Institutional Repository | Satya Wacana Christian University: Analisis Protein dan Identifikasi Asam Amino pada Tepung Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai (Glycine Max (L))
19
Lampiran 1. Skema Kerja Penelitian
Preparasi Sampel
Pembuatan Gaplek
Penentuan Kadar
Protein Tepung
Gaplek Terfortifikasi
dengan Metode
Biuret
Pembuatan Tepung
Gaplek Terfortifikasi
Identifikasi Asam
Amino Tepung
Gaplek Terfortifikasi
dengan Kromatografi
Lapis Tipis (KLT)
Identifikasi Asam
Amino Tepung
Gaplek Terfortifikasi
dengan Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi
(KCKT)
20
Lampiran 2. Pembuatan Kurva Standar untuk Pengukuran Kadar Protein
Metode Biuret
BSA (ml)
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
Akuades (ml)
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
Biuret (ml)
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
Konsentrasi (mg/ml)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
A 550 nm
Kurva Standar Biuret
0.500
0.450
0.400
0.350
0.300
0.250
0.200
0.150
0.100
0.050
0.000
y = 0.048x + 0.005
R² = 0.997
0
2
4
6
Konsentrasi (mg/ ml)
8
10
A550nm
0
0,059
0,109
0,139
0,199
0,259
0,279
0,339
0,399
0,449
0,459
21
Lampiran 3. Kadar Protein Terlarut Tepung Gaplek Terfortifikasi (TGT) dan
Tepung Gaplek Kontrol (TGK) pada lama waktu fermentasi 0,20,
dan 40 jam
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
1
GF0
GF20
GF40
A 550 nm
0,028
0,029
0,040
0,033
0,038
0,030
0,037
0,038
0,039
0,224
0,237
0,237
0,261
0,270
0,271
0,289
0,297
0,297
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,0323
0,5409
2,17
0,0337
0,5696
2,28
0,0380
0,6578
2,63
0,2660
5,329
21,32
0,2673
5,3565
21,43
0,2943
5,9098
22,64
22
Lampiran 3. Lanjutan
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
2
GF0
GF20
GF40
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
3
GF0
GF20
GF40
A 550 nm
0,026
0,037
0,031
0,035
0,040
0,026
0,033
0,041
0,031
0,196
0,256
0,253
0,260
0,255
0,267
0,283
0,284
0,283
A 550 nm
0,027
0,039
0,028
0,047
0,032
0,045
0,045
0,042
0,043
0,235
0,237
0,235
0,262
0,266
0,244
0,282
0,284
0,277
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,0313
0,5212
2,08
0,0337
0,5690
2,28
0,0350
0,5693
2,39
0,2350
4,6947
18,78
0,2607
6,4706
25,88
0,2837
6,8873
27,55
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,0313
0,5212
2,08
0,0413
0,7261
2,90
0,0433
0,7671
3,07
0,2357
4,709
18,84
0,2573
5,1523
20,61
0,2810
5,6373
22,55
23
Lampiran 3. Lanjutan
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
4
GF0
GF20
GF40
A 550 nm
0,030
0,035
0,034
0,035
0,038
0,038
0,035
0,040
0,042
0,223
0,229
0,246
0,245
0,262
0,276
0,273
0,279
0,288
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,033
0,5553
2,22
0,037
0,6373
2,55
0,039
0,6783
2,71
0,2321
4,6469
18,59
0,2610
5,2275
20,91
0,280
5,618
22,47
Contoh Perhitungan Kadar Protein :
Sampel G0 (ulangan 1)
Absorbansi = 0,2660
y = 0,0488x + 0,0059
0,2660 = 0,0488 + 0,0059
,
,
x=
= 5,329
,
Kadar Protein (%) =
,
/
x 20 x 100% = 21,32 %
24
Lampiran 4. Analisis Sidik Ragam Kadar Protein Terlarut Tepung Gaplek Kontrol (TGK) dan Tepung Gaplek
Terfortifikasi (TGT)
% Protein Terlarut
Ulangan
G0
G20
G40
GF0
GF20
GF40
Tu
Xu
du
Wu
I
2,16
2,28
2,63
18,59
21,43
23,64
70,73
11,79
0,18
533,0082
II
2,08
2,28
2,39
18,78
20,88
22,77
69,18
11,53
-0,08
522,3214
III
2,08
2,09
3,07
18,84
20,61
22,55
69,24
11,54
-0,07
513,4574
IV
2,22
2,55
2,71
18,59
20,91
22,47
69,45
11,58
-0,03
511,1891
Tp
8,54
9,20
10,8
74,8
83,83
91,43
278,60
Xp
2,14
2,3
2,7
18,7
20,96
22,86
dp
-9,47
-9,31
-8,91
7,09
9,35
11,25
SD
0,0721
0,1892
0,2816
0,1294
0,3426
0,5308
SE
0,1374
0,3606
0,53667
0,2465
0,6531
1,023
Keterangan : G0 = Tepung Gaplek Kontrol 0 jam, G20 = Tepung Gaplek Kontrol 20 jam, G40 = Tepung Gaplek Kontrol 40 jam, GF0= Tepung
Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 0 jam, GF20= Tepung Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 20 jam, GF40= Tepung Gaplek
Terfortifikasi Tepung Kedelai 40 jam.
Tu = Total Ulangan, Tp = Total Perlakuan, Xu = Purata Ulangan, Xp = Purata Perlakuan, X00 = purata
SD = Simpangan Baku, SE = Standar Eror
25
Lanjutan Lampiran 4.
W1 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,16)(-9,47) + (2,28)(-9,31) + …..(18,59)(7,09) = 533,0082
W2 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,08)(-9,47) + (2,28)(-9,31) + …..(18,78)(7,09) = 522,3214
W3 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,08)(-9,47) + (2,09)(-9,31) + …..(18,84)(7,09) = 513,4574
W4 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,22)(-9,47) + (2,55)(-9,31) + …..(18,59)(7,09) = 511,1891
N = (W1)(du1) + (W2)(du2) + …..(W4)(du4)
= (533,0082)(0,18) + (522,3214)(-0,08) +….. (511,1891)(-0,03) = 2,87
∑ du2 = (0,18)2 + (-0,08)2 + …..(-0,03)2 = 0,0446
∑ dG20 = (-9,47)2 + (-9,31)2 + …..(7,09)2 = 519,9982
FK = ∑
( ..) ^
, ^
=
= 3234,08
JK total = ((2,16)2 + (2,28)2 + (2,63)2 + …..(22,47)2 – FK )= 2081,59
JK ulangan = ∑
∑(
- FK
,
=
JK Perlakuan =
)^
∑(
– 3234,08 = 0,27
)^
=
- FK
,
– 3234,08 = 2079,96
JK Galad Acak = JK Total – JK Ulangan – JK Perlakuan
= 2081,59 – 0,27 – 2079,96
= 1,36
JK Non Additivitas =
^
= 0,35
26
Lanjutan Lampiran 4.
D = (∑du2)(∑dG20) = (0,0446)(519,9982) = 23,19
KV =
SX =
√
x 100% = √
.
.
=
,
x 100% = 2,67%
,
,
= 0,151
Tabel Q = 4.59
BNJ 5% = SX x Tabel Q = 0,693
Dasira Uji Additivitas
Sumber Ragam
Ulangan
Perlakuan
Galad Acak
Non Additivitas
Sisa
Db
JK
KT
F hitung
3
0,27
5 2079,96
15
1,36
0,0906
1
0,35
0,35
4,85
14
1,01
0,072
F Tabel
5%
1%
4,60
8,86
F Tabel 5% < F Hit < F Tabel 1% Data aditif
Daftar Sidik Ragam
Sumber Ragam
Ulangan
Perlakuan
Galad Acak
Total
Jk
Db
3
0,27
5 2079,96
15
1,36
23
KT
0,09
415,99
0,0906
F Hitung
0,989
4571,32**
Fhit perlakuan > F tabel 5% dan 1%
Kesimpulan : Antar perlakuan terdapat beda amat sangat nyata
F Tabel
5%
1%
3,29
5,42
2,90
4,56
27
Lanjutan Lampiran 4.
Uji BNJ 5%
Kadar Protein tiap Perlakuan
G0
G20
G40
GF0
GF20
GF40
Purata (%)
2,14
2,30
2,70
18,70
20,96
22,86
±
±
±
±
±
±
±
SE
0,1374
0,3606
0,5367
0,2465
20,96
22,86
W = 0,3551
(a)
(a)
(a)
(b)
(c)
(d)
Keterangan : G0 = Tepung Gaplek Kontrol 0 jam, G20 = Tepung Gaplek Kontrol 20 jam, G40 = Tepung
Gaplek Kontrol 40 jam, GF0= Tepung Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 0 jam, GF20=
Tepung Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 20 jam, GF40= Tepung Gaplek Terfortifikasi
Tepung Kedelai 40 jam.
28
Lampiran 5. Kadar Protein Terlarut Kedelai, Gaplek, Ragi, dan Tepung Terigu
“X”
Sampel
Ulangan
1
2
Kedelai
3
4
Sampel
Ulangan
1
2
Gaplek
3
4
A 550 nm
0,459
0,440
0,402
0,457
0,437
0,408
0,438
0,423
0,440
0,450
0,399
0,454
A 550 nm
0,028
0,031
0,027
0,033
0,020
0,018
0,023
0,024
0,026
0,021
0,014
0,014
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein
(%)
0,4337
8,7657
35,06
0,4340
8,7725
35,09
0,4337
8,7657
35,06
0,4343
8,7794
35,12
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein
(%)
0,0287
0,4665
1,87
0,0237
0,3641
1,46
0,0243
0,4028
1,61
0,0163
0,2361
0,94
29
Lampiran 5. Lanjutan
Sampel
Ulangan
A 550 nm
0,050
0,047
0,051
0,050
0,052
0,050
0,051
0,050
0,051
0,052
0,053
0,054
0,272
0,240
0,247
1
2
Ragi
3
4
Tepung Terigu X
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein
(%)
0,0493
0,9236
3,69
0,0507
0,9514
3,80
0,0507
0,9514
3,80
0,053
0,9652
3,86
0,253
5,0635
20,25
Contoh Perhitungan Kadar Protein :
Kedelai (ulangan 1)
Absorbansi = 0,4337
y = 0,0488x + 0,0059
0,4337 = 0,0488 + 0,0059
,
,
x=
= 8,766
,
Kadar Protein (%) =
,
/
x 20 x 100% = 35,06%
30
Lampiran 5. Lanjutan
Pengulangan
Kadar Protein Sampel
Kedelai
35,06
35,09
35,06
35,12
35,0825
0,0287
0,0547
1
2
3
4
X
SD
SE
Ragi
3,8056
3,8056
3,8608
3,6944
2,7781
0,0715
0,1364
Gaplek
1,87
1,46
1,61
0,94
1,47
0,3918
0,7468
Keterangan : X = Purata, SD = Simpangan Baku, SE = Standar Eror
Ʃ(x-X)2 Kedelai = (35,06-35,0825)2 + ( 35,09-35,0825)2 + ... + (35,12-35,0825)2
= 2,475 x 10-3
SDKedelai = √
Ʃ(
)
,
=
= 0,0287
∝
,
SEKedelai = t x √ = 3,812 x
√
= 0,0547
Ʃ(x-X)2 Ragi = (3,8056-3,7781)2 + (3,8056-3,7781)2 + ... + (3,6944-3,7781)2
= 0,01535
SDRagi = √
Ʃ(
)
∝
SERagi = t x
√
,
=
= 0,0715
= 3,812 x
,
= 0,1364
√
Ʃ(x-X)2 Gaplek = (1,87-1,47)2 + (1,46-1,47)2 + ... + (0,94-1,47)2
= 0,4606
SDGaplek = √
Ʃ(
∝
)
=
,
SEGaplek = t x √ = 3,812 x
= 0,3918
,
√
= 0,7468
31
Lampiran 6. Kromatogram Asam Amino Standar 31,25 ppm, 50 ppm, 62,5 ppm,
125 ppm, 500 ppm, Gaplek , G40 , GF0 , GF20 dan GF40.
Kromatogram Standar Asam Amino 31,25 ppm
Keterangan : Standar dianalisa pada fase diam kolom Licrospher ® 100 RP 18 (125 x 4 mm,5 µm ) dan
fase gerak adalah Eluent A : metanol : 50 mM natrium asetat : Teterahidrofuran (THF) dan Eluent B :65
% metanol. Suhu analisa adalah 27 0C dengan kecepatan alir 1 ml/menit serta dideteksi dengan detektor
fluorosen pada panjang gelombang 360 dan 460 nm.
Kromatogram Asam Amino 50 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
32
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Asam Amino 62,50 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Asam Amino 125 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
33
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Asam Amino 500 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Sampel Gaplek
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
34
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Sampel G40
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Sampel GF0
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
35
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Sampel GF20
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Sampel GF40
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
36
Lampiran 7. Perbandingan Waktu Retensi Sampel Gaplek, G40, GF0, GF20, dan GF40 terhadap Asam Amino Standar
TR ASAM Amino Standar
No
Gaplek
1
A.A
Standar
Asp
31,25
ppm
2,990
50,00
ppm
4,600
62,50
ppm
2,947
125,00
ppm
3,104
500,00
ppm
4,411
TR
1,155
2
Glu
5,462
8,545
5,399
5,399
8,208
3,011
3
Ser
13,741
14,968
13,851
13,059
14,551
4
His
16,208
16,239
16,243
15,117
5
Glis
18,633
19,653
18,670
6
Arg
21,341
21,378
7
Ala
23,571
8
Tyr
9
G40
A.A
GF0
TR
A.A
2,974
Asp
3,060
Asp
5,369
Glu
5,412
Glu
6,200
16,036
6,308
-
17,630
19,199
13,823
21,274
20,128
21,089
24,675
23,658
22,750
26,450
27,611
26,589
Met
33,997
35,483
10
Val
34,544
11
Phe
12
GF20
GF40
TR
A.A
TR
A.A
Asp
2,986
Asp
3,088
Asp
5,495
Glu
5,417
Glu
4,300
-
-
13,898
Ser
13,819
Ser
5,449
Glu
13,780
Ser
16,308
His
16,151
His
13,799
Ser
Ser
17,127
-
18,678
Glis
17,032
-
16,054
His
18,628
Glis
18,570
Glis
19,333
-
18,644
Glis
17,066
-
24,244
19,162
-
19,200
-
21,362
Arg
19,250
-
18,562
Glis
25,625
26,957
21,317
Arg
21,176
Arg
23,729
Ala
21,367
Arg
21,067
Arg
34,048
33,600
35,249
23,639
Ala
23,730
Ala
26,744
Tyr
23,653
Ala
23,295
Ala
36,118
34,562
34,074
35,850
25,117
Tyr
26,577
Tyr
34,975
Val
26,538
Tyr
25,200
-
36,408
37,896
36,487
36,078
37,688
33,272
-
33,400
-
36,689
Fenil
34,717
Val
26,052
Tyr
Isoleu
38,473
40,095
38,543
38,029
39,889
34,323
Val
34,592
Met
38,972
-
36,596
Fenil
33,989
Met
13
Leu
39,487
41,064
39,526
39,376
40,833
36,137
-
36,434
Fenil
39,899
Iso
38,732
-
35,878
val
14
Lys
44,674
45,827
44,658
44,821
45,847
38,150
39,200
Iso
Leu
38,615
39,647
44,869
Iso
Leu
Lys
39,739
44,820
Iso
Lys
38,083
39,100
44,489
Iso
Leu
Lys
37
Lampiran 8. Kurva Standar Asam Amino
Konsentrasi
(ppm)
aspartat
Glutamat
Serin
Histidin
Glisin
Arginin
Alanin
Tirosin
Metionin
Valin
Fenilalanin
Isoleusin
Leusin
Lisin
Luas Area A. A standar
31,25
50
62,5
320242
351719
456382
145504
535435
227964
437850
218236
221106
514635
262720
3242491
329264
90520
868262
964257
1242292
430979
1400397
652997
1255455
624291
779201
1151315
618965
935390
785774
213418
847677
989579
1224194
482543
1524497
636830
1198261
602562
552077
1250623
654050
827016
810776
235718
Aspartat
y = 13115x + 48593
R² = 0.998
6100000
500
6600678
8807475
12414626
4501609
16594865
7059803
11711212
6455774
8058306
9968835
5964575
8245041
7474275
2293374
Glutamat
y = 17794x - 85400
R² = 0.999
8100000
7100000
6100000
5100000
4100000
4100000
3100000
2100000
2100000
1100000
100000
100000
0
100 200 300 400 500 600
0
200
400
600
38
Lampiran 8. Lanjutan
Serin
Histidin
12400000
4100000
10400000
8400000
3100000
6400000
2100000
4400000
y = 25308x - 23860
R² = 0.999
2400000
400000
y = 9182.x - 87719
R² = 0.999
1100000
100000
0
500
1000
0
200
400
600
Arginin
Glisin
7200000
15500000
y = 34152x - 48250
R² = 0.999
y = 14495x - 18838
R² = 0.999
6200000
5200000
10500000
4200000
3200000
5500000
2200000
1200000
500000
200000
0
200
400
600
0
4200000
6400000
3200000
4400000
2200000
2400000
1200000
400000
200000
200
400
y = 13214x - 15140
R² = 0.999
5200000
8400000
0
600
6200000
y = 23780x - 17634
R² = 0.999
10400000
400
Tirosin
Alanin
12400000
200
600
0
200
400
600
39
4
Lampiran 8. Lanjutan
M etionin
Valin
8200000
10500000
y = 16665x - 27942
R² = 0.997
6200000
y = 19915x + 16314
R² = 0.999
8500000
6500000
4200000
4500000
2200000
2500000
500000
200000
0
200
400
600
0
Fenilalanin
5200000
400
600
Isoleusin
y = 12064x - 66524
R² = 0.999
4200000
200
y = 14241x + 1E+06
R² = 0.862
6700000
4700000
3200000
2200000
2700000
1200000
200000
700000
0
200
400
600
0
200
400
600
Lisin
Leusin
2480000
7250000
y = 15116x - 82745
R² = 0.999
6250000
y = 4675.x - 44188
R² = 0.999
2080000
5250000
1680000
4250000
1280000
3250000
880000
2250000
480000
1250000
250000
80000
0
200
400
600
0
200
400
600
58
40
Lampiran 9. Konsentrasi Asam Amino pada Sampel Gaplek, G40, GF0, GF20, dan
GF40.
No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Gaplek
AA
Kons
(ppm)
Asp*
Glu
5,692
Ser
9,732
Glis
14,345
Arg
13,205
Ala
8,130
Tyr
12,350
Val*
Iso*
Leu
5,752
G40
AA
Asp
Glu
Ser
Glis
Arg
Ala
Tyr
Met
Fenil
Iso*
Leu
Lys
Kons
(ppm)
8,809
14,726
13,219
17,155
16,359
13,988
14,905
22,562
9,855
12,512
14,375
GF0
AA
Kons
(ppm)
Asp 119,050
Glu 149,241
Ser
44,483
His
21,670
Glis 34,914
Arg
51,745
Ala
39,449
Tyr
29,120
Val
29,795
Fenil 43,318
Iso*
Lys
63,129
Ket : * menandakan bahwa asam amino tidak terkuantifikasi
GF20
AA
Kons
(ppm)
Asp 103,323
Glu 126,641
Ser
41,908
His
27,666
Glis 35,444
Arg
57,246
Ala
53,503
Tyr
34,747
Val
28,244
Fenil 40,109
Iso*
Lys
74,029
GF40
AA
Kons
(ppm)
Asp 272,151
Glu 288,071
Ser 93,477
His 61,381
Glis 129,596
Arg 104,325
Ala 147,923
Tyr 68,287
Met 108,152
val
47,082
Iso
14,957
Leu 148,557
Lys 151,747
Lampiran 1. Skema Kerja Penelitian
Preparasi Sampel
Pembuatan Gaplek
Penentuan Kadar
Protein Tepung
Gaplek Terfortifikasi
dengan Metode
Biuret
Pembuatan Tepung
Gaplek Terfortifikasi
Identifikasi Asam
Amino Tepung
Gaplek Terfortifikasi
dengan Kromatografi
Lapis Tipis (KLT)
Identifikasi Asam
Amino Tepung
Gaplek Terfortifikasi
dengan Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi
(KCKT)
20
Lampiran 2. Pembuatan Kurva Standar untuk Pengukuran Kadar Protein
Metode Biuret
BSA (ml)
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
Akuades (ml)
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
Biuret (ml)
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
Konsentrasi (mg/ml)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
A 550 nm
Kurva Standar Biuret
0.500
0.450
0.400
0.350
0.300
0.250
0.200
0.150
0.100
0.050
0.000
y = 0.048x + 0.005
R² = 0.997
0
2
4
6
Konsentrasi (mg/ ml)
8
10
A550nm
0
0,059
0,109
0,139
0,199
0,259
0,279
0,339
0,399
0,449
0,459
21
Lampiran 3. Kadar Protein Terlarut Tepung Gaplek Terfortifikasi (TGT) dan
Tepung Gaplek Kontrol (TGK) pada lama waktu fermentasi 0,20,
dan 40 jam
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
1
GF0
GF20
GF40
A 550 nm
0,028
0,029
0,040
0,033
0,038
0,030
0,037
0,038
0,039
0,224
0,237
0,237
0,261
0,270
0,271
0,289
0,297
0,297
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,0323
0,5409
2,17
0,0337
0,5696
2,28
0,0380
0,6578
2,63
0,2660
5,329
21,32
0,2673
5,3565
21,43
0,2943
5,9098
22,64
22
Lampiran 3. Lanjutan
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
2
GF0
GF20
GF40
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
3
GF0
GF20
GF40
A 550 nm
0,026
0,037
0,031
0,035
0,040
0,026
0,033
0,041
0,031
0,196
0,256
0,253
0,260
0,255
0,267
0,283
0,284
0,283
A 550 nm
0,027
0,039
0,028
0,047
0,032
0,045
0,045
0,042
0,043
0,235
0,237
0,235
0,262
0,266
0,244
0,282
0,284
0,277
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,0313
0,5212
2,08
0,0337
0,5690
2,28
0,0350
0,5693
2,39
0,2350
4,6947
18,78
0,2607
6,4706
25,88
0,2837
6,8873
27,55
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,0313
0,5212
2,08
0,0413
0,7261
2,90
0,0433
0,7671
3,07
0,2357
4,709
18,84
0,2573
5,1523
20,61
0,2810
5,6373
22,55
23
Lampiran 3. Lanjutan
Ulangan
Sampel
G0
G20
G40
4
GF0
GF20
GF40
A 550 nm
0,030
0,035
0,034
0,035
0,038
0,038
0,035
0,040
0,042
0,223
0,229
0,246
0,245
0,262
0,276
0,273
0,279
0,288
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein (%)
0,033
0,5553
2,22
0,037
0,6373
2,55
0,039
0,6783
2,71
0,2321
4,6469
18,59
0,2610
5,2275
20,91
0,280
5,618
22,47
Contoh Perhitungan Kadar Protein :
Sampel G0 (ulangan 1)
Absorbansi = 0,2660
y = 0,0488x + 0,0059
0,2660 = 0,0488 + 0,0059
,
,
x=
= 5,329
,
Kadar Protein (%) =
,
/
x 20 x 100% = 21,32 %
24
Lampiran 4. Analisis Sidik Ragam Kadar Protein Terlarut Tepung Gaplek Kontrol (TGK) dan Tepung Gaplek
Terfortifikasi (TGT)
% Protein Terlarut
Ulangan
G0
G20
G40
GF0
GF20
GF40
Tu
Xu
du
Wu
I
2,16
2,28
2,63
18,59
21,43
23,64
70,73
11,79
0,18
533,0082
II
2,08
2,28
2,39
18,78
20,88
22,77
69,18
11,53
-0,08
522,3214
III
2,08
2,09
3,07
18,84
20,61
22,55
69,24
11,54
-0,07
513,4574
IV
2,22
2,55
2,71
18,59
20,91
22,47
69,45
11,58
-0,03
511,1891
Tp
8,54
9,20
10,8
74,8
83,83
91,43
278,60
Xp
2,14
2,3
2,7
18,7
20,96
22,86
dp
-9,47
-9,31
-8,91
7,09
9,35
11,25
SD
0,0721
0,1892
0,2816
0,1294
0,3426
0,5308
SE
0,1374
0,3606
0,53667
0,2465
0,6531
1,023
Keterangan : G0 = Tepung Gaplek Kontrol 0 jam, G20 = Tepung Gaplek Kontrol 20 jam, G40 = Tepung Gaplek Kontrol 40 jam, GF0= Tepung
Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 0 jam, GF20= Tepung Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 20 jam, GF40= Tepung Gaplek
Terfortifikasi Tepung Kedelai 40 jam.
Tu = Total Ulangan, Tp = Total Perlakuan, Xu = Purata Ulangan, Xp = Purata Perlakuan, X00 = purata
SD = Simpangan Baku, SE = Standar Eror
25
Lanjutan Lampiran 4.
W1 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,16)(-9,47) + (2,28)(-9,31) + …..(18,59)(7,09) = 533,0082
W2 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,08)(-9,47) + (2,28)(-9,31) + …..(18,78)(7,09) = 522,3214
W3 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,08)(-9,47) + (2,09)(-9,31) + …..(18,84)(7,09) = 513,4574
W4 = (x)(dpG0) + (x)(dpG20) + …..(x)(dpGF40)
= (2,22)(-9,47) + (2,55)(-9,31) + …..(18,59)(7,09) = 511,1891
N = (W1)(du1) + (W2)(du2) + …..(W4)(du4)
= (533,0082)(0,18) + (522,3214)(-0,08) +….. (511,1891)(-0,03) = 2,87
∑ du2 = (0,18)2 + (-0,08)2 + …..(-0,03)2 = 0,0446
∑ dG20 = (-9,47)2 + (-9,31)2 + …..(7,09)2 = 519,9982
FK = ∑
( ..) ^
, ^
=
= 3234,08
JK total = ((2,16)2 + (2,28)2 + (2,63)2 + …..(22,47)2 – FK )= 2081,59
JK ulangan = ∑
∑(
- FK
,
=
JK Perlakuan =
)^
∑(
– 3234,08 = 0,27
)^
=
- FK
,
– 3234,08 = 2079,96
JK Galad Acak = JK Total – JK Ulangan – JK Perlakuan
= 2081,59 – 0,27 – 2079,96
= 1,36
JK Non Additivitas =
^
= 0,35
26
Lanjutan Lampiran 4.
D = (∑du2)(∑dG20) = (0,0446)(519,9982) = 23,19
KV =
SX =
√
x 100% = √
.
.
=
,
x 100% = 2,67%
,
,
= 0,151
Tabel Q = 4.59
BNJ 5% = SX x Tabel Q = 0,693
Dasira Uji Additivitas
Sumber Ragam
Ulangan
Perlakuan
Galad Acak
Non Additivitas
Sisa
Db
JK
KT
F hitung
3
0,27
5 2079,96
15
1,36
0,0906
1
0,35
0,35
4,85
14
1,01
0,072
F Tabel
5%
1%
4,60
8,86
F Tabel 5% < F Hit < F Tabel 1% Data aditif
Daftar Sidik Ragam
Sumber Ragam
Ulangan
Perlakuan
Galad Acak
Total
Jk
Db
3
0,27
5 2079,96
15
1,36
23
KT
0,09
415,99
0,0906
F Hitung
0,989
4571,32**
Fhit perlakuan > F tabel 5% dan 1%
Kesimpulan : Antar perlakuan terdapat beda amat sangat nyata
F Tabel
5%
1%
3,29
5,42
2,90
4,56
27
Lanjutan Lampiran 4.
Uji BNJ 5%
Kadar Protein tiap Perlakuan
G0
G20
G40
GF0
GF20
GF40
Purata (%)
2,14
2,30
2,70
18,70
20,96
22,86
±
±
±
±
±
±
±
SE
0,1374
0,3606
0,5367
0,2465
20,96
22,86
W = 0,3551
(a)
(a)
(a)
(b)
(c)
(d)
Keterangan : G0 = Tepung Gaplek Kontrol 0 jam, G20 = Tepung Gaplek Kontrol 20 jam, G40 = Tepung
Gaplek Kontrol 40 jam, GF0= Tepung Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 0 jam, GF20=
Tepung Gaplek Terfortifikasi Tepung Kedelai 20 jam, GF40= Tepung Gaplek Terfortifikasi
Tepung Kedelai 40 jam.
28
Lampiran 5. Kadar Protein Terlarut Kedelai, Gaplek, Ragi, dan Tepung Terigu
“X”
Sampel
Ulangan
1
2
Kedelai
3
4
Sampel
Ulangan
1
2
Gaplek
3
4
A 550 nm
0,459
0,440
0,402
0,457
0,437
0,408
0,438
0,423
0,440
0,450
0,399
0,454
A 550 nm
0,028
0,031
0,027
0,033
0,020
0,018
0,023
0,024
0,026
0,021
0,014
0,014
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein
(%)
0,4337
8,7657
35,06
0,4340
8,7725
35,09
0,4337
8,7657
35,06
0,4343
8,7794
35,12
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein
(%)
0,0287
0,4665
1,87
0,0237
0,3641
1,46
0,0243
0,4028
1,61
0,0163
0,2361
0,94
29
Lampiran 5. Lanjutan
Sampel
Ulangan
A 550 nm
0,050
0,047
0,051
0,050
0,052
0,050
0,051
0,050
0,051
0,052
0,053
0,054
0,272
0,240
0,247
1
2
Ragi
3
4
Tepung Terigu X
Rata-Rata
A 550 nm
Konsentrasi
(mg/ml)
Kadar
Protein
(%)
0,0493
0,9236
3,69
0,0507
0,9514
3,80
0,0507
0,9514
3,80
0,053
0,9652
3,86
0,253
5,0635
20,25
Contoh Perhitungan Kadar Protein :
Kedelai (ulangan 1)
Absorbansi = 0,4337
y = 0,0488x + 0,0059
0,4337 = 0,0488 + 0,0059
,
,
x=
= 8,766
,
Kadar Protein (%) =
,
/
x 20 x 100% = 35,06%
30
Lampiran 5. Lanjutan
Pengulangan
Kadar Protein Sampel
Kedelai
35,06
35,09
35,06
35,12
35,0825
0,0287
0,0547
1
2
3
4
X
SD
SE
Ragi
3,8056
3,8056
3,8608
3,6944
2,7781
0,0715
0,1364
Gaplek
1,87
1,46
1,61
0,94
1,47
0,3918
0,7468
Keterangan : X = Purata, SD = Simpangan Baku, SE = Standar Eror
Ʃ(x-X)2 Kedelai = (35,06-35,0825)2 + ( 35,09-35,0825)2 + ... + (35,12-35,0825)2
= 2,475 x 10-3
SDKedelai = √
Ʃ(
)
,
=
= 0,0287
∝
,
SEKedelai = t x √ = 3,812 x
√
= 0,0547
Ʃ(x-X)2 Ragi = (3,8056-3,7781)2 + (3,8056-3,7781)2 + ... + (3,6944-3,7781)2
= 0,01535
SDRagi = √
Ʃ(
)
∝
SERagi = t x
√
,
=
= 0,0715
= 3,812 x
,
= 0,1364
√
Ʃ(x-X)2 Gaplek = (1,87-1,47)2 + (1,46-1,47)2 + ... + (0,94-1,47)2
= 0,4606
SDGaplek = √
Ʃ(
∝
)
=
,
SEGaplek = t x √ = 3,812 x
= 0,3918
,
√
= 0,7468
31
Lampiran 6. Kromatogram Asam Amino Standar 31,25 ppm, 50 ppm, 62,5 ppm,
125 ppm, 500 ppm, Gaplek , G40 , GF0 , GF20 dan GF40.
Kromatogram Standar Asam Amino 31,25 ppm
Keterangan : Standar dianalisa pada fase diam kolom Licrospher ® 100 RP 18 (125 x 4 mm,5 µm ) dan
fase gerak adalah Eluent A : metanol : 50 mM natrium asetat : Teterahidrofuran (THF) dan Eluent B :65
% metanol. Suhu analisa adalah 27 0C dengan kecepatan alir 1 ml/menit serta dideteksi dengan detektor
fluorosen pada panjang gelombang 360 dan 460 nm.
Kromatogram Asam Amino 50 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
32
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Asam Amino 62,50 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Asam Amino 125 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
33
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Asam Amino 500 ppm
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Sampel Gaplek
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
34
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Sampel G40
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Sampel GF0
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
35
Lampiran 6. Lanjutan
Kromatogram Sampel GF20
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
Kromatogram Sampel GF40
Keterangan : Kondisi analisa sampel gaplek sama dengan kondisi yang digunakan pada kromatogram
asam amino 31,25 ppm
36
Lampiran 7. Perbandingan Waktu Retensi Sampel Gaplek, G40, GF0, GF20, dan GF40 terhadap Asam Amino Standar
TR ASAM Amino Standar
No
Gaplek
1
A.A
Standar
Asp
31,25
ppm
2,990
50,00
ppm
4,600
62,50
ppm
2,947
125,00
ppm
3,104
500,00
ppm
4,411
TR
1,155
2
Glu
5,462
8,545
5,399
5,399
8,208
3,011
3
Ser
13,741
14,968
13,851
13,059
14,551
4
His
16,208
16,239
16,243
15,117
5
Glis
18,633
19,653
18,670
6
Arg
21,341
21,378
7
Ala
23,571
8
Tyr
9
G40
A.A
GF0
TR
A.A
2,974
Asp
3,060
Asp
5,369
Glu
5,412
Glu
6,200
16,036
6,308
-
17,630
19,199
13,823
21,274
20,128
21,089
24,675
23,658
22,750
26,450
27,611
26,589
Met
33,997
35,483
10
Val
34,544
11
Phe
12
GF20
GF40
TR
A.A
TR
A.A
Asp
2,986
Asp
3,088
Asp
5,495
Glu
5,417
Glu
4,300
-
-
13,898
Ser
13,819
Ser
5,449
Glu
13,780
Ser
16,308
His
16,151
His
13,799
Ser
Ser
17,127
-
18,678
Glis
17,032
-
16,054
His
18,628
Glis
18,570
Glis
19,333
-
18,644
Glis
17,066
-
24,244
19,162
-
19,200
-
21,362
Arg
19,250
-
18,562
Glis
25,625
26,957
21,317
Arg
21,176
Arg
23,729
Ala
21,367
Arg
21,067
Arg
34,048
33,600
35,249
23,639
Ala
23,730
Ala
26,744
Tyr
23,653
Ala
23,295
Ala
36,118
34,562
34,074
35,850
25,117
Tyr
26,577
Tyr
34,975
Val
26,538
Tyr
25,200
-
36,408
37,896
36,487
36,078
37,688
33,272
-
33,400
-
36,689
Fenil
34,717
Val
26,052
Tyr
Isoleu
38,473
40,095
38,543
38,029
39,889
34,323
Val
34,592
Met
38,972
-
36,596
Fenil
33,989
Met
13
Leu
39,487
41,064
39,526
39,376
40,833
36,137
-
36,434
Fenil
39,899
Iso
38,732
-
35,878
val
14
Lys
44,674
45,827
44,658
44,821
45,847
38,150
39,200
Iso
Leu
38,615
39,647
44,869
Iso
Leu
Lys
39,739
44,820
Iso
Lys
38,083
39,100
44,489
Iso
Leu
Lys
37
Lampiran 8. Kurva Standar Asam Amino
Konsentrasi
(ppm)
aspartat
Glutamat
Serin
Histidin
Glisin
Arginin
Alanin
Tirosin
Metionin
Valin
Fenilalanin
Isoleusin
Leusin
Lisin
Luas Area A. A standar
31,25
50
62,5
320242
351719
456382
145504
535435
227964
437850
218236
221106
514635
262720
3242491
329264
90520
868262
964257
1242292
430979
1400397
652997
1255455
624291
779201
1151315
618965
935390
785774
213418
847677
989579
1224194
482543
1524497
636830
1198261
602562
552077
1250623
654050
827016
810776
235718
Aspartat
y = 13115x + 48593
R² = 0.998
6100000
500
6600678
8807475
12414626
4501609
16594865
7059803
11711212
6455774
8058306
9968835
5964575
8245041
7474275
2293374
Glutamat
y = 17794x - 85400
R² = 0.999
8100000
7100000
6100000
5100000
4100000
4100000
3100000
2100000
2100000
1100000
100000
100000
0
100 200 300 400 500 600
0
200
400
600
38
Lampiran 8. Lanjutan
Serin
Histidin
12400000
4100000
10400000
8400000
3100000
6400000
2100000
4400000
y = 25308x - 23860
R² = 0.999
2400000
400000
y = 9182.x - 87719
R² = 0.999
1100000
100000
0
500
1000
0
200
400
600
Arginin
Glisin
7200000
15500000
y = 34152x - 48250
R² = 0.999
y = 14495x - 18838
R² = 0.999
6200000
5200000
10500000
4200000
3200000
5500000
2200000
1200000
500000
200000
0
200
400
600
0
4200000
6400000
3200000
4400000
2200000
2400000
1200000
400000
200000
200
400
y = 13214x - 15140
R² = 0.999
5200000
8400000
0
600
6200000
y = 23780x - 17634
R² = 0.999
10400000
400
Tirosin
Alanin
12400000
200
600
0
200
400
600
39
4
Lampiran 8. Lanjutan
M etionin
Valin
8200000
10500000
y = 16665x - 27942
R² = 0.997
6200000
y = 19915x + 16314
R² = 0.999
8500000
6500000
4200000
4500000
2200000
2500000
500000
200000
0
200
400
600
0
Fenilalanin
5200000
400
600
Isoleusin
y = 12064x - 66524
R² = 0.999
4200000
200
y = 14241x + 1E+06
R² = 0.862
6700000
4700000
3200000
2200000
2700000
1200000
200000
700000
0
200
400
600
0
200
400
600
Lisin
Leusin
2480000
7250000
y = 15116x - 82745
R² = 0.999
6250000
y = 4675.x - 44188
R² = 0.999
2080000
5250000
1680000
4250000
1280000
3250000
880000
2250000
480000
1250000
250000
80000
0
200
400
600
0
200
400
600
58
40
Lampiran 9. Konsentrasi Asam Amino pada Sampel Gaplek, G40, GF0, GF20, dan
GF40.
No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Gaplek
AA
Kons
(ppm)
Asp*
Glu
5,692
Ser
9,732
Glis
14,345
Arg
13,205
Ala
8,130
Tyr
12,350
Val*
Iso*
Leu
5,752
G40
AA
Asp
Glu
Ser
Glis
Arg
Ala
Tyr
Met
Fenil
Iso*
Leu
Lys
Kons
(ppm)
8,809
14,726
13,219
17,155
16,359
13,988
14,905
22,562
9,855
12,512
14,375
GF0
AA
Kons
(ppm)
Asp 119,050
Glu 149,241
Ser
44,483
His
21,670
Glis 34,914
Arg
51,745
Ala
39,449
Tyr
29,120
Val
29,795
Fenil 43,318
Iso*
Lys
63,129
Ket : * menandakan bahwa asam amino tidak terkuantifikasi
GF20
AA
Kons
(ppm)
Asp 103,323
Glu 126,641
Ser
41,908
His
27,666
Glis 35,444
Arg
57,246
Ala
53,503
Tyr
34,747
Val
28,244
Fenil 40,109
Iso*
Lys
74,029
GF40
AA
Kons
(ppm)
Asp 272,151
Glu 288,071
Ser 93,477
His 61,381
Glis 129,596
Arg 104,325
Ala 147,923
Tyr 68,287
Met 108,152
val
47,082
Iso
14,957
Leu 148,557
Lys 151,747