4.4.3. Cara Pemeriksaan Laboratorium
Menurut Soemarno 2000, Pemeriksaan Most Probable Number MPN atau Perkiraan Jumlah Terdekat untuk spesimen yang sudah diolah atau yang
angka kumannya rendah dapat dilakukan dengan tabung ganda yang terdiri dari : 1.
Uji Perkiraan Presumptive test 2.
Uji Penegasan Confirmative test 3.
Uji Lengkap Complited test
1. Uji Perkiraan Presumptive test
Media yang digunakan adalah Lactose Broth LB Cara pemeriksaan :
a. Siapkan 10 tabung reaksi yang masing – masing berisi media Lactose
Broth LB sebanyak 10 ml. Tabung disusun pada rak tabung reaksi dan diberi tanda.
b. Ambil bahan pemeriksaan yang telah disiapkan dengan pipet kemudian
masukkan ke dalam : 1.
Tabung 1 sd 8 masing – masing sebanyak 10 ml 2.
Tabung ke- 9 sebanyak 1 ml 3.
Tabung ke- 10 sebanyak 0,1 ml 4.
Masing – masing tabung tersebut digoyang – goyang agar spesimen dan media tercampur.
c. Inkubasikan pada suhu 35˚C - 37˚C selama 24 jam diperiksa ada tidaknya
pembentukan gas pada tabung Durham. Catat semua tabung yang menunjukkan peragian laktosa pembentukan gas.
1. Bila terbentuk gas pada tabung dinyatakan positif + dan dilanjutkan
dengan uji penegasan. 2.
Apabila uji dalam waktu 24 jam tidak membentuk gas, dimasukkan kedalam inkubator kembali pada suhu 35˚C - 37˚C selama 24 jam, bila
terbentuk gas pada tabung Durham maka hasil menunjukkan positif + dan uji dilanjutkan dengan uji penegasan.
3. Bila hasil uji negatif -, bearti Coliform negatif - dan tidak perlu
dilakukan uji penegasan.
2. Uji Penegasan Confirmative test
Media yang digunakan adalah Briliant Green Lactose Bile Broth BGLB 2. Uji ini untuk menegaskan hasil positif dari uji perkiraan.
a. Dari tiap – tiap tabung presumtif yang positif, dipindahkan 1 – 2 ose
kedalam tabung confirmatif yang berisi 10 ml BGLB 2. b.
Satu seri tabung BGLB 2 diinkubasi pada suhu 35˚C - 37˚C selama 24 – 48 jam untuk memastikan adanya Coliform.
c. Pembacaan dilakukan setelah 24 – 48 jam dengan melihat jumlah tabung
BGLB 2 yang menunjukkan positif gas. Pembacaan hasil dari uji penegasan dilakukan dengan menghitung jumlah tabung
yang menunjukkan adanya gas pada seri tabung yang diinkubasikan pada suhu 35˚C – 37˚C.
Angka yang diperoleh dicocokkan dengan tabel MPN 511 menurut Formula Thomas, maka akan diperoleh indeks MPN Coliform untuk tabung yang
diinkubasi pada suhu 35˚C – 37˚C.
3. Uji Lengkap Complited test
Dari tabung yang positif terbentuk asam dan gas pada suhu 35˚C – 37˚C, suspensi ditanamkan pada media agar Eosin Methylene Blue EMB secara
aseptik dengan menggunakan ose. Dengan ose yang sudah steril diambil sampel, dipulaskan disalah satu sisitepi media, jangan menyentuh dinding cawan petri.
Kemudian, pulasan itu digores – goreskan sejajar sampai memenuhi permukaan media. Pada media agar Eosin Methylene Blue EMB akan tampak koloni bakteri
Escherichia coli berwarna kehijauan dengan bintik hitam di tengah koloni dan kilap logam.
4.5. Metode Pengolahan dan Analisa Data
Kategori