43
b. Pembuatan ektrak isi rempela dan pakan
Sebanyak 1 gram sampel basah digerus sedangkan sampel kering digiling halus, diayak dan dicampur dalam 20 ml buffer McIlvain pH 3
dan 5, pengenceran 10 kali, kemudian ditambahkan 0.2 ml natrium asida 20 NaN
3
. Selanjutnya disentrifus pada kecepatan 12000 rpm dengan temperatur 4
o
C selama 20 menit. Supernatan yang terbentuk disimpan di freezer, selanjutnya ditentukan aktivitas sakarifikasi.
c. Prosedur pengujian aktivitas sakarifikasi ekstrak isi rempela dan pakan
Penentuan aktivitas enzim dalam menghidrolisis substrat menjadi gula pereduksi dilakukan berdasarkan metode sebagai berikut: Sebanyak 2
ml enzim kasar pada pengenceran maksimum 10x dimasukkan ke dalam tabung Mc. Cartney dan ditambah 2 ml substrat glukosa 2 dan
diinkubasi pada penangas air goyang dengan kecepatan 120 rpm pada suhu optimum 40
o
C selama 2 jam. Inkubasi dihentikan dengan memasukkan sampel ke dalam penangas air mendidih selama 10 menit dan disentrifus
dengan kecepatan 2000 rpm selama 15 menit. Kontrol dibuat dengan memanaskan 2 ml enzim pada penangas air mendidih selama 5 menit,
setelah itu ditambah 2 ml substrat kemudian dipanaskan lagi selama 10 menit. Setelah itu disentrifus pada kecepatan 2000 rpm selama 15 menit.
Analisis gula pereduksi dilakukan dengan menambahkan 1 ml aquades dan 3 ml Dinitro Salicylic Acid DNS ke dalam 1 ml filtrat hasil sentrifus, lalu
didihkan dalam penangas air selama 15 menit. Blanko mengandung 1 ml air, 1 ml buffer asetat dan 3 ml DNS yang dididihkan selama 15 menit.
Absorbans diukur pada panjang gelombang optimum 540 nm. Satu unit sakarifikasi adalah banyaknya enzim yang dapat memproduksi 1 mol
gula pereduksi dalam satu unit yang dihitung berdasarkan persamaan:
konsentrasi gula pereduksi sampel-kontrol mol Aktivitas Sakarifikasi = x FP
BM glukosa x waktu inkubasi menit ml Keterangan :
BM = Berat Molekul FP = Faktor Pengenceran
44
10. Uji Kecernaan SK, Protein, Kalsium dan Fosfor
Kategori