µg Folic acid 0.14 2.4 µg

Perlakuan pada hewan coba diabetes Tikus dikelompokkan menjadi 6 kelompok perlakuan dengan masing- masing kelompok perlakuan diwakili oleh 5 ekor tikus. Pada kelompok 1 normal dan 2 diabetes masing-masing menerima aquades steril 5 mlkg BB. Kelompok 3 diabetes diberi ekstrak daun torbangun dosis T1 : 620 mgkg BB dan kelompok 4 diabetes diberi ekstrak daun torbangun dosis T2 : 930 mgkg BB. Ekstrak daun torbangun menjadi suspensi dengan 0.3 beratvolume NaCMC Viswamathaswamy et al. 2011. Kelompok 5 diabetes diberi Metformin hidroklorida yang dilarutkan dalam aquades dengan dosis : 62.5 mgkg BB selama 14 hari Shareef et al. 2013. Kelompok 6 diabetes diberi antioksidan quersetin yang dilarutkan dalam aquades dosis 15 mgkg BB. Gambar 7 menunjukkan alir pelaksanaan pada hewan coba Atef 2011. Kel. 1 kontrol normal, tikus tidak DM, diberi aquades steril selama 14 hari Kel. 2 kontrol diabetes tikus DM, diberi aquades steril selama 14 hari Kel 3. Tikus DM, diberi ekstrak 620 mgkg BB selama 14 hati Kel 4. Tikus DM diberi ekstrak 930 mgkg BB selama 14 hari Kel 5. Tikus DM diberi Metformin hidroklorida 62.5 mgkg BB selama 14 hari Kel 6. Tikus DM diberi Quersetin 15 mgkg BB selama 14 hari Gambar 7. Pelaksanaan penelitian pada hewan coba Tikus galur Sprague Dawley, 30 ekor Adaptasi 7 hari Persiapan tikus diabetes Pengelompokan Pengukuran berat badan dan kadar gula darah tikus pada hari ke 0, 1, 4, 7, 10, 14. Pada hari ke 15 : nekropsi, analisa hati : SOD,Catalase, GPx, MDA; analisa serum darahμ kolesterol, HDL, TG, glukokinase dan sel -pankreas Pengukuran berat badan dan kadar glukosa darah tikus Pengukuran berat badan dengan menggunakan timbangan elektrik dan kadar glukosa darah pada pagi hari sebelum pemberian pakan dengan menggunakan glukometer Accu check dilakukan pada hari ke- 0, 1, 4, 7, 10, 14 pascainduksi STZ. Sampel darah didapat dari ujung ekor tikus dan hasil yang didapat dirata-ratakan untuk menggambarkan nilai kadar glukosa darah kelompok dengan satuan mgdL Viswanathaswamy et al. 2011. Pengambilan organ hati dan pankreas Pada akhir penelitian hari ke-15 pasca induksi STZ semua tikus dianastesi general memakai campuran Ketamin: 90 mg dan Xylazine: 10 mg. Analisis hati tikus dilakukan untuk mengetahui kadar MDA dan antioksidan enzimatis katalase, SOD, GPx. Analisa jaringan pankreas untuk mengetahui sel - pankreas Asok et al. 2010. Analisa enzim Super Oksida Dismustase SOD Pengukuran kadar SOD dilakukan dengan cara: 0.06 ml serum direaksikan dengan campuran yang terdiri atas 2.70 ml bufer Natriumkarbonat yang mengandung 0.1 mM EDTA pH 10, 0.06 ml xantin 10 mM, 0.03 ml bovine serum albumin BSA 0.5, 0.03 ml NBT 2.5 mM. Kemudian ditambahkan xantin oksidase 0.04 unit. Absorbansi yang dihasilkan setelah 30 menit diukur pada panjang gelombang 560 nm. Kadar SOD dihitung dengan menggunakan persamaan: B-AB x 100; A adalah absorbansi larutan sampel dan B adalah absorbansi larutan kontrol Kotan et al. 2011. Analisis enzim GPx Pengukuran kadar enzim GPx dilakukan dengan caraμ β00 l serum ditambahkan β00 l buffer phosphat 0,1 M pH 7.0 yang mengandung 0,1 mM EDTA, β00 l glutation tereduksi GSH 10 mM dan β00 l enzim glutation reduktase. Kemudian diinkubasi selama 10 menit pada suhu 37 o C, ditambahkan β00 l NADPH 1,5 mM dan diinkubasi lagi selama tiga menit pada suhu yang sama, d itambahkan β00 l HβOβ 1.5 mM. Sampel diukur absorbansinya diantara waktu satu sampai dua menit dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 340 nm Kotan et al. 2011 Analisis enzim Catalase Analisa catalase CAT dengan cara: 0.1 ml jaringan homogenate dicampur dengan 2.6 ml dari 25 mM K 2 PO 4 pada pH 7.0 selama 15 menit, ditambah 0.1 ml 10 mM H 2 O 2 . Penurunan penyerapan dari 0.45 ke 0.4 menunjukkan jumlah aktivitas enzim. Perubahan dalam µmol H 2 O 2 mg protein pada pH 7.0 dan suhu 25 o C . Enzim catalase mengkalisis hidrolisis H 2 O 2 menjadi H 2 0 dan dibaca pada = β54 nm Asok et al. 2010. Analisis kadar MDA Sampel 1,8 gram dipotong kecil-kecil lalu digerus dalam mortar dingin yang diletakkan di atas blok es. Ditambahkan 1 mL NaCl 0.9. Pindahkan ke dalam tabung mikro dan disentrifugasi pada kecepatan 8000 rpm selama 20 menit, ditambahkan dengan 550 L aquades, β50 L HCl 1 N, 100 L Na-Thio dan 100