II. AKTIVITAS PROMOTER ß-AKTIN IKAN MEDAKA PADA IKAN LELE Clarias sp
ABSTRAK
Promoter berperan penting dalam transgenesis sebagai pengatur ekspresi gen yang diintroduksi. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui
aktivitas promoter β-aktin dari ikan medaka mBP pada ikan lele Clarias sp.
sebagai langkah awal dalam rangka produksi ikan lele transgenik dengan karakter yang berguna bagi akuakultur. Aktivitas promoter diketahui dengan cara
mengamati ekspresi gen penyandi protein berpendar hijau green fluorescent protein, GFP pada embrio hasil mikroinjeksi. Konstruksi gen dalam bentuk
plasmid mBP-GFP dengan konsentrasi 50 µgml . Konstruksi gen tersebut diinjeksikan secara terpisah ke dalam blastodisk embrio ikan lele fase 1
sel. Jumlah telur yang diinjeksi untuk konstruksi gen adalah sebanyak 30 embrio dan dilakukan 2 pengulangan. Telur diinkubasi pada akuarium dengan
suhu air sekitar 28
o
C. Ekspresi gen GFP diamati menggunakan mikroskop fluoresen Olympus SZX 16 dimulai pada jam ke-4 setelah fertilisasi dan
dilanjutkan setiap 2 jam sekali hingga ekspresi GFP tidak terdeteksi. Derajat kelangsungan hidup embrio DKH-e dan derajat penetasan DP dianalisis
sebagai data pendukung. DKH-e dihitung sebelum telur menetas, sedangkan DP dihitung ketika semua telur telah menetas. Data dianalisis secara deskriptif. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa DKH-e 63,33±3,34 dan DP 63,63± 10,03 kontrol tidak diinjeksi lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan
injeksi. DKH-e yang diinjeksi dengan
β-aktin-GFPadalah 25,00±1,67. Nilai DP untuk
β-aktin-GFP adalah 18,34±1,65. Persentase embrio yang mengekspresikan gen GFP adalah 3,3 ±0,0. Puncak ekspresi gen GFP yang
dikendalikan oleh promoter β-aktin adalah pada jam ke-10. Ekspresi gen GFP
tidak tampak lagi pada saat telur menetas. Kesimpulannya adalah bahwa promoter
β-aktin dari ikan medaka dapat aktif mengendalikan ekspresi gen asing pada ikan lele, sehingga promoter tersebut dapat digunakan dalam pembuatan
ikan lele transgenik. Kata kunci: ikan lele, GFP, mikroinjeksi, promoter
II. ACTIVITY OF MEDAKA ß-ACTIN PROMOTER IN CATFISH Clarias sp ABSTRACT