Eksplorasi bakteri dan cendawan yang berasosiasi dengan busuk basah pada buah pepaya (Carica papaya L.)

i

EKSPLORASI BAKTERI DAN CENDAWAN
YANG BERASOSIASI DENGAN BUSUK BASAH PADA BUAH
PEPAYA (Carica papaya L.)

YENI RIYANI SOLICHAH

DEPARTEMEN PROTEKSI TANAMAN
FAKULTAS PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2011

i

ABSTRAK

YENI RIYANI SOLICHAH. Eksplorasi bakteri dan cendawan yang berasosiasi
dengan busuk basah pada buah pepaya (Carica papaya L.), dibimbing oleh
IVONNE OLEY SUMARAUW. Penelitian ini bertujuan mengetahui beberapa
bakteri dan cendawan yang berasosiasi dengan busuk basah pada buah pepaya.

Tanaman pepaya dikenal sebagai tanaman multiguna, karena hampir seluruh
bagian tanaman mulai dari akar hingga buah bermanfaat bagi manusia maupun
hewan. Penelitian mengenai penyakit tanaman pepaya sampai saat ini masih
sedikit. Selain pada batang, daun dan perakaran, bagian yang dapat terserang
penyakit adalah buah. Penelitian diawali dengan mengambil contoh buah yang
bergejala busuk basah, kemudian mengisolasinya untuk mendapatkan isolat
bakteri dan cendawan. Identifikasi bakteri dilakukan dengan beberapa pengujian
yang meliputi: uji Gram, hipersensitivitas pada daun tembakau, fluoresensi,
pembusukan kentang, oksidatif/fermentatif, uji pertumbuhan pada media TZC,
pertumbuhan pada media YDCA, dan pembentukan endospora. Identifikasi
cendawan dilakukan dari hasil isolasi buah yang bergejala dan pengamatan
langsung dari buah tersebut. Hasil isolasi menunjukkan bahwa terdapat beberapa
bakteri dan cendawan yang berasosiasi dengan busuk basah pada buah pepaya.
Bakteri yang berhasil diidentifikasi adalah Bacillus sp. yang bersifat patogen
maupun nonpatogen, bakteri Pantoea sp. yang bersifat nonpatogen, dan satu
bakteri yang diduga Ralstonia sp. Cendawan yang ditemukan dari hasil isolasi
dan pengamatan langsung dari buah yang bergejala adalah Aspergillus niger,
Colletotrichum sp., Thielaviopsis sp., Mucor sp., Penicillium sp., dan Fusarium
sp.

ii

EKSPLORASI BAKTERI DAN CENDAWAN
YANG BERASOSIASI DENGAN BUSUK BASAH PADA BUAH
PEPAYA (Carica papaya L.)

YENI RIYANI SOLICHAH
A34061669

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Pertanian
pada
Departemen Proteksi Tanaman

DEPARTEMEN PROTEKSI TANAMAN
FAKULTAS PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2011

iii

Judul Skripsi
Nama Mahasiswa

: Eksplorasi Bakteri dan Cendawan yang Berasosiasi dengan
Busuk Basah pada Buah Pepaya (Carica papaya L.)
: Yeni Riyani Solichah

NRP

: A34061669

Menyetujui
Dosen Pembimbing

Ir. Ivonne Oley Sumarauw, M.Si.
NIP. 19490208 197603 2 002

Mengetahui

Ketua Departemen Proteksi Tanaman

Dr. Ir. Dadang, M.Sc.
NIP. 19640204 199002 1 002

Tanggal lulus:

iv

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Cirebon, tanggal 12 Agustustus 1988 dari pasangan
Bapak Abdul Azis Muslim dan Ibu Siti Maryam.
Tahun 2006 penulis menamatkan Sekolah Menengah Umun di Pondok
Pesantren Husnul Khotimah Kuningan. Pada tahun yang sama penulis diterima di
Institut Pertanian Bogor melalui jalur USMI (Undangan Seleksi Masuk IPB).
Penulis memilih jurusan Proteksi Tanaman, Departemen Proteksi Tanaman,
Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Selama kuliah penulis memiliki pengalaman organisasi sebagai pengurus
HIMASITA Divisi Keprofesian (2007-2008). Penulis pernah mengikuti magang

di Laboratorium Bakteriologi Tumbuhan, Departemen Proteksi Tanaman, Institut
Pertanian Bogor, serta pernah mengikuti Program Kreativitas Mahasiswa (PKM)
dengan judul ”Tanaman Formulasi Bacillus subtilis pada Tepung Singkong
sebagai Probiotik Tanaman” pada tahun 2009. Penulis pernah menjadi asisten
praktikum mata kuliah Hama Penyakit Benih (HPB D3).

v

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT, karena atas karunia-NYA
penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi sebagai salah satu syarat dalam
memperoleh gelar sarjana Pertanian. Shalawat serta salam tercurah pula kepada
Nabi Muhammad SAW, keluarganya, para sahabatnya, dan umat pengikutnya
sampai hari kiamat. Teriring doa semoga Allah meridhoi karya ini.
Penulis menyampaikan terima kasih sebesar-besarnya kepada Ir. Ivonne
Oley Sumarauw, M.Si sebagai dosen pembimbing dan arahan kepada Penulis
dalam menyelesaikan penelitian ini. Ucapan terima kasih juga diucapkan kepada
Dr. Ir. Idham Sakti Harahap, M.Si selaku dosen penguji tamu yang telah memberi
saran pada skripsi ini, serta Dr. Ir. Giyanto, M.Si selaku dosen pembimbing

akademik selama masa perkuliahan.
Penulis menyampaikan terima kasih kepada orang tua, Papa dan Mama
tercinta, Mba Irma Elfira serta keluarga, Kak Taufik Gozali, Novi Pamela Sari,
dan Muhammad Anwar Habib. Terima kasih kepada teman-teman di Pondok
Malea Atas, anggota Laboratorium Bakteriologi Tumbuhan, serta keluarga besar
PTN angkatan 43 atas semangat, kasih sayang, dan doa yang telah diberikan.

Bogor, Januari 2011

Yeni Riyani Solichah

vi

DAFTAR ISI

Halaman
DAFTAR TABEL ......................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR .....................................................................................

ix

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................

x

PENDAHULUAN .........................................................................................

1

Latar Belakang ......................................................................................
Tujuan Penelitian ...................................................................................
Manfaat Penelitian .................................................................................
Hipotesis................................................................................................

1
2
2
2

TINJAUAN PUSTAKA.................................................................................

3

Arti Penting Tanaman Pepaya .................................................................
Agroekologi Tanaman Pepaya ................................................................
Patogen yang Terdapat pada Tanaman Pepaya ........................................

3
3
4

BAHAN DAN METODE ...............................................................................

5

Tempat dan Waktu Penelitian .................................................................
Bahan dan Alat .......................................................................................
Metode Penelititian .................................................................................
Survei Buah Pepaya Sakit .......................................................................
Isolasi dari Buah Bergejala Busuk Basah ................................................

Identifikasi Bakteri .................................................................................
Uji Gram .....................................................................................
Uji Hipersensitivitas .....................................................................
Uji Fluoresensi ............................................................................
Uji Pembusukan Kentang ............................................................
Uji Oksidatif/Fermentatif ............................................................
Uji Tumbuh pada Media TZC .....................................................
Uji Tumbuh pada Media YDCA ..................................................
Uji Pembentukan Endospora .......................................................
Identifikasi Cendawan ............................................................................

5
5
5
5
6
6
6
7
7

7
8
8
8
8
9

HASIL DAN PEMBAHASAN..........................................................................

10

Survei Buah Sakit ...................................................................................
Isolasi dari Buah Bergejala Busuk Basah ................................................
Identifikasi Bakteri .................................................................................
Uji Gram .....................................................................................
Uji Hipersensitivitas ....................................................................
Uji Fluoresensi ............................................................................
Uji Pembusukan Kentang ............................................................

10

11
11
11
12
13
13

vii

Uji Oksidatif/Fermentatif ............................................................
Uji Tumbuh pada Media TZC .....................................................
Uji Tumbuh pada Media YDCA ..................................................
Uji Pembentukan Endospora .......................................................
Identifikasi Cendawan ............................................................................

14
14
15
16
17

KESIMPULAN DAN SARAN ....................................................................... 20
Kesimpulan ............................................................................................. 20
Saran ................................................................................................... 20
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 21

viii

DAFTAR TABEL

Halaman
1. Hasil identifikasi bakteri yang berasosiasi dengan busuk basah
buah pepaya……………………………………………………………...... 17
2. Komposisi bahan media King’s B 100% ................................................... 24
3. Komposisi bahan media LB (Luria Broth)................................................. 24
4. Komposisi bahan media NA (Nutrient Agar) ............................................ 24
5. Komposisi bahan media Oksidatif/Fermentatif .......................................... 24
6. Komposisi bahan media PDA (Potato Dextrose Agar) .............................. 24
7. Komposisi bahan media Uji Gram ............................................................. 25
8. Komposisi bahan media TZC Agar ........................................................... 25
9. Komposisi bahan media Yeast Extract Dextrose CaCO3 Agar ................... 25
10. Komposisi larutan PBS (Phospate Buffer Saline) ...................................... 25

ix

DAFTAR GAMBAR

Halaman
1. Sampel buah bergejala busuk basah yang masih berada di pohon .............. 10
2. Sampel buah yang bergejala busuk basah .................................................. 10
3. Bagian buah yang diisolasi antara daerah yang sehat dan sakit .................. 11
4. Reaksi bakteri Gram negatif dan bakteri Gram positif ............................... 12
5. Reaksi positif dan kontrol uji hipersensitivitas pada daun tembakau .......... 12
6. Reaksi negatif dan reaksi positif pada media King’s B .............................. 13
7. Reaksi negatif uji pembusukan pada kentang ............................................. 14
8. Kontrol, reaksi oksidatif, dan reaksi fermentatif ........................................ 14
9. Bakteri virulen dan avirulen ...................................................................... 15
10. Isolat bakteri berwarna kuning dan isolat bakteri berwarna kream ............. 16
11. Bentuk cendawan Aspergillus niger .......................................................... 17
12. Konidia Thielaviopsis sp. dan Fusarium sp. (mikro (a) dan
makrokonidia (b)) ..................................................................................... 18
13. Konidia Colletotrichum sp. (a) dan Mucor sp.(b) ....................................... 19

x

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
1. Komposisi bahan untuk isolasi dan identifikasi cendawan dan bakteri
(Schaad et al. 2001 dan Brown et al. 1980) .................................................... 24
2. Kunci Identifikasi Bakteri (Schaad et al. 2001) ............................................ 26
3. Kunci Identifikasi Bakteri (Brown et al. 1980) .............................................. 27
4. Kunci Identifikasi Cendawan (Watanabe 1993) ............................................. 29

1

PENDAHULUAN

Latar Belakang
Indonesia merupakan salah satu negara yang memiliki keanekaragaman
produk pertanian. Hasil produksi pertanian di Indonesia antara lain buah-buahan,
sayuran, tanaman pangan, dan lain-lain. Komoditas buah-buahan merupakan
penyumbang keanekaragaman dan kecukupan gizi bagi masyarakat Indonesia.
Buah-buahan sangat penting bagi kesehatan karena mengandung karbohidrat,
protein, lemak, mineral, vitamin, serat dan gula (Rukmana 2008). Salah satu jenis
buah-buahan yang memiliki kandungan gizi yang baik adalah pepaya. Pepaya
banyak mengandung vitamin A dan C yang baik untuk kesehatan tubuh. Vitamin
C yang terkandung dalam buah pepaya lebih tinggi dibandingkan dengan buah
jeruk, mangga, dan belimbing (Ashari 2006).
Tanaman pepaya dikenal sebagai tanaman multiguna, karena hampir
seluruh bagian tanaman mulai dari akar hingga buah bermanfaat bagi manusia
maupun hewan. Tanaman pepaya dapat dimanfaatkan sebagai makanan,
minuman, obat, kecantikan maupun sebagai pakan ternak (Semangun 2004).
Indonesia merupakan Negara peringkat kelima sebagai penghasil pepaya terbesar
setelah Brazil, Meksiko, Nigeria, dan India (FAO 2007). Di Indonesia terdapat
banyak jenis pepaya baik yang berdaging buah kuning maupun yang berwarna
jingga (Semangun 2006). Penelitian mengenai tanaman pepaya saat ini masih
sedikit khususnya tentang penyakit.
Untuk mengetahui ciri-ciri tanaman yang dapat dikatakan sakit antara lain
dengan melihat gejala dan adanya tanda yang ditimbulkan oleh organisme
penyebab penyakit. Gejala ataupun tanda dapat bermanfaat dalam proses
pengidentifikasian penyebab penyakit yang muncul (Yudiarti 2007).
Menurut hasil penelitian yang dilakukan oleh Widianti (2009) salah satu
penyakit yang menyerang tanaman pepaya adalah penyakit busuk basah yang
diduga disebabkan oleh bakteri Erwinia sp. dan Pseudomonas sp. Bakteri Erwinia
dapat menyebabkan terjadinya busuk lunak, nekrosis, dan kelayuan pada tanaman.
Bakteri ini dapat merusak lamella tengah sel-sel tumbuhan inang karena memiliki
enzim protopektinase. Menurut penelitian Ferfinia (2010) mikroorganisme

2

rizosfer yang terdapat pada tanaman pepaya yang terinfeksi penyakit busuk basah
terdiri atas bakteri Pseudomonas sp., Pantoea sp., Erwinia sp., Bacillus sp., serta
dari golongan cendawan Trichoderma sp., Penicillium sp., dan Aspergillus sp.
Selain pada batang dan perakaran, bagian yang dapat terserang penyakit
adalah bagian buah. Penyakit-penyakit pada buah yang banyak ditemukan adalah
busuk coklat, busuk kering, busuk hitam, antraknosa, dan busuk lunak (Semangun
2004). Namun gejala busuk basah pada buah pepaya di kebun percobaan
Leuwikopo berbeda dengan gejala penyakit-penyakit tersebut. Gejala awal yang
ditemukan berupa bercak kebasahan di permukaan buah yang kemudian
berkembang keseluruh permukaan buah dan buah terasa lunak. Sampai saat ini
belum banyak pustaka yang membahas tentang gejala kebasahan yang terjadi pada
buah pepaya.

Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan mengetahui bakteri dan cendawan yang berasosiasi
dengan busuk basah buah pepaya.

Manfaat Penelitian
Manfaat yang diharapkan dari penelitian ini adalah pengetahuan beberapa
bakteri dan cendawan yang berasosiasi dengan busuk basah buah pepaya yang
kemungkinan merupakan patogen.

Hipotesis
Terdapat berbagai macam bakteri dan cendawan yang berasosiasi dengan
busuk basah buah pepaya.

3

TINJAUAN PUSTAKA

Arti Penting Tanaman Pepaya
Salah satu tanaman yang mudah dibudidayakan di berbagai daerah
khususnya di Indonesia adalah pepaya. Buah pepaya juga merupakan salah satu
buah tropis yang mempunyai nilai ekonomis yang cukup tinggi dan banyak
digemari oleh masyarakat Indonesia. Pengembangan pepaya sebagai komoditas
hortikultura cukup prospektif karena jumlah permintaan pepaya cenderung
meningkat (Kalie M & Baga 1999).
Pepaya (Carica papaya L.) merupakan

tanaman yang berasal dari

Amerika tropis. Pusat penyebaran tanaman diduga berada di daerah sekitar
Meksiko bagian selatan dan Nikaragua. Abad ke-16 tanaman ini menyebar ke
berbagai benua dan negara, termasuk ke Benua Afrika dan Asia yang dibawa oleh
pelayar-pelayar Portugis. Pepaya merupakan tanaman buah dari famili Caricaceae.
Buah pepaya tergolong buah yang digemari oleh hampir seluruh masyarakat
Indonesia. Daging buah pepaya berwarna merah atau kuning dan terasa lunak.
Buah pepaya merupakan buah bermutu dan bergizi tinggi (Sastrahidayat 1991).
Tanaman pepaya dapat dimanfaatkan untuk pengobatan antara lain bagian
akar untuk menyembuhkan sakit ginjal, tekanan darah tinggi, dan gangguan
kandung kemih. Daun pepaya memiliki rasa pahit, namun rasa pahit tersebut dapat
berkhasiat bagi kesehatan (Verheij & Coronel 1997). Daun pepaya dapat
berkhasiat menyembuhkan penyakit malaria, kejang perut, sakit panas, menambah
nafsu makan, dan menyembuhkan penyakit beri-beri (Agromedia 2009). Getah
pepaya dapat dimanfaatkan bagi manusia. Menurut Sunarjono (2005) getah yang
terkandung dalam pepaya mengandung papain yang bersifat proteolitik
(merombak protein), dapat digunakan sebagai pelunak daging. Papain membantu
proses pencernaan makanan secara baik (Suryowihardi 2010).

Agroekologi Tanaman Pepaya
Tanaman pepaya dapat tumbuh di seluruh daerah tropis dan substropis
umumnya dapat tumbuh optimal di ketinggian 200-500 m dpl dengan suhu
berkisar antara 25-30 0C (Sastrahidayat 1991). Tanaman pepaya merupakan

4

tanaman yang mirip dengan pohon, bentuk tanaman ini pada umumnya tidak
bercabang, namun terdapat pula yang bercabang karena terjadi pelukaan.
Tanaman tersebut mengandung getah putih pada seluruh bagiannya. Daundaunnya tersusun spiral, berkelompok dekat dengan ujung batangnya, tangkai
daunnya mencapai panjang 1 m, berongga, lembaran daunnya berbentuk menjari
(Verheij & Coronel 1997).

Patogen yang Terdapat pada Tanaman Pepaya
Penyakit yang sering merugikan tanaman pepaya adalah penyakit yang
disebabkan oleh cendawan, virus mosaik, bakteri dan nematoda (Sunarjono 2005).
Penyakit-penyakit yang menyerang tanaman pepaya antara lain adalah busuk akar
dan pangkal batang yang disebabkan Phytophthora palmivora (Butl.) Butl.,
bercak daun Corynespora yang disebabkan Corynespora cassiicola (Berk. et.
Curt.) Wei., bercak daun Cercospora yang disebabkan Cercospora papayae
Hansf., penyakit tepung yang disebabkan Oidium caricae Noack, penyakit busuk
basah yang disebabkan bakteri Erwinia papayae (Rant) Magrou, bercak cicin
yang disebabkan virus Papaya ringspot virus, mosaik yang disebabkan Papaya
mosaic

virus,

antraknosa

yang

disebabkan

cendawan

Colletotrichum

gloeosporioides, dan busuk Rhizopus yang disebabkan Rhizopus stolonifer
(Semangun 2004). Penyakit yang banyak ditemukan pada buah pepaya adalah
busuk coklat oleh Fusarium sp. dan Phytophthora sp., antraknosa oleh
Colletotrichum gloeosporioides., busuk hitam oleh Rhizopus sp., busuk kering
oleh Phoma sp., dan busuk lunak oleh Botryodiplodia sp. (Sri Widadi dalam
Semangun 2004). Menurut Martoredjo (2009) beberapa penyakit lain yang
menyerang buah pepaya adalah bercak buah Alternaria (Alternaria alternata),
penyakit bercak Guignardia (Guignardia sp.), dan penyakit busuk buah cat ungu
(Erwinia herbicola).

5

BAHAN DAN METODE

Tempat dan Waktu
Penelitian

dilaksanakan

di Laboratorium Bakteriologi Tumbuhan,

Departemen Proteksi Tanaman dan Kebun Percobaan Leuwikopo, Fakultas
Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Penelitian berlangsung dari bulan April
sampai Agustus 2010.

Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan adalah buah pepaya sakit yang bergejala busuk
basah varietas IPB 6, tanaman tembakau, dan umbi kentang. Media biakan yang
digunakan Nutrient Agar (NA), Potato Dectrose Agar (PDA), dan Luria Broth
(LB). Media yang digunakan untuk pengujian adalah media King’s B,
Oksidatif/Fermentatif (O/F), Trypenil Tetrazolium Chloride (TZC), Yeast Extract
Dectrose CaCO3 Agar (YDCA), Phospate Buffer Saline (PBS), KOH 3%, alkohol
70%, Malachite green 5% , Safranin 0,5%, parafin oil, akuades, kapas, silk dan
tissu.
Alat-alat yang digunakan: jarum suntik, autoklaf, bunsen, cawan petri,
gelas bite, gelas obyek, gelas ukur, lup inokulasi, kantong plastik tahan panas,
labu erlenmeyer, mikroskop cahaya, lampu UV, pipet mikrometer, pisau, dan
inkubator bergoyang.
Metode Penelitian
Survei Buah Pepaya Sakit
Survei buah pepaya dilakukan pada buah pepaya yang menimbulkan gejala
busuk basah. Buah pepaya tersebut diamati kemudian dibawa ke Laboratorium
Bakteriologi Tumbuhan untuk diidentifikasi bakteri dan cendawan yang
berasosiasi pada buah yang bergejala. Survei dilakukan beberapa kali, namun
pengambilan sampel dilakukan sebanyak dua kali.

6

Isolasi Buah Bergejala Busuk Basah
Sampel buah pepaya yang menimbulkan gejala busuk basah diisolasi
dengan menggunakan pengenceran berseri. Bagian yang diambil untuk diisolasi
adalah bagian antara sakit dan sehat. Bagian tersebut dibersihkan dengan air steril
dan dimasukkan ke erlemeyer yang berisi 100 ml air steril dan PBS (Phospate
Buffer Saline) dengan perbandingan 1:1 dan dishaker 150 rpm selama semalam
(over night). Larutan PBS (Phospate Buffer Saline) merupakan larutan penyangga
yang dapat mempertahankan pH agar tetap netral atau berada pada pH 7. Sebagian
besar bakteri tumbuh dengan baik pada media dengan pH 7 (Hadioetomo 1990).
Pengenceran berseri dilakukan terhadap suspensi buah hingga pengenceran 10-6.
Setiap 0,1 ml suspensi ditumbuhkan dengan metode sebar menggunakan gelas
bite pada media Nutrient Agar (NA) dan Potato Dextrose Agar (PDA) kemudian
diidentifikasi bakteri dan cendawan yang muncul.

Identifikasi Bakteri
Bakteri yang muncul dari hasil isolasi kemudian dilakukan identifikasi
berdasarkan kunci identifikasi Schaad et al. (2001) dan Brown et al. (1980)
dengan beberapa pengujian yaitu uji Gram, hipersensitivitas pada daun tembakau,
fluoresensi pada media King’s B, pembusukan kentang, uji Oksidatif/fermentatif,
uji pertumbuhan pada media Yeast Extract Dextrose CaCO3 Agar (YDCA),
pertumbuhan pada media Trypenil Tetrazolium Chloride (TZC), dan uji
pembentukan endospora.
Uji Gram
Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui reaksi Gram isolat bakteri yang
diuji. Isolat bakteri diambil dengan menggunakan lup inokulasi dan diletakkan
pada gelas obyek yang telah ditetesi KOH 3% lalu dicampurkan dan diamati.
Apabila terbentuk lendir dan terasa lengket ketika jarum inokulasi diangkat maka
hal ini menunjukkan bahwa bakteri tersebut merupakan bakteri golongan Gram
negatif dan sebaliknya jika tidak terbentuk lendir dan tidak lengket maka bakteri
tersebut adalah bakteri golongan Gram positif.

7

Uji Hipersensitivitas
Uji hipersensitivitas pada daun tembakau bertujuan mengetahui sifat
patogenik dari bakteri uji. Isolat bakteri yang diuji dibiakan pada 5 ml media LB
(Luria Broth) sehingga menjadi suspensi bakteri, dishaker 100 rpm selama 20 jam
dan diinokulasikan pada daun tembakau dengan cara disuntikan pada permukaan
bawah daun sampai terlihat agak kebasahan. Apabila setelah 24-48 jam
menunjukkan gejala nekrosis pada bagian daun tembakau tersebut, maka reaksi
tersebut adalah positif, dan sebaliknya jika tidak menunjukan gejala maka reaksi
tersebut adalah negatif. Kontrol dengan menggunakan media LB tanpa diberi
bakteri.

Uji Fluoresensi
Pengujian Isolat bakteri yang diremajakan pada media NA diambil dengan
menggunakan jarum inokulasi lalu digoreskan pada media King’s B dan
diinkubasi selama 24-48 jam. Pengamatan dilakukan di bawah sinar Ultra Violet
(UV). Bakteri yang mengeluarkan warna hijau-kebiruan dan berpendar
merupakan bakteri Pseudomonas dari golongan “fluorescent”. Pengujian ini
bertujuan untuk membedakan bakteri Pseudomonas dengan bakteri yang lain.

Uji Pembusukan Kentang
Bahan yang digunakan dalam pengujian ini adalah umbi kentang yang
mentah. Alat-alat yang digunakan disterilisasi dengan alkohol 70% untuk
mengurangi kontaminasi. Umbi kentang dikupas, dicuci dengan air bersih, dan
diiris, selanjutnya irisan kentang tersebut diletakkan di dalam cawan steril yang
telah dialasi dengan kertas saring yang steril dan telah dilembabkan. Biakan
bakteri digoreskan di atas permukaan kentang, sebagai kontrol irisan kentang
tidak diberi biakan bakteri. Reaksi positif ditunjukan dengan adanya pembusukan
pada kentang dan terdapat lendir setelah diinkubasi selama 24-48 jam.

8

Uji Oksidatif/Fermentatif
Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui sifat aerob dan anaerob dari
bakteri. Pengujian ini dilakukan dengan menumbuhkan bakteri pada media
oksidatif/fermentatif (pH 7.2). Masing-masing bakteri diinokulasi pada 2 tabung
yang berisi media O/F dengan cara ditusukkan dan diberi glukosa 5% sebanyak 1
ml. Salah satu tabung reaksi diberi perlakuan dengan menambahkan parafin oil
steril sebanyak 1 ml sedangkan tabung lainnya tidak ditambahkan parafin oil.
Kontrol pada pengujian ini berupa media O/F yang tidak diberi perlakuan bakteri.
Apabila terjadi perubahan warna menjadi kuning pada kedua media baik yang
ditambahkan dan tidak ditambahkan parafin oil, hal ini menunjukkan bahwa
bakteri tersebut bersifat fermentatif. Sebaliknya jika terjadi perubahan warna
menjadi kuning hanya pada tabung yang tidak diberi parafin oil, hal ini
menunjukkan bahwa bakteri tersebut bersifat oksidatif.

Uji Tumbuh pada Media TZC
Isolat bakteri yang berumur 24 jam ditumbuhkan pada media TZC yang
telah ditambahkan 2,3,5 Tryphenil Tetrazolium Chloride 1% (b/v) dengan cara
menggoreskan bakteri pada media. Media ini bertujuan untuk mengetahui bakteri
uji bersifat avirulen atau virulen.

Uji Tumbuh pada Media YDCA
Pengujian ini bertujuan membedakan bakteri Erwinia sp. dan Pantoea sp.
Isolat bakteri yang berumur 24 jam ditumbuhkan pada media YDCA dengan cara
menggoreskan bakteri pada media. Pengamatan dilakukan setelah inkubasi 24-48
jam, dengan melihat warna koloni yang terbentuk yaitu warna putih atau kuning
pada media YDCA. Apabila bakteri menunjukkan warna kuning maka reaksi
tersebut adalah positif.

Uji Pembentukan Endospora
Pengujian pembentukan endospora dilakukan pada isolat bakteri yang
bersifat Gram positif baik anerob maupun aerob. Pengujian ini dilakukan untuk

9

mengetahui keberadaan endospora pada sel bakteri. Satu lup suspensi bakteri
dicampurkan dengan akuades steril, ditetesikan pada gelas obyek dan
dikeringanginkan, lalu ditetesi dengan malachite green 5% dan didiamkan selama
10 menit hingga mengering. Gelas obyek tersebut dicuci dengan air mengalir dan
dikeringanginkan kembali, selanjutnya diteteskan larutan safranin 0,5% diamkan
selama 15 detik, lalu dibilas dengan air dan dikeringanginkan di atas bunsen.
Pengamatan dilakukan di bawah mikroskop cahaya, sel bakteri terlihat berwarna
merah.
Identifikasi Cendawan
Identifikasi cendawan dilakukan dengan mengambil cendawan yang tumbuh
pada media PDA hasil isolasi atau cendawan yang diperoleh langsung pada buah
pepaya yang bergejala. Cendawan yang telah diperoleh dibuat preparat slide pada
gelas obyek. Identifikasi cendawan dilakukan dengan pengamatan di bawah
mikroskop cahaya dan berdasarkan kunci identifikasi yang dikemukakan oleh
Watanabe (1993) dan Domsch et al. (1993).

10

HASIL DAN PEMBAHASAN

Survei Buah Sakit
Survei dilakukan di kebun percobaan Leuwikopo, Fakultas Pertanian,
Institut Pertanian Bogor, di lahan ini terdapat 69 tanaman pepaya. Kondisi lahan
tidak terawat karena banyak terdapat gulma di sekitar area pertanaman. Hasil
survei menunjukkan bahwa buah pepaya IPB 6 yang bergejala busuk basah
ditandai dengan bercak kebasahan yang melebar di sekitar buah dan buah terasa
lunak saat dipegang. Namun, buah yang bergejala busuk buah tidak terlalu banyak
ditemukan. Menurut penelitian Widianti (2009) tanaman pepaya IPB 6 lebih tahan
terhadap penyakit busuk basah.

Gambar 1. Sampel buah bergejala busuk basah yang masih berada di pohon

Gambar 2. Sampel buah yang bergejala

11

Isolasi Buah Bergejala Busuk Basah

Gambar 3. Bagian buah yang diisolasi antara daerah yang sehat dan sakit

Hasil isolasi dari buah pepaya bergejala busuk basah yang ditumbuhkan
pada media PDA dan NA diperoleh enam jenis bakteri sebagai berikut: bakteri
(A) berwarna putih dengan bentuk bulat dengan tepian tidak beraturan, elevasi
timbul; bakteri (B) berwarna kekuningan dengan bentuk bulat; elevasi cembung;
dan tepian tak beraturan, bakteri (C) berwarna putih bening bentuk bulat; dengan
tepian licin; dan elevasi cembung, bakteri (D) berwarna putih bentuk bulat dengan
tepian tak beraturan; elevasi cembung, bakteri (E) berwarna kekuningan dengan
bentuk bulat; tepian tak beraturan; elevasi cembung; dan bakteri (F) berwarna
kuning dengan bentuk bulat; tepian tak beraturan; elevasi cembung. Cendawan
yang tumbuh pada media PDA memiliki meselium berwarna hitam.

Identifikasi Bakteri
Uji Gram
Hasil isolasi bakteri yang berasal dari buah bergejala busuk basah
diperoleh enam macam isolat bakteri. Berdasarkan pengujian dua isolat
menunjukkan bakteri Gram negatif, sedangkan empat bakteri lain menunjukkan
Gram positif. Bakteri Gram negatif ditandai dengan adanya lendir dan terasa
lengket ketika jarum inokulasi diangkat, dan bakteri Gram positif tidak
terbentuknya lendir. Menurut Schaad (2001) bakteri Gram negatif mempunyai
dinding sel yang lebih tipis dibandingkan dengan bakteri Gram positif sehingga
ketika dicampur KOH 3% lup inokulasi akan terasa lengket karena bakteri

12

menghasilkan lendir. Larutan KOH 3% memiliki viskositas lebih tinggi
dibandingkan dengan sel bakteri sehingga cairan dari dalam sel akan keluar
seperti yang terjadi pada bakteri Gram negatif (Schaad 2001).

Gambar 4. Reaksi Bakteri Gram negatif dan bakteri Gram positif

Uji Hipersensitivitas
Berdasarkan pengamatan dan pengujian dari semua bakteri yang didapat
baik bakteri yang bersifat Gram negatif maupun bakteri yang bersifat Gram
positif, dua bakteri Gram positif menunjukkan reaksi positif, sedangkan empat
isolat menunjukkan reaksi negatif. Reaksi positif ditandai dengan menimbulkan
gejala nekrosis pada daun tembakau. Kontrol pengujian dilakukan tanpa
menggunakan bakteri. Bakteri yang dapat menunjukkan reaksi positif dengan
munculnya gejala nekrosis pada daun tembakau yang diinokulasi bakteri uji
merupakan bakteri yang bersifat patogen (Lelliot & Stead 1997).

Gambar 5. Reaksi positif dan kontrol uji hipersensitif pada daun tembakau

13

Uji Fluoresensi
Berdasarkan hasil pengujian terhadap isolat bakteri, semua isolat bakteri
yang diuji tidak mengeluarkan pigmen “fluorescent” ketika diamati di bawah
sinar ultraviolet. Berdasarkan uji ini maka isolat yang diperoleh bukan merupakan
bakteri Pseudomonas sp, karena bakteri Pseudomonas sp. akan menunjukkan
warna kebiruan pada media ketika diuji di bawah sinar UV (Kiewnick dan Sands
2001).

Gambar 6. Reaksi negatif dan reaksi positif pada media King’s B

Uji Pembusukan Kentang
Semua isolat bakteri yang digoreskan pada permukaan umbi kentang,
menunjukkan reaksi negatif. Reaksi negatif yang terjadi pada pengujian umbi
kentang ditandai dengan tidak membusuknya umbi dan tidak terbentuknya lendir
pada umbi. Walaupun pada pengujian hipersensitivitas terjadi reaksi positif
dengan munculnya gejala nekrosis pada daun tembakau, hal ini menunjukkan
bahwa tidak semua bakteri yang bersifat patogen pada pengujian pembusukan
kentang. Menurut Kiewnick dan Sand (2001) bakteri yang mempunyai enzim
pektolitik yang dapat merusak umbi kentang. Salah satu contoh bakteri yang tidak
merusak permukaan umbi kentang adalah Bacillus sp.

14

Gambar 7. Reaksi negatif uji pembusukan pada kentang

Uji Oksidatif/Fermentatif
Bedasarkan uji oksidatif/fermentatif tiga isolat bakteri menunjukkan reaksi
fermentatif atau bakteri anaerob (dapat tumbuh tanpa adanya oksigen) dan tiga
isolat bakteri menunjukkan reaksi oksidatif atau bakteri aerob (dapat tumbuh
dengan adanya oksigen). Bakteri fermentatif ditunjukkan dengan adanya
perubahan warna menjadi kuning pada kedua tabung baik pada tabung yang diberi
parafin oil maupun yang tidak, sedangkan bakteri oksidatif mengalami perubahan
warna menjadi kuning hanya pada tabung yang tidak diberi parafin oil (Kerr
1980). Perlakuan kontrol tidak mengalami perubahan warna baik pada tabung
yang diberi parafin oil maupun tabung yang tidak diberi parafin oil.

Gambar 8. Kontrol, reaksi oksidatif, dan reaksi fermentatif

Uji Tumbuh pada Media TZC
Berdasarkan pengujian pada media TZC dari enam isolat bakteri yang
diujikan, satu isolat bakteri termasuk bakteri virulen ditandai dengan bentuk

15

koloni yang agak membesar, berlendir, berwarna merah dibagian tengahnya
dengan tepian putih. Menurut Kerr (1980) koloni bakteri Ralstonia solanacearum
merupakan koloni virulen dengan bentuk agak membesar, berlendir, tepian putih,
dan bagian tengah berwarna pink sampai merah orange. Media TZC merupakan
media selektif yang dapat membedakan antara bakteri avirulen dengan bakteri
virulen.

Gambar 9. Bakteri virulen dan avirulen

Uji Tumbuh pada Media YDCA
Berdasarkan hasil isolasi dua isolat yang bersifat fermentatif menunjukkan
warna kuning pada media NA, satu isolat menunjukkan warna kuning pada media
YDCA dan isolat yang lain berwarna krem. Media YDCA merupakan media yang
dapat membedakan pertumbuhan bakteri Erwinia sp. dengan bakteri Pantoea sp.
Bakteri Pantoea sp. menunjukkan warna kuning pada media YDCA karena
bakteri ini mempunyai pigmen warna kuning saat ditumbuhkan pada media
YDCA, sehingga satu isolat tersebut diidentifikasi sebagai bakteri Pantoea sp.
(Schaad 2001).

16

Gambar 10. Isolat bakteri berwarna kuning dan isolat bakteri berwarna kream
Bakteri Pantoea sp. merupakan bakteri Gram negatif yang berbentuk
batang, bersifat anaerob fakultatif. Kelompok bakteri ini dapat dibedakan dengan
kelompok bakteri Erwinia sp. dengan melihat produksi pigmen berwarna kuning
yang dihasilkan oleh kedua bakteri tersebut. Bakteri Pantoea sp. menghasilkan
pigmen berwarna kuning dibandingkan dengan bakteri Erwinia sp. Faktor lain
yang dapat membedakan antara kedua bakteri tersebut adalah bakteri Pantoea sp.
tidak dapat mendegradasi pektat dan tidak memproduksi urease (Coplin & Kado
dalam Schaad 2001).
Uji Pembentukan Endospora
Berdasarkan hasil pengujian terhadap empat isolat bakteri yang bersifat
Gram positif dan bersifat aerob maupun anaerob, semua isolat bakteri membentuk
endospora. Spora bakteri berwarna hijau kebiruan pada bagian ujung sel yang
terlihat di bawah mikroskop. Bakteri yang membentuk endospora yang bersifat
aerob dan anaerob tersebut adalah bakteri Bacillus sp. baik yang bersifat patogen
maupun yang non patogen. Bakteri Bacillus sp. merupakan salah satu bakteri yang
memilki spora (Chun dan Vidader dalam Schaad 2001).
Bakteri Bacillus sp. merupakan bakteri Gram-positif yang bersifat aerob
atau anerob fakultatif dan membentuk endospora sebagai alat pertahanan pada
kondisi yang tidak menguntungkan (Chun dan Vidaver dalam Schaad 2001).
Endospora dibentuk di dalam sel, bakteri ini diduga sebagai bakteri yang
menghasilkan antibiotik, dan kebanyakan bersifat saprofit di dalam tanah.

17

Tabel 1. Hasil identifikasi bakteri yang berasosiasi dengan busuk basah pada buah
pepaya
No.

Pengujian

A

B

C

D

E

F

1.
2.
3.

Uji Gram
Uji Hipersensitivitas
Uji Tumbuh pada
Media YDCA
Uji Tumbuh pada
Media TZC

+
+

+
-

-

+
+

+
-

-

-

-

-

-

-

+

-

-

+

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

O

F

O

O

F

F

+

+

-

+

+

-

B. sp.

B. sp.

R. sp.

B. sp.

B. sp.

P. sp.

4.
5.
6.
7.
8.

Uji Pembusukan
Kentang
Uji Fluoresensi
Uji
Oksidatif/Fermentatif
Uji Pembentukan
Endospora
Kemungkinan Bakteri

Keterangan: B. sp. = Bacillus sp., P. sp. = Pantoea sp.

Identifikasi Cendawan
Selain bakteri yang diperoleh dari hasil isolasi yang berasal dari buah
pepaya bergejala busuk basah dan pengamatan langsung dari buah tersebut,
beberapa cendawan juga diperoleh antara lain adalah Aspergillus niger,
Colletotrichum sp., Fusarium sp., Thielaviopsis sp., Penicillium sp., dan Mucor
sp.

Gambar 11. Bentuk cendawan Aspergillus niger

18

Bentuk konidia dari A. niger adalah berbentuk bulat kecil berwarna
kecoklatan dengan ujung konidiofora berbentuk bulat. Cendawan A. niger tumbuh
pada media PDA dengan miselium berwarna hitam. Cendawan Aspergillus sp.
merupakan cendawan dari kelas Deuteromycetes yang sebagian besar bersifat
saprofitik. Cendawan Aspergillus dapat menyebabkan infeksi, alergi atau
keracunan baik pada tumbuhan, hewan, bahkan pada manusia (Anonim 2003).

Gambar 12. Konidia Thielaviopsis sp. dan Fusarium sp. (mikro (a) dan makroonidia (b))

Sementara bentuk konidia yang diperoleh dari cendawan Fusarium sp.
berbentuk seperti bulan sabit, bersepta, dan hialin, memiliki mikrokonidia dan
makrokonidia (Gambar a dan b). Koloni cendawan Fusarium sp. biasanya cepat
tumbuh, dengan warna pucat atau berwarna cerah (tergantung pada spesies).
Makro dan mikro konidia hialin, berbentuk sabit, bersepta, sebagian besar dengan
sel apikal memanjang (Ellis D 2010). Konidiofor cendawan Thielaviopsis
berwarna coklat pucat, sedangkan konidia hialin atau coklat dan bersel satu.
Cendawan Thielaviopsis sp. merupakan cendawan yang bersifat saprofit fakultatif,
bersifat parasit pada tanaman kurma, tebu, nenas, dan lain-lain. Konidiofor berada
pada cabang-cabang lateral yang pendek. Konidia berbentuk seperti batang,
berwarna gelap, dan memiliki klamidospora yang berdinding tebal (Streets 1972).

19

b

a

Gambar 13. Konidia Colletotrichum sp. (a) dan Mucor sp. (b)

Pada tanaman pepaya terdapat cendawan Colletotrichum gloeosporioides
(Penz) Sacc, identik dengan C. papayae (P. Henn) yang merupakan penyebab
penyakit antraknosa. Bentuk konidianya seperti tabung, hialin, tidak bersepta, dan
bersel satu dengan ujung membulat (Semangun 2004). Namun pada penelitian ini
ditemukan konidia yang berbentuk sabit, hialin, bersel satu, dan tidak bersepta
(Gambar 13a). Menurut Semangun (1991) cendawan Colletotrichum mempunyai
banyak ras fisiologis, yang dalam hal ini memerlukan penelitian lebih lanjut untuk
menentukan spesiesnya. Oleh sebab itu dalam penelitian ini hanya dicantumkan
Colletotrichum sp.
Bentuk konidia cendawan Mucor sp. (Gambar 13b) bulat hampir sama
dengan Rhizopus sp. namun pada Mucor sp. tidak ditemukan akar stolon (rhizoid),
dan konidia hialin. Cendawan Mucor sp. bersifat saprofit atau parasit pada
tanaman, manusia, dan binatang. Spora aseksual cendawan nonmotil yang
diproduksi dalam sporangia. Cendawan ini penyebab kapang roti, busuk pada
buah-buahan dan sayuran di tempat penyimpanan (Sinaga 2006).
Cendawan Penicillium sp. merupakan cendawan Deuteromycetes yang
memiliki konidiofor dengan fialid (sel pembawa spora) membentuk struktur
seperti sikat atau sapu lidi. Cendawan ini banyak ditemukan pada buah-buahan
pascapanen atau benih yang rusak dan dapat menyebabkan busuk kapang biru,
bersifat saprofit maupun parasit pada tumbuhan. Cendawan ini mampu
menghasilkan antibiotik yang berguna dalam bidang kedokteran (Isarmanto 2009).

20

KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan
Bakteri yang berasosiasi dengan busuk basah buah pepaya adalah Bacillus
sp., Pantoea sp., dan Ralstonia sp. Cendawan yang ditemukan adalah A. niger,
Colletotrichum sp., Mucor sp., Thielaviopsis sp., Penicillium sp., dan Fusarium
sp. Bakteri Bacillus sp. yang ditemukan ada yang bersifat patogen dan
nonpatogen, sedangkan bakteri Pantoea sp. yang ditemukan tidak termasuk
bakteri patogen.
Saran
Perlu dilakukan pengujian lanjutan untuk mengetahui bakteri nonpatogen
yang kemungkinan merupakan bakteri antagonis di dalam buah pepaya yang
bergejala busuk basah.

21

DAFTAR PUSTAKA

[Ellis D]. 2010. Cendawan Fusarium sp. http://www.skripsi//fusariumsp.htm [2
Oktober 2010].
[FAO]. Food and Agriculture Organization. 2009. Top Production of Papayas in
2007. http://www.fao.org/corp/statistics/en/. [27 Desember 2010].
[Isarmanto]. 2009. Jamur/Fungi. http://www.jamur-fungi.html. [2 Oktober 2010].
[Ramdan].
2010.
Fusarium
oxysporum.
oxysporum.htm [2 Oktober 2010].

http://www.skripsi/Fusarium

[Suryowihardi]. 2010. Khasiat Buah Pepaya. http://www.purwakarta.org [23
Desember 2010].
Brown JF, Kerr A, Morgan FD, Parbey IH. 1980. Plant Protection. Australia:
Australian Vice-Chancelors Committee.
Chun W, Vidader AK. 2001. Gram-Positive Bacteria-Bacillus. Di dalam: Schaad
NW, Jones JB, and Chun W, editor. Laboratory Guide for Identification of
Plant Pathogenic Bacteria. Ed ke-3. Minnesota: APS Press.
Coplin DL, Kado CI. 2001. Gram-Negatif Bacteria-Pantoea. Di dalam: Schaad
NW. Jones JB, and Chun W, editor. Laboratory Guide for Identification of
Plant Pathogenic Bacteria. Ed ke-3. Minnesota: APS Press.
Ferfinia A. 2010. Eksplorasi bakteri dan cendawan rizosfer yang berasosiasi
dengan penyakit busuk basah pada batang papaya (Carica papaya L.) di
Pasir Kuda, desa Ciomas, Bogor [skripsi]. Bogor: Fakultas Pertanian,
Institut Pertanian Bogor.
Hadioetomo RS. 1990. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta: Gramedia.
Kalie M, Baga. 1999. Bertanam Pepaya. Jakarta: Penebar Swadaya.
Martoredjo T. 2009. Ilmu Penyakit Pascapanen. Ed ke-1. Jakarta: Bumi Aksara.
209:109-111.
Rukmana R. 2008. Bertanam Buah-buahan Di Perkarangan. Yogyakarta:
Kanisius.
Sastrahidayat. 1991. Budidaya Berbagai Jenis Tanaman Tropika. Surabaya:
Usana Offset Printing.
Schaad NW, Jones JB, Chun W. 2001. Laboratory Guide for Identification of
Plant Pathogenic Bacteria. Ed ke-3. Minnesota: APS Press.

22

Semangun H. 1991. Penyakit-Penyakit Tanaman Pangan Di Indonesia.
Yogyakarta: Gajah Mada University Press.
Semangun H. 2004. Penyakit-Penyakit Tanaman Hortikultura Di Indonesia.
Yogyakarta: Gajah Mada University Press.
Semangun H. 2006. Pengantar Ilmu Penyakit Tumbuhan. Yogyakarta: Gajah
Mada University Press.
Sinaga Meity Suradji. 2006. Dasar-dasar Ilmu Penyakit Tumbuhan. Jakarta:
Penebar Swadaya.
Streets RB. 1980. Diagnosis Penyakit Tanaman. Santoso Iman, penerjemah. Gede
Jaya. Terjemahan dari: Diagnosis of Plant Diseases.
Sunarjono H. 2005. Berkebun 21 Jenis Tanaman Buah. Jakarta: Penebar Swadaya
Verheij, Coronel, editor. 1997. Prosea Sumber Daya Nabati Asia Tenggara 2
Buah-buahan Yang Dapat Dimakan. Jakarta: Gramedia Pustaka.
Widiati R. 2009. Identifikasi bakteri penyebab busuk basah pada batang pepaya
(Carica papaya L.) [skripsi]. Bogor: Fakultas Pertanian, Institut Pertanian
Bogor.
Watanabe T. 1993. Pictorial Atlas of Soil and Seed Fungi Morphologies of
Cultured Fungi and Key to Species. USA: Lewis Publisher.
Yudiarti T. 2007. Ilmu Penyakit Tumbuhan. Yogyakarta: Graha Ilmu.

23

LAMPIRAN

24

Lampiran 1. Komposisi bahan untuk isolasi dan identifikasi cendawan dan bakteri
(Schaad et al. 2001 dan Brown et al. 1980)
Tabel 2. Komposisi bahan media King’s B 100%
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Nama bahan
Protease pepton No. 3
Glycerol
K2HPO4
MgSO4.7H2O
Agar
Akuades

Jumlah
20.0 g
15.0 ml
1.5 g
1.5 g
15.0 g
1.0 L

Tabel 3. Komposisi bahan media LB (Luria Broth)
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
Tryptone
10.0 g
2.
NaCl
5.0 g
3.
Yeast Extract
5.0 g
4.
Akuades
1.0 L
Tabel 4. Komposisi bahan media NA (Nutrient Agar)
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
Beef extract
3.0 g
2.
Peptone
5.0 g
3.
Agar
15.0 g
4.
Akuades
1.0 L
Tabel 5. Komposisi bahan media Oksidatif/Fermentatif
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
Peptone
2.0 g
2.
KH2PO4
0.3 g
3.
NaCl
5.0 g
4.
Agar
3.0 g
5.
Bromotimol Biru
3.0 ml
6.
Akuades
1.0 L
pH 7.2 sebelum ditambah agar
Tabel 6. Komposisi bahan media PDA (Potato Dextrose Agar)
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
Kentang
200 g
2.
Dextrose
10.0 g
3.
Agar
15.0 g
4.
Akuades
1L

25

Tabel 7. Komposisi bahan media Uji Gram
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
KOH
3%
Tabel 8. Komposisi bahan media TZC Agar (Tryphenil Tetrazolium Chloride 1%)
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
Pepton
10.0 g
2.
Glukosa
10.0 g
3.
Casamino acid
1.0 g
4.
Agar
18.0 g
5.
Akuades
1.0 L
6.
Tryphenil Tetrazolium Chloride
1% (5 ml /L)
Tabel 9. Komposisi bahan media Yeast Extract Dextrose CaCO3 Agar
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
Yeast Extract
10.0 g
2.
Dextrose
20.0 g
3.
CaCO3
20.0 g
4.
Agar
15.0 g
5.
Akuades
1.0 L
Tabel 10. Komposisi Larutan PBS (Phospate Buffer Saline)
No.
Nama bahan
Jumlah
1.
NaCl
80.0 g
2.
KH2PO4
2.0 g
3.
Na2HPO4
11,5 g
4.
KCl
2.0 g
5.
Akuades
1.0 L

26

Lampiran 2. Kunci Identifikasi Bakteri (Schaad et al. 2001)
Gram Reaction

(-)
Erwinia, Pantoea, Xylophilus, Acidovorax, Burkholderia
Ralstonia, Pseudomonas, Xanthomonas, Agrobacterium

(+)
Coryneform, Bacillus,
Clostridium,Streptomyces

Anaeroobic Growth

Endospored Formed

(+)

(-)

(+)

(-)

Erwinia, Pantoea

Xylophilus, Acidovorax, Burkholderia Bacillus
Ralstonia, Pseudomonas,
Clostridium
Xanthomonas, Agrobacterium

Colonies Yellow
on YDCA

Fluorecent Pigment on KB Anaerobic growth Aerial
Mycellium

(+)

(-)

Pantoea Erwinia

(+)

(-)

(+)

Coryneform
Streptomyces

(-)

Pseudomonas

Xylophilus
Clostridium Bacillus (+)
(-)
Acidovorax,
Stretomyces
Burkholderia,
Coryneform
Agrobacterium,Ralstonia,Xanthomonas

Colonies Yellow (YDCA dan NA)
(+)
Xanthomonas, Xylophilus

(-)
Agrobacterium, Acidovorax,
Burkholderia, Ralstonia

D1M

(+)
Agrobacterium

(-)
Acidovorax,
Ralstonia
Burkholderia

Argenine+Betanine

(+)
Burkholderia

(-)
Ralstonia,
Acidovorax

Growth 400C
(+)
Acidovorax

(-)
Ralstonia

27

Lampiran 3. Kunci Identifikasi Bakteri (Brown et al. 1980)

Key to assist in the screening of bacteria isolate from plants but which have
not been tested for pathogenicity
1.

Gram positive ………………………………………………………………...2
Gram negative ...……………...………………………………………………5

2.

Cocci ………………………….Micrococcus or Sarcina, not a plant pathogen
Rods or cocco- bacilli ……….………………………………………………..3

3.

Spores present (visual or heat test) Bacillus
Spores absent …………………………………………………………………4

4.

Cells more than 0.8 µm wide …………………...not a plant pathogen, discard
Cells less than 0.8 µm wide ………………Corynebacterium, Brevibacterium

5.

Cocci (all cells round) .……….Micrococcus or Sarcina, not a plant pathogen
Rods or coccu-bacilli …………………………………………………………6

6.

Spores present (visual or heat test) Bacillus
Spores absent …………………………………………………………………7

7.

Colonies whitish, or grayish to buff ………………………………………….8
Colonies yellow ...……………...……………………………………………16
Colonies other colours ...……………...…………………………………….18

8.

Produces fluorescein on Medium B of King et. al …………………………...9
Not fluoresceint pigmen on King’s Medium B ……….…………………….10

9.

Kovacs oxidase negative …………..Pseudomonas, probably a plant pathogen
Kovacs oxidase positive ….Pseudomonas, some plant pathogens in this group

10. Kovacs oxidase negative ……………………………………………………11
Kovacs oxidase positive ….............................................................................15
11. Acid from glucose acrobically and anaerobically …………………………..12
Acid from glucose acrobically only …Achromobacter, Acinebacter, and other
non

plant

pathogen.

Some

less

common plant pathogens many key out
here
No acid from glucose ……………………………………………………….14
12. Soft rots potato tissue .………...............................Erwinia (caratovora group)

28

No soft rot potato tissue …………………………………………………….13
Acid from glucose aerobically and anaerobically …Azotomonas, Aeromonas,
not a plant pathogen.
12. Acisd from glucose aerobically only .………............Pseudomonas, includes
some

plant

pathogen,

Agrobacterium
No acid from glucose …………………………......Alcaligenes, Pseudomonas
(few plant pathogens)

29

Lampiran 4. Kunci Identifikasi Cendawan (Watanabe 1993)

Key to sporodochium-forming fungi
1. Setae

on sporodochia formed…………………………………….2
not formed………………………………………………...4

2. Setae

curved…………………………………………Sarcopodium
not curved…………………………………………………3

3. Sporodochia

well differentiated…………………………………Volutella
not so……………………………………….Colletotrichum

4. Conidia

simple……………………………………………………...5

5. Conidia

with filiform appendages………………………………….6

6. Conidia

cylindrical. ……………………….................Hyphodiscosia
elliptical with central dark cells
and hyaline end cells……………………………..Pestalotia

Key to Phialosporae
1. Conidia

over 2-celled……………………………………………….2
1-celled…………………………………………………….4

2. Conidiophores

penicilliate with stipe and terminal
vesicles conidia cylindrical……………….Cylindrocladium
simple, conidia not cylindrical…………………………….3

3. Conidia

lunate with a foot cell…………………………….Fusarium
cylindrical, without a foot cel………………Cylindocarpon

4. Conidiophores

with inflated apical cells bearing
numerous phialides……………………………..Aspergillus
without an inflated apical cell……………………………..5

5. Conidia

pigmented…………………………………………………6
hyaline…………………………………………………....10

6. Conidiophores

poorly developed………………………………………….7
well developed…………………………………………….8

7. Conidia

aggregated in a mass…………………………..Phialophora
catenulate……………………………………..Torulomyces

30

8. Conidia

branched…………………………………………………..9
almost unbranched……………………………Stachybotrys

9. Conidia

catenulate……………………………………...Phyalomyces
aggregated in a mass………………………….