26 sampel uji yang mampu meredam radikal bebas 50 digunakan sebagai
parameter menentukan aktivitas antioksidan sampel uji Molyneux, 2004.
3.8.2 Pembuatan larutan
a. Larutan DPPH
Sebanyak 10 mg DPPH ditimbang kemudian dilarutkan dengan metanol dalam labu ukur sampai 50 mL sehingga diperoleh larutan DPPH 0,5 mM
konsentrasi 200 μgmL.
Larutan DPPH 0,5 mM dipipet sebanyak 5 mL, kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL, dicukupkan volumenya dengan metanol sampai garis
tanda, diperoleh larutan blanko DPPH konsentrasi 40 μgmL.
b. Larutan sampel uji EEBK
Sebanyak 25 mg EEBK ditimbang kemudian dilarutkan dengan metanol dalam labuukur sampai 25 mLsehinngga diperoleh larutan induk baku sampel
konsentrasi 1000 μgmL.
Konsentrasi ditetapkan setelah dilakukan beberapa orientasi. Larutan induk baku sampel dipipet sebanyak 1,25 mL; 1,6 mL; 2 mL; 2,4 mL ke dalam masing-
masing labuukur 25 mL untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 50 μgmL,
65 μgmL, 80μgmL, 95 μgmL, kedalam masing-masing labuukur ditambahkan 5
mL larutan DPPH 0,5 mM konsentras i 200μgmL lalu volumenya dicukupkan
dengan metanol sampai garis tanda. Diamkan di tempat gelap selama 60 menit,lalu diukur serapannya menggunakan spektrofotometer uv–visibel pada
panjang gelombang 516 nm.
c. Larutan vitamin C
Universitas Sumatera Utara
27 Sebanyak 25 mg serbuk vitamin C ditimbang kemudian dilarutkan dengan
metanol dalam labuukur sampai 25 mLsehinngga diperoleh larutan induk baku vitamin C konsentrasi 1000
μgmL. Larutan induk baku vitamin C dipipet sebanyak 0,05 mL; 0,1 mL; 0,15 mL;
0,2 mL ke dalam masing-masing labuukur 25 mL untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 2
μgmL, 4 μgmL, 6 μgmL dan 8 μgmL, kedalam masing-masing labuukur ditambahkan 5 mL larutan DPPH 0,5 mM konsentras
i 200μgmL lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda. Diamkan di tempat
gelap selama 60 menit, lalu diukur serapannya menggunakan spektrofotometer uv-visibel pada panjang gelombang 516 nm.
3.8.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Larutan DPPH konsentrasi 40μgmL dihomogenkan dan diukur serapannya
pada panjang gelombang 400-750 nm. 3.8.4 Waktu pengukuran
Lamapengukuran metode DPPH menurut beberapa literatur yang direkomendasikan adalah selama 60 menit, tetapi dalam beberapa penelitian
waktu yang digunakan sangat bervariasi yaitu dari 1 menit hingga 240 menit
Rosidah, et al., 2008; Molyneux, 2004; Marinova, 2011. 3.8.5 Analisis persen pemerangkapan radikal bebas
Menurut Rosidah, et al., 2008; Marinova 2011, penentuan persen pemerangkapan radikal bebasdihitung dengan rumus sebagai berikut:
Aktivitas pemerangkapan radikal bebas = 100
x kontrol
A sampel
A -
kontrol A
Keterangan: A
kontrol
= Absorbansi tidak mengandung sampel
Universitas Sumatera Utara
28 A
sampel
= Absorbansi sampel
3.8.6 Analisis nilai IC
