• Untuk mengeluarkan aspirat, jarum dibebaskan dari tabung suntik, piston ditarik ke arah proksimal kemudian jarum disatukan kembali
dengan tabung. Tekanan di ruangan tabung menjadi positif. Lalu, ujung jarum diletakkan di atas kaca objek, piston didorong pelan-pelan
dan aspirat diteteskan di atas kaca objek dan dibuat sediaan hapus. Untuk mengosongkan jarum atau tabung, prosedur ini dilakukan
berulang-ulang.
3.7.3. Bahan dan Prosedur pewarnaan Diff-Quik 3.7.3.1. Bahan pewarnaan Diff Quik
• Larutan fiksatif : Triarylmethane Dye, 100 PDC
Methyl alkohol, dalam konsentrasi 0,002 gliter • Larutan I :
Xanthene Dye, 100 PDC Buffer
Sodium azide, dalam konsentrasi 1,25 gliter • Larutan
II :
Thiazine Dye Mixture, 100 PDC Buffer, dalam konsentrasi 1,25 gliter
3.7.3.2. Prosedur pewarnaan Diff-Quik
• Celupkan sediaan kedalam larutan fiksatif selama 5
Lidya Imelda Laksmi : Tampilan Imunositokimia Her2Neu Pada Biopsi Aspirasi Metastasis Karsinoma Nasofaring Kelenjar Limfe, 2009
detik 5 kali celup masing-masing satu detik. Kelebihannya biarkan mengalir.
• Celupkan sediaan kedalam larutan I selama 5 detik
5 kali celup masing-masing satu detik. Kelebihannya biarkan mengalir.
• Celupkan sediaan kedalam larutan II selama 5 detik
5 kali celup, masing-masing satu detik. Kelebihannya biarkan mengalir.
• Cuci sediaan dengan air distilasi atau air diionisasi
• Keringkan, beri entelan dan siap dilihat dibawah
mikroskop.
Hasil :
Inti : berwarna biru Sitoplasma : eosinofilik
20
3.7.4. Prosedur kerja imunositokimia HER2neu pada sediaan sitologi
Setelah dibuat sediaan hapus dengan menggunakan kaca objek yang telah di coating dengan poly-L-lysine atau menggunakan silanized slide
agar sediaan smear dapat melekat pada kaca objek selama proses imunositokimia, kemudian difiksasi dengan methanol absolut selama 30
menit selanjutnya masukkan slide kedalam PBS.
Langkah 1 : Endogenous Enzyme Block
Lidya Imelda Laksmi : Tampilan Imunositokimia Her2Neu Pada Biopsi Aspirasi Metastasis Karsinoma Nasofaring Kelenjar Limfe, 2009
• Bersihkan preparat dari sisa buffer pencuci dengan menggunakan lap khusus.
• Teteskan Dual endogenous enzyme block
secukupnya untuk menutupi seluruh specimen.
• Inkubasi selama 5 -10 menit. • Bilas dengan air distilasi atau solusi buffer tanpa mengenai
specimen langsung. • Letakkan preparat dalam
bath buffer yang baru.
Langkah 2 : Reagen antibodi primer atau kontrol negatif • Bersihkan preparat dari sisa cairan buffer pencuci dengan lap
khusus. • Teteskan antibodi primer yang sudah diencerkan secukupnya
menutupi seluruh jaringan. • Inkubasi selama 30 menit.
• Bilas dengan lembut pada cairan buffer dan tempatkan dalam bath
buffer yang baru. Jika prosedur pewarnaan ingin di interupsi, slides dapat dibiarkan
didalam bath buffer selama 1 jam, pada suhu ruangan.
Langkah 3 : Labeled Polymer
-HRP • Bersihkan preparat dari sisa cairan buffer seperti di atas.
Lidya Imelda Laksmi : Tampilan Imunositokimia Her2Neu Pada Biopsi Aspirasi Metastasis Karsinoma Nasofaring Kelenjar Limfe, 2009
• Teteskan labelled polymer
secukupnya sampai menutupi sediaan hapus
• Inkubasi selama 30 menit. • Bilas dengan lembut pada larutan buffer dan tempatkan dalam
bath buffer selama 5 menit.
Langkah 4 : Substrat-kromogen • Lap kering slide preparatnya seperti biasa.
• Teteskan substrat-kromogen secukupnya dan inkubasi selama 5-10 menit.
• Bilas lembut dengan air distilasi.
Langkah 5 : Counterstain
hematoxylin • Masukkan slide ke dalam cairan Meyer hematoksilin dan inkubasi
seperti biasa. • Bilas
dalam bath
air distilasi. • Celupkan slide 10 kali dalam larutan amonia 0,037 molL atau
bluing agent
lainnya. • Bilas
slide dalam
bath air distilasi atau deionisasi selama 2-5 menit.
• Tutup dengan entelan • Lihat dibawah mikroskop tampilan imunositokimia HER-2neu
3.8. Alat dan Bahan Penelitian Imunositokimia
