) Sebagai Antidiare

  

Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan

  

Lampiran 2. Gambar tumbuhan dan buah petai (Parkia speciosa Hassk.)

  Gambar tumbuhan petai Gambar buah petai

  

Lampiran 3. Gambar simplisia dan serbuk simplisia kulit buah petai

  Gambar simplisia kulit buah petai Gambar serbuk simplisia kulit buah petai

  Lampiran 4. Bagan penelitian 1.

Pembuatan serbuk simplisia, karakterisasi simplisia dan skrining fitokimia

  Dicuci dari pengotor sampai bersih Ditiriskan Ditimbang berat basah Dirajang dan dikeringkan Ditimbang Dihaluskan dengan blender

  Kulit buah petai Kulit buah petai

  Simplisia Serbuk simplisia

  Skrining fitokimia Karakterisasi simplisisa

• Penetapan kadar air
• Pemeriksaan alkaloid
• Penetapan kadar sari larut air
• Pemeriksaan glikosida
• Penetapan kadar sari larut etanol
• Pemeriksaan glikosida antrakuinon
• Pemeriksaan saponin
• Penetapan kadar abu total
• Pemeriksaan flavonoid
• Penetapan kadar abu tidak larut asam
• Pemeriksaan tanin
• Pemeriksaan triterpenoid/steroid

  Lampiran 4. (Lanjutan) 2.

Pembuatan ekstrak etanol, fraksi n-heksana, dan fraksi etilasetat kulit buah petai (Parkia speciosa Hassk.)

  Serbuk simplisia Ditambahkan etanol 80% hingga serbuk terendam Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk Disaring

  Ampas Ditambahkan etanol 80% Dibiarkan selama 2 hari Disaring

  Maserat I Maserat II Digabung

  Maserat Diuapkan dengan rotary evaporator Dikeringkan di freeze dryer

  Ekstrak etanol kental Dipraksinasi dengan Dipraksinasi dengan

  n -heksana etilasetat

  Diuapkan dengan Diuapkan dengan

  rotary evaporator rotary evaporator

  Dikeringkan di freeze Dikeringkan di freeze

  dryer dryer

  Fraksi n-heksana Fraksi etilasetat

  Lampiran 4. (Lanjutan) 3.

  Bagan uji aktivitas antibakteri Biakan murni

  Diambil 1 ose dengan jarum ose steril Ditanam pada media nutrient agar miring

  O

  Diinkubasi pada suhu 35-37 C selama 18-24 jam Stok kultur

  Diambil 1 ose Disuspensikan ke dalam 10 ml NaCl 0,9% Dihomogenkan hingga diperoleh kekeruhan dengan transmitan 25% menggunakan alat spektrofotometer panjang gelombang 580 nm

  Suspensi bakteri Dipipet 0,1 ml ke dalam cawan petri Dituang 20 ml media nutrient agar Dihomogenkan, biarkan hingga memadat

  Media padat Diletakkan cakram kertas yang telah direndam dengan larutan uji

  O

  Diinkubasi pada suhu 35-37 C selama 18-24 jam Diukur diameter daerah hambat disekitar cakram kertas dengan menggunakan jangka sorong

  Hasil

  

Lampiran 5. Perhitungan hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia kulit buah

  3

  20 x

  100

  0,1790 g 5, 0009 g x

  Kadar sari larut air I =

  No Berat sampel (g) Berat sari (g) Kadar sari (%) 1 5,0009 0,1790 17,89 2 5,0013 0,1619 16,18 3 5,0011 0,1672 16,72

  20 x 100%

  100

  berat sari (g) berat sampel (g) x

  Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam air Kadar sari larut air =

  = 7,99% 2.

  7,99% + 7,99% + 7,99%

  petai 1. Perhitungan penetapan kadar air

  x 100% = 7,99% Kadar air rata-rata =

  0,4 ml 5, 0005 g

  x 100% = 7,99% Kadar air III =

  0,4 ml 5, 0008 g

  x 100% = 7,99% Kadar air II =

  0,4 ml 5, 0009 g

  2 5,0008 0,4 7,99 3 5,0005 0,4 7,99 Kadar air I =

  x 100% No Berat sampel (g) Volume air (ml) Kadar air (%) 1 5,0009 0,4 7,99

  volume air (ml) berat sampel (g)

  Kadar air simplisia =

  100% = 17,89%

  Lampiran 5. (Lanjutan) 0,1619 g 100

  Kadar sari larut air II = x 100% = 16,18%

  x 5, 0013 g

  20 0,1672 g 100

  Kadar sari larut air III = 100% = 16,72%

  x x 5, 0011 g

  20 17,89% + 16,18% + 16,72%

  Kadar sari larut air rata-rata = = 16,93%

  3 3.

  Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam etanol

  berat sari (g) 100

  Kadar sari larut etanol 100%

  = x x berat sampel (g)

  20 No Berat sampel (g) Berat sari (g) Kadar sari (%)

  1 5,0009 0,1871 18,71 2 5,0006 0,1845 18,45 3 5,0006 0,1853 18,53

  0,1871 g 100

  Kadar sari larut etanol I = 100% = 18,71 %

  x x 5, 0009 g

  20 0,1845g 100

  Kadar sari larut etanol II = x 100% = 18,45%

  x 5, 0006 g

  20 0,1853 g 100

  Kadar sari larut etanol III = 100% = 18,53%

  x x 5, 0006 g

  20 18,71% + 18,45% + 18,53%

  Kadar sari larut etanol rata-rata = = 18,56%

  3 4.

  Perhitungan penetapan kadar abu total serbuk simplisia kulit buah petai

  berat abu (g)

  Kadar abu total = x 100%

  berat sampel (g)

  Lampiran 5. (Lanjutan)

  berat abu (g) berat sampel (g)

  3

  0,29% + 0,25% + 0,23%

  x 100% = 0,23% Kadar abu tidak larut asam rata-rata =

  0,0047 g 2,0008 g

  x 100% = 0,25% Kadar abu total III =

  0,0051 g 2,0005 g

  x 100% = 0,29% Kadar abu total II =

  0,0059 g 2,0004 g

  2 2,0005 0,0051 0,25 3 2,0008 0,0047 0,23 Kadar abu total I =

  x 100% No Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu (%) 1 2,0004 0,0059 0,29

  Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam Kadar abu tidak larut asam =

  No Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu (%) 1 2,0004 0,0721 3,60 2 2,0005 0,0753 3,76 3 2,0008 0,0759 3,79

  = 3,72% 5.

  3

  3,60% + 3,76% + 3,79%

  x 100% = 3,79% Kadar abu total rata-rata =

  0,0759 g 2,0008 g

  x 100% = 3,76% Kadar abu total III =

  0,0753 2,0005 g

  x 100% = 3,60% Kadar abu total II =

  0,0721 2,0004 g

  Kadar abu total I =

  = 0,26%

  

Lampiran 6. Perhitungan hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak etanol kulit

buah petai

  Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam air Kadar sari larut air =

  100

  0,2025 g 5, 0005 g x

  Kadar sari larut air II =

  20 x 100% = 20,94%

  100

  0,2095 g 5, 0011 g x

  2 5,0005 0,2025 20,24 3 5,0005 0,1937 19,87 Kadar sari larut air I =

  x 100% No Berat sampel (g) Berat sari (g) Kadar sari (%) 1 5,0011 0,2095 20,94

  20

  100

  berat sari (g) berat sampel (g) x

  = 9,29% 2.

  Kadar air simplisia =

  3

  9,99% + 9,99% + 7,99%

  Kadar air rata-rata =

  x 100% = 7,99%

  0,4 ml 5, 0024 g

  x 100% = 9,99% Kadar air III =

  0,5 ml 5, 0022 g

  x 100% = 9,99% Kadar air II =

  0,5 ml 5, 0035 g

  2 5,0022 0,5 9,99 3 5,0009 0,4 7,99 Kadar air I =

  x 100% No Berat sampel (g) Volume air (ml) Kadar air (%) 1 5,0035 0,5 9,99

  volume air (ml) berat sampel (g)

  20 x 100% = 20,24%

  Lampiran 6. (Lanjutan)

  100

  19,48 % Kadar sari larut etanol II =

  0,1971g 5, 0153 g x

  100

  20 x 100% = 19,65%

  Kadar sari larut etanol III =

  0,1936 g 5, 0113 g x

  20 x

  100%

  100% = 19,32% Kadar sari larut etanol rata-rata =

  19,48% + 19,65% + 19,32%

  3

  = 19,48% 4.

  Perhitungan penetapan kadar abu total ekstrak etanol kulit buah petai Kadar abu total =

  berat abu (g) berat sampel (g)

  =

  20 x

  Kadar sari larut air III =

  = 20,35% 3.

  0,1987 g 5, 0005 g x

  100

  20 x 100% = 19,87%

  Kadar sari larut air rata-rata =

  20,94% + 20,24% + 19,87%

  3

  Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam etanol Kadar sari larut etanol =

  100

  berat sari (g) berat sampel (g) x

  100

  20 x 100%

  No Berat sampel (g) Berat sari (g) Kadar sari (%) 1 5,0121 0,1953 19,48 2 5,0153 0,1971 19,65 3 5,0113 0,1936 19,32

  Kadar sari larut etanol I =

  0,1953 g 5, 0121 g x

  x 100%

  Lampiran 6. (Lanjutan)

  berat abu (g) berat sampel (g)

  3

  0,58% + 0,67% + 0,68%

  x 100% = 0,68% Kadar abu tidak larut asam rata-rata=

  0,0139 g 2,035 g

  x 100% = 0,67% Kadar abu tidak larut asam III =

  0,0135 g 2,027 g

  x 100% = 0,58% Kadar abu tidak larut asam II =

  0,0118 g 2,015 g

  2 2,027 0,0135 0,67 3 2,035 0,0139 0,68 Kadar abu tidak larut asam I =

  x 100% No Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu(%) 1 2,015 0,0118 0,58

  Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam Kadar abu tidak larut asam =

  No Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu(%) 1 2,015 0,1053 5,22 2 2,027 0,1037 5,12 3 2,035 0,1056 5,19

  = 5,18% 5.

  3

  5,22% + 5,12% + 5,19%

  x 100% = 5,19% Kadar abu total rata-rata =

  0,1056 g 2,035 g

  x 100% = 5,12% Kadar abu total III =

  0,1037 2,027 g

  x 100% = 5,22% Kadar abu total II =

  0,1053 2,015 g

  Kadar abu total I =

  = 0,64%

  Lampiran 7. Gambar hasil kromatogram ekstrak etanol secara KLT BP TP

  (60:40) (70:30) (80:20) (90:10) Gambar hasil kromatogram dengan fase gerak n-heksana:etilasetat

  Keterangan: Fase diam = plat pra lapis silika gel 60 F 254 , fase gerak = n-heksana : etilasetat, penampak noda = Liebermann-Burchard, H=hijau, K=kuning, M.M=merah muda, U=ungu, U.M=ungu muda, BP=batas pengembang, TP= titik penotolan. ^{M.M U K H U.M H U U M.M M.M H H K H U M.M}

  Lampiran 7. (Lanjutan) BP TP

  (60:40) (70:30) (80:20) (90:10) Gambar hasil kromatogram dengan fase gerak kloroform:metanol

  Keterangan: Fase diam = plat pra lapis silika gel 60 F 254 , fase gerak = kloroform : metanol, penampak noda = FeCl

  3 , B.K=biru kehitaman, B.M=biru muda, BP=batas pengembang, TP=titik penotolan. ^{H B.M B.K B.K B.K B.M B.M B.M B.K B.K B.K B.K B.K B.K B.K}

  Lampiran 8. Gambar hasil kromatogram fraksi n-heksana secara KLT BP TP

  (60:40) (70:30) (80:20) (90:10) Keterangan: Fase diam = plat pra lapis silika gel 60 F 254 , fase gerak = n-heksana : etilasetat, penampak noda = Liebermann-Burchard, B=biru, H=hijau, K=kuning, M=merah, M.M=merah muda, U=ungu, BP=batas pengembang, TP=titik penotolan. ^{M.M M U H H K K U M.M M H H H H M.M B B K M U M.M H K B M.M M U H H B K B M.M H H}

  Lampiran 9. Gambar hasil kromatogram fraksi etilasetat secara KLT BP TP

  (60:40) (70:30) (80:20) (90:10) Keterangan: Fase diam = plat pra lapis silika gel 60 F 254 , fase gerak = kloroform : metanol, penampak noda = FeCl

  3 , BK=biru kehitaman, BM=biru muda, H=hijau, BP=batas pengembang, TP=titik penotolan. ^{B.M B.K B.K B.M B.K B.K B.K B.M B.K B.M H B.M B.M B.K B.K B.M B.M H}

  Lampiran 10. Gambar hasil kromatogram fraksi etilasetat secara KKt

  Penampak bercak AlCl

  3 FeCl

  3 K _K ^B.K

  Gambar hasil kromatogram dengan fase gerak HCl 1% Keterangan : Fraksi etilasetat kulit buah petai dengan fase gerak HCl 1%, fase diam kertas saring Whatmann, B.K= biru kehitaman, K=kuning.

  Lampiran 10. (Lanjutan)

  Penampak bercak AlCl

  3 FeCl

  3 _{K K B.K} B.K _{K K} B.K

  Gambar hasil kromatogram dengan fase gerak asam asetat 5% Keterangan : Fraksi etilasetat kulit buah petai dengan fase gerak asam asetat 5%, fase diam kertas saring Whatmann, B.K=biru kehitaman, K=kuning.

  Lampiran 10. (Lanjutan)

  Penampak bercak AlCl NH FeCl

  3

  3

  3 _B.K K _{K B.K B.K B.K B.K} B.K B.K

  Gambar hasil kromatogram dengan fase gerak BAW (4:1:5) Keterangan : Fraksi etilasetat kulit buah petai dengan fase gerak BAW (4:1:5), fase diam kertas saring Whatmann, B.K=biru kehitaman, K=kuning.

  Lampiran 11. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah petai 1.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah petai terhadap bakteri Bacillus cereus

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 17,0 17,1 17,1 17,07 400 16,5 16,5 16,3 16,43 300 16,0 15,7 16,0 15,90 200 15,8 15,4 15,7 15,63 100 14,7 14,5 14,5 14,57

  75 13,4 13,0 13,1 13,17 50 13,0 12,6 12,8 12,80 25 12,0 11,7 12,1 11,93

  12,5 10,1 10,4 10,3 10,26 Blanko - - - - 2.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah petai terhadap bakteri Escherichia coli

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 16,0 15,9 16,1 16,00 400 15,3 15,1 15,3 15,23 300 14,8 14,6 14,7 14,70 200 14,3 14,0 14,1 14,13 100 13,5 13,2 13,4 13,37

  75 13,0 12,8 12,6 12,80 50 12,5 12,1 12,3 12,30 25 11,0 10,8 10,9 10,90

  12,5 9,4 9,6 9,2 9,40 Blanko - - - -

  Lampiran 11. (Lanjutan) 3.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah petai terhadap bakteri Salmonella typhi

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 15,9 15,7 15,8 15,80 400 15,4 15,2 15,3 15,30 300 15,0 14,7 15,0 14,90 200 14,8 14,6 14,8 14,73 100 13,9 13,8 13,5 13,73

  75 13,4 13,4 13,2 13,33 50 13,0 12,8 12,9 12,90 25 12,5 12,4 12,4 12,43

  12,5 8,9 9,0 9,1 9,00 Blanko - - - -

  Lampiran 12. Hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana kulit buah petai 1.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana kulit buah petai terhadap bakteri Bacillus cereus

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 12,7 12,4 12,6 12,57 400 11,3 11,6 11,8 11,57 300 10,5 10,8 10,4 10,57 200 9,7 9,5 9,3 9,50 100 9,0 8,9 9,0 8,97

  75 8,4 8,1 8,0 8,17 50 6,5 6,7 6,4 6,53 25 - - - -

  12,5 - - - - Blanko - - - - 2.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana kulit buah petai terhadap bakteri Escherichia coli

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 12,5 12,3 12,3 12,37 400 10,5 10,7 10,2 10,47 300 10,0 10,1 9,6 9,90 200 9,6 9,6 9,3 9,50 100 8,6 8,4 8,3 8,43

  75 8,3 8,1 8,0 8,13 50 - - - - 25 - - - -

  12,5 - - - - Blanko - - - -

  Lampiran 12. (Lanjutan) 3.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri n-heksana kulit buah petai terhadap bakteri Salmonella typhi

  Diameter daerah hambat (mm) Konsentrasi

  (mg/ml)

  I II

  III Rata-rata 500 12,0 12,2 12,1 12,10 400 11,7 11,5 11,4 11,53 300 10,9 10,5 10,7 10,70 200 10,1 9,9 10,1 10,03 100 9,5 9,3 9,4 9,40

  75 9,0 8,8 9,0 8,90 50 7,1 7,2 7,4 7,23

  25

• 12,5 Blanko - - - -

  Lampiran 13. Hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat kulit buah petai 1.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat kulit buah petai terhadap bakteri Bacillus cereus

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 18,4 18,4 18,6 18,47 400 17,3 17,5 17,5 17,43 300 17,0 17,1 17,3 17,13 200 16,4 16,3 16,5 16,40 100 15,2 15,1 15,2 15,17

  75 15,0 14,9 15,0 14,97 50 14,0 14,2 14,0 14,07 25 12,7 12,7 12,9 12,77

  12,5 10,4 10,1 10,2 10,23 Blanko - - - - 2.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat kulit buah petai terhadap bakteri Escherichia coli

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 17,6 17,4 17,6 17,53 400 17,3 17,1 17,2 17,20 300 16,5 16,5 16,4 16,47 200 16,0 16,1 16,0 16,03 100 14,2 14,4 14,4 14,33

  75 12,8 12,6 12,9 12,77 50 12,5 12,2 12,5 12,40 25 11,3 11,1 11,1 11,17

  12,5 9,4 9,3 9,1 9,27 Blanko - - - -

  Lampiran 13. (Lanjutan) 3.

Tabel hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat kulit buah petai terhadap bakteri Salmonella typhi

  Konsentrasi (mg/ml)

  Diameter daerah hambat (mm)

  I II

  III Rata-rata 500 17,9 17,8 17,6 17,67 400 17,2 16,9 17,1 17,01 300 16,8 16,4 16,8 16,67 200 16,4 16,1 16,2 16,23 100 15 15,2 15 15,07 75 13,6 13,9 13,6 13,70

  50 12,7 12,4 12,5 12,53 25 11,3 11,0 11,5 11,27 12,5 9,8 9,3 9,6 9,57

  Blanko - - - -

  Lampiran 14. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah

  petai Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Bacillus cereus

  Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  Lampiran 14. (Lanjutan)

  Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  Lampiran 14. (Lanjutan)

  Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Salmonella typhi Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  

Lampiran 15. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana kulit buah

  petai Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Bacillus cereus

  Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  Lampiran 15. (Lanjutan)

  Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  Lampiran 15. (Lanjutan)

  Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Salmonella typhi Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  

Lampiran 16. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat kulit buah

  petai Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Bacillus cereus

  Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  Lampiran 16. (Lanjutan)

  Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25, 9= 12,5 mg/ml dan 10= blanko.

  Lampiran 16. (Lanjutan)

  Gambar hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Salmonella typhi Keterangan : Konsentrasi berturut-turut 1= 500, 2= 400, 3= 300,4= 200, 5= 100, 6= 75, 7= 50, 8= 25,9= 12,5 mg/ml dan 10=blanko.