Metode Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dalam tiga tahap, yaitu: 1.
Efek insulinotropik sambiloto pada BRIN-BD11. 2.
Pengaruh sambiloto pada sekresi insulin fase cepat BRIN-BD11. 3.
Mekanisme kerja sambiloto sebagai insulin sekretagog.
1. Efek Insulinotropik
sambiloto pada BRIN-BD11.
Untuk dapat menilai efek insulinotropik sambiloto pada BRIN-BD11, dilakukan inkubasi BRIN-BD11 dalam berbagai konsentrasi sambiloto. Setelah
jumlah sel BRIN-BD11 dalam botol kultur sudah mencukupi, dilakukan inkubasi BRIN-BD11 passage 40-50 selama 24 jam pada lempeng plastik dengan 24
buah sumur merek Costar, USA, dengan konsentrasi 300.000 sel di dalam masing masing sumur dalam media RPMI 1640 sama dengan media yang dipakai selama
kultur. Setelah inkubasi selama 24 jam, diharapkan sudah terjadi penempelan BRIN-BD11 pada dinding dasar sumur. Selanjutnya dilakukan pembilasan
sebanyak 3 kali dengan 1 mL larutan segar Modified Kreb Ringer Buffer KRB-1 NaCl 115 mM, KCl 4.7 mM, CaCl
2
1.3 mM, KH
2
PO
4
1.2 mM, MgSO
4
1.2 mM, NaHCO
3
24 mM, HEPES 10 mM, BSA Bovine Serum Albumin 1 gL, glukosa 1.11 mM, dan dialiri gas CO
2
5, O
2
95 selama 15 menit. Sebelum perlakuan dimulai dilakukan preinkubasi selama 40 menit dengan 1 mL larutan KRB-1
dalam inkubator pada suhu 37 C dan dialiri 5 gas CO
2
. Untuk penentuan efek insulinotropik sambiloto, dilakukan inkubasi dalam
inkubator pada suhu 37 C dan dialiri gas CO
2
5 selama 60 menit dengan 1 mL larutan ekstrak sambiloto konsentrasi 0.625, 1.25, 2.5, 5, dan 10 mgmL dalam
KRB-3 Modified Kreb Ringer Buffer berkadar glukosa 16.7 mM dan KRB-1. Selanjutnya media dipanen dan dimasukkan dalam wadah 1.5 mL, dilakukan
sentrifugasi dengan kecepatan 1500 rpm selama 5 menit untuk memisahkan sel BRIN-BD11 yang terlepas dalam media tersebut. Lakukan pemeriksaan kadar
insulin dengan Kit Mercodia Rat Insulin ELISA.
2. Pengaruh sambiloto pada sekresi insulin fase cepat BRIN-BD11.
Untuk menilai efek insulinotropik sambiloto pada sekresi insulin fase cepat BRIN-BD11, dilakukan tahapan sama seperti di atas, hanya lama inkubasi dalam
inkubator selama 20 menit saja dengan 1 mL larutan ekstrak sambiloto konsentrasi 0.625, 1.25, 2.5, 5, dan 10 mgmL dalam KRB-3 Modified Kreb
Ringer Buffer berkadar glukosa 16.7 mM dan KRB-1. Selanjutnya media dipanen dan dimasukkan dalam wadah 1.5 mL, dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan
1500 rpm selama 5 menit untuk memisahkan sel BRIN-BD11 yang terlepas dalam media tersebut. Lakukan pemeriksaan kadar insulin dengan Kit Mercodia Rat
Insulin ELISA.
3. Mekanisme kerja sambiloto sebagai insulin sekretagog
