Analisis Sidik Jari Daun Benalu Teh Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi
ANALISIS SIDIK JARI DAUN BENALU TEH
MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS KINERJA
TINGGI
MARTA YUSFITA SARI
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
ABSTRAK
MARTA YUSFITA SARI. Analisis Sidik Jari Daun Benalu Teh Menggunakan
Kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi. Dibimbing oleh ELLY
SURADIKUSUMAH dan WULAN TRI WAHYUNI.
Benalu teh merupakan tanaman obat yang banyak diperjualbelikan dalam
bentuk kering sehingga memungkinkan adanya pencampuran dengan bahan lain.
Analisis sidik jari dengan teknik kromatografi lapis tipis kinerja tinggi dapat
dimanfaatkan untuk menguji keaslian herbal benalu teh komersial. Pemilihan fase
gerak yang tepat merupakan salah satu tahap penting dalam pemisahan
komponen. Pelarut yang terpilih sebagai eluen adalah campuran 1,2-dikloroetana
dengan etil asetat pada nisbah 65:35 yang menghasilkan 9 pita pada benalu teh
asli dengan kisaran Rf (0.02−0.97). Hasil analisis menunjukkan bahwa salah satu
sampel benalu teh komersial memiliki pola kromatogram yang sama dengan
benalu teh asli, sedangkan 2 sampel lainnya menghasilkan 11 pita dan diduga
karena pencampuran dengan daun teh.
ABSTRACT
MARTA YUSFITA SARI. Fingerprint Analysis of Tea Parasitic Plant Leaves
Using High Performance Thin Layer Chromatography. Supervised by ELLY
SURADIKUSUMAH and WULAN TRI WAHYUNI.
Tea parasitic plant is a medicinal plant widely traded in dried form, allowing
mixing with other ingredients. Fingerprint analysis with high performance thin
layer chromatography technique can be utilized for testing the authenticity of
commercial tea parasite herbal. Selection of the appropriate mobile phase is an
important stage in the separation of components. The solvent selected as the
eluent was a mixture of 1,2-dichloroethane and ethyl acetate with 65:35 ratio that
gave nine bands in the original tea parasitic plant with Rf ranging from 0.02 to
0.97. The analysis showed that one of the commercial tea parasite samples had the
same chromatogram pattern with the original tea parasite, while the other two
produced 11 bands and appeared to be mixed with the tea leaves.
ANALISIS SIDIK JARI DAUN BENALU TEH
MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS KINERJA
TINGGI
MARTA YUSFITA SARI
Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
Judul
Nama
NIM
: Analisis Sidik Jari Daun Benalu Teh Menggunakan Kromatografi
Lapis Tipis Kinerja Tinggi
: Marta Yusfita Sari
: G44086033
Disetujui
Pembimbing I,
Pembimbing II,
Ir Elly Suradikusumah, MS
NIP 19450214 197010 2 001
Wulan Tri Wahyuni, SSi, MSi
Diketahui
Ketua Departemen,
Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 19501227 197603 2 002
Tanggal Lulus:
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat
dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Shalawat
beriring salam tercurahkan kepada Nabi besar Muhammad SAW beserta
keluarganya, semoga kita semua menjadi pengikutnya hingga akhir zaman.
Skripsi ini disusun berdasarkan penelitian yang dilaksanakan dari bulan Desember
hingga Juni 2011 di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka IPB, Bogor.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Ir Elly Suradikusumah, MS
dan Ibu Wulan Tri Wahyuni, SSi, MSi selaku pembimbing yang telah memberi
banyak arahan, inspirasi, dorongan, kritik, dan saran selama penulis melaksanakan
penelitian ini. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ayahanda dan
Almarhumah Ibunda serta Kakak tercinta yang telah memberi banyak kasih
sayang, semangat, dan doa selama penulis menempuh studi, penelitian, dan
penulisan skripsi ini.
Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada Ibu Salina, SSi, Ibu Nunuk,
Ibu Susi, Mba Wiwi, Endi, Antonio, dan Bapak Agung Zaim, S.Si, MSi atas
segala bantuannya selama penelitian. Ucapan terima kasih juga penulis berikan
kepada Arini, Zulia, Nanda, Ayu, Fajar Sumi, Rika, Desi, dan teman-teman
Ekstensi Kimia angkatan 2008 yang turut membantu memberikan semangat dan
dukungannya dalam penyusunan skripsi ini.
Semoga skripsi ini bermanfaat.
Bogor, Desember 2011
Marta Yusfita Sari
iv
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di kota Jepara pada tanggal 26 Maret 1984 sebagai anak
ketiga dari pasangan D Siswanto dan Rikhana. Penulis lulus dari SMU Negeri 1
kota Jepara pada tahun 2002, dan pada tahun 2003 diterima sebagai mahasiswa
Akademi Kimia Analisis Bogor (AKA). Penulis lulus pada tahun 2006 kemudian
pada tahun 2008 melanjutkan ke S1 Penyelenggaraan Khusus Departemen Kimia,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam IPB. Penulis pernah melakukan
praktik kerja lapangan di Balai Besar Air Tawar Sukabumi pada tahun 2006.
Penulis pernah bekerja di PT Raberindo Pratama dan PT Pharos Indonesia pada
tahun 2008. Tahun 2011 sampai saat ini, penulis bekerja di PT Boehringer
Ingelheim Indonesia.
v
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ................................................................................................. vii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ viii
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
TINJAUAN PUSTAKA
Benalu Teh ....................................................................................................... 1
Maserasi ........................................................................................................... 2
Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi (KLTKT) ....................... 2
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan ................................................................................................. 3
Persiapan Sampel ............................................................................................. 3
Penentuan Kadar Air ....................................................................................... 3
Ekstraksi dengan Maserasi ............................................................................... 3
Uji Fitokimia ................................................................................................... 3
Kondisi KLT .................................................................................................... 4
Penentuan Eluen Terbaik ................................................................................. 4
Deteksi Komponen ........................................................................................... 4
Sidik Jari Ekstrak Daun Benalu Teh ................................................................ 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi dan Preparasi Sampel .................................................................... 4
Kadar Air ......................................................................................................... 4
Uji Fitokimia .................................................................................................... 5
Rendemen Ekstrak ........................................................................................... 5
Eluen Terbaik ................................................................................................... 5
Sidik Jari Benalu Teh ....................................................................................... 7
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan .......................................................................................................... 8
Saran ................................................................................................................ 8
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................. 8
LAMPIRAN ............................................................................................................ 9
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Kadar air benalu teh asal Gunung Mas dan beberapa sampel benalu teh
komersial ............................................................................................................. 5
2 Nilai Rf pola KLT dengan menggunakan eluen tunggal. .................................... 6
3 Nilai Rf komponen ekstrak benalu teh dan beberapa benalu teh komersial ....... 7
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Scurrulla atropurpurea. ...................................................................................... 1
2 Bejana kromatografi berisi KLT dan eluen serta hasil elusi. .............................. 2
3 Rendemen ekstrak kasar benalu teh asal Gunung Mas (Gm) dan
beberapa sampel benalu teh komersial ............................................................... 5
4 Pola KLT menggunakan eluen tunggal ............................................................... 6
5 Pola KLT menggunakan campuran eluen dikloroetana dan etil asetat. .............. 7
6 Pola KLT ekstrak daun benalu teh dan berbagai sampel benalu
teh komersial pada visualisasi UV 366 nm (a), 254 nm (b)................................ 7
7 Pola KLT ekstrak sampel benalu teh (a), daun teh (b), dan campuran benalu
teh dengan daun teh (c) ....................................................................................... 8
vii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian ...................................................................................... 11
2 Determinasi tanaman benalu teh ....................................................................... 12
3 Penentuan kadar air ........................................................................................... 13
4 Uji fitokimia ...................................................................................................... 14
5 Rendemen ekstrak kasar sampel benalu teh asli dan komersial ........................ 15
6 Penggolongan pelarut oleh Snyder (Snyder 1979)............................................ 16
7 Hasil elusi dengan 10 pelarut tunggal visulisasi UV 254 nm ........................... 17
8 Pola KLT komposisi nisbah 1,2-dikloroetana dan etil asetat
visualisasi UV 254 nm ...................................................................................... 17
viii
1
PENDAHULUAN
Perkembangan
penggunaan
tanaman
herbal di Indonesia sebagai pengobatan
alternatif semakin luas. Hal ini ditunjang oleh
adanya bukti-bukti empiris dan juga dukungan
ilmiah terhadap khasiat produk herbal dalam
bentuk minuman atau jamu yang semakin
banyak, sehingga meyakinkan masyarakat
untuk menggunakannya sebagai obat untuk
pencegahan dan pengobatan berbagai macam
penyakit. Benalu teh (Scurrula atropurpurea)
merupakan salah satu tumbuhan yang
digunakan oleh masyarakat Indonesia sebagai
obat herbal antitumor atau antikanker.
Menurut Winarno et al. (2000), benalu teh
menghambat pertumbuhan tumor secara tidak
langsung, yaitu melalui sistem kekebalan
dengan cara meningkatkan konsentrasi
imunoglobulin G (IgG).
Benalu teh banyak diperjualbelikan dalam
bentuk yang telah dikeringkan sehingga
memungkinkan adanya pencampuran dengan
bahan lain yang bukan merupakan simplisia
benalu teh asli. Kesalahan identifikasi herbal
benalu teh mungkin terjadi, karena kesamaan
fisik (morfologi) sampel dalam bentuk
simplisia sehingga sulit dibedakan oleh
masyarakat awam. Menurut Delaroza dan
Scarminio (2008), metode analisis sidik jari
dapat mengatasi permasalahan tersebut.
Senyawa kimia yang dikandung oleh
tanaman obat dapat ditampilkan dalam
kromatogram sidik jari sehingga karakteristik
tanaman obat tersebut dapat digambarkan
secara menyeluruh (Liang et al. 2009).
Analisis sidik jari dimanfaatkan untuk
evaluasi dan kontrol kualitas multikomponen
dari bahan baku obat herbal karena profil
kromatografi yang dihasilkan mencirikan
komposisi sampel dan stabilitas dari suatu
tanaman obat (Zhao et al. 2008). Metode
analisis yang digunakan dalam penelitian ini
adalah teknik kromatografi lapis tipis kinerja
tinggi (KLTKT). Kromatografi lapis tipis
memiliki kelebihan berupa mudah dalam
preparasi
sampel,
sederhana,
biaya
operasional relatif murah karena semua
komponen sampel dan standar diujikan dalam
waktu yang sama, volume pelarut yang
digunakan sedikit, selektif dan sensitif, serta
kromatogramnya dapat diamati secara visual
(Kimura et al.2008). Salah satu hal yang
diperlukan untuk menunjang analisis sidik jari
adalah pemilihan fase gerak yang tepat untuk
mendapatkan pemisahan komponen yang
baik. Tujuan penelitian ini adalah menentukan
sidik jari benalu teh yang dapat dimanfaatkan
untuk pengujian herbal benalu teh komersial.
TINJAUAN PUSTAKA
Benalu Teh
Benalu adalah tumbuhan liar yang melekat
dan parasit pada tumbuhan lain sebagai
inangnya. Pada umumnya benalu diberi nama
berdasarkan tumbuhan yang ditumpanginya.
Benalu teh adalah tumbuhan yang hidupnya
menumpang pada tumbuhan teh dan mengisap
makanan dari tumbuhan inang untuk
kelangsungan hidupnya (Winarno et al. 2000).
Salah satu tanaman benalu teh yang
ditemukan
di
Indonesia
adalah
S.
atropurpurea
yang
termasuk
suku
Loranthaceae, dapat tumbuh pada ketinggian
1 600 m di atas permukaan laut (Florentina et
al. 1998). Ciri morfologi S. atropurpurea
ialah batang menggantung berbentuk silindris
berbintik-bintik cokelat, memiliki daun
tunggal berhadapan, lonjong, ujung agak
meruncing, pangkal membulat, tepi rata,
permukaan atas hijau dan permukaan bawah
cokelat (Gambar 1).
Gambar 1 Scurrulla atropurpurea.
Secara tradisional benalu teh dimanfaatkan
untuk menyembuhkan penyakit cacar air,
diare, cacing tambang, amandel, kanker, dan
tumor. Tanaman benalu teh diduga memiliki
beberapa senyawa aktif yang berfungsi
sebagai antioksidan. Hal tersebut diperkuat
oleh hasil penelitian Santa (1998) yang
menunjukkan bahwa
benalu
teh S.
atropurpurea yang dipakai untuk obat
antikanker memiliki kemampuan antioksidan
tersebut. Menurut Nugroho et al. (2000),
benalu teh mengandung senyawa alkaloid,
flavanoid, terpenoid, glikosida, triterpena,
saponin, dan tanin. Benalu teh juga
mengandung katekin (Bustanulssalam et al.
2003) yang merupakan antioksidan inhibitor
antikanker. Menurut Ohashi et al. (2003),
benalu teh efektif untuk menyerang sel kanker
yang diisolasi dari tikus. Senyawa kimia yang
berperan aktif merupakan golongan flavonoid.
2
Berdasarkan hasil isolasi, tanaman benalu teh
mangandung komponen senyawa flavan
(katekin, epikatekin, epikatekin-3-O-galat,
dan
epigalokatekin-3-O-galat),
flavonol
glikosida, dan inhibitor kanker asam
oktadeka-8,10,12-triunoat.
Maserasi
Maserasi ialah metode ekstraksi dengan
cara merendam sampel menggunakan pelarut
yang sesuai dalam jangka waktu tertentu
sehingga interaksi antara senyawa yang
diekstraksi dan pelarut dapat berlangsung
maksimum (Houghton & Raman 1998).
Keuntungan menggunakan teknik ini adalah
peralatan yang digunakan sederhana dan aman
untuk senyawa yang tidak tahan panas,
sedangkan kerugiannya adalah waktu yang
diperlukan lama serta jumlah pelarut yang
dipakai tidak efisien (Meloan 1999).
Pengambilan komponen target pada proses
maserasi dilakukan dengan cara merendam
serbuk simplisia dalam jangka waktu tertentu
sehingga isi sel akan larut karena adanya
perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam
sel dan di luar sel. Larutan dengan konsentrasi
tinggi akan terdesak keluar kemudian
digantikan oleh pelarut dengan konsentrasi
lebih rendah (proses difusi). Peristiwa tersebut
berulang-ulang sampai terjadi kesetimbangan
konsentrasi antara larutan di luar dan di dalam
sel. Selama proses maserasi, sesekali
dilakukan pengadukan dan juga penggantian
pelarut. Kemudian residu yang diperoleh
dipisahkan dan filtrat yang dihasilkan
diuapkan (Sudjadi 1986).
Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis
Kinerja Tinggi (KLTKT)
Analisis sidik jari adalah suatu prosedur
untuk menunjukkan informasi kimia dalam
bentuk spektrogram, kromatogram, dan grafik
lainnya yang didapatkan dari teknik analitis.
Informasi ini dapat dimanfaatkan untuk
evaluasi dan kontrol kualitas multikomponen,
antara lain dari tanaman obat (Delaroza &
Scarminio 2008), yang penting untuk
klasifikasi dan validasi spesies botani serta
kendali mutu tanaman obat.
Informasi mengenai komponen kimia pada
tanaman obat dapat dilihat dari sidik jari
tanaman tersebut melalui pola kromatogram
tanpa memperhatikan jenis komponennya.
Beberapa
teknik
kromatografi
seperti
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT),
kromatografi gas (KG), kromatografi lapis
tipis (KLT), dan elektroforesis kapiler dapat
ditetapkan untuk analisis sidik jari (Delaroza
& Scarminio 2008)
Teknik kromatografi yang paling luas
digunakan dalam fitokimia adalah KLT
karena dapat diterapkan pada hampir setiap
golongan senyawa, kecuali komponen yang
sangat atsiri (Harbone 1987). Kromatografi
adalah suatu teknik yang digunakan untuk
memisahkan
senyawa
berdasarkan
distribusinya pada fase gerak dan fase diam.
Komponen yang memiliki interaksi lebih
besar pada fase diam akan bertahan lama,
sedangkan komponen yang memiliki interaksi
lebih besar dengan fase gerak akan bergerak
lebih cepat (Gambar 2)
Gambar 2 Bejana kromatografi berisi KLT
dan eluen serta hasil elusi.
KLT merupakan metode yang paling
banyak digunakan untuk analisis sidik jari
karena mempunyai beberapa kelebihan yaitu
mudah dalam preparasi sampel, sederhana
dalam prosedur kerja, volume pelarut yang
digunakan sedikit, selektif dan sensitif, serta
kromatogramnya dapat diamati secara visual
(Cie’sla & Hajnos 2009). Secara luas KLT
banyak digunakan untuk berbagai keperluan
analisis tumbuhan obat. Saat ini telah
dikembangkan KLT semiautomatis CAMAG
Linomat V. Alat ini dikendalikan oleh suatu
mikroprosesor yang menyebabkan larutan
ekstrak dapat diaplikasikan pada pelat dalam
bentuk pita dengan mengalirkan tekanan udara
atau gas nitrogen sehingga tidak memerlukan
kontak langsung dengan pelat dan dapat
mengurangi kerusakan pelat (Wall 2005).
Kromatografi lapis tipis kinerja tinggi
(KLTKT) atau high performance thin layer
chromatography merupakan aplikasi modern
dari KLT yang dimaksudkan untuk
menghasilkan pemisahan hasil analisis yang
lebih baik dibandingkan dengan KLT biasa.
Kelebihan KLTKT dibandingkan dengan KLT
terletak pada fase diamnya, fase diam pada
KLTKT berukuran lebih halus dengan poripori seragam serta ketebalan lapisan 0.1 mm.
Pada KLTKT, pelat fase diamnya memiliki
rerata ukuran partikel sebesar 5 m. Pelat
tersebut memiliki keterpisahan yang lebih
3
baik apabila dibandingkan dengan KLT biasa
yang memiliki ukuran partikel pelat 12 m.
Pencirinya berupa kromatogram, yaitu pola
yang menggambarkan senyawa dalam setiap
tumbuhan obat sehingga bermanfaat dalam
kontrol kualitas tumbuhan obat baik untuk
pencirian bahan baku maupun produk akhir.
KLTKT lazim digunakan untuk identifikasi
dan sangat ideal untuk uji penapisan
pendahuluan ekstrak tanaman (Marston 2007).
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan
Peralatan
yang
digunakan
selama
penelitian adalah peranti KLTKT Camag
Linomat 5, Camag Reprostar 3 didukung
peranti lunak winCATS 1.2.3 untuk
dokumentasi kromatogram KLT, bejana kaca
kromatografi, peralatan kaca, neraca analitik,
dan oven Memmert.
Bahan-bahan yang digunakan adalah daun
benalu teh asli yang diambil dari perkebunan
teh Gunung Mas, sampel benalu teh komersial
produksi dari Cianjur (K1), Cisarua (K2), dan
Sukabumi (K3), pelat KLTKT silika gel 60
F254 2020 cm (Merck, Jerman), etanol 96%.
Pelarut p.a untuk fase gerak diperoleh dari
Merck dan Sigma Aldrich (St Louis, Amerika
Serikat) seperti dietil eter, n-butanol, etanol
absolut, etanol 30%, asetonitril, kloroform,
etil asetat, metanol, 1,2-dikloroetana, dan
diklorometana.
Persiapan Sampel
Tanaman benalu teh diambil dari Gunung
Mas. Identifikasi dilakukan di Herbarium
Bogoriense, Bogor, Jawa Barat, Indonesia.
Sampel benalu teh komersial diperoleh di
pasaran yang merupakan produksi dari
Cianjur (K1), Cisarua (K2), dan Sukabumi
(K3). Selanjutnya sampel-sampel tersebut
dikeringkan, dan dibuat serbuk. Bagan alir
penelitian dapat dilihat pada Lampiran 1.
Penentuan Kadar Air (BPOM 2004)
Sebanyak 3 g serbuk kering ditimbang,
digunakan wadah yang telah dikeringkan pada
suhu 105 C hingga diperoleh bobot konstan.
Wadah beserta isinya dipindahkan ke dalam
eksikator selama 15 menit sebelum bobotnya
ditimbang. Kadar air diperoleh sebagai nisbah
selisih bobot sampel awal dengan bobot
sampel setelah dikeringkan terhadap bobot
sampel sebelum dikeringkan.
diulangi sebanyak 3 kali.
Perlakuan
Ekstraksi dengan Maserasi
Metode ekstraksi yang digunakan dalam
penelitian ini adalah maserasi menggunakan
etanol 96%. Sebanyak 50 g serbuk kering
daun benalu teh direndam dengan 250 mL
pelarut selama 24 jam. Maserat dipisahkan
dari residu dengan penyaringan. Ke dalam
residu ditambahkan kembali pelarut dan
tahapan ekstraksi diulangi hingga 3 kali.
Maserat dari setiap ulangan ekstraksi
digabung dan dikeringkan dengan penguap
putar.
Uji Fitokimia (Harbone 1987)
Alkaloid
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh dilarutkan dengan 10 mL kloroform dan 4
tetes NH4OH. Larutan kemudian disaring dan
filtratnya dimasukkan ke dalam tabung reaksi
bertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung
reaksi dikocok dengan 10 tetes H2SO4 2 M
dan lapisan asamnya dipisahkan ke dalam
tabung reaksi lain. Lapisan asam ini diteteskan
pada lempeng tetes dan ditambahkan pereaksi
Mayer, Wagner, dan Dragendorf yang akan
menimbulkan endapan dengan warna berturutturut putih, cokelat, dan merah jingga jika
terdapat alkaloid.
Saponin
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh ditambahkan 10 mL air panas dan
dididihkan selama 5 menit. Setelah itu,
disaring dan filtratnya digunakan untuk
pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup kemudian dikocok
selama 10 detik dan didiamkan selama 10
menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan
terbentuk buih yang stabil.
Flavonoid
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh ditambahkan 10 mL air panas dan
dididihkan selama 5 menit. Setelah itu,
disaring dan filtratnya digunakan untuk
pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi lalu ditambahkan 0.5 g serbuk
magnesium, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL amil
alkohol, dan dikocok kuat. Uji positif
flavonoid menghasilkan warna kuning atau
jingga pada lapisan amil alkohol.
4
Tanin
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh ditambahkan 10 mL air panas, dididihkan
selama 5 menit, dan disaring. Sebagian filtrat
yang diperoleh ditambahkan larutan FeCl3
1%. Hasil positif ditunjukkan oleh warna hijau
kehitaman.
Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh dilarutkan dengan 25 mL etanol panas (50
C). Larutan disaring dalam pinggan porselen
dan diuapkan sampai kering. Residu
ditambahkan eter dan ekstrak eter dipindahkan
ke dalam lempeng tetes. Kemudian
ditambahkan 3 tetes anhidrida asetat dan 1
tetes H2SO4 pekat (Uji Lieberman-Burchard).
Warna merah atau ungu menunjukkan adanya
triterpenoid dan warna hijau atau biru
menunjukkan adanya steroid.
Uji Fenol
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
kemudian ditambahkan FeCl3. Warna ungu,
biru, atau hijau menunjukkan adanya senyawa
golongan fenol.
gerak mencapai 0.5 cm dari tepi atas pelat.
Pelat diangkat segera setelah elusi mencapai
garis finis dan dikeringkan. Deteksi
komponen dilakukan untuk melihat bercak
yang muncul pada pelat. Eluen yang dipilih
ialah yang memberikan penampakan bercak
terbanyak dan mewakili pemisahan yang baik.
Eluen terpilih kemudian dikombinasikan
untuk mendapatkan eluen campuran.
Deteksi Komponen
Deteksi komponen dilakukan dengan cara
pelat dikeringudarakan selama 5−10 menit
kemudian pelat disinari dengan sinar
ultraviolet (UV) 254 nm dan 366 nm, bercak
akan terlihat (Fernand 2003).
Sidik Jari Ekstrak Daun Benalu Teh
Ekstrak daun benalu teh asli dan benalu
teh komersial diaplikasikan pada pelat yang
sama dan dielusi menggunakan pelarut
pengembang
terbaik
untuk
dilihat
perbandingan pola kromatografinya.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kondisi KLT
Identifikasi dan Preparasi Sampel
Penotolan ekstrak sampel daun benalu teh
pada pelat menggunakan aplikator KLT
semiautomatis, yaitu Camag Linomat V
dengan menggunakan pelat silika gel 60 F 254.
Pelat dimasukkan ke dalam oven sebelum
digunakan. Kondisi aplikasi antara lain gas
pembawa
adalah
nitrogen,
kecepatan
pengiriman sampel dengan syiringe sebesar 40
nL/det, aplikasi volume sampel sebesar 5.0 L
dan 4.0 L untuk standar, lebar pita 8 mm,
dan jarak dari tepi bawah pelat sebesar 10
mm. Ekstrak yang diaplikasikan dipersiapkan.
Ekstrak pekat dari ekstraksi maserasi
dilarutkan dengan etanol 96% sehingga
diperoleh konsentrasi 10 g/L.
Penentuan Eluen Terbaik
Sebanyak 5 mL pelarut dietil eter, nbutanol, etanol absolut, etanol 30%,
asetonitril, kloroform, etil asetat, metanol, 1,2dikloroetana, diklorometana masing-masing
dimasukkan ke dalam bejana kromatografi
dan dijenuhkan. Sampel dengan konsentrasi
10 g/L ditotolkan pada pelat KLT, setelah
kering langsung dielusi dalam bejana
kromatografi yang telah dijenuhkan oleh uap
eluen. Pengembangan dilakukan hingga fase
Tanaman benalu teh yang digunakan
dalam penelitian ini diperoleh dari Gunung
Mas, Bogor, Jawa Barat. Tanaman benalu teh
kemudian dideterminasi oleh Herbarium
Bogoriense. Berdasarkan determinasi yang
dilakukan, tanaman tersebut benar S.
atropurpurea (BI) Danser (Lampiran 2).
Sebelum sampel digunakan, terlebih dahulu
dikeringkan dan dibuat serbuk. Pengeringan
bertujuan agar sampel tidak mudah rusak
sehingga dapat disimpan dalam jangka waktu
lama. Dengan mengurangi kadar air,
kerusakan sampel oleh mikrob dapat
dihindari. Penggilingan sampel menjadi
ukuran
yang
lebih
kecil
bertujuan
memperbesar luas permukaan bahan sehingga
dapat membantu penetrasi pelarut ke dalam
sel tumbuhan, mempercepat pelarutan
komponen bioaktif, dan meningkatkan
rendemen.
Kadar Air
Sampel benalu teh yang siap diekstraksi
ditetapkan kadar airnya dengan menggunakan
metode gravimetri. Perolehan kandungan air
5
Tabel 1 Kadar air benalu teh asal Gunung
Mas dan beberapa sampel benalu
teh komersial
Sampel benalu teh
Kadar air
(%)
Benalu teh asli
7.50
Komersial asal Cianjur (K1)
6.35
Komersial asal Cisarua (K2)
8.88
Komersial asal Sukabumi (K3)
7.86
Kadar air yang diperoleh kemudian
digunakan sebagai faktor koreksi dalam
penentuan rendemen ekstrak. Perhitungan
kadar air dapat dilihat pada Lampiran 3.
Penetapan kadar air berguna untuk
mengetahui kandungan air pada sampel
sebagai persen bahan keringnya serta untuk
memperkirakan untuk daya tahan bahan dan
cara penyimpanan terbaik agar tidak terjadi
kerusakan sampel akibat aktivitas mikrob
(jamur dan bakteri) (Harjadi 1993).
Berdasarkan BPOM (2004), kadar air
simplisia tidak boleh lebih dari 10%.
Simplisia yang mengandung kadar air di
bawah 10 % akan memiliki masa simpan yang
relatif lama karena proses pembusukan oleh
bakteri dan jamur dapat terhambat sehingga
lebih stabil.
Nilai kadar air yang diperoleh lebih kecil
dari 10%. Kadar tersebut telah memenuhi
persyaratan simplisia menurut BPOM (1995),
sehingga diharapkan pertumbuhan mikrob
dapat dihambat dan risiko kerusakan sampel
benalu teh akibat serangan jamur dan bakteri
dapat dikurangi.
Uji Fitokimia
Uji fitokimia pada simplisia dilakukan
untuk mengetahui secara kualitatif senyawa
metabolit sekunder yang terkandung dalam
sampel. Uji yang dilakukan meliputi alkaloid,
flavonoid, saponin, tanin, steroid, triterpenoid,
dan fenol. Golongan senyawa dalam sampel
dapat ditentukan dengan melihat perubahan
warna setelah ditambahkan pereaksi yang
spesifik
untuk
setiap
uji
kualitatif.
Berdasarkan hasil uji fitokimia, diketahui
bahwa dalam sampel serbuk kering benalu teh
asli dan komersial mengandung metabolit
sekunder dari golongan flavonoid, tanin,
saponin, fenol, alkaloid, dan steroid
(Lampiran 4).
Uji alkaloid memberikan hasil yang positif
karena terbentuk endapan. Uji tanin
memberikan warna hijau kehitaman setelah
ditambahkan FeCl3 1%. Pada uji saponin
terbentuk busa yang stabil selama beberapa
menit setelah dikocok secara vertikal. Uji
flavonoid memberikan hasil positif yang
ditunjukkan dengan timbulnya warna merah
pada lapisan amil alkohol. Uji steroid
menunjukkan
hasil
positif
sedangkan
triterpenoid negatif karena warna yang
terbentuk adalah warna hijau kehitaman dan
bukan merah atau ungu yang menandakan
positif untuk triterpenoid.
Rendemen Ekstrak
Pelarut merupakan salah satu faktor
penting dalam menghasilkan ekstrak yang
baik. Pelarut yang dipilih adalah yang
memiliki daya larut tinggi, tidak berbahaya,
dan tidak beracun. Pelarut etanol dipilih
karena lebih selektif dan aman. Rendemen
ekstrak kasar benalu teh dari Gunung Mas dan
benalu teh komersial berkisar 7.8319.82%
dari masing masing 2 g sampel yang di
ekstraksi (Gambar 3). Proses ekstraksi
dilakukan menggunakan metode maserasi
pada suhu kamar dengan pertimbangan
maserasi
dapat
digunakan
untuk
mengekstraksi sampel yang tahan maupun
tidak tahan terhadap panas. Dengan demikian,
kerusakan komponen kimia benalu teh dapat
dihindari. Perhitungan ditunjukkan rendemen
pada Lampiran 5.
Rendemen (%)
pada sampel kering daun benalu teh asal
Gunung Mas dan beberapa benalu teh
komersial berkisar 6.35–8.88% (Tabel 1).
30
20
10
0
Gm
K1
K2
K3
Sampel Benalu teh
Gambar 3 Rendemen ekstrak kasar benalu teh
asal Gunung Mas (Gm) dan
beberapa sampel benalu teh
komersial (K1−K3)
Eluen Terbaik
Eluen yang akan digunakan sebagai
larutan
pengembang
adalah
yang
menghasilkan jumlah pita terbanyak dengan
pemisahan yang baik. Pemilihan fase gerak
diawali dengan pemisahan menggunakan
pelarut tunggal, yaitu kelompok pelarut polar
(metanol, asetonitril, dan etanol 30%),
6
semipolar (n-butanol, kloroform, etil asetat,
dan etanol absolut) dan nonpolar (dietil eter,
1,2-dikloroetana, dan diklorometana). Dalam
mencari eluen terbaik dilihat dari jumlah pita
yang dihasilkan, selain itu juga berdasarkan
pemisahan antar pitanya.
Diantara 10 pelarut yang digunakan, 1,2dikloroetana menghasilkan 4 noda yang
terpisah dengan baik tetapi Rf kurang dari 0.5
(Gambar 4C), sedangkan etil asetat yang juga
menghasilkan 4 noda memiliki Rf yang lebih
tinggi (Gambar 4G). Perbedaan antara kedua
pelarut tersebut terjadi karena kekuatan
pelarut etil asetat lebih tinggi dari 1,2dikloroetana (Lampiran 6). Kombinasi
keduanya diharapkan mampu menghasilkan
pola KLT yang memiliki jumlah pita yang
banyak dan terpisah dengan baik.
sehingga bisa digunakan dalam bentuk
camputan.
Eluen 1,2-dikloroetana dan etil asetat
menghasilkan 4 noda pada UV 366 nm. Selain
eluen pengembang, jumlah pita yang
dihasilkan juga dipengaruhi oleh jenis deteksi
yang digunakan. Sinar UV 366 nm akan
memunculkan komponen yang berpendar
sehingga pita akan terlihat lebih jelas
sedangkan, sinar UV 254 nm digunakan untuk
memunculkan senyawa yang mengabsorpsi
sebagai bercak gelap. Kedua deteksi tersebut
akan memunculkan senyawa yang berbeda.
Pola KLT menggunakan eluen tunggal deteksi
UV 254 dapat dilihat pada lampiran 7. Dilihat
dari jumlah pita terbanyak dan intensitas
warna yang dihasilkan, deteksi UV 366 nm
selanjutnya digunakan untuk pendeteksian.
Nilai Rf dari kromatogram pada Gambar 4
dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel
2
Nilai Rf pola KLT dengan
menggunakan eluen tunggal.
Eluen
Dietileter
Diklorometana
A
F
Gambar 4
B
G
C
H
D
I
E
J
Pola KLT menggunakan eluen
tunggal. Keterangan: dietil eter
(A), diklorometana (B), 1,2dikloroetana (C), n-butanol (D),
kloroform (E), etanol absolut
(F), etil asetat (G), metanol (H),
asetonitril (I), etanol 30% (J).
Berdasarkan
penggolongan
pelarut
menurut Snyder (Lampiran 6), 1,2dikloroetana memiliki kekuatan pelarut 3.5,
sedangkan etil asetat 4.4. Kedua pelarut
tersebut dapat bercampur dengan baik
Jumlah
noda
2
4
1,2dikloroetana
n-Butanol
4
Kloroform
Etanol absolut
Etil asetat
2
2
4
Metanol
4
Asetonitril
Etanol 30%
2
2
3
Rf
(0.06); (0.37)
(0.03); (0.06);
(0.11); (0,21)
(0.03); (0.06);
(0.11); (0,24)
(0.15); (0.83);
(0.92)
(0.03); (0.81)
(0.73); (0.82)
(0.15); (0.34);
(0.42); (0.91)
(0.50); (0.58);
(0.75); (0.85)
(0.42); (0.95)
(0.02); (0.37)
Setelah 2 pelarut tunggal terpilih, langkah
selanjutnya ialah penentuan nisbah komposisi
dari pelarut 1,2-dikloroetana dan etil asetat.
Mengacu pada Houghton dan Raman (1998),
maka digunakan variasi nisbah (50:50);
(55:45); (60:40); (65:35); (70:30); (75:25);
(80:20); (85:15); ((90:10); (95:5). Komposisi
yang paling banyak menghasilkan pita adalah
nisbah 65:35 yang dideteksi di bawah UV 366
nm (Gambar 5). Pada komposisi nisbah
tersebut dihasilkan 8 pita dengan keterpisahan
yang baik. Pola KLT komposisi nisbah 1,2dikloroetana dan etil asetat visualisasi UV 254
dapat dilihat pada Lampiran 8.
7
Rf 0.13
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(b)
Gambar 6 Pola KLT ekstrak daun benalu teh
dan berbagai sampel benalu teh
komersial pada visualisasi UV 366
nm (a), 254 nm (b). Keterangan:
ekstrak benalu teh asli (GM),
benalu teh komersial (K1), (K2),
dan (K3).
(f)
(g)
(h)
(i)
(j)
Gambar 5 Pola KLT menggunakan campuran
eluen dikloroetana dan etil asetat
dengan nisbah (50:50) (a), (55:45)
(b), (60:40) (c), (65:35) (d),
(70:30) (e), (75:25) (f), (80:20)
(g), (85:15) (h), (90:10) (i), dan
(95:5) (j).
Dua sampel benalu teh komersial yaitu K1
dan K3 menunjukkan 11 pita, sedangkan satu
sampel lainnya yaitu K2 menunjukkan 9 pita
dengan pola yang sama dengan benalu teh asli
(GM). Berdasarkan Gambar 6b diketahui
bahwa katekin dengan Rf 0.13 terdapat pada
semua sampel benalu teh.
Tabel 3 Nilai Rf komponen ekstrak benalu
teh dan beberapa benalu teh
komersial
Sidik Jari Benalu Teh
Eluen campuran 1,2-dikloroetana dan etil
asetat pada nisbah 65:35 dipilih sebagai eluen
terbaik yang akan diaplikasikan pada ekstrak
benalu teh asli dan komersial untuk
membandingkan pola kromatogramnya. Pola
KLT pada Gambar 6a memberikan informasi
bahwa ekstrak benalu teh asli (GM)
mempunyai 9 pita dengan Rf 0.02−0.97 (Tabel
3).
10
11
9
8
7
7
7
7
6
5
3
1
4
2
(a)
Pita
ke 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Rf
GM
0.02
0.04
0.06
0.13
0.19
0.29
0.88
0.93
0.97
K1
0.02
0.04
0.06
0.13
0.19
0.27
0.77
0.87
0.91
0.93
0.98
K2
0.02
0.04
0.07
0.14
0.19
0.28
0.88
0.93
0.97
K3
0.02
0.04
0.06
0.13
0.19
0.28
0.70
0.86
0.91
0.93
0.98
Benalu teh hanya tumbuh di pohon teh
yang cukup tinggi sehingga sulit untuk
didapatkan. Hal ini memungkinkan penjual
benalu teh komersial melakukan pencampuran
benalu teh dengan bahan lain seperti daun teh.
Karena itu, dilakukan pengujian dengan
mencampurkan ekstrak benalu teh dengan
ekstrak daun teh yang juga berasal dari
Gunung Mas.
8
DAFTAR PUSTAKA
[BPOM] Badan Pengawas Obat dan Makanan
2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat
Indonesia. Volume 1. Jakarta : BPOM RI.
[BPOM] Badan Pengawas Obat dan Makanan.
1995. Materia Medika Indonesia. Jilid IV.
Jakarta: Depkes RI.
a
b c1 c2 c3
c4 c5
Gambar 7 Pola KLT ekstrak sampel benalu
teh (a), daun teh (b), dan
campuran benalu teh dengan daun
teh (c), dengan nisbah c1 (1:3), c2
(1:2), c3 (1:1), c4 (2:1), dan c5
(3:1).
Benalu teh asli tidak menunjukkan
intensitas warna yang jelas pada pita ke- 9
pada Rf 0.97, sementara pada daun teh
warnanya jelas dan tajam. Pola yang sama
ditunjukkan oleh sampel komersial K1 dan K3
campuran benalu teh dengan daun teh pada
nisbah (3:1), (2:1), (1:1), (2:1), dan (3:1) yang
dapat dilihat pada Gambar 7 c1−c5 .
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Pelarut terpilih yang baik sebagai eluen
untuk penentapan sidik jari benalu teh metode
Kromatografi lapis tipis kinerja tinggi
(KLTKT) adalah campuran dikloroetana
dengan etil asetat nisbah 65:35 yang
menghasilkan 9 pita pada benalu teh asli yaitu
pada kisaran Rf 0.02–0.97. Satu sampel benalu
teh
komersial
menunjukkan
pola
kromatogram yang sama dengan benalu teh
asli, sedangkan dua sampel lainnya terdapat
11 pita dan diduga ada campuran dengan daun
teh.
Saran
Perlu dilakukan pengujian benalu teh asli
dari daerah lain untuk melihat pola sidik
jarinya.
Bustanussalam, Simanjuntak P, Muwarni R.
2003. Chatechin analysis from several
water extract of tea plant parasitic. J Kim
Mulawarman. 6:37-42.
Cie’sla L, Hajnos MW. 2009. Twodimensional thin layer chromatography in
the analysis of secondary plant
metabolites. J Chromatogr 12:1035−1052.
Delaroza F, Scarminio IS. 2008. Mixture
design optimization of extraction and
mobile phase media for fingerprint
analysis of Bauhinia variegate L. J
Separation Sci 31:1034-1041.
Florentina I, Windadri, Raharjoe JS. 1998.
Keanekaragaman jenis benalu di Pulau
Jawa. Warta Tumbuhan Obat Indonesia
4:25-28.
Fernand VE. 2003. Initial characterization of
crude extracts from Phyllanthus amarus
Schum. and Thonn. and Quassia amara L.
using
normal
phase
thin
layer
chromatography
tesis.
Lousiana:
Program Pascasarjana, University of
Suriname.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata K, Soediro I, penerjemah;
Niksolihin S, editor; Bandung: ITB Pr.
Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
Harvey D. 2000. Modern Analytical
Chemistry. New York: Mc.Graw-Hill.
Houghton PJ, Raman A. 1998. Laboratory
Handbook for Fractionation of Natural
Extracts. London: Chapman & Hall.
Liang YZ, Xie P, Chen K. 2004. Quality
control of herbal medicines. J Chromatogr
812:53-70.
9
Kimura M, Fujimura M, Yoshida M, Takeshi
T, Naoko TA. 2008. An easy method to
identify 8-keto-15-hydroxytrichothecenes
by thin layer chromatographic. Mycotoxins
58 : 115-117.
Santa IGP. 1998. Studi kemotaksonomi
farmakognosi benalu anti kanker Scurrulla
atropurpurea
(BI)
Dans
dan
Dendreoephthoe petendra (L) Miq. Warta
Tumbuhan Obat Indones 4:12-13.
Marston A. 2007. Role of advances in
chromatographic
techniques
in
phytochemistry. Phytochemistry 68:22-24
Snyder LR. Introduction to modern liquid
chromatography. New York : J Wiley.
Meloan CE. 1999. Chemical Separation. New
York: J Wiley.
Nugroho YA, Nuratmi B, Suhardi. 2000.
Daya hambat benalu teh (Scurrulla
atropurpurea) terhadap poliferasi sel
tumor kelenjar susu mencit (Mus Musculus
L) C3H. Cermin Dunia Kedokteran 27:1517.
Ohashi K et al. 2003. Indonesian medicinal
plants. XXV. Cancer cell invasion
inhibitory effects of chemical constituens
in
the
parasitic
plant
Scurrula
atropurpurea
(Loranthaceae).
Chem
Pharm 51:343-345.
Sudjadi.
1986.
Metode
Yogyakarta: UGM Pr.
Pemisahan.
Wall PE. 2005. Thin Layer Chromatography:
A Modern Practical Approach. Dorset:
VWR Int.
Winarno MW, Sundari D, Nuratmi B. 2000.
Penelitian aktivitas biologik infus benalu
teh (Scurulla atropurpurea BI. Danser)
terhadap aktivitas sistem imun mencit.
Cermin Dunia Kedokteran 127:11-14.
Zhao L, Chaoyu H, Zhen S, Bingren X,
Linghua M. 2008. Fingerprint analysis of
Psoralea corylifolia L. by HPLC and LCMS. J Chromatogr 821:67-74.
10
LAMPIRAN
11
Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Pengambilan sampel benalu teh
Determinasi sampel
(asli dan sampel komersial)
tanaman asli
Preparasi sampel
Pemeriksaan kadar air dan fitokimia
Ekstraksi (Maserasi, etanol 96%)
Pemekatan ekstrak
Penentuan eluen terbaik
menggunakan KLT
Penentuan sidik jari menggunakan KLTKT
12
Lampiran 2 Determinasi tanaman benalu teh
13
Lampiran 3 Penentuan kadar air
Bobot sampel (g)
Sampel
Benalu teh
Kadar Air
Ulangan
Rerata (%)
Bobot basah
GM
K1
K2
K3
Bobot kering
(%)
1
3.0014
2.7701
7.71
2
3.0028
2.7733
7.64
3
3.0063
2.7909
7.16
1
3.0044
2.8147
6.31
2
3.0027
2.7977
6.83
3
3.0055
2.8279
5.91
1
3.0056
2.7551
8.33
2
3.0001
2.7155
9.49
3
3.0013
2.7366
8.82
1
3.0023
2.7546
8.25
2
3.0007
2.7842
7.21
3
3.0043
2.7607
8.11
Keterangan : GM = Gunung Mas ; K1 = Sampel komersial 1; K2 = Sampel komersial 2;
K3= Sampel komersial 3
Contoh perhitungan kadar air sampel Benalu teh Gunung Mas ulangan 1:
Kadar air
=
=
= 7.71%
7.50
6.35
8.88
7.86
14
Lampiran 4 Uji fitokimia
Hasil uji
No
Kandungan fitokimia
Gunung
Mas
+
+
+
+
+
+
-
K1
K2
1
Alkaloid
+
+
2
Flavonoid
+
+
3
Saponin
+
+
4
Tanin
+
+
5
Fenol
+
+
6
Steroid
+
+
7
Triterpenoid
Keterangan: (-) = Tidak terdeteksi ; (+) = Terdeteksi ; K1 = Sampel komersial 1;
K2 = Sampel komersial 2; K3= Sampel komersial 3.
K3
+
+
+
+
+
+
-
15
Lampiran 5 Rendemen ekstrak kasar sampel benalu teh asli dan komersial
Kkkk
Sampel
Kadar
air
1
2.0383
Bobot
ekstrak
kasar (g)
0.3589
2
2.0003
0.3905
20.88
3
2.0011
0.3721
19.53
1
2.0036
0.2376
12.61
2
2.0044
0.2223
11.66
3
2.0026
0.2201
10.54
1
2.0022
0.1424
7.60
2
2.0012
0.1652
8.66
3
2.0036
0.1602
8.71
1
2.0002
0.1558
8.13
2
2.0058
0.1439
7.57
3
2.0084
0.1506
7.80
Bobot
Ulangan
sampel (g)
Gunung
Mas
7.5%
K1
6.35%
K2
8.88%
K3
7,86%
Rendemen
(%)
19.04
Keterangan : GM = Gunung Mas ; K1 = Sampel komersial 1; K2 = Sampel komersial 2;
K3= Sampel komersial
Contoh perhitungan kadar air sampel Benalu teh Gunung Mas ulangan 1:
Rendemen
=
=
= 19.10%
Rerata
(%)
19.82
11.60
8.33
7.83
16
Lampiran 6 Penggolongan pelarut oleh Snyder (Snyder 1979)
Golongan
Pelarut
Kekuatan Pelarut
I
n-Heksana
n-Butil eter
Diisopropil eter
Metil t-butil eter
Dietil eter*
Isopentanol
n-Butanol
Isopropanol
n-Propanol
Etanol*
Metanol*
Tetrahidrofuran
Piridina
2-Metoksietanol
Metil formamida
Dimetilformamida
Dimetil sulfoksida
Asam asetat*
Formamida
Diklorometana*
1,2-Dikloroetana
Benzil alkohol
Etil asetat*
Metil etil keton
Dioksana
Aseton*
Asetonitril*
Toluena
Benzena
Nitrobenzena
Nitrometana
Kloroform*
Dodekafluoroheptanol
Air
0
2.1
2.4
2.7
2.8
3.7
3.9
3.9
4.0
4.3
5.1
4.0
5.3
5.5
6.0
6.4
7.2
6.0
9.6
3.1
3.5
5.7
4.4
4.7
4.8
5.1
5.8
2.4
2.7
4.4
6.0
4.1
8.8
10.2
II
III
IV
V
VI
VII
VIII
Keterangan : * menunjukkan pelarut yang digunakan
17
Lampiran 7 Hasil elusi dengan 10 pelarut tunggal visulisasi UV 254 nm
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Keterangan : 1.Dietil eter, 2. Diklorometana, 3. 1,2-Dikloroetana, 4. n-Butanol, 5. Kloroform, 6.
Etanol, 7. Etil asetat, 8. Metanol, 9. Asetonitril, dan 10. Etanol 30%
Lampiran 8 Pola KLT komposisi nisbah 1,2-dikloroetana dan etil asetat
visualisasi UV 254 nm
a
b
c
d
e
f
g
Keterangan: A = 1,1-dikloroetana, B = etil asetat
a. (50A:50B), b. (55A:45B), c. (60A:40B), d. (65A: 3B), e. (70A:30B),
f. (75A:25B), g. (80A:20B), h. (85A:15B), i. (90A:10B), dan j. (95A:5B)
h
i
j
MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS KINERJA
TINGGI
MARTA YUSFITA SARI
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
ABSTRAK
MARTA YUSFITA SARI. Analisis Sidik Jari Daun Benalu Teh Menggunakan
Kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi. Dibimbing oleh ELLY
SURADIKUSUMAH dan WULAN TRI WAHYUNI.
Benalu teh merupakan tanaman obat yang banyak diperjualbelikan dalam
bentuk kering sehingga memungkinkan adanya pencampuran dengan bahan lain.
Analisis sidik jari dengan teknik kromatografi lapis tipis kinerja tinggi dapat
dimanfaatkan untuk menguji keaslian herbal benalu teh komersial. Pemilihan fase
gerak yang tepat merupakan salah satu tahap penting dalam pemisahan
komponen. Pelarut yang terpilih sebagai eluen adalah campuran 1,2-dikloroetana
dengan etil asetat pada nisbah 65:35 yang menghasilkan 9 pita pada benalu teh
asli dengan kisaran Rf (0.02−0.97). Hasil analisis menunjukkan bahwa salah satu
sampel benalu teh komersial memiliki pola kromatogram yang sama dengan
benalu teh asli, sedangkan 2 sampel lainnya menghasilkan 11 pita dan diduga
karena pencampuran dengan daun teh.
ABSTRACT
MARTA YUSFITA SARI. Fingerprint Analysis of Tea Parasitic Plant Leaves
Using High Performance Thin Layer Chromatography. Supervised by ELLY
SURADIKUSUMAH and WULAN TRI WAHYUNI.
Tea parasitic plant is a medicinal plant widely traded in dried form, allowing
mixing with other ingredients. Fingerprint analysis with high performance thin
layer chromatography technique can be utilized for testing the authenticity of
commercial tea parasite herbal. Selection of the appropriate mobile phase is an
important stage in the separation of components. The solvent selected as the
eluent was a mixture of 1,2-dichloroethane and ethyl acetate with 65:35 ratio that
gave nine bands in the original tea parasitic plant with Rf ranging from 0.02 to
0.97. The analysis showed that one of the commercial tea parasite samples had the
same chromatogram pattern with the original tea parasite, while the other two
produced 11 bands and appeared to be mixed with the tea leaves.
ANALISIS SIDIK JARI DAUN BENALU TEH
MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS KINERJA
TINGGI
MARTA YUSFITA SARI
Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
Judul
Nama
NIM
: Analisis Sidik Jari Daun Benalu Teh Menggunakan Kromatografi
Lapis Tipis Kinerja Tinggi
: Marta Yusfita Sari
: G44086033
Disetujui
Pembimbing I,
Pembimbing II,
Ir Elly Suradikusumah, MS
NIP 19450214 197010 2 001
Wulan Tri Wahyuni, SSi, MSi
Diketahui
Ketua Departemen,
Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 19501227 197603 2 002
Tanggal Lulus:
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat
dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Shalawat
beriring salam tercurahkan kepada Nabi besar Muhammad SAW beserta
keluarganya, semoga kita semua menjadi pengikutnya hingga akhir zaman.
Skripsi ini disusun berdasarkan penelitian yang dilaksanakan dari bulan Desember
hingga Juni 2011 di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka IPB, Bogor.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Ir Elly Suradikusumah, MS
dan Ibu Wulan Tri Wahyuni, SSi, MSi selaku pembimbing yang telah memberi
banyak arahan, inspirasi, dorongan, kritik, dan saran selama penulis melaksanakan
penelitian ini. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ayahanda dan
Almarhumah Ibunda serta Kakak tercinta yang telah memberi banyak kasih
sayang, semangat, dan doa selama penulis menempuh studi, penelitian, dan
penulisan skripsi ini.
Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada Ibu Salina, SSi, Ibu Nunuk,
Ibu Susi, Mba Wiwi, Endi, Antonio, dan Bapak Agung Zaim, S.Si, MSi atas
segala bantuannya selama penelitian. Ucapan terima kasih juga penulis berikan
kepada Arini, Zulia, Nanda, Ayu, Fajar Sumi, Rika, Desi, dan teman-teman
Ekstensi Kimia angkatan 2008 yang turut membantu memberikan semangat dan
dukungannya dalam penyusunan skripsi ini.
Semoga skripsi ini bermanfaat.
Bogor, Desember 2011
Marta Yusfita Sari
iv
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di kota Jepara pada tanggal 26 Maret 1984 sebagai anak
ketiga dari pasangan D Siswanto dan Rikhana. Penulis lulus dari SMU Negeri 1
kota Jepara pada tahun 2002, dan pada tahun 2003 diterima sebagai mahasiswa
Akademi Kimia Analisis Bogor (AKA). Penulis lulus pada tahun 2006 kemudian
pada tahun 2008 melanjutkan ke S1 Penyelenggaraan Khusus Departemen Kimia,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam IPB. Penulis pernah melakukan
praktik kerja lapangan di Balai Besar Air Tawar Sukabumi pada tahun 2006.
Penulis pernah bekerja di PT Raberindo Pratama dan PT Pharos Indonesia pada
tahun 2008. Tahun 2011 sampai saat ini, penulis bekerja di PT Boehringer
Ingelheim Indonesia.
v
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ................................................................................................. vii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ viii
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
TINJAUAN PUSTAKA
Benalu Teh ....................................................................................................... 1
Maserasi ........................................................................................................... 2
Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi (KLTKT) ....................... 2
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan ................................................................................................. 3
Persiapan Sampel ............................................................................................. 3
Penentuan Kadar Air ....................................................................................... 3
Ekstraksi dengan Maserasi ............................................................................... 3
Uji Fitokimia ................................................................................................... 3
Kondisi KLT .................................................................................................... 4
Penentuan Eluen Terbaik ................................................................................. 4
Deteksi Komponen ........................................................................................... 4
Sidik Jari Ekstrak Daun Benalu Teh ................................................................ 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi dan Preparasi Sampel .................................................................... 4
Kadar Air ......................................................................................................... 4
Uji Fitokimia .................................................................................................... 5
Rendemen Ekstrak ........................................................................................... 5
Eluen Terbaik ................................................................................................... 5
Sidik Jari Benalu Teh ....................................................................................... 7
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan .......................................................................................................... 8
Saran ................................................................................................................ 8
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................. 8
LAMPIRAN ............................................................................................................ 9
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Kadar air benalu teh asal Gunung Mas dan beberapa sampel benalu teh
komersial ............................................................................................................. 5
2 Nilai Rf pola KLT dengan menggunakan eluen tunggal. .................................... 6
3 Nilai Rf komponen ekstrak benalu teh dan beberapa benalu teh komersial ....... 7
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Scurrulla atropurpurea. ...................................................................................... 1
2 Bejana kromatografi berisi KLT dan eluen serta hasil elusi. .............................. 2
3 Rendemen ekstrak kasar benalu teh asal Gunung Mas (Gm) dan
beberapa sampel benalu teh komersial ............................................................... 5
4 Pola KLT menggunakan eluen tunggal ............................................................... 6
5 Pola KLT menggunakan campuran eluen dikloroetana dan etil asetat. .............. 7
6 Pola KLT ekstrak daun benalu teh dan berbagai sampel benalu
teh komersial pada visualisasi UV 366 nm (a), 254 nm (b)................................ 7
7 Pola KLT ekstrak sampel benalu teh (a), daun teh (b), dan campuran benalu
teh dengan daun teh (c) ....................................................................................... 8
vii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian ...................................................................................... 11
2 Determinasi tanaman benalu teh ....................................................................... 12
3 Penentuan kadar air ........................................................................................... 13
4 Uji fitokimia ...................................................................................................... 14
5 Rendemen ekstrak kasar sampel benalu teh asli dan komersial ........................ 15
6 Penggolongan pelarut oleh Snyder (Snyder 1979)............................................ 16
7 Hasil elusi dengan 10 pelarut tunggal visulisasi UV 254 nm ........................... 17
8 Pola KLT komposisi nisbah 1,2-dikloroetana dan etil asetat
visualisasi UV 254 nm ...................................................................................... 17
viii
1
PENDAHULUAN
Perkembangan
penggunaan
tanaman
herbal di Indonesia sebagai pengobatan
alternatif semakin luas. Hal ini ditunjang oleh
adanya bukti-bukti empiris dan juga dukungan
ilmiah terhadap khasiat produk herbal dalam
bentuk minuman atau jamu yang semakin
banyak, sehingga meyakinkan masyarakat
untuk menggunakannya sebagai obat untuk
pencegahan dan pengobatan berbagai macam
penyakit. Benalu teh (Scurrula atropurpurea)
merupakan salah satu tumbuhan yang
digunakan oleh masyarakat Indonesia sebagai
obat herbal antitumor atau antikanker.
Menurut Winarno et al. (2000), benalu teh
menghambat pertumbuhan tumor secara tidak
langsung, yaitu melalui sistem kekebalan
dengan cara meningkatkan konsentrasi
imunoglobulin G (IgG).
Benalu teh banyak diperjualbelikan dalam
bentuk yang telah dikeringkan sehingga
memungkinkan adanya pencampuran dengan
bahan lain yang bukan merupakan simplisia
benalu teh asli. Kesalahan identifikasi herbal
benalu teh mungkin terjadi, karena kesamaan
fisik (morfologi) sampel dalam bentuk
simplisia sehingga sulit dibedakan oleh
masyarakat awam. Menurut Delaroza dan
Scarminio (2008), metode analisis sidik jari
dapat mengatasi permasalahan tersebut.
Senyawa kimia yang dikandung oleh
tanaman obat dapat ditampilkan dalam
kromatogram sidik jari sehingga karakteristik
tanaman obat tersebut dapat digambarkan
secara menyeluruh (Liang et al. 2009).
Analisis sidik jari dimanfaatkan untuk
evaluasi dan kontrol kualitas multikomponen
dari bahan baku obat herbal karena profil
kromatografi yang dihasilkan mencirikan
komposisi sampel dan stabilitas dari suatu
tanaman obat (Zhao et al. 2008). Metode
analisis yang digunakan dalam penelitian ini
adalah teknik kromatografi lapis tipis kinerja
tinggi (KLTKT). Kromatografi lapis tipis
memiliki kelebihan berupa mudah dalam
preparasi
sampel,
sederhana,
biaya
operasional relatif murah karena semua
komponen sampel dan standar diujikan dalam
waktu yang sama, volume pelarut yang
digunakan sedikit, selektif dan sensitif, serta
kromatogramnya dapat diamati secara visual
(Kimura et al.2008). Salah satu hal yang
diperlukan untuk menunjang analisis sidik jari
adalah pemilihan fase gerak yang tepat untuk
mendapatkan pemisahan komponen yang
baik. Tujuan penelitian ini adalah menentukan
sidik jari benalu teh yang dapat dimanfaatkan
untuk pengujian herbal benalu teh komersial.
TINJAUAN PUSTAKA
Benalu Teh
Benalu adalah tumbuhan liar yang melekat
dan parasit pada tumbuhan lain sebagai
inangnya. Pada umumnya benalu diberi nama
berdasarkan tumbuhan yang ditumpanginya.
Benalu teh adalah tumbuhan yang hidupnya
menumpang pada tumbuhan teh dan mengisap
makanan dari tumbuhan inang untuk
kelangsungan hidupnya (Winarno et al. 2000).
Salah satu tanaman benalu teh yang
ditemukan
di
Indonesia
adalah
S.
atropurpurea
yang
termasuk
suku
Loranthaceae, dapat tumbuh pada ketinggian
1 600 m di atas permukaan laut (Florentina et
al. 1998). Ciri morfologi S. atropurpurea
ialah batang menggantung berbentuk silindris
berbintik-bintik cokelat, memiliki daun
tunggal berhadapan, lonjong, ujung agak
meruncing, pangkal membulat, tepi rata,
permukaan atas hijau dan permukaan bawah
cokelat (Gambar 1).
Gambar 1 Scurrulla atropurpurea.
Secara tradisional benalu teh dimanfaatkan
untuk menyembuhkan penyakit cacar air,
diare, cacing tambang, amandel, kanker, dan
tumor. Tanaman benalu teh diduga memiliki
beberapa senyawa aktif yang berfungsi
sebagai antioksidan. Hal tersebut diperkuat
oleh hasil penelitian Santa (1998) yang
menunjukkan bahwa
benalu
teh S.
atropurpurea yang dipakai untuk obat
antikanker memiliki kemampuan antioksidan
tersebut. Menurut Nugroho et al. (2000),
benalu teh mengandung senyawa alkaloid,
flavanoid, terpenoid, glikosida, triterpena,
saponin, dan tanin. Benalu teh juga
mengandung katekin (Bustanulssalam et al.
2003) yang merupakan antioksidan inhibitor
antikanker. Menurut Ohashi et al. (2003),
benalu teh efektif untuk menyerang sel kanker
yang diisolasi dari tikus. Senyawa kimia yang
berperan aktif merupakan golongan flavonoid.
2
Berdasarkan hasil isolasi, tanaman benalu teh
mangandung komponen senyawa flavan
(katekin, epikatekin, epikatekin-3-O-galat,
dan
epigalokatekin-3-O-galat),
flavonol
glikosida, dan inhibitor kanker asam
oktadeka-8,10,12-triunoat.
Maserasi
Maserasi ialah metode ekstraksi dengan
cara merendam sampel menggunakan pelarut
yang sesuai dalam jangka waktu tertentu
sehingga interaksi antara senyawa yang
diekstraksi dan pelarut dapat berlangsung
maksimum (Houghton & Raman 1998).
Keuntungan menggunakan teknik ini adalah
peralatan yang digunakan sederhana dan aman
untuk senyawa yang tidak tahan panas,
sedangkan kerugiannya adalah waktu yang
diperlukan lama serta jumlah pelarut yang
dipakai tidak efisien (Meloan 1999).
Pengambilan komponen target pada proses
maserasi dilakukan dengan cara merendam
serbuk simplisia dalam jangka waktu tertentu
sehingga isi sel akan larut karena adanya
perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam
sel dan di luar sel. Larutan dengan konsentrasi
tinggi akan terdesak keluar kemudian
digantikan oleh pelarut dengan konsentrasi
lebih rendah (proses difusi). Peristiwa tersebut
berulang-ulang sampai terjadi kesetimbangan
konsentrasi antara larutan di luar dan di dalam
sel. Selama proses maserasi, sesekali
dilakukan pengadukan dan juga penggantian
pelarut. Kemudian residu yang diperoleh
dipisahkan dan filtrat yang dihasilkan
diuapkan (Sudjadi 1986).
Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis
Kinerja Tinggi (KLTKT)
Analisis sidik jari adalah suatu prosedur
untuk menunjukkan informasi kimia dalam
bentuk spektrogram, kromatogram, dan grafik
lainnya yang didapatkan dari teknik analitis.
Informasi ini dapat dimanfaatkan untuk
evaluasi dan kontrol kualitas multikomponen,
antara lain dari tanaman obat (Delaroza &
Scarminio 2008), yang penting untuk
klasifikasi dan validasi spesies botani serta
kendali mutu tanaman obat.
Informasi mengenai komponen kimia pada
tanaman obat dapat dilihat dari sidik jari
tanaman tersebut melalui pola kromatogram
tanpa memperhatikan jenis komponennya.
Beberapa
teknik
kromatografi
seperti
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT),
kromatografi gas (KG), kromatografi lapis
tipis (KLT), dan elektroforesis kapiler dapat
ditetapkan untuk analisis sidik jari (Delaroza
& Scarminio 2008)
Teknik kromatografi yang paling luas
digunakan dalam fitokimia adalah KLT
karena dapat diterapkan pada hampir setiap
golongan senyawa, kecuali komponen yang
sangat atsiri (Harbone 1987). Kromatografi
adalah suatu teknik yang digunakan untuk
memisahkan
senyawa
berdasarkan
distribusinya pada fase gerak dan fase diam.
Komponen yang memiliki interaksi lebih
besar pada fase diam akan bertahan lama,
sedangkan komponen yang memiliki interaksi
lebih besar dengan fase gerak akan bergerak
lebih cepat (Gambar 2)
Gambar 2 Bejana kromatografi berisi KLT
dan eluen serta hasil elusi.
KLT merupakan metode yang paling
banyak digunakan untuk analisis sidik jari
karena mempunyai beberapa kelebihan yaitu
mudah dalam preparasi sampel, sederhana
dalam prosedur kerja, volume pelarut yang
digunakan sedikit, selektif dan sensitif, serta
kromatogramnya dapat diamati secara visual
(Cie’sla & Hajnos 2009). Secara luas KLT
banyak digunakan untuk berbagai keperluan
analisis tumbuhan obat. Saat ini telah
dikembangkan KLT semiautomatis CAMAG
Linomat V. Alat ini dikendalikan oleh suatu
mikroprosesor yang menyebabkan larutan
ekstrak dapat diaplikasikan pada pelat dalam
bentuk pita dengan mengalirkan tekanan udara
atau gas nitrogen sehingga tidak memerlukan
kontak langsung dengan pelat dan dapat
mengurangi kerusakan pelat (Wall 2005).
Kromatografi lapis tipis kinerja tinggi
(KLTKT) atau high performance thin layer
chromatography merupakan aplikasi modern
dari KLT yang dimaksudkan untuk
menghasilkan pemisahan hasil analisis yang
lebih baik dibandingkan dengan KLT biasa.
Kelebihan KLTKT dibandingkan dengan KLT
terletak pada fase diamnya, fase diam pada
KLTKT berukuran lebih halus dengan poripori seragam serta ketebalan lapisan 0.1 mm.
Pada KLTKT, pelat fase diamnya memiliki
rerata ukuran partikel sebesar 5 m. Pelat
tersebut memiliki keterpisahan yang lebih
3
baik apabila dibandingkan dengan KLT biasa
yang memiliki ukuran partikel pelat 12 m.
Pencirinya berupa kromatogram, yaitu pola
yang menggambarkan senyawa dalam setiap
tumbuhan obat sehingga bermanfaat dalam
kontrol kualitas tumbuhan obat baik untuk
pencirian bahan baku maupun produk akhir.
KLTKT lazim digunakan untuk identifikasi
dan sangat ideal untuk uji penapisan
pendahuluan ekstrak tanaman (Marston 2007).
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan
Peralatan
yang
digunakan
selama
penelitian adalah peranti KLTKT Camag
Linomat 5, Camag Reprostar 3 didukung
peranti lunak winCATS 1.2.3 untuk
dokumentasi kromatogram KLT, bejana kaca
kromatografi, peralatan kaca, neraca analitik,
dan oven Memmert.
Bahan-bahan yang digunakan adalah daun
benalu teh asli yang diambil dari perkebunan
teh Gunung Mas, sampel benalu teh komersial
produksi dari Cianjur (K1), Cisarua (K2), dan
Sukabumi (K3), pelat KLTKT silika gel 60
F254 2020 cm (Merck, Jerman), etanol 96%.
Pelarut p.a untuk fase gerak diperoleh dari
Merck dan Sigma Aldrich (St Louis, Amerika
Serikat) seperti dietil eter, n-butanol, etanol
absolut, etanol 30%, asetonitril, kloroform,
etil asetat, metanol, 1,2-dikloroetana, dan
diklorometana.
Persiapan Sampel
Tanaman benalu teh diambil dari Gunung
Mas. Identifikasi dilakukan di Herbarium
Bogoriense, Bogor, Jawa Barat, Indonesia.
Sampel benalu teh komersial diperoleh di
pasaran yang merupakan produksi dari
Cianjur (K1), Cisarua (K2), dan Sukabumi
(K3). Selanjutnya sampel-sampel tersebut
dikeringkan, dan dibuat serbuk. Bagan alir
penelitian dapat dilihat pada Lampiran 1.
Penentuan Kadar Air (BPOM 2004)
Sebanyak 3 g serbuk kering ditimbang,
digunakan wadah yang telah dikeringkan pada
suhu 105 C hingga diperoleh bobot konstan.
Wadah beserta isinya dipindahkan ke dalam
eksikator selama 15 menit sebelum bobotnya
ditimbang. Kadar air diperoleh sebagai nisbah
selisih bobot sampel awal dengan bobot
sampel setelah dikeringkan terhadap bobot
sampel sebelum dikeringkan.
diulangi sebanyak 3 kali.
Perlakuan
Ekstraksi dengan Maserasi
Metode ekstraksi yang digunakan dalam
penelitian ini adalah maserasi menggunakan
etanol 96%. Sebanyak 50 g serbuk kering
daun benalu teh direndam dengan 250 mL
pelarut selama 24 jam. Maserat dipisahkan
dari residu dengan penyaringan. Ke dalam
residu ditambahkan kembali pelarut dan
tahapan ekstraksi diulangi hingga 3 kali.
Maserat dari setiap ulangan ekstraksi
digabung dan dikeringkan dengan penguap
putar.
Uji Fitokimia (Harbone 1987)
Alkaloid
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh dilarutkan dengan 10 mL kloroform dan 4
tetes NH4OH. Larutan kemudian disaring dan
filtratnya dimasukkan ke dalam tabung reaksi
bertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung
reaksi dikocok dengan 10 tetes H2SO4 2 M
dan lapisan asamnya dipisahkan ke dalam
tabung reaksi lain. Lapisan asam ini diteteskan
pada lempeng tetes dan ditambahkan pereaksi
Mayer, Wagner, dan Dragendorf yang akan
menimbulkan endapan dengan warna berturutturut putih, cokelat, dan merah jingga jika
terdapat alkaloid.
Saponin
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh ditambahkan 10 mL air panas dan
dididihkan selama 5 menit. Setelah itu,
disaring dan filtratnya digunakan untuk
pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup kemudian dikocok
selama 10 detik dan didiamkan selama 10
menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan
terbentuk buih yang stabil.
Flavonoid
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh ditambahkan 10 mL air panas dan
dididihkan selama 5 menit. Setelah itu,
disaring dan filtratnya digunakan untuk
pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi lalu ditambahkan 0.5 g serbuk
magnesium, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL amil
alkohol, dan dikocok kuat. Uji positif
flavonoid menghasilkan warna kuning atau
jingga pada lapisan amil alkohol.
4
Tanin
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh ditambahkan 10 mL air panas, dididihkan
selama 5 menit, dan disaring. Sebagian filtrat
yang diperoleh ditambahkan larutan FeCl3
1%. Hasil positif ditunjukkan oleh warna hijau
kehitaman.
Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh dilarutkan dengan 25 mL etanol panas (50
C). Larutan disaring dalam pinggan porselen
dan diuapkan sampai kering. Residu
ditambahkan eter dan ekstrak eter dipindahkan
ke dalam lempeng tetes. Kemudian
ditambahkan 3 tetes anhidrida asetat dan 1
tetes H2SO4 pekat (Uji Lieberman-Burchard).
Warna merah atau ungu menunjukkan adanya
triterpenoid dan warna hijau atau biru
menunjukkan adanya steroid.
Uji Fenol
Sebanyak 0.1 g serbuk kering daun benalu
teh dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
kemudian ditambahkan FeCl3. Warna ungu,
biru, atau hijau menunjukkan adanya senyawa
golongan fenol.
gerak mencapai 0.5 cm dari tepi atas pelat.
Pelat diangkat segera setelah elusi mencapai
garis finis dan dikeringkan. Deteksi
komponen dilakukan untuk melihat bercak
yang muncul pada pelat. Eluen yang dipilih
ialah yang memberikan penampakan bercak
terbanyak dan mewakili pemisahan yang baik.
Eluen terpilih kemudian dikombinasikan
untuk mendapatkan eluen campuran.
Deteksi Komponen
Deteksi komponen dilakukan dengan cara
pelat dikeringudarakan selama 5−10 menit
kemudian pelat disinari dengan sinar
ultraviolet (UV) 254 nm dan 366 nm, bercak
akan terlihat (Fernand 2003).
Sidik Jari Ekstrak Daun Benalu Teh
Ekstrak daun benalu teh asli dan benalu
teh komersial diaplikasikan pada pelat yang
sama dan dielusi menggunakan pelarut
pengembang
terbaik
untuk
dilihat
perbandingan pola kromatografinya.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kondisi KLT
Identifikasi dan Preparasi Sampel
Penotolan ekstrak sampel daun benalu teh
pada pelat menggunakan aplikator KLT
semiautomatis, yaitu Camag Linomat V
dengan menggunakan pelat silika gel 60 F 254.
Pelat dimasukkan ke dalam oven sebelum
digunakan. Kondisi aplikasi antara lain gas
pembawa
adalah
nitrogen,
kecepatan
pengiriman sampel dengan syiringe sebesar 40
nL/det, aplikasi volume sampel sebesar 5.0 L
dan 4.0 L untuk standar, lebar pita 8 mm,
dan jarak dari tepi bawah pelat sebesar 10
mm. Ekstrak yang diaplikasikan dipersiapkan.
Ekstrak pekat dari ekstraksi maserasi
dilarutkan dengan etanol 96% sehingga
diperoleh konsentrasi 10 g/L.
Penentuan Eluen Terbaik
Sebanyak 5 mL pelarut dietil eter, nbutanol, etanol absolut, etanol 30%,
asetonitril, kloroform, etil asetat, metanol, 1,2dikloroetana, diklorometana masing-masing
dimasukkan ke dalam bejana kromatografi
dan dijenuhkan. Sampel dengan konsentrasi
10 g/L ditotolkan pada pelat KLT, setelah
kering langsung dielusi dalam bejana
kromatografi yang telah dijenuhkan oleh uap
eluen. Pengembangan dilakukan hingga fase
Tanaman benalu teh yang digunakan
dalam penelitian ini diperoleh dari Gunung
Mas, Bogor, Jawa Barat. Tanaman benalu teh
kemudian dideterminasi oleh Herbarium
Bogoriense. Berdasarkan determinasi yang
dilakukan, tanaman tersebut benar S.
atropurpurea (BI) Danser (Lampiran 2).
Sebelum sampel digunakan, terlebih dahulu
dikeringkan dan dibuat serbuk. Pengeringan
bertujuan agar sampel tidak mudah rusak
sehingga dapat disimpan dalam jangka waktu
lama. Dengan mengurangi kadar air,
kerusakan sampel oleh mikrob dapat
dihindari. Penggilingan sampel menjadi
ukuran
yang
lebih
kecil
bertujuan
memperbesar luas permukaan bahan sehingga
dapat membantu penetrasi pelarut ke dalam
sel tumbuhan, mempercepat pelarutan
komponen bioaktif, dan meningkatkan
rendemen.
Kadar Air
Sampel benalu teh yang siap diekstraksi
ditetapkan kadar airnya dengan menggunakan
metode gravimetri. Perolehan kandungan air
5
Tabel 1 Kadar air benalu teh asal Gunung
Mas dan beberapa sampel benalu
teh komersial
Sampel benalu teh
Kadar air
(%)
Benalu teh asli
7.50
Komersial asal Cianjur (K1)
6.35
Komersial asal Cisarua (K2)
8.88
Komersial asal Sukabumi (K3)
7.86
Kadar air yang diperoleh kemudian
digunakan sebagai faktor koreksi dalam
penentuan rendemen ekstrak. Perhitungan
kadar air dapat dilihat pada Lampiran 3.
Penetapan kadar air berguna untuk
mengetahui kandungan air pada sampel
sebagai persen bahan keringnya serta untuk
memperkirakan untuk daya tahan bahan dan
cara penyimpanan terbaik agar tidak terjadi
kerusakan sampel akibat aktivitas mikrob
(jamur dan bakteri) (Harjadi 1993).
Berdasarkan BPOM (2004), kadar air
simplisia tidak boleh lebih dari 10%.
Simplisia yang mengandung kadar air di
bawah 10 % akan memiliki masa simpan yang
relatif lama karena proses pembusukan oleh
bakteri dan jamur dapat terhambat sehingga
lebih stabil.
Nilai kadar air yang diperoleh lebih kecil
dari 10%. Kadar tersebut telah memenuhi
persyaratan simplisia menurut BPOM (1995),
sehingga diharapkan pertumbuhan mikrob
dapat dihambat dan risiko kerusakan sampel
benalu teh akibat serangan jamur dan bakteri
dapat dikurangi.
Uji Fitokimia
Uji fitokimia pada simplisia dilakukan
untuk mengetahui secara kualitatif senyawa
metabolit sekunder yang terkandung dalam
sampel. Uji yang dilakukan meliputi alkaloid,
flavonoid, saponin, tanin, steroid, triterpenoid,
dan fenol. Golongan senyawa dalam sampel
dapat ditentukan dengan melihat perubahan
warna setelah ditambahkan pereaksi yang
spesifik
untuk
setiap
uji
kualitatif.
Berdasarkan hasil uji fitokimia, diketahui
bahwa dalam sampel serbuk kering benalu teh
asli dan komersial mengandung metabolit
sekunder dari golongan flavonoid, tanin,
saponin, fenol, alkaloid, dan steroid
(Lampiran 4).
Uji alkaloid memberikan hasil yang positif
karena terbentuk endapan. Uji tanin
memberikan warna hijau kehitaman setelah
ditambahkan FeCl3 1%. Pada uji saponin
terbentuk busa yang stabil selama beberapa
menit setelah dikocok secara vertikal. Uji
flavonoid memberikan hasil positif yang
ditunjukkan dengan timbulnya warna merah
pada lapisan amil alkohol. Uji steroid
menunjukkan
hasil
positif
sedangkan
triterpenoid negatif karena warna yang
terbentuk adalah warna hijau kehitaman dan
bukan merah atau ungu yang menandakan
positif untuk triterpenoid.
Rendemen Ekstrak
Pelarut merupakan salah satu faktor
penting dalam menghasilkan ekstrak yang
baik. Pelarut yang dipilih adalah yang
memiliki daya larut tinggi, tidak berbahaya,
dan tidak beracun. Pelarut etanol dipilih
karena lebih selektif dan aman. Rendemen
ekstrak kasar benalu teh dari Gunung Mas dan
benalu teh komersial berkisar 7.8319.82%
dari masing masing 2 g sampel yang di
ekstraksi (Gambar 3). Proses ekstraksi
dilakukan menggunakan metode maserasi
pada suhu kamar dengan pertimbangan
maserasi
dapat
digunakan
untuk
mengekstraksi sampel yang tahan maupun
tidak tahan terhadap panas. Dengan demikian,
kerusakan komponen kimia benalu teh dapat
dihindari. Perhitungan ditunjukkan rendemen
pada Lampiran 5.
Rendemen (%)
pada sampel kering daun benalu teh asal
Gunung Mas dan beberapa benalu teh
komersial berkisar 6.35–8.88% (Tabel 1).
30
20
10
0
Gm
K1
K2
K3
Sampel Benalu teh
Gambar 3 Rendemen ekstrak kasar benalu teh
asal Gunung Mas (Gm) dan
beberapa sampel benalu teh
komersial (K1−K3)
Eluen Terbaik
Eluen yang akan digunakan sebagai
larutan
pengembang
adalah
yang
menghasilkan jumlah pita terbanyak dengan
pemisahan yang baik. Pemilihan fase gerak
diawali dengan pemisahan menggunakan
pelarut tunggal, yaitu kelompok pelarut polar
(metanol, asetonitril, dan etanol 30%),
6
semipolar (n-butanol, kloroform, etil asetat,
dan etanol absolut) dan nonpolar (dietil eter,
1,2-dikloroetana, dan diklorometana). Dalam
mencari eluen terbaik dilihat dari jumlah pita
yang dihasilkan, selain itu juga berdasarkan
pemisahan antar pitanya.
Diantara 10 pelarut yang digunakan, 1,2dikloroetana menghasilkan 4 noda yang
terpisah dengan baik tetapi Rf kurang dari 0.5
(Gambar 4C), sedangkan etil asetat yang juga
menghasilkan 4 noda memiliki Rf yang lebih
tinggi (Gambar 4G). Perbedaan antara kedua
pelarut tersebut terjadi karena kekuatan
pelarut etil asetat lebih tinggi dari 1,2dikloroetana (Lampiran 6). Kombinasi
keduanya diharapkan mampu menghasilkan
pola KLT yang memiliki jumlah pita yang
banyak dan terpisah dengan baik.
sehingga bisa digunakan dalam bentuk
camputan.
Eluen 1,2-dikloroetana dan etil asetat
menghasilkan 4 noda pada UV 366 nm. Selain
eluen pengembang, jumlah pita yang
dihasilkan juga dipengaruhi oleh jenis deteksi
yang digunakan. Sinar UV 366 nm akan
memunculkan komponen yang berpendar
sehingga pita akan terlihat lebih jelas
sedangkan, sinar UV 254 nm digunakan untuk
memunculkan senyawa yang mengabsorpsi
sebagai bercak gelap. Kedua deteksi tersebut
akan memunculkan senyawa yang berbeda.
Pola KLT menggunakan eluen tunggal deteksi
UV 254 dapat dilihat pada lampiran 7. Dilihat
dari jumlah pita terbanyak dan intensitas
warna yang dihasilkan, deteksi UV 366 nm
selanjutnya digunakan untuk pendeteksian.
Nilai Rf dari kromatogram pada Gambar 4
dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel
2
Nilai Rf pola KLT dengan
menggunakan eluen tunggal.
Eluen
Dietileter
Diklorometana
A
F
Gambar 4
B
G
C
H
D
I
E
J
Pola KLT menggunakan eluen
tunggal. Keterangan: dietil eter
(A), diklorometana (B), 1,2dikloroetana (C), n-butanol (D),
kloroform (E), etanol absolut
(F), etil asetat (G), metanol (H),
asetonitril (I), etanol 30% (J).
Berdasarkan
penggolongan
pelarut
menurut Snyder (Lampiran 6), 1,2dikloroetana memiliki kekuatan pelarut 3.5,
sedangkan etil asetat 4.4. Kedua pelarut
tersebut dapat bercampur dengan baik
Jumlah
noda
2
4
1,2dikloroetana
n-Butanol
4
Kloroform
Etanol absolut
Etil asetat
2
2
4
Metanol
4
Asetonitril
Etanol 30%
2
2
3
Rf
(0.06); (0.37)
(0.03); (0.06);
(0.11); (0,21)
(0.03); (0.06);
(0.11); (0,24)
(0.15); (0.83);
(0.92)
(0.03); (0.81)
(0.73); (0.82)
(0.15); (0.34);
(0.42); (0.91)
(0.50); (0.58);
(0.75); (0.85)
(0.42); (0.95)
(0.02); (0.37)
Setelah 2 pelarut tunggal terpilih, langkah
selanjutnya ialah penentuan nisbah komposisi
dari pelarut 1,2-dikloroetana dan etil asetat.
Mengacu pada Houghton dan Raman (1998),
maka digunakan variasi nisbah (50:50);
(55:45); (60:40); (65:35); (70:30); (75:25);
(80:20); (85:15); ((90:10); (95:5). Komposisi
yang paling banyak menghasilkan pita adalah
nisbah 65:35 yang dideteksi di bawah UV 366
nm (Gambar 5). Pada komposisi nisbah
tersebut dihasilkan 8 pita dengan keterpisahan
yang baik. Pola KLT komposisi nisbah 1,2dikloroetana dan etil asetat visualisasi UV 254
dapat dilihat pada Lampiran 8.
7
Rf 0.13
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(b)
Gambar 6 Pola KLT ekstrak daun benalu teh
dan berbagai sampel benalu teh
komersial pada visualisasi UV 366
nm (a), 254 nm (b). Keterangan:
ekstrak benalu teh asli (GM),
benalu teh komersial (K1), (K2),
dan (K3).
(f)
(g)
(h)
(i)
(j)
Gambar 5 Pola KLT menggunakan campuran
eluen dikloroetana dan etil asetat
dengan nisbah (50:50) (a), (55:45)
(b), (60:40) (c), (65:35) (d),
(70:30) (e), (75:25) (f), (80:20)
(g), (85:15) (h), (90:10) (i), dan
(95:5) (j).
Dua sampel benalu teh komersial yaitu K1
dan K3 menunjukkan 11 pita, sedangkan satu
sampel lainnya yaitu K2 menunjukkan 9 pita
dengan pola yang sama dengan benalu teh asli
(GM). Berdasarkan Gambar 6b diketahui
bahwa katekin dengan Rf 0.13 terdapat pada
semua sampel benalu teh.
Tabel 3 Nilai Rf komponen ekstrak benalu
teh dan beberapa benalu teh
komersial
Sidik Jari Benalu Teh
Eluen campuran 1,2-dikloroetana dan etil
asetat pada nisbah 65:35 dipilih sebagai eluen
terbaik yang akan diaplikasikan pada ekstrak
benalu teh asli dan komersial untuk
membandingkan pola kromatogramnya. Pola
KLT pada Gambar 6a memberikan informasi
bahwa ekstrak benalu teh asli (GM)
mempunyai 9 pita dengan Rf 0.02−0.97 (Tabel
3).
10
11
9
8
7
7
7
7
6
5
3
1
4
2
(a)
Pita
ke 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Rf
GM
0.02
0.04
0.06
0.13
0.19
0.29
0.88
0.93
0.97
K1
0.02
0.04
0.06
0.13
0.19
0.27
0.77
0.87
0.91
0.93
0.98
K2
0.02
0.04
0.07
0.14
0.19
0.28
0.88
0.93
0.97
K3
0.02
0.04
0.06
0.13
0.19
0.28
0.70
0.86
0.91
0.93
0.98
Benalu teh hanya tumbuh di pohon teh
yang cukup tinggi sehingga sulit untuk
didapatkan. Hal ini memungkinkan penjual
benalu teh komersial melakukan pencampuran
benalu teh dengan bahan lain seperti daun teh.
Karena itu, dilakukan pengujian dengan
mencampurkan ekstrak benalu teh dengan
ekstrak daun teh yang juga berasal dari
Gunung Mas.
8
DAFTAR PUSTAKA
[BPOM] Badan Pengawas Obat dan Makanan
2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat
Indonesia. Volume 1. Jakarta : BPOM RI.
[BPOM] Badan Pengawas Obat dan Makanan.
1995. Materia Medika Indonesia. Jilid IV.
Jakarta: Depkes RI.
a
b c1 c2 c3
c4 c5
Gambar 7 Pola KLT ekstrak sampel benalu
teh (a), daun teh (b), dan
campuran benalu teh dengan daun
teh (c), dengan nisbah c1 (1:3), c2
(1:2), c3 (1:1), c4 (2:1), dan c5
(3:1).
Benalu teh asli tidak menunjukkan
intensitas warna yang jelas pada pita ke- 9
pada Rf 0.97, sementara pada daun teh
warnanya jelas dan tajam. Pola yang sama
ditunjukkan oleh sampel komersial K1 dan K3
campuran benalu teh dengan daun teh pada
nisbah (3:1), (2:1), (1:1), (2:1), dan (3:1) yang
dapat dilihat pada Gambar 7 c1−c5 .
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Pelarut terpilih yang baik sebagai eluen
untuk penentapan sidik jari benalu teh metode
Kromatografi lapis tipis kinerja tinggi
(KLTKT) adalah campuran dikloroetana
dengan etil asetat nisbah 65:35 yang
menghasilkan 9 pita pada benalu teh asli yaitu
pada kisaran Rf 0.02–0.97. Satu sampel benalu
teh
komersial
menunjukkan
pola
kromatogram yang sama dengan benalu teh
asli, sedangkan dua sampel lainnya terdapat
11 pita dan diduga ada campuran dengan daun
teh.
Saran
Perlu dilakukan pengujian benalu teh asli
dari daerah lain untuk melihat pola sidik
jarinya.
Bustanussalam, Simanjuntak P, Muwarni R.
2003. Chatechin analysis from several
water extract of tea plant parasitic. J Kim
Mulawarman. 6:37-42.
Cie’sla L, Hajnos MW. 2009. Twodimensional thin layer chromatography in
the analysis of secondary plant
metabolites. J Chromatogr 12:1035−1052.
Delaroza F, Scarminio IS. 2008. Mixture
design optimization of extraction and
mobile phase media for fingerprint
analysis of Bauhinia variegate L. J
Separation Sci 31:1034-1041.
Florentina I, Windadri, Raharjoe JS. 1998.
Keanekaragaman jenis benalu di Pulau
Jawa. Warta Tumbuhan Obat Indonesia
4:25-28.
Fernand VE. 2003. Initial characterization of
crude extracts from Phyllanthus amarus
Schum. and Thonn. and Quassia amara L.
using
normal
phase
thin
layer
chromatography
tesis.
Lousiana:
Program Pascasarjana, University of
Suriname.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata K, Soediro I, penerjemah;
Niksolihin S, editor; Bandung: ITB Pr.
Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
Harvey D. 2000. Modern Analytical
Chemistry. New York: Mc.Graw-Hill.
Houghton PJ, Raman A. 1998. Laboratory
Handbook for Fractionation of Natural
Extracts. London: Chapman & Hall.
Liang YZ, Xie P, Chen K. 2004. Quality
control of herbal medicines. J Chromatogr
812:53-70.
9
Kimura M, Fujimura M, Yoshida M, Takeshi
T, Naoko TA. 2008. An easy method to
identify 8-keto-15-hydroxytrichothecenes
by thin layer chromatographic. Mycotoxins
58 : 115-117.
Santa IGP. 1998. Studi kemotaksonomi
farmakognosi benalu anti kanker Scurrulla
atropurpurea
(BI)
Dans
dan
Dendreoephthoe petendra (L) Miq. Warta
Tumbuhan Obat Indones 4:12-13.
Marston A. 2007. Role of advances in
chromatographic
techniques
in
phytochemistry. Phytochemistry 68:22-24
Snyder LR. Introduction to modern liquid
chromatography. New York : J Wiley.
Meloan CE. 1999. Chemical Separation. New
York: J Wiley.
Nugroho YA, Nuratmi B, Suhardi. 2000.
Daya hambat benalu teh (Scurrulla
atropurpurea) terhadap poliferasi sel
tumor kelenjar susu mencit (Mus Musculus
L) C3H. Cermin Dunia Kedokteran 27:1517.
Ohashi K et al. 2003. Indonesian medicinal
plants. XXV. Cancer cell invasion
inhibitory effects of chemical constituens
in
the
parasitic
plant
Scurrula
atropurpurea
(Loranthaceae).
Chem
Pharm 51:343-345.
Sudjadi.
1986.
Metode
Yogyakarta: UGM Pr.
Pemisahan.
Wall PE. 2005. Thin Layer Chromatography:
A Modern Practical Approach. Dorset:
VWR Int.
Winarno MW, Sundari D, Nuratmi B. 2000.
Penelitian aktivitas biologik infus benalu
teh (Scurulla atropurpurea BI. Danser)
terhadap aktivitas sistem imun mencit.
Cermin Dunia Kedokteran 127:11-14.
Zhao L, Chaoyu H, Zhen S, Bingren X,
Linghua M. 2008. Fingerprint analysis of
Psoralea corylifolia L. by HPLC and LCMS. J Chromatogr 821:67-74.
10
LAMPIRAN
11
Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Pengambilan sampel benalu teh
Determinasi sampel
(asli dan sampel komersial)
tanaman asli
Preparasi sampel
Pemeriksaan kadar air dan fitokimia
Ekstraksi (Maserasi, etanol 96%)
Pemekatan ekstrak
Penentuan eluen terbaik
menggunakan KLT
Penentuan sidik jari menggunakan KLTKT
12
Lampiran 2 Determinasi tanaman benalu teh
13
Lampiran 3 Penentuan kadar air
Bobot sampel (g)
Sampel
Benalu teh
Kadar Air
Ulangan
Rerata (%)
Bobot basah
GM
K1
K2
K3
Bobot kering
(%)
1
3.0014
2.7701
7.71
2
3.0028
2.7733
7.64
3
3.0063
2.7909
7.16
1
3.0044
2.8147
6.31
2
3.0027
2.7977
6.83
3
3.0055
2.8279
5.91
1
3.0056
2.7551
8.33
2
3.0001
2.7155
9.49
3
3.0013
2.7366
8.82
1
3.0023
2.7546
8.25
2
3.0007
2.7842
7.21
3
3.0043
2.7607
8.11
Keterangan : GM = Gunung Mas ; K1 = Sampel komersial 1; K2 = Sampel komersial 2;
K3= Sampel komersial 3
Contoh perhitungan kadar air sampel Benalu teh Gunung Mas ulangan 1:
Kadar air
=
=
= 7.71%
7.50
6.35
8.88
7.86
14
Lampiran 4 Uji fitokimia
Hasil uji
No
Kandungan fitokimia
Gunung
Mas
+
+
+
+
+
+
-
K1
K2
1
Alkaloid
+
+
2
Flavonoid
+
+
3
Saponin
+
+
4
Tanin
+
+
5
Fenol
+
+
6
Steroid
+
+
7
Triterpenoid
Keterangan: (-) = Tidak terdeteksi ; (+) = Terdeteksi ; K1 = Sampel komersial 1;
K2 = Sampel komersial 2; K3= Sampel komersial 3.
K3
+
+
+
+
+
+
-
15
Lampiran 5 Rendemen ekstrak kasar sampel benalu teh asli dan komersial
Kkkk
Sampel
Kadar
air
1
2.0383
Bobot
ekstrak
kasar (g)
0.3589
2
2.0003
0.3905
20.88
3
2.0011
0.3721
19.53
1
2.0036
0.2376
12.61
2
2.0044
0.2223
11.66
3
2.0026
0.2201
10.54
1
2.0022
0.1424
7.60
2
2.0012
0.1652
8.66
3
2.0036
0.1602
8.71
1
2.0002
0.1558
8.13
2
2.0058
0.1439
7.57
3
2.0084
0.1506
7.80
Bobot
Ulangan
sampel (g)
Gunung
Mas
7.5%
K1
6.35%
K2
8.88%
K3
7,86%
Rendemen
(%)
19.04
Keterangan : GM = Gunung Mas ; K1 = Sampel komersial 1; K2 = Sampel komersial 2;
K3= Sampel komersial
Contoh perhitungan kadar air sampel Benalu teh Gunung Mas ulangan 1:
Rendemen
=
=
= 19.10%
Rerata
(%)
19.82
11.60
8.33
7.83
16
Lampiran 6 Penggolongan pelarut oleh Snyder (Snyder 1979)
Golongan
Pelarut
Kekuatan Pelarut
I
n-Heksana
n-Butil eter
Diisopropil eter
Metil t-butil eter
Dietil eter*
Isopentanol
n-Butanol
Isopropanol
n-Propanol
Etanol*
Metanol*
Tetrahidrofuran
Piridina
2-Metoksietanol
Metil formamida
Dimetilformamida
Dimetil sulfoksida
Asam asetat*
Formamida
Diklorometana*
1,2-Dikloroetana
Benzil alkohol
Etil asetat*
Metil etil keton
Dioksana
Aseton*
Asetonitril*
Toluena
Benzena
Nitrobenzena
Nitrometana
Kloroform*
Dodekafluoroheptanol
Air
0
2.1
2.4
2.7
2.8
3.7
3.9
3.9
4.0
4.3
5.1
4.0
5.3
5.5
6.0
6.4
7.2
6.0
9.6
3.1
3.5
5.7
4.4
4.7
4.8
5.1
5.8
2.4
2.7
4.4
6.0
4.1
8.8
10.2
II
III
IV
V
VI
VII
VIII
Keterangan : * menunjukkan pelarut yang digunakan
17
Lampiran 7 Hasil elusi dengan 10 pelarut tunggal visulisasi UV 254 nm
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Keterangan : 1.Dietil eter, 2. Diklorometana, 3. 1,2-Dikloroetana, 4. n-Butanol, 5. Kloroform, 6.
Etanol, 7. Etil asetat, 8. Metanol, 9. Asetonitril, dan 10. Etanol 30%
Lampiran 8 Pola KLT komposisi nisbah 1,2-dikloroetana dan etil asetat
visualisasi UV 254 nm
a
b
c
d
e
f
g
Keterangan: A = 1,1-dikloroetana, B = etil asetat
a. (50A:50B), b. (55A:45B), c. (60A:40B), d. (65A: 3B), e. (70A:30B),
f. (75A:25B), g. (80A:20B), h. (85A:15B), i. (90A:10B), dan j. (95A:5B)
h
i
j