coli Isolasi, pengklonan, dan konstruksi RNAi Gen Penyandi H+- ATPase membran plasma dari Melastoma malabathricum L.

3 ✶ ✷ ✸ ✷✹ , ✺ ✷✻✶ ✼ 1 ✷✽ ✹ ✾✻ ✿ ✻ ❀ ✷❁✻ M ❂❃ ❂ a5’ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ✹ ❈ ✻ ✽ ❅❈ ❉❊❋ 2- ● ❄ ✷❆ ❊✷❉ ❊❋✹ - ❍ ✹ ❈ ■ ❄ ✼ ❀ ❉ ❏ ❍ 1, ❄ ✷ ❆ M ❂❃ ❂ a ✽ 3’ ❄ ❅❆ ❇ ✷ ❆ ✹ ❈ ✻ ✽❅❈ ❋● 2 ❄ ✷❆ 3’ ❑▲ ❍ - ❍ ✹ ❈ ■ ❄ ✼ ❀ ❉❏ ❍ 2; 2 ✹ ❈ ■ ❄ ✼ ❀ ❉ ❏❍ 1 ❄ ✷❆ 2 ❄ ✻ ❇ ✷▼ ✼ ❆ ❇ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ✹ ❅❈ ▼ ✷ ❆ ❄ ✻❆ ❇ ✷ ❆ ✽ ■ ✾ ✺ ✷ ❆ ❇ ❁ ✷ ✽✷ , ✾ ✷✾✼ ❄ ✻ ◆ ✷ ✽✹ ✼ ❈ ❄ ❅ ❆ ❇ ✷ ❆ 0.2 ✽❊ ❄ ❖ ▲❉ ✽✻ P ◗ 1 P ▼ ✼ ✿ ✿ ❅❈ ▲ ✷ ❘ , 1.25 ❑ ❙ ❋ ▲ ✷ ❘ ❚ ❖ ❋ ✹ ■ ✾✺ ✽❅ ❈ ✷ ❁ ❅ , ❄ ✷ ❆ ❄ ❄ ❯ 2 ❱ ✸ ✻❆ ❇ ❇ ✷ ❲ ■ ✾✼ ✽❅ 20  ✾ . ❉ ❏ ❍ ❄ ✻ ✾✷❀ ✼ ❀ ✷❆ ❁ ❅▼ ✷❆ ✺ ✷❀ 10 ❁✻ ❀ ✾✼ ❁ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ❀ ■ ❆ ❄ ✻ ❁✻ ✹ ❈ ✷ - ❉ ❏❍ 96 ❳ C ◗ ❨ ✽❅❆ ✻ ✶ ❩ ❄ ❅❆ ✷✶✼ ❈ ✷❁✻ ❬ ❭ ❳ C ◗ ❪ ✽❅ ❆ ✻ ✶ ❩ ✹ ❅❆ ❅✽ ✹ ❅ ✾✷❆ ❄ ✷❆ ✹ ❅ ✽✷ ❆ ❫ ✷❆ ❇ ✷❆ ❭ ❴ ❳ C ◗ ❵ ✽ ❅ ❆ ✻✶ ◗ ❄ ✷❆ ✹ ✷ ❁ ◆ ✷ ❛ PCR ❭ ❴ ❳ C ◗ ❜ ✽❅❆ ✻✶ ❩ ❵ ❝ ❁ ❅▼ ✷❆ ✺ ✷❀ ❪  ✾ ✹ ❈ ■ ❄ ✼ ❀ PCR ✶ ✷ ✸ ✷✹ ❨ ❄ ✻ ◆ ✷✽ ✹ ✼ ❈ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ❞ ❡ ❜ ❢ M ✹ ❈ ✻ ✽❅❈ PMA ❨ ❛ F ◗ ❞ ❡ ❜ ❢ M ✹ ❈ ✻ ✽ ❅❈ ❵ ❣ UTR ❛ R ◗ ❞ ❡ ❨ ✽ M ❄ ❖ TP ✽ ✻ P ◗ ❪ P ▼ ✼ ✿ ✿ ❅ ❈ T ✷ ❘ ◗ ❪ ❡ ❨ ❜ U LA T ✷ ❘ DNA ✹ ■ ✾✺ ✽ ❅❈ ✷ ❁ ❅ ◗ ❄ ✷❆ ❄ ❄ ❯ ❤ O ✸ ✻ ❆ ❇ ❇ ✷ ❲ ■ ✾ ✼ ✽❅ ❨ ❞  ✾❡ PCR ❄ ✻ ✾✷❀ ✼ ❀ ✷❆ ❁ ❅ ▼ ✷ ❆ ✺ ✷ ❀ ❵ ❞ ❁✻❀ ✾✼ ❁ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ❀ ■ ❆ ❄ ✻❁✻ ✹ ❈ ✷ ❛ PCR ❬ ❴ ❳ C ◗ ❨ ✽ ❅ ❆ ✻✶ ❩ ❄ ❅❆ ✷ ✶ ✼ ❈ ✷❁✻ ❬ ❴ ❳ C ◗ ❨ ❞ ❄ ❅ ✶ ✻❀ ❩ ✹ ❅ ❆ ❅✽ ✹ ❅ ✾✷❆ ❜ ❜ ✐ C ◗ ❜ ❄ ❅✶✻ ❀ ❩ ❄ ✷❆ ✹ ❅✽ ✷ ❆ ❫ ✷❆ ❇ ✷ ❆ ❥ ❨ ❳ C ◗ ❵ ✽❅❆ ✻ ✶ ◗ ❄ ✷ ❆ ✹ ✷ ❁ ◆ ✷ ❛ PCR ❥ ❨ ❳ C ◗ ❜ ✽ ❅ ❆ ✻ ✶❡ S ❅✾ ✷ ❆ ❫ ✼ ✶ ❆ ✺ ✷ ❇ ❅❆ M ❂❃ ❂ a ❄ ✻❀ ✾■ ❆ ❀ ❅ ❄ ✷✾ ✷✽ ✹ ❦ EM ❛ T E ✷ ❁✺ ❡ ❧♠♥ ♠♦ s ♣

E. coli

qrs  t ✉ ✈✇ ① ♠ n ✇ ✉ ✈ ② u n ✇ ③♠ k to r ④♠ k o m ⑤ ♣ n ✉ n . ⑥⑦ c ⑧ ⑨ i DH ❜  ✺ ✷ ❆ ❇ ✽❅❆ ❇ ✷❆ ❄ ✼ ❆ ❇ ❲ ❅❀ ✶ ■ ❈ ❈ ❅❀ ■ ✽ ▼ ✻ ❆ ✷❆ ❄ ✻ ❁ ❅✾ ❅ ❀ ❁✻ ✽ ❅ ❆ ❇ ❇ ✼ ❆ ✷ ❀ ✷ ❆ ✷✽ ✹ ✻ ❁✻ ✾ ✻ ❆ ❁ ❅✾ ❅ ❀ ❁✻ ❈ ❅ ❁✻ ❁✶ ❅ ❆ ❁✻ ❁ ❅❈ ✶ ✷ X ❛ ❇ ✷✾ ❄ ✷❆ IPTG ❁ ❅ ✾❅❀ ❁✻ ▼ ✻ ❈ ✼ ❛ ✹ ✼ ✶✻ ✸ ❝ ❡ H ✷ ❆ ✺ ✷ ▼ ✷❀ ✶ ❅ ❈ ✻ ✺ ✷ ❆ ❇ ✽❅ ❆ ❇ ✷ ❆ ❄ ✼ ❆ ❇ ✹ ✾ ✷❁ ✽ ✻ ❄ ✺ ✷ ❆ ❇ ❄ ✷ ✹ ✷ ✶ ✸ ✻ ❄ ✼ ✹ ✹ ✷❄ ✷ ✽❅ ❄ ✻ ✷ ✺ ✷ ❆ ❇ ✽ ❅ ❆ ❇ ✷❆ ❄ ✼ ❆ ❇ ✷ ❆ ✶ ✻▼ ✻■ ✶ ✻❀ ✷✽✹ ✻ ❁✻ ✾✻❆ ❡ A ❄ ✷ ❆ ✺ ✷ X ❛ ❇ ✷✾ ❄ ✷ ❆ IPTG ❄ ✷✾ ✷✽ ✽❅ ❄ ✻ ✷ LB ✹ ✷ ❄ ✷ ✶ ✷ ❀ ✷ ❆ ✽❅❆ ❇ ✸ ✷ ❁ ✻ ✾❀ ✷❆ ❀ ■ ✾■ ❆ ✻ ▼ ✷ ❀ ✶ ❅ ❈ ✻ ✺ ✷ ❆ ❇ ▼ ❅❈ ⑩ ✷❈ ❆ ✷ ▼ ✻ ❈ ✼ ❄ ✷❆ ✹ ✼ ✶ ✻ ✸ ❡ H ✷❆ ✺ ✷ ❀ ■ ✾■ ❆ ✻ ▼ ❅❈ ⑩ ✷ ❈ ❆ ✷ ✹ ✼ ✶ ✻ ✸ ✺ ✷ ❆ ❇ ❄ ✻ ✻❁ ■ ✾ ✷ ❁✻ ❀ ✷❈ ❅❆ ✷ ❄ ✻ ❄ ✷ ✾✷ ✽ ❆ ✺ ✷ ✽❅❆ ❇ ✷❆ ❄ ✼ ❆ ❇ ✹ ✾ ✷❁✽✻❄ ❈ ❅ ❀ ■ ✽ ▼ ✻❆ ✷ ❆ ❡ A ❄ ✷ ❆ ✺ ✷ ❁✻❁✻ ✹ ✷❆ ▼ ✷❇ ✻ ✷❆ ❇ ❅ ❆ M ❂❃ ❂ a ❄ ✻ ❄ ✷ ✾✷✽ ❀ ■ ✾■ ❆ ✻ ⑥⑦ c ⑧ ⑨ i ✹ ✼ ✶✻ ✸ ❄ ✻ ❀ ■ ❆ ✿ ✻ ❈ ✽✷❁✻ ❄ ❅❆ ❇ ✷ ❆ PCR ✶ ❅ ❈ ✸ ✷❄ ✷ ✹ ❀ ■ ✾■ ❆ ✻ ✹ ✼ ✶ ✻ ✸ ❄ ❅ ❆ ❇ ✷ ❆ ◆ ✷❈ ✷ ✽❅❆ ❇ ✷ ✽ ▼ ✻ ✾ ❀ ■ ✾■ ❆ ✻ ❄ ❅❆ ❇ ✷ ❆ ✶✼ ❁✼ ❀ ❇ ✻❇ ✻ ✾✷ ✾ ✼ ❄ ✻ ❈ ❅ ❁✼ ❁ ✹ ❅❆ ❁✻ ❀ ✷ ❆ ❀ ❅ ❄ ✷ ✾✷ ✽ ❄ ❄ ❯ ❤ O ❡ S ✼ ❁ ✹ ❅ ❆ ❁✻ ✻❆ ✻ ❀ ❅ ✽ ✼ ❄ ✻ ✷ ❆ ❄ ✻ ◆ ✷ ✽✹ ✼ ❈ ❄ ❅❆ ❇ ✷ ❆ ❞ ❡ ❜ M ✹ ❈ ✻ ✽❅ ❈ SP ❭ ◗ ❞ ❡ ❜ M ✹ ❈ ✻ ✽❅ ❈ T ❥ ◗ ❞ ❡ ❨ ✽ M ❄ ❖ TP ✽ ✻ P ◗ ❪ P ▼ ✼ ✿ ✿ ❅ ❈ T ✷ ❘ ◗ ❄ ✷❆ ❪ ❡ ❨ ❜ ❑ LA T ✷ ❘ DNA P ■ ✾✺ ✽❅ ❈ ✷ ❁ ❅ ❄ ❅ ❆ ❇ ✷ ❆ ❲ ■ ✾ ✼ ✽❅ ❈ ❅✷❀ ❁ ✻ ❁ ❅❀ ✻✶ ✷❈ ❪ ❞ ❢✾❡ K ■ ❆ ❄ ✻ ❁✻ PCR ❁ ✷✽✷ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ✻❁■ ✾✷❁✻ ✽ ✷ ❁✻ ❆ ❇ ❛ ✽✷❁✻❆ ❇ ▼ ✷❇ ✻ ✷❆ ❇ ❅ ❆ ❡ ❶ n ✉ ♥♣ s ♣ s ❷q❸ ❶ s ♣ s ♣ p ✉ ✈ . P ✾ ✷❁ ✽ ✻ ❄ ❈ ❅❀ ■ ✽ ▼ ✻❆ ✷❆ ❄ ✻ ✻❁■ ✾ ✷ ❁✻ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ✽❅ ❆ ❇ ❇ ✼ ❆ ✷ ❀ ✷❆ ✹ ❈ ■ ❁ ❅ ❄ ✼ ❈ S ✼ ✸ ✷ ❈ ❁■ ❆ ■ ❨ ❞ ❞ ❴ ❡ U ❆ ✶ ✼ ❀ ✽ ❅ ❆ ❇ ❅ ✾✼ ✷ ❈ ❀ ✷❆ ❁✻ ❁ ✻ ✹ ✷ ❆ ◗ ✹ ✾✷❁ ✽ ✻ ❄ ❈ ❅❀ ■ ✽▼ ✻ ❆ ✷ ❆ ❄ ✻ ✹ ■ ✶■ ❆ ❇ ❄ ❅❆ ❇ ✷❆ ❅ ❆ ❹ ✻ ✽ ⑥❺ ⑧ R ❪ ✽❅❆ ❇ ❇ ✼ ❆ ✷❀ ✷❆ ✹ ❈ ■ ❁ ❅❄ ✼ ❈ ❄ ✷ ❈ ✻ P ❈ ■ ✽ ❅ ❇ ✷ I ❆ ◆ ❡ P ❅❆ ❇ ✼ ❈ ✼ ✶ ✷ ❆ DNA ❄ ✻ ✾ ✷ ❀ ✼ ❀ ✷❆ ❄ ❅ ❆ ❇ ✷ ❆ ✽ ❅❆ ❇ ❇ ✼ ❆ ✷ ❀ ✷❆ ✽❅❁✻❆ ✹ ❅❆ ❇ ✼ ❈ ✼ ✶ DNA ■ ✶ ■ ✽✷ ✶ ✻❁ A ✼ ✶ ■ ✽✷ ✶ ❅❄ DNA S ❅ ❘ ✼ ❅ ❆ ◆ ❅ ❈ ABI P ❈ ✻ ❁ ✽ ❵ ❪ ❞ ◗ P ❅❈ ❀ ✻❆ ❛ E ✾✽❅ ❈ ❡ I ❄ ❅❆ ✶✻ ✿ ✻❀ ✷ ❁✻ ✼ ❈ ✼ ✶ ✷❆ ❆ ✼ ❀ ✾ ❅ ■ ✶ ✻❄ ✷ ❄ ✻ ✾✷❀ ✼ ❀ ✷ ❆ ❄ ❅❆ ❇ ✷ ❆ ▼ ❅▼ ❅ ❈ ✷✹ ✷ ✷ ❆ ✷✾✻❁✻ ❁❡ A ❆ ✷✾✻❁✻ ❁ ❀ ❅❁ ❅ ❫ ✷ ❫ ✷ ❈ ✷ ❆ ✾■ ❀ ✷ ✾ ❻❼ ❽ a ❻ a ❻ ig ❾ ❿ e ❾ ➀ M ❿ ➁ ❿ a ➂ ➃ ➄ ➅ ➆ ➇ ➆ ➄ ➈ ➆ ➉ ➉ ➊ ➈ ➋➃ ➌ ➍ ➎➅ ➆ ➅ ➆➉ ➆ ➇ ➆ ➏ ➆ ➏➎➉ ➌ ➅ ➃ ➉ ➐ ➆➉ ➅ ➆➍ ➆ ➑ ➆ ➉ ➐ ➆ ➅ ➆ ➅ ➎ ➒ e ❾ e ➓➔ ❾ → ➅ ➎ ➋ ➆➈ ➊ ➈ ➆ ➉ ➅ ➃ ➉ ➐ ➆ ➉ ➣ ➄ ➌ ➐ ➄ ➆ ➏ ↔ ↕➙➛➜ ➓ ➔ ➝ ic L ❼ ❽ a ❻ ➞ ❻ ig ❾ ❿ e ❾ ➀ Sea ➟ ch T ❼ ❼ ❻ ➝ ➑ ➆ ➉ ➐ ➅ ➎➇ ➃ ➅ ➎ ➆ ➈ ➆ ➉ ➠➡ ↔ ➢ Na ➀ i ❼ ❾ ➔ ❻ ➤ e ❾ ➀ e ➟ f ❼ ➟ ➓ ➥ ❼ ➀ ech ❾ ❼ ❻ ❼ ➦ ➧ I ❾ ➨ ❼ ➟❿ a ➀ i ❼ ❾ ➏ ➃➋ ➆ ➋ ➊ ➎ ➩ ➍ ➍➣ ➫ ➭➭➭ . ➉ ➯ ➂ ➎ . ➉ ➋ ➏ . ➉ ➎ ➩ . ➐ ➌ ➲ ➂ ➋ ➆ ➇ ➍ . ➙ ➉ ➆➋ ➎➇➎ ➇ ➄ ➃ ➇ ➍ ➄ ➎➈ ➇➎ ➅ ➎➋➆ ➈ ➊ ➈ ➆➉ ➅ ➃➉ ➐ ➆ ➉ ➏ ➃ ➉ ➐ ➐ ➊ ➉ ➆➈ ➆ ➉ ➣ ➄ ➌ ➐ ➄ ➆ ➏ ➠➳ ↔➡ ➊ ➍ ➍ ➃ ➄ ➩ ➍ ➍ ➣ : ➍ ➌ ➌ ➋ ➇ . ➉ ➃ ➂ . ➯ ➌ ➏ ➠➳ ↔ ➯ ➊ ➍➍ ➃ ➄ 2 ➎➉ ➅ ➃ ➵ . ➣ ➩ ➣ ➸ ➅ ➆➉ ➣ ➄ ➌ ➐ ➄ ➆ ➏ ↔ ➎➌ ➳➅ ➎➍ ➲ ➃ ➄ ➇➎ 7.0.9.0. ➺ ➌ ➏ ➆ ➎ ➉ ➣ ➌ ➍ ➃➉ ➇➎ ➆ ➋ ➅ ➎ ➆ ➉ ➆ ➋ ➎ ➇➎ ➇ ➅ ➃ ➉ ➐ ➆➉ ➣ ➄ ➌ ➐ ➄ ➆ ➏ ➏➌ ➍ ➎➻ ➇ ➯ ➆➉ ➩ ➍ ➍ ➣ : ➆ ➊ . ➃ ➵ ➣ ➆ ➇ ➑ . ➌ ➄ ➐ ➣ ➄ ➌ ➇➎➍➃ . ➙ ➉ ➆ ➋ ➎ ➇➎ ➇ ➩ ➎➅ ➄ ➌ ➻ ➌ ➂ ➎ ➇➎➍➆ ➇ ➏ ➃➉ ➐ ➐ ➊ ➉ ➆➈ ➆➉ ➣ ➄ ➌ ➐ ➄ ➆ ➏ ↔ ➎➌ ➳➅ ➎ ➍ ➲ ➃ ➄ ➇➎ 7.0.9. ➼➽ ➾➚➪ ➶➽ ➹ ➘➴➷ ➬➽ ➮➽ ➾➽ ➹ ➱ s ✃ ➪ ➽ ➾➚ ❐❒❮ ❰ o t ➽ ➪ Ï➠ ➙ ➍ ➌ ➍ ➆➋ ➍ ➃➋ ➆ ➩ ➂ ➃ ➄ ➩ ➆ ➇➎ ➋ ➅ ➎➎ ➇➌ ➋➆ ➇➎ ➅ ➆ ➄ ➎ ➅ ➆ ➊ ➉ Me ❻ a ➝➀ ❼ ❿ a ❿ a ❻ aba ➀ h ➟ ic Ð ❿ ↕ . Ñ ➊ ➏➋➆ ➩ Ï➠ ➙ ➍ ➌ ➍ ➆➋ ➑ ➆➉ ➐ ➅ ➎➣ ➃ ➄ ➌ ➋ ➃ ➩ ➆➅ ➆➋ ➆ ➩ 234.64 Ò ➐ ➍ ➎➆➣ ➐ ➄ ➆ ➏ ➅ ➆ ➊ ➉ ➇ ➃ ➐ ➆ ➄ Ó P ➃➉ ➐ ➊ Ô ➎ ➆ ➉ ➈ ➃ ➏➊ ➄ ➉ ➎➆➉ RNA ➍ ➌ ➍ ➆➋ ➑ ➆ ➉ ➐ ➅ ➎ ➋ ➆➈ ➊ ➈ ➆ ➉ ➅ ➃ ➉ ➐ ➆➉ ➏ ➃ ➏ ➂ ➆➉ ➅ ➎ ➉ ➐ ➈ ➆ ➉ ➉ ➎➋➆ ➎ OD ÕÖ× ➅ ➆ ➉ OD Õ Ø × ➏ ➃ ➉ ➊ ➉ Ô ➊ ➈ ➈ ➆➉ ➂ ➆ ➩ ➭ ➆ RNA ➍ ➌ ➍➆ ➋ ➑ ➆ ➉ ➐ ➅ ➎ ➎➇ ➌ ➋ ➆ ➇ ➎ ➏ ➃ ➏ ➣ ➊ ➉ ➑ ➆ ➎ ➈ ➃ ➏➊ ➄ ➉ ➎➆ ➉ ➑ ➆➉ ➐ ➯ ➊ ➈ ➊ ➣ ➍ ➎➉ ➐ ➐ ➎ ➈ ➆ ➄ ➃ ➉ ➆ ➏ ➃ ➏➣ ➊ ➉ ➑ ➆ ➎ ➄ ➆ ➇➎➌ Ù Ó Ú Û Ó M ➃ ➉ ➊ ➄ ➊ ➍ F ➆ ➄ ➄ ➃ ➋ Ù Ü Ü Û ➸ RNA ➑ ➆ ➉ ➐ ➏➃ ➏ ➣ ➊ ➉ ➑ ➆ ➎ ➄ ➆ ➇➎➌ ➆ ➂ ➇ ➌ ➄ ➂ ➆➉ ➇➎ ➣ ➆ ➅ ➆ Ý Þ ß ➉ ➏ ➅ ➆➉ Ý Ú ß ➉ ➏ ➆ ➉ ➍➆ ➄ ➆ Ù Ó Ú ➅ ➆➉ Ý Ó ß ➆ ➅ ➆ ➋➆ ➩ ➏➊ ➄ ➉ ➎ ➑ ➆ ➉ ➐ ➂ ➃ ➂ ➆ ➇ ➅ ➆ ➄ ➎ ➈ ➌ ➉ ➍➆ ➏➎ ➉ ➆➉ ➣ ➄ ➌ ➍ ➃ ➎➉ Ó I ➉ ➍➃ ➐ ➄ ➎➍➆ ➇ RNA ➍ ➌ ➍➆ ➋ ➅ ➎ ➆➉ ➆ ➋ ➎ ➇➎➇ ➅ ➃ ➉ ➐ ➆ ➉ ➏➃➋ ➆➈ ➊ ➈ ➆ ➉ ➃➋ ➃➈ ➍ ➄ ➌ ➻ ➌ ➄ ➃ ➇➎ ➇ ➅ ➎ ➐ ➃➋ ➆ ➐ ➆ ➄ ➌ ➇ ➃ ➑ ➆ ➉ ➐ ➍ ➃ ➄ ➅ ➃➉ ➆ ➍ ➊ ➄ ➆ ➇➎ ➌ ➋➃ ➩ ➻ ➌ ➄ ➏ ➆ ➋➅ ➃ ➩ ➎➅ ➃ Ó H ➆ ➇➎ ➋ ➃ ➋➃ ➈ ➍ ➄ ➌ ➻ ➌ ➄ ➃ ➇➎ ➇ RNA ➍ ➌ ➍ ➆ ➋ ➏ ➃➉ ➊ ➉ Ô ➊ ➈ ➈ ➆ ➉ ➆ ➅ ➆ ➉ ➑ ➆ Ý ➣ ➎ ➍ ➆ ➅ ➌ ➏ ➎ ➉ ➆ ➉ ➑ ➆ ➉ ➐ ➈ ➃ ➅ ➊ ➆ ➉ ➑ ➆ ➆ ➅ ➆ ➋➆ ➩ RNA ➄ ➎ ➂ ➌ ➇➌ ➏ ➆ ➋ ➄ RNA Ý Ú ➛ ➅ ➆➉ Ù Ú ➛ G ➆ ➏➂ ➆ ➄ Ù à Ó A ➅ ➆➉ ➑ ➆ ➅ ➊ ➆ ➣ ➎➍➆ ➄ RNA ➑ ➆➉ ➐ Ô➃ ➋➆ ➇ ➏ ➃➉ ➊ ➉ Ô ➊ ➈ ➈ ➆ ➉ ➂ ➆ ➩ ➭ ➆ ➈ ➃➅ ➊ ➆ ➄ RNA ➍➃ ➄ ➇ ➃➂ ➊ ➍ ➏ ➃ ➏➣ ➊ ➉ ➑ ➆ ➎ ➎➉ ➍ ➃ ➐ ➄ ➎ ➍ ➆ ➇ ➑ ➆➉ ➐ ➍ ➎ ➉ ➐ ➐ ➎ ➇ ➃ ➩ ➎➉ ➐ ➐ ➆ ➏ RNA ➑ ➆ ➉ ➐ ➍➃ ➄ ➅ ➆ ➣ ➆ ➍ ➅ ➎ ➇ ➊ ➇ ➣ ➃ ➉ ➇ ➎ ➑ ➆➉ ➐ ➇➆ ➏ ➆ Ô ➊ ➐ ➆ ➏➃ ➏ ➣ ➊ ➉ ➑ ➆ ➎ ➎➉ ➍➃ ➐ ➄ ➎➍➆ ➇ ➑ ➆ ➉ ➐ ➍ ➎ ➉ ➐ ➐ ➎ Ó á ➚ n t ➴ s ➚ s âã ❒❮ ❰ o t ➽ ➪ ➯ DNA ➍ ➌ ➍ ➆➋ ➅ ➎➇➎➉ ➍ ➃ ➇➎➇ ➏➃➋➆ ➋ ➊ ➎ ➍ ➄ ➆ ➉ ➇ ➈ ➄ ➎➣ ➇➎ ➂ ➆ ➋ ➎ ➈ ➅ ➃ ➉ ➐ ➆ ➉ ➏ ➃➉ ➐ ➐ ➊ ➉ ➆ ➈ ➆➉ ➯ ➃ ➍➆ ➈ ➆ ➉ ä ➀ e ❿ ➁ ❻ a ➀ e RNA ➍ ➌ ➍➆ ➋ ➅ ➆➉ ➣ ➄ ➎ ➏ ➃ ➄ ➌ ➋ ➎➐ ➌ å ➅ ➜ ➇ ➃ ➩ ➎➉ ➐ ➐ ➆ ➯ DNA ➑ ➆➉ ➐ ➍➃ ➄ ➂ ➃➉ ➍ ➊ ➈ ➩ ➆ ➉ ➑ ➆ ➂ ➃ ➄ ➆ ➇ ➆ ➋ ➅ ➆ ➄ ➎ ➏ RNA ➈ ➆ ➄ ➃ ➉ ➆ ➩ ➆➉ ➑ ➆ ➏ RNA ➑ ➆➉ ➐ ➏➃ ➉ ➐ ➆ ➉ ➅ ➊ ➉ ➐ ➣ ➌ ➋ ➑ A ➣ ➆ ➅ ➆ G æç è æé ê ë ì í NA T î ï æð ñ æ é ò ñ æ ó ô Me õ a ö÷ø ù a ù a õ aba ÷ h ú ic û ùì üê ýþ ÿ RNA T î ï æðì ê ✁ þ ✁ ✂ ✄ ☎ ✆☎ ✝ ✞ 3’, ✟✠ ✡ ☛✝ ✞ ☞ ☛ ✝ ✌ ✍ ✎ ✏ ✡ ☛ ✝ ✑✍ ✎ ✏ ✑ ✒ ✡ ☛ ☞ . ✓✠ ✔ ✠ ✌ ✕ ☛ ✟ ✒✖ ☛ ✝ ✟✒✝ ✑ ✠ ✟ ✒✟ ✗✘ ✎ ✏ ✑ ✙ ✑ ☛ ✖ ✡ ✒ ☞ ✠✑ ☛ ✕ ☎ ✒ ✡ ✠✝ ✞ ☛✝ ✚✛✍ ✜✠ ✝ ✞ ✞ ☎ ✝ ☛ ☞ ☛ ✝ ✢ ✌ ✒✜✠✌ ✟✢ ✠ ✟ ✒ ✣ ✒☞ ✑ ✠✌ ✕ ☛ ✡ ☛ ✢ ✗ ✘ ✎ ✏ ✠ ☞ ✟ ✙ ✝ ✤ – ✠ ☞ ✟ ✙ ✝ ✥ ✡ ☛ ✌ ✒ ☛ ☞ ✑ ✒✝ ✦ ✧★ ✩ ✡ ☛ ✝ ✦ ✧★ R ✡ ☛✝ ✜ ✠✝ ✞ ✕ ☛ ✟✒✖ ☞ ☛ ✝ ✟ ☛ ✑☎ ✢ ✒✑☛ ✔ ✠ ✌ ☎ ☞ ☎ ✌ ☛✝ 451 ✢ ✔ ✪ ✫ ✒ ✖ ☛ ✑ ✠✌ ✡ ☛ ✢ ☛✑ ✑ ☛✜ ✔ ☛ ✕ ☛ ✝ ✢ ✒✑☛ ✔ ✠✌ ☎ ☞ ☎ ✌ ☛ ✝ ✖ ✠ ✔ ✒ ✕ ✔ ✠ ✟ ☛ ✌ ✡ ☛ ✌ ✒ 451 ✢ ✔ , ✔ ✠✌ ☛ ✌ ✑ ✒ ✗ ✘ ✎ ✏ ✕ ☛ ✟✒✖ ✟✒ ✝ ✑ ✠ ✟✒ ✟ ✑ ✠✌ ☞ ✙ ✝ ✑ ☛✜ ✒✝ ☛ ✟✒ ✘ ✎ ✏ ☞ ☛✌ ✠ ✝ ☛ ☛ ✝ ✑ ☛✌ ☛ ✠ ☞ ✟ ✙ ✝ ✤ ✡ ☛ ✝ ✠ ☞ ✟ ✙ ✝ ✥ ✜✠ ✜ ✢ ☎ ✝ ✬ ☛ ✒ ✒✝ ✑ ✌ ✙ ✝ ✪ ✫ ✠ ✌ ✡ ☛ ✟ ☛✌ ☞ ☛✝ ✞ ✠✝ ✙ ✜ ☞ ✠ ✡ ✠ ✖☛ ✒ , ✘ ✎ ✏ ☛ ✝ ✑ ☛✌ ☛ ✠ ☞ ✟ ✙ ✝ 1 ✡ ☛ ✝ ✠ ☞ ✟ ✙ ✝ ✥ ✔ ✠✌ ☎ ☞ ☎ ✌ ☛ ✝ ✟ ✠ ☞ ✒✑☛ ✌ 539 ✢ ✔ ✭✕ ☛ ✕ e ★ a ✮ 1982. ✭✒✝ ✑✠ ✟✒ ✟ ✗ ✘ ✎ ✏ ✑ ✙ ✑ ☛ ✖ ✑ ✠ ✖☛ ✕ ✔ ✠✌ ✕ ☛ ✟✒ ✖ ✡ ✒ ✖ ☛ ☞ ☎ ☞ ☛✝ , ✕ ☛ ✖ ✒ ✝ ✒ ✡ ✒✑☎ ✝ ✆ ☎ ☞ ☞ ☛✝ ✙ ✖ ✠ ✕ ✕ ☛ ✟ ✒✖ ☛✜ ✢ ✖ ✒ ✣ ✒ ☞ ☛ ✟✒ ✗✘ ✎ ✏ ✡ ✠ ✝ ✞ ☛ ✝ ✢ ✌ ✒✜✠ ✌ ✦ ✧★ ✩ ✡ ☛✝ ✦ ✧★ R ✜✠✜ ✢ ☎ ✝ ✬ ☛ ✒ ✢ ✌ ✙ ✡ ☎ ☞ ✚✛ ✍ ✔ ✠✌ ☎ ☞ ☎ ✌ ☛ ✝ 451 ✢ ✔ ✯☛✜ ✔ ☛ ✌ 16. ✰ s ✱ ✲ ✳ ✴✵ ✶✷✸✹ ✺ p ✻ s ✵ ✼ ✵ ✽ ✚✛ ✍ ✡ ✠✝ ✞ ☛ ✝ ✜✠ ✝ ✞ ✞ ☎ ✝ ☛ ☞ ☛✝ ✢ ☛ ✟ ☛✝ ✞ ☛✝ ✢ ✌ ✒ ✜ ✠✌ ✏ ✾ 2 – ✏✍ 2 ✡ ☛✝ ✢ ☛ ✟ ☛ ✝ ✞ ☛✝ ✢ ✌ ✒✜✠✌ ✚ ✿ ✏ 2- ✾ – ✿ ☛✚ ✿ ✏ ✢ - ✍ ✡ ✠✝ ✞ ☛✝ ✗✘ ✎ ✏ ✑ ✙ ✑☛ ✖ ✟ ✠ ✔ ☛ ✞ ☛ ✒ ✗ ✠ ✑☛ ☞ ☛ ✝ ✜☛ ✟✒✝ ✞ - ✜☛ ✟ ✒ ✝ ✞ ✜✠✝ ✞ ✕ ☛ ✟✒ ✖☞ ☛ ✝ ✣ ✌ ☛✞ ✜✠ ✝ ✗ ✘ ✎ ✏ M ❀❁ ❀ a ✜ ✯☛✜ ✔ ☛ ✌ 17 ✏ ✡ ☛✝ M ❀❁ ❀ a5’ ✯☛ ✜ ✔ ☛✌ 17 ✫ ✟ ✠ ✡ ☛✝ ✞ ☞ ☛ ✝ ✣ ✌ ☛ ✞ ✜ ✠✝ ✗✘ ✎ ✏ M ❀❁ ❀ a3’ ✡ ✒ ✟✒ ✝ ✑ ✠ ✟✒ ✟ ✜✠ ✝ ✞ ✞ ☎ ✝ ☛ ☞ ☛✝ ✜✠✑ ✙ ✡ ✠ 3’ ✍ ✏✛ ❂ ✯☛ ✜ ✔ ☛ ✌ 17 ✛ . ✗✘ ✎ ✏ ✞ ✠✝ M ❀❁ ❀ a ✡ ✒ ✢ ✠ ✌ ✙ ✖✠ ✕ ✡ ✠✝ ✞ ☛✝ ✚ ✛ ✍ ✜✠✝ ✞ ✞ ☎ ✝ ☛ ☞ ☛ ✝ ✗ ✠✑ ☛ ☞ ☛ ✝ ✞ ☛ ✔ ☎ ✝ ✞ ☛ ✝ ☞ ✠ ✑ ✒✞ ☛ ✣ ✌ ☛✞ ✜✠ ✝ ✑✠ ✌ ✟✠ ✔ ☎ ✑ ✡ ✠ ✝ ✞ ☛ ✝ ✢ ✌ ✒✜✠ ✌ ✚ ✿ ✏ 2- ✾ ✡ ☛ ✝ 3’ ❃ ❄✍ - ✍ ✜✠✝ ✞ ✕ ☛ ✟✒ ✖☞ ☛✝ ✢ ✒ ✑☛ ✟ ✠ ✢ ✠ ✌ ✑ ✒ ✢ ☛ ✡ ☛ ✯☛✜ ✔ ☛ ✌ 17 ✘ . ❅ ❆❇ ❈ ❆❉ 17. ❊ ❆❋●❍ ●❋■ ❍❆ ❋● ❈ ❆❏ ●❆❑ - ❈ ❆ ❏ ● ❆❑ ❏ ▲ ❑ ▼ ▲❑ ◆ ❆ ❑ ❖ ● ❊ + - P ◗❘❆ ❋▲ ❇ ▲❇ ❈ ❉ ❆ ❑ ▼ ❍❆ ❋ ❇ ❆ ❖ ❆ ❉ ● M ❙ ❚ a ❯ aba ❱ h ❲ ic ❳ ❚ . P , ❨ ❉ ❆❏ ❇ ▲❑ M ❚❩ ❚ a ❇ 806 ▼ ❈ ; ❬ , ❨ ❉ ❆ ❏ ❇ ▲ ❑ M ❚ ❩ ❚ a5’ 1055 ▼ ❈ ; ❭ , ❨ ❉ ❆❏ ❇ ▲❑ M ❚ ❩ ❚ a3’ 144 3 ▼ ❈ ❖ ❆ ❑ ❪ , M ❚ ❩ ❚ a 3126 ▼ ❈ ❫ 500 ❴ ❵ 1000 ❴ ❵ 800 ❴ ❵ ❛ ❜ 2000 ❴ ❵ 1000 ❴ ❵ ❛ ❜ ❝ ❞ 2000 ❴ ❵ 1000 ❴ ❵ ❛ ❜ ❝ C ❛ ❜ 2000 ❴ ❵ 3000 ❴ ❵ ❡ ❅ ❆ ❇ ❈ ❆❉ 16. ❊❆ ❋●❍ ❆❇ ▼ ❍● ❨ ● ❢ ❆❋● ❣❪ ❤P ❇ ▲❑ ❏ ❏ ✐ ❑ ❆ ❢ ❆❑ ▼ ❉ ● ❇ ▲ ❉ ❥ c ❱ ❦ ❖ ❆❑ ac ❱❧ . 1000 ❴ ❵ 500 ❴ ❵ ♠♥ ♦ ♣ q r q ♦ s q t ✉ ♥t ✈ ✇ ♦ ✇ ①q t t ✇ s ②♥ ③ ① ④ ♣ q ⑤ ♦ q ✈ ⑥ ♥ t M ⑦⑧ ⑦ a5’ ⑨ q ⑥ ✉ ④ ♦ q t 3 ♣ q t 4 ♣ qt M ⑦⑧ ⑦ a3’ ⑨ q ⑥✉ ④ ♦ qt 5 ♣ qt 6 ⑥♥t ✇ t ⑩✇ s s qt ❶ q ❷ ❸q ✇ s ✇ ♦ q t s ♥ ♣ ✇ q ⑤ ♦ q ✈ ⑥ ♥ t ①♥ ♦ r♥❶ ✇ ① q ♣ q ② q ❷ ⑥ q r④t ✈ - ⑥ q r④t ✈ 1055 ✉ ❶ ♣ q t 1443 ✉ ❶ ❹ ❺ q❶ ✇ t ✈ q t s ♥① ④✈ q ⑤ ♦ q ✈ ⑥♥t M ⑦⑧ ⑦ a ④t ④ ❶ ♥ ♦ ✇ s ✇ ♦ q t 3155 ✉ ❶ ❺ q ⑥❶ q ♦ 18 ❻ q t ✈ ⑥ ♥t ✈ qt ♣ ✇ t ✈ s ③ ♣ ③ t q ❸q② q ① ✈ , s ③ ♣ ③ t q s ❷ ④ ♦ ① ✈ q , 3’ ❼❽❾ , ♣ q t ⑧ ❿ ➀ a ➀ i ➁ e ⑧ ➂ ➃➄ ade ➅ ➄ ➃ a ➀ i ➂ ➅ ➆ ig ➅ ➇ ➃ qq ①q qq ① . ➈ ➉➊➋ M ⑦⑧ ⑦ a ♣ q t 3’ ❼ ❽❾ , r♥②q ④ t ✉ ③ ② ❻ ➋ , ❻ q t ✈ ❶ ♥ ♦ ✇ s ✇ ♦ q t 3126 ✉ ❶ ①♥② q ❷ ❶ ♥ ♦ ❷ q r ④ ② ♣ ④s ② ③ t s ♥ ♣ q② q ⑥ ➌ ♥s ① ③ ♦ ✉ ❺ ➍➎ - ❽ ➍ q r ❻ ♣ q t ♣ ④ ➌ ♥ ♦ ④⑤ ④s q r④ ✇ ♦ ✇ ①q t t ✇ s ②♥ ③ ① ④ ♣ q t ❻ q ⑨ q ⑥✉ ④ ♦ qt 7 ♣ q t 8. ➏ q r④ ② ✉ ♥ t ✈ s ②③ t qt ④ t ④ r ♥ ②q t ⑩✇ ① t ❻ q ♣ ④r ♥ ❶ ✇ ① r ♥ ❶ q ✈ q ④ ✉ ➎⑥ ✉ ⑥ q ❺ q ⑥ ❶ q ♦ 19. ➐ ②q r⑥④ ♣ ④t ④ r qt ✈ q ① ✉ ♥ t ① ④ t ✈ ♣ q ②q ⑥ s ③ t r ① ♦ ✇ s r④ ➌ ♥s ① ③ ♦ ♥s r ✉ ♦ ♥ r④ ✇ t ① ✇ s ⑥ ♥ t ✈ ❷ q r④②s q t ①q t q ⑥ q t ① ♦ q t r✈ ♥ t ④ s ❻ q t ✈ ① ③ ②♥ ♦ q t ① ♥ ♦ ❷ q ♣ q ✉ ➈ ♥s q ⑥ q t ➋ ② ♣ q t ✉ ➏ ♦ ♥t ♣ q ❷ . ➑ ’ ➒ ➓ ➔ → → → → ➣ → ➣➣ → ↔ ↔ ↕ → ➣→ → ↕→ ↔ ↕→ → ➣→ → ↔ ➣ → ↕ → ↔ ↕ → ➣ ➣ → → ➣ ➣ → ↔ ➣ → ↕ → → ➣ ↕↕ ↕ → → ➣ → ➣ ➣↔ ➣ ↕↕↔↔ ↕ ➣ ↕↕ → ➣ → → ➣ ➣→ ↕ → ↕ ↕↕ → ➣ → ➣➣ ↕ ↔ ↕ → ➣ → ➣↕ → ↔ ➣ → ↔ ➣ ➣ → → ➣ → → → ↔ ↔ ↕→ ➣↔↔ ➣↔↔ ↔ ➣→ ↕↔↔ → ↔↔ → ➣ → → ➣ → ↔ → ↔ ↔ ↕ ↕→ ↔ → ➣ ↕ ↕↕↕↔ → → ↔ ↔ ➣ → ➣ ➣ ↔ ➣ ➣ → ↔ ↕ ↔ → ➣ → → ➣ → ➣➣ → ➣➣ → → ➣ → ➣ → ↔ ➣ ➣ → ↕ ↕ ↔ ↕↕ → ➣ ➣ → ↕ ↕ ↔ ↕↕ → → → → ↕↕ ↕➣ ↕ → ↕ → → ➣ ➣ ↕ ↔ ↔ ↕ ↔ ↕→ ↕ ↔ ↕↕ → → → ↕ ↔ ➣ ↕→ → ➣➣ → ↔ ↕→ ↔ ➣→ ↔ ➣➣ ↕↔ ➣ ↕ → → ↔↔ ➣ ↕↕ → ↔ ↔ ↔ ↕ → → ↔ ➣ ➣➣ ↕ → → ➣ → → ➣ → → → ➣ ➣ → ↔↔ ↕ ↔↔ ↕ → ➣ ↕↕ → → ↔ ➣ → → ➣ ↕↕ ↕↕ → ↕↔ → → ↕ ➣↕↔ ➣ ↕➣ ➣↔ ↕ ↔ ↕↕ ↔ ↕↔ ↕ ↕ ↔ ➣ ↕↕ ➣➣↔ ↕ ↔ → ➣ ↔ → ➣↕↔ ➣→ ↔ ↕↕↔ ➣ ↕↔ → ➣ → → ➣ ➣➣ ➣ ↕➣ ➣ ↕→ ↔ → → → ↕➣ ➣ ↕→ ↔ ↕→ ↔↔ → ↔ ↕ → ↔ ↕ ↕↕ → ➣ ↕ → → ↔ ↕ ↔ → ↕ ↔ ↕ ↔ → ↔↔ ↔ ↔↔ ➣ ➣ → → ↔ ↔ ➣ ➣ → → ↕ ↕ ↔ ↕➣↔ → ➣ → ➣ ↕→ → ➣➣ → → ↕ → → ➣→ ↕ → ➣ → → ➣➣ → ➣ ↔ → ↔ ➣ → ↔ ↕→ ↕ → ↔ ↕➣ → ↕ ↔ ↔ ↔ ↕ → → → → ➣ ↕➣ ↕➣ ➣↕↔ ➣ → ↔ ➣ ↕↕ ➣➣ ➣↔ ↕ ↕→ → ➣→ ➣↔ ➣ ↕ ➣➣ ↕↕↔↔ ↕ → ↔ ↕ → ➣ ↕→ ↔ ↕ ↔ → ↔↔ ↕↕↔ ↕ ↕→ ➣ → → → ➣ → ➣↕↔↔ ↔ ↕↕ → ➣ ➣ ➣ ➣↕ ↕→ ➣ ↔ ↔ ➣ → ↕↔ ↕ → ↔ ➣↔ ↕ ↔ ➣ ↔ ↕ → → ↕ → ➣ ➣ ↕ ↔ ↕ ↔ ↕ → ↔ ↔ → → ↕ ↔ ➣↔ ↔ ➣ ➣ ➣ → → ↔↔ ↔ ↕→ → ➣ → ➣ ↕ → → ↕ → ↕ ↕↕ ➣↕ ↕ ↔ ➣ → → ↕↕↔ ↔ ➣↔ ➣↕ → ↕ ➣ ➣→ ↔ ➣➣ → → → → ➣ ➣ ➣↕ ↕→ ➣ ➣ → ↔ ↕→ ↕ → → ↕↕ ➣↕ ↕ → ↔ ↔ ➣↔ ↕→ → ↕→ ↕ → ↔ ➣ ↔ ➣↔ ↕↕ ↕ ↔ ↕↕↕ → → ↔ ➣ ➣ → → ↔ → → ↔ ➣↔ ➣↔ ↕↕ → → ↕ → → ➣ ↕➣↔ ↔ ➣↔ ↕➣ ➣↕↔ ➣➣ → ↕→ → → ➣↔ ➣ ↕↕↕↔↔ ➣ → ➣➣ → → ↕ ↕↕ ↕→ ➣↔ ↕ → ↔ ➣ ➣ ↕↕ → → ➣ ➣➣ ↕ ↕↕ ↔ ↕ → ↔ ➣ ↕↕ ↕→ ↔ ↕ ↔ → ➣ ↕ ↕→ ↔ ↕ → ↕↔ → → → ➣ ↕→ ➣↕ ➣ ➣↕ ↕→ ➣➣ ➣ ↕↕➣ ↕ ↕→ ↕ ↔ ➣ ↕→ ↕➣ ↕ ↔ ↔ → ➣ ↕ ↕ ↔ ➣ ➣ ↔ → → ➣ → → ➣➣ ➣ ↕➣ ↕ ↔ → ↔↔ ↔ ↕→ → ➣➣ ↕ ↔ → ➣ ↔ ➣ ➣ ↕ ↔ ↕↕↔ ↕ ↕→ ↕↕↔ ↕ ↕ ↔ ↕ ↔ ➣ ↕ ↔ → → ➣ → → ➣➣ ↕ ↔ ↔ ↔ ↕➣ ↕↕ → ↔ ↔ ➣ ↕ → ↔↔ ↕ ➣ ↔ ↔ → ↕ ↕ ↔ ↕↕ ↕ ↔ ➣ → ↕ ↔ ➣↔↔ ➣ ↕→ → ↔ ↔ ➣ ↕↕ → → ↔ ↕ ↔ ↕↔ ➣↔ ➣ → → ↔ ↕➣ ↕ ↔ ↕ ↔ ➣ → ↔ ➣ → → → ➣ → ↔ → ➣ ↕ ↔ ➣↔↔ ➣ ➣→ ➣ → ➣ ➣ ↕→ ➣↔ ➣ → ↔ ➣➣ ↕ ↔ → ➣ ➣ → ➣ → ➣ ↕ → → ↔ ↕ → → ➣ ➣↕ → → ➣↕ → ↕↔ ↔ ↕↔ ↕ → ↔ ➣ → ↕→ ➣↕ ➣ ➣→ ➣↔ ↕→ → → ➣↔ ↕ ↔ ↕→ ➣↔ ↕ ↕↕ → ➣ ➣↔ ➣ ➣ → ↔ ↕ ↕➣↔ ↕ → ↕↕ → ➣↔ ➣➣ ➣ ➣➣ ↕ ↔ ↕ ↔ ➣ ↕ ↔ → ➣ → → ↕ ↔ ↕ ↕↕ → ↔ → ➣➣ ➣ → → ➣ → ↕→ → ➣ ↔↔ ↔ → → ➣ ↕➣↔ ↕→ ↕↕ → ↕↔↔ ↕ → ➣↕ → → ↔ ↕ → ↔ ↕➣ → ➣ → ↔ ➣ ↕ ↔ → ➣ → → ➣ ↔ ↔ → ➣➣ ➣ ➣ ↔ ↔ ➣➣ → ➣ ↕→ ↔ ↔ ➣ ↕ ➣→ ➣ ↕↕ ↔ ↔ → ↔↔ ➣ ↕➣ → ↕↕ → → → ➣↕ → ↔ ↕ ➣ → ↔ ↕ → ➣ ↕ ↔ ↔ ➣➣ ➣ ➣ → ➣ → → ↔ ↕↔ → ➣ ↕ ↔ ↕ → → → ➣↕ ↕ ↔ ➣ → → ➣ ➣ → ↕➣↔ ➣ ↔ ↕↕ ↕ ↔ ↕↕↔↔ ↔ ↕↕↕ ➣➣↔ ↔↔ ↕➣↔ ↕→ ➣↔ ➣ ➣ → ➣ → → ➣↔↔ → ↔ ↕ ↕↕ → ➣↔ ↔ ↕ ➣↔ ➣ ↕ ↔ → ➣↕ ↕ ↔ ↔ → ➣ → → → ↔ ➣ → → ➣ ↕ → ↔ ➣ ↔ ➣ → ➣ → ↕ → ➣ → ↔ ➣➣ ➣ → → ↕ → ↔ ↕ ↔ ↔ ➣ → ➣ → ↔ ➣ → ➣ ↕ ↔ ↔ ↕ → ➣➣↔ ↔↔ ↕ → ↔ → ↔ ➣↔ ➣➣ ↕➣ ➣ → ↕↔ → → ➣ → ➣↕ ↕ → ➣ → ↔ → ↕ ↔ → ➣ → ↕↔↔ ➣ ↕→ ↔ ↔ → ↕ → ➣ ↕ ↕→ ➣↕ ➣➣ ➣ ↕↕ ↕→ ↔ ↔ → ➣ → ↔ → ↕ → → ↕ ↔ ↕ → ↔ → ➣↕↔ ➣↔ ↕↕ → ↔ ➣ → ↕➣ → ↔ → ↕ ➣↕↔ ➣ → → ➣➣ → ↕↕↔↔ ➣ → ➣ ➣ → → ➣ ➣ → ➣➣ ➣ → → ➣ → ➣ → ↕↔↔ ↕ → → ➣ → → → ↔ ↔ → ↕ → → ↔ ➣ → ↕ ↕ ↔ ➣ ↕ ↔ → → ↕↔ ↕ → ➣ ↕→ ↔↔ ↕↔ ↕ → ↕ ↕↕ → ➣↕↔↔ ↔ ↔↔ ↔ ➣ → → ↔ ➣ ↕ → ➣↔ ➣ → ↕ → ↔ ↔ → ➣→ ➣↔ ➣ ➣ ↕↕ ➣ → → ➣ → → → ↔ ↕ ↔ ↕↕ ➣ ➣↕↔ ↕ ↕→ → → → ↕ ↕➣ ➣ ↕→ ↕ ↔ ➣➣ ➣ ➣↕ → ➣↕↔ ➣↔ → → → → → ➣↕↔ ➣➣ ↕↕ ↕→ ↔ ↕ ➣ ↕➣ → → ↔ ➣➣ ➣ → ➣ ➣ ➣ ↔ ↕ → → ↔ ↔ → ↕↔ → → ↕↕ → → → ➣ ➣ ↕→ → → ↔ ➣ ↕➣ ➣➣↔ ➣ ↕ → ↕ ➣ ↔ ↔ ↔ ↕ ↕ ↔ ↕↕↔ ↕→ ↔ ↕ ↕↕ ➣↕ ↕➣ → → ↕ ↔ ➣→ ➣ ➣↕ ➣ ➣→ → ➣↕ → ➣➣ ↕↔ → ➣ ↕↕ → ↔ ↕ → ↔ → ↔ ↕→ ↔↔ ➣ → ↕↕ → ➣ ↕ → ➣ → ↔ ↕↔ ➣ ↕↕ → ➣➣ ➣ ➣ → → ↔ ➣→ ➣ ↕→ → ↔ ↕ ↕↕ → ↔ ↕ → → ↕ → ↕ ↕↕ ↕ ↔ ↔↔ → → ➣ → ↔ ➣↕ ➣ ➣ → ↕➣ ↕ → ➣ → ➣↕ ↕ → ↕ → ➣ ➣ → ↔ → ➣ ↕↕ ➣ ↔ ➣ ➣→ ↔ ➣➣ → → ➣ ➣ ➣ ↔ ➣ ↕ ➣↕ ➣ ↕→ ↕→ → ↔ ➣ ↕ → ➣↔ ➣ → → ➣ → ➣ ↕→ → ↕ → ↕↔ ➣ ➣↔ → ➣ ↕→ ↔ ↔↔ ↔ ↕→ ↔↔ ↔ ↕➣ ➣ ➣→ ➣ ➣ → → ↔ ↕→ ➣ ↕➣ ↕↕ → → → ➣ ↕➣ → ↔ ↕ → ↕ ↕→ ↔ ↔ → ➣ ↕ → ↔ ↔ ➣↔ ↕→ ➣ ↕→ ↔ ↕→ ↔ ↕↔ → ↕ ➣ → ↕ → ↔ ↕ ↕ ↔ ↕→ ➣↔ ➣ ↕ ↕→ ↕→ ↔ ↕ ↔ ➣ ↔ ↕ → ➣ → ↔↔ ↕ → → ↔ ↔ ↕↕➣ → ↕ → ↕↔ ➣ ↕ ↔ ➣ ↕ ↔ ➣ → ↕ → ↔ ↕ → ↕↔↔ ↕ ↔ ➣↔ ↔ ➣ → ↕ ↔ → ↕→ ↔ ↕ ➣ ↕ ↔ ↕↕ ↔ ↔ ➣➣ ➣ → → ➣ ↕ → ➣ ➣ ➣ ➣➣ ↕↕ ➣ ↔ ➣↔ ↕ ➣↕↔ ↕➣↔ → ↔ ➣ → ↕ ↕↕↔ ↕ ➣↕ ↕➣↔ ➣➣ ↕↕↔ → ↕ ➣ ↕➣ → ↕ → ↔ ↕ ↕→ → ➣↕ ↕ ↔ ➣ ↕→ ↕↕ ➣↕ ↕→ → ↔↔ ↔ ↕ ↔ ➣ ↕➣ ↕→ → ➣➣ → ↕↕ ↕→ ➣ ↔ ↕ ↕↕ ↔ ↔ ↔↔ ↔ ↕↕ ↕ ↔ ➣↕ → → ↕ → ↔ ↕ → ➣↕↔ → ↕ ↕→ ↔ ↕➣ ↕ ↔ ↔ ↕↔ ➣➣ ↕ → ➣ ↕→ → ↕➣↔↔ → ↕ ↔ ➣ ↕→ ➣↔ ➣ ➣ ↕ ↔ ↕ ↔ → ➣➣ → → ➣↕ ➣ → → → ↕→ ➣ ➣➣↔ ↔ ➣ ↕ ↔ ➣↔↔ ↕↔ ↕ ↕ ↔ ↔ ↔ → ➣↔ ➣ → ↔ ↕ → → ➣ ➣ → ↔ ↕ ↔ → ↔ ➣ → ➣ ➣➣ ↕ ↔ ↕ ↕ ↔ ➣ ↔ ↕ ➣ ↔ ↕ → → ➣➣ ↕ ↕→ ↕ ↕ ↔ ↕ ↔ → → ↔ ➣ → ↕ ↕➣↔ ↔ ↕ → → ↔ ↕➣ ↕ → ➣ ↕ → ➣↔ → → ↕ ↕➣ ↕ ↔ ↕↕↔ ↕ ↕↕ ↕→ → → ↔ ➣ → ↔↔ ↕➣↔ → ➣➣ ➣↔ ↕ ➣➣↔ ↕↕↔ ↕ ↕ ↔ ↔ ↔ → ➣ → ➣ → ↕↕ ↕↕ ↕→ → ↔ → ↕➣ → ↔ ↔ ➣↔ ↕ ↔ ↕↕ → ➣ → ➣ ➣→ ➣ ↔ ↕ → ↔ ↔ ↔ ➣ ↕ → ➣↔ → ➣↔ ↕↕↔↔ → ➣➣ ➣ → ↔ ↕ ↕→ ↔ ↔ ↕ ↔ ↔ → ↔ → ➣ ↕ ➣↕ ➣ ↔ ↕↕ → ↔ ➣ ➣ → ↕→ ➣→ ↕ ➣ ↔ ↕➣ ↕ ↔ ➣ → ↕ ↔ ➣ → → ↔ ↔ ↕ ↕→ ➣ ↕➣ ↕↕ ↕→ ↕→ ➣↔ ➣↔ → ➣ ↕↔↔ ➣ → → → → ↕↕ → → ↕ ↔↔ ↕ ➣ ↔ → ↕↔ → ➣ → ↔ → ↕↔ ↔↔ → → → ↕ ↕→ ↕↕ → ↔ ↕↔ ➣↕ ↕→ ↔ → → ↔ ↕↕ ↕↕ → ↕ → ➣ ↕ ↕→ ↔ ↕↔ ➣➣↔ ↕→ ➣↕ ↕ → ↔ ↕➣↔ ↕ ↔ ↕➣ ➣↕ ↕→ ↔ → → ↕ ↕↕➣↔ → ↔ → ➣ → ↔ ↕ → → → → ↔ ↕ ↕ ↕→ ↔↔ → ↔ ↕ ➣↕↔ → ➣ → → → → ➣ ↕↕ → → ➣ ↕→ → → → ↕ ↕→ → → ↔↔ → → ↕→ ↕ ↔ ➣ ↕ ↔ ↕→ → ↔ ↕ ↕↕ ➣↕ ➣➣↔ ➣↕↔ ➣↕↔ ↕ ↕↕ ↕➣↔ ➣↕↔↔ ↔ → ↔ ↕↕ → ➣ ↔ ↕↕↔ ➣↕↔ ➣ ➣ → ↕↕ ↔ ↕↕↔ ➣ ↕↔↔ → ↕↕ ➣↕ → ↔ ➣ ↕↕ → ➣ → ↕ → → → ➣ ➣→ → ↔↔ ↕ → → → ➣ ↕ ↔ ↕↕ → ↕ ↕➣ ↕ ↔ → ➣ → ↔ ➣ → ➣ → → ➣ ↕↕ → ↔ ➣ ↕↕ ↔ ➣↔ → ➣ → → ↔ ➣ ➣➣ ➣ → → ➣ ↔ ↕↕ ↕→ → ➣➣ ➣ ➣ → ➣ ➣ ↔ ➣ → ↔ → ↔ → ➣ → ↔ ↕↕ ↔ ➣ ➣ ↕→ → → ↔ ➣ ↔ ➣ ↔ → ↔ ➣ ↔ ➣ ➣➣ → ➣➣↔ ➣ ↔ ↕ → ↔ ➣ ↕→ → → ↕ ↕ → ↔ ➣➣↔ ↔ ➣ ↔ ↔ ↔ → ➣↔ ➣↔ ➣➣ ➣ ➣➣ ↕ ➣↕ ↕ ↔ ➣ ↔ ↕ → ➣ → ↔ → ↕ ➣ ↔ ↕ ↔ → ↔ ↕ ↕ ↔ → ↔ → → ➣ ➣ ↔ ↕ ↔ ➣ ➣↕↔ ➣↕ ➣↕ ↕ → ↔ ↕→ ➣ ➣→ ➣ ➣→ ↔ ↕ ➣➣ → ➣ → ➣ ➣ → ➣ → ↔ ↔ → ➣ → ➣ ↕➣ → ↔ → ➣ → → ↕↕ → ➣ → → → ➣ ➣↔ ↕→ ➣➣ ↕ ➣ ↔ ↔ ↔ ↕ → ➣ ➣ ➣ → → ↕ ↔ ➣ ↕→ ↕ → → ➣ ➣↕↔ ➣→ ↕↕ → ↕→ ➣ → ➣↔ ↕→ ➣ ➣ → → → ➣ ↔ ↕↕ → ➣ ↔ ➣ ↕➣ → ➣ → ➣ ↔ ➣ ➣ ↕ ↔ ↔ ➣→ ↔ ➣➣ → ↔ ➣ ↕➣↔ ➣ ↔ ➣ → ↕↔ t ➔ ➒ ggagagcaacacga ➙➛ ➙ ➙ ➛ ➙ g ➙ agc ➙ ➛ cggc ➙ ➛ ➙➙ a ➙➛ a ➙➜ gca ➙➙➛ ➙ ➙ a ➙ ➛ ➙ g ➙ gc ➙ gaggccaa ➙➝ a a ➙ cg ➙➜ ➙ aac ➙ agcag ➙ ➜ ➙ ➜ ➙ ➛ aacag ➙➙ ➙ ➛ ➙ ➜ ➙ ➛ g ➙ gg ➙ agc ➙➙ gggcaa ➙➛ ccc ➙➝ ➙➙ ➛ gcaccc ➙ ➙ ggaaaa ➙ gcc ➙➛ aagagggacaccac ggcgaacgac ➙➛ ➙ g ➙ ➝ agc ➙➙ ➙ g ➙ ➛ gaagaggc ➙ ➙ gaaacaacag ➙ acggcc ➙ ➝ c ➙➙ ➙➙ ➜ ➙ a ➙ ➙ aa ➙ ➛ ➙➙ a ➙ gcaac ➙ g ➙ ➛ ga ➙➙ ➙➙ ga ➙ ➙ ➝ ➙ gc ➙ ➛ ➙ aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa ➞ ’ ➟ ➠➡ ➢ ➠ ➤ 18. ➥ ➠➦ ➧➨ ➩ ➫➭ ➯ ➲ ➤➲ ➳ ➠ ➭ ➭ ➲ ➵ ➨ ➫ ➸ ➳ ➧ ➺ ➠ ➺ ➠➤ ➧ ➯ ➫ ➭ ➲ ➳➲ ➻ f ➼ ➽ ➽ ➽ e ➾ ➚ ➪ h ➩ ➫➭ ➶ ➠➭ ➺ ➧ ➥ + - ➹ ➘➴ ➠ ➦ ➫ ➡ ➫ ➡ ➢ ➤ ➠ ➭ ➩ ➨➠➦➡ ➠ ➺ ➠➤ ➧ M ➷ ➬ a ➽ aba ➪ h ➮ ic ➼ ➬ M ➬ ➱ ➬ a ➶ ➠➭ ➯ ➢ ➫ ➤➲ ➵ ➲ ➤ ➠ ➭ 3155 ➩ ➢ ➶ ➠ ➭ ➯ ➺ ➧➩ ➫➤➸ ➨➫➻ ➺ ➠ ➤ ➧ ➩ ➫➭ ➯ ➯ ➠ ➢ ➲ ➭ ➯ ➠➭ ✃ ➤ ➠ ➯ ➡ ➫➭ M ➬➱ ➬ a5’, M ➬➱ ➬ a ➡ , ➺ ➠ ➭ M ➬➱ ➬ a3’. ❐➸ ➳ ➠ ➵ ❒ ➵ ➸ ➺ ➸ ➭ ➠ ❮ ➠➨ ❰ ➯ ➠ ➤ ➧ ➦ ➢ ➠ ❮ ➠➻ ➳ ➫ ➢ ➠ ➨ ❒ ➵ ➸ ➺ ➸ ➭ ➠➵ ➻ ➧ ➤ ❰ ➯ ➠➤ ➧ ➦ ➢ ➠ ❮ ➠➻ ➩ ➠ ➺ ➠ ➻ ➲ ➤➲ ✃ ➡ ➧ ➤ ➧➭ ➯ ❒ ➱ ➼ ➪ a ➪ i Ï e ➱ Ð ➽ Ñ ade ➾ Ñ ➽ a ➪ i Ð ➾ Ò ig ➾ Ó ➽ ❰ ➻ ➲ ➤➲ ✃ ➡ ➧ ➤ ➧ ➭ ➯ ❒ Ô Õ UTR ➼ ➾ ➪➮ a ➾ Ò➽ a ➪ ed ➮ egi Ð ➾ ❰ ➺ ➠➭ ➻ ➲ ➤➲ ✃ ➡ ➧ ➤ ➧➭ ➯ ➳ ➫➢ ➠➨ ❒ ➫ ➵ ➸ ➤ ➩ ➸ ➨➧ A Ö × n Ø ÙÚ s Ú s Û ru t Ø Ü Ý u ÞÙß o t Ú àØ Mmpma áâ ã äå æå æ ç è ç éã â â ç ê äëì é å í ã î ëâ ç â ï ç ê ê ã â ð ã ñ ò ã ó ôõá M ö÷ ö a ð ëè ç ê ç è ã â 2871 ø ð ù ã â ú î ë â ù ã â í å 956 ã æ ã î ã îå â ì . û ë éë ä ã ñ ê ì í ì â ã ê ñ åè 2872 ø ð , é ë è í ã ø ã é 3’ üýþ ÿ ✁ ✂ a ✄☎ a ✁ ed ✂ egi ✆ ð ëè ç ê ç è ã â 284 ø ð é ë è îã æç ê í å í ã ä ã î â ù ã ã í ã äã ñ ø ì äåã í ë â å â . M ö÷ ö a î ë îå äå ê å ÷ ÿ ✁ a ✁ i ✝ e ÷ ✆ ☎✞ ade ✞ ☎ a ✁ i ✆ ✄ ig ✟ ☎ áá ý ááá ý , 64 ø ð æëé ëäã ñ ó ì í ì â ã ê ñ å è . P ✆ ☎✞ ade ✞ ☎ a ✁ i ✆ í å ê ëâ ã ä æë ð ã ú ãå î ë ê ã â å æ î ë è ë ú ç äã æ å ç é ã îã æëé ëäã ñ éè ã â æê è å ø æ å ø ãí ã ë ç ê ã è åì é . áâ ã äå æå æ ê ë æëïã ïãè ã â ð ë è í ã æ ã è ê ã â ç è ç é ã â â ç ê äëì é å í ã í ëâ ú ã â ð ã â ê í ã é ã í å ✠ e e ✡✟ ☛ í ëâ ú ã â ø è ì ú è ã î ☞✌ á ûý ✡✟ ✄ ic L ✆ ✍ a ☎ ✎ ☎ ig ö e ✁ Sea ✂ ch T ✆ ✆ ☎ ✄ î ë â ç â ï ç ê ê ã â ð ã ñ ò ã M ö÷ ö a î ëî ø ç â ù ãå ê ëæ ã îã ã â 82 í ëâ ú ã â ÷ ö a ✏✑ ✁ i ✄ ✝ i ✑ fe ✂ a XM ✒✓ ✓ ✔✔ ✕ ✓ ✖ ✓✗ ✘ ✙ ✚ ✛ îã æ å â ú ✜ îã æ å â ú í ëâ ú ã â ÷ ö a J ÿ ✢ ☎ a ✄ ✂ egia AY ✣ ✤ ✥ ✥ ✚ ✦ ✧ ★ ÷ ö a P ✆ ÷ ÿ ☎ÿ ✄ ✁ ✂ ic ✆ ✍ a ✂ ÷ ✟ XM ✩ ✪ ✪ ✫ ✣ ✫ ✫ ✪ ✬ ✚ ✧ ★ ÷ ö a Se ✄ ba ✑ a ✂ ✆ ✄ ✁ ✂ a ✁ a AB ✪ ✙ ✭ ✣ ✥ ✤ ✧ ★ í ã â ÷ ö a P ✂ÿ ÿ ✄ ÷ ✮ ✂✄ ica AJ ✫ ✥ ✚ ✤ ✣ ✬ ✧ ✘ æëè é ã ✙ ✪ ✛ í ë â ú ã â ÷ ö a L ✯ e ✄ c ÿ ☎ e ✁ ÿ ö AF ✫ ✥ ✦ ✥ ✤ ✦ ✧ ✰ A â ã äå æå æ æ å é ç æ è ëæ é è å ê æ å é ë è ñ ãí ã ø ç è ç éã â â ç ê äëì é å í ã M ö÷ ö a í ë â ú ã â P è ì ú è ã î B åì ✱ í å é ✲ ë è æ å ✥ ✰ ✪ ✰ ✬ ✰ ✪ î ë â ç â ïç ê ê ã â ð ã ñ ò ã ê ëó ç ã äå Nc ✆ I ★ P ✄✁ I ★ NdeI ★ SacI ★ ✡ ✄ ✁ XI í ã â N ✄ iI ★ â ç ê äëì éåí ã é ëè æ ëð ç é é å í ã ê î ëâ ú ã â í ç â ú æ å éç æ è ëæ é è å ê æ å ù ã â ú é ë è í ã ø ã é ø ãí ã æ å éç æ î ç ä é å ø ë â ú ê äì â ã â í ã è å ø ✳ EM ✜ T E ã æ ù ✰ F è ã ú î ëâ M ö÷ ö a í å æ å æ å ø ê ã â í å ã â é ã è ã æ å éç æ ✎ ÷ ✟ I ★ ✎ ✟ ✁ II ★ S ÷ ✴ I ★ Nc ✆ I ★ ✡ ✄ ✁ ✵ I ★ G ✶✷ ✸ ✶✹ ✺ ✻ ✼ P ✽✾✶ ✿ ❀✶❁✷ ❂❃ ✿ ❄✷ ✿ ✷ ✶ ❅ ✺ ❆ ✺ ✿ ✸ ❇ ✶❈ ❉ ✾✽✹❃ ❂✹❂ ❃ ✶✹❂ ❊ ✽❋ ✾● ✹ ✿ ❍ EM ■ T E ✶❁ ❇ ❏ ❑ ✺ ▲ ✿ ✸ ❃ ✶❈ ▼ DNA ◆❖ P ❖ ◗ ❏ ✺ ❘ ❅ ✿ ✸ N ❙ ❚❯ , Sac ❯ ❯ , ❱❲ ❙ ❳ ❯ ❨ ❩ ❬ ❭❪❫ ❬ ❩ ❬ ❩ ❨ ❭❴ S ❵ ❛❯ , ❱ ❲ ❙ ❳ ❯ , N ❙ ❚❯ , ❜❝ ❚❞❯ , P ❝ ❚❯ , Sa ❡❯ , Nde ❯ , Sac ❯ , ❜❝ ❚ XI ❢ N ❝ iI ❨ ❩ ❬ ❩❬ ❩ ❣ ❭ ❩ ❴ ❬❤ ✐ ❩❴ ❥ ❥ ❭ ❦ ❤ ❧ ❫ ❭❣ ❩ Nc ❙ I ❢ P ❝ ❚ I ❢ NdeI ❢ SacI ❢ ❜❝ ❚ XI ❨ ❭❴ N ❝ iI ❢ ❬ ❩ ❪ ❫ ❬♠ ❬ ❩ ❪ ❫ ❬ ❪ ❤ ♥ ❬❤ ♦ ❫ ❪ ❨ ❭♣ ❭❪ ❨ ❩❥ ❫ ❴ ❭❦ ❭ ❴ ❫ ❴ ❪ ❫ ❦ q❤ ❴ ❥ ❤❣ ❫ ❭ ♥ ❦ ❭ ❴ ❬ ❩❬ ❩ ♣ ❭ ❴ M r ❵ r a ❨ ❭ ♥ ❩ ♣ ❣ ❭ ❬ q ❩❨ ♥ ❤ ❦ s q ♦ ❩❴ ❭❴ G ❭q♦ ❭ ♥ t ✉ ✈ P ❤❪ ❭ ❬ ❩ ❪ ❫ ❬ ♥ ❤ ❬❪♥ ❩❦ ❬ ❩ ❬ ❭ ❴ ❥ ❭ ❪ ♣ ❤❴ ❪ ❩ ❴ ❥ ❨ ❭ ❣ ❭ q ♥ ❤ ❦ ❭✇ ❭ ❬ ❭ ❥ ❤ ❴ ❤❪ ❩ ❦ ❭ ✈ A ❴ ❭ ❣ ❩ ❬ ❩ ❬ ❦ ❤❬❤ ① ❭ ① ❭♥ ❭❴ ♦ ❤♥ ❨ ❭ ❬ ❭♥ ❦ ❭❴ ❫ ♥ ❫ ❪ ❭❴ ❭❬ ❭ q ❭ q ❩ ❴ s q ❤❴ ❫ ❴ ① ❫ ❦ ❦ ❭ ❴ ♦ ❭ ✐ ② ❭ M q PMA q ❤q♣ ❫ ❴ ✇ ❭ ❩ ❦ ❤❬ ❭q ❭❭❴ ✉ ③ ④ q ❭❬ ❩❴ ❥ ♠ q ❭❬ ❩ ❴ ❥ ❨ ❤ ❴ ❥ ❭❴ PMA ⑤⑥ ❚ i ❝ ⑦ i ⑧ ⑥ fe ⑨ a XP ⑩ ❶ ❶ ❷ ❷ ❸ ❶ ❹ ③ ③ ❺ ❨ ❭❴ PMA J ❻ ❼ ❡ a ⑧ ❝ ⑨ egia AAQ ❽ ❽ ❷ ✉ t ❺ ❢ ✉ ❹ ④ ❨ ❤ ❴ ❥ ❭❴ PMA P ❙ ❵ ❻ ❡ ❻ ❝ ❚ ⑨ ich ❙ ❲ a ⑨ ❵ ❾ XP ⑩ ❶ ❶ ❷ ❹ ❷ ❷ t ❷ ❸ ❺ ❢ ✉ ❷ ④ ❨ ❤❴ ❥ ❭ ❴ PMA ⑤⑥ cia faba CAC ❷ ✉ ③ ❹ ❽ ❺ ❢ L ❿ c ❙ ❵ e ⑨❝ ic ❙ ⑧ e ❝ c ❻ ❡ e ⑧ ❚ ❻ r AF t ❸ ✉ ③ ③ ❷ ❺ ❢ S ❙ ❡ a ⑧ ❻ r ❚ ❻ be ⑨ ❙ ❝ ❻ r CAA ❽ ③ ❶ ③ ➀ ❺ ❢ ❨ ❭❴ ➁⑨ abid ❙ ❵ ❝ i ❝ ❚ ha ❡ ia ⑧ ❾ ❢ AHA ③ NP ⑩ t ✉ ❶ ❹ ❸ ➂ ❺ ✈ S ❪ ♥ ❫ ❦ ❪❫ ♥ ❨ ❫ ❭ ❨ ❩q❤ ❴ ❬ ❩ ♣ ♥ s ❪ ❤ ❩ ❴ H ➃ ♠ ATP ❭ ❬❤ q❤ q♦ ♥ ❭❴ ♣ ❣ ❭ ❬q ❭ PMA ✇ ❭❴ ❥ q❤q ❩ ❣ ❩ ❦ ❩ t ❶ ❨ s q ❭❩❴ ❪♥ ❭❴ ❬q ❤q♦ ♥ ❭❴ M t ♠ M t ❶ ❺ ❢ ③ ❡❙ ❙ ❵ ❝ ❬ ❩❪ s ♣ ❣ ❭❬q ❭ C t ♠ C ③ ❢ ❨ ❭ ❴ ➀ ❨ s q ❭ ❩ ❴ ➄ ❫ ❴ ❥ ❬ ❩ s ❴ ❭❣ F t ♠ F ➀ ❺ ❨ ❩❥ ❭q♦ ❭ ♥ ❦ ❭ ❴ s ❣❤ ✐ M s ♥ ❬ s qq❤ e ❚ a ❡ ✈ ❷ ❶ ❶ ❶ ❨ ❭ ❴ B ❫ ♥ ❥ ✐ s s ♥ ❴ e ❚ a ❡ ✈ ❷ ❶ ❶ ❷ G ❭ q♦ ❭♥ ❷ ❶ ✈ P ❭❨ ❭ M ➅ r a ❡ aba ❚ h ⑨ ic ❻ r L ✈ ❢ ❨ s q ❭ ❩ ❴ ❪♥ ❭ ❴ ❬q ❤q♦ ♥ ❭ ❴ ❢ ❡❙ ❙ ❵ ❝ ❬ ❩❪ s ♣ ❣ ❭❬q ❭❢ ❨ s q ❭ ❩ ❴ ➄ ❫ ❴ ❥ ❬ ❩ s ❴ ❭ ❣ ❨ ❭ ❴ ❨ s q ❭ ❩ ❴ ❭❫ ❪ s ♥ ❤ ❥ ❫ ❣ ❭ ❪ s ♥ ❨ ❩❪❫ ❴ ① ❫ ❦ ❦ ❭ ❴ ♣ ❭ ❨ ❭ G ❭ q ♦ ❭♥ ❷ t ✈ P ❭ ❨ ❭ ❡❙ ❙ ❵ ❬ ❩ ❪ s ♣ ❣ ❭❬q ❭ ❦ ❤ ❨ ❫ ❭ C ❷ ❺ ❪ ❤♥ ❨ ❭ ♣ ❭ ❪ ❬❤ ❦ ❫ ❤❴ ❪❤ ♥ ❦ s ❴ ❬❤♥ ➆ ❭ ❬ ❩ TGES ❨ s q ❭❩❴ ❭❦ ❪ ❩ ➆ ❩❪ ❭❬ ➄ s ❬ ➄ ❭❪ ❭ ❬ ❤ ❢ F t ❢ ❬❤ ❨ ❭❴ ❥ ❦ ❭ ❴ ♣ ❭❨ ❭ C ❹ ❪ ❤♥ ❨ ❭ ♣ ❭ ❪ ❬❤❦ ❫ ❤❴ DKTGTLT ❨ s q ❭ ❩ ❴ ➄ s ❬ ➄ s ♥ ❩ ❣ ❭❬❩ ❨ ❭ ❴ ❪ ♥ ❭❴ ❬ ❨ ❫ ❦ ❬ ❩ ❢ F ❷ ❢ KGAP ❨ s q ❭ ❩ ❴ ♣ ❤ ❴ ❥ ❩❦ ❭❪ ❭ ❴ ATP ❨ ❭ ❴ ➇ ❭❪ ❭❫ ❭ ❦ ❪ ❩ ➆ ❩ ❪ ❭ ❬ ❦ ❩❴ ❭ ❬❤ ❢ F ❹ ❢ DPPR ❨ s q ❭❩❴ ♣ ❤❴ ❥ ❩ ❦ ❭ ❪ ❭ ❴ ATP ❢ F ③ ❢ MITGD ❨ s q ❭❩❴ ♣ ❤❴ ❥ ❩❦ ❭ ❪ ❭❴ ATP ❢ F ❽ ❺ ❨ ❭❴ GDGVNDAPALK ❨ s q ❭ ❩ ❴ G ➈➉ ➊ ➈➋ ➌ ➍ ➎ S ➏➋➐ ➑ ➏➐ ➋ ➌ ➒ ➓➉ ➔→ ➣ ➓ ➒ ➈ ➋ ➓ H ↔ ↕ ATP ➈ ➣➔ ➉ ➔ ➉ ➊ ➋ ➈→ ➙ ➛ ➈➣ ➉ ➈➎ M ➜ ➝ M ➜ ➞➟ ➠➡ ➢ ➤➥ ➦ ➧ ➨ ➤➦ ➩ ➢ ➫ ➢ ➭ ➨ ➤➦ ➯ C ➜ ➝ C ➲ ➟ ➳ ➡ ➡ ➵ ➩ ➥ ➧ ➡ ➵ ➳ ➤ ➩ ➢ ➤ ➯ F ➜ ➝ F ➸ ➟ ➠ ➡ ➢ ➤➥ ➦ ➺ ➻ ➦ ➼➩ ➥ ➡➦➤ ➳ S ➽ ➤ ➨➭ ➡ ➨ ➡ ➻➼ ➾ ➜ ➚➚ ➸ ➪ ➯ R ➫ ➼ ➥ ➡➦ ➜ R ➜ ➪ ➟ R ➶ ➟ ➠➤➦ ➜ ➲ ➝ ➹ ➝ ➹ ➟ ➠ ➡ ➢ ➤➥ ➦ ➤ ➻➧ ➡ ➨➫ ➼➻ ➳ ➤ ➧ ➡ ➨ F ➻➼ ➳ ➩ ➤➦ ➼ e ➘ a ➴ ➷ ➜ ➚➚ ➚➪ ➯ ➠➤➦ ➜ ➲ ➝ ➹ ➝ ➹ ➟ ➩ ➥ ➧ ➻➩ ➵ ➫ ➦ ➼ ➥ ➬ ➤ ➧ ➤➦ ➵ ➨ ➡ ➧ ➫ ➥ ➦ ➜ ➲ ➝ ➹ ➝ ➹ ➷ ➮ 2 ➮ 6 ➮ 1 F3 F4 F5 R2 14-3-3 R1 ➱ ✃❐ ❒ ❮❰ ÏÐ Ï ❐ ÑÒÓ , Ô 6. Õ ✃Ö Ï❐ ❒ ❰ Ï ❐ Ö × ØÏ ❮❐ ÏÙ Ð × Ú ✃ ❒ Ù Û ÏÐ × Ú Ø✃Ø➱ Ù ❐ Ü Ï ❮ Ý✃❰ Ù ✃❐ Þßà Ô áßâÞã âäÞåÑ æ ÑÞã Ò ä æ á ä , çæè Ñ â â Ñßã ãÑ â è Ñã ä , Ö Ï❐ é Òê . ë ✃ Ú Ö Ï ÝÏÚ ❰ Ï ❐ Ö ✃Ö Ù ❰ Ý❮ Ï ÝÏØ Ï Ø❮❐ × , ìØÓì Ñ Ø ✃Ø❮Û ❮❰ ❮ í ✃ Ú ÏÐ Ø × Û ✃ ❰ Ù Û 105.29 ❰ àÏ Ö ✃❐ ❒ Ï❐ ➱ ✃ Ú ❰ ❮ Ú Ï Ï ❐ Ð ❮ Ð ❮ ❰ ❮Ý × ✃Û ✃❰ Ð Ú ❮ ❰ 6.84. 7 8 î ï ð 4 ñ 6 9 10 C î C ï C ð C4 ò óô õ óö 22. ÷ö ø ù úû ü ú ý ö ø ù ø õ úþúÿó þ ô ÷ ✁ ý ó✂ ÷ ✁ J ✄ ☎ ✆ a ✝ ✞ ✟ egia ✁ ✠✁ 1 ô ✡ ✂ ☛ ☛ ☞ ✂ ó✌ ó✂ þ ✌ óûó ✍ ✎ ÿ✡ ✏ ø ø ûúÿÿû✡ . ✁ ✂ ☛ ✌ ó 1-10 ô ✡✂ ☞ ✂ ✑ ☞ ✌ ✌ ó ✂ ý ø ô óú✂ ÿ ö ó✂ þ ô ✡ô õ ö ó✂ ý ó ✂ ✒ 1- ✒ 4 ô ✡ ✂ ☞ ✂ ✑ ☞ ✌ ✌ ó✂ ý ø ô óú✂ þúÿ ø ✓ ûó þ ô ó . ò ó ô õ ó ö 21. ✏ ✡ý ☞ ✌ þú ó þóô óô ú✂ ø ☛ ✡✂ ✓ ✡✂ ✎ ó✂ ý ú ✠ + - ✁ ✔÷ ó þ✡ ô ✡ô õ ö ó ✂ ✓ ûó þ ô ó ý óö ú M ✕ ✖ a ✆ aba ✗ h ✟ ic ✄ ✖ . ✍ ø ÿó✌ , ÿ ö ó✂ þ ô ✡ô õ ö ó ✂ 1-10 1- 10; ûó ÿó ö õ ✡ûó✌ ó ✂ ☛ ☛ ✡ûó ✓ , 4 ✆ ✘ ✘ ✙ ✞ þ úÿø ✓ ûó þ ô ó ✒ 1- ✒ 4; ü ☞ ö ☞ ù ÿ ✡õ óû , 6 ý ø ô óú✂ ù ☞ ✂ ☛ þúø ✂ óû ✔ò ✚✛ , ✏✍ ✔ò ✔ ✜ ✔ , ✍ ò ✁÷ , ✢ ✔ò ✏ , ý ó ✂ ò ✏ ò ✣ ✤✏ ✁ ÷✁ ✜ ✍ ; ý ó✂ ü ☞ ö☞ ù ÿ✡ õ óû ý ó✂ ☛ ó ö úþ õ ó ✥ ó ü , ý ø ô óú✂ ó ☞ ÿø ö ✡ ☛ ☞ ûó ÿø ö ✦ 1, ✦ 2, ý ó ✂ 14-3-3. 14-3-3, þúÿ ☞ þ ✓ ✡✂ ☛ ú ✌ ó ÿó✂ ✓ ö ø ÿ✡ú✂ 14- 3-3 ✎ ó ✂ ☛ ô ✡✂ ☛ óÿ ☞ ö ó ✌ ÿú ✧ úÿóþ ✡✂ ★ úô . ✩✪ ✫✬✭ ✫✮✯ ✫✰ ✮ ✯ ✬ ✫✰ ✮✱✯ ✫✲ ✳ ✭ ✳✫ ✫✮✴ ✫✲✯ ✵✶ ✷ ✬ ✫ ✪ ✯ ✸✸ ✹ ✷ ✰ ✫✫✵✯ ✰ ✳ ✴ ✪ ✹ ✲ ✬✯ ✫✫✬✬ ✫✷ ✬✴ ✯ ✬✴ ✯✪ ✴ ✩ ✺ ✲ ✭ ✯ ✷ ✺ ✮ ✩ ✫✰✰✰ ✳ ✩✰ ✳ ✰ ✯✰✲ ✪✪✪ ✬✭ ✭ ✱✺ ✹✱ ✴ ✮ ✪ ✳✳✸✯✯ ✴ ✳ ✲ ✷ ✸✳ ✷ ✴ ✳✫ ✫ ✲✲ ✰✪✲ ✰✰✰✰ ✯✩✰ ✵ ✯✰ ✭ ✬✰✬ ✮✯ ✵ ✱ ✪ ✵✺ ✷ ✫✫ ✱ ✰✰ ✮✯ ✮✭ ✪ ✱✳✳ ✷ ✳ ✬ ✯✪ ✱ ✳✳ ✭ ✰ ✱ ✰ ✵✯ ✯ ✫ ✪ ✱ ✭ ✯✬ ✳✱✹ ✷ ✰ ✯ ✻ ✼✽ ✾ ✯ ✭ ✮ ✸ ✬ ✪✭ ✪ ✱ ✪ ✮ ✿ ✷ ✪ ✷ ✸✶✬ ✹✪ ✫ ✳✫ ✰ ✮ ✮✳ ✰ ✸ ✪ ✮ ❀ ✸✴ ✴ ✪✬ ✰✰ ❀ ✯ ✮✱ ✸✸✲ ✹✮✪ ❀ ✴ ✹ ✬ ✮ ✯ ✸✰ ✳ ✪✲ ✴ ✶ ✳ ✶✷ ✳ ✰ ✮✪✩ ✳✳ ✫✳✳✮✩ ✿ ✭ ✳✹✵ ✵ ✬ ✿ ✵ ✭ ✪ ✳✱ ✲✯ ✯ ✮✯✯ ✳ ✪✪ ✳ ✭ ✳✰✩✭ ✸✮✯✷ ✮✸✩✰ ✳ ✪✷ ❀ ✵✯✷ ✹✹✪✰ ✳✸ ✬ ✵ ✩ ✸✰ ✳✫ ✫ ✩✰✪ ✩ ✱✮✯✶✷ ❁ ❂ ✻ ✼ ✻ ❃✻ ✯✲✬ ✯ ✸✮ ✱ ✬✲ ✯ ✳ ✫✮✴ ✰ ✬✪ ✮ ✱ ✭ ✱✸✮ ✮ ✯✩✰ ✰ ✵ ✰ ✷ ✵ ✸ ✫ ✲ ✹ ✱ ✰ ✳✱✷ ✰ ✳✮ ✪ ✩✯✰ ✱✭ ✬ ✫ ✰ ✵ ✷ ✪ ✳✹ ✫✮ ❀ ✴ ✯✭ ✴ ✲ ✭ ✸✱ ✬ ✵✸✰✯ ✸ ✿ ✳✱ ✷ ✫ ✪ ✵ ✩ ❀ ✵✮✷ ❂✼❄❅ ✫ ✹✳ ✯ ✲✭ ✰ ❀ ✲ ✬✷ ✫✳ ✫✵✵ ✮ ❀ ✰ ✮✳✱✬✴ ✰ ✫✵✪ ✯ ✵✷ ✯ ✰ ✮ ✰ ✿ ✹✫ ✮ ✭ ✫ ✪ ✵ ✬ ✫ ✷ ✭ ✪✪ ✭ ✺ ✹ ✴ ✳ ✪✯ ✩✭ ✯✴ ❁❅ ❅ ❆❀ ✱ ✷ ✰ ✫ ✸✳✵ ✵ ✰ ✯✲ ✯✪ ✮✲ ✮ ✬ ❇ I ✻ ✼❁ ✹ ✴ ✰ ✳ ✪✬ ✫✸✪ ✵ ✵ ✯✪ ✩✪ ✳ ✲ ✩ ✿ ✭ ✷ ✷ ✰✯ ✯✪ ✹ ✲✬ ✱✫✷ ✳ ✰ ✰✯ ✭ ✮ ✱✫✯ ✳✫✬✰ ✱✪✴ ✰✪ ✮ ✴ ✭ ✫ ❀ ✬ ✿ ✫✳✮ ✬ ✵✯ ✹ ✰ ✵ ✬ ❀ ✳ ✶✪ ✩ ✸ ✼ ❁ ✼❈❉❁❄❅ ❄ ❃ ❂ ✬✰ ✱✳ ✪ ✳ ✰ ✮ ✰ ✱✰ ✸ ✱ ✰✰ ✵✷ ✰✷ ✱✳✮✯ ✸ ✫ ✭ ✪✯ ✷ ✮✳✳ ✷ ✰ ✮✯ ✸✷ ✵✰ ✳✴ ✹✵✩✬✲ ✿ ✸ ✳ ✿ ✰ ✮✷ ✳✸✳✵ ✳ ✮ ✯ ✪✴ ✩✯✯ ✰✯ ✳✺ ✬✴ ✱ ✴ ✭ ✭ ✴ ✩ ✮ ✯ ✳✮ ✰ ✳ ✯✲ ✱✪ ✸ ✮ ✩ ✸ ✳ ✷ ✬ ✱✵ ✮ ✬✭ ✷ ✭ ✯✭ ✱ ✷ ✺ ✬✯✰ ✫✳✴ ✸ ✸ ✪ ✳✮ ✯✪ ✷ ✿ ✯ ✰✩✩ ✸✮ ✳ ✴ ✴ ✺ ✰✰ ✿ ✫ ✸ ✲ ✴ ✴ ✭ ✵ ✮ ✴ ✪ ✮ ✰ ✸ ✯ ✫ ✬ ✸ ✰ ❀ ✱✱✴ ✵✬✯ ✰✷ ✰ ✳ ✿ ✯ ✹✮ ✷ ✸ ✳ ✷ ✹ ✰✯ ✳ ✴ ✮✸ ✵ ✷ ✵ ✪ ✺ ✷ ✿ ✮✫✵✭ ✪✯✯ ✯ ✳✰✰✴ ✮✳ ✰ ✹ ✯ ✳ ✰ ✸✯ ✳ ✰ ✮ ✿ ✰ ✷ ✺ ✪ ✴ ✰ ✰ ✳✫✪ ✳ ✪ ✺ ✪ ✺ ✰✪ ✮ ✳✺ ✯ ✿ ✲ ✳✳ ✴ ✿ ✳ ✭ ✯ ✱✴ ✳ ✬✴ ✴ ✳✵ ✿ ✰✯✷ ✪ ✬✰ ✺ ✱✯ ✮✳✫ ✹✵ ✳ ✰✴ ✸✵ ❊❂ ❁ F ✼ ❂ ✽ ❊❆✽ ❃ ❊ ❋ ❄●❄ ❊❆✻ ❃● ✼❃ ✹ ✭ ✭ ✱ ✸ ✬ ✳✴ ✸ ✫✵ ✸✵✴ ✰ ✫✯ ❉● I ❄✽✽ ❄ ❂ ❆ ❆❄✽ I ❄❆ ❃ ✵ ✫ ✯✲ ✸ ✯ ✬✪ ❀ ✮✫ ✷ ✮✮ ✵✯✬✪ ✯ ✱ ✳✫✸ ✳✹✹ ✰ ❍✻ ❈ C î C ï C ð C4 ❇ î ❇ ï ❇ ð ❇ 4 ❇ ñ ❇ 6 ❇ 7 ❇ 8 ❇ ■ ❇ î ❆ î ❆ ï î 4- ð - ð ❏ ❑▲ ▼ ◆❖ ◆ ▲ P ◆◗ ◆◗ ◆❘ ❙❖ ❙ ❖ ❚ ❙ ▼ ▲ ❯ ❱ ❯ ❲ ❙❖ ❙❳ ◆ ❖ , ❨❩❬❨❭ ❩❑ ◗ ❪ ◗ ❫ ❪ P P ◆ ◗ ❴ ▲ ❯ ❱ ❙❘ ❵ ◆ ◗ ❛ ❖ ◆❩ ◆ ▼ ❑ ◗ ❛ ◆ ◗ ❬❨❭ J ❜ ❝ ❞ a ❡ ❢ ❣ egia ❤ ◆❩ ❲ ◆▲ 22. ✐ ❪ ▲ ❥ ◆ ❵ ◆◗ ❛ ❲ ❑ ▲ ◆▼ ◆ ▼ ❙ ◆❳ ◆❖ ❩❑◗ ❪ ◗ ❫ ❪ P P ◆ ◗ ❱ ▲ ◆❛ ❩❑ ◗ ❵ ◆ ◗ ❛ ❲ ❑ ▲ ❖ ❙❱ ◆ ❳ ❚ ❙ ▼ ▲ ❯ ❱ ❯ ❲ ❙P ▼ ◆ ◗ ▼ ❙ ❲ ◆ ❦◆❚ ❲ ❑ ▲ ❖ ❙ ❱ ◆❳ ❚ ❙▼ ▲ ❯ ❱ ❙❘ ❙P . ❏ ❑▲ ▼ ◆❖ ◆ ▲ P ◆◗ ❤ ◆ ❩❲ ◆ ▲ 21, ❨❩❬❨❭ ❩❑ ❩ ❴ ❪ ◗ ❵ ◆❙ 10 ▼ ❯ ❩◆ ❙◗ ❳ ▲ ◆ ◗ ❖ ❩❑❩❲ ▲ ◆◗ ❵ ◆ ◗ ❛ ▼ ❙ ❳❪ ◗ ❫ ❪ P P ◆◗ ❯ ❘❑ ❚ ◆▼ ◆ ◗ ❵ ◆ 10 ❴ ❪ ◗ ❧ ◆ P ▼ ❯ ❩❙ ◗ ◆ ◗ ▼ ❙ ◆❳ ◆ ❖ ❨ 1- ❨ 10 ▼ ◆ ◗ 4 ❞♠ ♠ ♥ ❢ ❖ ❙❳❯ ❴ ❘ ◆ ❖ ❩ ◆ ❵ ◆◗ ❛ ▼ ❙ ❳❪ ◗ ❫ ❪ P P ◆ ◗ ❯ ❘ ❑ ❚ 4 ❴ ❪ ◗ ❧ ◆ P ▼ ❯ ❩❙ ◗ ◆ ◗ ▼ ❙ ❲ ◆ ❦◆❚ ♦ 1- ♦ 4. ♣q s rs p u t ✉ n ❤ ❑ ◗ ❴ ❑◗ ❵ ◆◗ ▼ ❙ ✈ + - ❭ ✇ ❬◆❖ ❑ ❩❑ ❩❲ ▲ ◆ ◗ ❴ ❘ ◆ ❖ ❩◆ ❪ ❳ ❪ ❚ f ❜ ❞ ❞ ❞ e ❡ ❝ ① h ❵ ◆ ◗ ❛ ❳❑ ❘ ◆❚ ❲ ❑▲ ❚ ◆❖ ❙ ❘ ▼ ❙ ❙ ❖❯ ❘◆❖ ❙ ❲ ❑▲ ❪ P ❪ ▲ ◆ ◗ 2871 ❴ ❲ ❵ ◆ ◗ ❛ ❩❑ ◗ ❵ ◆◗ ▼ ❙ 956 ◆ ❖ ◆ ❩ ◆ ❩❙◗ ❯ . ❏ ❑▲ ▼ ◆❖ ◆ ▲ P ◆◗ ❪ ▲ ❪ ❳◆ ◗ ◗ ❪ P ❘ ❑ ❯ ❳ ❙ ▼ ◆ , M ② ♥ ② a ❩ ❑❩❴ ❪ ◗ ❵ ◆ ❙ P ❑ ❖ ◆ ❩◆◆ ◗ 82 ▼ ❑ ◗ ❛ ◆ ◗ ❬❨❭ ③④ ① i ❢ ⑤ i ❡ ④ fe ❣ a XM ⑥⑦⑦ ⑧⑧⑨⑦ ⑩⑦❶ ❷ ❸ ❹ ❺ ❩◆❖ ❙ ◗ ❛ ❻ ❩◆ ❖ ❙ ◗ ❛ ▼ ❑◗ ❛ ◆◗ PMA J ❜ ❝ ❞ a ❡ ❢ ❣ egia AY ❼ ❽ ❾ ❾ ❹ ❿ ➀ ➁ PMA P ♠ ♥ ❜ ❞❜ ❢ ① ❣ ic ♠ ca ❣ ♥ ➂ XM ➃ ➄ ➄ ➅ ❼ ➅ ➅ ➄ ➆ ❹ ➀ ➁ PMA Se ❢ ba ❡ ④ a ❣♠ ❢ ① ❣ a ① a AB ➄ ❸ ➇ ❼ ❾ ❽ ➀ ➁ ▼ ◆◗ PMA P ❣❜ ❡ ❜ ❢ ♥ ➈ ❣ ❢ ica AJ ➅ ❾ ❹ ❽ ❼ ➆ ➀ ❷ ❖ ❑▲ ❳◆ ❸ ➄ ❺ ▼ ❑ ◗ ❛ ◆ ◗ PMA L ➉ e ❢ c ❜ ❞ e ❡ ① ❜ ② AF ➅ ❾ ❿ ❾ ❽ ❿ ➀ ➊ B ❑▲ ▼ ◆ ❖ ◆ ▲ P ◆◗ ▼ ❑▼ ❪ P ❖ ❙ ◆❖ ◆❩ ◆ ❩❙◗ ❯ ➁ M ❩ PMA ❩❑❩❴ ❪ ◗ ❵ ◆ ❙ P ❑ ❖ ◆ ❩◆ ◆◗ ➆ ❽ ❺ ❩◆❖ ❙ ◗ ❛ ❻ ❩◆❖ ❙◗ ❛ ▼ ❑ ◗ ❛ ◆ ◗ PMA ③④ ① i ❢ ⑤ i ❡ ④ fe ❣ a XP ➃ ➄ ➄ ➅ ➅ ❾ ➄ ❼ ❽ ❽ ➀ ▼ ◆ ◗ PMA J ❜ ❝ ❞ a ❡ ❢ ❣ egia AAQ ❿ ❿ ➅ ➆ ❹ ➀ ➁ ➆ ❼ ❺ ▼ ❑ ◗ ❛ ◆ ◗ PMA P ♠ ♥ ❜ ❞❜ ❢ ① ❣ ich ♠ ➋ a ❣ ♥ ➂ XP ➃ ➄ ➄ ➅ ❼ ➅ ➅ ❹ ➅ ❾ ➀ ➁ ➆ ➅ ❺ ▼ ❑◗ ❛ ◆◗ PMA ③④ cia faba CAC ➅ ➆ ❽ ❼ ❿ ➀ ➁ L ➌ c ♠ ♥ e ❣ ❢ ic ♠ ❡ e ❢ c ❜ ❞ e ❡ ① ❜ ② AF ❹ ❾ ➆ ❽ ❽ ➅ ➀ ➁ S ♠ ❞ a ❡ ❜ ② ① ❜ be ❣♠ ❢ ❜ ② CAA ❿ ❽ ➄ ❽ ➇ ➀ ➁ ▼ ◆ ◗ ➍ ❣ abid ♠ ♥ ❢ i ❢ ① ha ❞ ia ❡ ➂ ➁ AHA ❽ NP ➃ ❹ ➆ ➄ ❼ ❾ ❸ ➀ ➊ S ❑ ❘◆ ❙ ◗ ▼ ◆❑▲ ◆ ❚ ❴ ❑ ◗ ❵ ◆ ◗ ▼ ❙ ➁ ❼ ➎ UTR ▼ ◆ ▲ ❙ M ② ♥ ② a ❫ ❪ ❛ ◆ ❳❑ ❘◆ ❚ ❲ ❑ ▲ ❚ ◆ ❖ ❙❘ ▼ ❙ P ❘ ❯ ◗ ➊ ➏➐ ✉ ➑✉ ➒ ➓q r rs ✉ ♣✉ ➔ r→ K ◆❩ ❙ ❲ ❑▲ ❳❑▲ ❙ ❩◆ P ◆ ❖ ❙ ❚ P ❑ ❴ ◆ ▼ ◆ P ▲ ❯ ❛ ▲ ◆❩ BPPS ➁ K ❑ ❩❑ ◗ ❳ ❑ ▲ ❙◆ ◗ P ❑ ◗ ▼ ❙▼ ❙ P ◆◗ N ◆ ❖ ❙❯ ◗ ◆ ❘ ➁ I ◗ ▼ ❯ ◗ ❑ ❖ ❙ ◆ ◆ ❳◆❖ ❲ ❑ ◆ ❖ ❙❖ ❦◆ ❵ ◆ ◗ ❛ ❳❑ ❘◆ ❚ ▼ ❙ ❲ ❑▲ ❙ P ◆◗ ❷ H ❙❲ ◆❚ K ❯ ❩ ❴ ❑❳ ❑◗ ❖ ❙ ◆ ◗ ➊ D ▲ ➊ S ❪ ❚ ◆▲ ❖❯ ◗ ❯ ▼ ❑ ◗ ❛ ◆ ◗ ❫ ❪ ▼ ❪ ❘ ❙❖❯ ❘◆❖ ❙ ▼ ◆ ◗ ❑ P ❖ ❴ ▲ ❑ ❖ ❙ ❛ ❑ ◗ ▼ ◆ ❘◆ ❩ ▲ ◆◗ ❛ P ◆ ❴ ❑▲ ◆P ❙❳ ◆◗ ❳◆ ◗ ◆ ❩◆ ◗ ❵ ◆ ◗ ❛ ❳ ❯ ❘ ❑ ▲ ◆ ◗ ❳ ❑ ▲ ❚ ◆ ▼ ◆ ❴ ❧ ❑ P ◆ ❩◆ ◗ ◆❖ ◆❩ ▼ ◆◗ ◆❘ ❪ ❩❙◗ ❙❪ ❩ ◆ ❳◆ ❖ ▼ ❪ P ❪ ◗ ❛ ◆◗ ❖ ❑❲ ◆ ❛ ❙ ◆◗ ❲ ❑❖ ◆▲ ▼ ◆ ◗ ◆ ❴ ❑◗ ❑❘ ❙❳ ❙◆ ◗ ❷ P ▲ ❯ ❱ ➊ K ❯ S ❚ ❙❩◆ ❩ ❯ ❳❯ ▼ ◆ ◗ D ▲ ➊ W ❯ ◗ ❛ H ◆ ◗ ◗ L ❙ ◗ ❛ ▼ ◆▲ ❙ P ❘ ◆ ◗ ❳ M ❯ ❘ ❑ ❧ ❪ ❘ ◆▲ G ❑◗ ❑ ❳❙ ❧ ❖ L ◆❲ ❯ ▲ ◆❳▲ ❵ ➁ N ◆ ▲ ◆ I ◗ ❖ ❳ ❙❳ ❪ ❳❑ ❯ ❱ S ❧ ❙ ❑◗ ❧ ❑ ◆◗ ▼ T ❑ ❧ ❚ ◗ ❯ ❘ ❯ ❛ ❵ ➁ J ◆❴ ◆ ◗ ◆❳ ◆ ❖ ▼ ❪ P ❪ ◗ ❛ ◆◗ ❱ ◆❖ ❙❘ ❙ ❳◆ ❖ ❘◆ ❲ ❯ ▲ ◆ ❳ ❯ ▲ ❙❪ ❩ ➁ ❲ ◆ ❚ ◆ ◗ P ❙ ❩❙ ◆ ▼ ◆ ◗ ❲ ◆ ◗ ❳❪ ◆ ◗ ❳ ❑ P ◗ ❙ P ❘◆ ❲ ❯ ▲ ◆❳❯ ▲ ❙❪ ❩ ➊ ➣↔↕ ➙➛ ➜ ➝ ➣ ➙ ➞ ➜ ↕ ➟ ➠ ➡ ➟ ➜ ➞ ➢ ➜ ➟ ➤ ➥➦ ↕ ➧ ➨ ➝ ➛ ➜ G ➦↕ ➩ ➦ ↕ ➫ ➟ ↕ ➡ ➞ ➭ ➯ - ➟ ➛ ➩ ➲ s ➳ ➥➦➥ ➵ ➜ ➟ ↕ ➩ ➸ ➟ ➙ ➥➟ ➡ ➟ ➜ ➞ ➺➻➼ ➽ st ➾ ➚ ➽ ➚➽ ➼ ➽ b ➽ t ➪ r ➶ ➹ u ➚ ➸ . ➘➴ st ➷➬ ➮ T ➱ ✃ ❐ ❒ ✃ RNA ❮❒ ❰➱ ❐ Ï❒ ❐ Ð Ñ Ò Ñ ❰ Ñ Ó ❮ ➱ Ô Õ Ñ Ó ÏÑ Ö Ñ × Ñ ❐ Ð ➱ Ø ➱ ✃ Ù ❒Ø Õ ❐ ÙÕ ✃ Ú ➱ ❐ Ð Õ Û ❒ Ø Õ ❐ Ð ❮ ❒ Ô ❒ Ü ❰ Ü Ð ❒ Ú RNA ÙÑ Ö Ð ➱ Ù Ý Ñ Ò Ñ ÙÑ ❐ Ñ Ú Ñ ❐ . P ➱ Ö ✃ ➱ ÚÔ Ñ ❐ Ð Ñ ❐ Ù ➱ Ö ✃ ❒ ❐ ❒ Ú➱ ❐ Ð ➱ ❐ Ñ❒ Ù ➱ ✃ ❐ Ü ❰Ü Ð ❒ Ý ➱ ❐ Ð ✃ ❰ Ü ❐ Ñ ❐ GATEWAY TM Ú ➱ Ú Õ Ò Ñ Ó ✃ Ñ ❐ Õ ❐ Ù Õ ✃ Ú ➱ ❐ Ð ✃ Ü ❐ ❮Ù Ö Õ ✃ ❮ ❒ Þ ➱ ✃ Ù Ü Ö RNA ❒ × Ñ ❐ Ð Ú ➱ Ú Ý Õ ❐ × Ñ❒ ❮➱ ✃ Õ ➱ ❐ Ý ➱ Ú ❒ Ï Õ Ò Ñ ❐ Õ ❐ ÙÕ ✃ Ú➱ ❐ Ð Ñ ❐ Ñ ❰❒❮❒ ❮ Ø Õ ❐ Ð ❮❒ Ð ➱ ❐ Ù Ñ Ö Ð ➱ Ù . T Õ ÛÕ Ñ ❐ Ý ➱ ❐ ➱ ❰ ❒ Ù❒ Ñ ❐ ❒ ❐ ❒ Ñ Ò Ñ ❰ Ñ Ó Ú ➱ ❐ Ð ✃ Ü ❐ ❮Ù Ö Õ ✃ ❮❒ RNA ❒ Ò Ñ Ö ❒ Ø Ö ÑÐ Ú ➱ ❐ 3’UTR Ð ➱ ❐ Ý ➱ ❐ × Ñ ❐ Ò ❒ H + -ATP Ñ ❮➱ Ú➱ ÚÔ Ö Ñ ❐ Ý ❰ Ñ❮ Ú Ñ Ò Ñ Ö ❒ ßà áâ ãä å æ â æ â áâ ç â ä è éêë ì æ L., 3’UTRM Ú Ý ÚÑ . V ➱ ✃ ÙÜ Ö RNA ❒ Ù ➱ ❰Ñ Ó Ô ➱ Ö Ó Ñ ❮❒ ❰ Ò ❒ ✃ Ü ❐ ❮Ù Ö Õ ✃ ❮❒ Ú➱ ❐ Ð Ð Õ ❐ Ñ ✃ Ñ ❐ Ù➱ ✃ ❐ Ü ❰ Ü Ð ❒ Ý ➱ ❐ Ð ✃ ❰ Ü ❐ Ñ ❐ GATEWAY TM Ò ❒ Ú Ñ ❐ Ñ Ø Ö Ñ Ð Ú ➱ ❐ 3’UTRM Ú Ý Ú Ñ Ò ❒Ð Õ ❐ Ñ ✃ Ñ ❐ ❮➱ Ô ÑÐ Ñ❒ ❮➱ ✃ Õ ➱ ❐ Ý ➱ Ú ❒ Ï Õ RNA Õ ÙÑ ❮ Ð Ñ ❐ Ò Ñ Ò ❮ RNA, Ý íî TR TM D-TOPO ï ❮➱ Ô Ñ Ð Ñ❒ à ð ä éñ òàë ä å é Ò Ñ ❐ Þ ➱ ✃ ÙÜ Ö Ý ó NDA ❮➱ Ô Ñ Ð Ñ ❒ ô àãä êð â ä ê å ð ò àë ä å é . RNA ❒ Ù➱ ❰ Ñ Ó Ò ❒ ❒ ❐ Ù Ö Ü Ò Õ ✃ ❮❒ ✃ Ñ ❐ ✃ ➱ Ù Ñ ❐ Ñ Ú Ñ ❐ ß . æ â á â ç â ä è é ê ë ì æ L. Ú ➱ ❰ Ñ ❰ Õ ❒ õ ö ä ì æ à÷ â ë ê à ð ã EHA101 Õ ❐ ÙÕ ✃ Ú ➱ ÚÝ ➱ ❰ Ñ ÛÑ Ö ❒ Ý ➱ Ö Ñ ❐ Ñ ❐ Ð ➱ ❐ ß æ ø æ â Ò Ñ ❰Ñ Ú Ò ➱Ù Ü ✃ ❮❒ Ø ❒ ✃ Ñ❮❒ ❮Ù Ö ➱❮ A ❰ . U Û ❒ Ù Ü ❰➱ Ö Ñ ❐ ❮ ❒ ÙÑ ❐ Ñ Ú Ñ ❐ Ù Ö Ñ ❐ ❮Ð ➱ ❐ ❒ ✃ Ù ➱ Ö Ó Ñ Ò ÑÝ Ï ➱ ✃ Ñ Ú Ñ ❐ A ❰ Ú ➱ ❐ Õ ❐ Û Õ ✃ ✃ Ñ ❐ Ô Ñ Ó ù Ñ Ý Ñ Ò Ñ ❰ Ñ Ö Õ ÙÑ ❐ Ó Ñ Ö Ñ × Ñ ❐ Ð Ú ➱ ❐ Ð Ñ ❐ Ò Õ ❐ Ð 3.2 Ú M A ❰ A ❰ C ❰ 3 .6H 2 O, Ù Ñ ❐ Ñ Ú Ñ ❐ Ù Ö Ñ ❐ ❮Ð ➱ ❐ ❒ ✃ Ú ➱ ❐ Ð Ñ ❰ Ñ Ú ❒ Ó Ñ ÚÔ ÑÙ Ñ ❐ Ý ➱ Ö Ù Õ Ú Ô Õ Ó Ñ ❐ Ù➱ Ö Õ ÙÑ ÚÑ Ý ➱ Ö Ù Õ Ú Ô Õ Ó Ñ ❐ Ñ ✃ Ñ Ö Ò Ñ ❐ Ò ÑÕ ❐ , ❮➱ Ò Ñ ❐ Ð ✃ Ñ ❐ ❐ Ü ❐ - Ù Ö Ñ ❐ ❮Ð ➱ ❐ ❒ ✃ Ù❒ Ò Ñ ✃ Ú ➱ ❐ Ð Ñ ❰Ñ Ú ❒ Ó Ñ ÚÔ Ñ ÙÑ ❐ . H Ñ ❰ ❒ ❐ ❒ Ú ➱ ❐ Õ ❐ Û Õ ✃ ✃ Ñ ❐ Ô Ñ Ó ù Ñ Ý ➱ ❐ Ð Ó Ñ Ú Ô Ñ ÙÑ ❐ ➱ ✃ ❮ Ý Ö ➱❮ ❒ Ð ➱ ❐ ß æ ø æ â Ò ➱ ❐ Ð Ñ ❐ RNA ❒ Ý Ñ Ò Ñ ÙÑ ❐ Ñ Ú Ñ ❐ ß . æ â áâ ç â ä è éêë ì æ L. Ú ➱ ❐ × ➱ Ô Ñ Ô ✃ Ñ ❐ ÙÑ ❐ Ñ Ú Ñ ❐ Ú ➱ ❐ Û Ñ Ò ❒ ❮➱ ❐ ❮❒ Ù❒Ø Ù ➱ Ö Ó Ñ Ò ÑÝ A ❰ . ➘➴ st ➷➬ ú t T Ó ➱ RNA ❮❒ ❰➱ ❐ Ï❒ ❐ Ð Ù➱ ÏÓ ❐ ❒ û Õ ➱ ❒❮ Ñ ❐ ➱Ø Ø ➱ ÏÙ❒ Þ ➱ Ù Ü Ü ❰ Ù Ü ➱ ü Ñ Ú ❒ ❐ ➱ Ù Ó ➱ Ô ❒Ü ❰ Ü Ð ❒ ÏÑ ❰ Ø Õ ❐ Ï Ù ❒Ü ❐ Ü Ø Ù Ó ➱ ÙÑ Ö Ð ➱ Ù Ú RNA ❒ ❐ Ý ❰ Ñ ❐ Ù ❮ . T Ó ➱ Ö ➱ Ï ➱ ❐ Ù Ò ➱ Þ ➱ ❰ Ü Ý Ú ➱ ❐ Ù Ü Ø GATEWAY TM Ï❰Ü ❐ ❒ ❐ Ð Ù➱ Ï Ó ❐ Ü ❰Ü Ð × Ú Ñ ✃ ➱❮ ❒Ù ➱ Ñ❮× Ù Ü ÏÜ ❐ ❮Ù Ö Õ ÏÙ Ù Ó ➱ RNA ❒ Þ ➱ ÏÙ Ü Ö ❮ ù ❒Ù Ó Ù Ö ❒ Ð Ð ➱ Ö ❮➱ û Õ ➱ ❐ Ï ➱ ❮ Ñ ❐ Ò ÙÜ Ñ ❐ Ñ ❰× ý ➱ Ù Ó ➱ Ø Õ ❐ Ï Ù ❒ Ü ❐ Ü Ø Ñ ÙÑ Ö Ð ➱ Ù Ð ➱ ❐ ➱ . T Ó ➱ Ü Ô Û ➱ ÏÙ❒ Þ ➱ Ü Ø Ù Ó ❒❮ Ö ➱ ❮➱Ñ Ö ÏÓ ❒ ❮ ÙÜ ÏÜ ❐ ❮Ù Ö Õ ÏÙ RNA ❒ ❒ ❐ Ï ❰Õ Ò ❒ ❐ Ð Ù Ó ➱ 3’UTR Ø Ö Ñ Ð Ú➱ ❐ Ù Ü Ø Ù Ó ➱ Ð ➱ ❐ ➱ ÏÜ Ò ❒ ❐ Ð Ý ❰Ñ❮ Ú Ñ Ú ➱ ÚÔ Ö Ñ ❐ ➱ H + -ATP Ñ ❮➱ Ø Ö Ü Ú ß à á â ãä å æ â æ â áâ ç â ä è é ê ëì æ L., 3’UTRM Ú Ý ÚÑ . RNA ❒ Þ ➱ ÏÙÜ Ö Ó Ñ Ò Ô ➱➱ ❐ ❮Õ Ï Ï ➱ ❮❮Ø Õ ❰❰× Ï Ü ❐ ❮Ù Ö Õ Ï Ù ➱ Ò Õ ❮❒ ❐ Ð GATEWAY TM Ï❰Ü ❐ ❒ ❐ Ð Ù ➱ ÏÓ ❐ Ü ❰Ü Ð × ù ❒Ù Ó Ù Ó ➱ 3’UTRM Ú Ý Ú Ñ ù Ñ❮ Õ ❮➱ Ò Ñ❮ Ò Ü Õ Ô ❰➱ - ❮Ù Ö Ñ ❐ Ò ➱ Ò RNA Ò ❮ RNA Ù Ö ❒Ð Ð ➱ Ö ❮➱ û Õ ➱ ❐ Ï ➱ , Ý í î TR TM D-TOPO ï Ñ❮ ➱ ❐ Ù Ö × Þ ➱ ÏÙÜ Ö , Ñ ❐ Ò Ý ó NDA Ý ❰ Ñ ❮ Ú ❒ Ò Ñ ❮ Ò ➱ ❮Ù❒ ❐ Ñ Ù❒ Ü ❐ Þ ➱ ÏÙÜ Ö . RNA ❒ Ó Ñ Ò Ô ➱ ➱ ❐ ❮Õ ÏÏ➱❮❮Ø Õ ❰ ❰ × ❒ ❐ Ù Ö Ü Ò Õ Ï➱ Ò ❒ ❐ Ù Ü ß . æ â á â ç â äè éêëì æ L. Ú ➱ Ò ❒ ÑÙ➱ Ò Ô × õ ö ä ì æ à÷ â ë ê à ð ã EHA101 ÙÜ Ñ ❐ Ñ ❰× ý ➱ Ù Ó ➱ Ø Õ ❐ ÏÙ❒ Ü ❐ Ü Ø ß æ ø æ â Ð ➱ ❐ ➱ ❒ ❐ Ù Ó ➱ Ò ➱ ÙÜ ü ❒Ø × ❒ ❐ Ð A ❰ ❮Ù Ö ➱❮❮ . T Ö Ñ ❐ ❮Ð ➱ ❐ ❒ Ï Ý ❰Ñ ❐ Ù ❮ Ù Ü ❰➱ Ö Ñ ❐ Ï➱ Ñ ❐ Ñ ❰× ý ➱ ❮ Ù Ü A ❰ ❮Ù Ö ➱ ❮❮ ❮ Ó Ü ù ➱ Ò Ù Ó Ñ Ù ❒ ❐ Ù Ó ➱ ❐ Õ Ù Ö ❒➱ ❐ Ù ❮Ü ❰ Õ Ù ❒Ü ❐ ❒ ❐ Ï❰Õ Ò ❒ ❐ Ð 3.2 Ú M A ❰ A ❰ C ❰ 3 .6H 2 O, Ù Ó ➱ Ù Ö Ñ ❐ ❮Ð ➱ ❐ ❒ Ï Ý ❰Ñ ❐ Ù❮ Õ ❐ Ò ➱ Ö ù ➱ ❐ Ù Ð Ö Ü ù Ù Ó ❮Õ Ý Ý Ö ➱❮❮ ❒Ü ❐ ➱❮Ý ➱ Ï❒Ñ ❰❰× Ö Ü Ü Ù❮ Ñ ❐ Ò ❰➱Ñ Þ ➱❮ , ù Ó ➱ Ö ➱ Ñ❮ ❐ Ü ❐ - Ù Ö Ñ ❐ ❮Ð ➱ ❐ ❒ Ï Ý ❰Ñ ❐ Ù ❮ Õ ❐ Ò ➱ Ö ù ➱ ❐ Ù Ð Ö Ü ù Ù Ó ❐ Ü Ö ÚÑ ❰ ❰ × . I Ù ❮ Ó Ü ù ➱ Ò Ù Ó ÑÙ ❮Õ Ý Ý Ö ➱❮❮❒ Ü ❐ Ü Ø ß æ ø æ â Ð ➱ ❐ ➱ ➱ ü Ý Ö ➱ ❮❮❒ Ü ❐ Ô × RNA ❒ ÙÜ ß . æ â áâ ç â äè éêëì æ L. Ï Ñ Õ ❮➱ Ò Ù Ó ➱ Ý ❰ Ñ ❐ Ù Ô ➱ Ï Ñ Ú ➱ ❮➱ ❐ ❮❒Ù ❒ Þ ➱ ÙÜ A ❰ . K þ ÿ ✁ ✂✄☎ : 3’UTRM Ú Ý ÚÑ , RNA ✆ ✝þ✞✟✁ ✂ , õ . ä ì æ à ÷ â ë ê à ð ã , A ✠ ☎ ✟ ✂ þ☎ ☎ . ✡☛ ☞✌✍ ✎✏✑ ✏✍ ☞ RNA ✒✓ ✔ ✕✖ ✗ ✕✖ ✕✓ ✘ ✕ RNA ✒ ✙✚ ✙✛ ✙✜ RNA ✢ ✙ ✓ ✣ ✤✕✓ ✣ ✣ ✙ ✓ ✣ ✣ ✥ RNA ✢ ✙ ✓ ✣ ✙✚ ✙ ✚ ✒ ✚ ✙✛ ✙ ✤ ✦ ✕ ✛ . A ✚ ✙✓ ✢ ✙ RNA ✒ ✤✕✓ ✢ ✕✧ ✙✧ ★ ✙✓ RNA ✢ ✙✓ ✣ ✙ ✚ ✙ ✚ ✒ ✚ ✙✛ ✙ ✤ ✦ ✕ ✛ ✚ ✙✩ ✙ ✔ ✚ ✒ ✒ ★ ✙ ✔ ✪ ✛ ✕ ✜ RNA ✒ ✥ ✓ ✔✥ ★ ✤ ✕✤ ✧ ✕✓ ✔ ✥ ★ RNA ✥ ✔✙✦ ✣ ✙✓ ✚ ✙ ✚ ✦ RNA. RNA ✥ ✔ ✙ ✦ ✣ ✙✓ ✚ ✙ ✚ ✒ ✩ ✪ ✔ ✪ ✓ ✣ ✪ ✛ ✕ ✜ ✕ ✓ ✫ ✒ ✤ ✬✭ ✮✯ ✰ ✚ ✒ ✦ ✒✔ ✪ ✩ ✛ ✙ ✦ ✤✙ ✤✕ ✓ ✱ ✙ ✚ ✒ ✗ ✖ ✙ ✣ ✤ ✕ ✓ ✚ ✦ RNA ✩ ✕✓ ✚ ✕★ ✧ ✕✖ ✥ ★ ✥ ✖ ✙ ✓ 21-26 ✓ ✥ ★ ✛ ✕ ✪ ✔✒ ✚ ✙ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙ ✓ ✥ ✱ ✥ ✓ ✣ 3’ ✲ ✳ ✯ ✰ ✴ ✵ ✶ ✷ ✸ ✚ ✥ ✙ ✓ ✥ ★ ✛ ✕ ✪ ✔ ✒ ✚ ✙ B ✕✖ ✓ ✦ ✔✕ ✒ ✓ ✯ ✹ ✵ ✺ . 2001; V ✙ ✓ ✘ ✕ V ✪ ✥ ✘ ✜ ✕ ✖ ✕✔ 2001; W ✙ ✔✕✖ ✜ ✪ ✥ ✦ ✕ ✯ ✹ ✵ ✺ . 2001; H ✙✓ ✓ ✪ ✓ 2002; P ✒ ✘ ★ ✗ ✪ ✖ ✚ C ✪ ✣ ✪ ✓ ✒ 2003. S ✙ ✛ ✙ ✜ ✦ ✙✔ ✥ ✚ ✙ ✖ ✒ ★ ✕✚ ✥ ✙ ✥ ✔ ✙ ✦ ✚ ✙ ✖ ✒ ✤✙✦ ✒ ✓ ✣ - ✤✙✦ ✒✓ ✣ ✗ ✖ ✙ ✣ ✤ ✕ ✓ , ✢ ✙ ✓ ✣ ✚ ✒ ★ ✕✔ ✙ ✜ ✥ ✒ ✦ ✕✧ ✙✣ ✙✒ ✥ ✔✙✦ ✩ ✕✤✙✓ ✚ ✥ ✷ ✻ ✭ ✼ ✯ ✸ ✹✰ ✵ ✶ ✼ , ✧ ✕ ✖ ✣ ✙✧ ✥ ✓ ✣ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙ ✓ RISC ✽✾ ✿ - ✭ ✶ ✼ ✻ ✮✯ ✼ ✸ ✭ ✺✯ ✶ ✮ ✭ ✶ ✷ ✮ ✲ ❀❁ ✺ ✯ ❂ ✚ ✙ ✓ ✧ ✕✖ ✙✦ ✪ ✦ ✒ ✙ ✦ ✒ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙ ✓ ✤ RNA ✔ ✙✖ ✣ ✕✔ H ✙ ✤✤ ✪ ✓ ✚ ✯ ✹ ✵ ✺ . 2000, ✚ ✙ ✓ ★ ✕✤✥ ✚ ✒✙✓ ✤ ✕ ✓ ✣ ✙★ ✔✒❃ ✙✦ ✒ ✗ ✥ ✓ ✣ ✦ ✒ RISC ✥ ✓ ✔✥ ★ ✤✕ ✓ ✚ ✕✣ ✖ ✙ ✚ ✙✦ ✒ ✤ RNA ✔✙✖ ✣ ✕✔ ✚ ✙ ✓ ✤✕ ✓ ✕★ ✙✓ ✕★ ✦ ✩ ✖ ✕✦ ✒ ✣ ✕ ✓ ✩ ✙ ✚ ✙ ✧ ✕ ✖ ✧ ✙✣ ✙✒ ✛ ✕❃ ✕✛ M ✙ ✔ ✫ ★ ✕ ✯ ✹ ✵ ✺ . 2001; W ✙✔ ✕ ✖ ✜ ✪ ✥ ✦ ✕ ✯ ✹ ✵ ✺ . 2001; H ✙✓ ✓ ✪ ✓ 2002; P ✛ ✙✦ ✔✕✖ ★ 2002; M ✕ ✒✦ ✔✕✖ T ✥ ✦✘✜ ✛ 2004. P ✖ ✪ ✦ ✕ ✦ RNA ✒ ✤✕✓ ✣ ✜ ✙ ✦ ✒✛★ ✙✓ 2 ✔✒ ✩ ✕ ✤ ✪ ✛ ✕★ ✥ ✛ RNA ★ ✕✘ ✒✛ , ✢ ✙✒ ✔✥ ✤ ✒ ✘✖ ✪ ❄ NA ✤ ✒ RNA ✚ ✙✓ ✦ ✤ ✙ ✛ ✛ ✒ ✓ ✔ ✕ ✖ ✗ ✕ ✖ ✒✓ ✣ RNA ✦ ✒ RNA. RNA ✤✕✖ ✥ ✩ ✙★ ✙ ✓ ✩ ✖ ✪ ✚ ✥ ★ ✛ ✙✓ ✣ ✦ ✥ ✓ ✣ ✚ ✙✖ ✒ ✣ ✕✓ ✢ ✙✓ ✣ ✧ ✙✣ ✒✙✓ ✦ ✩ ✕✦ ✒✗ ✒★ ✓ ✢ ✙ ✚ ✙ ✩ ✙ ✔ ✚ ✒✒★ ✙ ✔ ✪ ✛ ✕ ✜ RNA ★ ✕✘ ✒✛ ✔✕✖ ✦ ✕ ✧ ✥ ✔ ✦ ✕ ✜ ✒✓ ✣ ✣ ✙ ✩ ✙✚ ✙ ✙★ ✜ ✒ ✖ ✓ ✢ ✙ ✚ ✙ ✩ ✙ ✔ ✤✕ ✓ ✒✓ ✣ ★ ✙✔★ ✙✓ ✙ ✔✙ ✥ ✤✕ ✓ ✥ ✖ ✥ ✓ ★ ✙ ✓ ✙★ ✔ ✒❃ ✒ ✔✙✦ ✣ ✕ ✓ ✔✕✖ ✦ ✕✧ ✥ ✔ . A ★ ✔ ✒ ❃ ✒✔ ✙✦ ✣ ✕✓ ✢ ✙✓ ✣ ✤ ✕ ✓ ✒ ✓ ✣ ★ ✙ ✔ ✚ ✒ ✔✙✓ ✚ ✙ ✒ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙ ✓ ✤✕✓ ✒ ✓ ✣ ★ ✙ ✔ ✓ ✢ ✙ ✔✖ ✙✓ ✦★ ✖ ✒ ✩ ✦ ✒ ✣ ✕ ✓ ❅ ✦ ✥ ✙ ✔ ✥ ✗ ✕✓ ✪ ✤✕ ✓ ✙ ✢ ✙ ✓ ✣ ✚ ✒✦ ✕✧ ✥ ✔ ✙ ★ ✔ ✒ ❃ ✙ ✦ ✒ RNA, ✢ ✙ ✓ ✣ ✚ ✙✩ ✙✔ ✔ ✕ ✖ ✱ ✙ ✚ ✒ ✙✩ ✙ ✧ ✒ ✛ ✙ ✦ ✕ ★ ✥ ✕ ✓ RNA ★ ✕✘ ✒ ✛ ✦ ✒ RNA ✚ ✙✓ ✤✒ RNA ★ ✪ ✤ ✩ ✛ ✕✤ ✕ ✓ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙ ✓ ✧ ✙ ✣ ✒ ✙ ✓ ✩ ✖ ✪ ✤ ✪ ✔ ✕ ✖ ✣ ✕✓ C ✜ ✕ ✘ ★ , 2007; L ✒ ✯ ✹ ✵ ✺ . 2006. A ★ ✔ ✒ ❃ ✒✔ ✙ ✦ ✣ ✕✓ ✤ ✕ ✓ ✥ ✖ ✥ ✓ ✙ ✩ ✙ ✧ ✒ ✛ ✙ RNA ★ ✕✘ ✒ ✛ ★ ✪ ✤✩ ✛ ✕✤✕✓ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙✓ ✧ ✙✣ ✒✙✓ ✣ ✕ ✓ ✢ ✙✓ ✣ ✦ ✩ ✕✦ ✒✗ ✒★ ✙✔ ✙✥ ✔ ✕ ✖ ★ ✪ ✓ ✦ ✕✖ ❃ ✙✦ ✒ M ✒ ★ ✒ ✯ ✹ ✵ ✺ . 2005. ✤ RNA ✢ ✙✓ ✣ ✚ ✒ ✔ ✖ ✙ ✓ ✦★ ✖ ✒✩ ✦ ✒★ ✙ ✓ ✪ ✛ ✕ ✜ ✣ ✕✓ ✔✕✖ ✦ ✕ ✧ ✥ ✔ ✤✕ ✤ ✧ ✕✓ ✔✥ ★ ✥ ✔ ✙ ✦ ✣ ✙ ✓ ✚ ✙ ✚ ✕✓ ✣ ✙✓ RNA ★ ✕ ✘ ✒✛ ✢ ✙✓ ✣ ✔✕✛ ✙✜ ✧ ✕✖ ✣ ✙✧ ✥ ✓ ✣ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙✓ RISC ✽ ✾ ✿ - ✭ ✶ ✼ ✻ ✮✯ ✼ ✸ ✭ ✺ ✯ ✶ ✮✭ ✶ ✷ ✮ ✲ ❀❁ ✺ ✯ ❂ ✚ ✙ ✓ ✦ ✕✛ ✙✓ ✱ ✥ ✔✓ ✢ ✙ ✿ ✰ ✷ ✲ ✶ ✵ ✻ ✹ ✯ , ★ ✪ ✤✩ ✪ ✓ ✕✓ ✙★ ✔✒ ✗ ✚ ✙✖ ✒ RISC, ✚ ✙✩ ✙✔ ✤✕ ✤ ✪ ✔ ✪ ✓ ✣ ✤ RNA ✦ ✕ ✜ ✒ ✓ ✣ ✣ ✙ ✣ ✕✓ ✤✕ ✓ ✱ ✙✚ ✒ ✔ ✒ ✚ ✙ ★ ✗ ✥ ✓ ✣ ✦ ✒ ✪ ✓ ✙ ✛ A ✜ ✛ ❆ ✥ ✒ ✦ ✔ 2002. B ✕ ✖ ✚ ✙ ✦ ✙✖ ★ ✙✓ ✤✕ ★ ✙ ✓ ✒✦ ✤✕ ✦ ✕✛ ✥ ✛ ✕ ✖ ✓ ✢ ✙ , ✩ ✕ ✤ ✧ ✕ ✓ ✔ ✥ ★ ✙ ✓ ✚ ✦ RNA ✚ ✙ ✩ ✙ ✔ ✔ ✕ ✖ ✱ ✙ ✚ ✒ ✤✕ ✛ ✙ ✛ ✥ ✒ ✚ ✥ ✙ ✘ ✙ ✖ ✙ , ✢ ✙✒ ✔✥ ✦ ✕ ✘ ✙ ✖ ✙ ✕★ ✦ ✪ ✣ ✕✓ ✪ ✥ ✦ ✚ ✙✓ ✕✓ ✚ ✪ ✣ ✕✓ ✪ ✥ ✦ B ✙✣ ✙ ✦ ✖ ✙ P ✖ ✒✛ ✛ ✒ ✤✙ ✓ 2004. S ✕ ✘ ✙ ✖ ✙ ✕ ★ ✦ ✪ ✣ ✕ ✓ ✪ ✥ ✦ , ✚ ✦ RNA ✢ ✙✓ ✣ ✧ ✕✖ ✙ ✦ ✙✛ ✚ ✙ ✖ ✒ ✒ ✓ ✗ ✕★ ✦ ✒ ❃ ✒✖ ✥ ✦ ✚ ✕ ✓ ✣ ✙✓ ✦ ✕✧ ✥ ✙✜ ✣ ✕✓ ✪ ✤ RNA ✙ ✔✙ ✥ ✚ ✙✖ ✒ ✤✙✓ ✒✩ ✥ ✛ ✙✦ ✒ ✛ ✙ ✧ ✪ ✖ ✙ ✔ ✪ ✖ ✒✥ ✤ ✢ ✙✓ ✣ ✦ ✕✘ ✙✖ ✙ ✛ ✙✓ ✣ ✦ ✥ ✓ ✣ ✤✙✦ ✥ ★ ★ ✕ ✚ ✙✛ ✙ ✤ ✦ ✒ ✔ ✪ ✩ ✛ ✙✦ ✤✙ ✚ ✙ ✓ ✚ ✒✩ ✪ ✔ ✪ ✓ ✣ ✤ ✕ ✓ ✱ ✙✚ ✒ ✗ ✖ ✙ ✣ ✤✕✓ ★ ✕✘ ✒ ✛ ✪ ✛ ✕ ✜ ✕ ✓ ✫ ✒✤ ✬✭ ✮✯ ✰ . S ✕✘ ✙✖ ✙ ❇ ❈ ❉ ❊ ❋ ❇ ❈ ❊ ● ❍ , ❉ ❍ RNA ■ ❇ ❏ ❑❍ ❑▲ ❉ ❑ ❏ ▼ ❉ ❑▲ ❑◆ ❍ ❇ ▲ ❍❇ ■ ❑❋ ❑ ▼ ❖ ❏ ❇ - ◆ ▼ P ❏ ❊ ◗ NA ❘ ❑❈ ❋ ❉ ▼ ❇ ❙ ❍❖ ❏ ❇❍ ▼ ❙ ❑❈ ❉ ❑ ❏ ▼ ❋ ❇ ❈ ❖ ❇ ❈ ❘ ❑ ❈ ❉ ▼ RNA ❉ ❑▲ ❑ ◆ ❋ ❇ ❈ ❊ ◆ . T ❏ ❑ ❈ ❍ ❙ ❏ ▼ ❖ ❉ ❑ ❏ ▼ ❋ ❇ ❈ ❚❇ ❏ ❍❇ ■ ● ❚ ◆ ❇ ◆ ■ ❇ ❈ ❚ ● ❙ ❍ ❚❏ ● ❙ ❚ ● ❏ ❯❇ ❖ ▼ ❚ ❏ ❑ ◆■ ● ❚ ❱❲ ❳❨ - ❩❬ ❬ ❭ ❘ ❑❈ ❋ ❙ ❇ ◆ ● ❉ ▼ ❑ ❈ ❉ ▼ ❙ ❇ ▲● ❑ ❏ ❙ ❑ ❈ ❙ ❇ ❍▼ ❚❊ ❖ ▲ ❑ ❍ ◆ ❑ ● ❈ ❚ ● ❙ ❉ ▼ ❖ ❊ ❚❊ ❈ ❋ ❊ ▲ ❇ ❪ ❫❴❵ ❳ ❛ . T ❇ ❙ ❈ ▼ ❙ RNA ▼ ❑❉ ❑ ▲❑ ❪ ❍❇ ■ ● ❑ ❪ P ❑❏ ❑ ❘ ❑❈ ❋ ❇ ❜ ❇ ❙ ❚ ▼ ❜ ● ❈ ❚ ● ❙ ◆ ❇ ❈ ❋ ● ❯ ▼ ❜ ● ❈ ❋ ❍ ▼ ■ ▼ ❊ ▲ ❊ ❋ ▼ ◆ RNA ❚❑ ❏ ❋ ❇ ❚ ❖ ❑❉ ❑ ❚ ❑❈ ❑◆ ❑❈ . P ❇ ❏ ❙ ❇ ◆■ ❑ ❈ ❋ ❑ ❈ ❚ ❇ ❏ ❙ ▼ ❈ ▼ ◆ ❇ ❈ ❋ ❇ ❈ ❑ ▼ ❝ ❇ ❙ ❚ ❊ ❏ RNA ▼ , ❘ ❑ ❈ ❋ ◆ ❇ ❈ ❋ ❋ ● ❈ ❑ ❙ ❑❈ ❖ ❏ ❊ ◆❊ ❚❇ ❏ ❙ ❊ ❈ ❍ ❚ ▼ ❚● ❚ ▼ ❜ ❉ ❑ ❈ ❚❇ ❙ ❈ ❊ ▲ ❊ ❋ ▼ ❚ ❇ ❙ ❈ ▼ ❙ ❖ ❇ ❈ ❋ ❙ ▲ ❊ ❈ ❑❈ GATEWAY TM , ◆ ❇ ◆ ● ❉ ❑ ❪ ❙ ❑ ❈ ● ❈ ❚ ● ❙ ◆ ❇ ❈ ❋ ❙ ❊ ❈ ❍ ❚ ❏ ● ❙ ❍▼ ❝ ❇ ❙ ❚❊ ❏ RNA ▼ ❘ ❑ ❈ ❋ ◆ ❇ ◆❖ ● ❈ ❘ ❑▼ ❍❇ ❙ ● ❇ ❈ ❖ ❇ ◆ ▼ P● ❉ ❍ RNA ❉ ❑ ❈ ◆ ❇ ◆ ● ❉ ❑ ❪ ❙ ❑❈ ❖ ● ▲❑ ● ❈ ❚ ● ❙ ◆ ❇ ❈ ❋ ❑ ❈ ❑ ▲ ▼ ❍▼ ❍ ❜ ● ❈ ❋ ❍▼ ❋ ❇ ❈ ❚ ❑ ❏ ❋ ❇ ❚ . S ❑ ▲❑ ❪ ❍ ❑ ❚ ● ❝ ❇ ❙ ❚❊ ❏ RNA ▼ ❘ ❑❈ ❋ ❉ ❑ ❖ ❑❚ ❉ ▼ ❋ ● ❈ ❑ ❙ ❑❈ ● ❈ ❚● ❙ ◆ ❇ ◆❖ ❇ ▲❑❯ ❑ ❏ ▼ ❜ ● ❈ ❋ ❍▼ ❋ ❇ ❈ ❚❑ ❏ ❋ ❇ ❚ ❑❉ ❑ ▲❑ ❪ ❝ ❇ ❙ ❚❊ ❏ ❖ ❞ NDA ❘ ❑❈ ❋ ❉ ▼ ❙ ❇ ◆■ ❑ ❈ ❋ ❙ ❑❈ ❊ ▲ ❇ ❪ M ▼ ❙ ▼ S ❪ ▼ ◆❑ ◆ ❊ ❚ ❊ 2004. V ❇ ❙ ❚❊ ❏ ▼ ❈ ▼ ◆ ❇ ❈ ❋ ❋ ● ❈ ❑ ❙ ❑❈ ❖ ❏ ❊ ◆ ❊ ❚ ❇ ❏ ❡ ❢ ❴❣ ❡ ❴ ❲ ❴❤ ✐ ❉ ❑ ❏ ▼ ❯ ❑ ❋ ● ❈ ❋ ❘ ❑❈ ❋ ◆ ❇ ❈ ❋ ❊ ❈ ❚❏ ❊ ▲ ❇ ❙ ❍❖ ❏ ❇ ❍▼ ◆ RNA ■ ❇ ❏ ● ▲❑ ❈ ❋ ❚ ❇ ❏ ■ ❑▲▼ ❙ ❉ ❑ ❏ ▼ ❍❇ ❙ ● ❇ ❈ ❋ ❇ ❈ ❚❑ ❏ ❋ ❇ ❚ . O ❏ ▼ ❇ ❈ ❚ ❑ ❍▼ ◆ RNA ■ ❇ ❏ ● ▲ ❑❈ ❋ ❚ ❇ ❏ ■ ❑ ▲ ▼ ❙ ◆ ❇ ❏ ● ❖ ❑ ❙ ❑ ❈ ❖ ❇ ◆ ▼ P● ❖ ❇ ◆■ ❇ ❈ ❚● ❙ ❑❈ ❍▼ RNA. A ❖ ▲▼ ❙ ❑❍▼ ❝ ❇ ❙ ❚ ❊ ❏ ▼ ❈ ▼ ❉ ❇ ❈ ❋ ❑ ❈ ❋ ❇ ❈ ❖ ❇ ❈ ❘ ❑ ❈ ❉ ▼ ❥ ❛ ❳❳ ❤ ❦ ❩ ❡ ❬ ❛ ❳ ❱ ❵ ❳ ❤ ❲ ❭ ❛ ❬ ❲ ❳ ❴❤ GFP ❉ ❑❈ ❭ ❧ ♠❲❬ ❳ ❤ ❳ ♥ ❳❱♦ ❲ ❡ ❛ ♦ ❱ ❳ PDS ❉ ❑❖ ❑❚ ◆ ❇ ❈ ❇ ❙ ❑❈ ❇ ❙ ❍❖ ❏ ❇❍ ▼ ❙ ❇ ❉ ● ❑ ❋ ❇ ❈ ❚ ❇ ❏ ❍❇ ■ ● ❚ ❖ ❑❉ ❑ ❚❑ ❈ ❑ ◆❑ ❈ ❖ ❑ ❉ ▼ M ▼ ❙ ▼ ❳ ❲ ♦ ❩ . 2005. M ▼ ❙ ▼ ❳❲ ♦ ❩ . 2005 ❯ ● ❋ ❑ ◆ ❇ ❈ ❋ ❋ ❑■ ● ❈ ❋ ❙ ❑❈ ❍ ❇ ❙ ● ❇ ❈ ● ❈ ▼ ❙ ■ ❇ ❏ ● ▲ ❑❈ ❋ ❚ ❇ ❏ ■ ❑ ▲ ▼ ❙ ❉ ❑❏ ▼ 3’UTR ❡ ❤ ❲ ❛ ♦ ❤ ❱ ❩ ♦ ❲ ❳ ♥ ❛ ❳ ❥ ❴ ❬ ❤ ❘ ❑ ❈ ❋ ❉ ▼ ❖ ❇ ❏ ❊ ▲ ❇ ❪ ❉ ❑ ❏ ▼ ❜ ❑◆ ▼ ▲ ▼ ❋ ❇ ❈ O ❍ R ❑ P ❖ ❑ ❉ ▼ ❉ ❇ ❈ ❋ ❑ ❈ ❖ ❏ ❊ ◆ ❊ ❚ ❊ ❏ ❙ ● ❑❚ ❉ ❑❈ ❍ ❚❑■ ▼ ▲ ▲ ❑▲● ❉ ▼▼ ❈ ❚❏ ❊ ❉ ● ❙ ❍▼ ❙ ❑ ❈ ❙ ❇ ❉ ❑▲ ❑◆ ❖ ❑ ❉ ▼ . M ❑❍▼ ❈ ❋ - ◆ ❑ ❍▼ ❈ ❋ ❉ ❑ ❏ ▼ ❍❇ ◆ ■ ▼ ▲❑ ❈ ❑❈ ❋ ❋ ❊ ❚❑ ❜ ❑◆▼ ▲▼ ❋ ❇ ❈ O ❍ R ❑P ❇ ❙ ❍❖ ❏ ❇ ❍▼ ❈ ❘ ❑ ❉ ▼ ❚ ❇ ❙ ❑❈ ❊ ▲ ❇ ❪ ❙ ❊ ❈ ❍ ❚❏ ● ❙ ❍▼ ■ ❇ ❏ ● ▲ ❑❈ ❋ ❚ ❇ ❏ ■ ❑ ▲ ▼ ❙ ❚ ❇ ❏ ❍❇ ■ ● ❚ . K ❊ ❈ ❍ ❚ ❏ ● ❙ ❍▼ ■ ❇ ❏ ● ▲❑ ❈ ❋ ❚ ❇ ❏ ■ ❑ ▲ ▼ ❙ ◆ ❇ ❈ ❋ ❋ ● ❈ ❑❙ ❑ ❈ ❋ ❑■ ● ❈ ❋ ❑❈ ❉ ❑ ❏ ▼ ■ ❇ ■ ❇ ❏ ❑ ❖ ❑ 3’UTR ◆ ❇ ❈ ● ❈ ❯ ● ❙ ❙ ❑❈ ❚▼ ❋ ❑ ❑❈ ❋ ❋ ❊ ❚❑ ❜ ❑ ◆ ▼ ▲▼ ❋ ❇ ❈ O ❍ R ❑ P ◆ ❇ ❈ ❋ ❑▲ ❑◆▼ ❚ ❇ ❙ ❑ ❈ ❑❈ . S ❇ ▲ ❑❈ ❯● ❚ ❈ ❘ ❑ , ❉ ❇ ❈ ❋ ❑❈ ◆ ❇ ❈ ❋ ❋ ● ❈ ❑ ❙ ❑❈ ❉ ❑ ❇ ❏ ❑ ❪ ❘ ❑ ❈ ❋ ❚❇ ❏ ❙ ❊ ❈ ❍❇ ❏ ❝ ❑❍▼ ❚ ▼ ❈ ❋ ❋ ▼ ❉ ❑ ❏ ▼ ❜ ❑◆ ▼ ▲ ▼ ❋ ❇ ❈ O ❍ R ❑P , M ▼ ❙ ▼ ❳❲ ♦ ❩ . 2005 ❯ ● ❋ ❑ ■ ❇ ❏ ❪ ❑❍▼ ▲ ◆ ❇ ❈ ❇ ❙ ❑ ❈ ❇ ❙ ❍❖ ❏ ❇ ❍▼ ❍ ❇ ◆ ● ❑ ❑❈ ❋ ❋ ❊ ❚❑ ❜ ❑ ◆ ▼ ▲▼ ❋ ❇ ❈ O ❍ R ❑P ❉ ❇ ❈ ❋ ❑❈ ❇ ❜ ▼ ❍▼❇ ❈ ❍▼ ❘ ❑ ❈ ❋ ■ ❇ ❏ ■ ❇ ❉ ❑ - ■ ❇❉ ❑ . H ❑ ❍▼ ▲ ❚ ❇ ❏ ❍❇ ■ ● ❚ ◆ ❇ ❈ ● ❈ ❯ ● ❙ ❙ ❑ ❈ ■ ❑ ❪ ♣ ❑ RNA ▼ ◆❇ ❏ ● ❖ ❑❙ ❑❈ ◆ ❇ ❚ ❊ ❉ ❑ ❘ ❑ ❈ ❋ ■ ❇ ❏ ◆❑ ❈ ❜ ❑❑ ❚ ● ❈ ❚● ❙ ◆ ❇ ❈ ❋ ❑❈ ❑ ▲ ▼❍ ▼❍ ❜ ● ❈ ❋ ❍▼ ❜ ❑◆ ▼ ▲▼ ❋ ❇ ❈ ❖ ❑ ❉ ❑ ❖ ❑❉ ▼ ❉ ❑ ❈ ❚❑ ❈ ❑ ◆❑❈ ▲❑▼ ❈ . S ❑ ▲❑ ❪ ❍ ❑ ❚ ● ❋ ❇ ❈ ❘ ❑ ❈ ❋ ❉ ▼ ❉ ● ❋ ❑ ❚ ❇ ❏ ▲▼ ■ ❑ ❚ ❉ ❑▲ ❑◆ ❚ ❊ ▲ ❇ ❏ ❑ ❈ ❍▼ ❚ ❑❈ ❑◆❑ ❈ ❚ ❇ ❏ ❪ ❑❉ ❑❖ ❙ ❊ ❈ ❉ ▼❍▼ ❑ ❍ ❑ ◆ ❉ ❑❈ ❑ ▲● ◆ ▼ ❈ ▼● ◆ ❚▼ ❈ ❋ ❋ ▼ ❑ ❉ ❑ ▲❑ ❪ ❋ ❇ ❈ ❖ ❇ ❈ ❘ ❑❈ ❉ ▼ H + -ATP ❑ ❍❇ ◆ ❇ ◆■ ❏ ❑❈ ❖ ▲ ❑ ❍ ◆❑ A ❈ ♣ ❑ ❏ , 1999; A ❪ ❈ ❳❲ ♦ ❩ ., 2004. G ❇ ❈ ▼ ❈ ▼ ■ ❇ ❏ ❖ ❇ ❏ ❑ ❈ ❑ ❈ ◆ ❇ ◆ ❊ ◆ ❖ ❑ ❖ ❏ ❊ ❚❊ ❈ ❙ ❇ ▲ ● ❑ ❏ ❍❇ ▲ ❍❇ ❪ ▼ ❈ ❋ ❋ ❑ ❉ ❑❖ ❑ ❚ ◆ ❇ ◆ ❖ ❇ ❏ ❚❑ ❪ ❑ ❈ ❙ ❑❈ ❖ q ❍▼ ❚❊ ❖ ▲ ❑ ❍ ◆ ❑ ❍❇ ▲ , ❘ ❑ ▼ ❚● ❍❇ ❙ ▼ ❚ ❑ ❏ 7.5 Y r s t ✉ ✈ ✇ ① ② . 1998, ③ ④ ⑤ ⑥ ③ ⑦t ⑧ ③ ③ ⑨ s ⑩⑤ t ⑤ s ⑩ ⑥ ❶ ⑥ ③ ❷ A ⑨ 3+ , ⑧ ③ t ✉ ⑩ ❶ ❸ s ❹ ③ ④ ③t ⑥ ❶t ⑦ s ④ A ⑨ ⑧ ③ t ✉ ❹ ③ ⑨ ⑤t ✉ ⑦ r ④ ❷ ⑤ ④ ❺ ⑦ ⑤ ❻ ③ ④ ❻ ③ ❹ ③ ⑦ ⑩③ ❷s ④ ④ ❶ ❻ ③ ⑨③ ⑩ ❷⑤⑦ r ❹ ⑨ ③ ❷ ⑩③ ④ ③ ❸ ❶ t ③ ❷ ⑤⑦ r ❹ ⑨ ③ ❷ ⑩③ ⑩❶⑩ ❹ s t ⑧ ③ ⑤ ❹ ❼ t ❶⑦ ❸ ③ ⑨ ❻ ③ t A ⑨ ❽ ③ t ⑧ ③ ❻ ③ ❹ ③ ⑦ ⑨③ ❸ s ⑦ ❹ ③ ❻ ③ ❷s ③ ❷ ③t ③ ③ ❷ ③⑩ . ❾ DNA ❻ ③ ❸ ⑤ H + -ATP ③ ❷ ❶ ⑩ ❶⑩ ⑥ ❸ ③t ❹ ⑨③ ❷ ⑩③ ❻ ③ ❸ ⑤ ❿ ✈②① ➀ ✇ ➁ ➂ ① ➂ ① ②① ➃ ① ✇ ➄ ➅➆ ➇➈ ➂ L., ❿➂ ➉ ➂ ① , ❻ ③t 3’UTR ❻ ③ ❸ ⑤ ✉ ❶ t ⑦❶ ❸ ❷ ❶ ⑥ s ⑦ ⑦❶ ⑨③ ❽ ⑥ ❶ ❸ ❽ ③ ❷ ⑤ ⑨ ❻ ⑤ ⑤ ❷ r ⑨ ③ ❷ ⑤ ❻ ③ ❸ ⑤ ❹ ❶ t ❶ ⑨⑤ ⑦⑤③ t ❷ ❶ ⑥ ❶ ⑨ s ⑩t ⑧ ③ . P ③ ❻ ③ ❹ ❶ ❸ ❾r ⑥ ③ ③ t ⑤t ⑤ , ④ ③⑩⑤ ⑩❶t ✉ s ➊ ⑤ ❹ ❶ ❸ ③ t ③ t ✉ ❶t ❹ ❶ t ⑧ ③t ❻ ⑤ H + -ATP ③ ❷ ❶ ⑩❶ ⑩ ⑥ ❸ ③ t ❹ ⑨③ ❷ ⑩③ ❻ ③ ⑨③ ⑩ ⑦ r ⑨❶ ❸ ③ t ❷ ⑤t ⑧ ③ ⑦ ❶ ❸ ❽ ③ ❻ ③❹ ❾❶ ④ ③⑩ ③t A ⑨ . D ③⑨ ③⑩ ❹ ❶ t ✉ s ➊ ⑤ ③ t ⑤ t ⑤ , ④ ③⑩ ⑤ ⑩❶t ✉ ④ r ❷ ⑦ ❸ s ④ ❷ ⑤ RNA ⑤ ⑩ ❶t ✉ ✉ s t ③ ④ ③ t ➋ ❶ ④ ⑦ r ❸ ❹ ➌ NDA ❻ ③ t ❷❶ ④ s ❶t 3’UTR ❻ ③ ❸ ⑤ ✉ ❶t ❹ ❶ t ⑧ ③ t ❻ ⑤ H + -ATP ③ ❷❶ ⑩ ❶⑩ ⑥ ❸ ③t ❹ ⑨ ③ ❷ ⑩ ③ ❻ ③ ❸ ⑤ ❿ . ➂ ① ②① ➃ ① ✇ ➄ ➅➆ ➇ ➈ ➂ L. ❷ ❶ ⑥ ③ ✉ ③ ⑤ ❷ ❶ ④ s ❶t ⑥ ❶ ❸ s ⑨ ③t ✉ ⑦ ❶ ❸ ⑥ ③⑨ ⑤ ④ . T ③ t ③ ⑩③t ❿ . ➂ ① ②① ➃ ① ✇ ➄ ➅➆ ➇➈ ➂ ❻ ⑤⑦ ❸ ③t ❷ ➍ r ❸ ⑩ ③ ❷ ⑤ ❻ ❶ t ✉ ③ t ➋ ❶ ④ ⑦ r ❸ ❽ ③ ❷⑤⑨ ④ r t ❷ ⑦ ❸ s ④ ❷ ⑤ ⑩❶ ⑨③ ⑨ s ⑤ ➎➏ ➅➁ ➃ ① ➇ ✇ ✈ ➅➆ ➈ ➂ ✇ ➈ ➂ ✈➐① ➇ ➆ ✈➑ ➀ EHA101. T ③t ③⑩③ t ⑦ ❸ ③t ❷ ➍ r ❸ ⑩ ③t ❷ ❶⑨ ③t ➊ s ⑦ t ⑧ ③ ❻ ⑤ s ➊ ⑤ ❹ ③ ❻ ③ ⑩❶ ❻ ⑤③ ⑧ ③ t ✉ ⑩❶ t ✉ ③t ❻ s t ✉ A ⑨ . B ⑤ ⑨③ ⑩③t ③ H + -ATP ③ ❷ ❶ ⑩❶⑩ ⑥ ❸ ③ t ❹ ⑨③ ❷ ⑩③ ⑥ ❶ ❸ ❹ ❶ ❸ ③t ❻ ③ ⑨③⑩ ⑦ r ⑨ ❶ ❸ ③t ❷ ⑤ ❿ . ➂ ① ② ① ➃ ① ✇ ➄ ➅➆ ➇ ➈ ➂ L. ⑦ ❶ ❸ ❽ ③ ❻ ③❹ ❾ ❶ ④ ③ ⑩③t A ⑨ , ⑩③ ④ ③ ✉ ③t ✉ ✉ s ③ t ❶ ④ ❷ ❹ ❸ ❶ ❷⑤ ✉ ❶t ⑤t ⑤ ⑩❶ ⑨③⑨ s ⑤ RNA ⑤ ⑩❶ t ⑧ ❶ ⑥ ③ ⑥ ④ ③ t ⑦③ t ③ ⑩③ t ⑦ ❸ ③ t ❷ ✉ ❶ t ⑤ ④ ⑧ ③ t ✉ ❻ ⑤ ❹ ❶ ❸ r ⑨ ❶❽ ③ ❻ ③⑨ ③ ❽ ❷ ❶ t ❷⑤⑦⑤ ➍ ⑦❶ ❸ ❽ ③ ❻ ③❹ ❾ ❶ ④ ③⑩③ t A ⑨ . ➒ ➓ ➔➓ → ➣ ➓ → ↔↕ t ➙ ➣↕ ➒ ➓ ➔➓ → B ③❽ ③t ⑦ ③t ③⑩ ③t ⑧ ③ t ✉ ❻ ⑤ ✉ s t ③ ④ ③t ③ ❻ ③ ⑨③ ❽ ❻ ③ s t ⑦③ t ③ ⑩③ t ❿ ✈②① ➀ ✇ ➁ ➂ ① ➂ ① ② ① ➃ ① ✇ ➄ ➅➆ ➇➈ ➂ ❷ ❶ ⑥ ③ ✉ ③ ⑤ ❷s ⑩ ⑥ ❶ ❸ ❶ ④ ❷❹ ⑨ ③t . ➎ . ✇ ➈ ➂ ✈ ➐ ① ➇ ➆ ✈ ➑ ➀ EHA101 ④ r ⑨ ❶ ④ ❷ ⑤ P ❸ r ➍ . K r S ❽ ⑤ ⑩③ ⑩ r ⑦ r , NAIST, J ③ ❹ ③ t ➛ ❻ ⑤ ✉ s t ③ ④ ③ t ❷ ❶ ⑥ ③✉ ③⑤ ⑤ t ③ t ✉ ➋ ❶ ④ ⑦ r ❸ ⑥ ⑤t ❶ ❸ . ❹ ➜ NTR™ ➝⑤ ❸ ❶ ❾⑦ ⑤ r t ③ ⑨ ➞➟➠➟ ➡ ➢ ⑨ r t ⑤t ✉ ➤ t ➋ ⑤ ⑦ ❸ r ✉ ❶ t ➥ ➦ ❻ ③t ➧ ❶ ④ ⑦ r ❸ ❹ ➌ ➨ ➝ ➌ ④ r ⑨❶ ④ ❷ ⑤ ➠ ❸ r ➍ ➩ ➫r ➭❽ ⑤ ⑩③ ⑩ r ⑦ r ❺ ➨ ➌ ➤ ➭➞ ❺ ➯ ③ ❹ ③ t ❺ ➲ ③ ⑩ ⑥ ③ ❸ ➳ ➵ ⑩③ ❷ ⑤t ✉ ➸ ⑩ ③ ❷ ⑤ t ✉ ❻ ⑤✉ s t ③ ④ ③t ❷ ❶ ⑥ ③✉ ③⑤ ✈ ➑ ✇ ➅ ➺ ➻ ✈ ➇ ✇ ➁ ➅ ❻ ③ t ➼ ✈ ➀ ✇ ➆ ➑ ① ✇ ➆➁ ➑ ➻ ✈ ➇ ✇ ➁ ➅ ❻ ③⑨ ③⑩ ④ r t ❷ ⑦ ❸ s ④ ❷ ⑤ ➋ ❶ ④ ⑦ r ❸ ➽ ➨ ➌ ⑤ ➩ ➠ ❸ ⑤⑩ ❶ ❸ ❷ ❹ ❶ ❷ ⑤ ➍ ⑤ ④ ➵ ➾ ➚ ➞➽ ➸ ➪ ➶ ➾ ➸ ➢ ➌ ➢➢ ➲➲ ➌ ➲ ➌ ➲ ➢ ➌➌ ➢ ➌ ➢ ➲ ➌ ➞➢ ➞➞ ➲ ➞➸ ➵ ➾ ❻ ③ t ➵ ➾ ➚ ➞➽ ➸ ➽ ➶ ➾ ➸ ➌➌ ➞ ➢ ➌➌➌➌ ➞ ➢ ➲ ➌ ➢ ➌ ➲ ➞➞ ➲ ➢ ➌ ➞ ➌➌ ➲ ➌ ➸ ➵ ➾ ⑧ ③t ✉ ❻ ⑤✉ s t ③ ④ ③ t s t ⑦ s ④ ⑩❶t ✉ ③⑩ ❹ ⑨ ⑤ ➍ ⑤ ④ ③ ❷ ⑤ ➍ ❸ ③✉ ⑩❶ t ➵ ➾ ➚ ➞➽ ❻ ③ ❸ ⑤ ✉ ❶t ❹ ❶t ⑧ ③ t ❻ ⑤ ❼ ➹ ➸ ➌ ➞ ➠③ ❷ ❶ ⑩❶ ⑩ ⑥ ❸ ③ t ❹ ⑨③ ❷ ⑩③ ❻ ⑤ ❻ ❶ ❷ ③ ⑤t ⑥ ❶ ❸ ❻ ③ ❷ ③ ❸ ④ ③t ❽ ③ ❷ ⑤ ⑨ ⑤ ❷r ⑨ ③ ❷ ⑤ ❿ ➂ ➉ ➂ ① ❻ ❶t ✉ ③ t ➵ ➾ ➽ ➌ ➢ ➜ ⑧ ③t ✉ ⑦❶ ⑨③ ❽ ❻ ⑤⑨ ③ ④ s ④ ③t ❷ ❶ ⑥ ❶⑨ s ⑩t ⑧ ③ ➩ ➪ ❸ ③ ✉ ⑩ ❶t ⑤t ⑤ ❻ ③ ❹ ③ ⑦ ❻ ⑤✉ s t ③ ④ ③ t ❷ ❶ ⑥ ③ ✉ ③ ⑤ ❹ ❶⑩⑤ ❾ s ❻ ❷ ➽ ➨ ➌ ❻ ③ ⑨③ ⑩ ④ r t ❷ ⑦ ❸ s ④ ❷ ⑤ ➽ ➨ ➌ ⑤ ➩ ➠ ❸ ⑤ ⑩❶ ❸ ❷ ❹ ❶ ❷⑤ ➍ ⑤ ④ ➚⑥ ⑤ ➪ ➘ ➶ ➾ ➸ ➞ ➲ ➌ ➞ ➲ ➌ ➞ ➲ ➞ ➲➲ ➞ ➢➞ ➲➲ ➞➞ ➲➲ ➸ ➵ ➾ ❻ ③ t ➲s ❷ ➽ ➘ ➶ ➾ ➸ ➞ ➲➲ ➌ ➞ ➢➢ ➢ ➲➲ ➢ ➌ ➞ ➌ ➲ ➞➞ ➌➌➌ ➸ ➵ ➾ ❻ ⑤ ✉ s t ③ ④ ③ t s t ⑦ s ④ ⑩❶ t ✉ ➸ ➴ ➷ ➬ ➮ ➱➴ ✃ ➴ ❐ ❒❮➴ ➱ ❒➮ ❒❰❒ ➮ ➱ Ï ❒➮ ❮ Ð ➬ ➮ ➴❐ Ñ P Ï ➴ ❰➬Ï ❒ ❐ ➱➴ ➮ ❒ Ò ➱ F 5’-ATGGCAGATG- CCGAGGATAT-3’ ➷ ❒➮ ❒ Ò ➱ R 5’-CAGTTGTGCGACCACTTGCA-3’ ➷ ➴ Ð Ó ➮ ❒ ❐ ❒ ➮ ❮➬ Ô ❒Ð ❒ ➴ ❒Õ ❒➱ ➬ Ö ❒ ÕÓ ❒❮➴ DNA ➱× ➱ ❒Õ . ØÙ Ú Û ÜÙ ÝÙ Þ Ù ß à Ú àá Þ Ýâãä F Ï ❒ Ð ❰➬ ➮ 3’UTR ➷ ➴ ❒❰å Õ➴ ✃ ➴ ❐ ❒❮➴ ➷ ➬ ➮ Ð ❒ ➮ PCR ❰ ➬ ➮ Ð Ð Ó ➮ ❒ ❐ ❒ ➮ ➬ ➮ æ➴ ❰ DNA å × Õ➴ ❰ ➬Ï ❒❮➬ ç èé é êèë ì í î ï ð Ó ➮ ➱Ó ❐ ❰ ➬ ➮ Ð ñ ❒❮➴ Õ ❐ ❒ ➮ å Ï × ➷ Ó ❐ PCR Ó ò Ó ➮ Ð ➱ Ó ❰å Ó Õ ó ôõ ï ö ë ï í ➷ ❒➮ å Ï ➴ ❰ ➬ Ï ❮å ➬ ❮➴ ✃ ➴ ❐ ➷ ➬ ➮ Ð ❒➮ å ➬ ➮ ❒❰ Ô ❒ ñ ❒ ➮ CACC å ❒➷ ❒ å Ï ➴ ❰ ➬ Ï ✃ × Ï ÷ ❒ Ï ➷ ❒Ð ❒ Ï ➷ ❒ å ❒➱ ➷ ➴ ❮➴ ❮➴å ❐ ❒➮ å ❒ ➷ ❒ ❮➴ ➱Ó ❮ å ➬ ➮ Ð ❐ Õ× ➮ ❒ ➮ å Õ ❒ ❮ ❰ ➴ ➷ å øù TR TM D-TOPO ú G ❒ ❰Ô ❒ Ï 24 ➷ ➬ ➮ Ð ❒➮ × Ï ➴➬ ➮ ➱❒❮➴ û ❒ ➮ Ð Ô ➬ ➮ ❒Ï . K × ❰ å × ❮ ➴❮➴ PCR û ❒➮ Ð ➷ ➴ Ð Ó ➮ ❒❐ ❒ ➮ ❒➷ ❒Õ ❒ ñ 10 ➮ Ð å ü ❰ å ❰ ❒ 3’, 0.5 ý ü å Ï ➴ ❰ ➬ Ï þ ÿ ✁✂ ✄ ☎✆ ✝ Ñ ✞ ý ü å Ï ➴ ❰ ➬Ï þ ÿ ✁ ✂ ✄ ✂✆ ✟ ✠ Ô Ó ✃ ✃ ➬Ï ➱ ❒✡ ✆ ✝ Ñ ☛ ❰ ü ➷ ù ✁ ☞ ❰ ➴ ✠ ✆ ✟ Ñ ☛ ✞ ☞ Ï ➴ ❰ ➬ ✌ ✁ ✍ ✂ ú ✎ ✌ ✏ ù ✍ ☞× Õû ❰➬Ï ❒ ❮ ➬ ➷ ❒➮ ➷ ➷ ✎ ✑ ✒ ñ ➴ ➮ Ð Ð ❒ Ö × ÕÓ ❰ ➬ Ï ➬ ❒❐ ❮➴ ☛ ✝ μ Õ Ñ ☞ ✓✂ ➷ ➴ Õ❒❐ Ó ❐ ❒➮ ❮➬ Ô ❒➮ û ❒ ❐ þ ✞ ❮➴ ❐ Õ Ó ❮ ➷ ➬ ➮ Ð ❒ ➮ ❐ × ➮ ➷ ➴❮➴ å Ï ❒ ✄ ☞ ✓✂ ✔ ✕ ✖ ✓✆ ☛ ❰ ➬ ➮ ➴ ➱✗ ➷ ➬ ➮ ❒➱ Ó Ï ❒❮➴ ✔ ✕ ✖ ✓✆ ✟ ✝ ➷ ➬ ➱➴ ❐ ✗ å ➬ ➮ ➬ ❰ å ➬ Õ❒ ➮ å Ï ➴ ❰ ➬ Ï ✞ ✞ ✘ ✓✆ ✞ ➷ ➬ ➱ ➴ ❐ ✗ å ➬ ❰❒➮ ò ❒➮ Ð ❒ ➮ ✙ ☛ ✖ ✓✆ ✞ ✝ ➷ ➬ ➱➴ ❐ ✆ ➷ ❒➮ å ❒❮Ò ❒ ✄ ☞ ✓✂ ✙ ☛ ✖ ✓✆ ☛ ❰ ➬ ➮ ➴ ➱Ñ ☞Ï × ➷ Ó ❐ ☞ ✓✂ ❮➬ Õ❒ ➮ ò Ó ➱ ➮ û ❒ ➷ ➴ ➬ Õ ➬❐ ➱Ï × ✃ × Ï ➬ ❮ ➴❮ ❰ ➬ ➮ Ð Ð Ó ➮ ❒❐ ❒➮ Ð ➬ Õ ❒ Ð ❒Ï × ❮➬ Ó ➮ ➱Ó ❐ ❰ ➬ ➮ Ð ➬ ➱ ❒ ñ Ó ➴ ➴ ➮ ➱➬ Ð Ï ➴ ➱ ❒ ❮ ➷ ❒➮ ❐ Ó ❒ ➮ ➱ ➴ ➱❒❮ ➮ û ❒Ñ ✚ ✛✜ ✢ ✛ ✣ ✤ ✥ ✦ ✧ ★✩ ✪✫ ✣ ✬ ✭✮ ✯ ✭ ✰ ✱✲ ✳ ✴ ✛ ✩ ✛ ✴ ✳ ✴ ✪ ✳ ✩ ✩ ✫ ✴ ✵✪ ✣ ✳ ✩ ✵✱ ✶ ✮ ✭✱ ✢ ★✣ ✳ ✩ ✳ ✣ ✛✴ ✤ ✷ ✩ ✢ ✸ ✱✩ ✱ ✛✴ ✰ ✹✺ ✱✜ ✛ ✜ ✫ ✪✫ ✤ ✷ ✷ ✻ ✼ ✦ ✽✾✿ ❀ ★ ❁ ✪ ✢ ✫ ✣✰ ★ ✣ ❂ ✶ ✾ ✿ ✣✱✲ ✺ ✪ ✢ ✫ ✣✰ ★ ✣ ❂ ✮ ❃❄ ❅❅ ✿ ✲ ★ ✴ ✣ ★ ✵ ✱ ✵ ✪ ★ ✴ ❆ ✛✴ ✛ ✜ ❇ ❈ ✱ ✴ ❂ ❉ ❃❄✿ ✲ ★✴ ✣ ★✵✱ ✵ ✪ ★✴ ❉ ❇ ✲ ✣✫ ✜ ❇ ❈ ✱ ✴ ❂ ❊ ✢ ❋ ✬ ✣✫ ✦ ✿ ✬ ✣✫ ✜ ✫ ✪ ★✣ ● ❍ ■❏ ● ■❑■ ▲ ▼ ◆ ✛ ✲ ✳ ✴ ✲ ❖ ✱ ✴ ✪✣✫ ✴ ✬ ★✣✪ ✛✜ ✛ ❂ P ❑❑✶ ✿ ✩ ✛✵ ★ ✪ ✣ ★ ✩ ✫ ✜ ✢ ✱ ✴ ✛ ✵ ✱ ✽ ✶ ❈ ❀ ✫ ✴ ✛ ✵★ ❂ P ❑❑✶◗ P ❑❑✶✤ ✿ ✵ ✱✪ ✳ ✵ ✣ ★✩ ✫ ✜ ✢ ✱ ✴ ✛ ✵ ✱ ✽ ✶ ❈ ❀ ✫ ✴ ✛ ✵★ ❂ ❘✜ ❙ ✿ ✲ ★ ✴ ✣ ★ ✵ ✱ ✵ ✪ ★ ✴ ❘ ✺ ❀ ✫ ✣ ✛✜ ✬ ✺ ★✴ ✱ ❈ ✫ ❀ ❂ ❚❚❯ ✾✿ ✲ ★✴ ❚ ❚ ❯ ✾ ❂ ✮ ❱ ✹ ✪ ✿ ✪ ★ ✣ ✜ ✱ ✴ ✛ ✪ ✫ ✣ ✮ ❱ ✹ ✦ ❲❳❨❩❬❭ ❪❫❪ ❴ ❵ ❛ ❜ ❴ ❝ ❞❪ ❡ ❢ ❣ ❤ ✐ ❩❞ ❥ ❜ ❬ ❜ ❝ ❦ ntry V ❧ ♠ t ♥ r . A ♦ ♣q rs rt s q ✉✈ ♣✇ ① ♣② ✉③ ④ ♣ ✇ ♦ ⑤ ⑥ ⑦ ✉ r♣③ , ⑥ s q t ♣✇ ⑧ ✉✇ ♦ ♣✇ r⑤ ③ ♣q ♣✇ ⑦ ♣q ♣ ⑥ q ⑤ ⑧ ⑨ ✈ PCR ⑧ s ✇ ♦ ♣✇ ⑩ s✈ ⑦ ⑤ q TOPO ♣⑧ ♣ ③ ♣ ① 0.5:1 ① ✉✇ ♦ ♦ ♣ 2:1. K ⑤ r⑥ ⑤ ② ✉② ✉ q s ♣ ✈ ② ✉ ③ ✉ ♦ ♣② ✉ ♣⑧ ♣ ③ ♣① ②s t ♣♦ ♣ ✉ t s q ✉ ✈ ⑨ ⑦ : 2 ð ③ 8 ✇ ♦ ⑥ q ⑤ ⑧ ⑨ ✈ PCR, 1 ❶ ③ ③ ♣ q ⑨ ⑦ ♣ ✇ ♦ ♣q ♣r ❷ ❸ ❹ ❺ ❻ ♣ ❼ ③ ⑧ ♣✇ ❽ ❾ ❽ ❿ ❺ ❺ ♦ ❼ ③ ➀ ❾ ❷ ❶ ③ ❷ ➁ ➂ ❹ ❽ ✇ ♦ ⑩ s✈ ⑦ ⑤ q ⑥ ➃ ❻ ➄➅ ➆➇ ➈ ➉ ➂ ➄➊➋➊ ➌ ❾ ⑧ ♣ ✇ ❹ ❶ ③ ⑧ ➍ ➀ ➊ ❸ ➎ ⑤ r⑥ ⑤ ✇ s ✇ q s ♣✈ ② ✉ ⑦sq ②s t ⑨ ⑦ ⑧ ✉➏ ♣ r ⑥ ⑨ q ⑧ ♣✇ ⑧ ✉ ✉✇ ✈ ⑨ t ♣ ② ✉ ② s③ ♣r♣ ➁ r s ✇ ✉⑦ ⑥ ♣ ⑧ ♣ ② ⑨ ① ⑨ q ⑨ ♣✇ ♦ ❹ ❹ ➂ ❹ ➐ ➑ ❼ ❸ ➋ q ⑤ ②s② ③ ✉ ♦ ♣ ② ✉ ♣✇ ⑦ ♣q ♣ ⑩ s✈ ⑦ ⑤ q ⑧ ♣ ✇ ✉✇ ②s q ⑦ ⑦ sq ➒ ♣⑧ ✉ ②s ③ ♣r ♣ ✉✇ ✈ ⑨ t ♣ ② ✉ ⑤ ③ s① s ✇ ➓ ✉r ➄⑤ ⑥ ⑤ ✉② ⑤ r sq ♣②s ➔ ❸ → s t ♣✇ ④ ♣ ✈ ➐ ❶ ③ q s ♣✈ ② ✉ ③ ✉ ♦ ♣ ② ✉ ⑧ ✉ ➏ ♣r⑥ ⑨ q ⑧ s ✇ ♦ ♣ ✇ ➁ ❽ ❶ ③ t ♣✈ ⑦ sq ✉ ➣ . ↔ ↕ ➙➛ ➉➍ ➁ ➜ ✈ ⑤ r ⑥ s ⑦s ✇ ❾ ⑧ ♣✇ ⑧ ✉ ✉✇ ✈ ⑨ t ♣② ✉ ⑧ ✉ s ② ②s ③ ♣ r♣ ➐ ❽ r s ✇ ✉⑦ ❸ → s ③ ♣ ✇ ➒ ⑨ ⑦ ✇ ④ ♣ ❾ ➏ ♣ r ⑥ ⑨ q ♣ ✇ ✉ ✇ ✉ ⑧ ✉⑥ sq ③ ♣✈ ⑨ ✈ ♣ ✇ ⑧ s ✇ ♦ ♣✇ ✈ s ➒ ⑨ ⑦ ♣ ✇ ⑥ ♣✇ ♣② ➝ ➞➟ ➠ - ➡➝ ↕ ↔➢ ⑥ ♣⑧ ♣ ➤ ❹ ➑ ❼ ②s③ ♣r♣ ➐ ❽ ⑧ s⑦ ✉ ✈ ❾ ⑧ ♣✇ ②s♦ sq ♣ ⑧ ✉✉ ✇ ✈ ⑨ t ♣ ② ✉✈ ♣✇ ⑧ ✉ ⑧ ♣ ③ ♣r s② ❸ → s ⑦ s③ ♣① ✉⑦⑨ ❾ ➏ ♣ r ⑥ ⑨ q ♣ ✇ ⑧ ✉ ⑦ ♣r t ♣① ⑧ s ✇ ♦ ♣✇ ❹ ➁ ❽ ❶ ③ ❹ ➥ ➦➄ ❷ ❿ ♦ ➈③ ➧ ♣➏⑦ ⑤ ➂ ⑦ q ④ ⑥ ⑦ ⑤ ✇ s ❾ ❷ ❽ ♦ ➈ ③ t ♣➏⑦ ⑤ ④ s ♣②⑦ s ➥ ⑦q ♣➏⑦ ❾ ➁ ♦ ➈ ③ ❻ ♣ ❼ ③ ❾ ⑥ ➍ ➨ ❸ ❽ ➩ ❾ ③ ♣ ③ ⑨ ⑧ ✉ ✉✇ ✈ ⑨ t ♣② ✉ ⑥ ♣ ⑧ ♣ ②⑨ ① ⑨ ➐ ➨ ➑ ❼ ② s③ ♣ r♣ ❷ ➒ ♣ r ⑧ s ✇ ♦ ♣ ✇ ⑥ s ✇ ♦ ⑤ ➏ ⑤ ✈ ♣✇ ❸ → s t ♣✇ ④ ♣ ✈ ➁ ❽ ❶ ③ ✈ ⑨ ③ ⑦ ⑨ q t ♣✈ ⑦ s q ✉ ⑧ ✉② s t ♣q ⑥ ♣ ⑧ ♣ rs ⑧ ✉ ♣ ➫ ➧ ⑥ ♣ ⑧ ♣⑦ ④ ♣ ✇ ♦ rs ✇ ♦ ♣ ✇ ⑧ ⑨ ✇ ♦ ➁ ❽ ❶ ♦ ➈ r③ ✈ ♣ ✇ ♣ r ✉② ✉ ✇ ⑧ ♣ ✇ ⑧ ✉ ✉ ✇ ✈ ⑨ t ♣② ✉ ⑥ ♣ ⑧ ♣ ② ⑨ ① ⑨ ➐ ➨ ➑ ❼ ②s r♣③ ♣ r ❸ ➭➯ ➲ ➳ ➯ ➵ ➸ ➺ ➻ ➼➽➾➯ ➚➪➶➪ ➹ ➘ ➴ ➯ ➶ ➲ ➪ ➷ ➷ ➯➬ ➶➪ ➾➮ ➶ ➘ ➽ ➬ ➱ ➹ ➴ ✃ ➬ ➯ ➬ ➘ ❐❒ ❮❰ Ï Ð ÑÒ Ó❮Ô ➼Ô Õ Ö×ØÙ ÚÛ Ü ØÝ Ø Ú × Þ Ý Û Ý ß à × Ú t Ü á âãäåã . V æç è é ê ë ìí TR TM D-TOPO î ê æç é ïñ òó ôó õ ö ÷øù ú û ü ö õ ý ò ê æç é ï ñ òó ô þ òç ô ó ý æó ÿ ôó æ ç è é ê ë ✁ NDA ïæó ÿ ÿ ✂ ó ô ç ôó æ ó ✄ ò ï LR ☎ ✆ é ó ô þ æ . C ô ï ë ✂ ê ô ó ê æôç þ òó ✝ ô ô ý ô ✆ ô ✞ þ æ ñ ôÿ ô ò ñ æ ê ò ç ✂ è : 2 ✟ ✆ ñ ✂ ✠ ✠ æ ê ê æ ô ç þ ò ✡☛ ☞ ✌ ✍ ✎ ✏ ✑ ✑ ✒ ✓ ✑ ✑ ó ÿ õ ö ÷øù ú û ü ö õ ✎ ✓ ✑ ✑ ó ÿ æ ç è é ê ë ✁í ✔ ✁ ✎ ý ô ó ñ ✂ ✠ ✠ æ ê ✕ ì ✞ ò ó ÿ ÿ ô é ✆ ✂ ïæ ✖ ✟ ✆✗ ✘ æ✆ ô ó ✙✂ è ó ✝ ô ✚ ✟ ✆ æ ó ✄ òï ✡☛ ☎✆ é ó ô þ æ ý òè ô ï ñ ô✞ ç ôó ç æ ý ô ✆ô ï ☎ô ï ë ✂ ê ôó ê æôç þ ò ý ô ó ý ò☎ô ï ë ✂ ê ✆ô ✆ ✂ ý ò òó ç ✂ ñ ô þ ò ë ô ý ô þ✂ ✞ ✂ ✚ ☞ ✛ ✜ þ æ ✆ ô ï ô þ æ ï ô ✆ô ï✗ ✢ ó è✂ ç ïæ ó ÿ ✞ æó è òç ôó ê æ ô ç þ ò ✎ þ æ ñ ôó ✝ ôç ✏ ✟ ✆ ✆ ô ê ✂ è ôó ë ê é è æ ò ó ôþ æ ✣ ✚ ✟ÿ ✤✟ ✆ ý òèô ï ñ ô✞ ç ôó ç æ ý ô ✆ ô ï ☎ ô ï ë ✂ ê ô ó ê æôç þ ò ✆ ô ✆ ✂ ý ò òó ç ✂ ñ ô þ ò ë ôý ô þ ✂ ✞ ✂ ✓ ✥ ✛ ✜ þ æ✆ô ïô ✏ ✑ ïæó ò è ✗ ✦ ôþ ò ✆ ê æç é ïñ òó ôþ ò ý ò ò ó èê é ý ✂ ç þ òç ô ó ç æ ý ô ✆ô ï ✧ . ú ü û ★ ✔ ✦ ☞  ý æó ÿ ô ó ïæó ☎ ô ïë ✂ ê ✏ ✑ ✟ ✆ ✆ ô ê ✂ è ôó ✞ ô þ ò✆ ê æ ç é ï ñ òó ôþ ò ý ô ó ☞ ✑ ✟ ✆ ✧✩ ú ü û ★ ✔ ✦ ☞  ç é ï ë æè æó ✝ ôó ÿ ý ò✆ô ç ✂ ç ôó þ æ ë æê è ò ë ê é þ æ ý ✂ ê è ê ôó þ ✠ é ê ïôþ ò ý ò ôè ôþ ý ô ó è ê ô ó þ ✠ é ê ï ô ó ó ✝ ô ý òþ æ✆ æ ç þ ò ý æó ÿ ô ó ïôþ òó ÿ ✒ ï ôþ ò ó ÿ ☞ ✑ ✟ÿ ✤ ï ✆ ç ô ó ô ïòþ ò ó ý ôó ✞ òÿ ê é ïòþ òó ✗ ✪ æ ê ò✠ òç ô þ ò é ê òæó èô þ ò ✠ ê ôÿ ïæó ✓ ✫ ✢ ✕ ☛ ý ô ✆ ô ï æç è é ê ☛ í✁ ò ý ò✆ôç ✂ ç ô ó ý æó ÿ ôó þ æ ç ✂ æ ó þ òó ÿ ïæ ó ÿ ÿ ✂ ó ôç ôó ë ê ò ïæê ✬ ✂ þ ✭ ý ô ó ✬ ✂ þ ☛ ✗ ✮ ò✆ô ✞ ôþ ò ✆ þ æç ✂ æó þ ò ó ÿ ï æ ó æï✂ ç ô ó ✂ ✙ ✂ ó ÿ ☞ ✫ ✠ ê ôÿ ïæó ✓ ✫ ✢ ✕ ☛ ✎ ï ôç ô é ê òæó èô þ ò þ æ þ✂ ô ò ✞ ôê ôë ô ó ✎ ✝ ô òè✂ ñ æê ✂ ✆ ô ó ÿ è æê ñ ô ✆ ò ç ✗ ✯ á Ý Ø s ✰ Ü á ßÝ ✱✲ ✳ . tu ✴ ✵✶ ✷ ✸✹ ✵ ns ✺✻ ã✼ ✽ ✼ Þ× ØÙ Ý Ø à ×Ú t Ü á ✾ä ã ✲ . ✘æñ ôó ✝ ôç ✏ ✟ ✆ ✏ ☞ ✑ ó ÿ ✍ æ ç è é ê ☛ í✁ ò ý ò ☎ ô ï ë ✂ ê ý æó ÿ ô ó ☞ ✑ ✟ ✆ ✿ ✩ ÷ ❀ ❁ õ ❂❃ ú★õ ö ❄ ì ✦ ✁ ✏ ✑ ✏ ç é ï ë æè æó ✎ ý òñ æê ò ç æ✙✂ èô ó ✆òþè ê òç ë ôý ô é ✆ è ô þ æ ✏ ✖ ✑ ✑ é ✆ è ✎ ç ô ë ô þ ò è ôþ ✚ ☞ ✟ ✭✎ ý ôó ê æþ òþè æó þ ò ✚ ✑ ✑ ❅ þ æ ✆ ô ï ô ✓ ✒ ❆ ïý æè òç ý ò ý ô ✆ô ï æ ✆æ ç è ê é ë é ê ôè é ê ✗ ✮ ô ç è æê ò ✞ ô þ ò ✆ æ✆ æ ç èê é ë é ê ô þ ò ç æï ✂ ý ò ô ó ý ò è ô ïñ ô ✞ ç ô ó ý æ ó ÿ ô ó ✏ ï✆ ✚ ✌ ❇ ✕ ✆ô ✆✂ ý òòó ç ✂ ñ ôþ ò ë ô ý ô þ ✂ ✞ ✂ ✚ ✖ ✛ ✜ þô ïñ ò ✆ ý òç é ☎ é ç þ æ✆ô ïô ✏ ✙ ô ï✗ ✘ æñ ôó ✝ ôç ✏ ☞ ✑ ð ✆ ñ ô ç è æê ò ç æï✂ ý òôó ý ò þ æñ ô ê ë ô ý ô ☎ ô ❈ ô ó ë æèê ò ✝ ôó ÿ ïæ ó ÿ ôó ý ✂ ó ÿ ï æ ý ò ô ✚ ✌ ❇ ✕ þ æ ê è ô ☞ ✑ μ ÿ ✤ ï✆ ç ô ó ô ïòþ òó ý ôó ✞ òÿ ê é ïòþ ò ó ✆ô ✆✂ ý ò ò ó ç ✂ ñ ô þ ò ë ô ý ô þ ✂ ✞ ✂ ✚ ✖ ✛ ✜ þ æ✆ô ï ô ✓ ✑ ✙ô ï✗ ✯ á Ý Ø s ✰ Ü á ßÝ ✱✲ ✯Ý Ø Ý ß Ý Ø Þ× ØÙ Ý Ø à × Ú t Ü á ✾äã✲ . ✕ ê ô ó þ✠ é ê ï ô þ ò ý ò ✆ ôç ✂ ç ôó ý æó ÿ ô ó ï æ ó ÿ ÿ ✂ ó ô ç ôó ✿ ✩ ÷ ❀ ❁ õ ❂ ❃ ú★ õ ö ❄ ïæó ✂ ê ✂ è ë ê é þ æ ý ✂ ê ✁ç ô þ✞ ò õ ÷ ❃ û ✗ ✚ ✑ ✑ ☞ ✍ ✝ ôó ÿ è æ ✆ ô ✞ ý òïé ý ò✠ òç ô þ ò é ✆æ ✞ ✔ ô ê é ✙ ô è ✚ ✑ ✏ ✑ ✍ ✗ ✘ æ✆ æ ç þ ò ý ôó ê æ ÿ æ ó æê ôþ ò èô ó ô ï ô ó ïæ ó ÿ ÿ ✂ ó ôç ô ó ë ê é þ æý ✂ ê ✔ ôê é ✙ô è ✚ ✑ ✏ ✑ ✍ ✗ ✁ç ✆ òï ô è òþô þ ò èô ó ô ï ô ó ý ò✆ôç ✂ ç ô ó þ æè æ ✆ ô ✞ èô ó ô ï ô ó ñ æ ê ✂ ï ✂ ê ✚ ✑ ïòó ÿ ÿ ✂ þ æè æ ✆ ô ✞ ç é ç ✂ ✆è ò ô þ ò✗ ❉ æ ý ò ô è ôó ô ï ✝ ôó ÿ ý òÿ ✂ ó ôç ô ó ý ô ✆ ô ï ôç ✆ òï ô è òþôþ ò ôý ô ✆ ô✞ èô ó ô✞ ❊ ô ê ô ó ÿ þ æç ô ï ❊ èô ó ô ✞ ë ✂ ë ✂ ç ý æó ÿ ôó ë æ ê ñ ôó ý òó ÿ ô ó ✏ ❊ ✏ ❊ ✏ ✗ ❋●❍■❏ ❑▲ ❑▼◆ ❖❑ P ◆ ■ ◆ ◗ ◆ ■ P ❘ ◆ ■ ❖ ❙ ❍■ ❑ ▼ . T ❚ ❯ ❚ ❱❚❯ ❲ ❳ ❚ ❯ ❨❩ ❬❯ ❭ ❪ ❫ ❭ ❭❫ ❬ ❯ ❲ ❭❴ ❭❪ ❚ ❨❭ ❱ ❬ ❯ ❩ ❩ ❵ ❯ ❚ ❪ ❚ ❯ PCR ❫ ❬ ❯ ❩ ❚❯ DNA ❲ ❚❯ ❚❱ ❚❯ ❲ ❳ ❚❯ ❨ ❩ ❬ ❯ ❭ ❪ ❛ ❚ ❯ ❩ ❫ ❭❭ ❨❜ ❝ ❚ ❨❭ ❫ ❬❯ ❩ ❚ ❯ ❱ ❬ ❯ ❩ ❩ ❵ ❯ ❚ ❪ ❚ ❯ DN ❬ ❚ ❨ ❛ P ❝ ❚❯ ❲ M ❭ ❯ ❭ K ❭ ❲ QIAGEN ❨❬❞ ❚ ❩ ❚ ❭ ❡ ❬❲❚ ❪ ❚ ❯ ❫ ❚❯ ❢ ❚ ❨❚❯ ❩ ❚ ❯ U ❞ ❭ F1 ❫ ❚❯ G ❵ ❨ R1 ❨❬❞ ❚ ❩ ❚ ❭ ❢ ❳ ❭❱ ❬❳ . K ❜ ❱ ❢ ❜ ❨❭❨ ❭ PCR ❛ ❚❯ ❩ ❫ ❭ ❩ ❵ ❯ ❚ ❪ ❚❯ ❚ ❫ ❚ ❝❚ ❣ 100 ❯ ❩ DNA, 0.5 ❤✐ ❥❞ ❭❦❧ ♠ ♥ ♦ ♣ ❤ ✐ q ❵ ❨ r❧ ♠ ❧ s ❞ ❵ ❴ ❴ ❬ ❳ ❲ ❚ t ♠ ♥ ♦ ✉ ❱ ✐ ❫ ✈ ✇ ① ❱ ❭s ♠ ❧ ♦ ✉ ♣ ❥ ❲❚ t ② ✈ ③ ❢ ❜ ❝❛ ❱ ❬ ❳ ❚ ❨❬ r ④⑤ ④ ❭❜ ❨ ❡ ❭❬ ❯ ❡ ❬ ❫ ❚ ❯ ❫ ❫ ⑥ ⑦ ⑧ ❣ ❭❯ ❩ ❩ ❚ ⑨ ❜ ❝ ❵ ❱ ❬ ❚ ❪ ❣ ❭ ❳ ✉ ♥ ❤ ❝ ♦ ① ⑤ r ❫ ❭ ❝ ❚ ❪ ❵ ❪ ❚ ❯ ❨❬ ❞ ❚❯ ❛ ❚ ❪ ⑩ ♣ ❨❭ ❪ ❝ ❵ ❨ ❫ ❬❯ ❩ ❚ ❯ ❪ ❜ ❯ ❫ ❭ ❨❭ ❢ ❳ ❚ ❶ ① ⑤ r ❷ ❸ ❹ ⑤ ♠ ♣ ❱ ❬❯ ❭ ❲ ❺ ❫ ❬❯ ❚❲ ❵ ❳ ❚ ❨❭ ❷ ❸ ❹ ⑤ ♠ ❧ ❱ ❬ ❯ ❭ ❲ ❺ ❢ ❬❯ ❬❱ ❢ ❬ ❝ ❚❯ ❢ ❳ ❭ ❱ ❬ ❳ ♣ ♣ ❻ ⑤ ♠ ⑩ ♥ ❫ ❬ ❲ ❭❪ ❺ ❢ ❬ ❱❚ ❯ ❼ ❚❯ ❩ ❚❯ ❽ ✉ ❹ ⑤ ♠ ❧ ❱ ❬ ❯ ❭ ❲ ♠ ❫ ❚ ❯ ❢ ❚ ❨❡❚ ❶ ① ⑤ r ❽ ✉ ❹ ⑤ ♠ ♣ ❱ ❬ ❯ ❭❲ ♦ ❾❿ ❑ P ➀ ➁ ❍ ❘◆ ■ ❖❑ P ◆ ■ ◆ ◗◆ ■ P ❘◆ ■ ❖ ❙ ❍ ■ ❑▼ P ❍❘➂ ◆ ●◆ ➃ ➄ ❍ ▼ ◆ ◗ ◆ ■ ➅ ➁ ➆ ✇ ❚❯ ❚❱ ❚❯ ❲ ❳ ❚❯ ❨ ❩ ❬ ❯ ❭ ❪ ❛ ❚❯ ❩ ❞ ❬❳ ❵ ❱ ❵ ❳ ❸ ❞ ❵ ❝ ❚❯ ❨❬ ❲ ❬❝❚ ❣ ❚ ❪ ❝ ❭ ❱❚ ❲ ❭ ❨ ❚ ❨❭ ❫ ❭❢ ❜ ❲ ❜ ❯ ❩ ❞ ❚❩ ❭ ❚ ❯ ❚ ❲❚ ❨❯ ❛ ❚ ❣ ❭❯ ❩ ❩ ❚ ⑩ ❶ ❸ ❞ ❵ ❪ ❵ ❫ ❚ ❳ ❭ ❢ ❵ ❡ ❵ ❪ ❝ ❚❝ ❵ ❫ ❭ ❲ ❵ ❱ ❞ ❵ ❣ ❪ ❚❯ ❢ ❚❫ ❚ ❱ ❬ ❫ ❭ ❚ ⑥ ⑦ ⑧ ❣ ❭❯ ❩ ❩ ❚ ❱ ❵ ❯ ❡ ❵ ❝ ❚ ❪ ❚ ❳ ❨❬❢ ❚ ❯ ❼ ❚❯ ❩ ➇ ❧ ❡ ❱ ♦ ✇❚❯ ❚ ❱❚❯ ❫ ❭❢ ❭ ❯ ❫ ❚ ❣ ❪ ❚ ❯ ❢ ❚ ❫ ❚ ❱ ❬ ❫ ❭ ❚ ❣ ❚ ❳ ❚ ➈❚❲ ❚❯ ❚ ❞ ❬ ➉➊ ➋ ➌ ♦ ✉ ♥ ♥ ❧ ➍ ❛ ❚❯ ❩ ❱ ❬ ❯ ❩ ❚❯ ❫ ❵ ❯ ❩ ⑩ ♦ ✉ ❱✐ ③ ❝ ⑤ ❝ ➎ ♦ ➏ ⑥ ⑦ ⑧ ❫ ❚❯ ❢ ⑥ ❸ ❪ ❬❱ ❵ ❫ ❭ ❚ ❯ ❫ ❭❞ ❭❚ ❳ ❪ ❚❯ ❞ ❬ ❞ ❬❳ ❚ ❢ ❚ ❣ ❚ ❳ ❭ ❣ ❭ ❯ ❩ ❩ ❚ ❲ ❬ ❳ ❼ ❚ ❫ ❭ ❢ ❬❯ ❩ ❣ ❚❱ ❞ ❚❲ ❚❯ ❢ ❬❳ ❲ ❵ ❱ ❞ ❵ ❣ ❚❯ ❢ ❚ ❫ ❚ ❲❚ ❯ ❚ ❱❚ ❯ ❲ ❳ ❚ ❯ ❨ ❩ ❬❯ ❭❪ ❫ ❚ ❯ ❲ ❭❫ ❚ ❪ ❢ ❚ ❫ ❚ ❪ ❜ ❯ ❲ ❳ ❜ ❝ ❣ ❚ ❳ ❚ ❲❚❯ ❢ ❚ ③ ❝ ♦ ➐➑ ➒➓ ➔ →➑ ➣ ↔↕ ➙➛ ➑ ➜ ➑ ➒ ➑ ➣ ➝➞ ➣➒ ➟ ➠ ➡ ➢ ➒ ➓ ➤ ↕ ➢ t ➞ ➠ ➥➦➧ ➓ V ➨➩ ➫➭ ➯ RNA ➲ ➳ ➲ ➩ ➭ ➵ ➸➫➯ ➺ ➩ ➸ ➲ ➳ ➨ ➵ ➻ ➼ ➵ ➽ ➨ ➵ ➾ ➲ ➸➲ ➚ ➩ ➼ ➵ ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨ ➵ 3’UTR ➻ ➨ ➵ ➚ ➨ ➵ ➾ ➼ ➵ ➳ ➲ H + -ATP ➼ ➸➨ ➽ ➨ ➽ ➶ ➯ ➼ ➵ ➚ ➹ ➼ ➸ ➽➼ ➳ ➼➯ ➲ ➘ . ➴➷ ➬➷ ➮ ➷ ➱✃ ❐❒ ❮❰ ➴ L. ➩ ➨ ➳ ➼ ➹ ➼ ➽ Ï ➨ ➩ ➫➭ ➯ ➚ Ð NDA ➽ ➨ ➹ ➼ ➹ ➺ ➲ Ï ➨ ➩ ➫ ➭ ➯ ➚ Ñ Ò TR TM D-TOPO Ó ➳ ➨ ➵ ➻ ➼ ➵ ➫ ➨ ➩ ➵ ➭ ➹ ➭ ➻ ➲ GATEWAY. A ➽ ➚ ➹ ➲ ➪ ➲➩ ➼ ➸ ➲ 3’UTR ➳ ➼ ➯ ➲ ➻ ➨ ➵ ➚ ➨ ➵ ➾ ➼ ➵ ➳ ➲ H + -ATP ➼ ➸➨ ➽ ➨ ➽ ➶ ➯ ➼ ➵ ➚ ➹ ➼ ➸ ➽➼ ➳ ➼ ➯ ➲ ➘ . ➴➷ ➬➷ ➮ ➷ ➱✃ ❐ ❒ ❮❰ ➴ L. ➾ ➼ ➵ ➻ ➶ ➨➯ ➺ ➩ ➺ ➯ ➼ ➵ 255 ➚ ➶ G ➼➽ ➶ ➼ ➯ 25 ➳ ➨➵ ➻ ➼ ➵ ➚ ➨ ➵ ➼ ➽ ➶ ➼ Ô ➼ ➵ CACC ➚ ➼ ➳ ➼ ➺ Õ ➺ ➵ ➻ 5’ ➫ ➨ ➹ ➼ Ô ➶ ➨ ➯ Ô ➼ ➸➲ ➹ ➳ ➲ ➹ ➼ ➩ ➺ ➩ ➼ ➵ . F ➯ ➼ ➻ ➽ ➨➵ ➲ ➵ ➲ ➩ ➨ ➽➺ ➳ ➲➼ ➵ ➳ ➲ ➸ ➲ ➸ ➲ ➚ ➩ ➼ ➵ ➩ ➨ ➳ ➼ ➹ ➼ ➽ ➚ Ñ Ò TR TM D-TOPO Ó . H ➼ ➸ ➲ ➹ ➯ ➨ ➩ ➭ ➽ ➶ ➲ ➵ ➼ ➸ ➲ ➼ ➵ ➫➼➯ ➼ ➼ ➫ ➫ R1 ➳ ➼➯ ➲ Ï ➨➩ ➫➭ ➯ ➚ ANDA ➳ ➼ ➵ ➼ ➫ ➫ L1 ➳ ➼ ➯ ➲ ➚ Ñ Ò TR TM D-TOPO Ó ➳ ➼ ➵ ➼ ➫ ➫ R2 ➳ ➼➯ ➲ Ï ➨➩ ➫ ➭ ➯ ➚ Ð NDA ➳ ➼ ➵ ➼ ➫ ➫ L2 ➳ ➼ ➯ ➲ ➚ Ñ Ò TR TM D- TOPO Ó ➽ ➨➵ ➾ ➨ ➶ ➼ ➶ ➩ ➼ ➵ ➫ ➨ ➯ Õ ➼ ➳ ➲ ➵ ➾ ➼ ➚ ➨➵ ➾ ➲ ➸ ➲ ➚ ➼ ➵ ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨ ➵ 3’UTR ➘➴Ö ➴➷ ➩ ➨ ➳ ➼ ➹ ➼ ➽ Ï ➨➩ ➫➭ ➯ ➚ Ð NDA ➚ ➼ ➳ ➼ ➳ ➺ ➼ ➳ ➼ ➨➯ ➼ Ô ➾ ➼ ➵ ➻ ➭ ➯ ➲ ➨ ➵ ➫ ➼ ➸ ➲ ➵ ➾ ➼ ➫ ➨ ➯ ➶ ➼ ➹ ➲➩ ❒ × ØÙ ❐ ➱ Ù Ú , ➾ ➼ ➵ ➻ ➸➨ ➹ ➼ ➵ Õ ➺ ➫ ➵ ➾ ➼ ➳ ➲ ➸➨ ➶ ➺ ➫ ➸➨ ➶ ➼ ➻ ➼➲ ➚ Ð NDA3’UTRM ➽ ➚ ➽ ➼ G ➼➽ ➶ ➼ ➯ 26. P ➨➵ ➾ ➲ ➸ ➲ ➚ ➼ ➵ ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨➵ ➳ ➲ Ï ➨➯ ➲ ➪ ➲ ➩ ➼ ➸ ➲ ➳ ➨ ➵ ➻ ➼ ➵ PCR ➽ ➨ ➵ ➻ ➻ ➺ ➵ ➼ ➩ ➼ ➵ Û ➨➫ ➼ ➩ ➼ ➵ ➚ Ð NDA3’UTRM ➽ ➚ ➽➼ ➳ ➼ ➵ ➚ ➯ ➲ ➽ ➨ ➯ U ➶ Ü -F ➳ ➼ ➵ G ➺ ➸ -R ➺ ➵ ➫ ➺ ➩ Ï ➨➯ ➲ ➪ ➲ ➩ ➼ ➸ ➲ ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨ ➵ ➳ ➲ ➸➨ ➶ ➨ ➹ ➼ Ô ➩ ➲➯ ➲ Ý ❰ Þ ➬❒ × ß Ù ❐ G ➼ ➽ ➶ ➼➯ 27, ➩ ➭ ➹ ➭ ➽ 1-6 ➳ ➼ ➵ ➚ ➯ ➲ ➽ ➨ ➯ G ➺ ➸ -F ➳ ➼ ➵ N ➭ ➸➫ -R ➺ ➵ ➫➺ ➩ Ï ➨ ➯ ➲ ➪ ➲ ➩ ➼ ➸ ➲ ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨➵ ➳ ➲ ➸➨ ➶ ➨ ➹ ➼ Ô ➩ ➼ ➵ ➼ ➵ Ý ❰ Þ ➬ ❒ × ß Ù ❐ G ➼ ➽ ➶ ➼➯ 27, ➩ ➭ ➹ ➭ ➽ 7-12. H ➼ ➸ ➲ ➹ PCR ➫ ➨➯ ➸➨ ➶ ➺ ➫ ➽ ➨➵ ➺ ➵ Õ ➺ ➩ ➩ ➼ ➵ ➼ ➳ ➼ ➵ ➾ ➼ ➚ ➲ ➫ ➼ ➶ ➨➯ ➺ ➩ ➺ ➯ ➼ ➵ ➸➨ ➩ ➲ ➫ ➼ ➯ 750 ➚ ➶ ➾ ➼ ➵ ➻ ➫ ➨ ➯ ➳ ➲➯ ➲ ➳ ➼ ➯ ➲ ➶ ➼ ➻ ➲➼ ➵ ➺ Õ ➺ ➵ ➻ 3’ ➚ ➯ ➭ ➽ ➭ ➫ ➨ ➯ ❰ ➮ ❒ à ❰ ❒ ➱ ❒ × á Õ ➼ ➻ ➺ ➵ ➻ , ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨ ➵ 3’UTR M ➽ ➚ ➽➼ ➳ ➼ ➵ ➶ ➼ ➻ ➲ ➼ ➵ ➺ Õ ➺ ➵ ➻ 5’ Ý ❰ Þ ➬ ❒ × ß Ù ❐ G ➼ ➽ ➶ ➼➯ 27, ➩ ➭ ➹ ➭ ➽ 1-6; ➳ ➼ ➵ ➚ ➲ ➫ ➼ ➹ ➼➲ ➵ ➾ ➼ ➵ ➻ Õ ➺ ➻ ➼ ➶ ➨➯ ➺ ➩ ➺ ➯ ➼ ➵ 750 ➚ ➶ ➾ ➼ ➵ ➻ ➫➨➯ ➲ ➳ ➲➯ ➲ ➼ ➫ ➼ ➸ ➶ ➼ ➻ ➲ ➼ ➵ ➺ Õ ➺ ➵ ➻ 3’ Ý ❰ Þ ➬❒ × ß Ù ❐ , ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨➵ 3’UTRM ➽ ➚ ➽ ➼ ➳ ➼ ➵ ➶ ➼ ➻ ➲ ➼ ➵ ➺ Õ ➺ ➵ ➻ 5’ ➫ ➨ ➯ ➽➲ ➵ ➼ ➫➭ ➯ × â Þ G ➼ ➽ ➶ ➼ ➯ 27, ➩ ➭ ➹ ➭ ➽ 7-12. H ➼ ➸ ➲ ➹ ➲ ➵ ➲ Õ ➺ ➻ ➼ ➫➨ ➹ ➼ Ô ➽ ➨➵ Õ ➨ ➹ ➼ ➸ ➩ ➼ ➵ ➶ ➼ Ô ã➼ ➪ ➯ ➼ ➻ ➽ ➨➵ 3’UTR ➫➨ ➹ ➼ Ô ➫➨➯ ➸ ➲ ➸ ➲ ➚ ➚ ➼➳ ➼ Ï ➨ ➩ ➫➭ ➯ ➚ Ð NDA ➳ ➨ ➵ ➻ ➼ ➵ ➺ ➯ ➺ ➫➼ ➵ ➚ ➭ ➸ ➲ ➸ ➲ : – ➚ ➯ ➭ ➽➭ ➫➨➯ ❰ ➮ ❒ à ❰ ❒ ➱ ❒ × á - 3’UTR - Ý ❰ Þ ➬ ❒ × ß Ù ❐ - 3’UTR - ➫➨➯ ➽➲ ➵ ➼ ➫ ➭ ➯ × â Þ - G ➼➽ ➶ ➼ ➯ 30. G ä å æ ä ç 25. H ä èéê ä å ë êé ì é í ä èé ë î å ë å ä 3’ ï ñ ò ó ä ò å ñ ò ó ó ô ò ä í ä ò ë çé å ñ ç 3’UTR -F ï ä ò õ ö UTR-R 1 ï ä ò ÷ ø . M, 100 ë æ êä ï ï ñ ç . M 1 2 200 ù ú 500 ù ú 1000 ù ú O û ü ýþ ÿ ✁ü ✂ û ✄ ☎ ý þ 3’UTR ✆ ü ✝ ý û ü ✂ ü ✞ ✁ü ✆ ý þ ✄ þ ✁ ý ✞ ✟ ý þ ✁ ü þ ✄ ☎ ýþ ✄ ✄ ✟ þ ✞ þ ✠ û ü ☎ ýû ✁ ✠ ý ✁ü ✂ ü✞ G ✟ ✁ -F ✟ þ ÿ ✟ ✞ ✡ û ü ý þ ÿ ✁ü ☛☞ ✌ ☛ ☞ 3’UTR ✆ ü ✁ ý ✍ ý ✎ ✏ ✞ þ þ ✑ ✒ ☛ ✓ ✔ ✌ ✕☞ ✖ ✆ þ ✠ û ü☎ ýû ✁ ✠ ý✁ü ✂ ü ✞ G ✟ ✁ -R ✟ þ ÿ ✟ ✞ ✡ û ü ý þ ÿ ✁ü ✗ ✌ ✘ ✔☛ ☞ ✌ ☛ ☞ 3’UTR ✆ ü ✁ ý ✍ ý ✎ ✏ ✞ ü û ü ✑ ✒ ☛ ✓✔ ✌ ✕☞ ✖ . H ✁ü ✎ ✁ ý✞ ✟ ýþ ✁ü þ ✄ ☎ ý þ ✟ þ ✙ ✟ ✞ ✞ þ ✍ ✏ ✚ ✆ ü ✍ ✄ ü þ ✚ ✎ ✏ ✁ü ✎ ✁ ý ✞ ✟ ý þ ✁ü þ ✄ ÿ ý ✎ ✏ ✆ ü ✠ ý û ✡ ✎ ý ✏ ✟ ✙ ✟ þ ✄ 5’ ✂ û ✄ ☎ ýþ 3’UTR ✛ ✜✢ ✜ ✗ G ☎ ✍ û 28 ✆ þ 29, ✣ þ ✄ G ✤ ✥ ✦ ✤ ✧ 27. H ✤ ★✩✪ PCR ✥ ✫✬ ✭ ✭ ✮ ✬ ✤ ✯ ✤ ✬ ✰ ✱ NDA3’UTRM ✥ ✰ ✥ ✤ ★ ✫✦ ✤ ✭ ✤✩ ✲ ✫✳✤✯ ✤ ✬ ✴ ✤ ✬ ✰ ✤ ★✤ ✬ ✭ ✤ ✬ U ✦ ✵ -F ✴ ✤ ✬ G ✮ ★ -R ★ ✫✧✳ ✤ G ✮ ★ -F ✴ ✤ ✬ N ✶ ★ ✳ -R ★ ✫✦ ✤ ✭ ✤✩ ✰ ✧✩ ✥ ✫ ✧ . P ✤ ★✤ ✬ ✭ ✤ ✬ U ✦ ✵ -F ✴ ✤ ✬ G ✮ ★ -R ✴ ✩ ✭ ✮ ✬ ✤✯ ✤ ✬ ✮ ✬ ✳ ✮ ✯ ✥ ✫ ✬ ✭ ✤ ✥ ✰ ✪✩ ✷ ✩✯ ✤★✩ ★ ✩★✩✰ ✤ ✬ ✷ ✧ ✤ ✭ ✥ ✫✬ 3’UTR ★ ✫ ✦ ✫ ✪✤ ✸ ✯ ✩ ✧ ✩ ✹ ✺ ✻ ✼✽✾ ✿❀ ❁ 1-6, ✴ ✤ ✬ ✰ ✤★ ✤ ✬ ✭ ✤ ✬ G ✮ ★ -F ✴ ✤ ✬ N ✶ ★ ✳ -R ✮ ✬ ✳✮ ✯ ✥ ✫ ✬ ✭ ✤ ✥ ✰ ✪✩ ✷ ✩ ✯ ✤ ★✩ ★ ✩★✩✰ ✤ ✬ ✴ ✩ ★ ✫ ✦ ✫✪✤✸ ✯ ✤ ✬ ✤ ✬ ✹ ✺ ✻ ✼✽✾ ✿❀ ❁ 7-12. M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ❂❃❃ ❃ ❄❅ ❆ ❃❃ ❄❅ G ✤ ✥ ✦ ✤ ✧ 26. H ✤ ★✩✪ ✧✫ ✯ ✶ ✥ ✦ ✩ ✬ ✤ ★✩ ✤ ✬ ✳ ✤ ✧✤ ❇ ✫ ✯ ✳✶ ✧ ✰ ✱ NDA ✴ ✤ ✬ ✰ ❈ NTR TM D-TOPO ❉ ❊ ✤ ✬ ✭ ✥ ✫ ✥ ✦ ✤ ❋✤ ✷ ✧✤ ✭ ✥ ✫✬ 3’UTR ✴ ✤ ✧ ✩ ● . ❍■ ✼■ ❏ ■ ❑▲ ❁ ✽▼ ✺ ❍ L. ✥ ✫ ✬ ✭ ✸ ✤ ★✩✪✯ ✤ ✬ ❇ ✫✯ ✳✶ ✧ RNA ✩ , ✰ ✱ NDA3’UTRM ✥ ✰ ✥ ✤ . ◆ ❖ P ◗ ❘ ❙ ❚ - ◗ ❯ ❱ ❯ ◆ ❲ P ❚ ❲ ◆ ❲ P ❚ ❲ - ❳ ’ ❨ ◗ ❘ ❩❬ ◆ ❬ ❭ ❱ ❪ ❫ ❴ u ❵ ❛ ❜ s ❭ ❝ ’ ❞❡ ❢ ❣ ❤✐ ❤ ❥ ❝ ’ ❞❡ ❢ ❣ ❤✐ ❤❥ ❦❧❦ ♠ ♥ ♦ ♣ q ♦ r s ♠ r t ✉r ✈ ✇ q❧ s ♣ r ①q ② ✇ r ③ ❦❧ s ♣ ❧✇ ① ❧ ♠ ♥ ♣ ①❧ ①♥ r q ④ ❧ s ③ r s ⑤ r s ③ ④ q t r ✇ r ⑥ ♦ r s , ⑤ r q♣ ♥ ♥ ✇ ♥ ♣ r s ♠ ❧ ✇ ♥ ⑦ r s ③ ♣ ❧✇ ♠ r ⑦ q ♦ , ⑧⑨ ⑩ ❶❷❸ ❶❹ ❷ ❶❺ ❶❻ ❸ ④ q ④ r ⑦ r❦ ❼ ❧ ♦ ♣ ✈ ✇ ⑥ ❽ NDA G r ❦♠ r✇ G ❾❿ ➀ ❾ ➁ 29. P ➂ ➃ ➄ ➂ ➅ ❾ ➅ ❾ ➁❾ ➃ ➆ ❾ ➇➈➉ ➇ ➂➊ ➋ ➂ ➃ ➇➈ ➃ ➌ ➍ ❾ ➁ ➈ 6 ➊ ➎ ➃ ➇ ➏ ➁ ➋ ➊ ➇ ➈ 3’UTR M ❿ ➐ ❿ ❾ ➊ ➂ ➍ ❾➉❾ ❿ ➑ ➂➊ ➏ ➎ ➁ ➐ ➒ NDA ➄ ❾ ➃ ➌ ❿ ➂ ➃ ➌ ➌ ➋ ➃ ❾ ➊ ❾ ➃ ➐ ➁ ➈❿ ➂ ➁ G ➋ ➇ -F. G ❾❿ ➀ ❾ ➁ 28. P ➂ ➃ ➄ ➂ ➅❾ ➅ ❾ ➁❾ ➃ ➆ ❾ ➇➈➉ ➇➂➊ ➋ ➂ ➃ ➇ ➈ ➃ ➌ ➍ ❾ ➁ ➈ 6 ➊ ➎ ➃ ➇ ➏➁ ➋ ➊ ➇➈ 3’UTR M ❿ ➐ ❿ ❾ ➊ ➂ ➍ ❾ ➉❾❿ ➑ ➂➊ ➏ ➎ ➁ ➐ ➒ NDA ➄ ❾ ➃ ➌ ❿ ➂ ➃ ➌ ➌ ➋ ➃ ❾➊ ❾ ➃ ➐ ➁ ➈❿ ➂ ➁ G ➋ ➇ -R. 30. D ➓ ➔ →➣→ ↔ ↕➙➣ , ➛ ➓➣→ ➜ ➙ ➔ ➝ → UTR ➓➞ ➓ ➔ ➓➟ ➠ → ➞ ↕➜ ➠ ➓➡ ↕ ➓➜ → ➞ , ➢ → ➞ ➤ ➔ ➓➜ ➥ ➞ ➟ ➠ ➥ ➣ ➥ ➣ ➙➦ ➡ ➠ ➥ ↔ ➥ ➟ ➙ ➠ ➜ ➥ ➞ ↕➟ ➓ ➟ ➝ ➟ ➓➧ ➨ ➩ ➫➭ ➨ ➫➯ ➫➲ ➳ ➵→ ➤ ➝ ➞ ➤ , ↔ → ➜ → ↔ RNA ➢ → ➞ ➤ ➔ ➓ ➦ → ↕ ➓ ➣ ➜ → ➞ ↔➙↔➛ ➙ ➞ ➟➝ ➜ ➝ ➟ →↕ ➤ → ➞ ➔ → ➔ ↕ RNA. ➔ ↕ RNA ➢ → ➞ ➤ ➔ ➓➦ →↕ ➓➣➜ → ➞ ➥ ➣ ➙➦ ↕ ➙ ➣ ↕➝ →➟ ➝ ➥ ➠ ➤ → ➞ ➓ ↕ ↔➙ → ➜ → ➞ ➔ ➓➜ ➙➞ →➣ ➓ ➥ ➣ ➙ ➦ ➙ ➞ ➸ ➓↔ ➺ ➫ ➻➼ ➽ ➔ → ➞ ➔ ➓ ➡ ➥ ➟ ➥ ➞ ➤ ↔➙ ➞ ➵ →➔ ➓ ➔ ↕ RNA ➛ ➙ ➠ ➝ ➜ ➝ ➠ → ➞ ➜ ➙ ➾ ➓ ➣ ➔ → ➞ ↕ ➙ ➣ → ➞ ➵➝ ➟ ➞ ➢ → ↕→ ➣→ ➦ ↕→ ➟➝ ➝ ➟→ ↕ ➞ ➢ → ➚ ➲ ➯➫ ➪ ➼ ➲ ➪ ➼ ➛ ➙ ➠ →↕➥ ↕ ➓→↕ ➓ ➔ ➙ ➞ ➤ → ➞ RISC ➝ ➞ ➟➝ ➜ ↔➙➞ ➔ ➙ ➤ ➠ →➔ → ↕ ➓ ↔ RNA ➟→ ➠ ➤ ➙➟ ↕ ➙➦ ➓➞ ➤ ➤ → ➙ ➜ ↕ ➡ ➠ ➙ ↕ ➓ ➤ ➙ ➞ ➔ → ➡ →➟ ➔ ➓ ➟ ➙➜ → ➞ ➔ →➣→ ↔ ➛ ➙➠ ➛ →➤ → ➓ ➣ ➙➶ ➙➣ H → ↔↔➥ ➞ ➔ ➼ ➯ ➚ ➹ . 2000; M →➟ ➸ ➜ ➙ ➼ ➯ ➚ ➹ . 2001; W → ➟ ➙➠ ➦ ➥ ➝ ↕ ➙ ➼ ➯ ➚ ➹ . 2001; H → ➞ ➞ ➥ ➞ 2002; P ➣ →↕➟ ➙➠ ➜ 2002; M ➙➓↕➟ ➙ ➠ T ➝ ↕ ➾ ➦ ➣ 2004. ➘ ➴➷ ➬➮➱ ✃ ➴❐➷ ➮❒ ❮ . tu ❰ ÏÐ Ñ ÒÓ Ï ns Ô ÕÖ× Ø × ÙÚ➬ Û ➷ ➬ ÜÖÝÞ Ö ßà á â ➘ ã ä ❐Ü❐➷ P ➣ →↕ ↔ ➓ ➔ ➡ å NDA3’UTRM ↔➡ ↔→ ➔ ➓ ➓➞ ➟ ➠ ➥ ➔ ➝ ➜ ↕ ➓➜ → ➞ ➜ ➙ ➔ →➣ → ↔ æ . ➯ ➨ ç ➼ è ➚ ➻ ➫ ➼ ➲ ➪ EHA101 ➔ ➙ ➞ ➤ → ➞ ↔➙ ➞ ➤ ➤ ➝ ➞ → ➜ → ➞ ↔ ➙ ➟ ➥ ➔ ➙ ➙ ➣ ➙ ➜ ➟ ➠ ➥ ➡ ➥ ➠ → ↕ ➓ . æ . ➯ ➨ ç ➼ è ➚ ➻ ➫ ➼ ➲ ➪ EHA101 ➔ ➓ ➡ →↕➟ ➓ ➜ → ➞ ↔➙↔➛ → é → ➡ ➣ →↕ ↔ ➓ ➔ ➡ å NDA3’UTRM ↔➡ ↔ → ➔ ➙➞ ➤ → ➞ ↔ ➙ ➣ →➜ ➝ ➜ → ➞ PCR ➟ ➙ ➠ ➦ → ➔ → ➡ ➜ ➥ ➣➥ ➞ ➓ ➛ →➜ ➟ ➙ ➠ ➓ ➢ → ➞ ➤ ➔ ➓➡ ➙➠ ➥ ➣ ➙➦ ➔ → ➠ ➓ ➦ → ↕ ➓ ➣ ➙➣ ➙➜ ➟ ➠ ➥ ➡ ➥ ➠ → ↕ ➓ ↔➙ ➞ ➤ ➤ ➝ ➞ →➜ → ➞ ➡ ➠ ➓ ↔➙➠ U ➛ ê -F ➔ → ➞ G ➝ ↕ -R, ➝ ➞ ➟➝ ➜ ↔ ➙➞ ➤ → ↔➡ ➣ ➓ ➧ ➓ ➜ →↕ ➓ ➧ ➠ →➤ ↔➙ ➞ 3’UTR ➢ → ➞ ➤ ➛ ➙ ➠ ➥ ➠ ➓ ➙➞ ➟→ ↕ ➓ ➚ ➲ ➯➫ ➪ ➼ ➲ ➪ ➼ G → ↔ ➛ → ➠ 31 ➜ ➥ ➣ ➥ ↔ 1-4, ↕ ➙ ➠ ➟→ ➡ ➠ ➓ ↔➙ ➠ G ➝ ↕ -F ➔ → ➞ N ➥ ↕➟ -R, ➝ ➞ ➟ ➝ ➜ ↔➙ ➞ ➤ → ↔➡ ➣ ➓ ➧ ➓➜ →↕ ➓ ➧ ➠ → ➤ ↔ ➙➞ ➢ → ➞ ➤ ➛ ➙➠ ➥ ➠ ➓ ➙ ➞ ➟ →↕ ➓ ➪ ➼ ➲ ➪ ➼ G → ↔ ➛ → ➠ 31 ➜ ➥ ➣➥ ↔ 5 -8. S ë ì í î : RB ï ðñ H I, òñ ð I, ó ô õ I, ö ô ð I, ÷ø ù I LB S ë ì í B: RB ú û ð H I, üý õþ III, ÿ ù R V LB S ë ì í ✁ : RB ÿ ù R I, ✂ ✄☎ I, ò ñ ð I, ï ð ñ H I, ÷ ø ù I, N ù ☎ I, ÿ ù R V, ✂ ✄☎ I, ÿ ù R I LB S ë ì í ✆ : RB ÿ ù R I, òô ✝ I, ï ðñ H I, ò ð I LB S ë ì í ✞ : RB ÿ ù R I, ÿ ù R V, üý õþ III LB G ✟ ✠ ✡ ✟ ☛ 30. F ☛ ✟ ☞ ✠ ✌✍ 3’UTR ☞ ✌✍ ✎ ✌✍ ✏ ✟ ✍ ✑ ✒ H + -ATPA ✓ ✌ ✠ ✌ ✠ ✡ ☛✟✍ ✎ ✔✟ ✓✠ ✟ ✑ ✟ ☛✒ M. ✕✖ ✗✖ ✘ ✖ ✙✚ ✛✜✢ ✣ ✕ L. ✠ ✌✠ ✡ ✌ ✍ ✤✥ ✦ ✧ ☛✒✌ ✍ ✤ ✟ ✓✒ ✡ ✌ ☛ ✥ ✔✟✍ ☞ ✤ ✌☛✡ ✟ ✔ ✒ ✦ ✏ ✟✍ ☞ ✑ ✒✓✌✔ ✒ ✍ ☞ ✒ ✧ ✔ ✌ ★ ✩ ☛✟☞ ✠ ✌ ✍ ✑ ✟ ☛ ✒ ☞ ✌ ✍ ✪ ✣ ✫ . B ✒ ✔✟ ✤ ✌ ☛✌ ✦ ✓✎ ☛ ✌✓✒ , ✠ ✟ ✦ ✟ ✩ ☛✟☞ ✠ ✌ ✍ 3’UTR ✠ ✌✠ ✡ ✌✍ ✤✥ ✦ ✑ ✓ RNA ✑ ✟✍ ✩ ☛ ✟ ☞ ✠ ✌ ✍ ☞ ✌✍ ✪ ✣ ✫ ✠ ✌ ✠ ✡ ✌✍ ✤✥ ✦ ✗ ✬ ✬ ✭ . K ✮✯ ✮ K ✰ ✱ ✰ ✱ PCR ✲ ✳✴ ✵ ✶ ✴ ✷✳✴ ✵ ✵ ✸ ✴ ✶ ✹ ✶ ✴ ✹ ✳✲ ✸ ✶ ✺ ✶ ✻✶✴ ✵ ✺ ✼ ✽ ✷✳✼ ✲ ✽ ✶ ✾✶✻ ✷✳ ✴ ✵ ✿ ✶ ✻✽ ❀ ✹ ✶✴ ✺ ✽ ✾ ✶ - ✺ ✽ ✾✶ ❁ ✳✼ ✸ ✹ ✸ ✼ ✶✴ ✻ ✳ ✹ ✽ ✾ ✶ ✼ 750 ✺ ❁ . H ✶ ✻✽❀ ✾✳✼ ✻ ✳ ❁ ✸ ✾ ✷✳✴ ✸ ✴ ❂ ✸ ✹ ✹ ✶✴ ✶ ✲ ✶ ✴ ❃ ✶ ❄ ✼ ✶ ✵ ✷✳✴ 3’UTRM ✷ ✺ ✷ ✶ ❃ ✶ ✴ ✵ ❁ ✳ ✼ ✶ ✲ ✶ ✲ ✽ ✶ ✴ ✾ ✶✼ ✶ ✻ ✳ ✹ ✸ ✳✴ ✺ ✼ ❅ ✷ ❅ ✾✳✼ ❆ ❇ ❆ ❈ ❆ ❉ ❊❉ ❋ ● ✲ ✶ ✴ ❍ ❆ ■ ❏❉ ❋ ❑▲ ▼ G ✶ ✷ ❁ ✶✼ 31 ✹ ❅ ❀ ❅ ✷ 1-4 ✻ ✳✼ ✾ ✶ ✻ ✳✹ ✸ ✳ ✴ ❍ ❆ ■ ❏ ❉ ❋ ❑ ▲ ▼ ✲ ✶✴ ✾✳ ✼ ✷ ✽ ✴ ✶ ✾ ❅ ✼ ❋ ◆ ■ G ✶ ✷ ❁ ✶✼ 31 ✹ ❅ ❀ ❅ ✷ 5-8. H ✶✻✽ ❀ ✾ ✳ ✼ ✻ ✳❁ ✸ ✾ ✷✳ ✴ ❂ ✳ ❀ ✶✻ ✹ ✶✴ ❁ ✶ ✿ ❖ ✶ P ✳✹ ✾ ❅ ✼ ❃ ✶ ✴ ✵ ✷ ✳✷❁ ✶ ❖ ✶ ✻ ✳✹ ✸ ✳ ✴ DNA 3’UT RM ✷✺ ✷✶ ❁ ✳✼ ✸ ❀ ✶✴ ✵ ✾✳✼ ❁ ✶ ❀✽ ✹ ✾✳ ❀ ✶✿ ❁ ✳✼ ✿ ✶ ✻✽❀ ✲ ✽✽ ✴ ✾✼ ❅ ✲ ✸ ✹ ✻✽ ✹ ✶ ✴ ✹ ✳ ✲ ✶ ❀✶ ✷ ◗ . ❊ ❆ ❘ ▲ ❙❚ ❯❉ ▲ ❋ ■ ✲ ✶✴ ✻✽ ✶✺ ✲ ✽ ✽✴ ✾✼ ❅ ✲ ✸ ✹ ✻✽ ✹ ✶ ✴ ✹ ✳ ✲ ✶❀ ✶ ✷ ✾ ✶✴ ✶ ✷ ✶✴ ✾ ✶ ✼ ✵ ✳ ✾ , ❱ ▲❏ ❚ ■❊◆ ❘ ❚ ❘ ❚ ❏ ❚ ❇ ❚ ❊ ❲ ▼❉❯❆ ❘ L. ❳ ❨ ❩❨ ❬ ❨ ❩ ❳ ❭ ❨ ❩ ❪ ❫ ❴ ❩❵❛ ❜ ❨ ❪ ❵❝ ❳ ❭ ❨ ❩ ❪ ❞ ❡ ❭❬ ❨ ❪ ❵ ❢❣ ❤ ❵ V ✳ ✹ ✾ ❅ ✼ ✳✹ ✻✺ ✼ ✳✻✽ RNA ✽ ✾ ✳ ❀ ✶✿ ❁ ✳ ✼ ✿ ✶✻ ✽❀ ✲ ✽✽ ✴ ✾✼ ❅ ✲ ✸ ✹ ✻✽ ✹ ✶ ✴ ✹ ✳ ✲ ✶❀ ✶ ✷ ✾ ✶ ✴ ✶ ✷ ✶✴ ❱ . ❘ ❚ ❏ ❚ ❇ ❚ ❊ ❲ ▼ ❉ ❯ ❆ ❘ L. ✻ ✳ ✿ ✽ ✴ ✵ ✵ ✶ ✾ ✶ ✴ ✶ ✷ ✶ ✴ ❱ . ❘ ❚ ❏ ❚ ❇ ❚ ❊ ❲ ▼ ❉ ❯❆ ❘ L. ✾ ✼ ✶✴ ✻ ✵ ✳ ✴ ✽ ✹ ❃ ✶✴ ✵ ✷✳ ✴ ✵ ✶✴ ✲ ✸ ✴ ✵ ✲ ✸ ✶ ❄ ✼ ✶ ✵ ✷ ✳ ✴ 3’UTRM ✷✺ ✷ ✶ ✲ ✳✴ ✵ ✶ ✴ ❅ ✼ ✽ ✳✴ ✾ ✶✻ ✽ ✾✳✼ ❁ ✶ ❀✽ ✹ ❃ ✶✴ ✵ ✲ ✽ ✹ ❅ ✴ ✾✼ ❅ ❀ ❅ ❀ ✳ ✿ ✺ ✼ ❅ ✷ ❅ ✾ ✳✼ ✹ ✸ ✶ ✾ ❆ ❇ ❉ ❈ ❆ ❉ ❊ ❉ ❋ ● ✾✳❀✶✿ ✲ ✽✺ ✳ ✼ ❅ ❀ ✳✿ . P ✳ ✴ ✵ ✸ ❂ ✽✶ ✴ ✲ ✳✴ ✵ ✶ ✴ PCR ✷✳ ✴ ✵ ✵ ✸ ✴ ✶ ✹ ✶ ✴ ✺ ✼ ✽ ✷✳✼ U ❁ ✽ F1 ✲ ✶ ✴ G ✸ ✻ R1 ✷✳✴ ✵ ✿ ✶ ✻✽❀ ✹ ✶✴ ✺ ✽ ✾✶ ❁ ✳ ✼ ✸ ✹ ✸ ✼ ✶ ✴ ✻ ✳✹ ✽ ✾✶✼ 950 ✺ ❁ G ✶ ✷ ❁ ✶ ✼ 32, ❁ ✶✼ ✽ ✻ ✺ ✳✼ ✾✶ ✷✶ , ✻ ✳✲ ✶✴ ✵ ✹ ✶✴ PCR ✷ ✳ ✴ ✵ ✵ ✸ ✴ ✶ ✹ ✶✴ ✺ ✼ ✽ ✷✳✼ A ✐✾ F ✲ ✶✴ A ✐✾ R ✷✳ ✴ ✵ ✿ ✶ ✻✽ ❀ ✹ ✶✴ ✺ ✽ ✾✶ ❁ ✳✼ ✸ ✹ ✸ ✼ ✶✴ ✻ ✳ ✹ ✽ ✾✶✼ 500 ✺ ❁ G ✶ ✷ ❁ ✶ ✼ 32, ❁ ✶ ✼ ✽ ✻ ✹ ✳✲ ✸ ✶ . P ✽ ✾ ✶ ❁ ✳✼ ✸ ✹ ✸ ✼ ✶✴ 950 ✺ ❁ ❁ ✳✼ ✶ ✻✶❀ ✲ ✶ ✼ ✽ ✶ ✷ ✺ ❀ ✽ ❄ ✽ ✹ ✶ ✻✽ ❁ ✶ ✵ ✽ ✶ ✴ ✸ ❂ ✸ ✴ ✵ 3’ ✺ ✼ ❅ ✷ ❅ ✾ ✳ ✼ ❆ ❇ ❉ ❈ ❆ ❉ ❊❉ ❋ ● ❂ ✶ ✵ ✸ ✴ ✵ ✻ ✳ ✹ ✽ ✾ ✶ ✼ 300 ✺ ❁ ❥ , ❄ ✼ ✶ ✵ ✷✳✴ 3’UTRM ✷✺ ✷ ✶ ✻ ✳✹ ✽ ✾ ✶ ✼ 255 ✺ ❁ , ✲ ✶✴ ❁ ✶ ✵ ✽ ✶✴ ✸ ❂ ✸ ✴ ✵ 5’ ✵ ✳ ✴ G ✸ ✻ ✻ ✳ ✹ ✽ ✾✶✼ 400 ✺ ❁ , ✻ ✳✲ ✶ ✴ ✵ ✹ ✶✴ ✺ ✽ ✾✶ ❁ ✳ ✼ ✸ ✹ ✸ ✼ ✶ ✴ 500 ✺ ❁ ✷✳✼ ✸ ✺ ✶ ✹ ✶✴ ✿ ✶ ✻✽ ❀ ✶ ✷ ✺ ❀ ✽ ❄ ✽ ✹ ✶✻ ✽ DNA ✳✹ ✻ ❅ ✴ 1 – ✳✹ ✻ ❅ ✴ ❦ ✲ ✶ ✼ ✽ ✵ ✳✴ ✶ ✹ ✾ ✽ ✴ . F ✸ ✴ ✵ ✻✽ ✲ ✶✼ ✽ ✺ ✳ ✴ ✵ ✵ ✸ ✴ ✶ ✶✴ G ❧ ♠ ♥ ❧ ♦ 31. H ❧ ♣qr PCR st ♦✉ ❧ ✈ ❧ ✇ ① ② r ② ③ q ④ . ⑤⑥ ⑦⑧ ⑨⑩ ❶❷⑧❸ ❹ ✉ ❧♣q r tr t ① s ♦② ✇ ② ♦ ❧♣ q . P ❧♣ ❧③ ❺ ❧③ U ♥ ❻ -F ✈ ❧③ G ❼ ♣ -R ✈ q❺ ❼ ③ ❧ ① ❧ ③ ❼ ③ s❼ ① ♠ t③ ❺ ❧ ♠ ✇ rq ❽ q ① ❧♣ q ♣q♣ q✇ ❧ ③ ❽♦ ❧ ❺ ♠ t ③ 3’UTR ❾ ❧③ ❺ ♥ t ♦② ♦ qt ③ s❧♣q ⑩ ❸ ⑤❷ ❹⑧ ❸ ❹ ⑧ 1-4, ✈ ❧③ ✇ ❧♣ ❧③ ❺ ❧③ G ❼ ♣ -F ✈ ❧ ③ N ② ♣s - R ❼ ③ s❼ ① ♠ t ③ ❺ ❧ ♠ ✇ rq ❽q ① ❧ ♣q ♣q♣ q✇ ❧ ③ ❽ ♦ ❧❺ ♠ t③ 3’UTR ❾ ❧ ③ ❺ ♥ t ♦ ② ♦qt③ s❧♣ q ❹⑧❸ ❹ ⑧ 5-8. M 1 2 3 4 5 6 7 8 ❿➀➀➀ ➁ ➂ ➃➀➀ ➁ ➂ ➄ ➅ ➆➇ ➈ ➅ ➉ ➊ ➋ ➆➌ ➉ ➍ ➉ ➎➉ ➏ ➐ ➌ ➋➐ ➊ ➇ ➈➇➉ ➑ ➋➆ ➊ ➉ ➌ ➒ ➉➏ ➓ ➉ DNA ➔ ➉ ➌ → ➍ ➆ → ➐ ➌ ➉ ➊ ➉ ➌ ➑ ➈➒ ➉ → ➉ ➆ ➣ ➈ ➋ ➉ ➊ ➉ ➌ ➉ ➍ ➉ ➎➉ ➏ ➒ ➉ ➆ ➊ . T ➉ ➌ ➉➇➉ ➌ ↔ . ↕➙ ➛ ➙ ➜ ➙ ➝ ➞ ➟➠ ➡➢ ↕ L. ➋➅ ➉ ➌ ➑ → ➈➌ ➆ ➊ ➇ ➈➌ ➐ ➌ ➤ ➐ ➊ ➊ ➉ ➌ ➄ ➈ ➅ ➒ ➈➍ ➉ ➉ ➌ ➥ ➈➌ ➦ ➋ ➆ ➄ ➈ ➍ ➈ ➌ → ➉ ➌ ➋➉ ➌ ➉ ➇➉ ➌ ➊ ➦ ➌ ➋➅ ➦ ➎ ➌ ➦ ➌ - ➋ ➅ ➉ ➌ ➑ → ➈ ➌ ➆➊ . K ➈➋ ➆ ➊ ➉ ➋ ➉ ➌ ➉➇➉ ➌ ➒ ➈ ➅ ➐ ➇ ➐ ➅ 3 ➒ ➐ ➎ ➉ ➌ ➑ ➈ ➋➈➎➉ ➏ ➉ ➊ ➎ ➆➇➉ ➋➆➑➉➑ ➆ , ➋ ➉ ➇➄ ➉ ➊ ➉ ➍ ➉ ➌ ➔ ➉ ➄ ➈➅ ➒ ➈ ➍ ➉➉ ➌ ➔ ➉ ➌ → ➤➈➎➉ ➑ ➉ ➌ ➋➉ ➅ ➉ ➋ ➉ ➌ ➉ ➇➉ ➌ ➋➅ ➉ ➌ ➑ → ➈➌ ➆ ➊ ➍ ➉ ➌ ➌ ➦ ➌ - ➋ ➅ ➉ ➌ ➑ → ➈ ➌ ➆ ➊ ➊ ➦ ➌ ➋➅ ➦ ➎ . P ➈➅ ➋ ➐ ➇ ➒ ➐ ➏ ➉ ➌ ➋ ➉ ➌ ➉ ➇➉ ➌ ➋ ➅ ➉ ➌ ➑ → ➈ ➌ ➆➊ ➇ ➈➌ ➤➉➍ ➆ ➋➈➅ ➏ ➉ ➇ ➒ ➉ ➋ , ➍ ➉ ➐ ➌ ➎ ➈➒ ➆➏ ➊ ➈➣ ➆➎ ➍ ➉ ➌ ➣ ➈ ➌ ➍ ➈ ➅ ➐ ➌ → ➇ ➈➌ → ➐ ➌ ➆ ➌ → G ➉ ➇ ➒ ➉ ➅ 33 A1- A4, ➑ ➈➍ ➉ ➌ → ➊ ➉ ➌ ➋➉ ➌ ➉➇➉ ➌ ➊ ➦ ➌ ➋➅ ➦ ➎ ➋➆➍ ➉ ➊ ➇ ➈ ➌ ➐ ➌ ➤➐ ➊ ➊ ➉ ➌ ➏ ➉ ➇ ➒ ➉ ➋ ➉ ➌ ➄ ➈ ➅ ➋➐ ➇ ➒ ➐ ➏ ➉ ➌ G ➧➨ ➩ ➧➫ 32. H ➧➭➯➲ PCR ➨ ➳➵ ➸ ➸ ➺ ➵ ➧ ➻ ➧ ➵ DNA ➼ ➧➫➯ 4 ➽ ➧ ➵ ➧ ➨ ➧➵ ➽ ➫➧ ➵ ➭ ➸ ➳➵ ➯ ➻ ➯➵ ➼ ➳➾ ➳➵ ➼ ➳➵ ➻ ➚ ➲ ➚ ➨ 2-5, DNA ➽➧➵ ➧ ➨ ➧ ➵ ➻ ➚ ➵ ➽➫ ➚ ➲ ➻ ➚ ➲ ➚ ➨ 1, ➼ ➧ ➵ ➪ ➳ ➻ ➽ ➚ ➫ RNA ➯ ➻ ➚ ➲ ➚ ➨ 6 ➭➳ ➩ ➧➸ ➧➯ ➶ ➳➽➧➻ ➧➵ ➼ ➧ ➵ ➾ ➧ ➭➧ ➵ ➸ ➧➵ U ➩ ➯ F1 – G ➺ ➭ R1 ➭ ➳ ➩ ➧➸ ➧➯ ➾ ➫ ➯ ➨ ➳ ➫ . M ➧ ➼ ➧➲ ➧ ➹ ➘ ➻ ➩ ➲ ➧➼ ➼ ➳➫ ➺ ➵ ➽➺ ➻ ➨ ➳➵ ➸ ➳➽➧ ➹ ➺ ➯ ➺ ➻ ➺ ➫ ➧ ➵ ➴ ➫➧ ➸ ➨ ➳➵ ➷ M 1 2 3 4 5 6 500 ➬ ➮ 1000 ➬ ➮ 850 ➬ ➮ G ➧ ➨ ➩ ➧➫ 33. T ➧ ➵ ➧➨ ➧➵ ➽➫➧➵ ➸ ➳➵ ➯➻ ➹ ➧➭➯➲ ➽➫ ➧ ➵ ➭ ➴➚ ➫ ➨ ➧➭➯ RNA ➯ ➱ ➧➵ ➸ ➨ ➳➨ ➩ ➧✃ ➧ ➴ ➫➧➸ ➨ ➳ ➵ 3’UTRM ➨ ➾ ➨ ➧ ➼ ➳ ➵ ➸ ➧ ➵ ➻ ➚ ➵ ➭ ➽➫ ➺ ➻ ➭➯ ➩ ➳ ➫ ➺ ➲ ➧ ➵ ➸ ➽➳➫➩ ➧➲➯➻ A1 –A4 ➼ ➧ ➵ ➽➧ ➵ ➧ ➨ ➧➵ ➵ ➚ ➵ - ➽ ➫➧ ➵ ➭ ➸ ➳ ➵ ➯➻ B ➱ ➧➵ ➸ ➩ ➳ ➫ ➺ ➨ ➺ ➫ 3 ➩ ➺ ➲ ➧ ➵ ➭ ➳➽➳ ➲ ➧ ➹ ➧ ➻ ➲➯➨ ➧➽➯ ➭➧➭➯ . T ➧ ➨ ➾ ➧ ➻ ➽➧➵ ➧➨ ➧ ➵ ➽➫➧ ➵ ➭➸ ➳➵ ➯➻ ➨ ➳ ➵ ➸ ➧ ➲ ➧➨ ➯ ➸ ➧➵ ➸ ➸ ➺ ➧ ➵ ➾ ➳➫➽ ➺ ➨ ➩ ➺ ➹ ➧ ➵ ➼ ➳ ➵ ➸ ➧ ➵ ➼ ➧ ➺ ➵ ➱ ➧ ➵ ➸ ➶ ➳ ➵ ➼ ➳➫➺ ➵ ➸ ➨ ➳ ➵ ➸ ➺ ➵ ➯➵ ➸ ➼ ➯➩ ➧➵ ➼ ➯ ➵ ➸ ➻ ➧ ➵ ➽➧➵ ➧ ➨ ➧ ➵ ➻ ➚ ➵ ➽➫ ➚ ➲ . 1 ❐ ❒ ❮ ❰ 1 ❐ ❒ 1 1 ❐ ❒ 2 1 ❐ ❒ 3 1 ❐ ❒ 4 Ï ÐÑ Ò ÓÑ Ï ÓÔ Ñ Õ Ó Ñ Ò Ö Ð× Ø Ù Ö Ð× ÓÚ Ï ÓÑ Ù Ø Û ÓÔ G ÓÜ × Ó Ú 33 B. P Ð Ñ Ò Ù ÓÜ × ÓÝ Ó Ñ Þ Ð Ú Ý Ô Ü × Ô Ù ÓÑ ÝÓÑ ÓÜ Ó Ñ Ý Ú ÓÑ ßÒ ÐÑ Ø à Ï Ø Ï Ô Ò Ó Ï Ø ßÐ× Ó × à Ó Ñ á ÖÐ Ù Ò ÓÑ Ò Ò Ô ÓÑ Ðà ß Þ Ú Ð ß Ø Ò ÐÑ Þ ÐÑ Õ ÓÑ Ï Ø H + -ATP Ó ßÐ Ü Ð Ü × Ú ÓÑ Þ ÖÓ ß Ü Ó . G Ó Ñ Ò Ò Ô ÓÑ ÝÐ Ú ßÐ× Ô Ý ÝÐÚ Û Ó Ï Ø à ÓÚ Ð Ñ Ó Þ ÓÏ Ó Ò ÐÑ á Ü ÝÓÑ Ó Ü ÓÑ Ý Ú ÓÑ ßÒ ÐÑ Ø à Ý ÐÖ ÓÙ Ý ÐÚ ß Ø ß ØÞ Ï Ô Ó â Ú ÓÒ Ü Ð Ñ 3’UTR Ï ÐÑ Ò Ó Ñ ÓÚ ÓÙ Ý ÐÚ × ÓÖØà ãä å æçè æé ç æê æë è Ï Ø × Óì ÓÙ à Ð Ñ Ï ÓÖ Ø ßÓ Ý Ô Þ Ú á Ü á Ý ÐÚ à Ô Ó Ý , í î ãï í ãè ãä ð Û Ó Ò Ô Ñ Ò . B Ø Ö Ó à ÐÏ Ô Ó â Ú ÓÒ Ü Ð Ñ 3’UTR ØÑ Ø Ï Ø Ð à ß Þ Ú Ðß Ø à ÓÑ , Ü Ó à Ó Ü RNA- Ñ Õ Ó Ü ÐÜ × Ð Ñ Ý Ô à ßÝÚ Ô à Ý Ô Ú Û ÐÞ Ø Ý Ú ÓÜ × Ô Ý ñ è æò ë ä é ó ô ô ê Ï Ø Ü ÓÑ Ó à ÐÏ Ô Ó â Ú Ó Ò Ü ÐÑ 3’UTR Ü Ð Ü × ÐÑ ÝÔ à Ï ß RNA Ï ÓÑ â Ú ÓÒ Ü Ð Ñ Ò Ð Ñ õ í ñ Ü Ð Ü × ÐÑ Ý Ô à ó ô ô ê . Ï ß RNA Õ Ó Ñ Ò ÝÐ Ú × ÐÑ ÝÔ à Óà Ó Ñ Ï ØÞ á Ýá Ñ Ò á ÖÐ Ù Ð Ñ öØ Ü ÷ãø æç Ü ÐÑ Û ÓÏ Ø Ï ß RNA × ÐÚ Ô à Ô Ú Ó Ñ à ÐùØ Ö 21-26 Ñ Ô à ÖÐ á ÝØ Ï Ó Ï ÓÑ Ô ÝÓ ß ë ä è ãñæä ñæ RNA à Ð ù Ø Ö × Ð Ú Ó ßá ß Ø Ó ß Ø Ï ÐÑ Ò Ó Ñ RISC Ô Ñ Ý Ô à Ü ÐÜ á Ýá Ñ Ò Ü RNA Þ Ð Ñ Õ Ó Ñ Ï Ø Þ Ú á ÝÐØÑ H + -ATP Óß Ð Ü Ð Ü × Ú ÓÑ Þ ÖÓ ß Ü Ó ßÐ Ù ØÑ Ò Ò Ó Ü RNA Ý Ø Ï Óà Ï ÓÞ Ó Ý Ï Ø ÝÚ ÓÑ ßÖÓ ß Ø Ü Ð Ñ Û Ó Ï Ø Þ Ú á ÝÐ Ø Ñ à Ó Ú Ð Ñ Ó ß Ô Ï ÓÙ ÝÐ Ú Ï ÐÒ Ú ÓÏ Ó ß Ø . G ÓÑ Ò Ò Ô ÓÑ ÝÐ Ú Ù ÓÏ ÓÞ Ð à ß Þ Ú Ðß Ø Ò Ð Ñ Ø Ñ Ø Ó à ÓÑ Ü Ð Ñ Ò Ò Ó Ñ Ò Ò Ô Ó à Ý Ø ú Ø Ý Óß ÝÚ Ó Ñ ß Þ á Ú ÝÐ Ú ß Ð à Ô Ñ Ï ÐÚ Õ Ó Ñ Ò Ü Ð Ñ Ò Ò Ð Ú Ó à à Ó Ñ × ÓÑ Õ Óà ß á ÖÔ Ý , ÓßØÜØ ÖÓ Ý , ÓÝ Ó Ô Ü ÐÝ Ó × á ÖØ Ý Ü ÐÖØ Ñ Ý Óß Ø Ü Ð Ü × Ú ÓÑ Þ ÖÓ ß Ü Ó S Ô ßßÜ Ó Ñ , 1994. S ÐÖ ÓØÑ Ø ÝÔ , ÝÓÑ ÓÜ ÓÑ Û Ô Ò Ó Óà Ó Ñ Ü Ð Ñ Ò ÓÖ Ó ÜØ Ò ÓÑ Ò Ò Ô ÓÑ Ù á Ü Ðá ßÝ Óß Ø ß Þ û Ï Ø ßØ Ý á Þ Ö Óß Ü Ó à ÓÚ ÐÑ Ó H + -ATP Óß Ð Ü ÐÜ × Ú Ó Ñ Þ Ö ÓßÜ Ó , ßÐ× ÓÒ ÓØ Þ á ÜÞ Ó Õ Ó Ñ Ò Ü ÐÑ Ò Ð Ö Ô ÓÚ à ÓÑ Þ Ú á Ýá Ñ Ï Ó Ú Ø ß Ø Ý á Þ Ö Óß Ü Ó , Ý ØÏ Óà ÝÐ Ú × ÐÑ ÝÔ à Y á Ô Ñ Ò æè ë ó . 1998 ßÐ Ù ØÑ Ò Ò Ó Ï ÓÞ Ó Ý Ü ÐÑ Ò Ò Ó Ñ Ò Ò Ô ß Ø ßÝÐÜ Ü Ð ÝÓ× á Ö Ø ß Ü Ð Ï Ø Ï Ó ÖÓÜ ßÐÖ . T ÓÑ ÓÜ ÓÑ Õ Ó Ñ Ò Ü Ð Ñ Ò Ó ÖÓÜØ Ò ÓÑ Ò Ò Ô ÓÑ Ù á Ü Ð á ßÝÓ ß Ø ß Þ û ß Ø Ýá Þ ÖÓ ß Ü Ó Û Øà Ó Ï Ø ÝÓÑ Ó Ü Þ ÓÏ Ó Ü ÐÏ Ø Ó Ï Ð Ñ Ò ÓÑ Þ û Ú ÐÑ Ï Ó Ù Ï ÓÑ A Ö Ý Ø Ñ Ò Ò Ø , Ü Ó à Ó Þ û ß Ø Ý á Þ ÖÓ ß Ü Ó Ó à Ó Ñ Ü Ð Ñ Ô Ú Ô Ñ Ï ÓÑ Ü Ð Ñ Õ Ð× Ó× à Ó Ñ Ü Ó ß Ô à Ñ Õ Ó A Ö à Ð Ï Ó ÖÓÜ ßÐ Ö Ý Ó Ñ ÓÜ Ó Ñ ßÐ Ù Ø Ñ Ò Ò Ó Ý ÓÑ ÓÜ Ó Ñ Ü Ð Ñ Ò ÓÖ Ó ÜØ à ÐÚ Ó ù Ô Ñ ÓÑ A Ö . üý þ ÿ ✁✂ ✄☎ ✆✝ þ ÿ ☎ ✆☎ ✞☎ ✆ ÿ ✄☎ ✆✝ ✟ ✂ ✆ þ✠ ÿ ✂ ✄✡☎ ☛ ☎ ☞ ✌ ✂ ✠ ☎ ✞☎ ✆ ✍✁ T ÓÑ Ó Ü ÓÑ M. òë ó ë î ë è ✎ ç ã ø í ò L. Ý Ú ÓÑ ß Ò ÐÑ Øà Õ Ó Ñ Ò ÝÐ ÖÓ Ù Ï Ø Ý Ô Ü × Ô Ù à ÓÑ Þ ÓÏ Ó Ü Ð Ï Ø Ó Ù Ó Ú Ó W Ó ÝÓ Ñ Ó × Ð æè ë ó . 2001 Õ ÓÑ Ò Ü Ð Ñ Ò ÓÑ Ï Ô Ñ Ò 3.2 Ü M A Ö C Ö 3 .6H 2 O Ü Ô Ö ÓØ Ù Ó Ú Ø à Ð -2 Þ ÐÚ ÖÓà Ô ÓÑ A Ö ÝÓÜÞ Ó à Ô Û Ô Ñ Ò Óà ÓÚ ßÐÜÔ Ó ÝÓÑ ÓÜ ÓÑ Õ ÓÑ Ò Ï Ø Ô Û Ø × ÐÚ ì ÓÚ Ñ Ó ù á à ÖÓ Ý , Ï Ó Ñ Ü Ô ÖÓ Ø Ù ÓÚ Ø à Ð -6 Þ ÐÚ Ö Ó à Ô ÓÑ A Ö ÝÓÜÞ Ó à ì ÓÚ Ñ Ó ù á à Ö ÓÝ × Ð Ú à Ô Ú Ó Ñ Ò Þ Ó Ï Ó ÝÓÑ ÓÜ ÓÑ ÝÚ ÓÑ ß Ò ÐÑ Ø à G Ó Ü × Ó Ú 34 A Ï Ó Ñ ÝØÏ Óà × Ð Ú Ô × Ó Ù Þ ÓÏ Ó ÝÓÑ ÓÜ Ó Ñ Ñ á Ñ - ÝÚ Ó Ñ ß Ò Ð Ñ Ø à G Ó Ü × Ó Ú 34 B. W Ó Ú Ñ Ó ù á à ÖÓ Ý Þ ÓÏ Ó Ô Û Ô Ñ Ò Óà Ó Ú ÝÐ Ú × ÐÑ Ý Ô à à Ó Ú ÐÑ Ó ò í ø ã ó ë õ æ Õ Ó Ñ Ò Ï Ø Ðà ß Ô Ï Ó ß Ø Þ Ó Ï Ó Ô ÛÔ Ñ Ò Ó à Ó Ú ÝÓÑ ÓÜ ÓÑ M. òë ó ë î ë è ✎ ç ã øí ò L. Ü Ð Ñ Ò Øà Ó Ý A Ö Ï ÓÖ Ó Ü Û Ô Ü Ö ÓÙ × Ð ßÓÚ W Ó ÝÓÑ Ó × Ð æ è ë ó . 2008 Ó . M í ø ã ó ë õ æ Þ Ó Ï Ó ✏ ✑✒ ✑✓ ✑✒ ✔ . ✕✖ ✗✖ ✘ ✖ ✙✚ ✛✜✢ ✣ ✕ L. ✓ ✤✒ ✥ ✑ ✒ ✦ ✧ ✒ ✥ ✑★ ✑ ✓ ✥ ✩✧ ✪ ✧ ✫ ✬ ✒ ✑ ✏ ✭ ✑ ✒ ✥ ✮ ✤ ✫ ✓ ✧ ✑✏ ✑✒ ✒ ✤ ✥ ✑✏ ✯ ✰ ★✤ ✪ ✯✏ ✑ ✫ 42 ★✤ ✱ ✯ ✒ ✥ ✥ ✑ ✓ ✤✓ ✲ ✧ ✒ ✭ ✑✯ ✑✰ ✯ ✒ ✯ ✏ ✑★ ✭ ✑✒ ✥ ✏ ✯✒ ✥ ✥ ✯ ✏ ✤✫ ✱ ✑ ✦ ✑ ✲ ✪ ✑✏ ✯ ✬ ✒ ✏✫ ✯ ✳ ✑✩✤ ✒ ✏ , ✓✯★ ✑✩✒ ✭ ✑ A ✩ W ✑ ✏ ✑✒ ✑ ✮ ✤ ✴ ✙ ✖ ✗ . 2008 ✑ . B ✤✫ ✪ ✧ ✫ ✑✒ ✥ ✒ ✭ ✑ ✵ ✑ ✫ ✒ ✑ ✶ ✬ ✪ ✩ ✑ ✏ ✲ ✑✦ ✑ ✧ ✷ ✧ ✒ ✥ ✑✪ ✑ ✫ ✏ ✑✒ ✑✓ ✑✒ ✏✫ ✑✒ ★ ✥ ✤ ✒ ✯ ✪ ✦ ✯ ✦ ✧ ✥ ✑ ✦ ✯★✤ ✮ ✑ ✮ ✪ ✑✒ ✪ ✑ ✫ ✤ ✒ ✑ ✮ ✤ ✫ ✪ ✧ ✫ ✑✒ ✥ ✒ ✭ ✑ ✪ ✤ ✓ ✑✓ ✲ ✧ ✑✒ ✏ ✑ ✒ ✑ ✓ ✑✒ ✧ ✒ ✏✧ ✪ ✓ ✤✒ ✥ ✤ ✪ ★✧ ✦ ✑★✯ ✕ ✣ ✢ ✜✗ ✖ ✸ ✴ ✲ ✑✦ ✑ ✧ ✷ ✧ ✒ ✥ ✑ ✪ ✑ ✫ . K ✤ ✓✧ ✒ ✥ ✪ ✯✒ ✑✒ ✹ ✰ ✧ ✒ ✥ ★✯ ✥ ✩✧ ✪ ✬ ★ ✑ ✭ ✑✒ ✥ ✦ ✯ ✥ ✧ ✒ ✑ ✪ ✑ ✒ ★ ✤ ✮ ✑✥ ✑ ✯ ✲ ✫ ✤ ✪ ✧ ✫ ★ ✬ ✫ ✪ ✬ ✓ ✲ ✬ ✒ ✤ ✒ ✕ ✣ ✢ ✜✗ ✖ ✸ ✴ , ✑ ★ ✑✓ ✥ ✩✧ ✪ ✧ ✫ ✬ ✒ ✑ ✏ , ✦ ✯ ✑✩✯ ✱ ✪ ✑✒ ★✤ ✮ ✑✥ ✑ ✯ ★✧ ✓ ✮ ✤✫ ✤ ✒ ✤✫ ✥ ✯ ✧ ✒ ✏ ✧ ✪ ✓✤✓ ✲ ✤ ✫ ✏ ✑ ✱ ✑✒ ✪ ✑✒ ✦ ✯✫ ✯ ✦ ✑✫ ✯ ✶ ✤ ✪ ✑ ✓ ✑✒ A ✩ . P ✑✦ ✑ ✲ ✤ ✒ ✤ ✩✯ ✏✯ ✑ ✒ ✯ ✒ ✯ , ✲ ✤✫ ✏✧ ✓ ✮ ✧ ✱ ✑✒ ✏ ✑ ✒ ✑ ✓ ✑ ✒ ✏ ✫ ✑✒ ★ ✥ ✤ ✒ ✯ ✪ ✏ ✤✫ ✱ ✑✓ ✮ ✑✏ ✬ ✩✤ ✱ ✲ ✤ ✫ ✩ ✑ ✪ ✧ ✑✒ 3.2 ✓ M A ✩ C ✩ 3 .6H 2 O. G ✤ ✷ ✑ ✩ ✑ ✑✵✑✩ ✭ ✑ ✒ ✥ ✓✧ ✒ ✶✧ ✩ ✑✦ ✑ ✩ ✑ ✱ ✲ ✤ ✫ ✏✧ ✓ ✮ ✧ ✱ ✑✒ ✑✪ ✑ ✫ ✏✤ ✫ ✱ ✑ ✓ ✮ ✑ ✏ G ✑ ✓ ✮ ✑ ✫ 35. D ✑✧ ✒ ✓✧ ✩ ✑ ✯ ✓ ✤✒ ✧ ✒ ✷ ✧ ✪ ✪ ✑✒ ✥ ✤ ✷ ✑ ✩ ✑ ✪ ✤ ✪ ✧ ✒ ✯✒ ✥ ✑✒ ✲ ✑✦ ✑ ✱ ✑✫ ✯ ✪ ✤ -2 ★✤✏ ✤✩ ✑✱ ✑ ✲ ✩ ✯ ✪ ✑ ★✯ A ✩ ✩ ✑✩✧ ✮ ✤ ✫ ✧ ✮ ✑ ✱ ✓ ✤✒ ✷ ✑✦ ✯ ✶ ✬ ✪ ✩ ✑ ✏ ✲ ✑ ✦ ✑ ✪ ✤ -7 G ✑✓ ✮ ✑ ✫ 36 A1, A2, A3, ✦ ✑✒ A4, ★✤ ✦ ✑ ✒ ✥ ✪ ✑✒ ✏ ✑ ✒ ✑ ✓ ✑✒ ✒ ✬ ✒ - ✏ ✫ ✑ ✒ ★ ✥ ✤✒ ✯ ✪ ✓✤ ✒ ✧ ✒ ✷ ✧ ✪ ✪ ✑✒ ✲ ✤ ✫ ✏✧ ✓ ✮ ✧ ✱ ✑✒ ✒ ✬ ✫ ✓ ✑✩ G ✑✓ ✮ ✑✫ 36 B. H ✑★✯✩ ✏✤ ✫ ★✤ ✮ ✧ ✏ ✓✤ ✒ ✧ ✒ ✷ ✧ ✪ ✪ ✑✒ ✮ ✑ ✱ ✵ ✑ ✪ ✬ ✒ ★✏ ✫ ✧ ✪ ★✯ RNA ✯ ✦ ✑ ✫ ✯ 3’UTRM ✓ ✲ ✓ ✑ ✦ ✯✦ ✧ ✥ ✑ ✦ ✑✲ ✑ ✏ ✓✤ ✒ ✥ ✱ ✤✒ ✏ ✯ ✪ ✑ ✒ ✦ ✑ ✒ ✺ ✑✏ ✑✧ ✓✤✒ ✧ ✫ ✧ ✒ ✪ ✑ ✒ ✤ ✪ ★ ✲ ✫ ✤ ★✯ ✥ ✤ ✒ ✲ ✤✒ ✭ ✑✒ ✦ ✯ H + -ATP ✑★✤ ✓✤ ✓ ✮ ✫ ✑✒ ✲ ✩ ✑★✓ ✑ ✲ ✑✦ ✑ ✔ ✴ ✗✖ ✻ ✙✼ ✕✖ ✕✖ ✗ ✖ ✘ ✖ ✙✚ ✛✜ ✢ ✣ ✕ L. ✦ ✑ ✒ ✷ ✧ ✥ ✑ ✦ ✑ ✲ ✑ ✏ ✓✤✓ ✮ ✤ ✫ ✯ ✪ ✑ ✒ ✦ ✧ ✥ ✑✑✒ ✮ ✑✱ ✵ ✑ ✥ ✤✒ ✲ ✤✒ ✭ ✑✒ ✦ ✯ H + - ATP ✑ ★✤ ✓✤ ✓ ✮ ✫ ✑✒ ✲ ✩ ✑ ★✓ ✑ ✲ ✑✦ ✑ ✔✴✗ ✖ ✻ ✙ ✼ ✕✖ ✕✖ ✗ ✖ ✘ ✖ ✙ ✚ ✛✜ ✢ ✣ ✕ L., ✔✕✽ ✕✖ , ✓✤✫ ✧ ✲ ✑✪ ✑ ✒ ★ ✑ ✩ ✑✱ ★ ✑ ✏ ✧ ✥ ✤✒ ✭ ✑ ✒ ✥ ✏ ✤ ✫ ✩ ✯ ✮ ✑✏ ✦ ✑ ✩ ✑✓ ✏ ✬ ✩ ✤✫ ✑ ✒ ★✯ ✏ ✑ ✒ ✑ ✓ ✑ ✒ ✦ ✑✫ ✯ ✶✤ ✪ ✑ ✓ ✑ ✒ A ✩ . H ✑ ✩ ✯ ✒ ✯ ★✤ ✷ ✑✩ ✑✒ ✦ ✤✒ ✥ ✑ ✒ ✲ ✤✫ ✒ ✭ ✑✏ ✑ ✑✒ ✮ ✑ ✱ ✵ ✑ ✪ ✬ ✒ ★✏✫ ✧ ✪ ★ ✯ RNA ✯ ✦ ✑ ✲ ✑✏ ✦ ✯ ✥ ✧ ✒ ✑ ✪ ✑✒ ✧ ✒ ✏✧ ✪ ✓✤✓ ✲ ✤ ✩ ✑ ✷ ✑✫ ✯ ✲ ✤ ✫ ✑✒ ✑✒ ★✧ ✑ ✏ ✧ ✥ ✤ ✒ ✲ ✑ ✦ ✑ ✏ ✑✒ ✑ ✓ ✑✒ M ✯ ✪ ✯ ✴ ✙ ✖ ✗ . 2005; I ★✩ ✑✓ ✴ ✙ ✖ ✗ . 2005; W ✑ ✏ ✤✫ ✱ ✬ ✧ ★✤ ✴ ✙ ✖ ✗ . 1998; C ✱ ✧ ✑✒ ✥ M ✤ ✭ ✤ ✫ ✬ ✵✯ ✏ ✾ 2000; M ✬ ✫ ✯ ✏ ✬ ✱ ✴ ✙ ✖ ✗ . 2005. B 1 ✿ ❀ A 1 ✿ ❀ G ❁❂ ❃ ❁❄ 34. A ❅ ❁❄ ❆ ❁ ❇ ❁ ❂ ❁ ❇ ❆ ❄ ❁ ❇ ❈❉ ❊❇ ❋ ❅ ● A ❍ ❁ ❇ ❇ ■ ❇ - ❆ ❄ ❁ ❇ ❈ ❉ ❊ ❇ ❋ ❅ ● B ❈ ❊❆❊❏ ❁❑ ▲ ❊❄❏ ❁ ❅ ▼ ❁ ❇ ◆ ❖P ❂ M A ❏ ❍ ❁ ❇ ✲ ◗ 4 ❍ ❁❏ ❁ ❂ ❏ ❁❄ ▼ ❆❁ ❇ ❑ ❁❄ ❁ W ❁ ❆❁ ❇ ❁ ❃ ❊ ❘ ❙ ❚ ❯ 2001 ❈❊ ❏ ❁❂ ❁ 6 ❑ ❁❄ ❋ . W ❁❄❇ ❁ ❱ ■ ❅ ❏ ❁❆ ▲ ❁ ❍ ❁ ▼ ❲▼ ❇ ❉ ❁❅ ❁❄ ❆ ❁ ❇ ❁ ❂ ❁ ❇ ❆ ❄ ❁ ❇ ❈ ❉ ❊❇ ❋❅ ❂ ❊❂ ▼ ❍ ❁❄ ▲ ❁ ❍ ❁ ❑ ❁❄ ❋ ❅ ❊ -6 A ❍ ❁❇ ❆❊❆❁ ▲ ❃ ❊ ❄ ❳ ❁ ❄ ❇ ❁ ❱ ■ ❅ ❏ ❁❆ ▲ ❁ ❍ ❁ ❆❁❇ ❁ ❂ ❁ ❇ ❇ ■ ❇ ❆ ❄ ❁ ❇ ❈❉ ❊❇ ❋ ❅ B. ❨❩ ❬❭❪ ❫❴❵❛ ❜ V ❝❞ ❡❢ ❣ RNA ❤ ✐ ❥ ❦ ❧ ♠❝ ♠♥ ❥ ♦ ❥ ♣ ❣ ❥ ❧ ♠ ❝ ❦ 3’UTRM ♠ q ♠ ❥ ♥ ❝❣ r ❥ s❤ t ✉ ❤ ❞ ❢ ❦ s ❡❣ ✈ ❞ s❤ ✉ ❥❦ ✉ ❤ s❤s❤ q ❞ ❥ ❦ ❞ ❝ ❧ ❝ ❦ ❢ ♠ ❡ ❥❦ ❥ ♠❥❦ ✇① ②③ ④⑤ ⑥ ⑦③ ⑦③ ② ③ ⑧ ③ ⑤ ⑨ ⑩❶ ❷❸ ⑦ L. ♠❝t❥ t ✈ ❤ ❹❺ ⑩ ⑥ ⑧ ③ ❷⑤① ⑩❶❸ ⑦ ⑤❸ ⑦① ❻ ③ ❷❶ ① ❼ ④ EHA101. P ❥ ✉ ❥ t❥❣ ✈ ❡ ❥ ❦ r ❥❣ ❥ ✐ ❥❦ ❧ ♠❝ ❦ ❧ ❥❦ ✉ ✈ ❦ ❧ ❽ ❝❞ ❥ ♠ ❥ ❦ A t 3.2 ♠ M A t C t 3 .6H 2 O, ❡❥❦ ❥ ♠ ❥ ❦ ❡ ❣ ❥❦ s ❧ ❝ ❦ ❤ ❞ ♠ ❝ ❦ ❧ ❥ t ❥ ♠ ❤ r ❥ ♠♥ ❥ ❡❥❦ q ❝ ❣ ❡ ✈ ♠ ♥ ✈ r ❥❦ ❡❝❣ ✈ ❡ ❥ ♠❥ q ❝ ❣ ❡ ✈ ♠ ♥ ✈ r ❥❦ ❥❞ ❥❣ ✉ ❥ ❦ ✉ ❥ ✈ ❦ , s ❝ ✉ ❥ ❦ ❧ ❞ ❥❦ ❦ ❢ ❦ - ❡ ❣ ❥❦ s ❧ ❝ ❦ ❤ ❞ ❡❤ ✉ ❥ ❞ ♠❝❦ ❧ ❥ t ❥ ♠❤ r ❥ ♠ ♥ ❥ ❡ ❥ ❦ . G ❾❿ ➀ ❾➁ 36. T ❾➂ ❾❿ ❾ ➂ ➃➁ ❾➂ ➄➅ ➆➂ ➇➈ ➉ ❾➂ ➅ ➊ ➇ ➋ ➆ ➁➌ ❾ ➈ ➍ ➈ ❾ ➂ ➊ ➆➂ ➅ ❾ ➂ 3.2 ❿ M A ➌ C ➌ 3 .6H 2 O ➊ ❾ ➂ q ➎ 4 A ➊ ❾ ➂ ➃ ❾ ➂ ❾❿ ❾➂ ➂ ➏ ➂ - ➃➁ ❾➂ ➄➅ ➆ ➂ ➇➈ B ➊ ❾ ➌ ❾❿ ➌ ❾➁ ➍ ➃ ❾ ➂ ➐ ❾➁ ❾ W ❾ ➃ ❾➂ ❾➀ ➆ ➑➒ ➓ ➔ . 2001 ➄➆➌ ❾ ❿ ❾ 7 ➐ ❾➁➇ . → 1 ➣ ↔ ↕ 1 ➣ ↔ 1 1 ➣ ↔ 2 3 4 G ❥ ♠♥ ❥❣ 35. P ➆➁ ➃ ➍ ❿ ➀ ➍ ➐ ❾ ➂ ❾ ➈ ❾ ➁ ➃ ❾➂ ❾ ❿ ❾ ➂ ➃➁ ❾ ➂ ➄ ➅ ➆➂ ➇➈ ➊ ❾ ➂ ➂ ➏ ➂ - ➃ ➁ ❾ ➂ ➄ ➅ ➆ ➂ ➇ ➈ ➋ ❾ ➊ ❾ ❿ ➆ ➊ ➇ ❾ ➐ ❾ ➁ ❾ W ❾➃ ❾ ➂ ❾➀ ➆ ➑ ➒ ➓ ➔ . 2001 ➉ ❾➂ ➅ ❿ ➆ ➂ ➅ ❾➂ ➊ ➍ ➂ ➅ 3.2 ❿ M A ➌ C ➌ 3 .6H 2 O ➊ ❾ ➂ q ➎ 4 ➄ ➆ ➌ ❾ ❿ ❾ 7 ➐ ❾ ➁ ➇ . 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 1 2 3 4 5 6 Waktu hari P e ru b a h a n p a n ja n g a k a r c m Transgenik Non Transgenik ➙➛ ➜ ➛ ➝ A ➞ ➟ ➠ ➡ ➟ ➢➤ ➥ ➦ ➧ ➨ ➧ ➥➤ ➩➤➟ ➨ ➤ ➨ ➤ ➫➧ ➨ ➭➟ ➯ ➤ ➥➧ ➲ ➤ ➡ ➲ ➟ ➤ ➳ , ➫➟ ➳ ➟ ➦ ➧ ➠ ➥➵ ➯ ➤ ➥ ➟ ➳ ➵ ➳ ➟ ➨ ➦ ➧ ➨ ➸ ➧ ➫➦ ➵ ➠ ➨ ➟ ➟ ➨ ➯ ➧ ➨ ➞ ➟ ➨ ➺ 1 ➡ ➤ ➲ ➠ ➤➯ ➤ ➢ ➟ ➢ ➤ ➢ ➻ ➵ ➩ ➡ ➧ ➠ ➨ ➩➧ ➠ ➡ ➟➯ ➟➦ ➩ ➟ ➨ ➟ ➫➟ ➨ ➩➠ ➟ ➨ ➢➞ ➧ ➨ ➤ ➳ ➵ ➨ ➩➵ ➳ ➫➧ ➨ ➞ ➧ ➩➟ ➡ ➵ ➤ ➢ ➤ ➢ ➤➦ ➟ ➨ ➯ ➤ ➞ ➧ ➨ ➻ ➫ , ➯ ➟ ➨ 2 ➟ ➨ ➟ ➥➤ ➢ ➤ ➢ ➧ ➳ ➢ ➦ ➠ ➧ ➢ ➤ ➞ ➧ ➨ ➼ ➽➾ ➽➚ ➦ ➟ ➯ ➟ ➩ ➟ ➨ ➟ ➫➟ ➨ ➩ ➠ ➟ ➨ ➢➞ ➧ ➨ ➤ ➳ . ➪➶ ➛ ➹➛ ➝ ➘➴➜ ➷ ➬➛ ➮ ➛ ➱➷ ✃ K ➟➫ ➤ ➲ ➧ ➠ ➩ ➧ ➠ ➤ ➫➟ ➳ ➟ ➢ ➤ ➡ ➳ ➧➦ ➟➯ ➟ P ➠ ➻ ➞ ➠ ➟➫ BPPS, K ➧ ➫➧ ➨ ➩➧ ➠ ➤ ➟ ➨ P ➧ ➨ ➯ ➤ ➯ ➤ ➳ ➟ ➨ N ➟ ➢ ➤ ➻ ➨ ➟ ➥ , I ➨ ➯ ➻ ➨ ➧ ➢ ➤ ➟ ➟ ➩➟ ➢ ➲ ➧➟ ➢ ➤ ➢ ❐ ➟ ➸ ➟ ➨ ➞ ➩ ➧ ➥ ➟ ➡ ➯ ➤ ➲ ➧ ➠ ➤ ➳ ➟ ➨ ; H ➤ ➲ ➟ ➡ K ➻ ➫➦ ➧ ➩ ➧ ➨ ➢➤ ➯ ➧ ➨ ➞ ➟ ➨ ➭ ➵ ➯ ➵ ➥ : ➤ ➢ ➻ ➥ ➟ ➢ ➤ ➯ ➟ ➨ ➧ ➳ ➢ ➦ ➠ ➧ ➢ ➤ ➞ ➧ ➨ ➯ ➟ ➥ ➟➫ ➠ ➟ ➨ ➞ ➳ ➟ ➦ ➧ ➠ ➟ ➳ ➤ ➩➟ ➨ ➩➟ ➨ ➟ ➫➟ ➨ ➸ ➟ ➨ ➞ ➩ ➻ ➥ ➧ ➠ ➟ ➨ ➩ ➧ ➠ ➡ ➟ ➯ ➟ ➦ ❒ ➧ ➳ ➟ ➫➟ ➨ ➟ ➢ ➟ ➫ ➯ ➟ ➨ ➟ ➥ ➵ ➫➤ ➨ ➤➵ ➫ ➟ ➨ ❮ D ➠ . S ➵ ➡ ➟ ➠ ➢ ➻ ➨ ➻ ➟ ➩ ➟ ➢ ➯ ➵ ➳ ➵ ➨ ➞ ➟ ➨ ➢ ➧ ➲ ➟ ➞ ➤ ➟ ➨ ➲ ➧ ➢ ➟ ➠ ➯ ➟ ➨ ➟ ➦ ➧ ➨ ➧ ➥➤ ➩ ➤➟ ➨ ❰ P ➠ ➻ Ï . K ➻ S ➡ ➤ ➫➟ ➫ ➻ ➩ ➻ ➯ ➟ ➨ D ➠ . W ➻ ➨ ➞ H ➟ ➨ ➨ L ➤ ➨ ➞ ➯ ➟ ➠ ➤ P ➥➟ ➨ ➩ M ➻ ➥➧ ❒ ➵ ➥➟ ➠ G ➧ ➨ ➧ ➩➤ ❒ ➢ L ➟ ➲ ➻ ➠ ➟ ➩ ➻ ➠ ➸ , N ➟ ➠ ➟ I ➨ ➢➩ ➤ ➩➵ ➩➧ ➻ Ï S ❒ ➤ ➧ ➨ ❒ ➧ ➟ ➨ ➯ T ➧ ❒ ➡ ➨ ➻ ➥ ➻ ➞ ➸ , J ➟ ➦ ➟ ➨ ➟ ➩ ➟ ➢ ➯ ➵ ➳ ➵ ➨ ➞ ➟ ➨ Ï ➟ ➢➤ ➥➤ ➩➟ ➢ ➥ ➟ ➲ ➻ ➠ ➟ ➩ ➻ ➠ ➤ ➵ ➫ , ➲ ➟ ➡ ➟ ➨ ➳ ➤ ➫➤ ➟ ➯ ➟ ➨ ➲ ➟ ➨ ➩ ➵ ➟ ➨ ➩ ➧ ➳ ➨ ➤ ➳ ➥➟ ➲ ➻ ➠ ➟ ➩ ➻ ➠ ➤ ➵ ➫ . Ð ÑÒÓÔ ÕÔ ÖÔ × Ø ÒØ Ò ÙÚ ÛÜ ÝÞ ß àÜ àÜ ÛÜ á Ü Þ â ãäå æ à çè é ê é ëé ì í é î é ï é î ð é î ñ òéî ñ é í íó ëôõ é î íôõ ì é ê é ö í é î é ì é ò é ï ê ôî ñ é î ÷ é î ê ø î ñ é î é ë ø ï ù î ù ø ï í ù î ñ ñ ù ò ôì ù î ñ ñ é í é î é ï é î ù î ù ú ù é ò é ê ù òô ú ø í òô ú éñ é ù í éî é ï éî ù î ê ù÷ é íó õ íéî é ì é òé ï ê é î íéî é ï éî é ÷ ø ï ø ë é íó õ é ë ø ï ù î ù ø ï è û ôõ í ø ï ú ø ì éî é ÷ é õ Ù Ú ÛÜ Ý Þ ß à Ü àÜ ÛÜ á Ü Þâ ã ä å æ à ç è ö ü ý è þ í ù ê é ÷ ïô î ñ é ëé ï ù ñ éî ñ ñ ø é î ÿ ÷ ô ø é ë ù ö é ê é ö ü ✁ è þ ð é î ñ ì éî ð é é ê é ê ù ë é ú ó õ é í ó õ ù ø ï ✂ ✄ø ì é ô ï ù î ☎ þ þ ✆ ✝ è ✞ ôëé ù î ù í ø ÿ íô ë é ì ê ùú ø ÷ í ù÷ é î ö ø ëé ú é ì ✟ é ö é ê é Ù ✠ Ü ✡ ✡ ä ☛ Ú ☞ è ☞ ó î è ✂ ò ù î ó î ù ï ê ô î ñ éî Ù ✠ àÜ Û Ü á Ü Þâ ã äå æ à ç è ✝ ð é î ñ ïôî ê é ö é í ô ÷ é ï é î ✁ è ☎ ï ✄ ✌ ë ö é ê é ö ü ý ê é ëé ï ïôê ù é é ù õ ïô î ø î ✍ ø ÷ ÷ é î é ÷ ø ï ø ë é ò ù ✌ ë òô ú ô ò éõ ✆ è ✆ ☎ ï ñ ✌ ë ✎ ñ ê é ø î í ø é òôí ôëé ì ☎ ú ø ë é î ö ô õ ë é ÷ ø é î ✂ ✄ ø í ù é ò éõ ù ☎ þ þ ✆ ✝ è ✏ éõ ôî é í ø ï ú ø ì ú é ù÷ ö é ê é ÷ ó î ê ù ò ù é ò é ï ê éî é ë ø ï ù î ù ø ï í ù î ñ ñ ù ÿ ï é ÷ é íéî é ïéî ù î ù ê é ö é í ê ù ñ ø î é ÷ éî òô ú é ñ é ù ò ø ï ú ô õ ñ ôî ÷ ô í é ì é î éî íôõ ì é ê é ö í é î é ì é ò é ï ê éî é ë ø ï ù î ø ï í ù î ñ ñ ù è ✑ î í ø ÷ ïôï é î ✒ éé í ÷ éî ò ù✒ é í í ó ë ô õ é î ò ù ÙÚ ÛÜ ÝÞ ß àÜ à Ü ÛÜ á Ü Þ â ã ä å æ à çè íôõ ì é ê é ö ö ü õ ôî ê é ì ê éî é ë ø ï ù î ù ø ï ÿ ú ô ú ô õ é ö é ñ ô î íô ë é ì ú ôõ ì é ò ù ë ê ù ù ò ó ëé ò ù ê é õ ù í é î é ï é î ù î ù ð éî ñ ê ù ê ø ñ é í ô õ ë ù ú é í ê é ëé ï ò ù òí ô ï í ó ëôõ é î ò ù í é î é ï é î íôõ ì é ê é ö ô ÷ é ï é î ö ü õ ô î ê é ì ê é î é ë ø ï ù î ù ø ï è ✓ ô î ✔ ñ ô î íôõ ò ô ú ø í é ê é ëé ì ñ ôî ö ô î ð é î ê ù à æ ÛÞä ✕ ã æ ✖ ã Ú Ý ä Ý ÞÜ ☛ åÚ Ü ÝÝß åä Ü ÞÚ ✕ ✗ ãß ÞÚ ä ☛ ✂ ✄ ✘ û ✝ ✂ ✞ ø ì éõ òó î ó Ú Þ Ü Û è ☎ þ þ ✆ ✙ ✚ù õ ê é ø ò ☎ þ þ ✛ ✝ ÿ à Ú ÞÜ Û Ûß Þ â ä ß ☛ Úä ☛ Þ ✜ ✗ Ú ☎ ✂ Ù Þ ☎ ✝ ✂ ✞ø ì éõ òó î ó ÚÞ Ü Û è ☎ þ þ ✢ ✝ ÿ ü ✣ ✔ ✌ ✤ û é òô ïôï ú õ éî ö ë é òï é ✂ Ùà ✗ à Ü ✝ ✂ ✄ø ✥ ø î ù ÚÞ Ü Û è ☎ þ ✦ þ ✝ ÿ àÜ ✧ ß ã ✡ Ü åä ÛäÞÜ Þ ß ã Ýæ ✗ Ú ã ✡ Ü àä Û ✜ ✂ Ù Ü à ✡ Ý ✝ ✂ ★ù ê ð éõ í ù î ù ☎ þ þ ✩ ✝ ÿ ê é î ò ù íõ é í ò ù î íé òô ✂ Ù à Ý å ✝ ✂ ✄ø òì ó ✒ é ☎ þ ✦ ✦ ✝ è ✪ òó ëé ò ù ñ ôî ✔ ñ ôî íôõ ò ô ú ø í ò é î ñ é í ö ô î í ù î ñ ê ù ë é ÷ ø ÷ éî éñ éõ ö ôõ é ÷ ù íéî í é î é ï é î í õ éî ò ñ ô î ù ÷ ð é î ñ íó ë ô õ éî í ô õ ì é ê é ö ô ÷ é ïéî ✌ ë ê éî ö ü õ ôî ê é ì ê é ö é í ê ù ë é ÷ ø ÷ é î è ✤éî é ï é î ù î ù ê ù ì éõ é ö ÷ éî ê é ö é í ê ù÷ ôï ú é î ñ ÷ éî ê ù ë é ì é î ïéõ ñ ù î é ë òôì ù î ñ ñ é ö õ ó ê ø ÷ ò ù íéî é ï é î ö é î ñ é î ê ù ëé ì é î í ô õ òô ú ø í ê é ö é í ê ù í ù î ñ ÷ é í ÷ éî è ✞ ô é õ é ø ï ø ï ÿ ö ô î ôë ù í ù é î ù î ù ê ù ú éñ ù ï ô î ✍ é ê ù ✁ ö ô õ ó ú éé î ✂ ✓ é ï ú é õ ✦ ✝ è û ô õ ó ú éé î ✦ ú ôõ í ø ✍ ø é î ø î í ø ÷ ïôî ñ ù ò ó ëé ò ù ú éñ ù é î íô î ñ é ì ñ ô î Ùà ✗ à Ü ð éî ñ ê é ö é í ê ù ñ ø î é ÷ é î ø î í ø ÷ ïôî ê ô ò é ù î ö õ ù ïôõ ò ö ôò ù ✒ ù÷ ê é ëé ï ïôî ñ ù òó ë é ò ù ñ ôî Ù à ✗ àÜ ø í ø ì ð é î ñ ê ù ë é ÷ ø ÷ é î ö é ê é ö ô õ ó ú éé î ☎ è ✞ ô íô ë é ì ☞✫ ✌ Ù à ✗ àÜ ø í ø ì ê ùö ô õ ó ëô ì ÿ ï é ÷ é ø î í ø ÷ ïôî ñ ø ✍ù ö ôõ éî ñ ôî íôõ òô ú ø í ÿ ÷ ì ø ò ø òî ð é í ôõ ì é ê é ö ô ÷ é ïéî ✌ ë ÿ ï é ÷ é ê ù ë é ÷ ø ÷ é î ö ô õ ó ú é éî ✁ è û ôõ ó ú éé î ✁ ú ôõ í ø ✍ ø éî ø î í ø ÷ ïô î ñ ÷ ó òíõ ø ÷ ò ù ✘ ✫ ✌ù ê éî ïô õ é ÷ ù í íéî é ï é î Ù ✠ à Ü ÛÜ á Ü Þâ ã ä å æ à ç è íõ éî ò ñ ô î ù ÷ ð é î ñ ï ô î ñ é î ê ø î ñ ê ø é ✒ õ é ñ ï ô î ✁ ✬ ✑ ✤ ✘ ✄ ï ö ï é ê ô î ñ é î ó õ ù ô î íé ò ù ú ôõ ë é ✟ é î éî ê ù ú é ✟ é ì ÷ ô î ê é ë ù ò é í ø ö õ ó ïó í ó õ ÷ ø é í ÿ ð é ù í ø ö õ ó ïó íôõ ø î ú ù ✭ ø ù í ù î è ✰ ✱ ✲ ✳ ✱ ✲ ✴ ✵ ✲ ✶ ✷ ✸ ✹ ✺ ✻ ✼✽✵✾ ✱ ✿✱✿❀ ❁ ✵ ✲ ✳ ❂✵✾✿✵ ✿✱ ❁ ❃ ✳ ✵ ❄ ✵ ✲ ❅ ✱ ✲ ✴ ✵ ✲ ❅ ❀ ✱ ❁ ❃ ❄ ❃ ❁ ✵ ✲ ❀ ✱✾✵ ❁ ❆ ✾✱ ❄ ✷ ❇✵ ❁ ❈ ✯ ❉ ❉ ✳ ❀ ❆ ✾✱ ❊ ✷ ✲ ❅ ❅ ✵ ❁ ✱ ❂✵❇ ✷❋ ❂✱❀ ✷❊ ✾❃ ❂ ✷ ❇ ❃ ✲ ❇❃ ❄ ✿✱ ✲ ❅ ✷✾● ❂✵✾ ✷ ❅ ✱ ✲ ❃ ❇ ❃ ❊ ✲ ✴ ✵❍ ■ ✵ ❂✵ ❊ ✾ ✵❇ ❃ ✾❇ ❁ ✵❇✱ ❅ ✷ ✴ ✵ ✲ ❅ ✶ ✵ ✳ ✵❇ ✶ ✷❅ ❃ ✲ ✵ ❄ ✵ ✲ ❃ ✲ ❇❃ ❄ ✿✱ ✲ ❅ ✷✾● ❂✵✾ ✷ ❅ ✱ ✲ ✷✲ ✷ ✵ ✶ ✵❂✵ ❊ ✿✱❂✵❂ ❃ ✷ ✷ ✾● ❂ ✵✾ ✷ ✾✱ ❏ ✵ ❁ ✵ ❀ ✱ ❁ ❇✵ ❊ ✵ ✳ ✾ ✱ ✳ ✱ ❁ ❇ ✷ ✶ ✷ ❇❃ ✲ ❑ ❃ ❄ ❄ ✵ ✲ ✳ ✵✶ ✵ ✰ ✵ ✿❀ ✵ ❁ ❈ ▲ ❍ ▼ ✵ ✲ ❅ ❄ ✵ ❊ ✵ ◆ ✵ ❂ ✴ ✵ ✲ ❅ ✶ ✷ ❂ ✵ ❄ ❃ ❄ ✵ ✲ ✵✶ ✵❂✵ ❊ ✿✱ ✲ ✶ ✱✾✵ ✷✲ ✳ ❁ ✷ ✿✱ ❁ ✾ ✳ ✱✾ ✷❋ ✷❄ ❖ ✻ ❈ ✶ ✵ ✲ P❈ ◗ ❃ ✲ ❇ ❃ ❄ ✿✱ ✲ ❅ ✷ ✾● ❂✵✾ ✷ ❀ ✵ ❅ ✷ ✵ ✲ ❇✱ ✲ ❅ ✵ ❊ ❅ ✱ ✲ ❖ ❘ ❃ ❙ ❃ ✲ ✷ ❚❯ ❱ ❲ ❍ ❳ ❉ ❨ ❉ ◗ ❍ ■ ✱ ❄ ❃ ✱ ✲ ❀ ✵ ❅ ✷✵ ✲ ❇ ✱ ✲ ❅ ✵ ❊ ❅ ✱ ✲ ✶ ✵ ✳ ✵❇ ✶ ✷ ❅ ❃ ✲ ✵ ❄ ✵ ✲ ❃ ✲ ❇❃ ❄ ✿✱ ✲ ✶ ✱✾✵ ✷✲ ✳ ❁ ✷ ✿✱ ❁ ✾ ✳ ✱ ✾ ✷❋ ✷ ❄ ❩ ❚ ❬ ❚ ❩❭ ❚ ❖ ✻ ❨ ✶ ✵ ✲ ✻ ❳ ◗ ✶ ✵ ✲ ✳ ❁ ✷ ✿✱ ❁ ✾✳ ✱✾ ✷❋ ✷❄ ❪ ❫ ❩❴ ❱ ❩❵ ❖ P ❨ ✶ ✵ ✲ P ❳ ◗ ❍ ❛ ✲ ❇❃ ❄ ✿✱ ✲ ❅ ✷ ✾● ❂✵ ✾ ✷ ❀ ✵ ❅ ✷ ✵ ✲ ❃ ❑ ❃ ✲ ❅ ✯ ❜ ❅ ✱ ✲ ✶ ✷❂✵ ❄ ❃ ❄ ✵ ✲ ✶ ❃ ✵ ❄ ✵❂ ✷ ✽ ❝❞ ✶ ✱ ✲ ❅ ✵ ✲ ❇❃ ❑ ❃ ✵ ✲ ❃ ✲ ❇❃ ❄ ✿ ✱ ✲ ✷✲ ❅ ❄ ✵❇ ❄ ✵ ✲ ✾ ✳ ✱ ✾ ✷❋ ✷ ❄ ✵✾ ✷ ✳ ❁ ● ✶ ❃ ❄ ❍ ✽ ❝ ❞ ✳ ✱ ❁ ❇✵✿✵ ✿✱ ✲ ❅ ❅ ❃ ✲ ✵ ❄ ✵ ✲ ❏ ❡❢✻ ✾✱❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ❏ ✱❇✵ ❄ ✵ ✲ ❆ ✳ ✵✾✵ ✲ ❅ ✵ ✲ ✻ ❣ ✻ ❨ ✾✱❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ✳ ❁ ✷ ✿✱ ❁ ❆ ✶ ✵ ✲ ✿✱ ✲ ❅ ❊ ✵✾ ✷❂ ❄ ✵ ✲ ❋ ❁ ✵ ❅ ✿✱ ✲ ❀ ✱ ❁ ❃ ❄ ❃ ❁ ✵ ✲ ❨ ❨ ❉ ❨ ✳ ❀ ❤ ✾ ✱ ✶ ✵ ✲ ❅ ❄ ✵ ✲ ✽ ❝ ❞ ❄ ✱✶ ❃ ✵ ✿✱ ✲ ❅ ❅ ❃ ✲ ✵ ❄ ✵ ✲ ✳ ❁ ● ✶ ❃ ❄ ✽ ❝ ❞ ✳ ✱ ❁ ❇✵✿✵ ✾✱❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ❏ ✱ ❇✵ ❄ ✵ ✲ ❆ ✳ ✵✾✵ ✲ ❅ ✵ ✲ ✻ ❣ ✻ ❳ ✾ ✱ ❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ✳ ❁ ✷ ✿✱ ❁ ❆ ✶ ✵ ✲ ✿✱ ✲ ❅ ❊ ✵✾ ✷ ❂ ❄ ✵ ✲ ❋ ❁ ✵ ❅ ✿✱ ✲ ❀ ✱ ❁ ❃ ❄ ❃ ❁ ✵ ✲ ❨ ❉ ✯ ✯ ✳ ❀ ❍ ❛ ✲ ❇❃ ❄ ✿✱ ✲ ❅ ✷✾● ❂✵✾ ✷ ❀ ✵ ❅ ✷ ✵ ✲ ❃ ❑ ❃ ✲ ❅ ❈ ❜ ❑ ❃ ❅ ✵ ✶ ✷❂✵ ❄ ❃ ❄ ✵ ✲ ✶ ✱ ✲ ❅ ✵ ✲ ✶ ❃ ✵ ❄ ✵ ❂ ✷ ✽ ❝ ❞ ❍ ✽ ❝ ❞ ✳ ✱ ❁ ❇✵✿✵ ✿ ✱ ✲ ❅ ❅ ❃ ✲ ✵ ❄ ✵ ✲ ❏ ❡❢✻ ✴ ✵ ✲ ❅ ✶ ✷❀ ❃ ✵ ❇ ✶ ✱ ✲ ❅ ✵ ✲ ✿✱❇ ● ✶ ✱ ❞ ✻ ❝✐ ✾✱❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ❏ ✱❇✵ ❄ ✵ ✲ ❆ ✳ ✵✾✵ ✲ ❅ ✵ ✲ P ❨ ❣ ❝❨ ✾✱❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ✳ ❁ ✷✿✱ ❁ ❆ ✶ ✵ ✲ ✿✱ ✲ ❅ ❊ ✵✾ ✷ ❂ ❄ ✵ ✲ ❋ ❁ ✵ ❅ ✿ ✱ ✲ ❀ ✱ ❁ ❃ ❄ ❃ ❁ ✵ ✲ ❨ ✯ ❳ ❈ ✳ ❀ ❤ ✾✱✶ ✵ ✲ ❅ ❄ ✵ ✲ ✽ ❝ ❞ ❄ ✱ ✶ ❃ ✵ ✿✱ ✲ ❅ ❅ ❃ ✲ ✵ ❄ ✵ ✲ ✳ ❁ ● ✶ ❃ ❄ ✽ ❝❞ ✳ ✱ ❁ ❇✵✿✵ ✾ ✱ ❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ❏ ✱❇✵ ❄ ✵ ✲ ❆ ✳ ✵✾✵ ✲ ❅ ✵ ✲ P ❳ ❣ ❝ ❳ ✾✱❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ✳ ❁ ✷ ✿✱ ❁ ❆ ✶ ✵ ✲ ✿✱ ✲ ❅ ❊ ✵✾ ✷ ❂ ❄ ✵ ✲ ❋ ❁ ✵ ❅ ✿✱ ✲ ❀ ✱ ❁ ❃ ❄ ❃ ❁ ✵ ✲ ❨ ❥ ❦ ✮ ✳ ❀ ❍ ✽ ✱ ✲ ❅ ❅ ✵❀ ❃ ✲ ❅ ✵ ✲ ✾ ✱ ❄ ❃ ✱ ✲ ✶ ✵ ❁ ✷ ❄ ✱❇ ✷❅ ✵ ❀ ✵ ❅ ✷✵ ✲ ❅ ✱ ✲ ✶ ✷ ✵❇ ✵✾ ✶ ✷✳ ✱ ❁ ● ❂✱ ❊ ✾✱ ❄ ❃ ✱ ✲ ❃ ❇❃ ❊ ❀ ✱ ❁ ❃ ❄ ❃ ❁ ✵ ✲ ❈ ❨ ✯ ▲ ✳ ❀ ❖ ✰ ✵✿❀ ✵ ❁ ❨ ✮ ◗ ✴ ✵ ✲ ❅ ✿ ✱ ✲ ❏ ✵ ❄ ❃ ✳ ✶ ✵✱ ❁ ✵ ❊ ✳ ✱ ✲ ✴ ✵ ✲ ✶ ✷ ✳ ❁ ● ❇✱ ✷ ✲ ❖ ❧ ❫ ❵ ♠ ♥ ♦ ❭ ❚ ♣ q ❚ ♥ ❧ ❚ ❆ ❝ ❡■ ◗ ❀ ✱ ❁ ❃ ❄ ❃ ❁ ✵ ✲ ❳ ✮ ▲ ❨ ✳ ❀ ❆ ✶ ✵✱ ❁ ✵ ❊ r s q ♥ ❯ ❩ ❱ ♥ ❭ ❲ ❱ ❯ ❚ ❵ ❩ ❚♦ ♠ ❫ ♥ ❖ ❈ ❜ ❛ ✼ ❞ ◗ ❆ ✶ ✵ ✲ ✳ ● ❂ ✷ ❖ ✻ ◗ ❍ ✰ ✵❀ ❃ ✲ ❅ ✵ ✲ ✵ ✲ ❇ ✵ ❁ ✵ ✶ ✵✱ ❁ ✵ ❊ ❝ ❡ ■ ✶ ✵ ✲ ❈ ❜ ❛ ✼ ❞ ❖ ❳ ✯ ✯ ✳ ❀ ◗ ✶ ✷✳ ✱ ❁ ● ❂✱ ❊ ✶ ✱ ✲ ❅ ✵ ✲ ✽ ❝ ❞ ✿✱ ✲ ❅ ❅ ❃ ✲ ✵ ❄ ✵ ✲ ✳ ❁ ✷ ✿✱ ❁ ✻ ✶ ✵ ✲ P ❖ ✿✱❇ ● ✶ ✱ ✳ ✱ ✲ ❅ ❅ ✵❀ ❃ ✲ ❅ ✵ ✲ ❇✱❂✵ ❊ ✶ ✷ ❀ ✵ ❊ ✵✾ ✾✱❀ ✱❂❃ ✿ ✲ ✴ ✵◗ ❆ ✶ ✵ ✲ ❇✱❂✵ ❊ ✶ ✷ ❄ ❂● ✲ ❄ ✱ ✶ ✵ ❂✵✿ ✳ ❂ ✵✾✿ ✷ ✶ ✳ ✰ ✐❘ ✺ ✼ ✐ ✵✾✴ ❖ ✽ ❁ ● ✿✱ ❅ ✵❆ ✰ ✵✿❀ ✵ ❁ ❨ t ◗ ❍ ✰ ✱ ✲ ✷✲ ✷ ✾ ✷ ✵ ✳ ✶ ✷ ✾ ✷ ✾ ✷✳ ❄ ✵ ✲ ❄ ✱ ✶ ✵ ❂✵✿ ✉ ✱ ❄ ❇● ❁ ✱ ❄ ✾ ✳ ❁ ✱ ✾ ✷ ❃ ✲ ❇ ❃ ❄ ✿✱ ✿✳ ✱❂✵ ❑ ✵ ❁ ✷ ✱ ❄ ✾ ✳ ❁ ✱✾ ✷✲ ✴ ✵ ❖ ❫ ❬ ❚ ❩ ❚ ✈ ✇ ❩ ❚ ❭ ❭ ♠ ❫ ♥ ◗ ✳ ✵✶ ✵ ❇✵ ✲ ✵✿✵ ✲ ✿● ✶ ✱ ❂❆ ✿ ✷ ✾ ✵ ❂ ✲ ✴ ✵ ❇✱✿❀ ✵ ❄ ✵ ❃ ❍ ① ✶ ✱ ✲ ❇ ✷ ❇ ✵✾ ✶ ✵ ❁ ✷ ✾✱ ❄ ❃ ✱ ✲ ❂ ✱ ✲ ❅ ❄ ✵ ✳ ❅ ✱ ✲ ❇ ✱ ❁ ✾✱ ❀ ❃ ❇ ✵ ✶ ✵ ❂✵ ❊ ✾✱ ❀ ✵ ❅ ✵ ✷ ❀ ✱ ❁ ✷ ❄ ❃ ❇ ② ✳ ✵✶ ✵ ❝ ❡■ ✿ ✱ ✲ ❅ ✵ ✲ ✶ ❃ ✲ ❅ ❨ ❉ ✶ ● ✿✵ ✷✲ ❇ ❁ ✵ ✲ ✾✿ ✱✿❀ ❁ ✵ ✲ ❆ ❦ ✶ ● ✿✵ ✷ ✲ ❋ ❃ ✲ ❅ ✾ ✷● ✲ ✵ ❂ ❆ ✶ ✵ ✲ ❈ ✶ ● ✿✵ ✷✲ ✵ ❃ ❇● ❁ ✱ ❅ ❃ ❂ ✵❇ ● ❁ ❖ ✰ ✵ ✿❀ ✵ ❁ ❳ ❉ ✶ ✵ ✲ ❳ ❨ ◗ ❤ ✳ ✵✶ ✵ ❈ ❜ ❛ ✼ ❞ ✿✱ ✲ ❅ ✵ ✲ ✶ ❃ ✲ ❅ ✇ q ❯ ❱ ❯ ♠ ❬ ❚ ✇ ❫ ❲ ③ ❱ ❵ ❚♥ ③ ❲❱ ❯♠ ❫ ♥ ❭ ♠♦ ♥ ❱ ❲ ❖ ✰ ✵✿❀ ✵ ❁ ❨ ✮ ◗ ❤ ✶ ✵ ✲ ✳ ✵ ✶ ✵ ❃ ❑ ❃ ✲ ❅ ❈ ❜ ✿✱ ✲ ❅ ✵ ✲ ✶ ❃ ✲ ❅ ✱ ❄ ● ❁ ✳ ● ❂ ✷❖ ✻ ◗ ❖ ✰ ✵ ✿❀ ✵ ❁ ❨ ✮ ◗ ❍ ⑥⑦ ⑧ ⑨⑦ ⑩ ❶ ❷ ❸❹❺ ⑧ ❻⑩ ❼ ❻⑩ ❽ ⑦ ⑩ ❾ ⑨ ❿ ➀ ➁ ➂ ❹➃ ⑦ ➄ ❻ ➅ ❻ ➅ ➆ ➇ ⑦⑩ ❼ ➈ ⑦➄➅⑦ ❾ ⑨ ⑧ ➉ ⑩ ⑦ ➊ ⑦⑩ ➄ ❻➆ ⑦ ⑧ ⑦ ⑨ ➋ ➇ ⑦ ⑧ ➅ ❻⑩ ➄❼ ❻➄⑨ ➋ ⑨➊ ⑧ ❻⑩ ❾ ⑦➈ ⑦➅ ➊ ➌ ⑩ ➄ ➍ ➇ ➉ ➊ ➄⑨ ➎ ❻ ➊ ➍➌ ➇ ❺ ➏ ➂⑨ ➐ ➑ ➇ ⑦ ⑧ ➅ ❻ ⑩ ❶ ❷ ❸❹ ❺ ❾ ⑨ ⑦➅ ❼ ➈ ⑨ ➋ ⑨ ➊ ⑦ ➄⑨ ❾ ❻ ⑩ ⑧ ⑦ ⑩ ➃ ➒ ❺ ➅ ❻⑩ ⑧ ⑧ ➉ ⑩ ⑦➊ ⑦ ⑩ ⑧ ❻ ⑩ ➓ ➔→ ➔ ➣ ➉ ➍ ➉ ↔ ⑦ ➍ ⑦ ➉ ➆ ⑦ ⑧ ⑨⑦ ⑩ ➉ ↕ ➉ ⑩ ⑧ ❶ ❷ ➁ ⑩ ❽ ⑦ ➄ ❻ ➆ ⑦ ⑧ ⑦ ⑨ ➙ ❻ ➍ ⑦ ➊ ⑦ ⑩ ❾ ⑦⑩ ❼ ⑦ ➄⑦⑩ ⑧ ⑦ ⑩ ❶ ❷ ❸❹ ❺ ➁ ➑ ➛ ➜ ❷ ➁ ➒ ➂ ➒ ➒➝➝ ➂ ➝ ➂ ➝➒ ➂ ➂ ➒ ➂ ➒ ➝ ➁ ➂ ❹ ➒ ❹❹ ➝ ❹ ➁ ❶ ❷ ➞ ❾ ⑦ ⑩ ❶ ❷ ❸ ❹❺ ➁ ❺ ➛ ➜ ❷ ➁ ➂➂ ❹ ➒ ➂ ➂➂➂ ❹ ➒ ➝ ➂ ➒ ➂ ➝ ❹❹ ➝➒ ➂ ❹➂ ➂ ➝ ➂➁ ❶ ❷ ➞ ➄ ❻➆ ⑦ ⑧ ⑦ ⑨ ❼ ➇ ⑨➅ ❻➇ ❾ ⑦ ⑩ ➅ ❻⑩ ⑧ ↔ ⑦➄⑨ ➈➊ ⑦ ⑩ ➋ ➇ ⑦ ⑧ ➅ ❻⑩ ➆ ❻ ➇ ➉ ➊ ➉ ➇ ⑦ ⑩ ➟ ➜ ➜ ❼ ➆ ➐ ➑ ➇ ⑦ ⑧ ➅ ❻ ⑩ ⑨⑩ ⑨ ➍ ❻ ➈ ⑦ ↔ ❾ ⑨ ➄⑨ ➄⑨❼ ➊ ⑦⑩ ➊ ❻ ❼ ➠ ➏ ❹ ❺ ➡ ➢ ➤➥ ➁ ❹➦ ➃ ➦ ➧ ❾ ⑨ ⑦ ⑩ ➍ ⑦ ➇ ⑦ ❾ ➉ ⑦ ❾ ⑦ ❻➇ ⑦ ↔ ➛ ⑦ ➍ ➍ ➨➩ ❾ ⑦ ⑩ ⑦ ➍➍ ➨ ➟ ➞ ❽ ⑦⑩ ⑧ ➅ ❻ ➅ ❼ ➉ ⑩ ❽ ⑦ ⑨ ↔ ➌ ➅ ➌ ➈ ➌ ⑧ ⑨ ❾ ❻ ⑩ ⑧ ⑦ ⑩ ❾ ➉ ⑦ ❾ ⑦ ❻➇ ⑦ ↔ ⑦ ➍➍ ❺ ➩ ❾ ⑦ ⑩ ⑦ ➍➍ ❺ ➟ ❽ ⑦ ⑩ ⑧ ➆ ❻ ➇ ➉ ➈⑦ ⑩ ⑧ ➍ ❻➇ ➆ ⑦ ➈⑨ ➊ ❽ ⑦ ⑩ ⑧ ❾ ⑨ ❼ ⑨ ➄⑦ ↔ ➊ ⑦⑩ ➌ ➈ ❻ ↔ ➝ ❸➫ ➭ ➯➲ ➳➵ ➸ ❾ ⑦ ➇ ⑨ ❼ ➂ ➏ ➥➂ ➛ ➺⑨➊ ⑨ ➻ ➫ ↔ ⑨➅⑦ ➅ ➌ ➍ ➌ ➟ ➼ ➼ ➽ ➞ ➐ ➥ ❻ ⑩ ⑧ ⑦ ⑩ ⑦ ❾ ⑦ ⑩ ❽ ⑦ ➨ ❺ ➙ ➈ ➌ ⑩ ⑦➄ ❻ ➛ ❻⑩ ➾ ⑨➅ ➇ ❻➊ ➌ ➅ ➆ ⑨ ⑩ ⑦ ➄ ❻ ➞ ➚ ⑦ ➍➍ ➨➩ ❾ ⑦ ⑩ ⑦ ➍ ➍ ➨ ➟ ➆ ❻➇ ❻ ➊ ➌ ➅ ➆ ⑨⑩ ⑦➄⑨ ❾ ❻⑩ ⑧ ⑦ ⑩ ⑦ ➍ ➍ ❺ ➩ ❾ ⑦⑩ ⑦ ➍➍ ❺ ➟ ➄ ❻ ↔ ⑨⑩ ⑧ ⑧ ⑦ ❶ ❷ ❸ ❹❺ ➍ ❻➇ ➄⑨➄ ⑨❼ ❾ ⑨ ❾ ➉ ⑦ ❾ ⑦ ❻ ➇ ⑦ ↔ ❽ ⑦ ⑩ ⑧ ➌ ➇ ⑨ ❻ ⑩ ➍ ⑦ ➄⑨ ⑩ ❽ ⑦ ➍ ❻➇ ➆ ⑦ ➈⑨ ➊ ❾ ⑦⑩ ❾ ⑨ ❼ ⑨ ➄⑦ ↔ ➊ ⑦⑩ ➌ ➈ ❻ ↔ ➝ ❸➫ ❾ ⑨ ➆ ⑦ ➪ ⑦ ↔ ➊ ❻ ⑩ ❾ ⑦➈ ⑨ ❼ ➇ ➌ ➅ ➌ ➍ ❻➇ ➊ ➉ ⑦ ➍ ➉ ➆ ⑨ ➶ ➉ ⑨ ➍ ⑨⑩ ❾ ⑨ ❾ ⑦ ➈⑦ ➅ ❼ ➂ ➏ ➥➂ ➐ ❼ ➂ ➏ ➥ ➂ ➅ ❻ ➇ ➉ ❼ ⑦➊ ⑦⑩ ➎ ❻ ➊ ➍➌ ➇ ➆ ⑨ ⑩ ❻➇ ❽ ⑦ ⑩ ⑧ ➅ ❻ ➅ ❼ ➉ ⑩ ❽ ⑦ ⑨ ⑧ ❻⑩ ❼ ❻⑩ ⑦ ⑩ ❾ ⑦ ➄ ❻ ➈ ❻ ➊ ➄⑨ ➲ → ➹ ➘ ➘ ❾ ⑦ ⑩ ➴ → ➹ ❽ ⑦⑩ ⑧ ➍ ❻ ➇ ❾ ⑦❼ ⑦ ➍ ❾ ⑨ ❾ ⑦ ❻ ➇ ⑦ ↔ ❹➁ ➥ ➏ ➂ ➐ ➫❻ ➍ ❻ ➈ ⑦ ↔ ❾ ⑨ ➅⑦➄ ➉ ➊ ➊ ⑦⑩ ➊ ❻ ❾ ⑦ ➈⑦ ➅ ➷➬ ➹ ➮ ➔ ➵ ➱ ➣ ✃ ➯➵➲ ❐ ➠❿ ➂ ➩ ➼ ➩ ➚ ➆ ⑦➊ ➍ ❻➇ ⑨ ⑨ ⑩ ⑨ ❾ ⑨ ⑧ ➉ ⑩ ⑦➊ ⑦⑩ ➉ ⑩ ➍ ➉ ➊ ➅ ❻⑩ ⑧ ⑨ ⑩ ➋ ❻➊ ➄⑨ ➓ ➬ ➔ ➣ ➭ ➣ ❒ ➣ ➹ ➴ ➸➯✃ ➮ ➔ ➨ ➐ ❾ ⑦ ⑩ ➅ ❻⑩ ⑧ ↔ ⑦➄⑨ ➈ ➊ ⑦ ⑩ ➓ ➬ ➔ ➣ ➭ ➣ ❒ ➣ ➹ ➴ ➸➯ ✃ ➮ ➔ ➨ ➐ ➍ ➇ ⑦ ⑩ ➄ ⑧ ❻⑩ ⑨ ➊ ❽ ⑦ ⑩ ⑧ ➇ ❻➄⑨ ➄ ➍ ❻⑩ ➍ ❻➇ ↔ ⑦ ❾ ⑦ ❼ ⑦ ⑩ ➍ ⑨ ➆ ⑨ ➌ ➍ ⑨ ➊ ➊ ⑦ ⑩ ⑦ ➅⑨➄ ⑨⑩ ❾ ⑦⑩ ↔ ⑨ ⑧ ➇ ➌ ➅ ⑨➄⑨ ⑩ ➐ ❿ ⑦➄⑨ ➈ ⑦ ⑩ ⑦ ➈⑨ ➄⑨➄ ➍ ⑦ ⑩ ⑦ ➅⑦ ⑩ ❮❰Ï Ð ❰ Ñ Ò Ó Ô ÕÖ Ñ ❰ Ö× Ø Ù Ú ❰ Û Ø Ü Ù Ø Ý Û ❰ Þ ❰ Û Ý Û Ö Ý Þ Ï × Û Ø Ù ßà á ❰ ß Ù Ø × Û â × Û Ú ❰ Û Ü Ù ã ä åæ çè ❰ ß × Ï ×Ï Ð Ñ ❰ Û â á ❰ ß Ï ❰ Ü ❰ Ñ Ù é êëì íîï ðì ðì ëì ñ ì îò óôõ ö ð ÷Ô ú û ü ý þÿ ý ✁✂ ✄ ý ÿ ü ý ☎✆✝ ✞ ý ✟ ý ✠✟ ✂ ✂ ü ý ✡ ü ☛ ☞ü ú ü ý ü ✞ü ý ✌ ü ý ÿ ú ü ☛ ü ý ✂ ü ý ü ✞ ✁þ✁ ý ✄ ü ý ☛ ✁ ÿ û ✍ ✞✁ þ✁ý ✞ ý ÿ ü ý ✄ ✟ ý ÿ ✎ ✏✑ þ✁þ✁ ✒ ü ý ✌ ü ✁ ú ✟ ✓ ✔ ✕✖✝ ✗ ✞✒ ✞ ü ✘ ✖ ü ý ü ✞ ü ý ú û ü ý þ ÿ ý ✁✂ ✌ ü ý ÿ ✄ ✁☛ ü þ ✁ ✙ ✂ ü ý ✞ ý ÿ ü ✙ü ✞✁ ☛ ü ✞ ✡ ü úü ý ✒ û ú✟ ✞✡ ✟ ☛ ü ý ✚ ú û ✟ ú ü ✞ ü ✒ û ú ✟ ✞✡ ✟ ☛ ü ý ü ✂ ü û ✄ ü ý ✄ ü ✟ ý ✚ ✂ ú ✁ ✂ ü ú ü ý ü ✞ü ý ✄ ✁✡ û ✁ ✒ û ✙ ü✂ ✟ ü ý ✓ ✘ ✛ ✞ ✗ ✑✙ ✜ ✢ ü ✞ ✡ ü û ✓ ✣ ✄ ü ý ✓ ✤ ✥ ✘ ✦ ü✙ ✁ý ✁ ✄ ✁✄ ✟ ÿ ü ✂ ü û ý ü ✒ û ü ý ü ý ÿ ý ✒ ý ✌ ü ý ✄ ✁ ✦ ✧ ★ ✑✖ ☎ ü þ ✞ ✞ ✡ û ü ý ✒ ✙ ü þ ✞ ü ✄ ü ✙ü ✞ ✞ ý ✠ü ÿ ü ✂ þ ✁ ✞✡ ü ý ÿ ü ý ✒ ✦ þ✁ú ✍ ✒ ✙ü þ✞ ü ✞ ý ÿ ü✙ ü ✞✁ ÿ ü ý ÿ ÿ ✟ ü ý þ ☛ ✁ ý ÿ ÿ ü ✒ ✦ þ✁ ú ✍ ✒ ✙ ü þ ✞ü ✞ ý ✟ û ✟ ý ✄ ü ý ✞ ý ÿ ü✂ ✁ ✡ ü ú✂ ü ý ✩ ✜ ✪ ✥ ✑✙ ✧ ✫ ✡ ✡ ü þ ✄ ü ✒ üú ✄ ý ÿ ü ý ✞ ✟ ✄ ü ☛ ✞ ü þ✟ ✂ ✂ ✄ ü✙ ü ✞ þ✁ú ✍ ✒ ✙ü þ✞ ü ✄ ü ý ✜ ✛ ✥ ÿ ü ý ÿ ÿ ✟ ü ý ✞ úü ✡ ✍ ✙ ✁þ✞ þ ✙ ✘ ☎ û ü ý ü ý þ✟ ü ú✟ ÿ ý ✄ ü✙ ü ✞ ú ü ý ü ✞ ü ý ✄ ü ✒ üú ✄ ✁ ✒ ✙ü ✠ ü û ✁ ✞✁ ý ✁ ✞ ü✙ ✄ ý ÿ ü ý ✒ ý ✄ ✂ ü úü ý ✄ ✟ ü ü û ü ☛ ✚ ✌ ü ✁ú✟ ✞ ý ÿ ☛ ý ú ✁✂ ü ý ✄ ü ý ✬ üú ü✟ ✞ ý ✟ û ✟ ý ✂ ü ý ✂ þ✒ û þ ✁ ÿ ý ü ý úü û ü ✙ü ✁ý ✄ ý ÿ ü ý ✞ ý ÿ ✂ ✍ ý þ ú û ✟ ✂ þ✁ ✝ ✏✑ ✁ ✜ ú ✙ü ☛ ✄ ✁ ✡ ü ☛ ü þ ✒ ü ✄ ü ✡ ü ✡ þ ✡ ✙✟ ✞ý ✌ ü ✥ ✄ ü ý ✞ ý ✁ ý ÿ ✂ üú ✂ ü ý ✂ þ✒ û þ✁ ÿ ý ü ý úü û ü ✙ü ✁ý ✄ ý ÿ ü ý ✞ ý ÿ ✂ ✍ þ ú û ✟ ✂ þ ✁ ✭ ✂ ú ✍ û ✮ ✯✰ ✱ ✰ ✲✳ ✱ ✰ ✴✴ ✵✮ ✶ ✄ ü ý ✄ ✁ ✂ þ✒ û þ✁✂ ü ý ✂ úü ý ü ✞ ü ý þ ý þ✁ ú ✁ ✷ ✑ ✙ ✘ ✎ ü ✙ü ✞ ✒ ý ✙ ✁ú ✁ü ý ✁ ý ✁ ✚ ✒ ý ÿ ✟ ✠ ✁ ü ý ú ✍ ✙ û ü ý þ✁ úü ý ü ✞ ü ý ✞ ü þ✁☛ ✄ ✁ ✙ ü✂ ✟ ✂ ü ý ✄ ý ÿ ü ý ✒ ý ✄ ✂ ü úü ý þ ü ú✟ ü û ü ☛ ✚ ✌ ü ✁ ú ✟ ✂ ✍ ý þ ú û ✟ ✂ þ✁ ✝ ✏✑ ✁✚ þ ✄ ü ý ÿ ✂ ü ý ✒ ý ✄ ✂ üúü ý ✙ü ✁ ý ✚ ✌ ü ✁ú✟ ✂ ✍ ý þ ú û ✟ ✂ þ✁ ✄ ü ý ✮ ✯ ✰ ✱ ✰ ✲✳ ✱ ✰ ✴✴ ✵✮ ✶ ✄ ✁ úü ý ü ✞ ü ý ✌ ü ý ÿ þ ý þ✁ú ✁ ✷ ú û ☛ ü ✄ ü ✒ ✑✙ ✡ ✙ ✟ ✞ ✄ ✁✙ü✂ ✟ ✂ ü ý ✘ ✸ ✙ ☛ þ ✡ ü ✡ ✁ú✟ ✚ ✒ û ü ý ü ý ÿ ý ✒ ý ✌ ü ý ✄ ✁ ✦ ✧ ★ ✑✖ ☎ ü þ ✞ ✞ ✡ û ü ý ✒ ✙ ü þ✞ ü ✄ ü ✙ü ✞ þ✁ þ ú ✞ ú ✍ ✙ û ü ý þ ✁ úü ý ü ✞ ü ý ú û ☛ ü ✄ ü ✒ ✹ ✂ ü ✞ü ý ✑✙ ✄ ü ý ✒ ✦ û ý ✄ ü ☛ ✞ ✞ û ✙✟ ✂ ü ý ✂ ✍ ý ✷ ✁û ✞ ü þ✁ ✄ ý ÿ ü ý ✞ ✙ ü✂ ✟ ✂ ü ý ✮ ✯ ✰ ✱ ✰ ✲ ✳ ✱ ✰ ✴✴ ✵ ✮ ✶ ✄ ✁ úü ý ü ✞ ü ý ✌ ü ý ÿ þ ý þ✁ú ✁ ✷ ú û ☛ ü ✄ ü ✒ ✑ ✙ ✚ þ ✒ û ú ✁ ✺ ✵ ✻ ✮ ✼ ✵ ✽ ✶ ✽ ✼ ✽ ✾ ✽ ✻ ✿ ❀ ü úü✟ ✺ ✵ ✻ ✮ ✼ ✵ ✽ ✶ ✽ ✾ ✰ ✶ ✼ ❁ ✽ ❀ ✵ ✽ ✶ ✽ ✘ ✕ ý ú✟ ✂ ✞ ý ✄ ü ✒ üú ✂ ü ý ú ü ý ü ✞ü ý ✌ ü ý ÿ ú ✍ ✙ û ü ý ✑✙ ✚ ÿ ý ❂ ❀ ✳ ❀✽ ☛ ü û ✟ þ ✄ ✁ þ✁ þ✁✒ ✂ ü ý ✂ ✄ ü ✙ü ✞ ✭ ✂ ú ✍ û ✂ þ✒ û þ✁ ✌ ü ý ÿ ✞ ✞✒ ✟ ý ✌ ü ✁ ✒ û ✍ ✞✍ ú û ✂ ✟ üú þ ✒ û ú ✁ ✒ û ✍ ✞✍ ú û ✟ ✡ ✁ ❃ ✟ ✁ ú ✁ý ü úü ✟ ✒ û ✍ ✞✍ ú û ✆ü✗ ❄ ✘ ✢ ý ❂ ❀ ✳ ❀✽ ✡ û ✟ ✂ ✟ û ü ý ✡ þ ü û ✜ ✓ ✪ ✛ ✤ ✒ ✡ ✥ þ ☛ ✁ ý ÿ ÿ ü þ ✟ ✙ ✁ú ✄ ✁þ✁ þ✁ ✒ ✂ ü ý ✂ ✄ ü ✙ü ✞ ✭ ✂ ú ✍ û ✂ þ✒ û þ✁✘ ❅ü✙ ü✟ ✒ ✟ ý ✡ ✁þ ü ✄ ✁þ ✁þ✁ ✒ ✂ ü ý ✚ ✭ ✂ ú ✍ û ú û þ ✡ ✟ ú þ ✟ ✙ ✁ú ✄ ✁✁ ý ú û ✍ ✄ ✟ ✂ þ✁ ✂ ✄ ü ✙ü ✞ ✡ ü ✂ ú û ✁ A ❆ ✱ ✮ ✾ ✽ ✻ ✼ ✰ ✱✵ ✿ ❀ ✼✿ ❀ ✰ ❇ ✽ ✻ ✵✰✶ ✴ ✘ ✕ ý ú ✟ ✂ ✞ ý ÿ üú ü þ✁ ☛ ü ✙ ✁ý ✁✚ ✞ ü ✂ ü ✒ û ✙ ✟ ✄ ✁ ✙ ü✂ ✟ ✂ ü ý ü ý ü ✙ ✁ þ✁þ ✂ þ ✠ü ✠ü û ü ý ü ý úü û ÿ ý ✒ ý ✌ ü ý ✄ ✁ ✦ ✧ ★ ✑✖ ☎ ü þ ✞ ✞ ✡ û ü ý ✒ ✙ü þ✞ ü þ ☛ ✁ ý ÿ ÿ ü ✄ ü û ü ☛ ✌ ü ý ÿ ú û ✂ ✍ ý þ û ✭ ü þ✁ ✄ ü ✒ üú ✄ ✁ ✁✄ ý ú ✁ ✷ ✁✂ ü þ✁✘ ✎ ü û ü ☛ ✂ ✍ ý þ û ✭ üú ✁ ✷ ✁ ý ✁ þ ü ý ÿ üú ✒ ý ú ✁ ý ÿ ✟ ý ú✟ ✂ ü✂ ú ✁ ✭ ✁ ú ü þ ✒ û ✍ ú ✁ý ✌ ü ý ÿ ✄ ✁ ☛ ü þ✁✙✂ ü ý ✚ þ ☛ ✁ ý ÿ ÿ ü ✄ ü û ü ☛ ✄ ü û ✁ ✦ ✧ ★ ✑✖ ☎ ü þ ✞ ✞✡ û ü ý ✒ ✙ ü þ ✞ü ✌ ü ý ÿ ú ✁ ✄ ü✂ ✞ ✞ ✒ ✟ ý ✌ ü ✁ ✒ û ü ý ✄ ü ✒ üú ✄ ✁ ✡ ✟ ü ý ÿ ✄ ü ý ✞ ý ÿ ü ✂ ✁✡ üú ✂ ü ý ÿ ý ✄ ü ✒ üú ✄ ✁ ✂ þ✒ û þ✁✂ ü ý ✄ ý ÿ ü ý ✷ ✁þ✁ ý ✂ ü û ý ü ✡ û ✟ ✂ ✟ û ü ý û ✙ü ú ✁ ✷ ✂ ✹ ✁ ✙ ✘ ❉❊❋ ❊● ❍■ ❍ ❏❋ ■ ❊❋ ■ ❏❋ ❑ ▲ ❍▼ ●▼ ❑ ❍ ◆ ▼ ● ❊❖ P ● ❊◗ ❘ ■ ❊ ◗ P ■ ❏ ◆ ❏ ❍❙ ▼ ●❏ ❙❍❘ ❚ ❊ ❋ ❑ ❖ ● ▼ ❋ ❏ ❋ ❘ ❯ ❏❋ P ❱ ❍ ❚ ❊ ◗ ❏❋ ❏❋ ❑ ❊❋ ❘ ◆❊ ◗ P ❚ ❏ ❖ ❏ ❋ ❚ ❊ ❋ ❊ ● ❍ ■ ❍ ❏ ❋ ❲ ❏❋ ❑ ◆❏ ❙❍❳ ❱ ❏ ◗ ❏❋ ❑ ❯ ❍ ● ❏ ❖ P ❖ ❏ ❋ ❨ ❩❏❏ ■ ❍ ❋ ❍❘ ❍ ❙ ▼ ● ❏ ❙❍ ❑ ❊❋ ❚ ❊❋ ❲ ❏ ❋ ❯ ❍ ❬ ❭ ❪ ❫❴ ❉ ❏ ❙ ❊ ◆❊ ◆ ▲ ◗ ❏❋ ❚ ●❏ ❙◆ ❏ ❯ ❏ ◗ ❍ ❵❛ ❜ ❝ ❞❡ ❢ ❣❝ ❣❝ ❜❝ ❤ ❝ ❡ ✐ ❥❦ ❧♠ ❣ ♥❨ ❯ ❏❋ ❚ ❊❋ ❑ P ❱ ❍ ❏ ❋ ❚ ❊◗ ❏❋ ❏ ❋ ❑ ❊ ❋ ■ ❊ ◗ ❙ ❊ ▲ P ■ ■ ❊ ◗ ❳ ❏ ❯ ❏ ❚ ♦ ❊❖ ❏ ◆ ❏ ❋ ❫● ❯ ❏❋ ❚ ❬ ◗ ❊ ❋ ❯ ❏❳ ❚ ❏ ❯ ❏ ❵ ♣ ❣❝ ❜ ❝ ❤ ❝ ❡ ✐ ❥❦ ❧♠ ❣ ♥❨ ❯ ❊ ❋ ❑ ❏ ❋ ◆❊❋ ❑ ❑ P ❋ ❏ ❖ ❏❋ q r ❫ ❦ s ❡ ❛❥ t❛❥❛ s ❧❛ ✉ q r ❫❍ ✈ ◆❊◗ P ❚ ❏ ❖ ❏❋ ❚ ❊❋ ❊ ● ❍ ■ ❍ ❏❋ ❲ ❏ ❋ ❑ ▲ ❊● P ◆ ❚ ❊ ◗ ❋ ❏ ❳ ❯ ❍●❏ ❖ P ❖ ❏ ❋ ▼ ● ❊❳ ❚ ❊ ❋ ❊ ● ❍■ ❍ ●❏ ❍ ❋ ❯ ❍ ❯ P ❋ ❍ ❏❨ ✇ ● ❊ ❳ ❖ ❏ ◗ ❊❋ ❏ ❍ ■ P ❘ ❖ ❊❯ P ❏ ■ ▼ ❚ ❍ ❖ ❚ ❊ ❋ ❊● ❍■ ❍❏❋ ❯ ❍ ❏■ ❏ ❙ ❏ ❯ ❏ ●❏ ❳ ❖ ❊▲ ❏ ◗ P ❏ ❋ ✉ s ❢ ① ❛ ❜❡② ✈ ❯ ❏● ❏ ◆ ❚ ❊❋ ❊● ❍■ ❍❏❋ ❍ ❋ ❍❨ ⑤⑥⑦ ⑧ ⑨⑩ ❶ ❷❸ ❹ ❺ ❸ ❹ ⑦ ❸ ❻ ❸ ❹ ❶ ⑨ ❶ ⑨ ❼❽❾ ❿➀➁➂➃ ➄ ➅ ➆ ➀ ➂➀ ➇➈ ➉ ➊ ➋ ➌ ➋ ➉ ➍ ➋ ➎ ➏ ➉ ➋ ➐ ➑➈➎ ➒➓➔→ ➣↔↕ ↔ ➙ ➛ ➒➓➔→ ➣↔↕ ↔ ➙ ➜ ➝ ➜ ➞ ➝ ➈ ➟➋ ➞ ➠ ➈ ➉ ➞ ➋ ➌ ➡ ➟ ➊ ➡ ➡ ➌ ➢ ➟➋ ➌ ➡ ➑➈ ➟ ➋ ➟➜ ➡ ➑➈ ➝ ➢ ➊ ➈ ➤ → ➥ ➦ ➊ ➋➎ ➊ ➡ ➍ ➟ ➢ ➎ ➍ ➈ ➊ ➋ ➟➋➑ ➧ ➨➦➩ ➫ ➭ ➦ ➋ ➌ ➯ ➲ ➨ ➈ ➎ ➣ ↔↕ ↔ ➙ ➯ ➋ ➎ ➐ ➠ ➈ ➉ ➞ ➋ ➌ ➡ ➟ ➊ ➡➡ ➌ ➢ ➟➋ ➌ ➡ ➠ ➈ ➉ ➜ ➍ ➜ ➉ ➋ ➎ ➳ ➵ ➸ ➺ ➧ ➠ ➊ ➈➎ ➐ ➋➎ ➥ ➓➻ ➠ ➈ ➉ ➜ ➍ ➜ ➉ ➋➎ ➼ ③ ➺ ➵ ➧ ➠ ➯ ➋➎ ➐ ➑➈➎ ➯ ➋➎ ➊ ➡ ④ ➸ ➽ ➋ ➌ ➋ ➑ ➋➑ ➡➎ ➢ ➲ →➎ ➋ ➟➡ ➌ ➡ ➌ ➧ ➉ ➢ ➝ ➈➡ ➎ ➑➈➎ ➜ ➎ ➾ ➜ ➍ ➍ ➋ ➎ ➠ ➋ ➞ ➚ ➋ ➧ ➉ ➢ ➝➈➡ ➎ ➩ ➑ ➪ ➩ → ➯ ➋➎ ➐ ➊ ➡ ➊ ➈ ➊ ➜ ➍ ➌ ➡ ➊ ➋ ➉ ➡ ➒ ➓➔→ ➑➈ ➎ ➐ ➋➎ ➊ ➜ ➎ ➐ ➵ ➶ ➊ ➢ ➑➋ ➡➎ ➝ ➉ ➋➎ ➌ ➑➈ ➑➠ ➉ ➋ ➎ ➛ ➽ ➊ ➢ ➑➋ ➡➎ ➏ ➜ ➎ ➐ ➌➡ ➢ ➎ ➋ ➟➛ ➊ ➋ ➎ ➳ ➊ ➢ ➑➋➡ ➎ ➋ ➜ ➝ ➢ ➉ ➈ ➐ ➜ ➟ ➋ ➝ ➢ ➉ ➲ ➓ ➋ ➈ ➉ ➋ ➞ ➳ ➹ ➘ ➭ ➤ ➑ ➈➎ ➐ ➋➎ ➊ ➜ ➎ ➐ ↕ ➴ ➷ ➙ ➷➬ ➮➱ ↕ ✃ ❐ ❒ ➙ ❮ ➱ ❰ ❒❐ ➙ ➷ ➬ ✃ ❰ Ï➬ Ð ❰ ➙ ❐ ➊ ➋➎ ➧ ➋ ➊ ➋ ➜ ➾ ➜ ➎ ➐ ➳ ➹ ➊ ➋ ➉ ➡ ➒ ➓➔→ ➯ ➋➎ ➐ ➊ ➡ ➡ ➌ ➢ ➟➋ ➌ ➡ ➑➈➎ ➐ ➋➎ ➊ ➜ ➎ ➐ ➈➍ ➢ ➉ ➧ ➢ ➟➡ Ñ →Ò ➲ Ó ➈ ➍ ➝ ➢ ➉ ➯ ➋➎ ➐ ➑➈ ➎ ➐ ➋ ➎ ➊ ➜ ➎ ➐ ➐ ➈ ➎ ➧ ➈ ➎ ➯ ➋ ➎ ➊ ➡ ➤ ➔→➡ ➯ ➋➎ ➐ ➝➈ ➉ ➌➜ ➌➜ ➎ ➊ ➋ ➉ ➡ ➊ ➜ ➋ ➏ ➉ ➋ ➐ ➑ ➈➎ ➳ ➹ ➘ ➭➤➩ ➑ ➧ ➑➋ ➊ ➈➎ ➐ ➋➎ ➋ ➉ ➋ ➞ ➝➈ ➉ ➠ ➋ ➟➡➍ ➝➈ ➟➋ ➞ ➠ ➈ ➉ ➞ ➋ ➌ ➡ ➟ ➊ ➡ ➍ ➢ ➎ ➌➝ ➉ ➜ ➍ ➌ ➡ ➲ ➨ ➈➎ ➧ ➈ ➎ ➯ ➋ ➎ ➊ ➡ ➤ ➔→➡ ➣↔↕ ↔ ➙ ➝ ➈ ➟ ➋ ➞ ➠ ➈ ➉ ➞ ➋ ➌ ➡ ➟ ➊ ➡➡ ➎ ➝ ➉ ➢ ➊ ➜ ➍ ➌ ➡➍ ➋ ➎ ➍ ➈ ➐ ➈ ➎ ➢ ➑ ➝ ➋ ➎ ➋➑➋ ➎ ➣ ➱ ❐ ➙ Ï➷ ✃ ↔ ➙ ↔ ➙ ❐ ➙ Ô ➙ ➷Õ Ö➬ × ➴ ↔ Ø ➲ ➑ ➈ ➟ ➋ ➟ ➜ ➡ Ù Ð Ö ✃ Ô ➙ ×➷➱Ö➬ ➴ ↔ ➷➴ ↔➱ Ú ➙ ×➬➱ ❰ Ï ➦ Û→ ➵ ➶ ➵ ➑➈➎ ➐ ➞ ➋ ➌ ➡ ➟ ➍ ➋➎ ➝ ➋ ➎ ➋➑➋ ➎ ➣ ➱ ❐ ➙ Ï➷ ✃ ↔ ➙ ↔ ➙ ❐ ➙ Ô ➙ ➷ Õ Ö➬ × ➴ ↔ Ø ➲ ➝ ➉ ➋ ➎ ➌➐ ➈ ➎ ➡➍ ➲ ➭ ➋➎ ➋ ➑➋➎ ➝➉ ➋➎ ➌➐ ➈➎ ➡ ➍ ➡ ➎ ➡ ➟ ➈ ➠ ➡ ➞ ➧ ➈➍ ➋ ➝➈ ➉ ➞ ➋ ➊ ➋ ➧ ➒ ➈ ➍ ➋ ➑➋ ➎ ➳ ➲ ➼ ➑ ➩ → ➟ Ñ → ➟ ➥ ➟ Ü ➲ ➽ Û Ý ÞÒ ➊ ➋➎ ➧ Û ß ➊ ➡ ➠ ➋➎ ➊ ➡➎ ➐ ➍ ➋ ➎ ➊ ➈➎ ➐ ➋ ➎ ➝ ➋ ➎ ➋➑➋ ➎ ➎ ➢ ➎ ➝➉ ➋➎ ➌➐ ➈➎ ➡ ➍ ➲ Û➋ ➟ ➡ ➎ ➡ ➑➈ ➎ ➜ ➎ ➾ ➜ ➍ ➍ ➋ ➎ ➠ ➋ ➞ ➚ ➋ ➩ ➑ ➪ ➩ → ➑ ➈➑ ➧ ➜ ➎ ➯ ➋➡ ➧ ➈ ➉ ➋➎ ➋➎ ➯ ➋➎ ➐ ➧ ➈ ➎ ➝➡➎ ➐ ➊ ➋ ➟➋➑ ➝ ➢ ➟➈ ➉ ➋➎ ➌ ➡ ➣ ➱ ❐ ➙ Ï➷ ✃ ↔ ➙ ↔ ➙ ❐ ➙ Ô ➙ ➷Õ Ö➬ × ➴ ↔ Ø ➲ ➝➈ ➉ ➞ ➋ ➊ ➋ ➧ ➒ ➈ ➍ ➋➑➋ ➎ → ➟ ➲ à ➄ á ➄ ➅ ➆ ➀➂➀ Ó ➈ ➍ ➝ ➢ ➉ ➈ ➍ ➌ ➧ ➉ ➈ ➌ ➡ ➐ ➈➎ ➣ ↔↕ ↔ ➙ ➜ ➝ ➜ ➞ ➊ ➡ ➠ ➋ ➚ ➋ ➞ ➍ ➈ ➎ ➊ ➋ ➟➡ ➧ ➉ ➢ ➑ ➢ ➝ ➈ ➉ ➍ ➜ ➋ ➝ ➧ ➈ ➉ ➟➜ ➊ ➡ ➍ ➢ ➎ ➌➝ ➉ ➜ ➍ ➌ ➡ ➊ ➋ ➎ ➊ ➡➡ ➎ ➝ ➉ ➢ ➊ ➜ ➍ ➌➡➍ ➋➎ ➍ ➈ ➐ ➈ ➎ ➢ ➑ ➝➋➎ ➋➑➋ ➎ ➌ ➈ ➎ ➌➡ ➝➡➏ → ➟ ➛ ➌➈ ➞ ➡➎ ➐ ➐ ➋ ➧ ➈ ➉ ➋ ➎ ➋ ➎ ➐ ➈ ➎ ➡➎ ➡ ➊ ➋ ➟➋➑ ➝ ➢ ➟ ➈ ➉ ➋ ➎ ➌ ➡ ➝➈ ➉ ➞ ➋ ➊ ➋ ➧ ➒ ➈ ➍ ➋ ➑➋➎ → ➟ ➧ ➋ ➊ ➋ ➝➋ ➎ ➋ ➑➋➎ ➊ ➋ ➧ ➋ ➝ ➊ ➡ ➍ ➈ ➝➋ ➞ ➜ ➡ ➲ âãäå ãæ çèéå ã ê ã ëì íî ï ðñ ò óô õ ö ö õ ô ÷øëù ú û ü ûý ú ûý ò ÷ øë ü þ íÿ û✁ ✂ñ ûñ✄ ☎ ð✁ ï ñ ûñ✄ ✂ ý ú ÷øë ñ ð íû ý ✆ ðý ✝ ô ✞ ✟ ✠✡ ☛ ✟✡ õ ☞ ✌ ✍ ✎ ✎ ✏ ✑ ✒ ✓✑ õ ✏ ö – ✑ õ ✏ ✔ ô ëì ý ✕✖ ✄ ✕ ð☎ ✂ ✝ ï ✁ ï ✗ ✄ ✘ ñ✂ ✙ ✂ ✚ ✄ ✛ ì ï ý ✝ ✜✛ ✄ ✗ ✂ ò ñï þ ò þ ✚ ô õ ö ö ✑ ô ë í ï ð ý ï ð ý ì ð ✢ ð òñ ò ì û ✚ ✣ ù ë ✤ ó✂ñ û ✂ ✆ òð ☎ ð òÿ ✢ ÿ ü û✁ ✂ ý û ý òí ÿ ✂ íò û✁ ð ý ✝ òì û ü í ✂ ñ ✂ û ✢ ✁ ✂ ý û ñ ï ✁ ✥ ✂ ✆ û ü þ òû ý ò ð ✂ í ñ ð ý ñî ï ✂ ñì ✁ þ þ òñô ✦✧★ ☛ t ✦✩ ys ✠ ✪ ✧ ✑ õ ✌ ✓✑ ✔ ✫ ✑ ù ✑ ✔ ☞ ö ô ë✬ ✂ ñì ð ✭ ✄ ✗ þ ✁ ð✬ ✂ ✙ ✂ ✭ ✄ ✮ þ ✬ þ ò✂ ëô õ ö ö ✎ ô ✯✰ ✱ ✪ ✲ ★ ✟ t ✡ r ✠✳ ✴ ù û ú ð ✂ òûú ò✁ ✂ ý ñ ✥ þ ✁ ✂ ò ðþ ý ñÿ ñ òû ✥ þ ✁ ò ì û ú ✁ þ ï ✝ ì ò ✂ ý ú û✵ ✆ û ññ íð ✝ ì ò ñ ò ✁ û ññ ù òþ íû ✁ ✂ ý ò ✙ ð íú ✙ ✂ ò û ✁ û íþ ý ✍ ✶ ✠ tr ✳ ✧✧ u s ✧ ★ ☛ ★ ✷ u s ✒ ô ✦ ✧ ★ ☛ t ✸ ✠ ✪ ✷ ✡✟ ✩ õ õ ✍ ✑ ✒ ✓ ✑ ✔ ù ✑ ✫ ô ë ý þ þ ü ✹ ✗ ✄ ✺✂ñ ï ✻ ✄ ✗ ✆ ✛ ✂ þ ý ✗ ✤ ✄ ✗ ✆ë íðñ òû ✁ ù ✚ ûý ý ✼✄ ✤ ✂ÿ í þ ✁ ✜✖ ô õ ö ö ✔ ô ✗ þ ú ï í✂ ò ðþ ý þ ✥ ✛ ðò ✁ ✂ òû ✗ ûò ✂ ✢ þ í ðñ ë íò û✁ ë í ï ð ý ð ï ✤ þ í û✁ ✂ ý ✆û ðý ✮ û ✂ ñ ò ✂ ý ú ✤ ✁ ✂ ý ñ ✝ û ý ð ✆ ✛ ✂ ý þ í ✂ ✘ ☎ û✁ û✵ ü ✁ û ñ ñ ðý ✝ ✂ ✗ ðò þ ✆ ì þ ý ú ✁ ð ✂ í ✛ ðò ✁ ✂ ò û ✕ ÿ ý òì ✂ ñ û ô ✦✧★ ☛ ✷ ✦ ✩ ys ✠ ✪ ✧ ✑ ✔ õ ✓ õ õ ö ✎ ù õ õ ✑ ✏ ô ë ý ✙ ✂ ✁ ✕ ✄ ✖ ï ñï ✥ ✗ ✄ ✕ ï ì ✂ ✁ ñ þ ý þ ✄ ✕ þ ü ✂ ý ú ð û ✽ ô õ ö ö ö ô ó û ý ✝ ✬ íþ ý ✂ ý ✝ û ý ÿ ✂ ý ✝ ú ð ðý ú ï ✬ ñ ð þ íûì ✂ í ï ð ý ð ï ü ✂ú ✂ ✬ ûú û í ✂ ð ô ✾ ✸ ✠ ✪ t ✡ ✿ ☛ ✪ ✧ ❀ ☛ ❁ ✪ ☛ ✡ s ✠ ★ ✎ ✍ ✑ ✒ ✓ ✏ ù ✑ ✌ ô ë ✁ ✂ ý ✝ þ ✗ ✄ ✜ û✂ ☎ ï ú ✂ ý ò ❂ ✄ ✘ ï ✥ ✂ òò þ íû ✗ ✄ ✺þ ï ò✁ ÿ ✗ ô õ ö ö ✔ ô ✤ ì û ü í✂ñ ✂ û ✢ ✁ ✂ ý û ü ✁ þ ò þ ý ü ï ü ë ✤ ó✂ñ û✓ ò ì û ñ ð ✝ ý ð ✥ ð ✆ ✂ ý ✆ û þ ✥ ✝ ûý û ñï ✢ ✥ ✂ ð íð û ñô ✦✧★ ☛ t ★ õ ✑ ✌ ✓ ✔ ✎ ✎ – ✔ ✌ ✎ ô ëï û ✁ ✗ ✄ ✕ ✆✂ ✁ ✢ þ ✁ þ ï ✝ ì ✜ ë✄ ✭ ï ì í ✢ ✁ ✂ ý ú ò ❃ô ✑ ☞ ✫ ✫ ô ✤ ì ✁ ûûù ú ð ûý ñ ð þ ý ✂ í ✂ ü þ ✥ òì û ü í ✂ ñ ✂ û ✢ ✁ ✂ ý û ✚✛ ù ë ✤ ó✂ñ û ðý ò ì û þ ü ûý ✆þ ý ✥ þ ✁ ✂ òð þ ý ô ❄ ★ ✷ u r ✡ ✔ ☞ õ ✓ ✫ ❅ ö – ❅ ✔ ô ë✵ û í ñ ûý ✭ ✺✄ ó✂ í ✝ ✁ ûý ✗ ✜ ô ✑ ☞ ☞ ✫ ô ❆ ☎ þ í ï òð þ ý þ ✥ ñï ✢ ñ ò✁ ✂ ò û ñ ü û ✆ð ✥ ð✆ ðò ðûñ ðý ò ì û óù òÿ ü û ë ✤ ó✂ñ û ñï ü û ✁ ✥ ✂ ð í ÿ ô ✾ ❇ ✪ ✧ ❈ ❉ ✪ ✧ ❅ ✌ ✓ ✫ ❅ – ✑ ö ✑ ô ✺ ✂ ✝ ✂ ñ ✁ ✂ ✘ ✄ ó ✁ ð íí ð ✂ ý ✭÷ ô õ ö ö ❅ ô ÷øë ðý ò û✁ ✥ û✁ ûý ✆ û ✓ òì û þ í û✆ï í✂ ✁ ð ï ý û ñÿ ñ òû ô ✾ ❇✪ ✧ ❊ ✠ sto l ✔ ✎ ✍ ✌ ✒ ✓ ✎ ❅ ✎ – ✎ ✔ ô ✺ ✂ ✁ ✆ûí þ ✖ ✄ ó þ ñ ✆ì ûý ✁ ðû ú û ✁ ✛ ô õ ö ö õ ô ❂ ✂ ñ ò ✁ þ þ ò ✝ ✁ þ ✙ ò ì ✁ ûñ ü þ ý ñ û ñ✄ ✁ þ þ ò û ✵ ï ú ✂ òûñ✄ ✂ ý ú ð ý ò û✁ ý ✂ í ú ûò þ ✵ ð ✥ ð ✆ ✂ òð þ ý ✂ ñ ✆íï ûñ òþ òì û û✆ì ✂ ý ð ñ ñ þ ✥ ✂ í ï ð ý ðï òþ ✵ ð✆ ðòÿ ✂ ý ú ✁ û ñ ðñ ò✂ ý ✆û ✓ ✂ ✁ û ☎ ð û ✙ ô ❈ ☛ ❉ ✠ ro n ❈ ❋ p ✸ ✪ ✷ ❅ ✫ ✓ ✏ ✎ ù ☞ õ ô ✺ ✂ ñï ✻ ✄ ✜ þ ú ✢ þ íú ✽ ✄ ✤ ✂ÿ íþ ✁ ✜✖ ô ✑ ☞ ☞ ❅ ô ë íï ðý ðï ✁ û ñ ðñ ò✂ ý ✆û ð ý ● r ✠ t ✠ ✟ u m ★ ✡ st ✠ vu m ✂ ññ þ ✆ð✂ òûú ✙ ð ò ì û ý ì ✂ ý ✆ û ú û✵ ï ú ✂ ò ð þ ý þ ✥ ✂ í ✂ òûô ✦✧ ★ n t ✦ ✩ ❍ s ✠ o l ✑ ❅ ❅ ✓ ✏ ❅ ✏ ù ✏ ✎ ✔ ô ✺ ✂ ñï ✻ ✄ ✜ þ þ ú ë ✜ ✄ ✤ ✂ ÿ í þ ✁ ✜ ✖ ô õ ö ö ✑ ô ✤ ✁ ✂ ý ñ ✝ û ý ð ✆ ✸✱ ★ ■ s ✠ ✟ ★ ☛ ★ p u s ü í ✂ ý òñ þ ☎ û ✁ û ✵ ü ✁ ûññ ð ý ✝ ✂ íï ðý ðï ù ð ý ú ï ✆ û ú ð òþ ✆ì þ ý ú ✁ ð✂ í ✂ ý ✝ ✂ ý ûñ û ñï ü û ✁ þ ✵ ðú û ú ð ñ ï ò ✂ ñ û ✆ ✽ øë ✂ ✁ û ✁ ûñ ð ñ ò✂ ý ò òþ ✂ íï ð ý ð ï ô ✦ l ★ ☛ t ✶✡ ll ❈ ☛ ❉ ✠ ro n õ ❅ ✓ ✑ õ ✌ ☞ ù ✑ õ ✏ ✫ ô ✺ ✂ ï ý ñ ✝ ✂ ✂ ✁ ú ✼ ✡ t ★ ✧ ô ✑ ☞ ☞ ✫ ô ✤ ì û ✑ ❅ ù ✔ ù ✔ ü ✁ þ òû ðý ñ ✂ ññ þ ✆ð✂ ò û ✙ ð ò ì òì û ü í ✂ ý ò ✚ ✣ ù ë ✤ ó✂ñ û ò þ ✝ û ý û ✁ ✂ òû ✂ ✥ ï ñ ð✆ þ ✆✆ ðý ✢ ðý ú ðý ✝ ✆ þ ü íû✵ ✂ ý ú ✂ ✥ ï ñ ð ✆þ ✆✆ ðý ✁ û ñ ü þ ý ñ ð☎ û ñÿ ñ òû ô ● ✩ ✡ ✦✧ ★ ☛ t ✾ ✑ ✔ ✓ ✌ ✌ ✑ – ✌ ✏ ✑ ô ▲ ▼◆ ❖ ▼P ◗ ❘ ❙ ▼❚ ❯❚ ❱ ❲ ▼ P ❳❘ ❨ ❩ ❬ ❭ ▼ ❪ ❘ ◗▼❫ ❴❵ ❛ ❘ ❛▼❜ P ❚ ◆ ❬ ❝❞ ❑ ❏ ❏ ❡ ❞ ❢ ❜ ▼❱ ❴❚ ❣ ❚◆ ❵ ❴❚ ❩ ❱ ❵ ❱ ❜ ❤ ❚ ❩ ◆ ❬ ▼✐❚ ◆❵ ❯ ◆❬ ❵ P ❵ ◆ ❴ ▼P ❚ ❥❵ ❴❚ ❩ ❱ ❩ ❦ ❴ ❬ ▼ ❫ ❯❵❭✐❵ ✐ ▼✐ ❤ P ❵ ❱ ▼ ❛ ❧ ♠ ♥♦ ♣ ❵ ❭ ▼ ❚ ❱ ❲ q ❵ P ❜ ◆ ▼❯ ❯ ❭ ❩ ❦ rs ts ✉ ✈ ✉ ✇ ✉ ❨❞ ①②✉ ③ ④ ✉ ❑ ❏ ⑤ ⑥ ⑦ ⑦ ♠ ⑧ ⑤ ❞ ▲ ▼ P ❱ ❭ ❴▼ ❚ ❱ ⑨ ❘ ❳ ❵ q ❜ ⑩ ♥♥❘ ❛ ❵ ✐✐ ❩ ❱ ❜ ❶❷ ❘ ❛ ❵ ❱ ❱ ❩ ❱ ❪ ❸ ❞ ❹ ⑤ ⑤ ❑ ❞ ❝❩ ❯ ▼ ❦ ❩ P ❵ ❤ ❚ ❜ ▼ ❱ ❴ ❵ ❴▼ P ❚ ❤ ❩ ❱ q ◆ ❯▼❵❭ ▼ ❚ ❱ ❴❬ ▼ ❚ ❱ ❚ ❴ ❚ ❵ ❴ ❚ ❩ ❱ ❭ ❴ ▼ ❫ ❩ ❦ ❝ ❺ ♥ ❚ ❱ ❴▼ P ❦ ▼P ▼ ❱ ◆ ▼ ❞ ❻ ✉ ④ u r ❼ ⑦ ⑤ ❏ ⑥ ❡ ❽ ❡ – ❡ ❽ ❽ ❞ ▲❚ ❱ ❥▼❯ ❷ ❨❞ ❑ ❏ ❏ ⑧ ❞ ❺ ❵❳ ❯ ❚ ❱ ❜ q ◆ ▼ ❜ ❵◆ ◆ q ✐ q ❯ ❵ ❴ ❚ ❩ ❱ ❩ ❦ ❴ ❩ ❱ ❩ ❫ ❯❵ ❭ ❴ ❵ ❱ ❜ ❫ ❯❵❭✐❵ ✐ ▼ ✐ ❤ P ❵ ❱ ▼ ❛ ❧ ♠ ♥♦ ♣ ❵❭ ▼ ✐ ▼❭❭❵ ❲ ▼ ❚ ❱ ❴❩ ✐❵ ❴❩ ❞ ① ❾ ys s ❿ ② ①②✉ ③ ④ ✉ ❏ ⑦ ⑥ ➀ ❹ ❹ – ➀ ❹ ➁ ❞ ▲ P ▼◆ ❖ ❯▼ ❶ ➂ ❘ ➃ ❵ ❬ ❯▼ ❛ ❞ ❑ ❏ ❏ ❑ ❞ ➄t ❿ ② ❿ ➅ s t✉ ② ➅ ❼❿ ✇ ❿ ④✉ ③ ➆➇ ✉ ➈ ④ ❼ t o l ❿ ➅ y ✉ ③ ➉ ❼ t o to x s t o l ❿ ➅ ➆➊ ①➋ ❿ ➅ ➋ ❼ ss s n ✇ ❿ ④✉ ③ y ❞ ➌ ❩ ❯q ✐ ▼ ❖ ▼ ♠ ⑧ ❹ ❞ ▲ ▼ P ❯ ❚ ❱ ❘ ❛▼❜ ▼❯ ❤ ▼P ❲ ⑥ ❶ ❫ P ❚ ❱ ❲ ▼P ➌ ▼ P ❯❵❲ ❞ ❬ ❯ ✐ ❡ ❏ ❑ – ⑦ ⑤ ❽ ❞ ▲ P ▼❭❭❵ ❱ ❝ ♥❘ ❛ ❵❭ ▼❲ ❵ ➍ ❵ ♣ ❷ ❘ ♣ ❵ P ❜ ❩ ❸ ❷ ❞ ❑ ❏ ❏ ➁ ❞ ♣❯❵ ❱ ❴ ❭ q ❭ ▼ ◆❵ ❯ ◆ ❚ q ✐ ❴❩ P ▼❭ ❩ ❯❣ ▼ ❭❵ ❯❴ ❭ ❴ P ▼ ❭❭❞ ➎ r ❼ ③ ➉ ➏ ① ② ✉ ③ ④ ➐ t s ❡ ⑥ ⑦ ❑ ❑ ♠ ⑦ ❑ ❹ ❞ ▲ P ❚ ❭ ❖ ❚ ❱ ◗♣ ❘ ♣❩ ❩ ❯▼ ❝ ❸ ❞ ❑ ❏ ➁ ❡ ❵❞ ♣❯❵❭✐ ❵ ✐ ▼✐ ❤ P ❵ ❱ ▼ ♥♦ ♣ ❵ ❭ ▼ ❩ ❦ P ▼❜ ❤ ▼▼ ❴ ❦ ❩ P ✐ ❭ ❵ ❫ ❬ ❩ ❭❫ ❬ ❩ P ⑩ ❯❵ ❴ ▼❜ ❚ ❱ ❴ ▼P ✐ ▼ ❜ ❚ ❵ ❴ ▼ ❞ ① ② ✉ ③ ④ ① ❾ ➆ s s o l ➀ ❑ ⑥ ⑧ ⑤ ➀ – ⑧ ❑ ❹ ❞ ▲ P ❚ ❭ ❖ ❚ ❱ ◗♣ ❘ ♣❩ ❩ ❯▼ ❝ ❸ ❞ ❑ ❏ ➁ ❡ ❤ ❞ ⑨ ❣ ❚ ❜ ▼❱ ◆ ▼ ❦ ❩ P ❵ ð ♠ ❵ ❭❫ ❵ P ❴ ⑩ ❯ ❫ ❬ ❩ ❭❫ ❬ ❵ ❴▼ P ▼❭❚ ❜ q ▼ ❚ ❱ ❴❬ ▼ ❫ ❬ ❩ ❭❫ ❬ ❩ P ⑩ ❯❵ ❴ ▼❜ ❚ ❱ ❴ ▼P ✐ ▼ ❜ ❚ ❵ ❴ ▼ ❩ ❦ ❴❬ ▼ P ▼❜ ❤ ▼▼ ❴ ❫ ❯❵❭✐❵ ✐ ▼✐ ❤ P ❵ ❱ ▼ ♥♦ ♣ ❵ ❭ ▼ ❞ ①②✉ ③ ④ ① ❾ ys s o l ➀ ❹ ⑥ ❑ ❑ ❡ ❡ ♠ ❑ ❑ ❡ ⑧ ❞ ▲ q ◆ ❬ ❵ ❱ ❵ ❱ ▲▲ ❘ ❪P q ❚ ❭❭ ▼ ✐ ➂❘ ❸ ❩ ❱ ▼ ❭ ❝ ❨❘ ▼ ❜ ❚ ❴❩ P ❞ ❹ ⑤ ⑤ ⑤ ❞ ➑ s ❿ t ❾ ❼ m s stry ✉ ③ ➉ ➒ o l ❼ t u l ✉ ➋ ➑ s o l ❿ ➅ ➆ ❿ ✈ ① l ✉ ③ ④ s ❞ ⑨ ❜ ❖ ▼♠ ⑦ ❞ ❝❩ ◆ ❖ ❣ ❚ ❯ ❯▼⑥ ❸ ❩ ❬ ❱ ➂❚ ❯▼ ⑩ ❵ ❱ ❜ ❶ ❩ ❱ ❭❘ ❢ ❱ ◆❞ ❬ ❯ ✐ ❞ ❑ ❑ ⑧ ♠ ❑ ❑ ➀ ❞ ▲ q P ❲ ❬ ❩ ❩ P ❱ ❛ ♣ ❘ ❶ ❩ ❴ ▼P ❩ ❫ ❩ q ❯❩ ❭ ♣ ❘ ♣ ❵ ❜ ▼ P q ♣ ❞ ❹ ⑤ ⑤ ❹ ❞ ❷ ❩ ❯▼ ◆ q ❯ ❵ P ▼ ❣ ❵ ❯q ❵ ❴ ❚ ❩ ❱ ❩ ❦ ❴ ❬ ▼ ❫ ❯ ❵ ❭✐❵ ✐ ▼ ✐ ❤ P ❵ ❱ ▼ ❫ P ❩ ❴ ❩ ❱ ❫ q ✐❫ ❦ P ❩ ✐ ➓➏➔ ❼ r ➅ s llu s ✈ u m s ➅ ✉ tu s ❞ ➓③ t s m s t ➓➅ ❼ n ts ✉ ③ ➉ t ❾ ❼ m o ⑦ ❽ ⑥ ❽ ❑ ⑧ ♠ ❽ ❹ ⑦ ❞ ▲ q P ❥ ⑩ ński M, Kolano E. 2003. → n v s vo and s n v s tro effects of copper and cadmium on the plasma membrane H + -ATPase from cucumber ➣ u t u m s s s ✉ ④ s vu s L. and maize ↔ ❼ ✉ m ✉ ➆ s L. roots. ➓t t ✉ ① ❾ ➆ s s o l ①②✉ ③ ④ ✉ 25: 39–45. Butler MP, Hanly JA, Moynagh PN. 2005. Pellino3 is a novel upstream regulator of p38 MAPK and activates CREB in a p38-dependent manner. ↕ ➑ s o l ➣ ❾ ❼ m 280: 27759–27768. Cakmak I, Horst WJ. 1991. Effect of aluminum on lipidperoxidation, superoxidedismutase, catalase, and peroxidaseactivities in root-tips of soybean ➙ ly t s n ❼ m ✉ ➛ ➊ ① ❾ ➆ s s o l ①②✉ ③ ④ 83: 463-468. Camoni L, Fullone MR, Marra M, Aducci P. 1998. The plasma membrane H + - ATPase from maize roots is phosphorylated in the C-terminal domain by calcium-dependent protein kinase. ① ❾ ➆ s s o ①②✉ ③ t 104: 549–555. Care DA. 1995. The effect of aluminum concentration on root hairs in white clover ➎ r s✈ o l s u m r ❼ ➔ ❼ n s L.. ①②✉ ③ ④ ➐ ❿ s l 171: 159-162. Chang S, Puryear J, Cairney J. 1993. A simple and efficient method for isolating RNA from pine trees. ➜ ➝➞ ➟ ➠ ➡ ➢ ➝ ➤➥ ➢ ➝ ➦➧➨ 11: 113-116. Check E. 2007. RNA interference: hitting the on switch. ➩ ➞ tu r ➧ 448 7156: 855– 858. Chuang CF, Meyerowitz EM. 2000. Specific and heritable genetic interference by double-stranded RNA in Arabidopsis thaliana. ➜ r ➢ ➫ ➩ ➞ ➠ ➝ ➭➫ ➞ ➯ ➲ ➫ ➥ ➳ ➲ ➭ 97: 4985–4990. Chung HJ, Sehnke PC, Ferl RJ. 1999. The 14-3-3 proteins: cellular regulators of plant metabolism. ➵ r ➧➟ ➯ s ➜ ➝➞ ➟ ➠ ➲ ➫ ➥ 4:367–371. Ciamporova M. 2000. Diverse responses of root cell structure to aluminum stress. ➜ ➝ ➞ ➟ ➠ ➲ ➢ ➥ ➝ 226:113-116. Ciamporova M. 2002. Morphological and structural responses of plant roots to aluminum at organ, tissue, and cellular levels. ➤ ➥ ➢ ➝ ➜ ➝ ➞ ➟ t 45: 161-171. Claussen M, Luthen H, Blatt M, Bottger M. 1997. Auxin induced growth and its linkage to potassium channels. ➜ ➝ ➞ ➟ ➠ ➞ 201: 227-234. Cosgrove DJ. 1997 ➸ Relaxation in a high-stress environment: the molecular bases of extensible cell walls and cell enlargement. ➜ ➝ ➞ ➟ ➠ ➺ ➧➝ ➝ 9: 1031-1041. Cote GG. 1995. Signal Transduction in Leaf Movement ➸ ➜ ➝ ➞ ➟ ➠ ➜ ➻ ➼ s ➥ ➢ ➝ 109:729- 734. Cuenca G, Herrera R, Merida T. 1991. Distribution of aluminum in accumulator plants by X-ray microanalysis in ➦ ➥ ➫➻ ➧ r ➥ ➞ ➽ r ➞ ➟ ➯ ➥ s Vahl leaves from a cloud forest in Venezuela. ➜ ➝ ➞ ➟ ➠ ➺➧ ➝➝ ➾ ➟ v ➥ r ➢ ➟ 14: 437-441. Dai J, Sultan S, Taylor SS, Higgins JMG. 2005. The kinase haspin is required for mitotic histone H3 Thr 3 phosphorylation and normal metaphase chromosome alignment. ➚➧ ➟ ➧ s ➪ ➶ ➧ v 19: 472–488. Darojat MR. 2010. Perakitan ➡ ➧ l ➞ ➹ to m ➞ m ➞ ➝ ➞ ➘ ➞ ➠ ➻ ➴ ➥ ➫ u m transgenik [Skripsi]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. de la Fuente JM, RamirezRodriguez V, CabreraPonce JL, HerreraEstrella L. 1997. Aluminum tolerance in transgenic plants by alteration of citrate synthesis. ➲ ➫ ➥ ➧ n ➫ ➧ 276: 1566-1568. de Vos CHR, Bookum WMT, Vooijs R, Schat H, de Kok LJ. 1993. Effect of copper on fatty acid composition and peroxidation of lipids in the roots of copper-tolerant and -sensitive Silene cucubalus. ➜ l ➞ ➟ ➠ ➜ ➻ ➼ s ➥ o ➤ ➥ o ➫ ➻ ➧ m 31: 151–158. Delhazie E, Hebb DM, Ryan PP. 2001. Expression of a ➜ ➹ ➧ ➷ ➯ ➢ ➬ ➢ ➟ ➞ ➹ ➞ ➧ r ➷ ➽ ➥ n o s ➞ citrate synthase gene in tobacco is not associated with either enhanced citrate accumulation or efflux. ➜ ➝➞ ➟ ➠ ➜ ➻ ➼ s ➥ o l 125: 2059–2067. Delhaize E ➮ t ➱ ✃ . 1993. Aluminium tolerance in wheat ❐ r ❒ t ❒❮ ❰ Ï ➱ ➮ st ❒ vu Ï L.. 1. Uptake and distribution of aluminium in roots apices. Ð ✃ ➱ Ñ Ò s ÐÓ Ô s ❒ Õ ✃ 103: 685-693. Delhaize E, Ryan PR. 1995. Aluminium toxicity and tolerance in plants. Ð✃ ➱ Ñ t Ð Ó Ô s ❒Õ ✃ 107: 315-321. Delhaize E ➮ t ➱ ✃ . 2004. Engineering high-level aluminum tolerance in barley with the ALMT 1 gene. Ð Ö Õ ❮ × ➱ Ò✃ Ø ❮ ➱ Ù Ú ❮❒ 101:15249-54. Devi SR, Prasad MNV. 1999. Membrane lipid alterations in heavy metal exposed plants. Di dalam: Prasad MNV, Hagemeyer J, editor. Û➮ ➱ Ü y m ➮ t ➱ ✃ str ➮ ss ❒ n p l ➱ Ñ Ò s Ý Þ Ö o m m o l ➮❮ u l ➮ s to ➮❮ o syst ➮ m s . Berlin: Springer. hlm 99–116. Devi SR, Yamamoto Y, Matsumoto H. 2003. An intracellular mechanism of aluminum tolerance associated with high antioxidant status in cultured tobacco cells. ß à n o r á â ❒ o ❮ Ó ➮ m 97: 59-68. Eraso P, Portillo F. 1994. Molecular mechanism of regulation of yeast plasma membrane H + -ATPase by glucose. Interaction between domains and identification of new regulatory sites. ß â ❒ o l ã Ó ➮ m 26914: 10393-10399. Ezaki B, Gardner RC, Ezaki Y, Matsumoto H. 2000. Expression of aluminum- induced genes in transgenic Arabidopsis plants can ameliorate aluminum stress andor oxidative stress. Ð l ➱ Ñ Ò Ð Ó Ô s ❒ o l 122: 657-665. Ezaki B, Yamamoto Y, Matsumoto H. 1995. Cloning and sequencing of cDNA induced by aluminium treatment and Pi starvation in cultured tobacco cells. Ð ✃ ➱ Ñ Ò ➱ 93: 11-18 Farrel RE. 1993. ä ×Ø å ➮ t Ó Õ Ù Õ ✃Õ á ❒ ➮ s æ Ø ç ➱ è Õ Ö ➱ Ò o ry é ❰ ❒ Ù ➮ ê o r à so l ➱ Ò ❒ o n ➱ Ñ Ù ã Ó ➱ Ö ➱ ❮ t ➮ r ❒ z ➱ Ò ❒ o n . New York: Academic Press, Inc. Felle HH. 1996. Control of cytoplasmic pH under anoxic conditions and its implication for plasma membrane proton transport in å ➮ Ù ❒❮ ➱ á Õ s ➱ Ò❒ v ➱ root hairs. ß ë xp â Õ Ò 47: 967-973. Finnie C, Borch J, Collinge DB. 1999. 14-3-3 proteins: eukaryotic regulatory proteins with many functions. Ð ✃ ➱ Ñ t å o l â ❒ o l 40: 545–554. Firdaus S. 2006. Isolasi dan karakterisasi fragmen cDNA dari gen penyandi glutathione S-conjugate transporter dari å ➮ l ➱ ì to m ➱ ➱ ê ê ❒ Ñ ➮ D. Don. [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Fodor E, Szabo-Nagy A, Erdei L. 1995. The effects of cadmium on the fluidity and H + -ATPase activity of plasma membrane from sunflower and wheat roots. ß Ð✃ ➱ Ñ Ò Ð Ó Ô s ❒ o l 147: 87–92. Frias I ➮ t ➱ l . 1996. A major isoform of the maize plasma membrane H + -ATPase: characterization and induction by auxin in coleoptiles. ❐Ó ➮ Ð ✃ ➱ Ñ Ò ã ➮ ll 8: 1533–1544. Fry SC í t î ï . 1992. Xyloglucan endotransglycosylase, a new wall-loosening enzyme activity from plants. ñòó ôõ í ö ÷ 282: 821-828. Fu H, Subramanian RR, Masters SC. 2000. 14-3-3 proteins: structure, function, and regulation. øù ù ú û í v ü õ î ý öî ôó ï þ ó ÿ òôó ï 40: 617–647. Fuglsang AT, Visconti S, Drumm K, Jahn T, Stensballe A. 1999. Binding of 14-3- 3 protein to the plasma membrane H + -ATPase, AHA2, involves the three C-terminal residues Tyr 946 -Thr-Val and requires phosphorylation of Thr 947 . ÷ ñò ó ï õ í ö 274: 36774–36780. Fullone MR, Visconti S, Marra M, Fogliano V, Aducci P. 1998. Fusicoccin effect on the in vitro interaction between plant 14-3-3 proteins and plasma membrane H + -ATPase. ÷ ñ ò ó ï õ í ö 273: 7698–7702. Guo TR, Zhang GP, Zhou MX, Wu FB, Chen JX. 2004. Effects of aluminum and cadmium toxicity on growth and antioxidant enzyme activities of two barley genotypes with different Al resistance. ü ï î ù t ✁ ó òï 258: 241-248. Hamilton C, Goog AG, Taylor GJ. 2001. Induction of Vacuolar ATPase and mitochondrial ATP Synthase by aluminium in an aluminium resistant cultivar of wheat. ü ï î ù ✂ ü õ ✄ s òó ï 125: 2068-2077. Hammond SM, Bernstein E, Beach D, Hannon GJ. 2000. An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. ☎ î ✂ u r í 404: 293–296. Hannon GJ. 2002. RNA interference. ☎ î ✂ u r í 418: 244–251. Harms K, Wohner RV, Schulz B, Frommer WB. 1994. Isolation and characterization of P-type H + -ATPase genes from potato. ü ïî ù t ✆ ó ï ñ ò ó 26: 978–988. Haug A, Shi B, Vitorello V. 1994. Aluminum interaction with phosphoinositide- associated signal transduction. øý ô õ þ ó ÿ ò ô ó ï 68: 1-7. Haug A, Vitorello V. 1996. Aluminium coordination to calmodulin: Thermodynamic and kinetic aspects. ó ó ý✝ õ í ö û í v 149: 113-124. Helliwell C, Waterhouse P. 2005. Construction and methods for hairpin RNA- mediated gene silencing in plants. In: David R. Engelke, John Rossi eds, ✆ í t õ ó ✝ ✞ ò ù ✟ù ✠ y ö ó ïó ✡ y , ☛ ó ï ☞ ✌ ✍ ✎ , û ☎ ø ò n t í r ✏ í r í ù ô í . San Diego, CA: Elsevier Academic Press, pp 24–35. Helliwell C, Waterhouse P. 2003. Constructs and methods for high-throughput gene silencing in plants. ✆ í t õ ó ✝ 30: 289–295. Hernandez A, Cooke DT, Clarkson DT. 2002. In vivo activation of plasma membrane H + -ATPase hydrolytic activity by complex lipid-bound unsaturated fatty acids in Ustilago maydis. ✟ú r ó ✑ í î ù ÷ ñòó ôõ í m 269: 1006–1011. Hodson MJ, Evans DE. 1995. Aluminiumsilicon interaction in higher plants. ✒ ✓✔✕ ✖✗ ✘ ✙ ✚ ✛ 46: 161-171. Horst WJ. 1996. The role of the apoplast in aluminium toxicity and resistance of higher plants: a review. ✜✢ ✣✤ l ✙ ✚ ✥✦ n ✦ r ✚ ✙ ✧ ★ ✖✗ ✩ ✦ n k 158: 419-428. Horst WJ, Schmohl N, Kollmeier M, Baluska F, Sivaguru M. 1999. Does aluminium affect root growth of maize through interaction with the cell wall-plasma membrane-cytoskeleton continuum? ✣ ✪ ✙ ✚ ✘ ✫ ✗ ✬ l 215: 163-174. Ishikawa S, Wagatsuma T. 1998. Plasma membrane permeability of root-tip cells following temporary exposure to Al ions is a rapid measure of Al tolerance among plants species. ✣✪ ✙ ✚ ✘ ✭ ✦ ll ✣ ✧ ✛ s ✬ o l 39: 516-525. Ishikawa S, Wagatsuma T, Takano T, Tawaraya K, Oomata K. 2001. The plasma membrane intactness of root-tip cells is a primary factor for Al-tolerance in cultivars of five species. ✫ ✗ ✬ l ✫ ✮✬ ✣ ✪ ✙ ✚ t ✯ u tr 47: 489-501. Islam SMS, Miyazaki T, Tanno F, Itoh K. 2005. Dissection of gene function by RNA silencing. ✣ ✪ ✙ ✚ ✘ ✖ ✬ o t ✦ ✮ ✧ 22: 443–446. Jahn T ✦ t ✙ l . 1997. The 14-3-3 protein interacts directly with the C-terminal region of the plant plasma membrane H + -ATPase. ✰ ✧ ✦ ✣✪ ✙ ✚ ✘ ✭ ✦ ll 9: 1805–1814. Janicka-Russak M, Kabała K, Burzyński M, Kłobus G. 2008. Respons of plasma membrane H + -ATPase to heavy metal stress in ✭ u ✮ u m ✬ s ✙ ✘ ✬ vu s roots. ✒ ✓✔ p ✖✗ ✘ 5913: 3721-3728. Janicka-Russak M, Kłobus G. 2006. Modification of plasma membrane and vacuolar H+-ATPase in response to NaCl and ABA. ✒ ✣ ✪ ✙ ✚ ✘ ✣ ✧ ys ✬ o 164: 295–302. Jansen S, Broadley MR, Robbrecht E, Smets E. 2002. Aluminum hyperaccumulation in angiosperms: a review of its phylogenetic significance. ✖✗ ✘ ✱ ✦ v 68: 235-269. Jernejc K, Legisa M. 2001. Activation of plasma membrane H + -ATPase by ammonium ions in ✲✳ p ✦ r ✴ ✬ llu s ✚ ✬✴ ✦ r . ✲ ✕ ✕ ✪ ✵✬ ✮ r ✗ ✶ ✬ o l ✖ ✬ o t ✦ ✮ ✧ ✚ ✗ ✪ 57: 368- 373. Joe J ✦ t ✙ ✪ . 1997. Isolation of ALUI-P gene encoding a protein with aluminium tolerance activity from ✲ ★ t ✧ ★ ✗ ✶ ✙ ✮ t ✦ r v ✬ s ✮ o su s . Biochem. and Biophys. ✱ ✦ s ✦ ✙ ★✮ ✧ ✭ o m m u n 239: 835-839. Jones DL, Gilroy S, Larsen PB, Howell SH, Kochian LV. 1998. Effect of aluminum on cytoplasmic Ca 2+ homeostasis in root hairs of ✲★ ✙ ✶ ✬ ✩ ✗ ✕ ✳ ✬ s t ✧ ✙ ✪✬ ✙ ✚ ✙ L.. ✣✪ ✙ ✚ ✘ ✙ 206: 378-387. Jones DL, Kochian LV. 1995. Aluminum Inhibition of the inositol 1,4,5- trisphosphate signal transduction pathway in wheat roots - a role in aluminum toxicity. ✣✪ ✙ ✚ ✘ ✭ ✦ ll 7: 1913-1922. Jones DL, Shaff JE, Kochian LV. 1995a. Effect of aluminum on calcium homeostasis and IP 3 mediated signal-transduction in ✷ r ✸ t ✸✹✺ ✻ ✼ ✽ st ✸ vu ✻ and ✾ ✸✹✿ ❀ ✸✼ ❁ ✼ ❂ ❃✺ ✻❄ ✼ ❅ ✸❁ ✸❆✿ ❃✸ ✼ . ❇ ❃ ✼ ❁ ❀ ❇ ❈ ys ✸✿ ❃ 108: 41-51. Jones DL, Shaff JE, Kochian LV. 1995b. Role of calcium and other ions in directing root hair tip growth in limnobiumstoloniferum. 1. Inhibition of tip growth by aluminum. ❇ ❃✼ ❁ t ✼ 197: 672-680. Jorgensen PL, Nielsen JM, Rasmussen J, Pedersen PA. 1998. Structure function relationships of E 1 -E 2 transitions and cation binding in Na,K-pump protein. ❉ ❊❋❊ ● ✸ ssu ✽ ❍ ❋ ✸ ✿ ✹ ❈ ✸ m ❋ ✸ ✿ ❂ ❈ ■ s ❏ ✹ t ✼ ❋ ✸ ✿ ✽ n ✽ r ❅ ✽ t ✸✹ s 1365: 65-70. Karimi M, Inzé D, Depicker A. 2002. GATEWAY TM vectors for ❏ ❅ ❑✿ ❄ ✼ ✹ t ✽ r ✸ u m - mediated plant transformation. ✷ r ✽ ❁ ▲ ▼ ❇ ❃✼ ❁ t ◆ ✹ ✸ 7: 193–195. Kasim N, Sopandie S, Harran S, Jusuf M. 2001. Pola akumulasi dan seleksi asam sitrat dan asam malat pada beberapa genotipe kedelai toleran dan peka aluminium. ❖ ✼ ■ ✼ ❀✸ 8: 58 – 61. Kearns EV, Assman SM. 1993. The guard cell-environment connection. ❇ ❃✼ ❁ t ❇❈ ■ s ✸ o l 102: 711-715. Kennedy CD, Gonsalves FAN. 1989. The action of divalent Zn, Cd, Hg, Cu and Pb ions on the ATPase activity of plasma membrane fraction isolated from roots of Zea mays. ❇ ❃ ✼ ❁ ❀ ✼ ❁ ▲ ◆ ✿ ✸ l 117: 167–175. Kessler A, Brand MD. 1994. Quantitative determination of the regulation of oxidative phosphorylation by cadmium in potato tuber mitochondria. ❊ ✺ ❑✿ ❂ ✽ ✼ ❁ P ❋ ✸ o ✹ ❈ ✽ m 225: 923–935. Kinraide TB. 1991. Identity of the rhizotoxic aluminum species. ❇ ❃✼ ❁ t ◆ ✿ ✸ l 134: 176-178. Kinraide TB, Parker DR. 1987. Cation amelioration of aluminum toxicity in wheat. ❇ ❃✼ ❁ t ❇ ❈ ■ s ✸ o l 83:546-551. Klahre U, Crete P, Leuenberger SA, Iglesias VA, Meins F Jr. 2002. High molecular weight RNAs and small interfering RNAs induce systemic posttranscriptional gene silencing in plants. ❇❑ o ✹ ✾ ✼ ❀ l ❏ ✹✼ ▲ ◆ ✹ ✸ ◗ ◆ ❏ 99: 11981–11986 Kłobus G, Janicka-Russak M. 2004. Modulation by cytosolic components of proton pump activities in plasma membrane and tonoplast from Cucumis sativus roots during salt stress. ❇❈ ■ s ✸ o ❇ l ✼ ❁ ❀✼ 121: 84–92. Kochian LV. 1995. Cellular mechanisms of aluminium toxicity and resistance in plants. ❏ ❁ ❁ ✺ ❘✽ v ❇ ❃✼ ❁ ❀ ❇❈ ■ s ✸ o l ❇ ❃ ✼ ❁ ❀ ❙ o l ❋ ✸ o l 46: 237-260. Kochian LV, Hoekenga OA, Pineros MA. 2004. How do crop plants tolerate acid soil? – Mechanisms of aluminum tolerance and phosphorous efficiency. ❏ ❁ ❁ ✺ ❘✽ v ❇ ❃✼ ❁ ❀ ❋ ✸ o l 55: 459-493. Koyama H ❚ t ❯ ❱ . 2000. Overexpression of mitochondrial citrate synthase in ❲❳❯ ❨ ❩❬ ❭ ❪ ❫ ❩ s t ❴ ❯ ❱ ❩ ❯ ❵ ❯ improved growth on a phosphoruslimited soil. ❛❱❯ ❵ ❜ ❝ ❚ ❱ ❱ ❛❴ ys ❩ ❭ ❱ 41: 1030-1037. Krysan K, Dalwadi H, Sharma S, Põld M, Dubinett S. 2004. Cyclooxygenase 2- dependent expression of survivin is critical for apoptosis resistance in non- small cell lung cancer. ❝❯ ❵ ❞ ❚ r ❡ ❚ s 64: 6359–6362. Kühlbrandt W, Zeelen J, Dietrich J. 2002. Structure, mechanism, and regulation of the ❢ ❚ u r ❭ ❫ ❪ ❭ ❳ ❯ plasma membrane H + -ATPase. ❣ ❞ ❩ ❚ ❵ ❞ ❚ 297: 1692-1696. Li LC, Okino ST, Zhao H ❤ 2006. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. ❛ r ❭ ❞ ❢ ❯ ❜❱ ❲ ❞ ❯ ❬ ❣ ❞ ❩ ✐❤ ❣ ❤ ❲❤ 103 46: 17337–17342. Li-Song C. 2006. Physiological responses and tolerance of plant shoot to aluminum toxicity. ❡ ❚ v ❛ ❱❯ ❵ ❜ ❛ ❴ ys ❩❭ ❱ ❥ ❭ ❱ ❦ ❩ ❭ 322: 143-155. Liu K, Luan S. 2001. Internal aluminum block of plant inward K + channels. ❛❱❯ ❵ t ❝ ❚ ❱ ❱ 13: 1453-1465. Lutsenko S, Kaplan JH. 1995. Organization of P-type ATPases: significance of structural diversity. ❦ ❩ ❭ ❞ ❴ ❚❧❩ stry 34: 15607–15613. Ma JF, Hiradate S. 2000. Form of aluminum for uptake and translocation in buckwheat ♠❯ ♥ ❭ ❪ ♦ r ♣ ❧ ❚ s ❞ u ❱ ❚❵ ❜♣ ❧ Moench. ❛ ❱❯ ❵ ❜❯ 211: 355-360. Ma JF, Hiradate S, Nomoto K, Iwashita T, Matsumoto H. 1997a. Internal detoxification mechanism of Al in hydrangea. Identification of Al form in the leaves. ❛❱❯ ❵ ❜ ❛❴ ys ❩ ❭ ❱ 113: 1033-1039. Ma JF, Zheng SJ, Matsumoto H, Hiradate S. 1997 ❨ . Detoxifying aluminium with buckwheat. ❢ ❯ ❜ u r ❚ 390: 569–570. Ma JF, Hiradate S, Matsumoto H. 1998. High aluminium resistant in buckwheat. II. Oxalic acid detoxifies aluminium internally. ❛ ❱ ❯ ❵ ❜ ❛ ❴ ys ❩❭ ❱ 117: 753- 759. Ma Z, Miyasaka SC. 1998. Oxalate exudation by taro in response to Al. ❛❱❯ ❵ ❜ ❛ ❴ ♦ s ❩❭ ❱ 118: 861-865. Mackeigan JP, Murphy LO, Blenis J. 2005. Sensitized RNAi screen of human kinases and phosphatases identifies new regulators of apoptosis and chemoresistance. ❢ ❯ tu r ❚ ❝ ❚ ❱ ❱ ❦ ❩❭ ❱ ❤ 76: 591–600. MacLennan DH, Rice WJ, Green NM. 1997. The mechanism of Ca 2+ transport by sarcoendoplasmic reticulum Ca 2+ -ATPases. q ❦ ❩ ❭ ❱ ❝❴ ❚ ❧ 272: 28815– 28818. Mariano ED, Keltjens WG. 2003. Evaluating the role of root citrate exudation as a mechanism of aluminium resistance in maize genotypes. ❛ ❱ ❯ ❵ t ❣ ❭ ❩ ❱ 256: 469-479. Marienfeld S, Lehmann H, Stelzer R. 1995. Ultrastructural investigations and EDX-analysis of Al-treated oat r st ✉ ✈ s ✈ ✇ ① v ✈ roots. ②③✈ ✉ ✇ ④ ⑤ ①③ 171: 167- 173. Marienfeld S t t ✈ ③ . 2000. Localization of aluminium in root tips of ⑥ t✈ m ✈ ⑦ s and ⑧ ① ⑨ ① ✈ ⑩ ✈ ❶ a. ❷ ② ③ ✈ ✉ t ② ❸ ⑦ s ① o l 156: 666-671. Marienfeld S, Stelzer R. 1993. X-ray microanalyses in roots of Al-treated r st✉ ✈ s ✈ ✇ ① v ✈ plants. ❷ ② ③ ✈ ✉ ✇ ② ❸ ys ① o l 141: 569-573. Marschner H. 1995. ❹ ① n t r ✈ ③ ❺ u tr ① t ① o n ① n ❻①❼ ❸ t r ②③✈ ✉ ✇ s . London: Academic Press Inc. Martin RB. 1992. Aluminim speciation in biology. Di dalam: Chadwick DJ, Whelan J, editor. r ③ u m ① ✉ ① u m ① n ❶ ① o l ⑤ ❼ ⑦ ✈ ✉ ❽ m t ❽ ① ⑨ ① n t . New York: John Wiley Sons. hlm. 5-25. Matsumoto H. 1991. Biochemical Mechanism of Toxicity of Aluminium and The Squestration of Aluminium in Plant Cells. Di dalam: Wright R J, editor. ②③✈ ✉ ✇ s ⑤ ① l ① n t t r ✈ ⑨ t ① o n ✈ t lo w ❾ ❻ . Kluwer Netherlands: Academic Publisher hlm. 825-838. Matsumoto H. 2000. Cell biology of aluminum toxicity and tolerance in higher plants. ❿ n t ➀ t v ➁ yto l 200: 1–46. Matsumoto H, Hirasawa E, Torikai H, Takahashi E. 1976. Localization of absorbed aluminum in pea root and its binding to nucleic acid. ②③✈ ✉ t ➁ t ll ② ❸ ⑦ s ① o l 17: 127-137. Matsumoto H, Senoo Y, Kasai M, Maeshima M. 1996. Response of the plant root to aluminum stress: Analysis of the inhibition of the root elongation and changes in membrane function. ❷ ② ③ ✈ ✉ ✇ ➀ t s 109: 99-105. Matsumoto H, Yamaya T. 1988. Inhibition of potassium uptake and regulation of membran associated Mg-ATPase activity of pea roots by aluminium. ④ ⑤ ① l ④ ⑨ ① ②③✈ ✉ ✇ ❺ u tr 32: 179-188. Matzke M, Matzke AJ, Kooter JM. 2001. RNA: guiding gene silencing. ④ ⑨ ① t n ⑨ t 293: 1080–1083. Maudoux O, Batoko H, Oecking C, Gevaert K, Vandekerckhove J. 2000. A plant plasma membrane H + -ATPase expressed in yeast is activated by phosphorylation at its penultimate residue and binding of 14-3-3 regulatory proteins in the absence of fusicoccin. ❷ ➂ ① o l ➁ ❸ t m 275: 17762– 17770. Maurel C. 1997. Aquaporins and water permeability of plant membranes. r ✉ ✉ ➃ ➀ t v ②③✈ ✉ ✇ ② ❸ ys ① o l ② l ✈ ✉ ✇ ❹ o l ➂ ① o l 48:399-429. McDiarmid CW, Gardner RC. 1998. Over expression of the s ✈ ⑨❸ ✈ ro m y ⑨ t s ⑨ t r t v ① s ①✈ ③ magnesium transport system convers resistance to aluminium ion. ❷ ➂ ① o ➁ ❸ t m 2733: 1727-1732. McQueen-Mason S, Durachko DM, Cosgrove DJ. 1992. Two Endogenous Proteins That Induce Cell Wall Extension in Plants. ➄➅➆ ➇ ➈ ➉ ➊ ➅ ➅ 4: 1425- 1433. Meister G, Tuschl T. 2004. Mechanisms of gene silencing by doublestranded RNA. ➋➆ ➈ u r ➊ 431: 343–349. Michelet B, Boutry M. 1995. The plasma membrane H + -ATPase. A highly regulated enzyme with multiple physiological functions. ➄➅ ➆ ➇ ➈ ➄ ➌ ys ➍ ➎ ➅ . 108: 1-6. Miki D, Itoh R, Shimamoto K. 2005. RNA silencing of single and multiple members in a gene family of rice. ➄➅➆ ➇ ➈ ➄ ➌ ys ➍ ➎ ➅ 138: 1903–1913. Miki D, Shimamoto K. 2004. Simple RNAi vectors for stable and transient suppression of gene function in rice. ➄➅➆ ➇ ➈ ➉ ➊ ➅ ➅ ➄ ➌ ➏ s ➍ ➎ ➅ 45: 445–450. Milla MA ➊ t ➆ ➅ . 2002. Expressed sequence tag-based gene expression analysis under aluminum stress in rye. ➄➅➆ ➇ t ➄ ➌ ➏ s ➍ ➎ ➅ 130: 1706-1716. Moller JV, Juul B, le Maire M. 1996. Structural organization, ion transport, and energy transduction of P-type ATPases. ➐➍ ➎ ➑ ➌ ➍ ➒ ➐ ➍ ➎ ➓ ➌ ➏ s ➔ ➑ t ➆ 1286: 1–51. Morita A ➊ t ➆ ➅ . 2004. Chemical forms of aluminum in xylem sap of tea plants ➉ ➆ ➒ ➊ ➅➅ ➍ ➆ s ➍ ➇ ➊➇ → ➍ s L.. ➄ ➌ ➏ t ➎ ➑ ➌ ➊ ➒➍ stry 65: 2775–2780. Moritoh S ➊ t ➆ ➅ . 2005. RNAi-mediated silencing of OsGEN-L OsGENlike, a new member of the RAD2XPG nuclease family, causes male sterility by defect of microspore development in rice. ➄➅➆ ➇ t ➉ ➊➅ ➅ ➄ ➌ ys ➍ ➎ ➅ 46: 699–715. Morsomme P, Boutry M. 2000. The plant plasma membrane H + -ATPase: structure, function and regulation. ➐ ➍ ➎ ➑ ➌ ➍ ➒ ➐➍ ➎ ➓ ➌ ➏ s ➔ ➑ t ➆ 1465: 1-16. Morsomme P, Slayman CW, Goffeau A. 2000. Mutagenic study of the structure, function and biogenesis of the yeast plasma membrane H+-ATPase. ➐ ➍ ➎ ➑ ➌ ➍ ➒ ➊ t ➐ ➍ ➎ ➓ ➌ ➏ s ➔ ➑ t ➆ 1469: 133-157. Muhaemin. 2008. Analisis pertumbuhan Melastoma ➣ ➊➅ ➆ st ➎ ➒ ➆ ➒ ➆ ➅ ➆ ↔ ➆ t ➌ r ➍ ➑ u ➒ auct. Non L. dan ➣↕ ➔ ➙➙ ➍ ➇ ➊ D. Don. yang mendapat cekaman pH rendah dan aluminium [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Mushofa U. 2011. Isolasi dan karakterisasi fragmen cDNA dari gen penyandi sitrat sintase pada ➣ ➊ ➅ ➆ → t ➎ ➒ ➆ ➒ ➆ ➅➆ ↔ ➆ ➈ ➌ ➛➍➑ ➜ ➒ [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Muslin AJ, Tanner JW, Allen PM, Shaw AS. 1996. Interaction of 14-3-3 with signaling proteins is mediated by the recognition of phosphoserine. ➉ ➊ ➅➅ 84: 889–897. Mutiasari A. 2008. Akumulasi aluminium pada ➝ ➞➟ ➠ ➡ t ➢ ➤ ➠ ➠ ➥➥ ➦ ➧ ➞ dan ➝ ➞ ➟ ➠ ➡ t ➢ ➤ ➠ ➤ ➠ ➟ ➠ ➨ ➠ ➩ ➫ ➭➦ ➯ ➲ ➤ [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Muzuni, Sopandie D, Suharsono UW, Suharsono. 2010. Isolasi dan pengklonan fragmen cDNA gen penyandi H + -ATPase membran plasma dari ➝ ➞➟ ➠ ➡ t ➢ ➤ ➠ ➤ ➠ ➟ ➠ ➨ ➠ ➩ ➫ ➭➦ ➯ ➲ ➤ L. ➳ ➵➸ ➭ ➢ ➧ ➺ ➧ ➻ ➢ ➧ ➞ s ➦ ➠ 381: 67-74. Nagasaka S, Teraoka T, Matsumoto S, Mori S, Yoshimura E. 2003. Difference in Al sensitivity between seminal and crown roots of rice nursery seedlings. ➼ ➢ ➦➟ ➼ ➯ ➦ ➽ ➟ ➠ ➧ t ➾ u tr 49: 897-902. Nagata T, Hayatsu T, Kosuge N. 1992. Identification of aluminum forms in tea leaves by 27 Al NMR. ➽ ➫ ➚ t ➢ ➯ ➫ ➞ ➤➦ stry 31: 1215-1218. Niu X, Damsz B, Kononowicz AK, Bressan RA, Hasegawa PM. 1996. Tissue specific induction of plasma membrane H + -ATPase gene expression by NaCl. ➽ ➟ ➠ ➧ ➩ ➽ ➫ ys ➦ ➢ ➟ 111: 679-686. Niu X, Narasimhan ML, Salzman RA, Bressan RA, Hasegawa PM. 1993a. NaCl regulation of plasma membrane H + -ATPase gene expression in a glycophyte and a halophyte. ➽ ➟ ➠ ➧ ➩ ➽ ➫ ys ➦ ➢ ➟ ➢ ➸ y 103: 713–718. Niu X, Zhu JK, Narasimhan ML, Bressan RA, Hasegawa PM. 1993b. Plasma membrane H + -ATPase gene expression is regulated by NaCl in cells of the halophyte ➵ ➩ r ➦ ➪ ➟ ➞ x n u m m u l ➠ ➭ ➦ ➠ L. ➽ l ➠ ➧ ➩ ➠ 190: 433–438. Oecking C, Piotrowski M, Hagemeier J, Hagemann K. 1997. Topology and target interaction of the fusicoccin binding 14-3-3 homologues of ➶ o m m ➞ l ➦ ➧ ➠ ➯ o m m ➲ ➧ ➦ s . ➽ l ➠ ➧ ➩ ➳ 12: 441–453. Ofei-Manu P, Wagatsuma T, Ishikawa S, Tawaraya K. 2001. The plasma membran strength of the root-tip cells and root phenolic compound are correlated with Al tolerance in several common woody plants. ➼ ➢ ➦ l ➼ ➯➦ ➽ ➟ ➠ ➧ ➩ ➾ u tr 47: 359-375. Olsson A, Svennelid FEB, Sommarin M, Larsson C. 1998. A phosphothreonine residue at the C-terminal end of the plasma membrane H + -ATPase is protected by fusicoccin-induced 14-3-3 binding. ➽ ➟ ➠ ➧ ➩ ➽ ➫ ➚ s ➦ o l 118: 551– 555. Ono K, Yamamoto Y, Hachiya A, Matsumoto H. 1995. Synergistic inhibition of growth by aluminum and iron of tobacco ➾ ➦ ➯ o t ➦ ➠ ➧ ➠ t ➠ ➨ ➠ ➯ u m L. cells in suspension culture. ➽ l ➠ ➧ ➩ ➶ ➞ ll ➽ ➫ ys ➦ o l 36: 115-125. Orvig C. 1993. The aqueous coordination chemistry of aluminum. Di dalam: Robinson GH, editor. ➶ o o r ➻ ➦ ➧ ➠ ➩➦ o n ➯ ➫ ➞ m ➦ stry o ➥ ➠ ➟ u m ➦ n u m . New York: VCH Pub. hlm. 85-121 Osaki M ➹ t ➘ ➴ . 1998. Nutritional characteristics in leaves of native plants grown in acid sulfate, peat, sandy podzolic, and saline soils distributed in Peninsular Thailand. ➷ ➴ ➘ ➬ ➮ ➘ ➬ ➱ ✃ ❐ ❒ ➴ 2012: 175-182. Oufattole M, Arango M, Boutry M. 2000. Identification and expression of three new Nicotiana plumbaginifolia genes which encode isoforms of a plasma membrane H + -ATPase, and one which is induced by mechanical stress. ➷ ➴➘ ➬ ➮ ➘ 210: 715–722. Ownby JD. 1993. Mechanisms of reaction of hematoxylin with aluminum-treated wheat roots. ➷ ❮ ys ❒ ❐ ➴ ➷ ➴➘ ➬ ➮ 87: 371-380. Palmgren MG. 1991. Regulation of plasma membrane H + -ATPase activity. ➷ ❮ ❰ s ❒ ❐ Ï ➷ ➴➘ ➬ ➮ 83: 314–323. Palmgren MG. 1998. Proton gradients and plant growth: role of the plasma membrane H + -ATPase. Ð ➱ Ñ Ò ❐ ➮ Ó ➹ s 28: 1-70. Palmgren MG. 2001. Plant plasma membrane H + -ATPases: Powerhouses for nutrient uptake. ➷ ➴➘ ➬ t Ô ❐ ➴ Ò ❒ ❐ ➴ 52: 817-845. Palmgren MG, Larsson C, Sommarin M. 1990. Proteolytic activation of the plant plasma membrane H + -ATPase by removal of a terminal segment. Õ Ò ❒ ❐ ➴ Ö ❮ ➹ × 265: 13423-13426. Palmgren MG, Sommarin M, Serrano R, Larsson C. 1991. Identification of an autoinhibitory domain in the C-terminal region of the plant plasma membrane H + -ATPase. Õ Ò ❒ ❐ ➴ Ö ❮ ➹ × 266: 20470-20475. Papernik LA, Kochian LV. 1997. Possible Involvement of Al induced electrical signal in Al tolerance in wheat. ➷ ➴➘ ➬ t ➷ ❮ ❰ s ❒ ❐ ➴ 115: 567-667. Pardo JP, Slayman C. 1988. The fluorescein isothiocyanate binding site of the plasma-membrane H + -ATPase of Ø➹ u r ❐ Ù Ú ❐ r ➘ Û r ➘ Ù s ➘ . Õ Ò ❒ ❐ ➴ Ö ❮ ➹ × 263: 18664-18668. Parker DR, Bertsch PM. 1992. Formation of the Al-13 tridecameric polycation under diverse synthesis conditions. Ü ➬ Ñ ❒ r ❐ ➬ ✃ Û❒ Ý ➹ Û ❮ ➬ ❐ ➴ 26: 914-921. Pelkmans L ➹ t ➘ ➴ . 2005. Genome-wide analysis of human kinases in clathrin- and caveolaeraftmediated endocytosis. Ø➘ tu r ➹ 4367047: 78–86. Pelkmans L, Zerial M. 2005. Kinase-regulated quantal assemblies and kiss-and- run recycling of caveolae. Ø➘ tu r ➹ 436: 128–133. Pellet DM, Grunes DL, Kochian LV. 1995. Organic acid exudation as an aluminum-tolerance mechanism in maize Þ ➹➘ m ➘ ❰ s L.. ➷ ➴➘ ➬ t ➘ 196: 788- 795. Pettersson A, Bergman B. 1989. Effects of aluminum onATP pools and utilization in the cyanobacteririum Ð ➬ ➘ ß ➘ ➹ ➬ ➘ Û yl ❒ ➬ ➱ à ❒ Û ➘ á a model for the ❒ n v ❒ vo toxicity. ➷ ❮ ys ❒ o l ➷ l ➘ ➬ ➮ 76: 527-534. Pickford AS, Cogoni C. 2003. RNA-mediated gene silencing. â ãää å æ ä çè é ã ê ëè 60: 871–882. Plasterk RH. 2002. RNA silencing: the genome’s immune system. ê ëè ãì ë ã 296: 1263–1265. Portillo F. 2000. Regulation of plasma membrane H + -ATPase in fungi and plants. í è æ ë î è ï è ë ð ã t í è æ ñ î ys èë ð ò ë t ð 1469: 31-42. Prasetyo BH, Suriadikarta DA. 2006. Karakteristik, potensi dan teknologi pengelolaan tanah ultisol untuk mengembangkan pertanian lahan kering di Indonesia. ó çè t ô ð ì õ öã rt ð ì è ð ì 252: 39-46. Prihadi DP, Shipe ER, Wallace SU. 1995. Screening selected soybean genotype for aluminium tolerance. ÷ ì ø æ ì ó ù r æ ñ ò õ úèë 61: 11-12. Rao R, Slayman CW. 1993. Mutagenesis of conserved residues in the phosphorylation domain of the yeast plasma membrane H + -ATPase. Effects on structure and function. ó í è æ ä â î ã ï 2689: 6708-6713. Raoul C ã t ð ä . 2005. Lentiviral-mediated silencing of SOD1 through RNA interference retards disease onset and progression in a mouse model of ALS. û ð t å ã ø 411: 423–428. Rayle DL, Cleland RE. 1992. The acid growth theory of auxin-induced cell elongation is alive and well. ö ä ð ì ü ö î ys è æ ä 99: 1271-1274. Reese RN, Roberts LM. 1985. Effect of cadmium on whole cell and mitochondrial respiration in tobacco cell-suspension cultures. J Plant Physio 120: 123–130. Rengel Z. 1996. Uptake of aluminum by plant cells. û ã w ö î yt æ ä 134: 389-406. Rengel Z, Zhang WH. 2003. Role of dynamics of intracellular calcium in aluminum-toxicity syndrome. û ã w ö î yt æ ä 159: 295-314. Richards KD, Schott EJ, Sharma YK, Davis KR, Gardner RC. 1998. Aluminum induces oxidative stress genes in ò ú ð ô è ø æ ñ ý è s t î ð ä è ð ì ð . ö ä ð ì ü ö î ys è æ ä 116: 409-418. Rincon M, Gonzales RA. 1992. Aluminum partitioning in intact roots of aluminum-tolerant and aluminum-sensitive wheat þ ù r è t èë u m ð ã st è vu m ç ÿ cultivars. ö ä ð ì ü ö î ✁ s è o l 99: 1021-1028. Rober-Kleber N, Albrechtova TP, Fleig S, Fischer-Iglesias C. 2003. Plasma membrane H + -ATPase is involved in auxin-mediated cell elongation during wheat embryo development. öä ð ì ü ö î ys è o l 131: 1302-1312. Ros R, Cooke DT, Martinez-Cortina C, Picazo I. 1992. Nickel and cadmium related changes in growth, plasma membrane lipid composition, ATPase hydrolytic activity and proton-pumping of rice ✂ ryz ð s ð ü è v ð L. cv. Bahia shoots. ó ✄☎ p í æ t 43: 1475–1481. Ryan PR, Delhaize E, Randal PJ. 1995. Malate efflux from root apies and tolerance to aluminium are highly correlated in wheat. ✆✝ ✞ t ✟ ✠✡ ☛ ☞ t ✠ ✌ ✍ s ✎ ✏ ✡ 22: 531-536. Ryan PR, Ditomaso JM, Kochian LV. 1993. Aluminum toxicity in roots – an investigation of spatial sensitivity and the role of the root cap. ✟ ✑✒ ✓ ✔ ✏ ✕ 44: 437-446. Ryan PR, Reid RJ, Smith FA. 1997. Direct evaluation of the Ca 2+ displacement hypothesis for Al toxicity. ✟ ✠✡ ☛ ☞ ✕ ✠ ✌ ✍ s ✎ ✏ ✡ 113: 1351-1357. Sasaki T ✖ t ☛ ✡ . 2004. A wheat gene encoding an aluminum-activated malate transporter. ✠✡ ☛ ☞ ✕ ✟ 37: 645-653. Sattelmacher B, Heinecke I, Muhling KH. 1993. Influence of minerals on cytoplasmic streaming in root hairs of intact wheat seedlings ✗ r ✎ t ✎ ✘ ✝ ✙ ☛ ✖ st ✎ v ✝ ✙ L.. ✠✡☛ ☞ ✕ ✚ ✏ ✎✡ 156: 107-110. Scarborough GA. 1996. The Neurospora Plasma Membrane Proton Pump. Di dalam: Konings WN, Kaback HR, and Lolkema JS, editor. ✛ ☛ ☞ ✜ ✢ ✏ ✏ ✣ ✏ ✤ ✔ ✎ o l ✏ ✥ ✎ ✘ ☛ ✡ ✠ ✌ ys ✎ ✘ s . Ed ke-2. Chapel Hill: Elsevier Sci. hlm. 75-92. Schaller GE, Sussman MR. 1988. Phosphorylation of the plasma membrane H + - ATPase of oat roots by a calcium-stimulated protein kinase. ✠✡ ☛ ☞ t ☛ 173: 509–51. Schmohl N, Horst WJ. 2000. Cell wall pectin content modulates aluminium sensitivity of ✦ ✖☛ m ☛ ✍ s ✧ ★✩ ✪ cells grown in suspension culture. ✠ ✡☛ ☞ ✕ ✫ ✖ ll ✑ ☞ ✬ ✎ ro n 23: 735-742. Schmohl N, Pilling J, Fisahn J, Horst WJ. 2000. Pectin methylesterase modulates aluminium sensitivity in ✦ ✖ ☛ m ☛ ys ☛ ☞ ✜ ✚ ✏ ✡ ☛ ☞ ✝ ✙ t ✝ ✢ ✖ ro su m ✩ ✠ ✌ ✍ s ✎ o l ✠ l ☛ ☞ ✕ 109: 419-427. Serrano R. 1989. Structure and function of plasma membrane ATPase. ✆☞ n u ✭ ✖ v ✠✡ ☛ ☞ ✕ ✠ ✌ ys ✎ o l ✠✡ ☛ ☞ t ✮ o l ✔ ✎ o l 40: 61-94. Serrano R. 1996. Salt tolerance in plants and microorganisms: toxicity targets and defence responses. ✯ n t ✖ rn ✭✖ v ✫ yto l 165: 1-52. Shah DP, Hightower RC, Meagher RB. 1982. Complete nucleotide sequence of a soybean actin gene. ✠ ✰ o ✘ ✱ ☛ tl ✆ ✘ ☛ ✜ ✚ ✘ ✎ 79: 1022 – 1026. Shen H, Yan XL, Cai KZ, Matsumoto H. 2004. Differential Al resistance and citrate secretion in the tap and basal roots of common bean seedlings. ✠ ✌ ✍ s ✎ o l ✠ ✡☛ ☞ ✕ 121: 595-603. Shen H ✖ t ☛ ✡ . 2005a. Citrate secretion coupled with the modulation of soybean root tip under aluminium stress. Up-regulation of transcription, translation, and threonine-oriented phosphorylation of plasma membrane H + -ATPase. ✠✡ ☛ ☞ ✕ ✠ ✌ ys ✎ o l 138: 287-296. Shen J ✲ t ✳ ✴ . 2005b. Suppression of ocular neovascularization with siRNA targeting VEGF receptor 1. ✵ ✲ ✶ ✲ ✷✸ ✲ r ✹ ✲ ✺ 29: 1–10. Shen R, Ma JF, Kyo M, Iwashita T. 2002. Compartmentation of aluminium in leaves of an Al-accumulator, Fagopyrum esculentum Moench. ✻✴ ✳ ✶ ✼ ✳ 215: 394-398. Silva IR ✲ t ✳ ✴ . 2000. Aluminum accumulation at nuclei of cells in the root tip. Fluorescence detection using lumogallion and confocal laser scanning microscopy. ✻✴ ✳ ✶ ✼ ✻ ✸ ✽ s ✾ ✿ ✴ 123: 543-552. Sivaguru M, Baluska F, Volkmann D, Felle HH, Horst WJ. 1999. Impacts of aluminum on the cytoskeleton of the maize root apex. Short-term effects on the distal part of the transition zone. ✻ ✴ ✳ ✶ ✼ ✻✸ ✽ s ✾ ✿ ✴ 119: 1073-1082. Sivaguru M ✲ t ✳ ✴ . 2003. Aluminum-induced gene expression and protein localization of a cell wall-associated receptor kinase in Arabidopsis. ✻ ✴ ✳ ✶ t ✻✸ ✽ s ✾ ✿ ✴ 132: 2256-2266. Sivaguru M, Horst WJ. 1998. The distal part of the transition zone is the most aluminum-sensitive apical root zone of maize. ✻✴ ✳ ✶ ✼ ✻✸ ys ✾ ✿ ✴ 116: 155-163. Slaski JJ, Zhang G, Basu U, Stephens JL, Taylor GJ. 1996. Aluminium resistance in Wheat ✷ r ✾ t ✾ ❀❁ ❂ ✳ ✲ st ✾ v ❁ ❂ is associated with rapid, Al-Induced changes in activities of Glucose-6-phosphate dehydrogenase and 6- phosphogluconate dehydrogenase in root apices. ✻✴ ✳ ✶ ✼ ✻ ✸ ✽ s ✾ ✿ ✴ 98: 477- 484. Smith NA ✲ t ✳ ✴ . 2000. Total silencing by intron-spliced hairpin RNAs. ❃ ✳ tu r ✲ 407: 319–320. Snowden KC, Gardner RC. 1993. Five genes induced by aluminum in wheat ❄ ✷ r ✾ t ✾ ❀ u m ✳ ✲ st ✾ vu m L. roots. ✻✴ ✳ ✶ t ✻ ✸ ✽ s ✾ o l 103: 855-861. Sopandie D, Yusuf M, Setyono TD. 2000. Adaptasi kedelai ✵ ly ❀✾✶ ✲ m ✳ x MERR. terhadap cekaman pH rendah dan aluminium: Analisis pertumbuhan akar. ❅ o m m ❆ ❇ 5: 61 – 69. Soutschek J ✲ t ✳ l . 2004. Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs. ❃ ✳ ✼ u r ✲ 4327014: 173–178. Subagyo H, Suharta N, Siswanto AB. 2004. Tanah-tanah pertanian Indonesia. Di dalam ✹ ❁ ❂ ❈ ✲ r ❉ ✳ y ✳ ❊✳ ✸ ✳ ✶ ❋ ✶ ❉ ✿ ✶ ✲ s ✾ ✳ ❉ ✳ ✶ ✻✲ ✶ ❇ ✲ lo l ✳ ✳ ✶ ✶ ✽ ✳ . 21-66. Suharsono. 2002. Konstruksi pustaka genom kedelai kultivar Slamet. ● u r ✶ ✳ ✴ ❍✳ ✽✳ ✼ ✾ 93: 67-70. Suharsono, Firdaus S, Suharsono UW. 2008. Isolasi dan pengklonan fragmen cDNA dari gen penyandi multidrug resistance associated protein dari ■ ✲ l ✳ ❏ to m ✳ ✳ ❑❑ ✾ n ✲ . ■ ✳ ▲ ✳ ▼ ✳ ✹ ✳ ✾ n s . 12: 102-107. Suharsono, Trisnaningrum N, Sulistyaningsih LD, Widyastuti U. 2009. Isolation and cloning of cDNA of gene encoding for metallothionein type 2 from ◆❖ P◗ ❘ t ❙ ❚ ◗ ◗ ❯❯ ❱ ❲ ❖ . ❳❱ ❙ ❨ r ❙ ❩ ❱ ◗ . 16: 28-37. Surowy TK, Boyer JS. 1991. Low water potentials affect expression of genes encoding vegetative storage proteins and plasma membrane proton ATPase in soybean. ❬ P ◗ ❲ t ◆ ❙ P ❳❱❙ 16: 252–262. Sussman MR. 1994. Molecular analysis of proteins in the plant plasma membrane. ❭ ❲ ❲ ❪ ❫ ❖ v ❬ P ◗ ❲ ❨ ❬❴ ys ❱ ❙ P ❬ P◗ ❲ ❨ ◆ ❙ P ❳ ❱❙ P 45: 211-234. Sze H, Li X, Palmgren MG. 1999. Energization of plant cell membranes by H + - pumping ATPases: Regulation and biosynthesis. ❵ ❴ ❖ ❬ P◗ ❲ t ❛❖ P P 11: 677- 689. Svennelid F ❖ t ◗ P . 1999. Phosphorylation of Thr-948 at the C-terminus of the plasma membrane H + -ATPase creates a binding site for regulatory 14-3-3 protein. ❵ ❴ ❖ ❬ P◗ ❲ ❨ ❛ ❖ PP 11: 2379–2391. Taylor GJ. 1991. Current views of the aluminum stress response: the physiological basis of tolerance. ❜ ❲ DD Randall, DG Blevins, CD Miles, eds. ❛ u rr ❖ ❲ ❨ ❵❙ ❩ ❱ ❝ s ❱ ❲ ❬ P ◗ ❲ ❨ ❳❱ ❙ ❝ ❴ ❖ ❚ ❱ stry ◗ ❲ ❞ ❬ ❴ ❡ s ❱ ❙ P ❙ ❢ ❡ . Vol. 10. Interdisciplinary Plant Biochemistry and Physiology Program, University of Missouri, Columbia, pp 57-93. Vance V, Vaucheret H. 2001. RNA silencing in plants-defense and counterdefense. ❣ ❝ ❱ ❖ ❲ ❝ ❖ 292: 2277–2280. Vara F, Serrano R. 1982. Partial purification and properties of the proton translocating ATPase of plant plasma membranes. ❤ ❳ ❱❙ P ❛ ❴ ❖ ❚ 257: 12826–12830. Vitorello VA, Haug A. 1996. Short-term aluminium uptake by tobacco cells: Growth dependence and evidence for internalization in a discrete peripheral region. ❬❴ ys ❱ ❙ P ❬ P◗ ❲ t 97: 536-544. Vitorello VA, Capaldi FR, Stefanuto VA. 2005. Recent advances in aluminum toxicity and resistance in higher plants. ❳ ✐ ◗ ❥ ❤ ❬ P◗ ❲ ❨ ❬❴ ❡ s ❱❙ P 171: 129- 143. Wach A, Supply P, Dufour JP, Goffeau A. 1996. Amino acid replacements at seven different histidines in the yeast plasma membrane H+-ATPase reveal critical positions at His285 and His701. ❳ ❱❙ ❝ ❴ ❖ ❚ ❱ stry 35: 883-890. Wagatsuma T, Kaneko M, Hayasaka Y. 1987. Characteristics of upward translocation of aluminium in plants. ❣ ❙ ❱ P ❣ ❝ ❱ ❬ P◗ ❲ t ❦ u tr 30: 345-358. Wang G, Tamas MJ, Hall MJ, Pascual-Ahuir A, Perlin DS. 1996. Probing Conserved Regions of the Cytoplasmic LOOP1 Segment Linking Transmembrane Segments 2and 3of the Saccharomyces cerevisiae Plasma Membrane H+-ATPase. ❤ ❳ ❱❙ P ❛ ❴ ❖ ❚ 271: 25438-25445. Watanabe T, Jansen S, Osaki M. 2005. The beneficial effect of aluminum and the role of citrate in Al accumulation in ❧♠♥ ♦ st ♣ q ♦ q ♦ ♥ ♦ r ♦ t s r t✉ u q . ✈ ♠ w ✇ s yt ♣ ♥ 165: 773-780. Watanabe T, Misawa S, Hiradate S, Osaki M. 2008. Characterization of root mucilage from ❧ ♠ ♥ ♦ ① t ♣ q ♦ q ♦ ♥ ♦ r ♦ ② s ③ t✉ ④ q , with emphasis on its roles in aluminum accumulation. ✈♠ w ✇ s yt ♣ ♥ 178: 581-589. Watanabe T, Osaki M. 2001. Influence of aluminum and phosphorus on growth and xylem sap composisition in ❧♠ ♥ ♦ st ♣ q ♦ q ♦ ♥ ♦ r ♦ t s ③ t✉ u q L. ✇♥ ♦ ⑤ t ⑥ ♣ t ♥ 237: 63-70. Watanabe T, Osaki M, Tadano T. 1997. Aluminum-induced growth stimulation and relation to calcium, magnesium, and silicate nutrition in ❧♠♥ ♦ st ♣ q ♦ q ♦ ♥ ♦ r ♦ ② s ③ t✉ ④ q L. ⑥ ♣ t ♥ ⑥ ✉ t ✇ ♥ ♦ ⑤ ② ✈ u tr 43: 827-837. Watanabe T, Osaki M, Yoshihara T, Tadano T. 1998a. Distribution and chemical speciation of aluminum in the Al accumulator plant, ❧♠♥ ♦ st ♣ q ♦ q ♦ ♥ ♦ r ♦ ② s ③ t✉ ④ q L. ✇ ♥ ♦ ⑤ t ⑥ ♣ t ♥ 201: 165-173. Watanabe T, Osaki M, Tadano T. 1998b. Effects of nitrogen source and aluminum on growth of tropical tree seedlings adapted to low pH soils. ⑥ ♣ t ♥ ⑥ ✉ t ✇ ♥ ♦ ⑤ t ✈ u tr 44: 655–666. Watanabe T, Osaki M, Tadano T. 2001. Al uptake kinetics in roots of ❧♠ ♥ ♦ ① t ♣ q♦ q ♦ ♥ ♦ r ♦ ② s ③ t✉ ④ q L. – an Al accumulator plant. ✇ ♥ ♦ ⑤ t ♦ ⑤ ⑦ ⑥ ♣ t ♥ 231: 283-291. Watanabe T, Osaki M. 2002a. Mechanisms of adaptation to high aluminum condition in native plants species growing in acid soils: a review. ⑧ ♣ qq u ⑤ ⑥ ♣ t ♥ ⑥ ✉ t ✇♥ ♦ ⑤ ② ⑨ ⑤ ♦ ♥ 33: 1247-1260. Watanabe T, Osaki M. 2002b. Role of organic acids in aluminum accumulation and plant growth in ❧ ♠ ♥♦ st ♣ q ♦ q ♦ ♥♦ r ♦ t s r t ✉ u q . ⑩ r ♠ ♠ ✇ s ❶ s t♣ ♥ 22: 785-792. Waterhouse P, Graham M, Wang M. 1998. Virus resistance and gene silencing in plants can be induced by simultaneous expression of sense and antisense RNA. ✇ ③ ♣ ✉ ✈ ♦ ② ♥ ⑨ ✉ ♦ ⑦ ⑥ ✉ t ❷ ⑥ ⑨ 95: 13959–13964. Waterhouse PM, Wang M-B, Lough T. 2001. Gene silencing as an adaptive defense against viruses. ✈♦ ② u r ♠ 411: 834–842 Wenzl P, Patino GM, Chaves AL, Mayer JE, Rao IM. 2001. The high level of aluminum resistance in signalgrass is not associated with known mechanisms of external aluminum detoxification in root apices. ✇♥ ♦ ⑤ ② ✇ s ❶ s t♣ ♥ 125: 1473-1484. Wesley SV ♠ t ♦ ♥ . 2001. Construct design for efficient, effective and high- throughput gene silencing in plants. ✇♥ ♦ ⑤ t ❸ 27: 581–590 Williams RJP. 2002. Recent aspects of aluminium chemistry and biology: a survey. ⑧ ♣ ♣ ③ ⑦ ⑧ s ♠ q ❹ ♠ v 228: 93-96. Widyartini. 2007. Isolasi dan pengklonan fragmen cDNA gen penyandi major facilitator superfamily MFS dari ❺ ❻❼ ❽ ❾ t ❿ ➀ ❽ ❽ ➁ ➁➂ ➃ ❻ L. [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Wu JL, Seliskar D M. 1998. Salinity adaptation of plasma membrane H + -ATPase in the salt marsh plant ➄ ➅ ❽ ➆ t ➂ ➃ ❽ ➅ ❽ t ❻➃ ❾ : ATP hydrolysis and enzyme kinetics. ➇ ➈➉ ➅ ➊ ❿ ➋ 49: 1005-1013. Yaffe MB, Rittinger K, Volinia S, Caron PR, Aitken A. 1997. The structural basis for 14-3-3: phosphopeptide binding specificity. ➌ ❻❼❼ 91: 961–971. Yamamoto Y, Hachiya A, Hamada H, Matsumoto H. 1998. Phenylpropanoids as a protectant of aluminium toxicity in cultured tobacco cells. ➍❼ ❽ ➃ ➋ ➌ ❻❼❼ ➍ ➎ ➏ s ➂ ❿ ❼ 399: 950-957. Yamamoto Y, Hachiya A, Matsumoto H. 1997. Oxidative damage to membrane by a combination of aluminum and iron in suspension-cultured tobacco cells. ➍❼ ❽ ➃ ➋ ➌ ❻❼❼ ➍ ➎ ys ➂ ❿ ❼ 38: 1333-1339. Yamamoto Y, Kobayashi Y, Matsumoto H. 2001. Lipid peroxidation is an early symptom triggered by aluminium, but not the primary cause of elongation inhibition in pea roots. ➍❼ ❽ ➃ ➋ ➍ ➎ ys ➂ ❿ ❼ 125: 199–208. Yamamoto Y ❻ t ❽ ❼ . 1994. Quantitative estimation of aluminum toxicity in cultured tobacco cells-correlation between aluminum uptake and growth inhibition. ➍❼ ❽ ➃ ➋ ➌ ❻ ❼❼ ➍ ➎ ➏ s ➂ ❿ ❼ 35: 575-583. Yan F, Zhu Y, Muller C, Zorb C, Schubert S. 2002. Adaptation of H + -pumping and PM H + -ATPase activity in proteoid root of white lupin under phosphate deficiency. ➍❼ ❽ ➃ ➋ ➍ ➎ ys ➂ ❿ ❼ 129: 50-63. Young JC, DeWitt ND, Sussman MR. 1998. A transgene encoding a plasma membrane H + -ATPase that confers acid resistance in ➐➆ ❽ ➑ ➂ ➒ ❿ ➅ ❾ ➂ s t ➎ ❽ ❼➂ ❽ ➃ ❽ seedlings. ➓ ❻ ➃ ❻ t ➂ ➔ s 149: 501–507. Zhao XJ, Sucoff E, Stadelmann EJ. 1987. A1 3+ and Ca 2+ alteration of membrane permeability of → u ❻ r ➔ u s r ➣ ➑ r ❽ root cortex cells. ➍❼ ❽ ➃ ➋ ➍ ➎ ys ➂ o l 83: 159- 162. Zheng SJ, Ma JF, Matsumoto H. 1998. High aluminum resistance in buckwheat. I. Aluminum-induced specific secretion of oxalic acid from root tips. ➍ ❼ ❽ ➃ ➋ ➍ ➎ ➏ s ➂ o l 117: 745-751. ↔↕ ➙➛ ➜ ➝ ↕ ➞ ➟ ➠ ➡ ➢➤ ➥➦ ➧➨ ➤ ➩ ➟ ➫ ➭ ➨ ➯ ➥ ➤ ➲ ➯ ➳ ➨ ➤ ➥ ➦ ➵ ➩ ➳ ➸ ➨ ➸ ➲➤ ➩ ➺➻➼ ➽ ➨ ➤ ➳ ➥ ➵ ➩ ➾ ➚➪ ➚ ➶ ➥ ➹ ➵ ➩ ➳ ➤ ➩ ➥➵ ➩ ➳ ➳ ➸ ➩ ➤ ➘ ➤ ➩ ➦ ➨ ➧➥ ➵ ➨ ➴➷ ➹ ➤ ➩ ➬➮➱ ➮ ➨ ➧ ➥ ➵ ➨ ➴➷ ✃ ✃ ❐ ❒❮ ❰ÏÐ ❮ Ñ❒Ò Ó ÔÏÕ ❰❮ ÔÖ ✃ × ØÙ Ú ÛÜ ÝÙ Ú Þ ß ß ß àá âã äå á æ ß ç èé ê ë ì í é ê î ï å äâ ð å ñïò õö ÷÷ ÷÷÷ õ ÷ ö ÷øõ ÷ õ öø ÷ õ øõõ õ ÷÷ õ õ ÷ õõ öø ÷÷õ ÷÷õõ ÷ õ ÷÷ùúú ûû C ÷ öøø GATGTCCTTTGCAGTGATAAGAC ø ÷÷ ÷ öõø õø ÷ ö õøø ø ÷ öö õöö ÷õø øöõø ÷ øø ÷öõö öööö øõøõ öøõ ÷ ö ÷÷øõøø ø ÷ õ ÷ööö ÷÷ ö ÷ø ÷÷ ö õõõ ÷÷ öøöõ ø ÷ ø ø ÷ øõ õø ÷ ö ø ÷÷ õ ø ÷ õ øö ÷ ö ÷ õöø õ ÷ ö ÷÷ öõ õ ÷ öö ööõõ öö ÷öø ÷ õõö øö ÷ ö øøõ õ ÷ õõ öøö ÷øø ÷ ÷÷ öø ÷ õøö ÷ õø ÷öøõ õööö ö ÷ ö ÷ ÷ õø õ ÷ öøõø ÷÷÷ ö øøõ ö ÷÷ ö ö ÷ øö õöõ øøøõ øøõõ õøøø ööõ õõøö õø ÷ ö õöö ÷ ö ÷÷ öõ õ ÷ õø øø ÷öõõø öõöø õ ÷ ö øøõõ ÷ ö ÷÷ ÷ õö ÷ ÷ öø ÷ õöõ ö ÷ ö ÷ø ÷ ö ÷ õ ööö ÷ ÷ ø ÷ õ øõõ ö ÷ ö ÷õö ÷ ö øõõ ø ÷ öö õõõø ÷ õ ÷ õ öõö öøöö ÷ øõ ÷ ÷ ö ÷öø ø ÷ ö ÷õ ÷ øõ ÷ ö ÷øõõö ø ÷ õ õ ÷ ø ÷öøø ÷öøöö öøø ø ÷ õõ ÷ ö ÷ õ ÷ ø ÷ ÷ øõø ÷ õ ÷ öøõ öõøø ÷ õö ÷ øö ÷õ ÷ øö øõö ÷÷ öö ÷ øøõ õö ÷ ö ö ÷÷öö ÷ ö öö ÷÷ö ÷ ö ÷ ø õõø ÷ ÷ ö ÷÷ ÷ õõ ÷ ø ÷÷õö ÷ ø øõö øõ ÷÷øõø ÷öø ÷ õ õøõ ø ÷ øø ø ÷ öø õõõ õõ õö ÷÷õöø ÷öõö ÷ ø ÷ õ õ ÷ ö ÷öõö öøøö ÷÷ ö ÷ ÷÷ õø õøø ööøõ øø ÷÷ ÷÷ ø øö öø ÷ ø õööö öø ÷öøõö õ ÷÷÷ ÷÷ ö øõöö øøø ÷õøöø ö ÷÷õööö ÷ ööö õø ÷ ÷ õ õ ÷ øõ ÷÷ øø ÷÷÷ööø ÷ ÷÷ õö øöö öõöø ÷ øö õõõø øõøø õø ÷ õ øøø öøøö ÷÷ øõö ÷ööøö ö ÷÷öø ÷ ö öøõ ÷öøø ÷ õø ÷õ ÷ õø ÷ õõö ÷ øø ÷ öø ÷ö ÷ õø õöø ø ÷ öööö ÷÷ õö ÷ öø ÷÷ õø øø ÷ õ ø ÷÷ø ÷ øø øøõõ õ ÷÷ ö ÷ õö øöö ÷øöø ÷ö ÷ ö øø ÷ ø ÷ ö ö ÷ õ ÷öøø öõöö ÷ õöö ÷÷ ö ö ÷ õö øöøö ø ÷ ø ÷ ÷ õ ATGACAGGAGATGG TGTCAATGA öö øõöõ øö ÷ ø GAATTC ÷õ ÷÷õõ ÷ õ õø ÷ õ ö ÷÷øõ ÷ ö õõöø öø ÷÷÷ ö ÷ ö ÷ õ øõõ õööõ ÷ õ ÷ ø ø ÷÷ööø ÷õöö øö üýþ ýÿ ✁ ✂ ✁ ✄ ✄ ☎ ✂ ✆ ✁ ✝ ÿ ✆ ✞ ý✟ þ ✠ ÿ ✡ ✄ ☛ ÿ ✆☞ ýÿ ✌✍ ô ✝ ✁ ✌ ✎ô ✄ ✏ ý ✟ ✑ ý✁ ✒ ✓✔ ✓ ✕ ☞ ✡ ✄ ✏ ✆þ ✑ ✖ ✗ ý ☞ ✠ þ ✠ ✁ ✂ ✁ ✘✙ ✚ ✎ ✛ ✜✢✢ ✣✣✤ ✥ ☞ ✗ ✆ÿ ✁ ô ✦ ✧ ✖ ✆★ ✗ ý✁ ✂ ✑ ÿ ✑ þ ✁ ✩✪ ✌ ✫ ÿ ✂ ☞ ý✁ ✒ ✓ ✔ ✓ ✕ ☞ ☞ ý ✁ ✂ ✂ ✑ ✁ ✟ ✁ ✗ ÿ ✆☞ ý ÿ ✬✭ ✝ ✁ ✏ ☛ ✮ ✯ ✯ ✰ ✱✲ ✳✴ ✵✶ ✲ ✷ ✰ ✸ ✹ ✶ ✺ ✳ ✲ ✻✺ ✼ ✶ ✲ ✳ ✴ ✽ ✷ ✼ ✾ ✶ ✾ ✻ ✲ ✷ ✿❀❁ ❂ ✶ ✲✼ ✳ ✽ ✷ ❃ ❄ ❅ ❄ ❆ ❇ ❈ ❉ ✽ ✷ ✼ ✲ ✷ ✳ ✽ ✷ ✼ ✼ ✾ ✷ ✲ ❊ ✲ ✷ ✴ ✶ ✵✳ ✽ ✶ ❋ ● ❉ ✲ ✷ ❍■❏ ■ ✶ ✵✳✽✶ ❋ ● ❑ ❑ ▲ ▼◆ ❖P ◗❘ ◆ ❙ ❚ ❯ ❱❲ ❳ ❨ ❩ ❬ ❲ ❳ ❭ ❪ ❘ ◗ ❖ ❫ ❘ ❴ ❵ ❛ ❛ ❜ ❝❞ ❡❢ ❣❞ ❤❝✐ ❥❦ ❢ ❧ ❡❞ ❦ ♠ ♥ ♦ ♣q r s t ✉ q r ✈ ②③ ④ ③ ⑤②②⑤ ⑤②⑤ ⑤ ④ ②② ⑤②②⑤ ⑤②⑤ ②② GAATTC ② ⑥④ ④ ATGGGGGAGAAGCCTG AGGTATTGG ⑥ ② ②⑤ ⑥ ② ④ ②⑤ ④② ⑥⑥②② ⑥⑥②⑤ ⑥ ② ④ ②② ⑥④④④②② ⑥ ② ⑥⑥ ⑤ ⑥ ④④ ⑤ ⑤ ④ ⑥④④ ② ⑥ ②② ⑥ ⑥ ② ④② ④④④② ⑥ ② ⑥ ⑥④ ⑤ ④ ② ⑥ ② ⑥④ ②⑤ ⑥ ②⑤ ⑥ ⑥ ②② ⑥ ②②② ⑤⑤ ④ ② ⑥ ⑤⑤ ⑥ ⑤ ⑤⑤ ⑥ ② ④ ⑤⑤② ⑤⑤② ⑥ ②② ⑥②⑤②⑤ ⑤ ④④②⑤② ⑥ ④④④④⑤②②⑤ ⑤ ⑥ ② ⑥⑥ ⑤ ⑥ ⑥ ②⑤ ④⑤② ⑥②② ⑥ ② ⑥⑥② ⑥⑥ ② ② ⑥ ② ⑥ ②⑤ ⑥ ⑥ ② ④④⑤ ④④② ⑥⑥ ② ④④ ⑤ ④ ④ ②②② ② ④④ ④⑥④ ② ④ ②② ⑥ ⑥④⑤⑤ ④ ⑤ ④ ② ④⑤ ④④ ② ②② ④⑤ ⑥④ ② ② ⑥⑥ ② ⑤ ④ ② ⑤ ⑥ ②⑤ ⑥⑥④ ⑤ ⑥④ ②② ⑤⑤ ⑥ ④④ ②⑤ ⑤⑤ ④ ② ②⑤ ⑥ ⑥⑥ ④ ②② ⑥②② ⑥ ② ②② ⑥ ⑥ ②⑤⑤ ④ ⑤⑤ ④② ⑥④ ④ ②②⑤ ⑥ ②② ⑥ ④④④④② ④ ⑤ ②② ④⑥ ④ ⑤ ⑥④ ⑥⑥ ⑤ ④ ⑤ ④④ ⑤ ④⑤ ④④ ⑤ ⑥④④ ⑥⑥ ⑤ ④⑤② ⑥ ⑤ ② ⑥④⑤ ⑥ ②⑤ ④④ ⑤ ⑥ ④ ⑤② ⑥②② ⑥ ⑥⑥⑥④ ⑥⑥④ ② ⑤②② ② ④ ⑥⑥④ ② ⑤ ④ ②⑤ ⑤②⑤ ④ ②⑤ ④ ④④ ② ⑥ ④ ②② ⑤ ④ ⑤② ④ ⑤ ④ ⑤ ②⑤⑤⑤ ⑤⑤ ⑥ ⑥ ②②⑤ ⑤ ⑥⑥ ② ② ④④⑤ ④ ⑥ ⑤② ⑥② ⑥④ ② ② ⑥⑥②② ④ ② ② ⑥ ② ④② ⑥ ② ② ⑥⑥ ② ⑥ ⑤②⑤ ⑥ ②⑤ ④② ④ ② ⑤ ④⑥ ② ④ ⑤⑤⑤ ④ ②② ②② ⑥④⑥④ ⑥⑥④ ⑤ ⑥ ②⑤ ⑥④④⑥ ⑥⑥ ⑤ ④ ④ ②② ⑥ ② ⑥ ⑤ ⑥④⑥⑥ ④④ ⑤⑤ ④ ②⑤ ④ ② ⑥④②⑤ ④ ⑤ ②⑤⑤ ④④ ⑤ ④④ ② ⑥ ②②② ⑥ ② ⑥ ④ ⑤⑤⑤ ④④ ② ⑥ ⑥⑥⑥ ④④ ② ⑥⑤⑤ ⑥ ② ④ ⑤ ④ ② ⑤ ⑥ ⑤ ④ ⑤ ⑥ ⑤ ④ ②② ④② ⑥⑥ ④ ⑤ ④ ⑤ ④ ② ⑤⑤②② ④ ⑤ ⑥⑤⑤ ⑥⑥ ⑥ ②②⑤ ⑤⑤ ④②② ⑥ ② ⑥④ ②② ④ ② ④④ ④⑥④ ④ ⑤ ⑥ ② ② ④④ ⑤ ⑤ ⑥ ⑤ ⑥④ ② ④⑥⑥②⑤② ⑥②②② ② ⑥⑥⑥ ④④ ② ⑥ ⑥ ②⑤ ④ ② ④ ② ② ④④⑥ ④④ ②⑤ ⑤ ⑥ ⑤ ④ ②② ④② ④ ②⑤ ⑥ ⑤ ⑥⑤ ④ ④④ ⑤ ④ ④④ ②② ⑤ ⑥⑥②②⑤② ②⑤ ⑥ ⑤ ⑥ ⑤ ④ ④ ②② ④②② ⑥④ ⑥ ⑤⑤ ⑥⑤ ④⑥ ⑥④ ⑤ ⑥ ⑥ ② ④ ② ②② ⑥⑤ ⑥ ④④④ ⑤ ⑤ ⑥ ② ⑥ ⑥ ②② ④④④④② ⑥ ⑤ ④②⑤ ⑥ ⑥④④ ② ② ⑥⑥⑥ ④④④⑤ ④ ②⑤ ⑥④④④②⑤ ④ ⑤ ② ⑥④ ④ ② ⑤ ④ ② ④⑤②②② ⑥④ ② ⑥④⑥⑥ ④④ ② ⑥ ⑥⑥④ ④⑥④④② ④ ⑤ ⑥ ④ ② ④⑥ ④ ⑤⑤ ② ⑥④④⑤ ⑥⑥ ⑤ ②② ⑥②② ⑥⑥⑥④ ⑥④ ⑤② ⑤⑤⑤ ④ ②② ⑥ ⑥④ ⑤② ⑥ ⑤ ⑥ ⑥④ ⑤ ④ ④ ⑤ ④④② ④④ ⑤ ④④ ⑤ ④ ⑤ ⑥④⑤②② ⑥②② ⑥ ⑥④ ⑤⑤⑤ ④ ⑥④④ ② ⑤⑤ ⑥ ④ ②⑤⑤ ④⑥ ⑤⑤ ② ④④⑤ ④④④⑤ ⑥ ② ④⑤ ⑥ ⑤⑤ ⑥④ ② ②⑤⑤ ⑥ ④④ ②② ⑤ ④ ⑤ ④ ⑤ ⑥ ⑤ ⑥ ② ②⑤ ④⑥ ④ ⑤ ④⑤ ⑥ ②⑤ ⑥ ②②② ⑥ ②⑤ ② ⑥④ ⑤ ⑥ ⑤⑤ ⑥ ⑥ ② ⑥ ② ⑥⑥④② ⑥ ⑤ ⑥②⑤ ⑥⑥ ④ ⑤② ⑥⑥ ② ⑥ ② ⑥ ④ ②②⑤ ④ ②② ⑥⑥④ ② ② ⑥④② ④ ⑤⑤ ④ ⑤ ④ ② ⑤ ⑥ ② ④② ⑥④ ⑥⑥ ② ⑥⑤ ④ ②② ② ⑥ ⑤ ④ ⑤ ④ ② ⑥ ⑤ ④④④ ② ⑥⑥ ⑤ ⑥ ⑥ ②⑤ ④④⑥ CTGTTGACAAAAATCTCATCGAGGT ⑥ ⑥④ ⑤ ⑥⑤ ④⑥ ② ④ G AATTC ②⑤ ②②⑤⑤ ②⑤⑤ ④②⑤ ⑥ ② ② ④ ⑤ ② ⑥ ⑤⑤ ⑥④⑥ ③ ②②② ⑥ ② ⑥ ② ⑤ ⑦⑧⑨ ⑧⑩ ❶ ❷ ❸ ❶ ❷ ❹ ❹ ❺❶ ❸ ❻❶ ❷ ❼ ❶ ⑩ ❻ ❽ ⑧❾ ⑨ ❿ ⑩ ➀ ❹ ➁ ⑩ ❻➂ ⑧⑩ ➁➃➄ ➅ ➆ ➇ ❼ ❶ ❷ ➃ ❶ ➁➃➄ ➈ ➆ ➉ ❹ ➊ ⑧ ❾ ➋ ⑧ ❷ ➌ ➍ ➎ ➍ ➏ ➐ ➑ ➀ ❹ ➊ ❻⑨ ➋ ➒ ➈ ⑧ ➂ ❿ ⑨ ❿ ❷ ❸ ❶ ❷ ➓➔ → ➉ ➣ ↔ ↕↕➙➙➛ ➜ ❶ ➂ ➈ ❻⑩ ❶ ❷ ➝ ➞ ➟ ❶ ➒ ❻ ➠ ➈ ⑧❷ ❸ ➋ ⑩ ➋ ⑨ ❶ ❷ ➡➢ ➄ ➤ ⑩ ❶ ❸ ➂ ⑧ ❷ ➌ ➍ ➎ ➍ ➏ ➐ ➑ ➂ ⑧❷ ❸ ❸ ➋ ❷ ❶ ❾ ❶ ❷ ➈ ⑩ ❻ ➂ ⑧⑩ ➥➦ ❼ ❶ ❷ ➊ ➁ ① ➧ ➧ ➨ ➩➫ ➭➯ ➲➳ ➫ ➵ ➸ ➺ ➻ ➳ ➼ ➭ ➫ ➽ ➼ ➾ ➳ ➫ ➭ ➯ ➚ ➵ ➾ ➪ ➳ ➪ ➽ ➫ ➵ ➶➹➘ ➴ ➳ ➫ ➾ ➭ ➚ ➵ ➷ ➬➮ ➬ ➱ ✃ ❐ ❒ ➚ ➵ ➾ ➫ ➵ ➭ ➚ ➵ ➾ ➾ ➪ ➵ ➫ ❮ ➫ ➵ ➯ ➳ ➲➭➚➳ ❰ ➨ ❒ ➫ ➵ ÏÐÑ Ð➳ ➲➭ ➚ ➳ ❰ ➨ Ò Ò Ó ÔÕ Ö×Ø Õ ÙÔÚ ÛÜ× Ý Ö Õ ÜÞ ß à áâ ã ä å æ â ã ç è è é ê ëìí î ï ëð ñ ò óô õ ö÷ øô õ ù ú ï îì û ï üú ý ✁✁ ✂✄ ✄ ☎☎✁ ✁✁ ✂ ✂✂ ✁ ✄ ✂ ✁☎ ✂✁ ✂✄☎✁ ✂ ☎ ✂✂✂ ✁ ✁ ✂✂ ✁ ✂✂✄☎✁✁ ✂✁✁ ✂✂✁ ✂ ✁ ✁ G AATTC ✁ ✄☎☎ GCATAAGTATGAGATTGTGAAGCGA ☎☎ ✄ ✂✄✄✁ ✂✄✄✁✁ ✄✄ ✄✂ ✄ ☎ ✄ ☎ ✄ ☎✁☎ ✁✁ ✂ ✄ ☎✁ ✄ ✂ ✁✁✁ ✄ ✁ ✄☎✁✁☎ ✁☎ ✂✄ ✄✂ ✁ ✄☎✁ ✂ ✂✂✂ ☎ ✁ ✂✂✂☎ ✄✄ ✄ ✁ ✄✄ ✁✁ ✂ ☎✁ ✄ ☎ ✄ ☎ ☎✁✁✁ ✄ ☎ ✄ ✁ ✂ ☎✁ ☎☎✁ ✂ ✂ ✁ ✄ ☎ ✁ ✂✂ ✄✂ ☎✁ ✄ ☎✁ ✂☎✁ ✂ ☎ ✂ ✁☎ ✄ ✁ ☎✁ ✂ ☎ ☎ ✂ ☎✁ ✄✂✄☎☎✁☎ ✁ ✂ ☎ ✂ ✄✂ ☎ ✁ ✄ ✁ ✂ ✂ ☎✁✁ ✂✂ ☎☎ ✄ ✁☎ ✁☎ ✂✄☎ ✂✄ ☎ ✂✄ ✁ ☎✁ ✂ ☎✁☎ ✂✂ ☎☎ ✄✂✂ ✄ ✁☎ ✂✁☎✁ ✂☎ ✄ ☎ ✂ ☎☎ ✂ ✂✄✄✄✁✁ ✄ ☎ ✁ ✄✄ ✄✄✄ ☎ ☎ ✄✂✄ ✂ ☎ ✄☎ ✂ ☎ ✄✂ ✁ ✂✄ ✁☎ ☎☎ ✂☎ ✄ ☎☎ ✄✂✄✄☎☎ ✂✁☎ ✄ ☎ ✄ ✁☎✁ ✂ ☎☎✁ ✁ ✄ ☎ ☎ ✂✄ ☎ ✁☎☎ ✄☎☎✁ ✁ ✂ ✂✂ ☎ ✂ ✄ ☎ ✄ ☎ ✁✁ ✄ ✄ ✁☎☎ ☎✁ ✄✂☎☎☎ ✂✂✄✂ ✂ ☎☎☎ ✂✄ ☎✁ ✁☎✁ ✂ ☎✁ ✄☎ ✂✄ ☎ ☎✁ ✂☎ ✄ ☎ ✂✂ ☎ ✂✄✄ ☎ ✁ ✄ ☎ ✁✁☎ ✄ ✂✂✄☎ ✂✄ ☎ ✁ ✄✂ ✁ ✄ ☎☎☎ ✂ ✁ ✄ ✄ ✁✁ ✄☎ ✄ ✁✁ ✁☎✁ ✄✄✄✂ ✂✄ ☎ ✂✄✂ ✂ ☎ ✂ ☎ ☎ ✂✂ ✂ ✁ ✄✂ ✄ ✁ ✂ ☎ ✁✁ ✄ ✄ ✁ ✂ ☎ ✂ ✁ ✂✄✁ ✄✄✄☎ ✂ ☎ ☎ ✂✄✂☎ ✄✂ ☎ ✁✁ ✄ ✄ ☎ ☎✁☎☎ ✂ ☎☎✁ ✁ ✂ ✁ ✁☎☎ ✄ ✂✂ ☎✁ ✁ ✂ ☎ ✄ ☎✁ ✄☎✁ ✄✂✁✁☎☎ ✄ ☎ ✂☎☎ ✂ ☎ ☎☎☎✁ ✁✁ ✂ ✄ ✁ ✂✂ ☎ ✄ ✂ ✁ ✄✄ ✄✂ ☎ ✄✄✂ ☎ ☎ ✂ ☎☎ ✂✂✂✁ ✄ ✁ ✄✁☎☎☎ ☎☎✁✁ ✂ ✁☎ ✄ ✁ ✂✂ ✄✂ ☎ ✂☎☎✁ ✄ ✁ ✄✄ ✁ ✄ ✂ ☎✁ ✂ ✂✂✄☎✁ ✄✂✁ ✄✂ ☎ ☎ ✂✂✁ ✄✄✄✁ ✂ ☎☎ ✁ ✂✂ ☎ ✂✂ ✁ ✂ ✁ ✄ ☎ ✄ ☎ ✄✂☎☎✁ ✂✄ ✄ ✁☎✁ ✄ ✁☎ ✄ ✂ ☎ ✄☎ ✂✄ ✁ ☎ ✂✄✁✁ ✂✂☎☎✁ ✄☎ ✄ ☎ ☎☎✁☎ ✁ ✄✂✄ ✂ ✁ ✄ ☎ ✂✂✄✁✁✁✁ ☎☎ ✁✁☎ ✂ ✂ ☎ ✄✂✁☎ ✂✁✁✁ ✂✁☎ ✂✂ ✂ ✁✁ ✁☎☎✁ ☎☎✁ ✂☎ ✂✄ ☎ ☎✁ ✂✁✁ ✂ ☎ ☎☎☎✁ ☎✁ ✄☎☎ ✁ ✂ ☎ ✂ ✄✄✂ ☎ ✁ ✄ ☎ ☎✁ ✂ ☎ ✄✂ ☎ ✂☎ ✄✄☎ ✂ ✁ ✂✁✁☎☎ ☎ ✄✂ ✁ ✂ ✁ ✄✁ ✂ ☎✁ ✁✁✁ ✂☎☎☎ ✁ ✂ ✂ ✁ ✂ ☎ ✄ ☎ ✂ ✁ ✄ ✁✁ ✁✁ ✄ ☎ ☎✁✁ ✄☎✁✁ ✁✁☎☎ ✁✁✁ ✂ ✂ ✁✁☎ ✁☎ ✂ ✄ ☎ ✂ ☎ ✁✁ ✂ ☎ ☎☎ ✄☎ ✄ ✄✂✄ ☎ ✂✄ ☎ ✂☎☎☎ ☎ ✄✂✄☎ ✂✂✂✁ ✂ ☎ ☎✁ ✄✂☎☎ ✂✄☎ ✂✄✄✁☎☎ ✂ ☎☎ ✂ ✄ ☎ ✂✂✁☎☎ ✄ ☎ ✁ ✂✄ ☎ ☎✁ ✄ ✁ ☎✁✁ ✁ ✄✄ ✁ ✁ ✂✂ ☎ ✁✁✁ ✄ ☎ ✂ ☎ ☎✁☎ ☎ ✄ ☎ ✂✁ ✄ ✁ ✂ ✄ ✁ ✄✁✁ ✄ ☎ ☎✁ ✂✄☎☎ ✂✄✂ ✁ ✄ ✁✁ ✂ ✄✄✄ ✄ ✁✁ ✄ ✂ ☎☎☎ ✁✁ ✄ ✄✄✄ ✁ ✄✄✂✄✁ ✂ ✁ ✂✁ ✄ ✁ ✂ ☎☎ ✂ ✄✄ ☎✁ ✁✁ ✂ ✄✂ ✄✂ ✁ ✂ ✄✂✄✄ ✄ ✁ ✄ ✄✂✄✂☎✁ ✂✄☎✁✁ ✁☎☎✁ ✂✄✄✂ ✂✄✂✂ ✂ ✁ ✄ ✂✄✂✄ ✄✄✄✄☎✁☎ ☎ ✂ ✄✂ ☎✁ ✄ ✁ ✂ ✁ ☎ ✄✂☎ ✂ ✁ ✂☎☎ ✂ ✁ ✂ ✁✁ ✄✄✂ ☎ ✂✄✄ ☎ ✂✄ ☎ ✄☎☎✁ ✂ ☎✁ ✄ ✄ ✁ ✄✄✁ ✂ ☎ ✄✄ ✁ ✄ ✁ ✄ ✄ ✁ ✄ ✁ ✂✂ ✁ ✄ ✁ ✄ ☎ ✄ ✁ ✂ ✁ ✄ ✁✁ ☎☎✁ ✄✁✁✁ ✄ ✄✂ ☎✁ ✄✄ ☎ ✄✂✂✂☎✁ ✄✄ ✄ ✁✁ ☎ ✂ ✄ ☎✁☎ ✁✁ ✄✄☎ ✂✄✁☎☎✁ ☎✁ ✄ ✁ ✄✂ ☎ ✁ ✄✄ ✁ ✁✁ ✄✂☎☎✁ ✄✂✄ ☎ ✄ ✁ ✄✁ ✄✂ ✁ ✄ ☎ ✂✂ ✄ ✁ ✂✄✄ ☎ ✂ ✁☎ ✄ ✂✄✂ ✂ ✁☎ ✂☎✁ ✄✁✁ ✄ ✁ ✄ ✁ ✂✄ ✄✂✄ ✂ ✁ ✄ ☎ ✂ ☎☎ ✂☎✁☎ ✄✁ ✂ ☎ ✂✂ ✁✁ ✂ ☎ ✂ ☎☎ ✄☎ ✂✄ ☎ ✁✁ ✂ ✄ ☎☎ ✂☎☎ ✄ ☎ ✂ ☎✁ ☎✁ ✂ ☎ ✁ ✄ ✁✁ ✂✂✄✄☎ ✄✄ ✄ ☎ ✂ ✁ ☎✁☎ ✄ ✄ ☎☎ ✄ ✁ ✂✄ ✁☎ ✁☎✁☎ ✂✄✄ ✂✄ ✁☎ ☎☎ ✂ ☎ ✁☎ ✂✁☎✁✁ ☎ ✄ ✁ ✂☎☎✁✁ ✁ ✂✄ ✄ ☎ ✂✂ ✂✂ ☎ ✄☎☎ ✂✁ ✂ ✄✂✂✂☎☎✁✁ ✄✄✄ ✄ ☎✁ ✂ ✂ ☎ ✂✄ ✄ ✁ ✄✁✁✁ ✄ ✂✄✂✂ ✄ ☎✁✁ ✂ ✁ ✄ ✄✂ ☎ ✄ ✂ ☎ ✂ ☎ ✁☎ ✄ ✄ ✁ ✂ ☎☎☎ ✁☎ ✂ ✁ ✄✄ ✁ ✄ ✁✁ ✂☎☎✁ ✄ ✄✄✂ ✄✄✂✄✁☎ ✄✂✁✁ ✂✂☎ ✄✂☎☎☎ ☎✁☎ ✄☎☎ ✄✄☎ ✂ ☎☎ ✄ ☎ ✁ ✂✄✄ ✂ ☎✁ ☎ ✂ ✁ ✄☎☎☎☎ ✁ ✄ ☎ ☎ ✄ ☎✁ ✂ ☎ ✂ ☎ ✄✄✄✄ ✄✄✄ ✄✄✄✄ ✄✄✄✄ ✄✄✄ ✄✄ ✄✄ CACTGTCATGCCGTTACGTAGCG ✄ ✄ ☎ ✂ ✄✂ ☎ ✄✁☎ GAATTC ✁ ✂ ✁ ✁ ✂✂ ✁ ✂✂ ☎✁ ✂✄✁✁☎ ✂✁ ✄✂ ✂✄ ☎ ✄ ✆ ✁✁ ✄✁ ✄ ✁ ✂ ✆✆ ✂ ✂✄ ✝✞✟ ✞✠ ✡ ☛ ☞ ✡ ☛ ✌ ✌ ✍✡ ☞ ✎✡ ☛ ✏ ✡✠ ✎ ✑ ✞✒ ✟ ✓ ✠ ✔ ✌ ✕✎✟ ✖ ✗ ✘ ✞✙✓ ✟ ✓ ☛ ☞ ✡ ☛ ✚✛ ✜ ✢ ✣ ✌ ✕✞ ✒ ✖ ✞☛ ✤ ✥✦ ✥ ✧ ★ ✩ ✔ ✌ ✪ ✠ ✎ ✙✞✠ ✫ ✡ ✪✫✬ ✘ ✭ ✮ ✏ ✡ ☛ ✯ ✞☛ ✞✢✡ ✰ ✞✠ ✱✲ ★ ✩ ✳ ✞ ✗ ✟ ✞ ✏ ✘ ✠ ✎✙✞✠ ✴ ✡ ✙✘ ✎✠ ✡ ☛ ✵ ✶ ✷✡ ✗✎✸ ✘ ✞☛ ☞ ✖ ✠ ✖ ✟ ✡ ☛ ✹ ✳✬ ✺ ✠ ✡ ☞ ✙✞ ☛ ✤ ✥ ✦ ✥ ✧ ★ ✩ ✙ ✞☛ ☞ ☞ ✖ ☛ ✡✒ ✡ ☛ ✘ ✠ ✎✙✞✠ ✻ ✼ ✏ ✡ ☛ ✕ ✪ ✵ ✽✾✾✿✿❀ ❁ ❂ ❁ ❃❄ ❅❆ ❇❈ ❄ ❉ ❊ ❋ ● ❈ ❍ ❅ ❄ ■❍ ❏ ❈ ❄ ❅ ❆ ❑ ❉ ❏ ▲ ❈ ▲ ■ ❄ ❉ ▼◆❖ ❏ ❑ ❉ P◗❘ ◗ ❙ ❚ ❑ ❉ ❏ ❄ ❉ ❅ ❑ ❉ ❏ ❏ ▲ ❉ ❄ ❯ ❄ ❉ ❆ ❈ ❇ ❅ ❑❈ ❱❊ ❚ ❄ ❉ ❲❳❨ ❳❈ ❇ ❅ ❑ ❈ ❱❊ ❩ ❬ ❬ ❭ ❪❫❴ ❵ ❛ ❪❜ ❝ ❞ ❡❢ ❣ ❤✐ ❥❢ ❣ ❦ ❧ ❛ ❵ ❫ ♠ ❛ ♥ ❝ ♦ ♣ q rs t✉ ✈✇ s ① ② ③ ④⑤ ⑥ ⑦⑧ ⑨⑤ ⑥ ⑩ ❶ ✇ ✈t ❷ ✇ ❸ ② ❹ ❺ ❻ ❼❽ ❾❿ ➀ ❽ ➁❼➂ ➃➄❿ ➅ ❾❽ ➄➆ ➇ ➈ ➉ ➊ ➋ ➌➍ ➎➊ ➋ ➏ ➐ ➑ ➒ ➓➔ →➣ ↔↕ ➔ ➙ ➛ ➜ ➝➞ ➟ ➠➡ ➢➞ ➟ ➤ ➥ ↕ ↔→ ➦ ↕ ➧➥➨ ➩ ➫ ➭ ➯➲➳ ➵ ➸ ➺ ➲➻ ➼ ➽ ➾ ➚ ➪ ➶➹ ➘➚ ➪ ➴ ➷ ➺ ➸ ➳ ➬ ➺ ➮➷ ➭ ❒❮❰Ï❒❮❒Ï❮Ï❰ ❒❮Ï❒ÏÏ❮❮ÏÏ❮ ÏÏ❰❒❮❮Ï❮ ❮ÏÏ❮Ï❮ GAATTC ❮❰❒❰❮❰ ATGGGGG AGAAGCCTGAAGTACTGG ❰❮ ❮Ï❰❮❒❮Ï❒❮❰❰ ❮❮❰❰❮Ï❰❮❒❮❮ ❰❒❒❒❮❮❰❮❰❰Ï ❰❒ ❒ÏÏ❒❰❒❒❮❰❮❮ ❰❰❮❒❮❒❒❒❮❰❮ ❰❰❒Ï❒❮❰❮❰❒❮ Ï❰❮Ï❰❰❮❮❰❮❮ ❮ÏÏ❒❮❰ÏÏ❰ÏÏ Ï❰❮❒ÏÏ❮ÏÏ❮❰ ❮❮❰❮Ï❮ÏÏ❒❒❮ Ï❮❰❒❒❒❒Ï❮❮Ï Ï❰❮❰❰Ï❰❰❮Ï❒ Ï❮❰❮❮❰❮❰❰❮❰ ❰❮❮❰❮❰❮Ï❰❰❮ ❒❒Ï❒❒❮❰❰❮❒❒ Ï❒❒❮❮❮❮❒❒❒❰ ❒❮❒❮❮❰❰❒ÏÏ❒ Ï❒❮❒Ï❒❒❮❮❮❒ Ï❰❒❮❮❰❰❮Ï❒ ❮Ï❰❮Ï❰❰❒Ï❰❒ ❮❮ÏÏ❰❒❒❮ÏÏÏ ❒❮❮Ï❰❰❰❒❮❮❰ ❮❮❰❮❮❮❰❰❮ÏÏ❒ ÏÏ❒❮❰❒❒❮❮Ï❰ ❮❮❰❒❒❒❒❮❒Ï❮ ❮❒❰❒Ï❰❒❰❰Ï❒ Ï❒❒Ï❒Ï❒❒Ï❰❒ ❒❰❰Ï❒Ï❮❰Ï❮❰ ❒Ï❰❮Ï❒❒Ï❰❒Ï ❮❰❮❮❰❰❰❰❒❰❰ ❒❮Ï❮❮❮❒❰❰❒❮ Ï❒❮ÏÏ❮Ï❒❮Ï❒ ❒❒❮❰❒❮❮Ï❒Ï❮ ❒Ï❒Ï❮ÏÏÏÏÏ❰ ❰❮❮ÏÏ❰❰❮❮❒❒ Ï❒❰Ï❮❰❮❰❒❮❮ ❰❰❮❮❒❮❮❰❮❒❮ ❰❮❮❰❰❮❰Ï❮Ï❰ ❮Ï❒❮❒❮Ï❒❰❮❒ ÏÏÏ❒❮❮❮❮❰❒❰ ❒❰❰❒Ï❰❮Ï❰❒❒ ❰❰❰Ï❒❒❮❮ ❰❮❰Ï❰❒❰❰❒ ❒ÏÏ❒❮ Ï❒❮❰❒❮Ï❒Ï❮Ï Ï❒❒Ï❒❒❮❰❮❮❮ ❰❮❰❒ÏÏÏ❒❒❮❰ ❰❰❰❒❒❮❰ÏÏ❰❮ ❒Ï❒❮Ï❰Ï❒Ï❰Ï ❒❮❮❒❮❰❰❒Ï❒Ï ❒❮ÏÏ❮❮❒Ï❰ÏÏ ❰❰❰❮❮ÏÏÏ❒❮❮ ❰❮❰❒❮❮❒❮❒❒❒ ❰❒❒Ï❰❮❮❒❒ÏÏ ❰Ï❰❒❮❒❰❰❮Ï❰ ❰❮❮❮❮❰❰❰❒❒❮ ❰❰❮Ï❒❮❒❮❮❒❒ ❰❒❒❮ÏÏ❰Ï❒❮❮ ❒❮❒❮Ï❰Ï❰Ï❰❒ ❒Ï❒❒❒❮❮Ï❰❰❮ ❮Ï❮❮Ï❰Ï❰Ï❒❒ ❮❮❒❮❮❰❒❰ÏÏ❰ Ï❒❰❰❒Ï❰❰❮❒❮ ❮❮❰Ï❰❒❒❒ÏÏ❰ ❮❰❰❮❮❒❒❒❒❮❰ Ï❒❮Ï❰❰❒❒❮❮❰ ❰❰❒❒❒Ï❒❮ Ï❰❒❒❒❮Ï❒Ï❮❰❒ ❒❮Ï❒❮❒Ï❮❮❮❰ ❒❮ ❰❒❰❰❒❒❮❰❰❰❒ ❒❰❒❒❮❒Ï❰❒❮❒ ❰❒ÏÏ❮❰❒❒Ï❰❰ Ï❮❮❰❮❮❰❰❰❒❰ ❒Ï❮ÏÏÏ❒❮❮❰❰ ❒Ï❮❰Ï❰❰❒Ï❒❒ Ï❒❒❮❒❒Ï❒❒Ï❒ Ï❰❒Ï❮❮❰❮❮❰❰ ❒ÏÏÏ❒❰❒❰❮ÏÏ ❰❒❮ÏÏ❒❰ÏÏ❮❒ ❒Ï❒❒❒Ï❰❮❒Ï❰ ÏÏ❰❒❮❮ÏÏ❰❒❒ ❮❮Ï❒Ï❒Ï❰Ï❰❮ ❮Ï❒❰❒Ï❒Ï❰❮Ï ❰❮❮❮❰❮Ï❮❰❒Ï ❰ÏÏ❰❰❮❰❮❰❰❒ ❮❰Ï❰❮Ï❰❰❒Ï❮ ❰❰❮❰❮❰❒❮❮Ï❒ ❮❮❰❰❒❮❮❰❒❮❒ ÏÏ❒❒❒❮Ï❰❮❒❮ ❰Ï❰❰❮❰Ï❒❮❮ ❮❰Ï❒Ï❒❮❰Ï❒❒ ❒❮❰❰Ï❰❰❮Ï❒❒❰ Ï❒❮❒❒❮❰Ï❰❰❰ ❰❰❒Ï❒Ï❰❒Ï❮❰ ❮❮❒Ï❒❒❒❮Ï❮❰ ❰❰ .......................................... ....................................................... CTTTTCCCACCCTTTCATTGGTTGCTGATCCTTTGCTATCCTTCCAATGATGGTT CCATCATGACAATTTTGAAGGATAGGGTGAAACCATCACCTTTTTTCCCGACAGC TGGAAGCTCGCAGAAATCTTCACTACTGGAATTGTTCTTGGCAGTTACCTGGCTA TGATGACGGTTATCTTCTTTTGGGCAGCCTACGAAACTAACTTCTTTCCCGAGAG TTTTTGGCGTAGCCACTCTTGAGAAGACTGCCCATGACGACTTCCGAAAGCTTGC CTCCGCGATATACTTGCAAGTGAGTACTATCAGTCAGGCCTTGATATTTGTGACA CGATCCAGGGGTTGGTCCTACGTCGAGCGTCCCGGGTTGTTGCTCATTGCGGCTT TTGTGATTGCTCAACTGATTGCTACTCTAATTGCGGTTTACGCGAGCTGGGGCTT TGCCGCTATCGAGGGGATTGGATGGGGTTGGGCCGGTGTCATCTGGCTTTATAAC ATCATCTTTTACATCCCGCTTGACTTCATCAAGTTCTTCATCCGTTATGCATTGA GTGGGAAGGCCTGGGATCTTGTTATCGAGCAGAGGATTGCATTCACGAGGCAAAA GGACTTTGGAAAAGAACAGCGCGAGCTTCAATGGGCACACGCACAAAGAACACTG CATGGGTTGCAACCACCCGACACAAAAATGTTCACTGAGCGTACTCGCTTCGCGG AACTCAATCATATTGCTGAAGAAGCTAAGAGAAGAGCCGAGATAGCGAGGTTGAG GGAACTGAATACCCTGAAAGGTCATGTGGAATCAGTTGTGAGACTGAAGGGACTT GACATAGAGACGATCCAGCAATCGTACACCGTCTGAGGAGAGCAACACGATCTTC TGTAGCTCCGGCTCTTATCATGGCATTCTTATCTGTGCTGAGGCCAATAAATCGT GTAATTAGCAGTGTGTCAACAGTTTCTGTCGTGGTAGCTTGGGCAATCCCCTATT CGCACCCTTGGAAAATGCCTCAAGAGGGACACCATGGCGAACTACTCTGTAAGCT TTGTCGAAGAGGCTTGAAACAACAGTACGGCCTACTTTTGTATTAA TCTTATGCA ACTGTCGATTATCACT AGTGAATTCGCGGCCGCCTGCAGGTCGACCATATGGAGA GTCCCAACGCGTTGGAGCA ÐÑÒ ÑÓ Ô Õ Ö Ô Õ × × ØÔ Ö ÙÔ Õ Ú ÔÓ Ù Û ÑÜ Ò Ý Ó Þ × ß Ó Ùà ÑÓ ßáâ✃ ã ä Ú Ô Õ å æ çèé ã é × ê Ñ Ü ë ÑÕ ì íî í ï Þ × ê ÙÒ ë ð ñ Ñ à Ý Ò Ý Õ Ö Ô Õ òó ô é õ ö Ô à ñ ÙÓ Ô Õ ÷ ø ù Ô ð Ù ú ñ ÑÕ Ö ë Ó ë Ò Ô Õ ûü â ì íî í ï à ÑÕ Ö Ö ë Õ ÔÜ Ô Õ ñ Ó Ù à Ñ Ó è❐ Ú Ô Õ ê ß ý þÿÿ ✁ ✂ ✄ ☎ ✆✝ ✄ ✂ ✞ ✟✠✡☛ ☞✆ ☎✡ ✝ ✡ ✞ ✌ ✝ ✡ ☞ ☎✡ ✄ ✍✎ ✏ ☞✄ ✂ ✎ ✡ ✝✑ ☛✠✡ ✟✠✡ ✒ ✝✡ ✌✂ ✓ ✔ ✕ ✝✍ ✟ ✖ ✗✘ ✙ ✠ ✙ ✚ ✎ ✝ ✡ ✟ ✆✝✄ ✙ ✝ ✌✝✎✂ ✛✜ ✢ ✣ ✤✥✦ ✧ ✣ ✧ ✣ ✢ ✣ ★ ✣ ✥ ✩ ✪✫✬ u ✧ ✆ ✭ ✮ ✯ ✰ ✯ ✱✲ ✳ ✴ ✵✶✷ ✸✹ ✺✸ ✳ ✻✸ ✳ ✸ ✼✽✸✱✸ ✲ ✱ ✳ ✾ ✲✾ ✯✾ ✺ ✴ ✼✾ ✸✱✲✸✱ ✿ ✶❀ ✶ ✼ ✿ ✶❀ ✶ ✼ ❁❂ ❃❃ ❄❅ ❆❇❈❉❊ ❉❉ ❇ ❋ ❅ ❇ ● ❅ ❇❉ ❍ ■❍❏ ❅ ❆ ❊ ❉ ❏ ❍ ■ ❉❇ ❏ ❑ ❋ ▲ ❅ ❆ ❍ ❇ ▼◆ ❆ ❋❉❏ ❍ Dengan ini saya menyatakan bahwa disertasi Isolasi, Pengklonan, dan Konstruksi RNAi Gen Penyandi H + -ATPase Membran Plasma dari Melastoma malabathricum L. adalah karya bersama saya dan pembimbing yang belum pernah diajukan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka. Bogor, Februari 2011 Muzuni NIM G361050051 ❖ P ◗❘❙ ❖ ❚ ❘ MUZUNI. Isolation, Cloning, and RNAi construct of Gene coding Plasma Membrane H + -ATPase from Melastoma malabathricum L. Under supervised of SUHARSONO, DIDY SOPANDIE, and UTUT WIDYASTUTI SUHARSONO. Melastoma malabathricum L. is an Al-accumulating plant that grows in acidic soils with high level of soluble aluminum in the tropics. One of the important proteins in the detoxifying aluminum is a plasma membrane H + -ATPase, a most abundant protein on the plasma membrane, encoded by pma gene. The objective of this research is to isolate and characterize the gene encoding plasma membrane H + - ATPase from M. malabathricum L. Mmpma and to construct RNAi by using 3’UTR of Mmpma. Total cDNA had been successfully isolated by using reverse transcription with total RNA as template. Full length cDNA of Mmpma had been successfully isolated through a gradual isolation of the gene. The 5’ end and middle gene of Mmpma had been successfully isolated by PCR polymerase chain reaction by using total cDNA as template and pma primers designed from some plants, while the 3’ end of Mmpma had been isolated by 3’ RACE. The parts of the gene had been successfully joined by PCR. The joining product was successfully inserted into pGEM-T Easy and the recombinant plasmid was successfully introduced into E. coli DH5α. Nucleotide sequence analysis showed that the length of Mmpma coding sequence was sized 2871 bp encoding 956 amino acids with a predicted molecular weight of 105.29 kDa and pI value of 6.84. MmPMA has 10 transmembran domains, 4 cytoplasm loops, 6 functional domains and 3 autoregulatory domains. In the second cytoplasm loop C2 contained conserved sequence TGES phosphatase activity domain; in the C3 contained conserved sequences DKTGTLT phosphorylation and transduction domain, KGAP ATP-binding andor kinase activity domain, DPPR ATP-binding domain, MITGD ATP-binding domain and GDGVNDAPALK ATP-binding domain; in the C4 contained 3 autoregulatory domains: QKDFGKEQRELQWAHAQRTLHGL, NHIAEEAKRRAEIARL, and YTV. Local alignment analysis based on nucleotide of mRNA showed that Mmpma is 82 identical to pma Vitis vinifera; 81 to pma Juglans regia, pma Populus tricocarpa, pma Sesbania rostrata, and pma Prunus persica and 80 to pma Lycopersicon esculentum. Based on deduced amino acid sequence, MmPMA is 94 identical to PMA Vitis vinifera and PMA Juglans regia; 93 to PMA Populus trichocarpa; 92 to PMA Vicia faba, Lycopersicon esculentum, Solanum tuberosum, and Arabidopsis thaliana, AHA4. One of the methods to study the important role of Mmpma gene is by suppressing the gene expression through RNAi. The Mmpma gene can be supposed in detoxifying Al and low pH, if the transgenic plants containing RNAi became sensitive to Al and low pH. RNAi vector had been successfully constructed using GATEWAY TM cloning technology with the 3’UTRMmpma was used as double-stranded RNA dsRNA trigger sequence, pENTR TM D-TOPO ® as entry vector, and pANDA plasmid as destination vector. The DNA coding RNAi had been successfully introduced into M. malabathricum L. mediated by A. tumefaciens EHA101 to analyze the function of Mmpma gene in the detoxifying aluminum. Based on the result of transgenic plants tolerance analyzes to Al stress showed that in the nutrient solution including 3.2 mM Al stress AlCl 3 .6H 2 O, pH 4 for 7 days, the transgenic plants underwent growth suppression especially roots and leaves, whereas non-transgenic plants underwent growth normally. We supposed that Mmpma gene has an important role in the detoxifying aluminum in Melastoma malabathricum L. ❯ ❱ ❲ ❳ ❨❩ ❬❩ ❲ MUZUNI. Isolasi, Pengklonan, dan Konstruksi RNAi Gen Penyandi H + -ATPase Membran Plasma dari Melastoma malabathricum L. Dibimbing oleh SUHARSONO, DIDY SOPANDIE, dan UTUT WIDYASTUTI SUHARSONO. Melastoma malabathricum L. adalah suatu tanaman akumulator Al yang tumbuh pada tanah asam dengan tingkat kelarutan aluminium tinggi di daerah tropis. Salah satu enzim penting dalam detoksifikasi Al adalah H + -ATPase membran plasma, suatu protein yang paling melimpah pada membran plasma, yang disandikan oleh gen pma. Tujuan penelitian ini adalah mengisolasi dan mengkarakterisasi gen yang menyandikan H + -ATPase membran plasma dari Melastoma malabathricum L. Mmpma dan mempelajari peranan gen Mmpma melalui konstruksi RNAi dengan menggunakan fragmen 3’UTR Mmpma. cDNA total telah berhasil disintesis dengan menggunakan transkripsi balik dengan RNA total sebagai cetakan. cDNA Mmpma utuh telah berhasil diisolasi melalui isolasi gen secara bertahap. Bagian ujung 5’ dan tengah gen Mmpma telah diisolasi dengan PCR polymerase chain reaction menggunakan cDNA total sebagai cetakan dan primer pma yang didesain dari beberapa tanaman, sedangkan bagian ujung 3’gen Mmpma telah diisolasi dengan 3’ RACE. Bagian-bagian gen tersebut telah berhasil digabung menggunakan PCR dan telah disisipkan ke dalam pGEM- T Easy. Plasmid rekombinan tersebut telah berhasil diintroduksikan ke dalam E. coli DH5α. Analisis sekuen nukleotida menunjukkan bahwa panjang sekuen penyandi CDS Mmpma adalah 2871 pb yang menyandikan 956 asam amino dengan prediksi berat molekul 105.29 kDa dan prediksi nilai pI sekitar 6.84. MmPMA mempunyai 10 domain transmembran, 4 loop sitoplasma, 6 domain fungsional dan 3 domain autoregulator. Pada loop sitoplasma kedua C2 terdapat sekuen terkonservasi TGES domain aktivitas fosfatase; pada C3 terdapat sekuen DKTGTLT domain fosforilasi dan transduksi, KGAP domain pengikatan ATP danatau aktivitas kinase, DPPR domain pengikatan ATP, MITGD domain pengikatan ATP dan GDGVNDAPALK domain pengikatan ATP; pada C4 terdapat 3 domain autoregulator yang masing-masing mempunyai sekuen: QKDFGKEQRELQWAHAQRTLHGL, NHIAEEAKRRAEIARL, dan YTV. Analisis kesejajaran lokal berdasarkan nukleotida mRNA menunjukkan bahwa Mmpma mempunyai kemiripan 82 dengan pma Vitis vinifera; 81 dengan pma Juglans regia, pma Populus tricocarpa, pma Sesbania rostrata, dan pma Prunus persica dan 80 dengan pma Lycopersicon esculentum. Berdasarkan deduksi sekuen asam amino, MmPMA mempunyai kemiripan 94 dengan PMA Vitis vinifera dan PMA Juglans regia; 93 dengan PMA Populus trichocarpa; 92 dengan PMA Vicia faba, Lycopersicon esculentum, Solanum tuberosum, dan Arabidopsis thaliana. Salah satu cara untuk mempelajari peranan gen Mmpma adalah dengan menekan ekspresi gen tersebut melalaui RNAi. Gen Mmpma dapat diduga berperan dalam detoksifikasi Al dan pH rendah apabila tanaman transgenik hasil transformasi RNAi menjadi peka terhadap Al dan pH rendah. Vektor RNAi telah berhasil dikonstruksi menggunakan teknologi pengklonan GATEWAY TM dimana fragmen 3’UTRMmpma digunakan sebagai sekuen pemicu RNA utas ganda dsRNA, pENTR TM D-TOPO ® sebagai entry vector dan vektor pANDA sebagai destination vector. DNA penyandi RNAi telah diintroduksikan ke tanaman M. malabathricum L. melalui A. tumefaciens EHA101 untuk mempelajari peranan gen Mmpma dalam detoksifikasi Al. Hasil uji toleransi tanaman transgenik terhadap cekaman Al menujukkan bahwa pada larutan hara yang mengandung 3.2 mM AlCl 3 .6H 2 O dan pH 4 selama 7 hari, tanaman transgenik mengalami hambatan pertumbuhan terutama pertumbuhan akar dan daun, sedangkan non- transgenik tidak mengalami hambatan. Hal ini menjelaskan bahwa gen Mmpma diduga berperanan sangat penting dalam detoksifikasi Al pada Melastoma malabathricum L. Penelitian tentang isolasi, pengklonan, dan uji peranan gen, merupakan penelitian yang masih jarang dilakukan. Saat ini, isolasi gen penyandi H + -ATPase membran plasma dari Melastoma malabathricum L. dan pengujian peranan gen tersebut terhadap cekaman Al dan pH rendah pada M. malabathricum L. dengan menggunakan RNA interference RNAi merupakan penelitian yang belum pernah dilakukan oleh peneliti lain di dunia. Oleh karena itu, kedua topik penelitian di atas adalah kebaruan novelty dalam penelitian ini. ❭ ❪❫ ❴ ❵ ❛ ❜ ❝ ❜ ❵ ❫ ❞ ❡ ❢ ❡ ❣ ❤ ✐ ❥ ❡ ❦❡ ❧♠ ♥♦♣ q♣ r s t ✉t ♣ ✈ ✇ ① ② ③ s ④q ✈ ♦✇ ✉t♣ q t ♣ ② t✈ t ✉ ② q⑤t✈ t q ② ♦ ♣ r t ♣ ⑥ ♦⑦t s ③ s t ♣ ✈ ✇ ① r ✇ t ⑥ q ♣ ✉♦♣ ④q⑧ q s t ④q ⑥t③ ✈ ③ ♣ ♦ s ④ ✉♦♣ ④ q⑧ q s t ④q⑨ ♥ ✇ ① r ✇ t⑥ ♦s ④✉ ♦ ♣ ④q⑧ q s t ④q ② q⑩ t ② t ✈ s t♣ ✈ t ② t s ① ♣ ② q④q ⑦t ⑩ t ♣ ❶ t♣ r t ④ t ⑥ ⑨ ❷ ♦♣ ③ ✇ ③ ✉ ❸ ③ ❹ tr ❶ ① ❺ ❻ ❼ ❽ ⑨ ❾ ❿ ➀ ➀ ➁ ➂ ➃ ✉t♣ t ⑩ ③ ⑦ ✉ q④① ⑦ ❶ t♣ r ⑥ ♦✇ ③ ✈ t s t♣ ④ t ⑦t ⑩ ④ t ✉③ ➄ ♦ ♣ q ④ ✉ t ♣ t ⑩ ② q ➅ ♣ ② ① ♣ ♦ ④ qt ⑥ ♦ ⑥ ✈ ③ ♣ ❶ t q ④ ♦ ❹ t ✇ t ♣ ⑦ ③ t ④ ⑥ ♦♣ ⑤ t ✈ t q ➁ ➆ ⑨ ➇ ➄ ③ ✉t ⑩ t ➃ ✉♦ ✇ ③ ✉t⑥t ❶ t ♣ r ❹ ♦ ✇ t ④ t ⑦ ② t ✇ q ❹ t ⑩ t ♣ ② t ④ t ✇ ④♦ ② q ⑥ ♦♣ ⑨ ➈ q ✈ ♦ ✉ ♦ ✇ ④♦ ❹ ③ ✉ ⑥ ♦ ⑥ q ⑦ qs q ✈ ➉ ❶ t♣ r ④t♣ r t ✉ ✇ ♦♣ ② t ⑩ ➃ ❹ ♦✇ s q④ t ✇ ✈ t② t ✈ ➉ ➁ ② t ♣ ⑥ ♦⑥ q⑦ q s q s t♣ ② ③ ♣ r t♣ t⑦ ③ ⑥ q ♣ q③ ⑥ ✉q♣ r r q ❾ ♥ ✇ t ④♦ ✉ ❶ ① ➊ ❸ ③ ✇ qt② q s t ✇ ✉ t ❿ ➀ ➀ ➋ ➂ ⑨ ➌ t ⑩ t♣ q♣ q ⑥ ♦⑥✈ ③ ♣ ❶ t q ✈ ① ✉ ♦ ♣ ④q ❶ t ♣ r ④ t♣ r t ✉ ❹ ♦ ④ t ✇ ③ ♣ ✉③ s ✈ ♦♣ q♣ r s t ✉ s t ♣ ✈ ✇ ① ② ③ s ④q ✈ ♦✇ ✉t♣ q t ♣ ⑨ ➍ s t♣ ✉♦ ✉ t ✈ q ➃ s ♦ ❹ t♣ ❶ t s t♣ ✉t♣ t⑥t ♣ ✉ q ② t s ② t✈ t ✉ ✉③ ⑥ ❹ ③ ⑩ ① ✈ ✉q⑥t ⑦ ✈ t ② t s ① ♣ ② q ④q ⑦t ⑩ t ♣ t ④ t ⑥ ② ♦ ♣ r t♣ s ♦⑦t ✇ ③ ✉t♣ ➍ ⑦ ❶ t ♣ r ✉q♣ r r q⑨ ♥ t② t s ① ♣ ② q④q t ④ t⑥ ➃ ✈ ♦ ✇ ✉③ ⑥ ❹ ③ ⑩ t ♣ ✉ t ♣ t ⑥t ♣ ⑥ ♦ ♣ r t⑦ t⑥ q r t ♣ r r ③ t ♣ ❶ t♣ r ② q ④♦ ❹ t ❹ s t ♣ ① ⑦ ♦⑩ ✈ ♦ ♣ r ⑩ t ⑥ ❹ t ✉t♣ ⑦t ♣ r ④ ③ ♣ r ④♦✇ t ✈ t ♣ ⑩ t ✇ t t ✉ t ③ r t ♣ r r ③ t ♣ ⑧ ③ ♣ r ④q ④♦⑦ t s t ✇ ➃ ② t♣ ⑩ t ⑦ q♣ q ② t✈ t ✉ ✉♦ ✇ ➄ t② q ② t⑦ t⑥ ➎ t s ✉③ ➏ ➐ ❿ ➄ t ⑥ ④ ♦✉♦⑦ t ⑩ ✈ ♦ ✇ ⑦t s ③ t ♣ ➍ ⑦ ❾ ➑① ⑤ ⑩ q t ♣ ➃ ➏ ➒ ➒ ➇ ➂ ⑨ ➍ s q ❹ t ✉♣ ❶ t ➃ ✈ ♦✇ ✉ ③ ⑥ ❹ ③ ⑩ t ♣ ② t♣ ✈ ♦ ✇ s ♦⑥ ❹ t♣ r t ♣ t s t ✇ ✉♦ ✇ ⑩ t ⑥ ❹ t ✉ ➃ ② t ♣ ② t ⑦t ⑥ ➄ t♣ r s t ✈ t♣ ➄ t♣ r t s t ♣ ⑥ ♦ ⑥✈ ♦♣ r t ✇ ③ ⑩ q ✈ ♦ ✇ ✉ ③ ⑥ ❹ ③ ⑩ t ♣ ② t ♣ ✈ ♦ ✇ s ♦⑥ ❹ t♣ r t♣ ❹ tr q t ♣ ✉t ➄ ③ s ✉ t ♣ t⑥t ♣ ⑨ ♥♦ ✇ ✉③ ⑥ ❹ ③ ⑩ t ♣ ✉ t ♣ t ⑥t ♣ ✈ t ② t ✉ t♣ t ⑩ t ④ t ⑥ ② ♦♣ r t ♣ s ♦⑦t ✇ ③ ✉t♣ t⑦ ③ ⑥ q ♣ q ③ ⑥ ✉q♣ r r q ② t✈ t ✉ ② q✈ ♦ ✇ ❹ t qs q ② ♦♣ r t ♣ ⑥ ♦⑦t s ③ s t♣ ✈ ♦ ✇ t s q✉ t ♣ ✉t♣ t⑥t ♣ ⑥ ♦ ⑦ t⑦ ③ q ✈ ♦ ✇ ④q⑦t ♣ r t ♣ s ① ♣ ➓ ♦♣ ④q① ♣ t⑦ ❶ t♣ r ② qq s ③ ✉ q ② ♦♣ r t ♣ ④♦ ⑦ ♦s ④q ④♦④③ t q ② ♦♣ r t♣ ④q⑧ t ✉ s ♦ ③ ♣ r r ③ ⑦t ♣ ❶ t ♣ r ② q q ♣ r q ♣ s t♣ ⑥ t③ ✈ ③ ♣ ⑥ ♦ ⑦ t⑦ ③ q ✉♦ s ♣ ① ⑦ ① r q ➔→ ➍ ✇ ♦s ① ⑥ ❹ q ♣ t ♣ ⑨ ♥♦♣ ② ♦ s t ✉ t ♣ ✈ ♦ ⑥③ ⑦ q tt ♣ s ① ♣ ➓ ♦♣ ④q① ♣ t⑦ ② q ⑩ t② t✈ s t♣ ✈ t ② t ✉♦ ✇ ❹ t ✉ t ④ ♣ ❶ t ④ ③ ⑥ ❹ ♦ ✇ ② t ❶ t r ♦♣ ♦ ✉q s ③ ♣ ✉ ③ s ✉ ① ⑦ ♦ ✇ t ♣ ④q ✉ t ♣ t ⑥t ♣ ✉♦ ✇ ⑩ t② t✈ ✉ t ♣ t ⑩ t ④ t⑥ ② t ♣ ➍ ⑦ ✉ q ♣ r r q ➃ ④♦ ⑩ q♣ r r t ✈ ♦✇ ⑦ ③ ② q⑦t s ③ s t♣ ✈ ♦♣ ② ♦ s t ✉ t ♣ ✉♦ s ♣ ① ⑦ ① r q ➔→ ➍ ✇ ♦s ① ⑥ ❹ q ♣ t ♣ ③ ♣ ✉ ③ s ⑥ ♦ ✇ t s q ✉ ✉t♣ t ⑥t♣ ✉✇ t ♣ ④ r ♦♣ q s ❶ t ♣ r ✉ ① ⑦ ♦✇ t ♣ ✉♦ ✇ ⑩ t ② t ✈ ✉ t ♣ t ⑩ t ④ t⑥ ② t♣ ➍ ⑦ ✉q♣ r r q⑨ ➈t ⑩ t✈ ③ ✉t⑥t ❶ t ♣ r ⑩ t ✇ ③ ④ ② q ⑦ t s ③ s t ♣ ② t⑦ t⑥ ✈ ♦♣ ② ♦ s t ✉ t ♣ q ♣ q t ② t ⑦t ⑩ ⑥ ♦ ♣ r q ④① ⑦t ④q r ♦ ♣ ➐ r ♦ ♣ ❶ t♣ r ✉ ♦✇ ⑦ q ❹ t ✉ ② t⑦ t⑥ ✉① ⑦ ♦✇ t♣ ④q ✉ t ♣ t⑥t ♣ ✉♦ ✇ ⑩ t ② t ✈ ✉ t ♣ t ⑩ t ④ t ⑥ ② t ♣ ➍ ⑦ ✉ q ♣ r r q s ♦⑥③ ② q t ♣ ⑥ ♦ ♣ r q♣ ✉✇ ① ② ③ s ④q s t ♣ r ♦♣ ✉♦ ✇ ④ ♦ ❹ ③ ✉ s ♦ ✉ t ♣ t ⑥t ♣ ❹ ③ ② q ② t ❶ t ⑨ ➣ ♦ ❹ ♦✇ t ✈ t r ♦♣ ❶ t ♣ r ✉ ♦✇ ⑦ q ❹ t ✉ ② t ⑦t ⑥ ✉ ① ⑦ ♦✇ t♣ ④q ✉ t ♣ t ⑥t ♣ ✉ ♦✇ ⑩ t② t✈ ⑤♦ s t ⑥t♣ ➍ ⑦ ② t♣ ✉ t ♣ t ⑩ t ④t⑥ ✉ ♦ ⑦t ⑩ ❹ ♦ ✇ ⑩ t ④q ⑦ ② q q④① ⑦t ④q ⑨ ↔♦♣ ➐ r ♦ ♣ ✉♦✇ ④♦ ❹ ③ ✉ t ♣ ✉ t ✇ t ⑦t q ♣ t② t⑦ t ⑩ r ♦ ♣ ✈ ♦♣ ❶ t ♣ ② q ↕ ❺ ❻ ❼ ❽ ❽ ➙ ❻ ➛ ➜ ➙ ➝ ❺ ➜ ➝ ➞ ➜➟ ❺ ➠➡ ➙ ❻ ❺ ➜➝ ❾ ❷ ➈ ➂ ➃ ➢ ➙ ➤ ➥ ❼ ➝ ➢ ➜ ➡ ➟ ➠ ➡ ➙ ❻❺ ➜➝ ❼ ➦ ❺ ➧ ➝ ➛ ➜➨ ➜ ❻ ➙ ➡ ➦ ❾ ➣➣ ♥ ➅ ➂ ➃ ➩ ❽ ➫ ❻ ➛ ❼ ❻ ➜➙ ➝ -S transferase ❾ ↔ ❸ ➈ ➂ ➃ Blue Copper Binding Protein ➯ ➲ ➳ ➲➵ ➸ ➺ ➻ ➼ ➽➾➚ xide Dismutase ➯ ➪➶➹ ➵ ➸ Catalase ➘ ➴ ➷ Reticuline Oxygen Oxidoreductase ➬ ➴ ➷ ➮ ➘ ➱➱ ✃❐ ❒➴ ✃➱ ➘ ➴ ❮ ➱ ➮ ➴ ➷ ➘ ❰ Ï ➘ ➴ ➷ Ð❮ ➴ Ñ ➱ ➘ ❐ Ò ✃ ➱✃ ➯ ➪ ➷ ❐ Ó➘ Ô ➷ ➘ ➴ ➷ Õ➴❮ ➘ ➷ Ô❮ Ö × × Ø Ù Ú ➱Û Ü ➴ ❮ ➘ ✃ et al. Ö × × Ý ➵ Þ ß ➴ ➘ ➴ ➮ ➴ ➷ ➘ ❰ Ï ➸ ➪➴✃ ➴ à ➱ et al Þ ➯ ➭ á á â ➵ Ñ Ô❮ Ü ➴ ✃➱ ❒ Ï Ô➷ ➮ ➱✃❐ ❒ ➴✃➱ ➮ Ô ➷ almt Ö ➬ ➴ ➷ ➮ Ï Ô➷ ➬ ➴ ➷ ➘ ➱ aluminium-activated malate transporter Þ ß ➴ ➘ ➴ ã Ô Ï Ñ ➴ à ➴❰ ➮ Ô➷ Ò Ô➷ ➬ ➴ ➷ ➘ ➱ Õ➪ ä➸ ßÔ ❮ ❐ å ➱ ➘ ➴✃ Ô ➯ ß æÚ ➵ ➘ ➴ ➷ Õ➹ ß ➹➱ ✃✃❐ Û➱➴ ã ➱❐ ➷ ß ❮ ❐ ã Ô ➱ ➷ ➴ ✃ Ô ç ➷ Ü ➱Ñ ➱ ã❐ ❮ ✃ ➯ Õ➹ ç ➵ ã Ô ❒ ➴Ü ➘ ➱➱ ✃❐ ❒➴ ✃➱ ➯ æ è ➴ à ➱ et al Þ Ö × × é ➵ ➸ ✃Ô ➘ ➴ ➷ ➮ à ➴ ➷ Ò ➴ ➘ ➴ ã➴ ➷ ➴ Ï➴ ➷ à Ô➘ Ô❒➴➱ ➸ ➴ ➷ ã➴ ❮ ➴ ❒ ➴➱ ➷ ê ❮ ➴ ➮ Ï Ô ➷ ë ê ❮ ➴ ➮ Ï Ô➷ gmali Ö ➯ Glycine max aluminum induced ➵ ➸ gmali Ö â ➸ gmali â × ➘ ➴ ➷ gmali é á ➸ Ï➴ ✃➱ ➷ ➮ ë Ï➴✃ ➱ ➷ ➮ Ï Ô ➷ ➬ ➴ ➷ ➘ ➱ à ➴ ➷ ì í ë Ð äß ➴✃ Ô Ï Ô Ï Ñ ❮ ➴ ➷ Ò ❒ ➴✃Ï➴ ➸ Ò ❮ ❐ ã Ô➱ ➷ Ü ➱✃ ã❐ ➷ ì Ø ➸ îÐ➹ ì ë ➘ ÔÜ ➱ ➘ ❮ ❐ ➮ Ô➷ ➴ ✃ Ô ➘ ➴ ➷ Auxin- induced Protein ã Ô❒➴ Ü ➘ ➱➱ ✃❐ ❒ ➴ ✃➱ ❐ ❒ Ô Ü Ð ➷ Ó ➴❮ ➯ Ö × × × ➵ Þ ß ➴ ➘ ➴ ➮ ➴ ➷ ➘ ❰ Ï Û ï ß ä ð â Ö ➬ ➴ ➷ ➮ ã❐ ❒ Ô❮ ➴ ➷ ã Ô❮ Ü ➴ ➘ ➴ Ò Ð❒ ã Ô ❒ ➴Ü ➘ ➱ ➱ ✃❐ ❒ ➴ ✃➱ ➮ Ô➷ Ò Ô➷ ➬ ➴ ➷ ➘ ➱ Ò ❮ ❐ ã Ô ➱ ➷ ✃ Ò Ô✃➱ ê ➱ à Ñ Ô ❮ ❰ à ❰ ❮ ➴ ➷ é Ö à ➹➴ ➬ ➴ ➷ ➮ ã➱ ➘ ➴ à ➴ ➘ ➴ Ò ➴ ➘ ➴ à ❰ ❒ ã➱ ï ➴ ❮ ✃ Ô➷ ✃➱ ã➱ ê Ð ❒ ➯ ì ➴Ï ➱❒ ã❐ ➷ et al Þ ➭ á á Ö ➵ Þ ß ➴ ➘ ➴ Melastoma malabathricum ñ Þ ➮ Ô➷ ➬ ➴ ➷ ➮ ã Ô❮ ❒➱ Ñ ➴ã ➘ ➴❒➴Ï Û Ôà ➴Ï➴ ➷ ➴ ✃ ➴Ï ➘ ➴ ➷ Ð❒ ã➱ ➷ ➮ ➮ ➱ ➸ ➴ ➷ ã➴❮ ➴ ❒➴➱ ➷ ➮ Ô➷ Ò Ô➷ ➬ ➴ ➷ ➘ ➱ multidrug resistance associated protein ➯ ò Ú ß➵ ➯ ➪❰ Ü ➴❮ ✃❐ ➷ ❐ et al Þ ➭ á á Ý Ù ó ➱❮ ➘ ➴❰ ✃ ➭ á á ô ➵ ➸ metallothionein type ➭ ➯ Mt ➭ ➵ ➯ ➪❰ Ü ➴❮ ✃❐ ➷ ❐ et al Þ ➭ á á × ➵ ➸ ì í ë Ð äß ➴✃ Ô Ï Ô ÏÑ ❮ ➴ ➷ Ò ❒➴✃Ï➴ ➯ Mmpma ➵ ➯ ò ❰ è ❰ ➷ ➱ et al Þ ➭ á Ö á ➵ ➸ major facilitator superfamily ➯ Mamfs ➵ ➯ õ ➱ ➘ ➬ ➴ ❮ ã➱ ➷ ➱ ➭ á á ð ➵ ➸ ➘ ➴ ➷ ✃➱ ã❮ ➴ã ✃➱ ➷ ã➴ ✃ Ô ➯ Mmsc ➵ ➯ ò ❰ ✃Ü ❐ ê ➴ ➭ á Ö Ö ➵ ã Ô ❒➴Ü Ñ Ô ❮ Ü ➴ ✃ ➱ ❒ ➘ ➱➱✃❐ ❒➴✃➱ Þ ➪➴ ❒➴ Ü ✃➴ã ❰ ➮ Ô ➷ ➬ ➴ ➷ ➮ ã Ô❮ ❒ ➱Ñ ➴ ã ➘ ➴ ❒➴ Ï ã ❐ ❒ Ô ❮ ➴ ➷ ✃➱ ã ➴ ➷ ➴Ï➴ ➷ ã Ô❮ Ü ➴ ➘ ➴ Ò ã➴ ➷ ➴Ü ➴✃➴ Ï ➘ ➴ ➷ Ð❒ ã➱ ➷ ➮ ➮ ➱ ➴ ➘ ➴ ❒➴ Ü ➮ Ô➷ Ò Ô ➷ ➬ ➴ ➷ ➘ ➱ ì í ë Ð äß ➴ ✃ Ô Ï ÔÏÑ ❮ ➴ ➷ Ò ❒➴ ✃Ï➴ ➯ Ð ➷ Ó ➴❮ Ö × × × Ù ÐÜ ➷ et al Þ ➭ á á â ➵ Þ Õ Ô➷ ➱ ➷ ➱ Ñ Ô❮ ❰ à ❰ ❮ ➴ ➷ Ø é á á ë ➴ ➷ Ò Ñ ➘ ➴ ➷ Ï Ô ➷ ➬ ➴ ➷ ➘ ➱ à ➴ ➷ × é ô ➴✃➴ Ï ➴Ï➱ ➷ ❐ Þ ì í ë Ð äß ➴ ✃ Ô Ï Ô ÏÑ ❮ ➴ ➷ Ò ❒➴ ✃Ï➴ Ï Ô ❮ ❰ Ò ➴ à ➴ ➷ Ò ❮ ❐ ã Ô ➱ ➷ ➬ ➴ ➷ ➮ Ò ➴ ❒ ➱ ➷ ➮ Ï Ô❒➱ ÏÒ ➴Ü Ò ➴ ➘ ➴ Ï Ô Ï Ñ ❮ ➴ ➷ Ò ❒➴ ✃Ï➴ ➘ ➴ ➷ ã Ô ❮ ❒ ➱Ñ ➴ã ➘ ➴ ❒➴ Ï Ñ ➴ ➷ ➬ ➴ à ❮ Ô✃Ò ❐ ➷ ✃ Û Ô à ➴ Ï➴ ➷ Þ ß ❮ ❐ ã Ô➱ ➷ ➱ ➷ ➱ Ï Ô➷ ➮ ➴ à ã ➱ ï ➴✃➱ ✃ Ô❮ ➴ ➷ ➮ à ➴ ➱➴ ➷ ã❮ ➴ ➷ ✃Ò ❐ ❮ ã Ô❮ ✃ Ôà ❰ ➷ ➘ Ô❮ ➘ Ô ➷ ➮ ➴ ➷ Ï Ô ➷ ➮ Ü ➴✃➱ ❒ à ➴ ➷ proton motive force ➬ ➴ ➷ ➮ ➘ ➴ Ò ➴ã Ï Ô➷ ➮ ➮ Ô ❮ ➴ à à ➴ ➷ Ñ ➴ ➷ ➬ ➴ à ✃❐ ❒ ❰ ã ➸ ➴ ✃➱ Ï➱❒ ➴ã ➸ ➴ ã➴❰ Ï Ôã ➴Ñ ❐ ❒ ➱ã Ï Ô ❒ ➱ ➷ ã ➴✃➱ Ï Ô ÏÑ ❮ ➴ ➷ Ò ❒➴ ✃Ï➴ ➯ ➪❰ ✃✃Ï ➴ ➷ Ö × × â ➵ Þ ì í ë Ð ä ß ➴✃ Ô Ï Ô Ï Ñ ❮ ➴ ➷ Ò ❒➴ ✃Ï➴ ã Ô ❮ ❒ ➱Ñ ➴ã ➘ ➴ ❒➴ Ï ❮ Ô ➮ ❰ ❒➴ ✃➱ ❮ Ô✃Ò ❐ ➷ ✃ ã Ô❮ Ü ➴ ➘ ➴Ò Ñ Ô ❮ Ñ ➴ ➮ ➴➱ ❮ ➴ ➷ ➮ ✃➴ ➷ ➮ ➴ ➷ ❒ ➱ ➷ ➮ à ❰ ➷ ➮ ➴ ➷ ➸ ✃ ÔÒ Ô❮ ã ➱ Û Ôà ➴ Ï➴ ➷ Ð❒ ➯ Ð➷ Ó ➴ ❮ Ö × × × Ù ÐÜ ➷ ➭ á á â ➵ ➸ Û Ô à ➴ Ï➴ ➷ î➴ ➳❒ ➯ î➱❰ et al Þ Ö × × ô ➵ ➸ ➘ Ô ê ➱✃➱ Ô➷ ✃➱ ê ❐ ✃ ê ➴ã ➯ ö ➴ ➷ et al Þ ➭ á á ➭ ➵ ➸ ➘ ➴ ➷ Û Ôà ➴ Ï➴ ➷ ➴ ÏÏ❐ ➷ ➱❰ Ï ➯ ÷ Ô❮ ➷ Ô ø Û ù ñ Ô ➮ ➱✃➴ ➭ á á Ö ➵ Þ ➪ Ô❒➴ ➱ ➷ ➱ ã❰ ➸ ì í ë Ð äß ➴ ✃ Ô Ï ÔÏÑ ❮ ➴ ➷ Ò ❒ ➴✃Ï➴ ø ❰ ➮ ➴ ã Ô ❮ ❒ ➱Ñ ➴ã ➘ ➴❒➴ Ï Ò ÔÏ➴ ➷ ø ➴ ➷ ➮ ➴ ➷ ✃ Ô❒ ➬ ➴ ➷ ➮ ➘ ➱ ê ➴✃➱ ❒ ➱ã➴ ✃➱ ❐ ❒ Ô Ü ➴ ❰ à ✃➱ ➷ ✃ Ô ❒ ➴Ï➴ Ò Ô❮ à ÔÏÑ ➴ ➷ ➮ ➴ ➷ Ô Ï Ñ ❮ ➱ ❐ ➮ ➴ ➷ ➘ ❰ Ï ➯ Ú ❐ Ñ Ô❮ ë ú ❒ ÔÑ Ô❮ et al Þ ➭ á á Ø ➵ ➸ ➘ ➴ ➷ ã Ô❮ ❒ ➱Ñ ➴ ã Ò ❰ ❒ ➴ ➘ ➴❒ ➴Ï Ü ❐ Ï Ô❐ ✃ã ➴✃➱ ✃ Ò ì ✃➱ã ❐ Ò ❒ ➴✃Ï➴ ã➴ ➷ ➴Ï➴ ➷ ➯ ö ❐ ❰ ➷ ➮ et al Þ Ö × × Ý ➵ Þ üýþ ýÿýþ ✁✂ ✄ ☎ ✆ ✝ ✞ ✟☎ ✟ ✠ ✡ ✂ ☛ ☎✂ ☞ ✂ ✌ ý þ ✍ ✎ ✏ ✑✒ ý þ ✓ ✔ ✕ ✒ ÿý ✓ ✏ ✎ ✖þ ✍ ýþ ✍ ✖ þ ✗ ✘ ✙ ✚ ü ✛ ý ✓ ✖ ÿ ✖ÿ✜ ✒ ý þ ✢ ✣ý✓ ÿý ✤ ✚✗✚ û ✥ ✎ ý✢ ý ✑ ÿ✖ ÿ✢ ✖ ✒ ✜ ý ✏ ✦ ✏ ✢ ✖✒ ✑✧ ÿ ✜ ✧ ★ ý þ ✢ ý✎ ý ✢ ✗ ✒ ✖þ ✎ ý ★ ✓ ✖✣ ýÿ ý ✢ ✖ ✒ ✦ ✖ÿ ✜ ýþ ✍ ý þ ✦ ✖✩ ý ÿ✜ ý★ ✤ ✪ ✕ ✧ þ ✍ ✫✠ ✂ ☛ ✬ ✭ ✮ ✮ ✯ ✥ ✬ ✚✗✚ û ÿ✖ ✒ ✧ ✢ ý✦ ý þ ✍ ✖þ ✌ ýþ ✍ ✑✖✒ ✖✦ ✓ ✢ ✒ ✖✓✏ ✢ ý ✎ ý ✓ ✖✣✙ ✓ ✖ ✣ ✦ ✕ ÿ ✢ ýþ ✏ ✕ þ ✔ ✣ ✕ ✖ ÿ ✰ ✌ ý ✏ ✑ ✧ ✎ ý ✖ ✒ ý ★ ✌ ýþ ✍ ✜ ✖✒ ✑ýþ ✍ ✍ ✧ þ ✍ ✱ ý✲ý ✜ ✎ ý ✣ýÿ ✢ ✖ þ ✍ ýþ ✍ ✦ ✧ ✑ýþ ✱ ý✒ ý✦ ✱ ý ✧ ★ ✎ ý ✒ ✏ ✍ ✧ ✣ ý ✰ ★ ý✒ ý ✎ ý þ ★ ✕ ✒ ÿ✕ þ ✬ ✳ ✣✕ ✖ÿ ÿ ✖ÿ✢ ✧ þ ✌ ý✏ ✢ ✗ ✯ ✰ ✴ ý ✑ý✧ ✣ ✖✜ ✏ ★ ✓ ✖★ ✏þ ✍ ✍ ý ✣✖✜ ✏ ★ ✓ ✖þ ✓✏ ✑✏ ✔ ✑✖✒ ★ ý ✎ ý ✢ ✢ ✗ ✒ ✖þ ✎ ý ★ ✰ ✓ ✖★ ✏ þ ✍ ✍ ý ✎ ý ✖ ✒ ý ★ ✏þ ✏ ÿ✖ ✒ ✧ ✢ ý ✦ ýþ ✑ý✒ ✍ ✖ ✑ ✧ ✑ ýÿ ý ✢ ✗ ✒ ✖þ ✎ ý ★ ✬ ✵ ✦ ✓ ✢ ✒ ✖ ✓✏ ✍ ✖ þ ✚✗✚ û ÿ✖ þ ✍ ★ ý✓✏ ✣ ✦ ý þ ✖þ ✶ ✏ ÿ ✌ ý þ ✍ ✎ ý ✢ ý✑ ÿ✖ÿ ✕ ÿ ✢ ý ✗ ✘ ✦ ✖✣✧ ý✒ ✓ ✖✣ ✓ ✖★ ✏ þ ✍ ✍ ý ✢ ✗ ✎ ý ✢ ý✑ ✎ ✏ ✢ ✖ ✒ ✑ý ★ ý þ ✦ ýþ ✢ ý✎ ý ✦ ✕ þ ✎ ✏✓✏ ✜ ý ✓ ý✬ ✛ ✖þ ✍ ýÿ ý✑ýþ ✑✖✒ ✓ ✖✜ ✧ ✑ ÿ✖ þ ✧ þ ✱ ✧ ✦ ✦ ýþ ✢ ✖✒ ý þ ý þ ✗ ✘ ✙ ✚ ü ✛ ý ✓ ✖ ÿ✖ÿ ✜ ✒ ýþ ✢ ✣ý✓ ÿý ✎ ý✣ ýÿ ★ ✕ ÿ✖✕ ✓ ✑ ý ✓✏ ✓ ✢ ✗ ✓✏ ✑ ✕ ✢ ✣ý ✓ ÿý ✑ýþ ýÿýþ ✤ ✪✕ ✧ þ ✍ ✫ ✠ ✂ ☛ ✬ ✭ ✮ ✮ ✯ ✥ ✬ ü ✧ ÿ✜ ✧ ★ ý þ ✷ . ✸ ✂ ☛ ✂ ✄ ✂ ✠ ✡ ✁ ☎ ✹ ✺ ✸ ✻ ✬ ✌ ýþ ✍ ✎ ✏ ✑ ✖ÿ✧ ✦ ýþ ✑ ✖ ✒ ✧ ✑ý ÿý ✎ ✏ ✎ ý ✖ ✒ ý ★ ✑✒ ✕ ✢ ✏ ✓ ✎ ✏ ✎ ✧ ✍ ý ÿ ✖ÿ ✢ ✧ þ ✌ ý✏ ✓ ✏✓ ✑ ✖ÿ ✎ ✖✑ ✕ ✦ ✓✏ ✔ ✏ ✦ ý✓✏ ✚ ✣ ✓ ✖★ ✏þ ✍ ✍ ý ✎ ý ✢ ý✑ ✎ ✏✍ ✧ þ ý✦ ýþ ✓ ✖ ✜ ý ✍ ý ✏ ✓✧ ÿ ✜ ✖ ✒ ✍ ✖ þ ✧ þ ✑ ✧ ✦ ✑✕ ✣✖✒ ý þ ✓✏ ✑ýþ ý ÿýþ ✑ ✖ ✒ ★ ý✎ ý ✢ ✑ ý þ ý★ ý✓ ýÿ ✎ ýþ ✚ ✣ ✑✏þ ✍ ✍ ✏✬ ü ✧ ÿ✜ ✧ ★ ýþ ✑ ✖ ✒ ✓ ✖ ✜ ✧ ✑ ✎ ý ✢ ý ✑ ✑✧ ÿ ✜ ✧ ★ ✎ ✖þ ✍ ýþ ✜ ý ✏ ✦ ✢ ý✎ ý ✑ ý þ ý ★ ý ✓ ý ÿ ✓ ✖ ★ ✏ þ ✍ ✍ ý ÿ✖þ ✱ ý✎ ✏ ✏þ ✎ ✏✦ ý✑ ✕ ✒ ✑ýþ ý ★ ý ✓ ý ÿ ✰ ✎ ý þ ✎ ý ✢ ý ✑ ÿ✖þ ✍ ý ✦ ✧ ÿ ✧ ✣ý✓✏ ý ✣✧ ÿ✏þ ✏✧ ÿ ✎ ý✣ý ÿ ✱ ✧ ÿ✣ ý★ ✑✏þ ✍ ✍ ✏ ✎ ✏ ✎ ý✧ þ ✎ ý þ ý ✦ ý✒ ✓ ✖ ★ ✏þ ✍ ✍ ý ✎ ✏✓ ✖✜ ✧ ✑ ✓ ✖ ✜ ý✍ ý✏ ★ ✏ ✢ ✖ ✒ ý✦ ✧ ÿ ✧ ✣ý ✑✕ ✒ ✚ ✣ ✤ ✼ ý ✑ý þ ý ✜ ✖ ✽ ✾✓ ý ✦ ✏ ✿ ✴ ✴ ✿ ý✥ ✬ ✛ ý✎ ý ✢ ✗ ❀ ✬ ✴ ✰ ✢ ✖ ✒ ✑ ✧ ÿ✜ ✧ ★ ýþ ý ✦ ý ✒ ✷ . ✸ ✂ ☛✂ ✄ ✂ ✠ ✡ ✁ ☎ ✹ ✺ ✸ ✻ ✬ ✑ ✏ ✎ ý ✦ ✑✖✒ ✍ ýþ ✍ ✍ ✧ ✰ ✦ ✖ ✩✧ ý ✣ ✏ ✢ ý✎ ý ✢ ✗ û ✬ ✴ ✌ ýþ ✍ ★ ýþ ✌ ý ý✎ ý ✎ ✏ ✣ý ✜ ✕ ✒ ý ✑✕ ✒ ✏✧ ÿ ✤ ❁ ✧ ★ ý✖ ÿ ✏ þ ✿ ✴ ✴ ✯ ✥ ✬ ❁ ✖þ ✧ ✒ ✧ ✑ ✼ ý✑ýþ ý ✜ ✖ ✫✠ ✂ ☛✬ ✤ ✭ ✮ ✮ ✯ ý ✥ ✰ ✷ . ✸ ✂ ☛✂ ✄ ✂ ✠ ✡ ✁ ☎ ✹ ✺ ✸ ✻ ✬ ÿýÿ ✢ ✧ ÿ✖ þ ✍ ý ✦ ✧ ÿ ✧ ✣ý✓✏ ✣ ✖✜ ✏ ★ ✎ ý ✒ ✏ ✭ ❀ ✬ ❀ ✍ ✚ ✣ ❂ ✦ ✍ ✎ ý✧ þ ✑✧ ý ✎ ýþ ✣✖✜ ✏ ★ ✎ ý ✒ ✏ ✯ ✍ ✚ ✣ ❂ ✦ ✍ ✎ ý ✧ þ ÿ ✧ ✎ ý ✑ ý þ ✢ ý ÿ✖ þ ✍ ý✣ ýÿ ✏ ✦ ✖✒ ý✩✧ þ ý þ ✬ ✚þ ý✣✏ ✓✏✓ ý ✦ ✧ ÿ ✧ ✣ý✓✏ ✚ ✣ ✢ ý ✎ ý ✷ ✫ ☛ ✂ ✟ ✠✝ ✸ ✂ ✂ ❃❃ ☎ ☞ ✫ ❄ ✬ ❄ ✕ þ ✬ ✤ ✓✏þ ✕ þ ✏ ÿ ✎ ✖þ ✍ ý þ ✷ ✫ ☛ ✂ ✟ ✠✝ ✸ ✂ ✸ ✂ ☛✂ ✄ ✂ ✠ ✡ ✁ ☎ ✹ ✺ ✸ ✻ ✬ ✥ ✌ ý þ ✍ ÿ✖þ ✎ ý ✢ ý ✑ ✩ ✖ ✦ ý ÿý þ û ✬ ✿ ÿ ❁ ✚ ✣ ✢ ý✎ ý ✢ ✗ ❀ ✎ ý✣ ýÿ ÿ ✖✎ ✏ ý ✩ ý✏✒ ÿ✖þ ✧ þ ✱✧ ✦ ✦ ý þ ✜ ý★ ✲ý ✷ . ✂ ❃ ❃ ☎☞ ✫ ❄ ✬ ❄ ✕ þ ✬ ÿýÿ ✢ ✧ ÿ✖ þ ✍ ý ✦ ✧ ÿ ✧ ✣ý✓✏ ✯ ✬ ✯ ✭ ✍ ✚ ✣ ❂ ✦ ✍ ✎ ý✧ þ ✑✧ ý ✓ ✖✑ ✖✣ý ★ ✿ ✜ ✧ ✣ýþ ✢ ✖ ✒ ✣ý✦ ✧ ýþ ✤ ❁ ✧ ✑✏ ý✓ ý ✒ ✏ ✿ ✴ ✴ ✯ ✥ ✬ ❅ ✖✜ ✖ ✒ ý ✢ ý ✦ ý ✱✏ ýþ ✑✖þ ✑ýþ ✍ ✖✦ ✕ ✔ ✏✓✏ ✕ ✣✕ ✍ ✏ ý ✎ ý ✢ ✑ý ✓ ✏ ❁ ✖✣ ý ✓ ✑ ✕ ÿý ✢ ý ✎ ý ✑ýþ ý ★ ý✓ ý ÿ ✎ ✖þ ✍ ýþ ✦ ✖✣ ý ✒ ✧ ✑ýþ ✚ ✣ ✌ ý þ ✍ ✑ ✏ þ ✍ ✍ ✏ ✑ ✖✣ ý ★ ✎ ✏ ✣ ý ✦ ✧ ✦ ýþ ✕ ✣✖ ★ ✾✓ ý✦ ✏ ✫ ✠ ✂ ☛✬ ✤ ✭ ✮ ✮ ✯ ✥ ✎ ý þ ✼ ý✑ ý þ ý✜ ✖ ✽ ✾ ✓ ý ✦ ✏ ✤ ✿ ✴ ✴ ✿ ý✥ ✰ ✓✖ ✎ ý þ ✍ ✦ ý þ ✦ ý ✱ ✏ ý þ ✓ ✖ ✩ ý ✒ ý ÿ✕ ✣✖ ✦ ✧ ✣✖ ✒ ✑✖ ✣ý★ ✎ ✏ ✣ý ✦ ✧ ✦ ý þ ✕ ✣✖ ★ ❁ ✧ ✓ ★ ✕ ✔ ý ✤ ✿ ✴ ✭ ✭ ✥ ✰ ❁ ✧ ✶ ✧ þ ✏ ✫ ✠ ✂ ☛✬ ✤ ✿ ✴ ✭ ✴ ✥ ✰ ❆ ✧ ★ ý ✒ ✓✕ þ ✕ ✫ ✠ ✂ ☛✬ ✤ ✿ ✴ ✴ ✯ ❇ ✿ ✴ ✴ ✮ ✥ ✰ ✼ ✏ ✎ ✌ ý ✒ ✑✏þ ✏ ✤ ✿ ✴ ✴ ❈ ✥ ✰ ✎ ýþ ✳ ✏✒ ✎ ý ✧ ✓ ✤ ✿ ✴ ✴ ❉ ✥ ✎ ✖ þ ✍ ý þ ÿ✖ þ ✍ ✏✓ ✕ ✣ ý ✓✏ ✍ ✖ þ ✙ ✍ ✖ þ ✌ ý þ ✍ ✑✖ ✒ ✣ ✏ ✜ ý✑ ✎ ý✣ ýÿ ✑ ✕ ✣✖ ✒ ý þ ✓ ✏ ❁ ✖✣ý✓✑ ✕ ÿý ✎ ý ✒ ✏ ✩ ✖ ✦ ý ÿý þ ✚✣ ✎ ý þ ✑ý þ ý★ ý ✓ ýÿ ✬ ❅ ✖ ✜ ✖✒ ý ✢ ý ÿ✖ ✑✕ ✎ ✖ ✌ ýþ ✍ ❋ ●❍ ●■ ❋ ❏ ❑ ●▲ ▼ ▲ ●◆ ▼ ◆ ■▼ ▲ ❖P ❑● ▲ ▼ ▲ ●◆ ❏ ◗❘ ❑● ◗ ❏ ❙ P ◆ ● ◆ ■ ●❚ ● ❑●❏◆ ❋ P◆ ❙ ● ◆ ❖ P ❑● ▲ ▼ ▲ ● ◆ ❍ P ◆ ● ❍ ❏ ◗●◆ ■ P ❚ ❯ ●❋ ●❍ ❍ ▼ ◗■ ●▲ ● ❙ P ◆ ❘ ❖ ❋ ● ◆ ❍ ▼ ◗■● ▲ ● ❱❲❳❨❩ ❬ ❭❪ ❫❴❬ ❵ ❛ ❜❝ ❜❞❡ ❜ ❢ ❞ ❣ ❤ ❡ ✐ ❞❥❦ ❧ ❥♠ ❤ -Polymerase Chain Reaction ♥ ❩ ❋ ● ◆ ❬❨❴ ♦ ❵ Rapid Amplification cDNA Ends ♥ ♣ ❬❨❴ ♦ ● ❋ ●❑ ● ❯ ◗❏◆ ■ P ◗ ❏ ◗ ❱❲ ❳❨ ❋ P ◆ ❙ ●◆ ❖ P ◆ ❙ ❙ ▼ ◆ ● ▲ ●◆ ❖❬❳❨ ◗P q ● ❙ ●❏ ❱ P ■● ▲ ●◆ ❋ ●◆ ◗ P ▲ ▼ P◆ ❏ ◆ ■P ❚ ◆ ●❑ r ●◆ ❙ ◗▼ ❋ ●❯ ❋ ❏ ▲ P ■●❯ ▼ ❏ ▼ ❚ ▼ ■●◆ ◆ ▼ ▲ ❑ P ❘ ■❏❋ ●◆ r ● ◗P ❚ ■● ● ❋ ● ❍ ■P ❚ ❍ ●❋ ● ▼ s ▼ ◆ ❙ t ✉ ●■ ● ▼ ✈ ✉ ◗ P q ●❙ ●❏ ❍ ❚ ❏ ❖P ❚ ♣ ❬ ❳❨❏ ◗●◆ ❙ ● ■ q P ❚ ❖●◆ ✇ ● ●■ ▼ ◆ ■▼ ▲ ❖ P ❖❍ P ❑● s ● ❚ ❏ ✇ ▼ ◆ ❙ ◗ ❏ ◗ ▼ ● ■ ▼ ❙ P ◆ ♣ ❬ ❳❨❏ ❖ P◆ r P q ● q ▲ ● ◆ ❖ ❬ ❳❨ ■P ❚ ❋ P❙ ❚ ● ❋ ● ◗ ❏ ◗ P❯ ❏◆ ❙ ❙ ● ❙ P ◆ ❖ P◆ s ● ❋ ❏ ■❏❋ ● ▲ q P ❚ ✇ ▼ ◆ ❙ ◗ ❏ ♣ ❫ ●❋ ● ❍ P ◆ P ❑ ❏ ■ ❏ ● ◆ ❏◆ ❏ ❩ ▲ ●❖ ❏ ■ P ❑●❯ ❖ P ❑ ●▲ ▼ ▲ ●◆ ❏ ◗❘ ❑●◗❏ ❋ ● ◆ ❍ P ◆ ❙ ▲ ❑❘ ◆ ● ◆ ❙ P◆ ❍ P◆ r ● ◆ ❋ ❏ ① ② ❪ ❨ ❭ ❫ ● ◗ P ❖P ❖ q ❚ ● ◆ ❍ ❑● ◗❖● ❋ ● ❚ ❏ M. malabathricum ❖ P ❑ ●❑▼ ❏ ❬ ❭ ❪ ❫❴ ❬ ❋ ●◆ ❖P ■❘ ❋ P ❬❨❴ ♦ ◗ P ❚ ■● ▲ ❘ ◆ ◗■❚ ▼ ▲ ◗ ❏ ③ P ▲ ■ ❘ ❚ ▼ ◆ ■▼ ▲ P ▲ ◗ ❍ ❚ ●◗❏ ❬ ❳❨ ❏ ❋ ●◆ ■ ❚ ● ◆ ◗ ✇ ❘ ❚ ❖ ●◗ ❏ Melastoma malabathricum ④ ♣ ❋ P ◆ ❙ ● ◆ ❬ ❳❨ ❏ ▼ ◆ ■▼ ▲ ❖ P ❖ ❍ P ❑ ● s ●❚ ❏ ❍ P ❚ ● ◆ ● ◆ ❙ P ◆ ■ P ❚ ◗P q ▼ ■ ❋ ●❑ ●❖ ■ ❘ ❑P ❚ ●◆ ◗ ❏ ■●◆ ● ❖●◆ ❋ ●❚ ❏ ❱P ▲ ● ❖● ◆ ❨ ❑ ❋ ●◆ ❚ P ◆ ❋ ●❯ ❍ ① ♣ ⑤ ⑥⑦ ⑥ ⑧ ⑨ ⑩ ❶⑨ ❶❷❸ ❹ ❸ ⑧ ⑨ ❫P ◆ P ❑ ❏ ■❏ ● ◆ ❏ ◆ ❏ q P ❚ ■ ▼ s ▼ ●◆ ❺ ❻ ♣ ❼P◆ ❙ ❏ ◗❘ ❑ ●◗ ❏ ❋ ● ◆ ❖ P◆ ❙ ▲ ❑ ❘ ◆ ✇ ❚ ●❙ ❖ P ◆ ❙ P ◆ ❍ P◆ r ● ◆ ❋ ❏ ① ② ❪ ❨ ❭ ❫ ● ◗ P ❖P ❖ q ❚ ● ◆ ❍ ❑● ◗❖● ❋ ● ❚ ❏ M. malabathricum ④ ♣ ❽ ♣ ❼P◆ ❙ ❏ ◗❘ ❑ ●◗ ❏ ❋ ●◆ ❖ P ◆ ❙ ▲ ❑❘ ◆ ❙ P◆ ❍ P ◆ r ●◆ ❋ ❏ ① ② ❪ ❨ ❭ ❫ ● ◗ P ❖ P ❖ q ❚ ● ◆ ❍ ❑ ●◗❖● ❵ Mmpma ♥ ▼ ■▼ ❯ ❋ ●❚ ❏ M. malabathricum ④ ♣ t ♣ ❼P ❖❍ P ❑● s ● ❚ ❏ ❍ P ❚ ●◆ ● ◆ ❙ P◆ Mmpma ❖ P ❑ ● ❑ ▼ ❏ ▲ ❘ ◆ ◗■ ❚ ▼ ▲ ◗ ❏ ③ P ▲ ■ ❘ ❚ P ▲ ◗❍ ❚ P ◗ ❏ ▼ ◆ ■ ▼ ▲ ❬ ❳ ❨❏ q P ❚ ❋ ●◗● ❚ ▲ ●◆ t ✉ ❾ ❭ ❬ ❙ P ◆ ❍ P◆ r ● ◆ ❋ ❏ ① ② ❪ ❨❭❫ ●◗ P ❖ P ❖ q ❚ ●◆ ❍ ❑● ◗❖● ❋ ● ❚ ❏ M. malabathricum ④ ♣ ❊ ♣ ❼P ❑ ●▲ ▼ ▲ ●◆ ■ ❚ ● ◆ ◗ ✇ ❘ ❚ ❖ ●◗ ❏ ■ ● ◆ ●❖ ● ◆ M. malabathricum ④ ♣ ❋ P ◆ ❙ ●◆ ❙ P◆ ❍ P ◆ r ●◆ ❋ ❏ ❬ ❳ ❨❏ Mmpma ❖ P ❑● ❑ ▼ ❏ Agrobacterium tumefaciens ♦ ① ❨❻ ❿ ❻ ♣ ➀ ❹ ➁⑧ ❹ ❶➂ ❸ ⑩ ❶ ⑨ ❶ ❷ ❸ ❹ ❸⑧ ⑨ ➃ ■ ❚ ● ■ P ❙ ❏ r ● ◆ ❙ ❋ ❏ ❙ ▼ ◆ ●▲ ●◆ ▼ ◆ ■ ▼ ▲ ❖ P ◆ ❱ ● ❍ ● ❏ ■ ▼ s ▼ ●◆ ●❋ ●❑ ● ❯ ❖ P ❖ q ●❙ ❏ ❍ P ◆ P ❑❏ ■❏ ● ◆ ❖ P ◆ s ●❋ ❏ t ❵ ■❏❙ ●♥ ● ◗ ❍ P ▲ ▲ ● s ❏ ● ◆ ❵ ➄ ●❖ q ● ❚ ❻ ♥ ❩ r ●❏ ■▼ ❺ ❻ ♣ ➅ ◗❘ ❑● ◗ ❏ ❋ ● ◆ ❍ P◆ ❙ ▲ ❑ ❘ ◆ ●◆ q ●❙ ❏ ● ◆ ■ P ◆ ❙ ●❯ ❙ P◆ ❍ P◆ r ●◆ ❋ ❏ ① ② ❪ ❨ ❭ ❫ ● ◗ P ❖ P ❖ q ❚ ● ◆ ❍ ❑● ◗❖● ❋ ● ❚ ❏ Melastoma malabathricum ④ ♣ ①●❑ ❏◆ ❏ ❋ ❏ ❑ ●▲ ▼ ▲ ●◆ ▼ ◆ ■▼ ▲ ❖P◆ ❋ P ◗●❏◆ ❍ ❚ ❏ ❖ P ❚ ◗ ❍ P ◗❏ ✇ ❏ ▲ ●❙ ● ❚ ❖ P ◆ ❋ ●❍ ● ■▲ ● ◆ q ●❙ ❏ ● ◆ ▼ s ▼ ◆ ❙ ✈ ✉ ❋ ● ◆ t ✉ ❙ P ◆ ◗ P❯ ❏ ◆ ❙ ❙ ● ❋ ❏❍ P ❚ ❘ ❑ P ❯ ❙ P ◆ Mmpma ♣ ➇ ➈ ➉ ➊➋ ➌ ➍➊➎ ➏ ➍➐ ➑ ➒➐ ➓ ➔ ➌➋ ➐ ➍ ➐ ➓ ➒ ➐ ➑ ➒ ➐ → ➍ ➐ ➏ ➎ ➣ ↔ ↕ ➙➛➜ ➍ ➊ ➒ ➝ ➒➝ ➞ ➟ ➍➐ ➑ ➌ ➍➊➝ ➍ ➏ ➍➟ ➎ ➠ . ➡➢ ➤➢ ➥ ➢ ➦➧ ➨➩ ➫➭ ➡ ➯ ➈ ➲ ➠➡➳ ➡➢ ➵ ➞ ➒ ➟ ➏ ➍ ➊ ➍➟ ➔ ➍➐ ➸ ➟ ➍➓ ➝ ➒ ➐ ➞ ➍➓ ➎ ➍ ➐ ➺ ➒ ➐ ➓ ➍➻ ➺➒ ➟ ➊ ➒ ➞ ➼ ➺ ➈ ➽ ➈ ➾➋ ➐ ➊ ➺➟ ➼ ➔ ➊➎ ➚ ➪➙ ➎ ➏ ➍ ➟ ➎ ➸ ➟ ➍➓ ➝ ➒ ➐ ➽ ➶ ➹➛ ➚ ➓ ➒ ➐ ➠ ➡➳ ➡➢ ➼ ➐ ➺➼ ➔ ➝ ➒ ➝ ➑ ➒➌ ➍➘ ➍➟ ➎ ➑ ➒ ➟ ➍ ➐ ➍➐ ➓ ➒ ➐ ➺➒➟ ➊ ➒➞ ➼ ➺➈ ➴ ➷ ➬➮ ➷ ➷ ➱ ✃❐➬ ❐❒❮ ➱ ❮ ➷ ➬ ➜ ➒➐ ➒➌➎ ➺➎ ➍ ➐ ➎ ➐ ➎ ➞ ➒➟ ➝ ➍ ➐ ➸ ➍➍ ➺ ➼ ➐ ➺ ➼ ➔ ❰ Ï ➈ Ð ➒ ➝ ➑ ➒➌ ➍ ➘➍➟ ➎ ➺ ➋ ➌ ➒➟ ➍ ➐ ➊➎ ➺ ➍ ➐ ➍ ➝ ➍ ➐ ➺➒➟ ➻ ➍ ➏ ➍➑ ➔ ➒➟ ➍ Ñ ➼ ➐ ➍ ➐ ➍ ➌ ➼ ➝➎➐ ➎ ➼ ➝ ➈ ➇ ➈ ➜ ➒ ➟ ➞ ➍ ➎ ➔ ➍ ➐ ➓ ➒ ➐ ➒➺➎ ➔ ➺➍➐ ➍ ➝ ➍➐ ➏ ➒➐ ➓ ➍➐ ➝ ➒ ➟ ➍➔ ➎ ➺ ➺➍➐ ➍ ➝ ➍ ➐ → ➍ ➐ ➓ ➺ ➋ ➌ ➒ ➟ ➍ ➐ ➺ ➒ ➟ ➻ ➍ ➏ ➍ ➑ Ñ ➒ ➔ ➍ ➝ ➍➐ ➍ ➌➼ ➝➎➐ ➎➼ ➝ ➝ ➒ ➌ ➍ ➌ ➼ ➎ ➑ ➒ ➐ ➏ ➒ ➔ ➍ ➺➍ ➐ ➺➒ ➔ ➐ ➋ ➌ ➋ ➓ ➎ Ò ➪➙ ➟ ➒ ➔ ➋ ➝ ➞ ➎ ➐ ➍➐ ➈ ÓÔ Õ Ö Ô × Ø Ù ÚÛÔ Ü × Ô Õ Ô Ý Û × Þ ß ×àá Ö ÔÔ â Ûãá Ý ÔãÛ ä Þ ß â Ü å Ý á â Ô â ä æ Ô â å á â ã ç × è å ãÛ éê ëÛ Ü ß â Þ ß â ì Ô â æ Û í î ï ë ð ñ Ô ãß Õ ß Õ Ö ×Ô â Þ ÝÔã Õ Ô æ Ô ×Û òó ôõ ö÷ø ù õ ù õ ôõ ú õ ÷ û üý þÿ ù Ù é ë ✁✂ ä ✄ õ ☎ ý✆ õ ù☎ ô ý ✝ ý þ õ ÷ ý ø ✞ þ✟✠ ✡ ó ✞ ✆ ö☛ ☞ ✌✍ð éä ☞ ✌ ÿ ✞ ÷ ü õ ✞ öôõ ÷ ó ✆ ü ó✎ ý ø ✞ ☛ éê ëÛ ä ✄ ✠ ✡ ý ✞ ÷ ó ü ✝ ó üó ✞ þó Ù Disain primer spesifik PM H + -ATPase bagian tengah PM H + -ATPase bagian ujung 5’ 3’RACE Konstruksi RNAi Pembentukan cDNA melalui transkripsi balik Isolasi RNA total PCR dengan primer spesifik Disain primer spesifik untuk isolasi ujung 5’ Disain primer spesifik untuk isolasi ujung 3’ PM H + -ATPase bagian ujung 3’ PM H + -ATPase Full Length 3’UTR Transformasi pada Melastoma Uji toleransi tanaman terhadap cekaman aluminium ✏ ✑✒ ✓✔ ✕✖ ✖ ✗ ✘ ✏ ✑✒ ✓✔ ✕✖ ✖ ✗ ✘ ✘ ✏ ✑✒ ✓✔ ✕✖ ✖ ✗ ✘✘ ✘ TINJAUAN PUSTAKA Toksisitas Aluminium Aluminium merupakan logam yang mempunyai kelimpahan tinggi ketiga di kulit bumi Orvig 1993. Secara normal, aluminium Al berada dalam bentuk oksida dan kompleks aluminosilikat yang tidak larut dan tidak toksik. Aluminium mempunyai muatan ionik tinggi dan radius ionik rendah, dengan rasio muatan terhadap radius zr sebesar 5.9 sehingga Al dapat mempolarisasi molekul air. Aluminium membentuk ikatan koordinasi dengan enam molekul air dalam konfigurasi oktahedral. Derajat polarisasi ikatan O-H yang tinggi dapat dihasilkan tergantung pada pH media, melalui disosiasi satu atau lebih proton: AlH 2 O 6 3+  AlH 2 O 5 2+ + H + Aluminium selanjutnya mengalami seri hidrolisis yang tergantung pH Orvig 1993. Bentuk Al tersebut sering disingkat menjadi Al 3+ atau AlOH n 3-n . Pada pH netral, Al membentuk kompleks dengan ion hidroksida, AlOH 3 , yang tidak larut, sedangkan pada pH asam, Al berada dalam bentuk Al 3+ yang merupakan bentuk Al yang paling toksik. Pada larutan dengan pH yang lebih rendah dari 5.0, ion Al berada dalam bentuk oktahedral heksahidrat, AlH 2 O 6 3+ , sering disingkat dengan Al 3+ . Pada larutan yang keasamannya berkurang, AlH 2 O 6 3+ mengalami deprotonasi menjadi AlOH 2+ dan AlOH 2 + . Pada larutan netral menyebabkan AlOH 3 mengendap dan larut kembali pada larutan basa dengan membentuk formasi tetrahedral, AlOH 4 - Delhaize Ryan 1995; Marschner 1995. Pada kondisi rasio Al 3+ OH - tinggi, spesies polinuklear seperti polikation tridekamerik, Al 13 , terbentuk dari AlOH 2+ Parker Bertsch 1992. Spesies kimia Al yang toksik adalah Al 3+ dan mononuklear hidroksida, AlOH 2+ dan AlOH 2 + Kinraide 1991. Beberapa studi telah menunjukkan bahwa polikation tridekamerik, Al 13 , merupakan spesies Al yang juga mempunyai toksisitas tinggi. Aluminium merupakan kation reaktif tinggi dengan rasio ionik terhadap karakter kovalen yang tinggi. Oleh karena itu, Al akan berikatan dengan gugus donor yang bermuatan negatif. Fluorida, anion yang paling elektronegatif, merupakan ligan monodentat yang disukai. Akan tetapi, Al lebih cenderung mengikat ligan yang mengandung oksigen, seperti –COOH karboksil, –OH hidroksil, –CO karbonil, dan –PO 3 fosfat Orvig 1993. Amina biasanya juga merupakan pengikat Al penting, antara lain pada bagian ligan multidentat seperti nitrilotriacetic acid NTA dan ethylendiaminetetraacetic acid EDTA. Ukuran kation merupakan faktor yang paling penting dalam substitusi ion logam Williams, 2002. Ukuran ion Al r = 0,054 nm hampir sama dengan ukuran ion Mg 2+ r = 0,072 nm dan Fe 3+ r = 0,065 nm. Aluminium dapat mengikat nukleosida trifosfat dengan tingkat asosiasi 10 7 kali dibandingkan dengan Mg 2+ . Disamping itu, Al juga lebih kompetitif dalam pembentukan kompleks dengan ligan-ligan kecil. Al mempunyai kecepatan pertukaran yang rendah untuk masuk dan keluar lingkaran koordinasinya Orvig 1993. Kecepatan pertukaran ligan untuk Al adalah 1,3 per detik, 10 5 kali lebih rendah dibandingkan dengan Mg 2+ Martin 1992. Oleh karena itu, bila dalam sitoplasma mengandung Al maka proses metabolisme menjadi terganggu karena posisi Mg 2+ sebagai kofaktor dalam beberapa enzim akan tergantikan oleh Al 3+ sehingga aktivitas enzim tersebut menjadi terganggu. Berdasarkan konsentrasi kation dan ligan dalam sistem biologi, dalam sitoplasma dengan pH sekitar 7.3, konsentrasi ion Al bebas terbatas sekitar 10 -10 M, sedangkan konsentrasi ion Mg, Ca, dan Fe bebas masing-masing 10 -3 , 10 -7 , dan 10 -17 M Williams 2002. Konsentrasi ion Al dalam sitoplasma lebih rendah dibandingkan dengan ion Mg dan Ca. Hal ini disebabkan karena pH dalam sitoplasma adalah netral dan Al mengendap pada kondisi tersebut, sedangkan ion Mg dan Ca tetap larut. Pengikatan Al terhadap ligan dalam sitoplasma menjadi terbatas selain disebabkan karena konsentrasinya sangat rendah, juga disebabkan karena terjadi kompetisi dengan kation-kation lain. Penyerapan dan Distribusi Al pada Akar dan Daun Penyerapan Al pada banyak spesies tanaman, khususnya yang sensitif Al, terbatas pada sistem perakaran. Daerah akar yang banyak mengakumulasi Al adalah epidermis dan korteks bagian luar Wagatsuma ✙✚ ✛ ✜ . 1987; Delhaize ✙✚ ✛ ✜ . 1993; Matsumoto ✢✣ ✤ ✥ . 1996. Endodermis bertindak sebagai barrier, sehingga pengangkutan Al ke pucuk dan daun menjadi lebih kecil. Akan tetapi, banyak spesies tanaman yang mengakumulasi Al di pucuk Jansen ✢ ✣ ✤ ✥ . 2002; Watanabe Osaki 2002b. Umumnya, tanaman-tanaman ini berasal dari daerah tropik atau subtropik dan sering disebut sebagai tanaman hiperakumulator. Contoh tanaman hiperakumulator adalah tanaman teh ✦ ✤ ✧ ✢ ✥✥ ★ ✤ ✩ ★ ✪ ✢ ✪ ✩ ★ ✩ , hydrangea dan beberapa famili Rubiaceae. Namun demikian, belum banyak informasi mengenai mekanisme, lokalisasi seluler, dan bentuk-bentuk kimia Al yang terakumulasi dalam tanaman tersebut. Pada satu pengamatan tentang bentuk kimia Al pada daun teh, banyak Al dikelat oleh gugus polifenol Nagata ✢✣ ✤ ✥ . 1992. Pada daun hydrangea, Al ditemukan membentuk kompleks dengan sitrat Ma ✢✣ ✤ ✥ . 1997a dan pada hiperakumulator ✫ ✢✥ ✤ ✩✣ ✬ ✧ ✤ ✧ ✤ ✥ ✤ ✭ ✤ ✣ ✮ ✯ ★ ✰✱ ✧ , Al berikatan dengan oksalat Watanabe ✢ ✣ ✤ ✥ . 1998a. Lokalisasi Al Subseluler Beberapa studi menunjukkan bahwa sebagian besar Al dilokalisasi pada dinding sel Marienfeld Stelzer 1993; Ownby 1993; Marienfeld ✢✣ ✤ ✥ . 1995. Al berikatan dengan molekul pektin dinding sel atau komponen dinding sel yang bermuatan negatif pada sel-sel epidermis dan korteks akar Delhaize ✢ ✣ ✤ ✥ . 1993; Marienfeld ✢ ✣ ✤ ✥ . 2000; Schmohl Horst 2000; Schmohl ✢ ✣ ✤ ✥ . 2000. Gugus karboksil bebas molekul pektin yang bermuatan negatif mengikat ion aluminium menyebabkan dinding sel menjadi kaku sehingga pemanjangan akar menjadi terhambat Schmohl Horst 2000. Menurut Schmohl ✢✣ ✤ ✥ . 2000, perlakuan enzim pectin methylesterase PME pada suspensi sel ✲ ✢✤ ✧ ✤ ✳✩ menyebabkan penurunan toleransi aluminium. Selanjutnya, overekspresi PME pada tanaman kentang transgenik terbukti lebih sensitif terhadap aluminium daripada kultivar toleran dan sensitif aluminium. Berdasarkan penjelasan tersebut dapat disimpulkan bahwa matriks pektin pada apoplas sel-sel apikal akar berperanan penting dalam memfasilitasi sinyal stress pada sitoskeleton sel-sel tersebut. Akumulasi aluminium yang tinggi dalam apoplas akar merupakan karakteristik sensitifitas aluminium Rincon Gonzales 1992; Schmohl Horst 2000. Ikatan Al dengan gugus karboksil akan menimbulkan ikatan yang kuat sehingga sel tidak dapat membesar Marschner 1995. Studi lain juga menunjukkan bahwa Al ditemukan pada membran sel yang dapat menyebabkan perubahan atau kerusakan sifat permeabilitas membran sel. Permeabilitas membran sel yang meningkat pada pH rendah berkorelasi dengan penyerapan Al Ishikawa ✴ ✵ ✶ ✷ . 2001; Ofei-Manu ✴ ✵ ✶ ✷ . 2001. Pada membran sel akar barley, Al ditemukan berasosiasi dengan gugus fosfolipid membran yang menyebabkan kerusakan struktur membran atau perubahan dalam permeabilitas membran. Hal ini menyebabkan penyerapan hara yang dikatalisis oleh pompa proton menjadi terhambat Matsumoto 1991. Ion Al yang bermuatan positif dapat berasosiasi dengan gugus fosfat dari ATP atau fosfolipid pada membran yang akan mempengaruhi efektivitas transport proton. Aluminium ditemukan dalam nukleus berikatan dengan DNA Matsumoto ✴ ✵ ✶ ✷ . 1976. Sedangkan menurut Silva ✴ ✵ ✶ ✷ . 2000 bahwa Al dapat terakumulasi dalam nukleus dengan konsentrasi yang rendah. Asosiasi antara Al dengan DNA dapat menghentikan proses pembelahan sel meristem apikal Matsumoto 1991. Al dalam bentuk polimer memiliki muatan positif yang besar serta memiliki banyak situs pengikatan. Polimer Al ini dapat mengikat fosfat yang ada pada kedua utas DNA, mengakibatkan gagalnya kedua utas DNA berpisah Matsumoto 1991. Sensitivitas Seluler terhadap Al Pada tanaman, gejala toksisitas berlangsung di ujung akar Ryan ✴ ✵ ✶ ✷ . 1993. Sivaguru Horst 1998 menunjukkan bahwa daerah akar yang paling sensitif terhadap Al adalah bagian distal dari zona transisi DTZ. Sel-sel yang paling sensitif terhadap Al adalah epidermis Ciamporova 2000; Ciamporova 2002. Rambut akar dan sel-sel epidermal yang berdekatan juga menunjukkan sensitvitasnya terhadap Al Jones ✴ ✵ ✶ ✷ . 1995b. Rambut akar umumnya sangat sensitif terhadap Al, namun tingkat sensitivitasnya sangat tergantung pada aktivitas fisiologisnya Care 1995; Jones ✴ ✵ ✶ ✷ . 1998. Rambut akar yang pemanjangannya telah lengkap, kurang sensitif terhadap Al Sattelmacher ✴ ✵ ✶ ✷ . 1993. Perbedaan sensitivitas Al antara ujung dan dasar akar dari kecambah kacang-kacangan Shen ✸ ✹ ✺ ✻ . 2004 dan kecambah padi Nagasaka ✸ ✹ ✺ ✻ . 2003 telah diuji. Perbedaan tersebut menyangkut eksudasi asam-asam organik. Perbedaan sensitivitas Al sepanjang poros akar tidak dapat dijelaskan dengan perbedaan eksudasi asam organik. Daerah akar yang paling sensitif terhadap Al, mengeksudasi asam organik paling besar di apeks akarnya Delhaize ✸ ✹ ✺ ✻ . 1993; Pellet ✸ ✹ ✺ ✻ . 1995; Mariano Keltjens 2003. Eksudasi asam organik dapat menjelaskan perbedaan toleransi Al antar genotipe, tetapi tidak antara tipe sel dalam akar yang sama. Perbedaan sensitivitas Al dapat juga ditemukan pada kultur sel tanaman sehingga dapat memberikan alternatif untuk akar. Sel-sel tembakau pada fase pertumbuhan logaritmik adalah sensitif terhadap Al, tetapi sel-sel pada fase stasioner tidak sensitif Al Yamamoto ✸ ✹ ✺ ✻ . 1994; Vitorello Haug 1996; Sivaguru ✸ ✹ ✺ ✻ . 1999. Sensitivitas Al juga terjadi dengan memanipulasi kandungan pektin dan aktivitas pektin metil esterase pada kultur sel ✼ ✸✺ ✽ ✺ ✾✿ dan ❀ ❁ ✻✺ ❂ ❃ ✽ ✹❃ ❄ ✸ ❅❁ ✿ ❃ ✽ Schmohl Horst 2000; Shmohl ✸ ✹ ✺ ✻ . 2000. Mekanisme Utama Toksisitas Al Penelitian tentang target utama kerusakan tanaman oleh Al dan pemahaman yang lengkap tentang mekanisme toksisitas Al merupakan hal yang penting dalam mempelajari toksisitas Al. Hipotesis tentang mekanisme toksisitas Al paling tidak menyangkut pengaruhnya terhadap fosfat, metabolisme nukleotida, struktur dan fungsi dinding sel, dinamika sitoskeletal, transduksi signal, dan stress oksidatif. Aluminium mampu mengikat DNA dengan kuat pada tulang punggung fosfat atau pada daerah yang berasosiasi dengan histon Matsumoto 1991. Hal ini menyebabkan pembelahan sel terganggu karena adanya interaksi antara Al dengan DNA inti. Al juga mempunyai afinitas tinggi terhadap nukleotida trifosfat bebas dengan model toksisitas berdasarkan pada pengikatannya terhadap ATP dalam sitoplasma Pettersson Bergman 1989. Aluminium juga dapat merubah struktur membran plasma Zhao ❆❇ ❈ ❉ . 1987 dan berpengaruh besar pada pergerakan ion melintasi membran, khususnya penyerapan Ca 2+ Liu Luan 2001. Toksisitas Al sering berhubungan dengan Ca 2+ Rengel Zhang 2003 karena Al mengganggu metabolisme Ca 2+ seluler, atau karena Al menggantikan Ca 2+ dalam sel Kinraide Parker 1987. Beberapa pengamatan ditemukan bahwa Al merubah struktur kalmodulin, suatu mediator signal Ca 2+ intraseluler utama dalam sel Haug Vitorello 1996. Pengamatan lain menunjukkan bahwa transduksi signal yang difasilitasi oleh ❊ ❋ ● ❍ ❊ ❋ ● ■❏ ● ❍■ ❇ ■❑ ❆ , suatu jalur yang juga melibatkan Ca 2+ sebagai perantara intraseluler ■❏ ❇ ▲❈ ▼ ❆❉❉ ◆ ❉ ❈ ▲ ❖ ❆ ❍❍ ❆ ❏ P ❆ ▲ , merupakan salah satu situs utama toksisitas Al baik pada sel mamalia Haug ❆ ❇ ❈ ❉ . 1994 maupun pada sel tanaman Jones Kochian 1995; Jones ❆❇ ❈ ❉ . 1995a. Pada kedua kasus tersebut, perlakuan Al dapat menghambat aktivitas phospholipase C atau menghambat aksi protein trimerik G. Aluminium dapat meningkatkan stress oksidatif dalam sel. Pada tanaman, bukti tentang ini meliputi peningkatan peroksidasi lipid Cakmak Horst 1991; Yamamoto ❆❇ ❈ ❉ . 2001, dan ekspresi gen-gen stress oksidatif Richard ❆❇ ❈ ❉ . 1998; Milla ❆❇ ❈ ❉ . 2002. Perbaikan toleransi terhadap toksisitas Al pada tanaman dilakukan oleh gen-gen stress oksidatif Ezaki ❆ ❇ ❈ ❉ . 2000. Stress oksidasi yang diinduksi Al paling umum berhubungan dengan perubahan struktur membran oleh Al. Adanya Fe dapat meningkatkan peroksidasi membran yang diinduksi oleh Al Ono ❆❇ ❈ ❉ . 1995; Yamamoto ❆❇ ❈ ❉ . 1997. Pengaruh Al pada sistem antioksidan sel tidak dapat dihilangkan Devi ❆❇ ❈ ❉ . 2003; Guo ❆ ❇ ❈ ❉ . 2004. Aktivasi sistem antioksidan seluler merupakan sebuah respon stress umum dan tidak spesifik terhadap toksisitas Al. Hipotesis lain yang menarik adalah tempat utama toksisitas Al terletak pada rangkaian ◗ ❆ ❉❉ ❘ ❈ ❉ ❉ – ❙❉ ❈ ❍ ❖ ❈ ❚ ❆ ❖ ❯ ▲❈ ❏ ❆ – ◗ y ❇ ● ❍ ❱ ❆❉ ❆ ❇ ● ❏ CW-PM-CSK Horst ❆ ❇ ❈ ❉ . 1999. Hal ini disebabkan karena dinding sel, membran plasma dan sitoskeleton saling berhubungan satu sama lain, sehingga gangguan yang terjadi pada salah satu komponen dapat mengganggu komponen lainnya. Hal ini dapat menjelaskan fakta bahwa Al berinteraksi dengan dinding sel Schmohl Horst 2000, membran plasma Ishikawa Wagatsuma 1998, dan sitoskeleton Sivaguru ❆❇ ❈ ❉ . 1999. Rangkaian ketiga komponen tersebut di atas merupakan target utama Al. Ekspresi ❲❳ ❨ ❨ ❩ ❬ ❨ ❨ ❭ ❬ ❪❪❫ ❲ ❴❬ ❵❳❛ ❜❳ ❲❳ ❝ ❵ ❫ ❜ ❞ ❴❡ ❬ ❪❳ WAK juga diinduksi oleh Al Sivaguru ❳ ❵ ❬ ❨ . 2003. Gejala dan Pengaruh Umum Toksisitas Aluminium pada Tanaman Gejala toksisitas aluminium yang paling umum adalah penghambatan pertumbuhan akar, yang terdeteksi dalam 30 menit hingga 2 jam, dalam konsentrasi mikromolar Al Barcelo Poschenrieder 2002. Akan tetapi, mekanisme penghambatan ini belum diketahui. Adanya kerusakan akar oleh Al ditunjukkan oleh bentuk akar yang menjadi pendek dan gemuk, serta sering berwarna coklat. Jumlah percabangan dan rambut akar menurun serta sistem perakaran mengumpul. Pada apeks akar, keretakan akar mudah diamati pada epidermis. Perluasan sel-sel korteks secara radial dan tidak merata menyebabkan penebalan akar dan stress mekanik pada epidermis Ciamporova 2002. Sel-sel yang dipengaruhi oleh Al adalah antara lain tudung akar, meristem, sel-sel pemanjangan, rambut akar, dan titik percabangan Rengel 1996. Ujung akar merupakan daerah yang paling sensitif terhadap cekaman Al Ryan ❳ ❵ ❬ ❨ . 1993. Dalam pengujian yang lebih detail, daerah distal zona transisi ❢ ❴❪ ❵❬ ❨ ❵ ❜❬ ❡ ❪ ❴❵ ❴❫ ❡ ❣❫ ❡ ❳ , DTZ merupakan daerah apikal akar yang paling sensitif terhadap Al Sivaguru Horst 1998. Pada tahap awal toksisitas, aktivitas pembelahan sel menurun yang akan berakibat terhadap penghambatan pemanjangan sel dan pada akhirnya menghambat pertumbuhan akar Kochian 1995; Barcelo Poschenrieder 2002; Ciamporova 2002. Walaupun gejala toksisitas Al juga terjadi pada pucuk, hal ini biasanya dipandang sebagai konsekuensi dari kerusakan yang terjadi pada sistem perakaran. Respons yang paling umum pada pucuk terhadap toksisitas Al adalah modifikasi seluler pada daun, menurunnya pembukaan stomata, penurunan aktivitas fotosintesis, klorosis, dan nekrosis. Perlakuan Al dalam waktu lama menyebabkan penghambatan pertumbuhan akar dan mengarah ke defisiensi unsur hara, terutama P, K, Ca, dan Mg Haug Vitorello 1996. Pada tanaman barley yang ditanam pada media yang mengandung Al, kandungan Ca 2+ dan K + hanya setengahnya jika dibandingkan dengan kontrol Matsumoto Yamaya 1988. Al dapat mengikat anion anorganik, seperti sulfat, fosfat, fluor, dan silikat membentuk suatu kompleks yang mempunyai afinitas tinggi terhadap oksigen atau air Hodson Evans 1995. Interaksi antara Al dengan anion tersebut berpotensi untuk meningkatkan pH perakaran sekaligus dapat membuat rancu pengaruh toksisitas Al dengan defisiensi unsur tertentu seperti fosfat karena terbentuknya kompleks Al-fosfat baik di larutan tanah maupun di dalam sel yang tidak tersedia bagi tanaman. Kemampuan tanaman untuk dapat memanfaatkan kandungan P yang rendah secara efisien selalu dihubungkan dengan sifat toleransi tanaman terhadap cekaman Al. Kation trivalen Al 3+ menghambat transpor Ca 2+ secara efektif ke dalam akar, protoplasma dan membran vesikel. Hasil studi pada ❤ ✐❥ ✐❦ ❧ ✐❤ ♠ ♥♦♣ menunjukkan bahwa Al dapat memblok Ca 2+ dan saluran K + Ryan ♦ q ♠ ❤ . 1997. Pada akar barley, perlakuan Al menurunkan kandungan Ca pada membran sel hingga 50 Matsumoto Yamaya 1988 dan menyebabkan penurunan aktivitas H + -ATPase dalam menghidrolisis ATP Ahn ♦ q ♠ ❤ . 2001. Mekanisme Seluler Toleransi Aluminium Secara umum, Taylor 1991 mengelompokkan mekanisme toleransi terhadap cekaman Al menjadi dua kelompok, yaitu mekanisme eksternal dan mekanisme internal. Mekanisme eksternal terdiri dari: 1 immobilisasi Al di dinding sel, 2 selektifitas membran plasma terhadap Al, 3 induksi peningkatan pH di daerah perakaran atau apoplas akar, 3 eksudasi senyawa-senyawa pengkelat, dan 4 adanya mekanisme Al- ♦ rr ❤ s t . Sedangkan mekanisme internal terdiri dari: 1 kelatisasi Al di sitosol, 2 kompartementasi Al di vakuola, 3 pengikatan Al oleh protein ✉ ❤ ❧ ✐ ✈ ❦ ✐ ✈ ✇ - ❥ ♣ ① q ♦ ✐ ✈ , 4 sintesis enzim tertentu, dan 5 peningkatan aktivitas enzim. Tanaman yang toleran Al mempunyai kemampuan mensekresikan senyawa-senyawa organik seperti asam sitrat, asam malat, asam oksalat, asam fulvat Ryan ♦ q ♠ ❤ . 1995; Sopandie ♦ q ♠ ❤ . 1996; Ma ♦ q ♠ ❤ . 1998; Zeng 1998; Kasim 2000 dan Anoop ♦ q ♠ ❤ . 2003 dan senyawa fenilpropanoid seperti asam kafeat dan asam klorogenat Yamamoto ♦ q ♠ ❤ . 1998 ke dalam daerah perakaran membentuk kompleks dengan Al dan mencegah serapan Al oleh tanaman. Selain itu, tanaman yang toleran Al dapat meningkatkan kapasitas tukar kation dinding sel Horst 1996 dan potensial listrik depolarisasi dinding sel Papernik Kochian 1997 serta menginduksi peningkatan pH perakaran dan apoplas akar Sopandie ② ③ ④ ⑤ . 1996 sehingga Al menjadi bentuk yang tidak toksik bagi tanaman. Tanaman yang toleran Al juga mampu menstimulir peningkatan aktivitas senyawa antioksidan, seperti: peroksidase PER, superoxide dismutase SOD, glutathion s-transferase GST dan catalase Snowden Gardner 1993 serta Mg 2+ ⑥ ⑦ ⑧⑤ ⑨ x melalui peningkatan aktivitas Mg-transporter McDiarmid Gardner 1998. Selain itu, tanaman toleran Al mampu meningkatkan aktivitas enzim H + -ATPase membran plasma yang berperanan dalam pembentukan gradien elektrokimia untuk mendorong ion melintasi membran dan menyebabkan sekresi senyawa-senyawa organik Anoop ② ③ ④ ⑤ . 2003; Shen ② ③ ④ ⑤ . 2005a. Semua mekanisme toleransi yang dijelaskan di atas belum banyak dipelajari secara mendalam, tetapi paling sedikit dua mekanisme yang telah diketahui dengan baik, yaitu sekresi asam organik Kochian ② ③ ④ ⑤ . 2004 dan peningkatan ekspresi gen-gen tertentu Snowden Gardner 1993; Richards ② ③ ④ ⑤ . 1998; dan Sasaki ② ③ ④ ⑤ . 2004. Eksudasi Senyawa-senyawa Pengkelat Aluminum Bukti yang menjelaskan mekanisme eksudasi senyawa pengkelat Al berasal dari tiga kelompok peneliti, yaitu Delhaize ② ③ ④ ⑤ . 1993, Basu ② ③ ④ ⑤ . 1994, dan Pellet ② ③ ④ ⑤ . 1995 yang menunjukkan bahwa sekresi asam malat meningkat pada kultivar yang toleran Al dibandingkan dengan kultivar yang sensitif Al. Ekspresi gen sitrat sintase atau malat dehidrogenase yang diikuti dengan eksudasi asam organik dapat meningkatan toleransi tanaman terhadap Al de la Fuente ② ③ ④ ⑤ . 1997; Koyama ② ③ ④ ⑤ . 2000; Anoop ② ③ ④ ⑤ . 2003. Studi lain dengan mengekspresikan gen-gen stress umum menghasilkan peningkatan toleransi Al yang sangat rendah atau peningkatannya tidak ⑩② ❶ ⑩❷ ❸ ⑨ ❹⑥ ❺ ⑤② Delhaize ② ③ ④ ⑤ . 2001; Ezaki ② ③ ④ ⑤ . 2000; Basu ② ③ ④ ⑤ . 2001. Hal ini menunjukkan bahwa toleransi Al ditentukan oleh eksudasi asam organik. Studi lain menunjukkan bahwa tanaman barley yang ditransformasi dengan gen ④ ⑤ ❻ ③ -1, yang diduga menyandi malat transporter, adalah lebih toleran terhadap Al Delhaize ② ③ ④ ⑤ . 2004. Hal ini dapat memberikan informasi bahwa transformasi tersebut dapat meningkatkan eksudasi tanpa memerlukan perubahan konsentrasi metabolit sitoplasma. Asam organik mempunyai dua peranan yang sangat penting dalam menghilangkan toksisitas Al, yaitu penolakan Al melalui pelepasan Al dari akar dan detoksifikasi Al dalam simplas melalui pengkelatan Al oleh asam organik sehingga pengaruh racunnya dapat direduksi atau dicegah pada tingkat seluler Pellet ❼❽ ❾ ❿ . 1995; Kasim 2000; Anoop ❼❽ ❾ ❿ . 2003. Beberapa senyawa organik yang dihasilkan oleh tanaman dan dapat mengkelat Al antara lain: asam malat, asam sitrat, asam oksalat, asam fulfat, asam humat dan fenolat. Hasil penelitian pada tanaman ➀ ❾ ➁➁➂ ❾ ❽ ➃ ❽ ❾ L. memperlihatkan hubungan antara eksudasi asam sitrat dengan waktu pemberian Al. Eksudasi asam sitrat sangat lambat selama empat jam pertama pemberian Al, namun setelah itu meningkat dengan tajam. Jumlah asam sitrat yang dieksudasi meningkat dengan penambahan konsentrasi Al yang diberikan secara eksternal Ma ❼❽ ❾ ❿ . 1998. Pada tanaman taro ➀ ❾ ❿ ➃ ➄ ❾ ➁➂ ❾ ❼ ➁ ➄ ➅ ❿ ❼ ➆ ❽ ❾ L. Schoott juga banyak ditemukan asam oksalat. Asam oksalat ini yang membuat tanaman taro toleran terhadap cekaman Al, karena terjadi pembentukan kompleks Al-oksalat di rizosfir Ma Miyasaka 1998. Ryan ❼❽ ❾ ❿ . 1995 menunjukkan bahwa efluks malat yang dirangsang oleh Al dapat merupakan suatu mekanisme toleransi Al yang umum bagi tanaman gandum. Malat yang dieksudasi akan melindungi tanaman dengan cara mengkelat dan mendetoksifikasi Al pada bagian yang peka di ujung akar. Bukti yang mendukung bahwa malat berperan dalam mekanisme toleransi Al adalah: 1 efluks malat dirangsang secara spesifik oleh Al, 2 malat melindungi bagian tanaman gandum yang peka Al di ujung akar ketika ditambahkan pada larutan hara yang telah diberi perlakuan Al, 3 malat yang keluar dari akar dikendalikan oleh gen yang terdapat pada lokus Almt1. Pada populasi gandum ➆ ❼ ❾ ➇ ➂➁ ➃ ➈ ❼ ➆ ➂➄ , malat yang dilepaskan oleh genotipe toleran Al lebih tinggi daripada genotipe yang peka Al. Aktivitas saluran anion yang diakibatkan oleh Al merupakan mekanisme yang kemungkinan berperan terhadap pelepasan asam organik yang berlangsung dengan cepat Delhaize Ryan, 1995. Ada 3 kemungkinan mekanisme yang diajukan Gambar 2, yaitu: 1 Al berinteraksi langsung dengan protein saluran, mengakibatkan konformasinya berubah sehingga waktu pembukaan saluran menjadi lama; 2 Al berinteraksi dengan reseptor spesifik pada permukaan membran atau dengan membran itu sendiri, yang selanjutnya melalui serangkaian kurir sekunder di sitoplasma, merubah aktivitas saluran; 3 Al masuk ke sitoplasma dan merubah aktivitas saluran secara langsung dengan jalan menempel ke saluran atau secara tidak langsung melalui suatu lintasan transduksi sinyal. Sejumlah studi telah banyak dilakukan untuk mendukung mekanisme toleransi yang melibatkan asam organik. Ternyata, tidak semua tanaman yang toleran Al mempunyai mekanisme pertahanan dengan meningkatkan eksudasi asam organik. Beberapa tanaman yang sensitif Al mempunyai level sekresi asam organik yang tinggi Kochian ➉ ➊ ➋ ➌ . 2004. Tanaman gandum tidak menunjukkan peningkatan toleransi Al, walaupun efflux asam organik meningkat Sasaki ➉ ➊ ➋ ➌ . 2004. Tanaman lain yang resisten Al, tetapi tidak menunjukkan peningkatan eksudasi asam organik adalah tanaman ➍➎ ➋ ➏➐ ➑ ➋ ➎ ➑ ➋ ➒ ➉ ➏➓ ➔→ ➉ ➣ ↔ Wenzl ➉ ➊ ➋ ➌ . 2001. Gambar 2. Interaksi A1 3+ dengan saluran yang permeable terhadap efluks malat pada membran plasma Delhaize Ryan 1995. Sitoplasma pH 7.0 Luar sel pH 4.0 – 5.0 Al 3+ K + 1 2 3 Malat 2- [Malat : Al] Penyeimbang perubahan ion Ekspresi Gen-gen yang Diinduksi oleh Cekaman Al Cekaman Al dapat menginduksi ekspresi beberapa gen tanaman, misalnya pada gandum dan ↕➙➛ ➜ ➝➞ ➟ ➠ ➡ ➝ ➡ , antara lain gen yang menyandikan Metallothionein Like Protein MT, Bowman Birk Proteinase Inhibitors BBPI, Gluthation-S transferase GST, Blue Copper Binding Protein BCB, Superoxide Dismutase SOD, Catalase dan Reticuline Oxygen Oxidoreductase Snowden Gardner 1993; Richards ➢ ➤ ➛ ➥ . 1998. Pada gandum, Sasaki ➢ ➤ ➛ ➥ . 2004 berhasil mengisolasi gen ➛ ➥ ➦ ➤ 1 yang menyandikan aluminium-activated malate transporter. Ezaki ➢ ➤ ➛ ➥ . 1995 juga berhasil mengisolasi gen-gen tembakau yang menyandikan GST, Peroxidase PER dan GDP Dissociation Proteinase Inhibitors GDI yang diinduksi oleh cekaman Al. Sedangkan Joe ➢ ➤ ➛ ➥ . 1997 mampu mengklon gen dari mikroba tanah ↕➙ ➤ ➧ ➙➟ ➜ ➛ ➨ ➤ ➢ ➙ ➩ ➝➡ ➨ ➟ ➡ ➫ ➡ yang tumbuh di lingkungan tanah masam, disebut ↕ ➭➯ I- ➲ , yang berhubungan dengan sifat toleransi terhadap cekaman aluminum. Dari organisme yeast diperoleh dua gen, masing-masing ↕ ➭ ➳ 1 dan ↕ ➭ ➳ 2, dengan fungsi sebagai Mg transporter McDiarmid Gardner, 1998 yang diinduksi oleh cekaman aluminum. Dalam ekspresinya, semua gen di atas selain diinduksi oleh Al, juga diinduksi oleh beberapa cekaman lain, seperti logam Cu, Fe, Zn, Ga, La, cekaman osmotik, cekaman oksidasi, ozon, pelukaan dan suhu. Fenomena ini menunjukkan bahwa gen-gen tersebut tergolong gen-gen stress dan tidak bersifat spesifik terhadap cekaman aluminium. Dari tanaman kedelai, Anwar 1999 berhasil mengklon fragmen cDNA dari gen-gen kedelai yang toleran terhadap cekaman Al, antara lain ➵ ➦ ➛ ➥ ➝ 1 ➸ ➥ y ➨ ➝➺ ➢ ➦ ➛ ➻ ➛ ➥ ➫ ➦ ➝ ➺ ➫ ➦ ➝➺ ➞ ➫ ➨ ➢ ➞ , ➵ ➦ ➛ ➥➝ 14, ➵ ➦ ➛ ➥➝ 49 dan ➵ ➦ ➛ ➥ ➝ 50, masing-masing menyandikan H + -ATPase membran plasma, protein histon H3, NADH-dehidrogenase dan ↕ ➫ ➻ ➝ ➺ - ➝ ➺ ➞ ➫ ➨ ➢➞ ➲ ➙➟ ➤ ➢ ➝ ➺ . Semua gen tersebut di atas terekspresi untuk mempertahankan diri dari cekaman lingkungan. Pada kultivar gandum yang toleran Al yaitu cv PT741, Hamilton ➢ ➤ ➛ ➥ . 2001 telah mengisolasi dua protein 51 kDa yang spesifik diinduksi oleh aluminium. Sekuen protein tersebut homolog dengan subunit  dari H + -ATPase dan subunit  dan  ATP sintase mitokondria. Kedua protein tersebut hanya ada pada kultivar resisten PT741, tetapi tidak ada pada kultivar sensitif. Hal ini menunjukkan bahwa protein tersebut merespon secara spesifik stress Al untuk mengaktifkan ATP sintase sehingga keseimbangan energi dalam sel dapat terpelihara. Peningkatan aktivitas dua enzim jalur pentosa fosfat glukosa-6-fosfat dehidrogenase dan 6-fosfoglukonat dehidrogenase berperanan penting dalam toleransi gandum terhadap cekaman aluminium Slaski ➼ ➽ ➾ ➚ . 1996. Jalur pentosa fosfat menyediakan senyawa-senyawa intermediet seperti pentosa, eritrosa-4- fosfat, dan NADPH. Senyawa-senyawa tersebut penting dalam sintesis asam nukleat, asam amino, dan koenzim. Penyerapan Aluminium pada Tanaman ➪ . ➶➹ ➘➹ ➴ ➹ ➷ ➬ ➮ ➱✃ ❐ ➶ L. ❒➼ ➚➾ ❮ ➽❰ Ï➾ Ï➾ ➚➾ Ð ➾ ➽Ñ ÒÓÔ Õ Ï L. merupakan tanaman yang banyak tumbuh pada tanah asam tropik dan subtropik. Melastoma adalah salah satu tanaman akumulator Al yang mengakumulasi Al lebih 10 g kg -1 pada daun dan akarnya Watanabe ➼ ➽ ➾ ➚ . 1997, 1998a. Pada daun muda tanaman melastoma mengandung Al lebih dari 7 g kg -1 , ketika daun matang kira-kira mengandung lebih dari 10 g kg -1 Watanabe ➼ ➽ ➾ ➚ . 1997. Mutiasari 2008 melaporkan bahwa pada daun tua tanaman ❒ . ➾ Ö Ö Ó × ➼ D.Don. sinonim dari ❒ . Ï➾ ➚ ➾ Ð ➾ ➽Ñ ÒÓÔ Õ Ï L. mengandung Al sekitar 8.81 g kg -1 daun setelah 2 bulan perlakuan. Pada tanaman akumulator Al lain menunjukkan bahwa tanaman teh Ø ➾ Ï➼ ➚ ➚Ó ➾ ❮Ó × ➼ × ❮Ó❮ L. Kuntze dapat mengakumulasi Al hingga 30 g kg -1 pada daun tua dan hingga 0.6 g kg -1 pada daun muda Matsumoto ➼ ➽ ➾ ➚ . 1976, daun Hy Ù Ò ➾ × Ú ➼➾ Ï➾ Ô Ò❰ Û Ñ Ü ➚➚➾ mengakumulasi Al sebesar 3 g kg -1 Ma ➼ ➽ ➾ ➚ . 1997a, dan pada Buckwheat Ý➾ Ú ❰ Û Ü ÒÕ Ï ➼ ❮Ô Õ ➚ ➼ × ➽ Õ Ï Moench. cv. Jianxi yang mendapat perlakuan 50 M Al selama 10 hari dapat mengakumulasi Al di daun mencapai 0.45 g kg -1 Ma ➼ ➽ ➾ ➚ . 1997b. Banyak studi tentang mekanisme toksisitas dan toleransi Al telah dilakukan. Untuk mencegah toksisitas Al, tanaman melakukan mekanisme ekslusi dan mekanisme toleransi internal. Dalam mekanisme ekslusi, Al didetoksifikasi dengan mengeksudasi senyawa-senyawa organik yang dapat mengikat Al. Sedangkan dalam mekanisme toleransi internal, Al didetoksifikasi setelah Al diserap tanaman. Bentuk-bentuk kimia Al dalam spesies tanaman toleran Al telah diidentifikasi menggunakan spektroskopi Þ ß à áâ ã ä å ã æ ç â èéà êâ ëì ç ã àâ NMR. Bentuk Al pada daun åâ á ã ë è ì í ã í ã áã î ã è ï äéà ß í L. adalah Al 3+ , Al-oksalat, Al- oksalat 2 , dan Al-oksalat 3 Watanabe â è ã á . 1998a. Bentuk Al utama yang terakumulasi adalah Al-catechin di daun teh Nagata â è ã á . 1992, Al-sitrat di daun Hy ð ä ã ç æ â ã í ã àäì ñ ï y áá ã Ma â è ã á . 1997a, dan Al-oksalat 3 di daun buckwheat Ma â è ã á . 1998b. Akan tetapi, mekanisme penyerapan Al pada tanaman akumulator Al masih dipelajari, dan belum jelas apakah tanaman akumulator Al mempunyai mekanisme penyerapan Al khusus. Dalam buckwheat Ma Hiradate 2000, tanaman teh Morita â è ã á . 2004 dan åâ á ã ë è ì í ã í ã á ã î ã èï äé à ß í Watanabe Osaki 2001, Al diangkut dari akar ke pucuk dalam bentuk kompleks Al-sitrat. Jadi, asam organik dengan berat molekul kecil memainkan peranan penting dalam detoksifikasi internal pada jaringan tanaman dan transport Al dari akar ke pucuk melalui pembentukan kompleks asam organik dalam spesies tanaman akumulator Al. Kinetika penyerapan Al menunjukkan pola bifase, dengan suatu fase awal yang cepat fase non-linear diikuti oleh fase lambat fase linear. Dalam fase non- linear, sebagian besar terjadi akumulasi pasif dalam apoplas sedangkan dalam fase linear, terjadi penyerapan melintasi membran plasma. Pola penyerapan Al dalam akar melastoma, tidak banyak berbeda pada barley atau beberapa tanaman non- akumulator Al, hanya kecepatannya berbeda, misalnya kecepatan penyerapan Al ke dalam fraksi simplas akar pada fase linear dalam melastoma 3 – 72 jam sekitar 1,5 kali lebih tinggi daripada barley 1 – 24 jam Watanabe â è ã á . 2001. Melastoma memelihara kecepatan penyerapan Al yang tinggi ke dalam simplas dalam periode yang lama, sedangkan pada barley, penyerapan Al dalam fraksi simplas berhenti pada fase awal, dan akhirnya Al simplas dari melastoma 4 kali lebih tinggi dibandingkan barley pada 168 jam dari awal perlakuan Al Watanabe â è ã á . 2001. Hal ini menunjukkan bahwa simplas akar Melastoma mempunyai kapasitas yang lebih tinggi untuk menahan Al sehingga dapat menginduksi sejumlah Al untuk ditransport dari akar ke pucuk melastoma. Menurut Watanabe Osaki 2001 bahwa transport Al dari akar ke pucuk Melastoma berada dalam bentuk kompleks Al-sitrat. Oleh karena itu, ketika Al masuk ke dalam simplas akar, Al secara jelas meningkatkan aktivitas enzim Sitrat sintase di akar yang berperanan mensintesis asam sitrat Watanabe ò ó ô õ . 2005. Rengel 1996 memprediksi bahwa hiperakumulasi Al dalam tanaman akumulator terjadi karena adanya kapasitas internal untuk mendetoksifikasi danatau menyimpan Al daripada meningkatkan kecepatan transport Al ke simplas. Akumulasi Al di pucuk melastoma teramati setelah 24 jam aplikasi Al dan selanjutnya meningkat dengan kecepatan tetap Watanabe ò ó ô õ . 2001. Tingginya konsentrasi Al pada daun muda menunjukkan adanya distribusi Al dari daun tua ke daun muda, hal ini ditunjukkan oleh perbedaan konsentrasi Al antara daun termuda dan tertua tidak besar Watanabe ò ó ô õ . 1997. Pada pucuk melastoma, akumulasi Al nyata terdeteksi dalam 24 jam setelah aplikasi Al, tetapi konsentrasi oksalat di pucuk tidak berubah, yang menunjukkan bahwa kompleks Al-oksalat bukan merupakan bentuk utama untuk translokasi dari akar ke pucuk Watanabe ò ó ô õ . 2001. Pengaruh yang Ditimbulkan oleh Penyerapan Aluminium pada Tanaman ö . ÷ ø ùø ú ø ûüýþ ÿ ÷ Sintesis Asam Organik Konsentrasi sitrat dalam xilem ✁ò õ ô ✂ó✄ ☎ ô ☎ ô õô ✆ ô ó✝ ✞✟ ✠ ✡ ☎ meningkat dengan meningkatnya konsentrasi Al, sedangkan konsentrasi malat, suksinat, dan -ketoglutarat menurun Watanabe Osaki 2002b. Oksalat yang merupakan sebuah ligan Al pada daun ✁ò õ ô ✂ ó ✄ ☎ ô ☎ ô õ ô ✆ ô ó ✝ ✞ ✟✠ ✡ ☎ , tidak terdeteksi dalam xilem yang diperlakukan atau tidak diperlakukan dengan Al Watanabe Osaki 2002a. Pada akumulator Al lainnya, buckwheat ☛ ô ☞ ✄ ✌ ✍✞ ✡ ☎ ò ✂ ✠ ✡ õò ✎ ó ✡ ☎ , konsentrasi sitrat selalu tinggi dalam xilem, dan dengan perlakuan Al tidak berpengaruh pada konsentrasi sitrat dan malat dalam xilem Ma Hiradate 2000. Hal ini menunjukkan bahwa perbedaan respon metabolisme asam organik terhadap Al memungkinkan ✁ . ☎ ô õ ô ✆ ô ó ✝ ✞ ✟✠ ✡ ☎ mempunyai kemampuan mengkumulasi Al pada pucuk lebih besar dibandingkan dengan buckwheat Li- Song 2006. Perlakuan Al meningkatkan kandungan sitrat dan oksalat pada daun ✁ . ☎ ô õ ô ✆ ô ó ✝ ✞✟✠ ✡ ☎ Watanabe Osaki 2002a, sedangkan pada buckwheat kandungan oksalat hampir sama ditemukan pada daun yang diperlakukan atau tanpa diperlakukan dengan Al Ma ò ó ô õ . 1998. Asam oksalat terlibat dalam memberikan kemampuan internal ✏ . ✑✒ ✓✒ ✔ ✒ ✕✖ ✗✘ ✙✚ ✑ untuk menyimpan Al Watanabe ✛ ✕ ✒ ✓ . 1998a. Di akar, konsentrasi oksalat dalam fraksi simplas menurun sampai 24 jam setelah aplikasi Al dan setelah itu meningkat secara berkala. Sedangkan di pucuk, akumulasi Al adalah nyata yang terdeteksi 24 jam setelah aplikasi Al, tetapi konsentrasi oksalat di pucuk tidak berubah, yang menunjukkan bahwa kompleks Al-oksalat bukan merupakan bentuk utama untuk translokasi Al dari akar ke pucuk Watanabe ✛✕ ✒ ✓ . 2001. Penurunan konsentrasi oksalat hingga 24 jam setelah aplikasi Al dalam fraksi simplas diikuti dengan peningkatan konsentrasi oksalat dalam fraksi apoplas. Hal ini menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi oksalat dalam fraksi apoplas disebabkan oleh peningkatan eksudasi oksalat melintasi membran plasma menuju apoplas Watanabe ✛✕ ✒ ✓ . 2001. Asam sitrat merupakan ligan yang digunakan untuk translokasi Al dari akar ke pucuk Watanabe Osaki 2001. Konsentrasi sitrat meningkat dalam simplas ketika ✏ ✛✓✒ ✜ ✕✢ ✑✒ ✑✒ ✓✒ ✔ ✒ ✕✖ ✗✘ ✙✚ ✑ diperlakukan dengan Al. Peningkatan ini terjadi karena adanya penetrasi Al ke dalam simplas setelah 3 jam perlakuan. Hal ini menunjukkan bahwa induksi sitrat sintase terjadi ketika Al masuk ke dalam simplas. Walaupun konsentrasi sitrat dalam apoplas sedikit meningkat dengan perlakuan Al, namun demikian masih lebih rendah dibandingkan dengan konsentrasi sitrat dalam simplas Watanabe ✛ ✕ ✒ ✓ 2005. Berdasarkan penjelasan di atas, ada dua senyawa kompleks Al-kelat dalam ✏ ✛ ✓ ✒ ✜ ✕ ✢ ✑ ✒ ✑✒ ✓✒ ✔ ✒ ✕ ✖ ✗✘ ✙ ✚ ✑ dengan fungsi yang berbeda, yaitu Al-oksalat bentuk Al dalam daun, sebagai akumulator dan Al-sitrat bentuk yang digunakan dalam translokasi dari akar ke pucuk Watanabe Osaki 2002a; Watanabe ✛✕ ✒ ✓ . 2005. Peranan asam organik dalam melastoma dapat diringkas pada Gambar 3. Asam oksalat mempunyai dua fungsi, yaitu 1 melarutkan fosfat yang tidak terlarut aluminium fosfat dalam rizosfir, dan 2 bertindak sebagai ligan untuk akumulasi Al di daun Watanabe ✛ ✕ ✒ ✓ . 1998a. Karena daerah pertukaran kation pada akar melastoma mempunyai kapasitas dan afinitas tinggi terhadap Al Watanabe ✛✕ ✒ ✓ . 2001, maka daerah dinding sel pada permukaan akar mengabsorbsi Al dari kompleks Al-oksalat, dan meninggalkan sejumlah besar oksalat dalam rizosfir Watanabe Osaki 2002. Melastoma dapat menurunkan pH rizosfir ketika mengabsobsi NH 4 , yang merupakan sumber nitrogen anorganik utama pada banyak tanah asam Watanabe ✣ ✤ ✥ ✦ . 1998b. Aluminium yang diadsorbsi pada daerah pertukaran kation akar dan Al yang membentuk kompleks Al-oksalat pada permukaan akar dapat dilarutkan oleh penurunan pH di daerah rizosfir. Ion Al yang diabsorbsi oleh akar membentuk kompleks dengan sitrat untuk translokasi dalam xilem. Dalam daun, Al mengubah ligan dari sitrat ke oksalat atau menjadi bebas Watanabe Osaki 2002. Kompartementasi Analisis NMR menunjukkan bahwa sejumlah besar Al monomerik yang terdapat pada daun ✧✣ ✦ ✥ ★ ✤✩ ✪ ✥ ✪ ✥ ✦✥ ✫ ✥ ✤✬ ✭✮✯ ✰ ✪ , didistribusikan pada beberapa bagian yang mempunyai suasana asam, seperti vakuola Watanabe ✣ ✤ ✥ ✦ . 1998a. Sedangkan dalam buckwheat, lebih dari 80 dari total Al ada dalam protoplas dan telah diidentifikasi sebagai Al-oksalat dengan rasio molar 1:3. Oksalat dan Al Gambar 3. Peranan asam organik dalam pertumbuhan melastoma Watanabe dan Osaki 2002. a Oksalat melarutkan aluminium fosfat yang tidak larut. b Al diadsorbsi pada daerah pertukaran kation akar. Pengasaman daerah rizosfir akar melepaskan Al dari daerah pertukaran kation dan dari kompleks Al-oksalat. Al yang terlepas diabsorbsi oleh akar. c Al yang terabsorbsi membentuk kompleks dengan sitrat dan d diangkut ke pucuk melalui xilem. e Dalam daun, Al mengganti ligan sitrat menjadi ligan oksalat atau menjadi bebas Watanabe dan Osaki 2002. Senyawa Organik Oksalat Oksalat Oksalat Sitrat Sitrat Sitrat dalam protoplas dilokalisasi dalam vakuola Shen ✱ ✲ ✳ ✴ . 2002. Selain itu, Al juga dilokalisasi dalam sel-sel epidermis daun dari beberapa tanaman akumulator Al, antara lain: tanaman teh Watanabe Osaki 2002a, dan ✵✱✴ ✳ ✶ ✲✷ ✸ ✳ ✸ ✳ ✴ ✳ ✹ ✳ ✲ ✺ ✻✼ ✽✾ ✸ Watanabe ✱ ✲ ✳ ✴ . 1998a. Hal ini menunjukkan bahwa sel-sel epidermis yang tidak terlibat langsung dalam fotosintesis merupakan situs akumulasi Al pada tanaman akumulator Al Watanabe Osaki 2002a. Kompartementasi dan bentuk Al di daun dari beberapa tanaman akumulator Al ditunjukkan pada Tabel 1. Tabel 1. Kompartementasi dan bentuk Al di daun dari beberapa tanaman akumulator Al. Sumber: Li-Song 2006 H + -ATPase Membran Plasma Transport hara masuk ke dalam tanaman merupakan suatu proses aktif yang memerlukan energi dari metabolisme. Transport hara melintasi membran plasma digerakkan oleh pompa proton H + -ATPase yang tertanam dalam membran plasma, sehingga dapat menciptakan perbedaan potensial listrik dan gradien pH antara kedua sisi membran yang diperlukan oleh transporter sekunder yang aktivitasnya secara langsung tergantung pada ✿ ✻ ✷ ✲ ✷ ❀ ✸✷ ✲ ✼❁ ✱ ❂ ✷ ✻✽ ✱ . Enzim ini disandikan oleh gen berukuran besar dan mempunyai beberapa isoform yang terekspresi pada berbagai tipe sel dan jaringan. Tanaman yang ditransformasi dengan gen H + -ATPase membran plasma dapat memperbaiki pertumbuhan pada pH rendah selama perkembangan kecambah Young ✱ ✲ ✳ ✴ . 1998. H + -ATPase membran plasma berbeda dengan V-type dan F-type H + - ATPase pada vakuola dan membran–dalam mitokondria dalam hal biokimia, Spesies Tanaman Lokalisasi Bentuk Al ratio molar Pustaka Teh Epidermis Al-katekin Nagata ❃❄ ❅❆ . 1992 ❇ . ❈ ❉❅❊❋ ● ❍ Epidermis, vakuola, kloroplas - Cuenca ❃❄ ❅ ❆ . 1991 Buckwheat Vakuola Al-oksalat 1:3, Al- sitrat 1:1 Shen ❃❄ ❅❆ . 2002; 2004 Hydrangea - Al-sitrat 1:1 Ma ❃❄ ❅ ❆ . 1997b ■ . ❏❅❆ ❅❑ ❅ ❄ ▲❉● ▼ ◆❏ Epidermis, mesofil Al monomerik, Al- oksalat 1:1, 1:2, 1:3 Watanabe Osaki 2002a; Watanabe ❃❄ ❅❆ . 1998a organisasi subunit, dan mekanisme aksinya. H + -ATPase membran plasma tanaman merupakan polipeptida tunggal sekitar 100 kDa yang membentuk status transisi kovalen enzim – fosfat selama siklus reaksi Briskin Poole 1983a, 1983b; Vara Serrano 1982. Oleh karena itu, enzim ini diklasifikasikan sebagai P-type ATPase untuk mencerminkan adanya bentuk E – P. P-type ATPase membentuk famili besar pompa kation yang a membentuk siklus reaksi intermediet aspartil fosfat, b dihambat oleh vanadate, dan c mempunyai beberapa domain Axelsen Palmgren 1998; Lutsenko Kaplan 1995; Moller ❖P ◗ ❘ . 1996. ATPase lain yang termasuk famili ini adalah H + -ATPase membran plasma fungi; Na + K + -ATPase hewan; H + K + -ATPase lambung; Ca 2+ -ATPase pada retikulum sarkoplasmik dan pada membran plasma, membran vakuola, retikulum endoplasma tanaman, fungi dan hewan; logam berat ATPase pada bakteri dan eukariot; dan K + -ATPase bakteri. Pada semua ATPase tersebut, sekuen asam amino di sekitar residu aspartat yang terfosforilasi mempunyai sekuen terkonservasi, yaitu: DKTGT[LIVM][TI] D adalah residu terfosfo- rilasi. Motif ini dapat digunakan sebagai penanda untuk mengidentifikasi P-type ATPase Palmgren 2001. Pompa proton pada membran plasma yang tergantung ATP mempunyai fungsi sentral dalam regulasi homeostasis ion dalam sitosol. Enzim ini disandi oleh ❙❚ ❘ P ❯ ❱ ❖ ❲ ❖ ❳◗ ❙❯ ❘❨ Portillo 2000; Arango ❖ P ◗ ❘ . 2003 dan ekspresi dari beberapa isogen secara berbeda diregulasi menurut tipe jaringan dan tahap perkembangan Oufattole ❖ P ◗ ❘ . 2000. Banyak studi telah menunjukkan perubahan ekspresi gen H + -ATPase membran plasma dalam merespon berbagai faktor lingkungan, antara lain adalah stress garam Binzel 1995, dehidrasi Surowy Boyer 1991, kondisi cahaya Harms ❖ P ◗ ❘ . 1994, perlakuan hormon secara eksternal Frias ❖ P ◗ ❘ . 1996, regulasi pH intraseluler dan perluasan sel Serrano 1989; Sussman 1994; Michelet Boutry 1995; Palmgren 1998. Aktivitas H + -ATPase membran plasma diatur secara pasca-transkripsi pada level protein terutama melalui fosforilasi reversibel Schaller Sussman 1988; Portillo 2000. Pengaturan aktivitas enzim terjadi pada domain autoinhibitory pada daerah C-terminal enzim tersebut Jahn ❖ P ◗ ❘ . 1997; Oecking ❖ P ◗ ❘ . 1997; Baunsgaard ❖P ◗ ❘ . 1998; Camoni ❖P ◗ ❘ . 1998; Palmgren 2001. Pada tahap aktivitas rendah, ujung C-terminal berinteraksi dengan daerah katalitik enzim, yang membatasi aktivitasnya Portillo, 2000. Banyak data telah menunjukkan bahwa aktivasi H + - ATPase membran plasma tanaman terjadi melalui fosforilasi Thr-948 pada enzim, yang diikuti pengikatan protein 14-3-3 Svennelid ❩❬ ❭ ❪ . 1999. Hal ini menyebabkan ujung C-terminal menjadi tidak berinteraksi dengan bagian katalitiknya dan mengaktivasi H + -ATPase membran plasma Palmgren 2001; Arango ❩ ❬ ❭ ❪ . 2003. Defosforilasi protein enzim dilakukan oleh fosfatase spesifik termasuk PP2 dan diikuti oleh pelepasan protein 14-3-3 dari kompleks, dan menginaktivasi H + -ATPase membran plasma. Peranan Fisiologi H + -ATPase Membran Plasma Transport sekunder Peranan utama H + -ATPase membran plasma adalah mengaktivasi transport sekunder. Sebagai contoh, absorbsi mineral dari tanah dapat terjadi melawan gradien konsentrasi dengan mengandalkan energi dari gradien elekrokimia yang dihasilkan oleh H + -ATPase Gambar 4. Keluar masuknya hara dalam sel dapat melalui transporter sekunder, yaitu ❫❭ ❴❴ ❵❩❴ dan ❫❛ ❭ ❜ ❜ ❩❪ . Gambar 4. Transport primer dan sekunder melintasi membran plasma. Gradien elektrokimia yang dihasilkan oleh H + -ATPase digunakan oleh transporter sekunder ❝ ❞ ❡ ❢ ❢ ❣❤ ✐ ❥ ❡ ❦❦❧❣ ✐ untuk memindahkan ion dan senyawa organik melintasi membran plasma Morsomme Boutry 2000 . Carriers H + Simport Antiport Uniport H + Kation Anion Air Channels - + - + - + H + ATP ADP + Pi H + -ATPase membran plasma Transporter ♠ ♥ ♦♦ ♣q♦ dapat bekerja secara simport atau antiport dengan proton, atau secara uniport, sedangkan transporter ♠ r ♥ s s q t dapat berupa ♠ r ♥ s s q t kation, anion, maupun air. Gradien elektrokimia yang diciptakan oleh H + -ATPase juga memberikan energi yang diperlukan untuk transport senyawa-senyawa organik. Sebagai contoh, banyak simport gulaproton dan asam aminoproton telah teridentifikasi. Protein yang telah dikarakterisasi dengan baik adalah transporter sukrosa yang terlibat dalam pengangkutan gula dari apoplas jaringan sumber menuju pembuluh floem Palmgren 2001. Toleransi garam Toleransi garam tergantung pada transporter sekunder. Garam merupakan zat yang toksik bagi sel-sel tanaman. Untuk mencegah akumulasinya dalam sitosol, tanaman telah mengembangkan berbagai mekanisme yang melibatkan transport sekunder. Suatu respons terhadap akumulasi ion-ion toksik dalam sitosol adalah kompartementasi ion-ion toksik ke dalam vakuola, sedangkan respons yang lain adalah ekstrusi ion-ion toksik keluar dari sel Serrano 1996; Bressan q ✉ ♥ t . 1998. Kedua mekanisme ini melibatkan antiport Na + H + dan aktivasinya diduga oleh transporter proton utama pada membran plasma dan vakuola. Selama stres garam, mRNA dari H + -ATPase terakumulasi selain pada akar maupun daun ✈✉♦ ♣✇ tq x s ① ②② ① t ♥ ♦ ♣♥ , juga pada kultur sel-sel tembakau Niu q✉ ♥ t . 1993a, 1993b. Selain akumulasi mRNA, stres garam juga menstimulasi enzim tertentu yang diamati pada sel-sel tembakau Niu q✉ ♥ t . 1996 dan tanaman rawa berkadar garam tinggi, ③ ✇ ♥ ♦✉ ♣s ♥ Wu Seliskar 1998. Pembukaan dan penutupan stomata Pembukaan dan penutupan stomata terjadi karena pembesaran dan pengecilan sel-sel penjaga, akibat dari aliran ion dan air melalui channel spesifik Kearns Assmann 1993. Signal-signal lain yang dapat meregulasi pembukaan stomata adalah CO 2 , kelembaban, cahaya, toksin fungi, dan hormon. Signal-signal tersebut mempengaruhi aktivitas H + -ATPase dan mengakibatkan terjadinya penyerapan air, peningkatan turgor dan pembesaran sel. Peranan H + -ATPase dalam mekanisme ini selain untuk menyediakan potensial elektrokimia yang diperlukan selama pergerakan ion, tetapi juga untuk mengontrol pembukaanpenutupan pintu channel. Hal ini menjelaskan tingginya ekspresi gen penyandi H + -ATPase pada sel-sel penjaga Becker ④ ⑤ ⑥ ⑦ . 1993. Selain itu, aktivitas H + -ATPase juga terlibat dalam fenomena yang berhubungan dengan turgor lain seperti pergerakan daun Cote 1995. Pembesaran sel Penurunan pH medium eksternal yang disebabkan oleh pengaktivan H + - ATPase membran plasma menginisiasi perluasan seluler Rayle Cleland 1992; Cosgrove 1997. Mekanisme ini berasosiasi dengan auksin, suatu hormon yang dapat mengaktivasi H + -ATPase dengan mekanisme yang belum diketahui. Menurut teori, penurunan pH apoplastik mengakibatkan proses perenggangan dinding sel Fry ④ ⑤ ⑥ ⑦ . 1992; McQueen-mason ④ ⑤ ⑥ ⑦ . 1992 dan hiperpolarisasi membran plasma yang menginduksi penyerapan K + Claussen ④ ⑤ ⑥ ⑦ . 1997. Penyerapan ini menyebabkan perubahan osmotik yang kemudian diikuti masuknya air melalui akuaporin membran plasma, sehingga terjadi pemanjangan sel Maurel 1997. Struktur H + -ATPase Membran Plasma P-type ATPase disamping membentuk kompleks heterosubunit seperti Na + ,K + -ATPase dan H + ,K + -ATPase, yang tersusun dari -subunit katalitik dan - subunit glikosilasi, juga membentuk subunit tunggal ⑧⑨⑩ ❶ ⑦ ④ ⑧❷ ❸ ❷ ⑩ ⑨ ⑤ seperti Ca 2+ - ATPase membran plasma dan H + -ATPase membran plasma pada tanaman dan fungi. Meskipun demikian, semua P-type ATPase mempunyai subunit katalitik sekitar 100 kDa. Sifat molekuler H + -ATPase membran plasma tampak nyata setelah dilakukan purifikasi polipeptida 100 kDa dari fungi ❹ ❺ ❻ ⑨❼❽ ⑧ ⑥ ❺ ❺ ❻ ⑥ ❾❽ ❿➀❺④ ⑧ ➁ ❽ ❿ ❸ ④ , ❹ ⑥ ❺ ❺ ❻ ⑥ ❾❽ ❿ ➀❺④ ⑧ ❺ ④❾④ ➂ ⑨ ⑧⑨ ⑥ ④ dan ➃④ ❷ ❾❽ ⑧ ➁ ❽ ❾⑥ ❺ ❾⑥ ⑧⑧ ⑥ yang mampu membentuk -aspartyl phosphate intermediate dan terjadi aktivitas pemompaan proton yang tergantung ATP Rao Slayman 1993. Analisis hidropati dan analisis asam amino yang berada diantara domain N-terminal dan C-terminal menunjukkan bahwa H + -ATPase membran plasma mempunyai model 10 transmembran Gambar 5, walaupun model 8 atau 12 transmembran pernah diusulkan Moller ➄➅ ➆ ➇ . 1996; Serrano 1989; Sussman 1994; Rao Slayman 1993; MacLennan ➄➅ ➆ ➇ . 1997. Kontroversi mengenai jumlah transmembran telah diamati lebih lanjut berdasarkan analisis peta tiga dimensi H + -ATPase membran plasma dari ➈ . ➉ ➊ ➆ ➋➋ ➆ dengan menggunakan kristalografi elektron dua dimensi Auer ➄ ➅ ➆ ➇ . 1988. Data tersebut menunjukkan bahwa H + -ATPase membran plasma mempunyai 10 heliks transmembran dan empat domain sitoplasmik. H + -ATPase membran plasma pada Arabidopsis AHA2 Gambar 5 juga menunjukkan 10 heliks transmembran dan empat domain sitoplasma N-terminal, loop kecil sitoplasma, loop besar sitoplasma, dan C- terminal yang dibagi menjadi empat daerah fungsional, yaitu daerah A [ ➆ ➌➍➎ ➏ - ➅➄ ➊➌➍ ➎ ➆ ➇ ], daerah P [ ➐ ➑ ➏ ➋ ➐ ➑ ➏ ➊➍ ➇ ➆ ➅ ➍ ➏ ➎ ➋ ➍ ➅ ➄ ], daerah N [ ➎ ➒ ➉ ➇➄ ➏ ➅ ➍ ➓ ➄ ➔ ➍ ➎ ➓ ➍ ➎ → ➋ ➍ ➅➄ ] dan daerah R [ ➊ ➄ → ➒ ➇ ➆ ➅ ➏ ➊ y ➓ ➏ ➌ ➆ ➍➎ ] Palmgren 2001. Fungsi spesifik daerah N-terminal H + -ATPase membran plasma belum diketahui. Daerah loop kecil dan besar sitoplasma H + -ATPase membran plasma Gambar 5. Skema H + -ATPase membran plasma AHA2. Beberapa domain enzim A, P, N, dan R ditunjukkan oleh bagian yang diwarnai. M menunjukkan posisi transmembran 1 – 10. R-I: Region I; R-II: Region-II; 14-3-3: Situs pengikatan protein 14-3-3 Palmgren 2001. ➣ ↔ ↕ ➙ ↔ ➛ ➜ ➝ ➞↕ ➙ ➟ ➠➡ ↔ ➢ Loop kecil sitoplasma Loop besar sitoplasma Daerah C-terminal mengandung motif sekuen yang terkonservasi pada semua H + -ATPase membran plasma tanaman Gambar 5. Daerah loop kecil sitoplasma dari Na + ,K + -ATPase dan Ca 2+ -ATPase terlibat dalam perubahan konformasi selama silus katalitik Lutsenko Kaplan 1995. Mutan tertentu pada loop kecil H + -ATPase yeast menyebabkan ketidaksempurnaan dalam hubungan antara transport proton dan hidrolisis ATP Wach ➤➥ ➦ ➧ . 1996; Wang ➤➥ ➦ ➧ . 1996. Daerah ini mengandung motif sekuen TGES Gambar 6 yang terkonservasi pada semua pompa proton. Sekuen ini berperanan dalam aktivitas fosfatase. Daerah loop besar sitoplasma mengandung residu aspartat yang terfosforilasi selama siklus katalitik Briskin Poole 1983a, 1983b dan domain yang mengikat ATP yang teridentifikasi berdasarkan kesamaan sekuen dengan P-type ATPase lain dan berdasarkan pelabelan dengan fluorescein-5-isothiocyanat Pardo Slayman 1988. Motif sekuen yang terkonservasi di daerah ini adalah CSDKTGTLT yang berperanan dalam fosforilasi dan transduksi sinyal dan KGAP, DPPR, TGD, serta TGDGVNDAPSLKKADTGIA yang berperanan dalam pengikatan ATP Gambar 7. Bentuk ATP yang diikat dalam motif ini adalah Mg-ATP yang merupakan substrat dari H + -ATPase membran plasma Gambar 7. Daerah C-terminal dari H + -ATPase yeast mempanyai fungsi regulator Eraso Portillo 1994 dan berperanan sebagai domain auto-inhibitor pada tanaman Palmgren ➤➥ ➦ ➧ . 1990; Palmgren ➤ ➥ ➦ ➧ . 1991. ➨➩➫ ➭➯ ➲ ➳➯ ➵ ➨ ➸ ➺ ➲ ➳ ➻ ➼➽ ➯ ➾ Loop kecil sitoplasma Loop besar sitoplasma COOH Daerah C-terminal Membran e Sitosol Luar sel I II III IV V VI Gambar 6. Motif sekuen yang terkonservasi pada loop kecil dan besar sitoplasma H + -ATPase membran plasma ➚ . ➪ ➶➹ ➘ ➴ ➷ ➬ ➮➱ ➮✃❐ ➶➮ ➷ PMA2 Portillo, 2000. Informasi mengenai domain transmembran yang terlibat dalam transport kation telah dipelajari dari studi Ca 2+ -ATPase retikulum sarkoplasmik dan Na + , K + -ATPase, dimana transmembran 4, 5, dan 6 terlibat dalam transport kation MacLennan ❒❮ ❰ Ï . 1997; Jorgensen ❒❮ ❰ Ï . 1998. Sedangkan menurut Kühlbrandt ❒❮ ❰ Ï . 2002, transmembran yang terlibat dalam transport kation adalah transmembran 1, 2, 4, dan 5 Gambar 8. Siklus Katalitik Siklus katalitik yang diusulkan untuk H + -ATPase membran plasma mengacu pada model terakhir dari Na + ,K + -ATPase dan Ca 2+ -ATPase. Skema umum siklus reaksi H + -ATPase membran plasma seperti yang ditampilkan pada Gambar 8 menunjukkan bahwa enzim mempunyai dua status konformasi yang berbeda, yaitu E1 dan E2. Kedua konformasi tersebut mempunyai perbedaan afinitas kation yang ditranslokasi. Pompa proton diaktivasi oleh fosforilasi reversibel dari domain autoinhibitor R. Pada keadaan H + -ATPase E1 terbuka, proton mempunyai akses pada situs pengikatan proton pada domain M. Pengikatan proton menyebabkan perubahan konformasi yang dipancarkan melalui transmembran 4 dan 5 M4 dan Gambar 7. Situs pengikatan Mg-ATP substrat H + -ATPase membran plasma pada loop besar sitoplasma yang melibatkan motif III, IV, V, dan VI Serrano 1989 . Adenin Ribosa M5 menuju domain fosforilasi ATPase dan N-terminal P dan A sehingga terjadi reorientasi struktur domain-domain tersebut. Domain A menarik transmembran 2 M2 menuju suatu posisi yang memblok jalur proton pada situs pengikatannya di membran. Fosforilasi Asp 378 pada domain P menurunkan afinitas situs pengikatan proton pada membran sehingga proton dilepaskan keluar sel. Enzim kemudian kembali pada keadaan E1 melalui keadaan E2, dan memulai siklus pemompaan proton berikutnya. Vanadate, suatu inhibitor P-type ATPase, memblok enzim pada bentuk E2. Jika hara yang masuk dikurangi, maka domain autoinhibitor R mengalami defosforilasi dan menyerang domain N yang menyebabkan domain N tidak mampu mengantarkan ATP pada situs fosforilasinya Kühlbrandt ÐÑ Ò Ó . 2002. Gambar 8. Siklus reaksi H + -ATPase membran plasma. R: domain regulator; N: domain nukleotida; P: domain fosforilasi ATPase; A: domain N-terminal; M: domain transmembran. E1-P dan E2-P keadaan intermediet, enzim mengalami fosforilasi Kühlbrandt Ð Ñ Ò Ó . 2002 . Ô ÕÖ × ØÙ Ú ØÙ × ÛÜÝ Ú Û Ô ÕÖ × Þ Ö ØÙ Ú ØÙ × Û ÜÝ Ú Û Ú ÛÕ Ù ß ÜÝ Ú à Ý à Ö à á × Ý â Üã Ý × Ú Ö Ü Û â Ý ä ÕÛ Ø Regulasi Enzim Substrat enzim H + -ATPase membran plasma adalah MgATP. Pada tanaman, Km untuk MgATP bervariasi antara 0.3 dan 1.4 mM, pH optimum sekitar 6.6 dan aktivitasnya berkisar 1-2 μmol Piminmg Morsomme Boutry 2000. Karena enzim ini mempunyai banyak peranan fisiologi, maka kebutuhan akan ATP menjadi tinggi sehingga regulasi enzim ini terjadi sangat ketat. Aktivitas H + -ATPase membran plasma diregulasi oleh daerah ujung C- terminal domain regulatori C-terminal, R-domain sehingga domain ini disebut sebagai autoregulator. Studi yang dilakukan dengan penghilangan fragmen C- terminal H + -ATPase dengan protease menunjukkan peningkatan aktivitas H + - ATPase Palmgren å æ ç è . 1990; Palmgren å æ ç è . 1991. Hal ini menunjukkan bahwa modifikasi pasca-translasi secara in vivo menyebabkan R-domain tidak terikat pada situs pengikatannya dan terjadi peningkatan afinitasnya terhadap ligan Palmgren 1991. Beberapa bukti telah menjelaskan mekanisme molekuler yang melibatkan R-domain yang dapat mengaktivasi H + -ATPase membran plasma. Aktivitas enzim ini melibatkan protein 14-3-3, yang merupakan protein regulator yang mengikat sejumlah besar protein target dalam organisme eukariot Chung å æ ç è 1999; Finnie å æ ç è . 1999; Fu å æ ç è . 2000. Protein 14-3-3 hanya akan terikat pada residu Ser Muslin å æ ç è . 1996; Yaffe å æ ç è . 1997 atau Thr Fuglsang å æ ç è . 1999; Maudoux å æ ç è . 2000; Svennelid å æ ç è . 1999 yang mengalami fosforilasi pada situs target pengikatan 14-3-3. Pengikatan protein ini dengan R-domain terjadi secara langsung Fullone å æ ç è . 1998; Jahn å æ ç è . 1997; Oecking å æ ç è . 1997. Fosforilasi residu Thr pada R-domain Thr948 pada H + -ATPase bayam, Thr947 pada H + -ATPase Arabidopsis AHA2, dan Thr955 pada H + -ATPase é . ê èë ìí ç î ï ð ï ñ ò è ï ç PMA2 menyebabkan pembentukan situs pengikatan protein 14- 3-3 Fuglsang å æ ç è . 1999; Maudoux å æ ç è . 2000; Svennelid å æ ç è . 1999. Pengikatan protein 14-3-3 pada R-domain distabilkan oleh penambahan fusicoccin. Fusicoccin menginduksi pengikatan protein 14-3-3 dengan R-domain tanpa melibatkan fosfotreonin, tetapi pengikatannya kurang kuat. Pengikatan protein 14-3-3 pada R-domain dapat mengaktivasi protein H + - ATPase Baunsgaard å æ ç è . 1998; Maudoux å æ ç è . 2000; Svennelid å æ ç è . 1999. Residu treonin yang berada pada posisi R-domain adalah residu yang mengalami fosforilasi dan menjadi target pengikatan protein 14-3-3. Fosfotreonin yang terbentuk diproteksi dari defosforilasi oleh protein 14-3-3 Olsson ó ô õ ö . 1998. Agar protein ini menjadi tidak aktif, residu terfosforilasi pada R-domain mengalami defosforilasi oleh protein fosfatase. Pengaruh Logam terhadap Aktivitas Enzim Kerusakan sistem membran sel, khususnya membran plasma, adalah salah satu akibat utama dari aksi keracunan logam berat pada tanaman. Kerusakan integritas membran merupakan efek dari interaksi antara logam berat dengan gugus fungsional membran. Ion-ion logam dengan mudah dapat berikatan dengan gugus sulfhidril protein dan bagian hidroksil dari fosfolipid Devi Prasad 1999. Ion-ion tersebut juga dapat mengganti ion-ion kalsium pada membrane sel Breckle Kahle 1991. Semua peristiwa di atas dapat meningkatkan permiabilitas membran dan dapat menurunkan aktivitas transport spesifik sehingga merubah homeostasis ionik dan aktivitas banyak enzim penting untuk metabolisme sel dasar. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa aktivitas enzim menurun ketika mengalami stres logam berat Kennedy Gonsalves 1989; Fodor ó ô õ ö . 1995. Penurunan disebabkan karena logam dapat menyebabkan defosforilasi protein H + -ATPase membran plasma Janicka-Russak ó ô õ ö . 2008. Fungsi membran plasma dengan cepat berubah oleh adanya logam berat dengan konsentrasi tinggi dalam lingkungan. Gejala pertama kerusakan membran oleh logam berat adalah peningkatan permiabilitas membran Fodor ó ô õ ö . 1995 yang akibatnya dapat mengganggu keseimbangan ionik sel. Hal ini terutama disebabkan oleh perubahan komposisi lipid membran dan kejenuhan asam lemaknya de Vos ó ô õ ö . 1993. Aksi logam yang lebih kompleks yang mencakup berbagai peristiwa, antara lain oksidasi dan ikatan silang gugus tiol dari protein, menyebabkan penghambatan protein kunci di membran Harms ó ô õ ö . 1994. Salah satu dari enzim-enzim di membran yang berubah pada tanaman yang distres dengan logam adalah H + -ATPase membran plasma, suatu pompa proton yang bekerja pada membran plasma dan berperanan penting dalam regulasi homeostasis ion. Hal ini menunjukkan bahwa aktivitas hidrolitik H + -ATPase pada akar tanaman yang berbeda dihambat oleh Cd Kennedy Gonsalves 1989; Fodor ÷ ø ù ú . 1995 atau Cu Burzyński Kolano 2003. Perlakuan singkat mentimun dengan Cd atau Cu menurunkan hidrolisis ATP pada membran plasma sel-sel akar. Selanjutnya, transport proton yang tergantung ATP pada membran yang diisolasi dari akar yang distres dengan logam juga dihambat dengan cara yang sama. Pengaruh logam pada aktivitas hidrolitik dan transport tergantung pada konsentrasinya dalam larutan hara dan berkorelasi baik dengan akumulasi dalam simplas sel. Toksisitas logam berat dapat disebabkan oleh perubahan bentuk membran akibat perubahan kandungan lipidnya Burzyński Kolano 2003. Ros ÷ ø ù ú . 1992 dan Fodor ÷ ø ù ú . 1995 telah menunjukkan bahwa kejenuhan asam lemak pada membran tanaman yang ditumbuhkan pada media yang mengandung logam mengalami peningkatan, sedangkan level sterol secara signifikan mengalami penurunan. Komposisi lipid dan fluiditas membran merupakan salah satu faktor yang dengan nyata meregulasi H + -ATPase membran plasma Hernandez ÷ ø ù ú . 2002. Oleh karena itu, inaktivasi pompa proton dapat disebabkan oleh perubahan membran plasma akibat induksi logam. Penghambatan H + -ATPase membran plasma pada sel-sel akar dibawah stres logam berat dapat dihasilkan dari perubahan level transkripsi dan translasi. H + -ATPase membran plasma disandi oleh famili multigen karena ekspresi dari beberapa isoform secara differensial diregulasi oleh berbagai stres lingkungan. Oleh karena itu, dapat diasumsikan bahwa logam berat dapat mempengaruhi aktivitas pompa proton melalui perubahan ekspresi gen spesifik Janicka-Russak ÷ ø ù ú . 2008. Bukti telah ditunjukkan bahwa aktivitas H + -ATPase membran plasma dengan cepat diatur melalui mekanisme fosforilasidefosforilasi Kłobus Janicka-Russak 2004; Janicka-Russak Kłobus 2006. Aktivasi enzim terjadi karena forforilasi yang diikuti oleh pengikatan protein 13-3-3, sedangkan defosforilasi H + -ATPase oleh fosfatase spesifik termasuk PP2, dan pelepasan protein 14-3-3 dari kompleks, menginaktivasi enzim. Perubahan pompa proton membran plasma di bawah kondisi logam berat terjadi karena defosforilasi protein enzim. Adanya kalsium dalam larutan tidak mempengaruhi aksi logam terhadap fosforilasi H + -ATPase. Terjadinya fosforilasi protein tergantung pada jumlah ATP dalam sel. ATP mutlak diperlukan oleh H + -ATPase membran plasma untuk mengangkut proton sehingga jumlahnya dalam jaringan merupakan satu dari beberapa faktor pembatas tingkat aktivitas enzim H + -ATPase membran plasma. Perlakuan logam dapat menurunkan jumlah ATP di jaringan akar, yang menunjukkan bahwa selain intensitas fosforilasi H + -ATPase membran plasma, level ATP juga merupakan faktor penting dalam deaktivasi enzim ketika terjadi stres logam berat. Sumber utama ATP di jaringan akar adalah respirasi mitokondria. Hingga sekarang, pengaruh logam berat pada respirasi dan kandungan ATP pada sel tanaman belum dipelajari. Akan tetapi, dapat dijelaskan bahwa perlakuan tanaman dengan Cd secara nyata menurunkan konsumsi oksigen di akar Reese Roberts 1985 sehingga mengacaukan rantai transport elektron Kessler Brand, 1994. Jadi diduga bahwa perubahan respirasi dapat meningkatkan penghambatan aktivitas H + -ATPase membran plasma pada tanaman yang diperlakukan dengan logam. Aktivitas ATPase dipengaruhi oleh aksi logam berat melalui penurunan pengisian energi pada jaringan. Penurunan ini terjadi karena sejumlah ATP endogenous, substrat untuk H + -ATPase membran plasma, menurun ketika stres logam berat. ATP endogenous mempengaruhi aktivitas ATPase, tidak hanya sebagai substrat, tetapi juga melalui fungsinya sebagai aktivator. RNA Interference RNAi RNA interference RNAi adalah suatu proses pemotongan dan degradasi mRNA pasca-transkripsi yang dipicu oleh RNA utas ganda dsRNA yang menghasilkan ûüý þþ ÿ ✁✂ ✄☎ ✂✄ ÿ ✆ RNA siRNA berukuran 21 – 26 nukleotida Pickford Cogoni 2003; Vance Voucheret 2001; Waterhouse ✂ ✁ ý þ . 2001; Hannon 2002. RNAi berperanan dalam mempelajari fungsi suatu gen Butler ✂ ✁ ý þ . 2005; Dai ✂ ✁ ý þ . 2005; Krysan ✂✁ ý þ . 2004 dan menapis gen fungsional untuk mengidentifikasi target terapi pada hewan Pelkmans ✂ ✁ ý þ . 2005; Pelkmans Zerial 2005; Mackeigan ✂ ✁ ý þ . 2005; Shen ✂ ✁ ý þ . 2005b; Soutschek ✂ ✁ ý þ . 2004; Raoul ✂✁ ý þ . 2005. Proses RNAi ditemukan dalam banyak eukariot yang diawali oleh pemotongan RNA utas ganda dsRNA menjadi fragmen RNA utas ganda pendek berukuran 21-25 nukleotida, dengan 2 nukleotida ujung tidak berpasangan, oleh protein ribonuklease ✝ ✞ ✟✠ ✡ . Fragmen pendek tersebut disebut ☛☞✌ ✍✍ ✞ ✎ ✏✠ ✡ ✑✠ ✡ ✞ ✎ ✒ ✓✔ ✕ ☛ siRNAs. RNA utas ganda selanjutnya dipisahkan menjadi utas tunggal dan utas antisense diintegrasikan ke dalam kompleks RISC. Setelah integrasi, utas tunggal tersebut berpasangan dengan mRNA target dan menginduksi pemotongan mRNA oleh ✕ ✡✒ ✖ ✎ ✌ ✗ ✏ ✠ , komponen katalitik dari kompleks RISC ✓✔ ✕ ✘ ✎ ✙ ✗ ✟✠ ✙ ✚ ✞ ✍✠ ✎ ✟ ✞ ✎ ✒ ✛ ✖ ☞✜ ✍✠ x Ahlquist 2002. Transformasi tanaman dengan menggunakan sebuah vektor yang dapat membentuk dsRNA dapat digunakan untuk meniadakan ekspresi gen dan siRNA dapat diamati dalam tanaman transgenik tersebut sebagai hasil dari proses RNAi Wesley ✠ ✏ ✌ ✍ . 2001; Klahre ✠✏ ✌ ✍ . 2002. Vektor RNAi yang indusibel dan spesifik jaringan telah dikembangkan dan sesuai untuk analisis fungsi gen Islam ✠ ✏ ✌ ✍ . 2005. Vektor RNAi dapat dikonstruksi dengan menggunakan sistem pengklonan GATEWAY TM . Teknologi GATEWAY TM Invitrogen, Carlsbad, CA; URL: http:www.invitrogen.com.contentsfsmanualsgatewayman.pdf berdasar pada reaksi rekombinasi situs spesifik dari fage λ. Teknologi tersebut sangat memudahkan untuk mengkonstruksi vektor RNAi dibandingkan dengan teknik pengklonan konvensional. Pada teknik baru ini, sekuen pemicu diperoleh dengan amplifikasi menggunakan PCR dan kemudian dengan mudah diklon ke dalam vektor RNAi sesuai dengan orientasi yang diinginkan. Smith ✠ ✏ ✌ ✍ . 2000 melaporkan bahwa vektor yang membawa RNA ☛ ✠✍ ✑ - ✟ ✖ ☞✜ ✍✠ ☞ ✠ ✎ ✏ ✌ ✡ y yang mengandung intron merupakan vektor RNAi yang paling efisien. Intron yang menghubungkan kedua RNA yang saling komplemen dapat meningkatkan efisiensi silencing. Ekspresi RNAi diatur dengan menggunakan promoter konstitutif, yaitu CaMV35S. Sekuen homolog berulang terbalik dari gen target sangat mudah diklon ke dalam vektor RNAi tersebut menggunakan teknologi GATEWAY TM Wesley ✠ ✏ ✌ ✍ . 2001; Karimi ✠✏ ✌ ✍ . 2002; Helliwell Waterhouse 2003; Helliwell Waterhouse 2005. Sebuah vektor RNAi GATEWAY TM yang sama yang membawa promoter ✗ ✢ ✞ ✣ ✗ ✞✏✞ ✎ ✤ jagung dan penghubung ✒ ✗ ☛✕ telah dikembangkan oleh Miki Shimamoto 2004 dan menunjukkan efektivitas yang tinggi dalam mengganggu ekspresi gen spesifik dan banyak anggota famili gen tertentu. Gangguan ekspresi gen ini dapat terjadi dengan mengklon sekuen spesifik gen atau sekuen spesifik gen tandem atau sekuen gen yang terkonservasi tinggi ke dalam vektor RNAi untuk menganalisis gen PDS phytoene desaturase padi dan famili gen small GTPase Rac1 Miki ✥✦ ✧ ★ . 2005. Vektor tersebut sangat efektif dalam menekan ekspresi mRNA target, yaitu sekitar 85 hingga 100. Bagian dari disertasi ini telah dipublikasikan pada Jurnal Agronomi Indonesia 381: 67-74 2010 I ✩ ✪✫ ✬✩ I D ✬✭ ✮ E ✭ G ✯ ✫✪ ✭ ✬ ✭ F ✰ ✬ G ✱ E ✭ ✲ D ✭✬ GE ✭ ✮ E ✭✳ ✬✭ ✴ I H ✵ ✶ ✬✷ ✮ ✸✹ ✺ ✱ E ✱ BRAN P ✫ A ✩ MA DAR ✻ M ✼ la ✽✾ oma mala ✿❀ ✾ h ❁ ic ❂ m ✫❃ Abstrak ❄ e ❅ ast ❆ ❇ a ❇ a ❅ abathricu ❇ L. adalah tumbuhan yang tumbuh baik pada tanah asam dengan kelarutan aluminium tinggi. Salah satu protein penting dalam detoksifikasi cekaman asam dan aluminium tinggi adalah H + -ATPase membran plasma yang disandi oleh gen ❈ ❇ a. Tujuan penelitian ini adalah mengisolasi dan mengklon fragmen cDNA ❄❇❈ ❇ a yang menyandikan protein H + -ATPase membran plasma dari ❄ e ❅ ast ❆ ❇ a ❇ a ❅ abathricu ❇ L. cDNA total telah berhasil disintesis dari RNA total sebagai cetakan dengan menggunakan transkripsi balik. Fragmen cDNA ❄ ❇❈ ❇ a berhasil diisolasi dengan teknik PCR ❉ ❆ ❅❊ ❇ erase Chai ❋ ●❍ acti ❆ ❋ dan menggunakan cDNA total sebagai cetakan dan primer ❈ ❇ a yang didesain dari daerah terkonservasi pada semua H + -ATPase membran plasma. Fragmen ini telah disisipkan ke dalam pGEM-T Easy dan plasmid rekombinan telah diintroduksikan ke E ■ c ❆ ❅ i DH5. Berdasarkan analisis mutan nukleotida menunjukkan bahwa panjang fragmen ❄❇❈ ❇ a adalah 806 pb dan menyandikan 268 asam amino. Analisis kesejajaran lokal berdasarkan urutan nukleotida mRNA menunjukkan bahwa fragmen ❄❇❈ ❇ a mempunyai kemiripan 81 dengan bagian ❈ ❇ a dari ❏ ❍ sba ❋ ❑ a r ❆ ▲ trata, ▼ ug ❅ a ❋ ▲ regia dan ❉ ◆ u ❋ ❖ ▲ ❈ ❍ rsica. Berdasarkan deduksi urutan asam amino, MmPMA mempunyai kemiripan 94 dengan bagian PMA dari ▼ ug ❅ a ❋ ▲ regia; 93 dengan bagian PMA dari ❏ esba ❋ ❑ a r ❆ ▲ trata dan Arabid ❆ ❈ ▲ is tha ❅ ia ❋ P . Fragmen MmPMA mempunyai domain intermediet fosforilasi DKTGT dan domain pengikatan ATP KGAP, DPPR, MITGD, and GDGVN. Abstract ❄ e ❅ ast ❆ ❇ a ❇ a ❅ abathricu ❇ L. grows well in acid soil with high level of soluble aluminum. One of the important proteins in the detoxifying acid and aluminum stress is a plasma membrane H + -ATPase protein encoded by ❈ ❇ a gene. The objective of this research was to isolate and clone the cDNA fragment of ❄ ❇❈ ❇ a encoding plasma membrane H + -ATPase from ❄■ ❇ a ❅ abathricu ❇ L. By reverse transcription, total cDNA had been synthesized from the total RNA as template. The fragment of ❄ ❇❈ ❇ a cDNA had been successfully isolated by PCR by using total cDNA as template and ❈ ❇ a primer designed from conserved region of corresponding gene. This fragment had been successfully inserted into pGEM- T Easy and the recombinant plasmid was successfully introduced into E ■ c ❆ ❅ i DH5. Nucleotide sequence analysis showed that the length of ❄❇❈ ❇ a fragment is 806 bp encoding 268 amino acids. Local alignment analysis based on nucleotide of mRNA showed that ❄ ❇❈ ❇ a fragment was 81 identical to part of ❈ ❇ a of ❏ ❍ sba ❋ ❑ a r ❆ ▲ trata, ▼ ug ❅ a ❋ ▲ regia, and ❉ ◆ u ❋ ❖ ▲ ❈ ❍ rsica. Based on deduced amino acid sequence, MmPMA was 94 identical to part of PMA of ▼ ug ❅ a ❋ ▲ regia; 93 to PMA of ❏ ❍ sba ❋ ❑ a r ❆ ▲ trata, and Arabid ❆ ❈ ▲ is tha ❅ ia ❋ P . MmPMA fragment has phosphorylation intermediate domain DKTGT and ATP binding domain KGAP, DPPR, MITGD, and GDGVN. Keywords: Isolation, ❄■ ❇ a ❅ abathricu ❇ L., ❄❇❈ ❇ a fragment, sequencing. ❙❚ n ❯❱ ❲ ulu ❱ n ❳❨❩ ❨ ❬ ❨❭ ❨❪ ❫ ❴ ❬ ❵ ❨❬ ❛ ❨❬ ❫ ❜ ❬ ❵ ❨❬ ❨ ❝❜ ❪ ❞ ❬ ❞❜ ❪ ❡❞ ❬ ❵ ❵ ❞ ❡ ❴❢ ❭ ❴❣ ❨ ❢ ❝❜ ❨ ❭ ❫ ❞ ❤ ❬ ❫ ✐ ❬ ❴❭❞ ❨ ❥ ❳ ❨ ❩ ❨❬ ❞ ❬ ❞ ❪ ❴ ❪ ❦ ❜ ❬ ❧ ❨❞ ❦ ✐ ❡ ❴ ❬ ❭ ❞ ❧ ❨❬ ❵ ❭ ❨❬ ❵ ❨❡ ❣ ❴ ❭ ❨ ❢ ❜ ❬ ❡ ❜ ❛ ❪ ❴ ❬ ❞ ❬ ❵ ❛ ❨ ❡ ❛ ❨ ❬ ❦ ❢ ✐ ❫ ❜ ❛ ❭❞ ❦ ❴ ❢ ❡ ❨ ❬ ❞ ❨❬ ❥ ♠ ❛ ❨ ❬ ❡ ❴❡ ❨ ❦ ❞ ♥ ❛ ❴❣ ❨❬ ❧ ❨❛ ❨❬ ❡ ❨❬ ❨ ❪ ❨❬ ❡❞ ❫ ❨❛ ❫ ❨❦ ❨ ❡ ❡❜ ❪❣ ❜ ❩ ✐ ❦ ❡ ❞❪ ❨❝ ❦ ❨❫ ❨ ❛ ✐ ❬ ❫ ❞ ❭❞ ❝❨❩ ❨ ❬ ❨ ❭ ❨❪ ❫ ❴❬ ❵ ❨ ❬ ❛ ❴ ❝ ❨❢ ❜ ❡ ❨ ❬ ♠ ❝ ❧ ❨ ❬ ❵ ❡ ❞ ❬ ❵ ❵ ❞❥ ♦❨❫ ❨ ❛ ✐ ❬ ❫ ❞ ❭❞ ❞ ❬ ❞ ♥ ❦ ❢ ✐ ❭ ❴ ❭ ❦ ❴❪❣ ❴❝ ❨ ❩ ❨❬ ❫ ❨❬ ❦ ❴❪ ❨❬ ♣ ❨ ❬ ❵ ❨ ❬ ❭ ❴❝ ❡ ❴ ❢ ❵ ❨ ❬ ❵ ❵ ❜ ❭ ❴❩ ❞ ❬ ❵ ❵ ❨ ❨ ❛ ❨❢ ❡ ❨ ❬ ❨❪ ❨❬ ❪ ❴ ❬ ♣ ❨ ❫ ❞ ❦ ❴ ❬ ❫ ❴❛ ❫ ❨❬ ❪ ❴❬ ❴❣ ❨ ❝ ❛ ❩ ❜ ❭❜ ❭ ❬ ❧ ❨ ❦ ❨❫ ❨ ❨ ❛ ❨❢ ❜ ❡ ❨❪ ❨ ♦ ❢ ❞ ❩ ❨ ❫ ❞ et a q r s ❘ ❘ t ✉ ❥ ♠ ❛ ❞ ❣ ❨❡ ❬ ❧ ❨ ♥ ❦ ❴ ❢ ❡❜ ❪❣ ❜ ❩ ❨ ❬ ❫ ❨❬ ❦ ❴❢ ❛ ❴❪❣ ❨❬ ❵ ❨❬ ❨❛ ❨❢ ❡ ❴❢ ❩ ❨ ❪ ❣ ❨❡ ♥ ❫ ❨ ❬ ❫ ❨❝ ❨ ❪ ♣ ❨ ❬ ❵ ❛ ❨ ❦ ❨❬ ♣ ❨ ❬ ❵ ❨ ❛ ❨ ❬ ❪ ❴ ❪ ❦ ❴ ❬ ❵ ❨ ❢ ❜ ❩ ❞ ❦ ❴ ❢ ❡ ❜ ❪❣ ❜ ❩ ❨❬ ❫ ❨❬ ❦ ❴ ❢ ❛ ❴❪❣ ❨❬ ❵ ❨❬ ❣ ❨ ❵ ❞ ❨ ❬ ❡ ❨ ♣ ❜ ❛ ❡ ❨ ❬ ❨ ❪ ❨ ❬ ❥ ✈ ❨ ❪ ❜ ❬ ❫ ❴❪❞ ❛ ❞ ❨❬ ♥ ❨ ❫ ❨ ❣ ❴❣ ❴ ❢ ❨ ❦ ❨ ❡❜ ❪❣ ❜ ❩ ❨❬ ❫ ❨ ❦ ❨❡ ❡ ❜ ❪❣ ❜ ❩ ❫ ❴❬ ❵ ❨ ❬ ❣ ❨❞❛ ❦ ❨❫ ❨ ❡ ❨ ❬ ❨❩ ❨❭ ❨ ❪ ❭ ❴ ❩ ❞ ❬ ❵ ❵ ❨ ❪ ❴❬ ♣ ❨ ❫ ❞ ❞ ❬ ❫ ❞ ❛ ❨❡✐ ❢ ❡ ❨❬ ❨ ❩ ❨ ❭ ❨❪ ♥ ❫ ❨❬ ❫ ❨ ❦ ❨❡ ❪ ❴ ❬ ❵ ❨ ❛ ❜ ❪❜ ❝❨❭❞ ❨ ❝ ❜ ❪❞ ❬ ❞ ❜ ❪ ❫ ❨ ❝❨❪ ♣ ❜ ❪ ❝ ❨ ❩ ❡❞ ❬ ❵ ❵ ❞ ❦ ❨❫ ❨ ❫ ❨❜ ❬ ❫ ❨❬ ❨❛ ❨ ❢ ❭ ❴ ❩ ❞ ❬ ❵ ❵ ❨ ❫ ❞ ❭ ❴ ❣ ❜ ❡ ❭ ❴❣ ❨ ❵ ❨❞ ❨ ❛ ❜ ❪❜ ❝❨❡✐ ❢ ♠ ❝ ✇ ❨ ❡ ❨❬ ❨ ❣ ❴ et a q❥ ① ② ② s ③ ✇ ❨ ❡ ❨ ❬ ❨❣ ❴ ④ ❭ ❨❛ ❞ ① ② ② ① ❣ ❥ ♦ ❨❫ ❨ ❦ ⑤ ⑥ ❥ ② ♥ ❦ ❴❢ ❡ ❜ ❪ ❣ ❜ ❩ ❨❬ ❨ ❛ ❨❢ ⑦ e q ast ⑧ ⑨ a ⑨ a q abathricu ⑨ ❳ ❥ ❡ ❞❫ ❨ ❛ ❡ ❴❢ ❵ ❨ ❬ ❵ ❵ ❜ ♥ ❛ ❴ ⑩ ❜ ❨❝❞ ❦ ❨ ❫ ❨ ❦ ⑤ ◗ ❥ ② ❧ ❨❬ ❵ ❩ ❨ ❬ ❧ ❨ ❨❫ ❨ ❫ ❞ ❝❨❣ ✐ ❢ ❨ ❡ ✐ ❢ ❞❜ ❪ ❶ ❜ ❩ ❨❴❪❞ ❬ ① ② ② ❷ ✉ ❥ ❶ ❴ ❬ ❜ ❢ ❜ ❡ ✇ ❨❡ ❨❬ ❨❣ ❴ et a q ❥ s ❘ ❘ ❷ ❨ ♥ ⑦ r ⑨ a q abathricu ⑨ ❳ ❥ ❪ ❨❪ ❦ ❜ ❪ ❴❬ ❵ ❨❛ ❜ ❪ ❜ ❝ ❨ ❭❞ ❝ ❴ ❣ ❞❩ ❫ ❨ ❢ ❞ s ⑥ ❥ ⑥ ❵ ♠ ❝❸❛ ❵ ❫ ❨ ❜ ❬ ❡ ❜ ❨ ❫ ❨ ❬ ❝ ❴ ❣ ❞❩ ❫ ❨❢ ❞ ❷ ❵ ♠ ❝❸❛ ❵ ❫ ❨❜ ❬ ❪❜ ❫ ❨ ❡ ❨❬ ❦ ❨ ❪ ❴❬ ❵ ❨❝ ❨ ❪❞ ❛ ❴ ❢ ❨ ⑩ ❜ ❬ ❨❬ ❥ ♠ ❬ ❨❝❞❭❞ ❭ ❨ ❛ ❜ ❪❜ ❝❨❭❞ ♠ ❝ ❦ ❨ ❫ ❨ ⑦ r affi ❹ ❺ ❻❥ ❻✐ ❬ ❥ ❭❞ ❬ ✐ ❬ ❞❪ ❫ ❴❬ ❵ ❨❬ ⑦ r ⑨ a q abathricu ⑨ ❳ ❥ ❧ ❨❬ ❵ ❪ ❴❬ ❫ ❨❦ ❨❡ ⑩ ❴❛ ❨ ❪ ❨ ❬ ◗ ❥ ① ❪ ❶ ♠ ❝ ❦ ❨❫ ❨ ❦ ⑤ ⑥ ❫ ❨ ❝❨❪ ❪ ❴❫ ❞ ❨ ⑩ ❨❞ ❢ ❪ ❴ ❬ ❜ ❬ ♣ ❜ ❛ ❛ ❨❬ ❣ ❨ ❩ ❼ ❨ ⑦ r affi ❹ ❺ ❻❥ ❻✐ ❬ ❥ ❪ ❨ ❪ ❦ ❜ ❪ ❴❬ ❵ ❨ ❛ ❜ ❪❜ ❝❨❭❞ ❷ ❥ ❷ s ❵ ♠ ❝ ❸ ❛ ❵ ❫ ❨❜ ❬ ❡ ❜ ❨ ❭ ❴❡ ❴ ❝❨❩ ① ❣ ❜ ❝❨ ❬ ❦ ❴ ❢ ❝❨❛ ❜ ❨ ❬ ❶ ❜ ❡❞ ❨ ❭ ❨ ❢ ❞ ① ② ② ❷ ✉ ❥ ❽❜ ❪❣ ❜ ❩ ❨❬ ⑦ r ⑨ a q abathricu ⑨ ❳ ❥ ❫ ❞❫ ❜ ❵ ❨ ❪ ❴❪ ❦ ❜ ❬ ❧ ❨ ❞ ❭❞ ❭❡ ❴❪ ❫ ❴❡✐ ❛ ❭ ❞ ❾ ❞❛ ❨❭❞ ♠ ❝ ❭ ❴ ❩ ❞ ❬ ❵ ❵ ❨ ❶ ❴ ❝❨❭❡✐ ❪ ❨ ❫ ❨❦ ❨❡ ❫ ❞ ❵ ❜ ❬ ❨ ❛ ❨ ❬ ❭ ❴ ❣ ❨❵ ❨ ❞ ❭❜ ❪❣ ❴ ❢ ❵ ❴ ❬ ❜ ❬ ❡ ❜ ❛ ❡✐ ❝❴ ❢ ❨❬ ❭❞ ❡ ❨ ❬ ❨❪ ❨ ❬ ❡ ❴ ❢ ❩ ❨❫ ❨ ❦ ❡ ❨❬ ❨ ❩ ❨ ❭ ❨❪ ❫ ❨ ❬ ♠ ❝ ❡ ❞ ❬ ❵ ❵ ❞ ❥ ❿❨ ❝❨❩ ❭ ❨❡❜ ❵ ❴ ❬ ❧ ❨❬ ❵ ❡ ❴❢ ❝❞❣ ❨ ❡ ❫ ❨ ❝❨❪ ❡✐ ❝❴ ❢ ❨❬ ❭❞ ❡ ❨❬ ❨ ❪ ❨❬ ❡ ❴ ❢ ❩ ❨❫ ❨ ❦ ❡ ❨❬ ❨ ❩ ❨ ❭ ❨❪ ❫ ❨❬ ♠ ❝ ❡ ❞ ❬ ❵ ❵ ❞ ❨ ❫ ❨❝ ❨ ❩ ❵ ❴ ❬ ❦ ❴ ❬ ❧ ❨❬ ❫ ❞ ⑤ ➀ ➁ ♠ ❽♦ ❨ ❭ ❴ ❪ ❴❪❣ ❢ ❨❬ ❦ ❝❨❭❪ ❨ ♠ ❬ ❼ ❨ ❢ s ❘ ❘ ❘ ③ ♠ ❩ ❬ et a q❥ ① ② ② ⑥ ✉ ❥ ⑤ ➀ ➁ ♠ ❽♦ ❨❭ ❴ ❪ ❴ ❪❣ ❢ ❨❬ ❦ ❝ ❨ ❭ ❪ ❨ ❪ ❴ ❢ ❜ ❦ ❨ ❛ ❨ ❬ ❦ ❢ ✐ ❡ ❴ ❞ ❬ ❧ ❨❬ ❵ ❦ ❨❝❞ ❬ ❵ ❪ ❴❝❞❪ ❦ ❨❩ ❦ ❨ ❫ ❨ ❪ ❴❪❣ ❢ ❨❬ ❦ ❝ ❨ ❭❪ ❨ ❫ ❨❬ ❡ ❴ ❢ ❝❞ ❣ ❨❡ ❫ ❨❝❨❪ ❣ ❨ ❬ ❧ ❨❛ ❢ ❴ ❭ ❦ ✐ ❬ ❭ ⑩ ❴ ❛ ❨ ❪ ❨❬ ❥ ♦ ❢ ✐ ❡ ❴❞ ❬ ❞ ❬ ❞ ❪ ❴ ❬ ❵ ❨ ❛ ❡ ❞ ➂ ❨ ❭ ❞ ❭ ❴❢ ❨❬ ❵ ❛ ❨❞ ❨ ❬ ❡ ❢ ❨❬ ❭ ❦ ✐ ❢ ❡ ❴ ❢ ❭ ❴ ❛ ❜ ❬ ❫ ❴ ❢ ❫ ❴❬ ❵ ❨❬ ❪ ❴ ❬ ❵ ❩ ❨ ❭ ❞ ❝❛ ❨ ❬ ➃ ➄ ⑧ t ⑧ ❹ ⑨ ⑧ ➅ ive f ⑧ ➄ ce ❧ ❨ ❬ ❵ ❫ ❨ ❦ ❨❡ ❪ ❴❬ ❵ ❵ ❴ ❢ ❨ ❛ ❛ ❨❬ ❣ ❨ ❬ ❧ ❨ ❛ ❭✐ ❝ ❜ ❡ ♥ ❨ ❭❞ ❪❞ ❝❨ ❡ ♥ ❨❡ ❨❜ ❪ ❴❡ ❨❣ ✐ ❝❞❡ ❪ ❴ ❝ ❞ ❬ ❡ ❨ ❭❞ ❪ ❴ ❪❣ ❢ ❨ ❬ ❦ ❝ ❨ ❭ ❪ ❨ ❿ ❜ ❭❭❪ ❨❬ s ❘ ❘ ⑥ ✉ ❥ ♦ ❢ ✐ ❡ ❴❞ ❬ ❞ ❬ ❞ ❡ ❴ ❢ ❝ ❞ ❣ ❨❡ ❦ ❜ ❝ ❨ ❫ ❨❝ ❨ ❪ ❩ ✐ ❪ ❴ ✐ ❭❡ ❨ ❭❞ ❭ ❦ ⑤ ❭❞❡ ✐ ❦ ❝ ❨ ❭ ❪ ❨ ❡ ❨ ❬ ❨❪ ❨ ❬ ➆ ✐ ❜ ❬ ❵ et a q ❥ s ❘ ❘ ❷ ✉ ❥ ➉➊ ➋ ➊ ➌ ➍➎ ➍ ➏ ➍➐ ➑ ➍➒ ➓➊ ➒ ➓➍ ➒ ➔ ➊➏ → ➣ ➑ ↔ ➑→ ↕→ ➔ ➑ ➍➙ ➍ ➎ ➓➍↔ ➑ ➛➊ ↕➍↔ ➓ → ➜ ➍ ➎ ➍ ➙ ➍ ➓➍ ➒ ➍➝ ➍ ↔ ➍➜ ➙ ➊ ➒ ➔ ➍ ➒ ➏ ➊ ↕ ➍ ➌ ➞ ➓➍ ➒ ➟ ↕ ➠ ➍➒ ➔ ➓ ➑➒ ➔ ➔ ➑ ➓➊ ↕ ➍ ➝ ➙ ➑ ↕➍➏ ➞ ➏ ➍➒ ➡↔ ➍ ➏ ➑ et a ➢➤ ➥ ➦ ➦ ➧ ➨ ➩ ➍➓ ➍➒ ➍➋ ➊ ➡↔ ➍ ➏ ➑ ➫ ➈ ➈ ➫ ➋ ➭ ↔➊➙ ➍➒ ➔ ➏ ➍ ➒ ➏ ➍ ➐ ➑➍➒ ↔ ➊➯ ➍➌ ➍ ➜→ ↕➊➏ ➞ ↕➊➌ ➓ ➊ ↕ ➍ ➝ ➙ ➑↕➍ ➏ ➞ ➏ ➍➒ ➙ ➊ ➒ ➔ ➍➒ ➜➊ ➒ ➔ ➑ ↔→ ↕ ➍ ↔ ➑ ➙ ➍➒ ➜➊ ➒ ➔ ➏ ➍➌ ➍ ➏ ➓ ➊➌ ➑ ↔ ➍ ↔ ➑ ➔ ➊ ➒ ➲ ➔ ➊ ➒ ➠ ➍➒ ➔ ➓ ➊➌ ↕➑➋ ➍➓ ➙ ➍↕➍➜ ➓ → ↕ ➊➌ ➍➒ ↔ ➑ ➟ ↕ ➙ ➍➒ ➍ ↔ ➍ ➜ ➭ ➍ ➒ ➓➍➌ ➍ ↕➍ ➑➒ ➳ u ➢ tidrug resista ➵ ce ass ➸ ciated ➺ r ➸ tei ➵ ➛➻ ➼ ➽ ➞ ➝ ➍ ➌ ↔ → ➒ → et a ➢➤ ➫ ➈ ➈ ➧ ➭ ➙ ➍➒ ➳ eta ➢ ➢➸ thi ➸ ➵ ei ➵ t ➾ ➺ e ➫ ➚ t ➫ ➽ ➞ ➝ ➍➌ ↔→ ➒ → et a ➢➤ ➫ ➈ ➈ ➦ ➤ ➪ ➍➜➞ ➒ ↔ ➍➜➎ ➍ ➑ ↔ ➍➍ ➓ ➑ ➒ ➑ ➋ ➊ ↕➞ ➜ ➍ ➙ ➍ ➑➒ ➣ → ➌ ➜ ➍↔ ➑ ➓ ➊ ➒ ➓ ➍➒ ➔ ➔ ➊ ➒ ➎ ➊ ➒ ➠ ➍ ➒ ➙ ➑ ➶ ➹ ➲ ➟➘ ➼➍ ↔➊ ➜➊ ➜ ➋ ➌ ➍➒ ➎ ↕ ➍ ↔ ➜ ➍ ➙ ➍➌ ➑ ➛➊ ↕ ➍ ↔ ➓→ ➜ ➍ ➠ ➍➒ ➔ ➙ ➑ ➙ ➞ ➔ ➍ ➐➞ ➔ ➍ ➓➊➌ ↕➑ ➋ ➍➓ ➙ ➍↕ ➍ ➜ ➓→ ↕➊➌ ➍ ➒ ↔ ➑ ➓ ➊ ➌ ➝ ➍➙ ➍➎ ➯ ➊➏ ➍ ➜ ➍ ➒ ➍↔ ➍ ➜ ➙ ➍ ➒ ➟ ↕➤ ➴ ➊ ➒ ➑➒ ➑ ➜ ➊➌ ➞ ➎ ➍➏ ➍ ➒ ➔ ➊ ➒ ➠ ➍ ➒ ➔ ➋ ➊➌ ➞ ➏ ➞ ➌ ➍ ➒ ➋ ➊↔ ➍➌ ➭ ➠ ➍ ➑➓➞ ↔ ➊➏ ➑➓ ➍ ➌ ➷ ➬ ➈ ➈ ➎ ➋ ➓ ➊ ➌ ➜ ➍ ↔➞ ➏ ➷ ➮ ➙ ➍ ➒ ➬ ’ u ➵ tra ➵ ➱ ➢ ated regi ➸ ➵ ✃ ➘➻ ↔➊ ➝ ➑ ➒ ➔ ➔ ➍ ↔ ➍ ➒ ➔ ➍➓ ↔➞ ↕ ➑ ➓ ➞ ➒ ➓➞ ➏ ➙ ➑ ➑ ↔ → ↕ ➍ ↔ ➑ ➤ ➡ ↕ ➊ ➝ ➏ ➍➌ ➊ ➒ ➍ ➑ ➓ ➞ ➭ ➑ ↔→ ↕➍↔ ➑ ➣ ➌ ➍➔ ➜ ➊ ➒ ➚ ➳➺ ➳ a ➎ ➊➌ ↕➞ ➙ ➑↕ ➍➏ ➞ ➏ ➍➒ ➠ ➍ ➒ ➔ ➒ ➍ ➒ ➓ ➑➒ ➠ ➍ ➍ ➏ ➍➒ ➙ ➑➔ ➞ ➒ ➍ ➏ ➍ ➒ ↔➊ ↕ ➍➑ ➒ ➞ ➒ ➓➞ ➏ ➜➊ ➒ ➙ ➊↔ ➍ ➑ ➒ ➎ ➌ ➑➜➊➌ ↔➎ ➊ ↔ ➑ ➣ ➑➏ ➙ ➍↕ ➍ ➜ ➜➊ ➒ ➔ ➑ ↔ → ↕ ➍ ↔ ➑ ➔ ➊ ➒ ➞ ➓➞ ➝ fu ➢➢ ➢ e ➵ ❐ ❒ h ge ➵ e ➭ ➐ ➞ ➔ ➍ ➞ ➒ ➓ ➞ ➏ ➜➊ ➒ ➔ ➞ ➐➑ ➓ ➑➒ ➔ ➏ ➍ ➓ ➊ ➏ ↔ ➎ ➌ ➊ ↔ ➑➒ ➠ ➍ ➎ ➍ ➙ ➍ ➓➍➒ ➍➜ ➍ ➒ ➤ ❮ ➍↕ ➍ ➜ ➎ ➊ ➒ ➊ ↕➑ ➓➑ ➍➒ ➑ ➒ ➑➭ ➣ ➌ ➍ ➔ ➜➊ ➒ ➔ ➊ ➒ ➎ ➊ ➒ ➠ ➍➒ ➙ ➑ ➶ ➹ ➲ ➟ ➘➼➍↔➊ ➜➊➜ ➋ ➌ ➍ ➒ ➎ ↕ ➍ ↔➜ ➍ ➺ ❰ Ï tia ➢ ➢ e ➵ ❐ ❒ h ➓➊ ↕ ➍ ➝ ➙ ➑ ➑↔→ ↕ ➍ ↔ ➑ ➙ ➍➌ ➑ ➚ Ð ➳ a ➢ abathricu ➳ Ñ ➤ ➜ ➊ ↕ ➍↕➞ ➑ ➓ ➌ ➍ ➒ ↔➏ ➌ ➑➎ ↔ ➑ ➋ ➍ ↕➑➏ ➠ ➍➒ ➔ ➙ ➑ ➑ ➏ ➞ ➓➑ ➼ Ò ➻ Ó➸ ➢ ➾ ➳ erase Chai ➵ Ô eacti ➸ ➵ ➙ ➊ ➒ ➔ ➍ ➒ ➜➊ ➒ ➔ ➔ ➞ ➒ ➍➏ ➍➒ ➎ ➌ ➑➜➊ ➌ ↔ ➎ ➊ ↔ ➑ ➣ ➑➏ ➤ ➘➞ ➐➞ ➍➒ ➎ ➊ ➒ ➊ ↕ ➑➓➑ ➍ ➒ ➑➒ ➑ ➍ ➙ ➍ ↕➍➝ ➜➊ ➒ ➔ ➑↔→ ↕➍↔ ➑ ➙ ➍➒ ➜ ➊ ➒ ➔ ➏ ↕→ ➒ ➣ ➌ ➍ ➔ ➜➊ ➒ ➯ ❮ ➪ ➟ ➚ ➳➺ ➳ a ➠ ➍ ➒ ➔ ➜➊ ➒ ➠ ➍➒ ➙ ➑ ➎ ➌ → ➓ ➊ ➑➒ ➶ ➹ ➲ ➟ ➘➼➍↔➊ ➜➊➜ ➋ ➌ ➍ ➒ ➎ ↕ ➍ ↔➜ ➍ ➙ ➍ ➌ ➑ ➚ e ➢ ast ➸ ➳ a ➳ a ➢ abathricu ➳ Ñ ➤ Bahan dan Metode ➉ ➍ ➝ ➍ ➒ ➓➍ ➒ ➍ ➜ ➍ ➒ ➠ ➍ ➒ ➔ ➙ ➑➔ ➞ ➒ ➍➏ ➍ ➒ ➍➙ ➍ ↕➍➝ ➙ ➍➞ ➒ ÕÖ× Ø Ö Ù ÚÛ Ü Ý Þ a ß abathricu Þ à á ➠ ➍ ➒ ➔ ➓ ➞ ➜ ➋ ➞ ➝ ➙ ➑ ↕➍➝ ➍ ➒ ➍ ↔ ➍➜ â ➍ ↔ ➑➒ ➔ ➍ ➉ → ➔ → ➌ â ➍ã ➍ ➉ ➍➌ ➍ ➓➤ ➼ ➌ ➑ ➜ ➊➌ ↔➎ ➊↔ ➑➣ ➑ ➏ ➞ ➒ ➓➞ ➏ ➜➊ ➒ ➔ ➑ ↔→ ↕ ➍ ↔ ➑ ➣ ➌ ➍➔ ➜➊ ➒ ➔ ➊ ➒ ➎ ➊ ➒ ➠ ➍ ➒ ➙ ➑ ➶ ➹ ➲ ➟ ➘➼➍↔➊ ➜➊ ➜ ➋ ➌ ➍➒ ➎ ↕ ➍↔➜ ➍ ➣ → ➌ ã ➍ ➌ ➙ ➟ ä ➫ å ➬ ➮ ➴ ➟ ➘➴➘ÒÒ ➘➘ ➘➴ Ò ➟ ➴➘➴ ➟ æ ➟➟➻➟Ò ➷ ➮ ➙ ➍ ➒ ➌ ➊ ç ➊➌ ↔➊ ➟➻ ➫ å ➬ ➮ ➘ Ò ➟ ➘➘➴ ➟Ò ➟Ò Ò➟ ➘Ò➩ ÒÒ ➩ ➴➘ Ò ➟ ➘ ➷ ➮ ➙ ➑➙ ➊ ↔ ➍➑ ➒ ➙ ➍➌ ➑ ➜ ➍ ↔ ➑ ➒ ➔ ➲ ➜ ➍↔ ➑ ➒ ➔ ➞ ➌ ➞ ➓➍ ➒ ➍ ↔ ➍➜ ➍➜ ➑ ➒ → ❮èÑ Ò ➽ ❮ é ➘ ➙ ➍➒ ➛ ➘➴ ❮ ➴ è ➪ ❮ ➠ ➍ ➒ ➔ ➓➊➌ ➏ → ➒ ↔ ➊➌ ç ➍↔ ➑ ➎ ➍ ➙ ➍ ↔➊➜ ➞ ➍ ➏ ➍➓➑→ ➒ ➲ ➟ ➘ ➼➍ ↔➊ ➙ ➍➌ ➑ ➜➊➜ ➋ ➌ ➍ ➒ ➎ ↕➍↔➜ ➍ ➽ ➊ ➌ ➌ ➍ ➒ → ➥ ➦ ➧ ➦ å ➤ é ➊ ➙ ➞ ➍ ➞ ➌ ➞ ➓➍ ➒ ➍ ↔ ➍➜ ➍ ➜ ➑ ➒ → ➑➒ ➑ ➜ ➍↔ ➑➒ ➔ ➲ ➜ ➍ ↔ ➑➒ ➔ ➜ ➊➌ ➞ ➎ ➍➏ ➍ ➒ ➋ ➍➔ ➑ ➍➒ ➙ ➍ ➌ ➑ ➙ → ➜ ➍➑ ➒ ➣ → ↔➣ → ➌ ➑↕ ➍ ↔ ➑ ➙ ➍ ➒ ➎ ➊ ➒ ➔ ➑ ➏ ➍ ➓➍ ➒ ➟ ➘ ➼➤ ➼ ➌ ➑ ➜ ➊➌ ➍ ➏ ➓➑ ➒ actF ➬ ➮ ➲ ➟ ➘➴➴ Ò ➟ ➴ ➟ ➘ ➴ ÒÒ ➴ ➟ ➴➴ ➟ ➘ ➟ ➘ ➲ ➷ ➮ ➙ ➍ ➒ act Ô ➬ ➮ ➲ Ò➟ ➴➘➘ ➴➘➴ Ò ➴ ➟ÒÒ ➟Ò ➘➘➴ Ò ➟ ➲ ➷ ➮ ➙ ➑➔ ➞ ➒ ➍➏ ➍➒ ↔➊ ➋ ➍ ➔ ➍➑ ➍ ↕➍ ➓ ➊ ç ➍↕➞ ➍↔ ➑ ➯ ❮➪ ➟ ì í ì îï ð ñ ï îòóô õ ö ÷ø ùú û ø îò ü ý þ ë ÿ ö ñ✁ í ó ✂ ✄ î õ ô ✄ ☎ ✆ î✝ î ✆ ò✂ î✄ î ô ✞ ✂ ✝ ì í ✁ ö ✂ ✆ ✄ ✝ ï í ✆ î ✆ ð E ✟ ✠✡ ☛ i ☞✌ ÿ  õ ô ✄ ☎ ✆ î✝ î✆ ò ✂ î✄ î ô ô✆ î ✆ ✄ õ î✁ ô ö ï îòóô õ ✁ ✂ ✝ í ó ô✆ î✆ ð Isol ✍ s ✎ ✏ ✑ ✒ ✓ ot ✍ l ✔ ò í ï î òô ✕ ✖✗ ó✂ ✆ ✄ ô ✝ ☎ ìô ó✂ ì í õ ✂ ✘ô ✙ï ü î ✆ ✄ õ ô ó í õ ô ✚ ô ✝ îòô ✛ ☎ ✜ î✁ ò í ✆ í et a ☛ ð ✢ þ þ ✣ ✤ ð Isol ✍ ✥ ✎ Fr ✍ ✦ ✧ ★ n ✩ D ✑ ✒ ✪ mpm ✍ ✫ ★ n ✦ ✍ ✬ ✏ ✓ ✭ ✮✯ ✏ ✛ô ✆ ì ✂ò ôò ✰☞ ✖✗ ò ö ✂ òô ✚ ô ✝ õ ôï î✝ ☎ ✝ î✆ ó✂ ï î ï ☎ ô õ ☎ î ì î✜ î ö ✱ ü îôì ☎ ì✁ î✆ ò ✝ ✁ ô ö òô îïô ✝ reverse tra ✲ ✳ cri ✴ ✵ i ✡ ✲ ✶ ✕û ✤ ó✂ ✆ ✄ ✄ ☎ ✆ î✝ î✆ ✷ ✸ ✴ ✹ r ✷ ✠ ri ✴ ✵ ✺ ✺ ✻✼ ✔ ✆ ✞ ô ì✁ í ✄ ✂ ✆ ☎ ✆ ì ☎ ✝ ó ✂✆ òô ✆ ì ✂òô ò ✰ ☞ ✖✗ õ î ✆ ñ ✙ ✕ ☎ ✆ ì ☎ ✝ îó ö ïô ✚ ô ✝ î ò ô ✚ ✁ î✄ ó✂✆ ✰ ☞ ✖✗ ✽✾ ✴ ✾ a ð ✕û õ ô ï î ✝ ☎ ✝ î✆ õ ✂ ✆ ✄ î ✆ ó✂ ✆ ✄ ô ✝ ☎ ì ô ö ✁ í ò✂ õ ☎ ✁ õ î✁ ô ✔ ✆ ✞ ô ì✁ í ✄ ✂✆ ✘ô ✚ ✂ û✂ ✰✜ ✆ í ï í ✄ ô ✂ò ð ✿ ✂ ó ☎ ✁ ✆ ô î ✆ ✰ ☞ ✖✗ õ ô ✝ ✂ì î ✜ ☎ ô ó✂ ï îï ☎ ô ñ ✙✕ õ ✂✆ ✄ î ✆ ó✂ ✆ ✄ ✄ ☎ ✆ î ✝ î✆ ö ✁ ô ó✂ ✁ ò ö ✂ òô ✚ ô ✝ ☎ ✆ ì ☎ ✝ ✰ ☞ ✖✗ ✂ ❀ í ✆ ë ú ✂ ❀ í ✆ ✢ õ î ✁ ô  ú î ✝ ìô ✆ õ ✂✆ ✄ î ✆ ✝ í ó ö í òô òô ë μl cDNA, 1x taq buffer, 0.2 mM dNTP mix, 0.5 µM primer ActF, 0.5 µM primer Act ✻ , 4 DMSO, 1.25 U taq DNA polymerase RBC Bioscience dan H 2 O hingga mencapai volume akhir 20 μl. Campuran direaksikan dengan kondisi pra-PCR 94 °C, 5 menit; denaturasi 94 °C, 30 detik; penempelan primer 55 °C, 30 detik; pemanjangan 72 °C, 1.5 menit dan pasca-PCR 72 °C, 5 menit. PCR dilakukan sebanyak 35 siklus. Fragmen cDNA ✽✾ ✴ ✾ a diperoleh dengan melakukan PCR terhadap cDNA menggunakan primer spesifik AF2 dan AR2. Campuran reaksi PCR yang digunakan adalah 1 µl cDNA, 1 x buffer taq, 0.2 mM dNTP mix, 0.5 µM primer AF2, 0.5 µM primer AR2, 4 DMSO, 1.25 U taq DNA polymerase RBC Bioscience dan H 2 O hingga volume akhir 20 µl. PCR dilakukan sebanyak 35 siklus dengan kondisi pra-PCR 94 °C, 5 menit; denaturasi 94 °C, 30 detik; penempelan primer 56 o C, 30 detik; pemanjangan 72 °C, 1.5 menit, dan pasca- PCR 72 °C, 5 menit. ❃❄ n ❅ ❆ lon ❇ n ❈ D ❉❊ k ❄ ❋❇ ● ❇ ❍ Vektor ■❏ ❑ ❏ ▲ ▼ ◆ ▲ ❖P◗❘ ❙ ◆ ▲ ▼ ❚ ❯ ❱ ◆❲ ❯❳❨ ◆ ▲ ❚ ◆❩ ❯ ■ ❬ ❭ ❲❪ ❳◆ ▲ ❫❴ ❑ ▲ ❙ ◆ ❚ ❯❲ ❯❲❯❵ ❨ ◆ ▲ ❨ ❪ ❚ ◆❳ ◆ ❛ ❜ ❪❨ ❑ ❏ ❩ ❵ ❝❞❡❢ ❣ ❞ ◆ ❲ ❙ ■ ❩ ❏ ❛ ❪ ▼ ◆ ❛ ❪▲ ▼ ❯❨ ❴ ❑ ❯ ❵ ❩ ❏ ❲❪ ❚ ❴ ❩ ❚ ◆❩ ❯ ■ ❩ ❏ ❛ ❪ ▼ ◆ ❤ Transformasi E. coli DH5α dengan Vektor Rekombinan ❵ ❝❞ ❡❢ ❣ ❞ ◆❲ ❙ ❩ ❪ ❨ ❏ ❛ ✐ ❯▲ ◆ ▲ ❚ ❯ ❯▲ ❑ ❩ ❏ ❚ ❴ ❨ ❲❯ ❨ ◆▲ ❨ ❪ ❚ ◆ ❳◆❛ E ❥ c ❦ ❧ i P ♠♥ ♦ ❛ ❪▲ ▼ ❯ ❨ ❴ ❑ ❯ ❵ ❩ ❏ ❲❪ ❚ ❴ ❩ ♣ ❴ ❱ ◆ ❩ ❲❏ ▲ ❏ ❂ q q ❂ r ❤ s ◆ ❨ ❑ ❪❩ ❯ ❑❩ ◆ ▲ ❲ t ❏ ❩ ❛ ◆ ▲ ❚ ◆ ❵ ◆ ❑ ❱ ❯❚ ❴ ❵ ❵ ◆ ❚ ◆ ❛ ❪ ❚ ❯ ◆ ❙ ◆▲ ▼ ❛ ❪▲ ▼ ◆▲ ❚ ❴ ▲ ▼ ◆▲ ❑ ❯✐ ❯❏ ❑ ❯ ❨ ◆ ❛ ❵ ❯ ❲❯ ❳❯ ▲ ❤ ❘ ❚ ◆▲ ❙ ◆ X-gal dan IPTG dalam media LB padat akan menghasilkan koloni bakteri yang berwarna biru dan putih. Hanya koloni berwarna putih yang diisolasi karena di dalamnya mengandung plasmid rekombinan. Sebelum plasmid diisolasi, terlebih dahulu PCR dilakukan dengan menggunakan koloni putih sebagai cetakan. Koloni putih dicungkil dengan tusuk gigi steril kemudian disuspensikan ke dalam ddH 2 O dan dipanaskan 95 o C selama 10 menit lalu didinginkan di atas es selama 5 menit. Suspensi ini dicampur dengan 1 x buffer taq, 0.2 mM dNTP, 0.5 μM primer AF2, 0.5 μM primer AR2, 4 DMSO, 1.25 U taq DNA polymerase RBC Bioscience dan H 2 O hingga volume akhir 10 µl. PCR dilakukan sebanyak 35 siklus dengan kondisi PCR yang sama dengan PCR isolasi fragmen cDNA ✉ ✈✇ ✈ a. Koloni putih yang positif, selanjutnya diisolasi plasmidnya untuk dianalisis lebih lanjut. Analisis Urutan Nukleotida Mmpma dan Protein MmPMA Pengurutan DNA dilakukan dengan menggunakan mesin pengurut DNA otomatis Automated DNA Sequencer ABI Prism 310, Perkin-Elmer. Identifikasi urutan nukleotida dilakukan dengan beberapa analisis. Analisis kesejajaran lokal ❧ ❦ ① a ❧ a ❧ ig ② ✈ e ② t ✉ ✈✇ ✈ a berdasarkan nukleotida dan asam amino dengan data yang ada di Ge ② eBa ② ③ dilakukan dengan program BLAST Basic ④❦ ① a ❧ A ❧ ig ② ✈ e ② ⑤ ⑥ ⑦ arch ⑧❦ ❦ ❧ s yang disediakan NCBI ⑨ ati ❦ ② ⑩ ❧ Ce ② ⑤ er f ❦ ❶ Bi ❦ ⑤ ech ② ❦ ❧ ❦ ❷ ❸ ❹ ② ❺ ❦ ❶ ✈ ati ❦ ② melalui http:www.ncbi.nlm.nih.govblast. Analisis restriksi dilakukan dengan menggunakan program NEBCutter http:tools.neb.comNEBcutter2index.php. Domain potensial dianalisis dengan program ✈ ❦ ⑤ if sca ② http:au.expasy.orgprosite. Analisis hidrofobisitas ❽❾ ❿ ➀ ➀ ➁ ❿ ➂ ➃ ➂ ❿ ➄ ➅ ➂ ➀ ❽❾ ❿ ➆ ➅ ➇ ➂ ➈ ➉ esba ➊ ia r ➋ strata ➌ ➍ ➎ ➏ ➐ ➑➒ ➓ ➔ ➆❾ → ➂ ➀ ➂ ➣ ↔ ❾❽ → ➂ ❿ ↕ ➣❿ ➀ ↕ ➂ ❿ ↕ ➣➙➂ ➃ ➁ ➃ ➂ ❿ ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ❽❾ ❿ ➀ ➀ ➁ ❿ ➂ ➃ ➂ ❿ ↔ ➅ ➛ ➀ ➅ ➂ ❽ ➜ ➣ ➛ ➝ ↕ ➣➞ ➟ ❾ ➅ ➆ ➣ ➠ ➡ ➢ ➡ ➤ ➡ H ➥ ➦➧ l ➨➥ ➩ ➫➭ m ➯➥ ➲➥ ➦➥ ➩ ➳ ➧ nt ➭ s ➧ s ➵ D ➸➺ ➻➼➽➾ ↕ ➣➆ ➣❿ ➞❾➆ ➣➆ ❽❾ ➙➂➙ ➁ ➣ ➞➅ ➂ ❿ ➆ ➃ ➅ ➣↔ ➆ ➣ → ➂➙ ➣➃ ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ❽❾ ❿ ➀ ➀ ➁ ❿ ➂ ➃ ➂ ❿ ➻ ❾ ➞➂ ➃ ➂ ❿ ➚ ➔ ➪➶ ➹ ➒ ➚ ➔ ➘ ➽➾ ➞ ➛ ➞➂➙ ↕ ➂ ❿ ↔ ➅ ➣ ❽ ❾ ➅ ➛ ➙ ➣➀ ➛ ➴ ↕ ➷ ➆❾ ➇ ➣❿ ➀ ➀ ➂ ➻➼➽➾ ➬ ➂ ❿ ➀ ➞❾ ➅ → ❾ ❿ ➞ ➁ ➃ ➇ ➂ ❿ ➬ ➂ → ❾ ➅ ➂➆➂ ➙ ↕ ➂ ➅ ➣ ❽ ➘ ➽➾ ➃ ➂ ➅ ❾ ❿ ➂ ➇ ➂ ❿ ➬ ➂ ❽ ➘ ➽➾ ➬ ➂ ❿ ➀ ❽❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ↕ ➁ ❿ ➀ ↔ ➛ ➙ ➬ ➾ ↔ ➂ ↕ ➂ ➁ ➮ ➁ ❿ ➀ ❼ ➱ ✃ ➆ ❾ ↕ ➂ ❿ ➀ ➃ ➂ ❿ ➅ ➘ ➽➾ ↕ ➂ ❿ ➞ ➘ ➽➾ ➞➣ ↕ ➂ ➃ ➡ ❐ ❒ ➘ ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ❽ ❾ ❿ ➀ ➀ ➁ ❿ ➂ ➃ ➂ ❿ ↔ ➅ ➣❽❾ ➅ ➁ ❿ ➞➁ ➃ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❮ ➴ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❰ ↕ ➂ ➅ ➣ ➀ ❾ ❿ ➂ ➃ ➞➣ ❿ ❽❾ ❿ ➀ ➇ ➂➆ ➣ ➙ ➃ ➂ ❿ ➼➽➾ ➬ ➂ ❿ ➀ → ❾ ➅ ➁ ➃ ➁ ➅ ➂ ❿ ➆❾ ➃ ➣➞➂ ➅ ❻ ➈ ❮ ↔ → Ï ➂ ❽ → ➂ ➅ ➤ ➬ ➂ ❿ ➀ ❽ ❾ ❿ ➁ ❿ ➮ ➁ ➃ ➃ ➂ ❿ → ➂➇ Ð ➂ ↕ ➂❾ ➅ ➂ ➇ ➬ ➂ ❿ ➀ ➞❾ ➅ ➂❽ ↔ ➙ ➣➄ ➣ ➃ ➂ ➆ ➣ ➂ ↕ ➂ ➙➂ ➇ ➻➼➽ ➾ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❮ ➴ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❰ → ➁ ➃ ➂ ❿ ➼➽➾ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❮ ➴ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❰ ↕ ➂ ➅ ➣ ➀ ❾ ❿ ➂ ➃ ➞➣ ❿ ➡ ➼➽➾ ➂ ❿ ➞➂ ➅ ➂ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❮ ↕ ➂ ❿ ❾ ➃ ➆ ➛ ❿ ❰ → ❾ ➅ ➁ ➃ ➁ ➅ ➂ ❿ ➆❾ ➃ ➣ ➞ ➂ ➅ ➈ ❼ ➤ ↔ → ✃ ➙ ❾ → ➣ ➇ → ❾➆➂ ➅ ↕ ➂ ➅ ➣↔ ➂ ↕ ➂ ➻➼➽➾ ❿ ➬ ➂ ➃ ➂ ➅ ❾ ❿ ➂ ❽❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ↕ ➁ ❿ ➀ ➣ ❿ ➞ ➅ ➛ ❿ ➬ ➂ ❿ ➀ ↕ ➣ → ➁ ➂ ❿ ➀ ↔ ➂ ↕ ➂ ➆➂ ➂ ➞ ↔ ❾❽ → ❾ ❿ ➞ ➁ ➃ ➂ ❿ ❽ ➘ ➽➾ Ñ ➇ ➂➇ ➔ ➚ ➒ ➹ ❮ ➤ Ò ❰ Ó ➡ ➷ ❾ ➅ ➂❽ ↔ ➙ ➣➄ ➣ ➃ ➂ ➆ ➣ ❿ ➬ ➂ ➻➼ ➽➾ ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ↔ ➅ ➣❽❾ ➅ ➏ Ô ➚Õ ↕ ➂ ❿ ➏ Ô➚Ö ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ➁ ➃ ➁ ➅ ➂ ❿ ❻ ➈ ❮ ↔ → ❽❾ ❿ ➁ ❿ ➮ ➁ ➃ ➃ ➂ ❿ → ➂➇ Ð ➂ ➆ ➣ ❿ ➞ ❾ ➆ ➣ ➆ ➻➼➽➾ ➞➛ ➞➂➙ ❽ ❾➙ ➂➙ ➁ ➣ ↔ ➅ ➛ ➆❾ ➆ ➞➅ ➂ ❿ ➆ ➃ ➅ ➣↔ ➆ ➣ → ➂➙ ➣➃ ➞ ❾ ➙➂ ➇ → ❾ ➅ ➙➂ ❿ ➀ ➆ ➁ ❿ ➀ ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ → ➂ ➣ ➃ ➡ × ➂ ➙ ➣ ❿ ➣ ➮ ➁ ➀ ➂ ❽❾ ❿ ➁ ❿ ➮ ➁ ➃ ➃ ➂ ❿ → ➂ ➇ Ð ➂ ➘➽➾ ➞ ➛ ➞ ➂➙ ➬ ➂ ❿ ➀ ➞❾➙ ➂➇ ↕ ➣ ➣ ➆ ➛ ➙ ➂➆ ➣ ❽❾ ❽↔ ➁ ❿ ➬ ➂ ➣ ➃ ➁ ➂➙ ➣➞➂➆ ➬ ➂ ❿ ➀ ➆➂ ❿ ➀ ➂ ➞ → ➂ ➀ ➁ ➆ ➬ ➂ ❿ ➀ ➞ ❾ ➅ → ❾ → ➂➆ ↕ ➂ ➅ ➣ ➃ ➛ ❿ ➞ ➂❽ ➣❿ ➂➆ ➣ ➼➽ ➾ ➆❾➇ ➣ ❿ ➀ ➀ ➂ ↕ ➂ ↔ ➂ ➞ ↕ ➣ ➀ ➁ ❿ ➂ ➃ ➂ ❿ ➁ ❿ ➞ ➁ ➃ ❽ ❾ ❿ ➆ ➣ ❿ ➞❾➆ ➣➆ ➻➼➽➾ ➡ Ø ➙❾ ➇ ➆❾ → ➂ → ➣ ➞➁ ✃ ➻➼➽ ➾ ➞➛ ➞ ➂ ➙ ➣❿ ➣ ↕ ➂↔ ➂ ➞ ↕ ➣ ➀ ➁ ❿ ➂ ➃ ➂ ❿ ➆❾ → ➂ ➀ ➂ ➣ → ➂➇ ➂ ❿ ➁ ❿ ➞ ➁ ➃ ❽ ❾ ❿ ➀ ➣➆ ➛ ➙➂ ➆ ➣ ➄ ➅ ➂ ➀ ❽❾ ❿ ➻ ➼➽➾ Ù ➪➶ ➪ ➒ ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ❐ ❒ ➘ ➡ Ú ➅ ➂ ➀ ❽ ❾ ❿ ➣❿ ➣ ↕ ➣↔ ❾ ➅ ➛ ➙ ❾➇ ↕ ❾ ❿ ➀ ➂ ❿ ❐ ❒ ➘ ❽❾ ❿ ➀ ➀ ➁ ❿ ➂ ➃ ➂ ❿ ➻➼➽➾ ➞➛ ➞ ➂ ➙ ➆ ❾ → ➂ ➀ ➂ ➣ ➻ ❾ ➞ ➂ ➃ ➂ ❿ ↕ ➂ ❿ ↔ ➂ ➆➂ ❿ ➀ ➂ ❿ ➾ Ú ❰ ➴ ➾➘ ❰ ➆❾ → ➂ ➀ ➂ ➣ ↔ ➅ ➣❽❾ ➅ ➆↔ ❾➆ ➣➄ ➣➃ ➬ ➂ ❿ ➀ ❽❾ ❿ ➀ ➇ ➂ ➆ ➣➙ ➃ ➂ ❿ ➄ ➅ ➂ ➀ ❽❾ ❿ ➻ ➼➽➾ → ❾ ➅ ➁ ➃ ➁ ➅ ➂ ❿ ➆❾ ➃ ➣➞➂ ➅ Ò ➢ ➢ ↔ → ✃ ➬ ➂ ❿ ➀ ➆❾➙ ➂ ❿ ➮ ➁ ➞ ❿ ➬ ➂ ↕ ➣ ➆❾ → ➁ ➞ ➆❾ → ➂ ➀ ➂ ➣ ➄ ➅ ➂ ➀ ❽❾ ❿ Ù ➪➶ ➪ ➒ Ù ➔ ➹ ➒ ➓ ➚ ➋ ➪ ➒ ➪ ➒ ➹ ➒ Û ➒ ➚Ü ÝÞ Ôß ➪ ➶ ➹ ➒ ➓ ➪ ➒ ➪ ➔ ➪Û Ý ➒ ➊ ➔ ➌ ➍ ➎ ➏➐ ➑ ➒ ➓➔ Ï ➂ ❽ → ➂ ➅ ➤ ➡ à á â ã ä å æ ç ã ä è é ê ë ìíîïðñ òóôóõ ë ìíîïðñ ö ÷ø ù ú û íï ü íì ýþ ÿ í ✁ ✂ ✄ ☎ ✆ ï ð ñîî ✝ ñí ✞ í ñ ✟ ✠ ✡☛ ☞ ✌☞ í ✂ ð ü íîí ✁ ✟ ð ☞ í ✞ íñ ✍ í ñ ✎ í í ñîíñ ✎ ì ✁ ïðì ö ÷ ø ✏ – ö ÷ ø ✑ ✝ ñ ☞ ✝ ✞ ï ð ñ ✍ í ✎ í ☞ ✞ íñ ✒ìíîïðñ í ✞ ☞ ✁ ñ ✓ íñ î ü ðì ✝ ✞ ✝ ìíñ ✔✕ ✖ ✎ü ✍ íñ ☛ ë ✗ – ☛✆ ✗ ✝ ñ ☞ ✝ ✞ ïðñ ✍ í ✎ í ☞ ✞ íñ ✒ ìíî ï ð ñ òóô ó õ þ ✙ n ✚ ✛✜ s ✜ s Fr ✚ ✢ ✣✤ n ✥ mpm ✚ ✦✧ ★ ✧ ✩ ✪ ✫ ✬ ✭ ★ ✧ ✮ ✫✯ ✰ ✫✱✫ ✲ ✫ ✩ ✫✱✫✧ ✫ ✧ ✳ ✩ ✴ ✵ ✫✲ ✫ c ✶ di ✷ ✸ se ✹ ✺ ✻ ✷ ✼ ✻ ✽✲ ✱ ✾ ✿ ✩ ✵ ✿ ✩ ✪ ✫ ✩ ✲ ✳ ❀ ❁ ❂ ❃❄❅ ✫✱ ✿ ✧✿ ✧ ✰ ❆ ✫✩ ✵ ✮✫ ✱ ✧ ✫ ❇ ✫ ✩ ✫✧ ✫✩ ✫✲ ✫ ✮✫✯ ✰ ✿ ❆ ❇ ★ ❆ ★ ❇ ❂ ❇ ★ ❆ ★ ❇ ❈ ❉ ❊ ❋ ✵ ✰ ✲ ✫ ✩ ● ❍ ■ ✫✱✫✧ ✫✧ ✳✩ ✴ ❏ ❑ ✿ ❆ ✲ ✫ ✱✫ ❆ ▲ ✫✩ ✵ ✿ ✩ ✾ ★ ❆ ★ ❇ ✫ ✩ ▼◆❃ ❖ ✫ ✧ ✵ ✳ ❆ ✫ ✩ ❋ ✲ ✫ ✩ ❈ P ❇ ✿ ❆ ✯ ✫✲ ✫✵ ◗ ❆ ✫ ✾ ✧ ✿ ✩ ❘ ❙❚ ❙ ❯ ◆ ✴ ❏ ✫ ▲ ✱ ✿ ✱ ❱ ✻ ✷ ✻ ❲❯ ✷ ❳ ❨ ❀❩ ❉ ❬ ❈ ❊ ● ❋ ✧✿ ✩ ★ ✩ ✭ ★ ▲ ▲ ✫✩ ✰ ✫✯ ❭ ✫ ◗ ❆ ✫ ✾ ✧ ✿ ✩ ❇ ✿ ❆ ✱ ✿ ✰ ★ ❇ ✧✿ ✧ ✵ ★ ✩ ✪ ✫✳ ❉ ❪ ■ ✵ ✰ ❫ ✫✧ ✰ ✫ ❆ ❋ ❪ ✲ ✫ ✩ ✧✿ ✩ ✪ ✫✩ ✲ ✳ ❈ ■ ❉ ✫ ✱✫ ✧ ✫✧ ✳✩ ✴ ❫ ✫✧ ✰ ✫ ❆ ❋ ❋ ❏ ❴ ❆ ✫✾ ✧✿ ✩ ✳ ✩ ✳ ✰ ✿ ❆ ✫ ✲ ✫ ✵ ✫✲ ✫ ✰ ✫ ✾ ✳ ✫ ✩ ❇ ✿ ✩ ✾ ✫✯ ✲ ✫ ❆ ✳ ✽✲ ✱ ✾ ✿ ✩ ✵ ✿ ✩ ✪ ✫ ✩ ✲ ✳ ❀ ❁ ❂ ❃ ❄ ❅ ✫✱ ✿ ✧✿✧ ✰ ❆ ✫ ✩ ✵ ✮✫ ✱ ✧ ✫ ❇ ✫✩ ✫✧ ✫✩ ✬ ✪ ✫ ✳ ❇ ★ ✵ ✫ ✲ ✫ ✰ ✫✱✫ ● ❉ ❈ ❂ ❋ ❊ ❉ ❊ ✫ ❇ ✫★ ✵ ✫✲ ✫ ✫ ✱✫ ✧ ✫ ✧ ✳ ✩ ✴ ❬ ❈ ❉ ❂ ❍ ● ❍ ❏ ❃ ✩ ✫ ✮✳ ✱✳✱ ▲ ✿ ✱ ✿✭ ✫ ✭ ✫ ❆ ✫ ✩ ✮✴ ▲ ✫✮ ✰ ✿ ❆ ✲ ✫ ✱✫ ❆ ▲ ✫✩ ★ ❆ ★ ❇ ✫ ✩ ✩ ★ ▲ ✮✿✴ ❇ ✳ ✲ ✫ ✪ ✫ ✩ ✾ ✫ ✲ ✫ ✲ ✫✮ ✫ ✧ ✰ ✫ ✩ ▲ ✲ ✫ ❇ ✫ ✾ ✿ ✩ ❱ ✻ ✷ ✻ ❲ ❯ ✷ ❳ ✲ ✿ ✩ ✾ ✫ ✩ ✧ ✿ ✩ ✾ ✾ ★ ✩ ✫ ▲ ✫✩ ✵ ❆ ✴ ✾ ❆ ✫ ✧ ❑ ❖ ❃ ❵❄ ✩ ✧✿ ✩ ★ ✩ ✭ ★ ▲ ▲ ✫ ✩ ✰ ✫✯ ❭ ✫ ◗ ❆ ✫✾ ✧✿ ✩ ✽ ▼◆❃ ❘ ❙❚ ❙ ❯ ✧✿ ✧ ✵ ★ ✩ ✪ ✫✳ ▲ ✿ ✱✫✧ ✫✫ ✩ ❉ ❋ ✲ ✿ ✩ ✾ ✫ ✩ ✰ ✫ ✾ ✳ ✫ ✩ ✽ ✲ ✱ ✼ ✶ ❛ ❜ ✷ ✸ ❝ ✻✹ ✺ ✻ ✷ ✼ ✻ ❀ ❁ ❂ ❃ ❄ ❅ ✫ ✱ ✿ ✧✿✧ ✰ ❆ ✫ ✩ ✵ ✮✫ ✱ ✧ ✫ ❞ ✻ ❝ ❡ ❯ ✷ ❜ ❯ ❢ ✶ ❝ ❣❢❯ ❣ ❯ ❃❑ ❪ ❉ ■ ❬ ❊ ✘ P ✬ ❤ ✺ ✸ ✐ ❯ ✷ ❝ ❢ ✻ ✸ ❜ ❯ ❃ ❥ ❬ ✘ ❊ ❊ ❋ ❍ P ✬ ✲ ✫ ✩ ❦ ❢ ✺ ✷ ✺ ❝ ❚ ✻ ❢❝❜ ✼ ❯ ❃ ❧ ❈ ❊ ❋ ✘ ❬ ● ♠ ❉ ❪ ✲ ✿ ✩ ✾ ✫ ✩ ✰ ✫ ✾ ✳ ✫✩ ✽ ✲ ✱ ❀ ❁ ❂ ❃ ❄❅ ✫ ✱ ✿ ✧✿ ✧ ✰ ❆ ✫ ✩ ✵ ✮ ✫✱ ✧ ✫ ♥♦ ❣♣ ❯ ✐ ❜ ❯ ✷ ❯ ❃q❋ ❋ ❉ ❪ ❉ ❉ P ✲ ✫✩ r ❯ ✺ ✼ ✺ ❝ ✼ ❯ ❢ ✶ ❣ ❯ ❃❑ ❋ ❊ ❊ ■ ❍ ❈ P ❏ ❃ ✩ ✫✮ ✳✱✳ ✱ ✱ ✳ ❇ ★ ✱ ❆ ✿ ✱ ❇ ❆ ✳ ▲ ✱✳ ❇ ✿ ❆ ✯ ✫✲ ✫ ✵ ◗ ❆ ✫✾ ✧✿ ✩ ❘ ❙ ❚ ❙ ❯ ✧✿ ✩ ★ ✩ ✭ ★ ▲ ▲ ✫✩ ✰ ✫✯ ❭ ✫ ▲ ✿ ✽ ★ ✫✮ ✳ ❞ ❯ ✼s ✬ ◗ ❆ ✫ ✾ ✧ ✿ ✩ ❇ ✿ ❆ ✱ ✿ ✰ ★ ❇ ❇ ✳✲ ✫ ▲ ✧✿ ✩ ✾ ✫✩ ✲ ★ ✩ ✾ ✱✳ ❇ ★ ✱ ❆ ✿ ✱ ❇❆ ✳ ▲ ✱✳ ✪ ✫✩ ✾ ❇ ✿ ❆ ✲ ✫ ✵ ✫ ❇ GATGTCCTTTGCAGTGATAAGACTGGGACTCTGACTTTGAACAAGCTTACTGTTGACAAAAATCTCA TCGAGGTCTTTGCGAAAGGAGTGGACCCGGATACTGTTGTCCTGATGGCTGCTAGAGCATCGAGGAC CGAAAACCAAGATGCCATAGATTCCGCCATAGTTGGGATGCTAGCTGATCCAAAAGAGGCTCGATCT GGGATTCAGGAAGTACACTTTCTTCCCTTTAACCCTACTGACAAGAGGACCGCTTTGACCTACATCG ATTCCGAGGGCAGGATGCACAGAGTGAGCAAAGGTGCTCCAGAGCAGATCCTGAACCCTGCGCACAA TAAGTCGGAGATTGAGCGTCGAGTCCATGCCGTGATTGATAAATTTGCCGAGCGTGGTCTGCGATCA CTTGCAGTAGCGTATCAGGAAGTTCCAGAAGGAAGAAAGGAGAGTCCTGGAGGGCCGTGGCAGTTCA TCGGTCTGATGCCTCTGTTTGATCCCCCCAGGCATGACAGTGCCGAGACAATTAGGAGGGCTCTTAA TCTTGGGGTTAATGTCAAAATGATCACGGGGGATCAATTTGCTATAGGCAAAGAAACTGGCCGTCGG TTGGGAATGGGCATAAACATGTACCCTTCTTCTGCTTTATTAGGTCAGAATAAGGATGAATCGATTG CTGCGCTGCCAGTTGATGAGCTCATTGAAAAGGCAGATGGCTTTGCTGGTGTTTTCCCGGAGCATAA GTATGAGATTGTGAAGCGATTACAAGCAAGGAAGCATATATGTGGCATGACAGGAGATGGTGTCAAT GA t✉✈✇ ✉ ① ② ③④ ⑤ ① ⑥⑦ ✉⑧ ⑧ ⑥⑨⑩ ❶❷⑦ ❸ ❹ ✉ ❺① ✉ ❻ ✈❶ ⑧ ❼❽❾❿ ➀➁➂ ➁ ➃ DVLCSDKTGTLTLNKLTVDKNLIEVFAKGVDPDTVVLMAARASRTENQDAIDSAIVGMLADPKEARS GIQEVHFLPFNPTDKRTALTYIDSEGRMHRVSKGAPEQILNPAHNKSEIERRVHAVIDKFAERGLRS LAVAYQEVPEGRKESPGGPWQFIGLMPLFDPPRHDSAETIRRALNLGVNVKMITGDQFAIGKETGRR LGMGINMYPSSALLGQNKDESIAALPVDELIEKADGFAGVFPEHKYEIVKRLQARKHICGMTGDGVN t✉ ✈ ✇ ✉ ① ②② ④ ❽ ❶❹ ⑥⑨ ➄ ❸ ✉ ➄ ✉✈ ✉✈ ❸ ⑧ ❷ ❺ ① ✉ ❻ ✈❶ ⑧ ➅ ✈ ➆ ✈✉④ ⑤① ⑥⑦ ✉ ⑧ ✉ ➄ ✉✈ ✉✈ ❸ ⑧ ❷ ➇ ✉ ⑧❻ ❹ ❸ ❻ ✉ ①❸ ➄ ✇✉ ➈ ✉ ➉ ❸ ✉❹ ✉ ⑩ ✉ ➉ ❹❷ ✈ ✉❸ ⑧ ❺ ⑥ ⑧❻ ➄ ❸ ❷ ⑧ ✉ ⑩ ➌ ➍➎ ➍ ➏ ➐➑➒ ➏ ➓➒ ➔ ➑➐ ➌ →➣ ↔ ↕ ➔ ➙ ➣ ➍➣ ➛ ➍➓➜ ➍➝ ➞ ➟ ➠ ➡ ➝ ➍↔ ➓ → ➣ ➢ ➤➥ ➤ a ➎ ➐ ➏ ➐ ➏ ➐➌ ↕ ➍➣ ➎ ➐➍➣ ➑➍➝ ➍ ➏ ➐➑➒ ➏ A ➥ ➦ ➧ ➨ Aat ➧ ➧ ➨ ➩ ➥ ➫ ➧ ➨ ➭ c ➯ ➧ ➨ Bst ➲ ➧ ➨ ➭ ➯ ➳ ➧ ➨ ➩ ➦ ➵ ➧ ➧ ➨ ➸➵ ➯ ➺ ➧ ➎ ➐ ➏ ➍ ➑ ➒ ➏ ➐ ➏ ➐ ➎ ➍➣ ➩ ➥ ➻ ➧ ➨ ➸ ➵ ➯ ➺ ➧ ➨ ➭ ➯ ➳ ➧ ➨ ➼➽ ➳➾➧ ➨ ➚ ➽➳➧ ➨ ➩ ➦ ➪ ➧ ➨ ➭ ➶ ➻ ➧ ➨ ➩ ➦ ➵ ➧ ➨ ➼➽➳ XI, ➭ ➽➹ I di sisi lain sehingga kecuali ➩ ➦ ➵ I, situs-situs tersebut dapat digunakan untuk mengeluarkan sisipan ➢ ➤➥ ➤➦ dari plasmid rekombinan. Peta situs restriksi sangat penting dalam rekayasa genetika. Analisis kesejajaran lokal berdasarkan urutan asam amino dengan BLASTp menunjukkan bahwa fragmen MmPMA mempunyai kesamaan 94 dengan Cation-transporting ATPase ➘ ➴ ➷ ➪ ➦ ➬ ➽ ➮ ➻ ➷ ➹➦ Q6V914; 93 dengan Cation-transporting ATPase ➩ ➻ ➽➱ ➦ ➬ ➹➦ ➮ ➯ ➽➳ ➮ ➦ ➳➦ Q7Y066 dan ✃ ❐ ➳➫ ➦ ➪ ➹ ➦ ➬ ➦ Q9SU58; 92 dengan Cation-transporting ATPase ➩ ➯ ➪ ➦ ➬ ➴ ➤ ➳ u ➱ ➻ ➮ ➯ ➽ ➴ ➤ Q43182, ❒ ❐ ➻ ➽ ➵ ➴ ➪ ➻ ➬ ➳ ➴ ➤ Q9SPD5, ➭ ❐ ➥ ➪ ➴ ➤➱ ➦ ➷ ➹ ➬ ➹❮ ➯ ➪ ➹➦ Q08435 dan ❰❐ ➵ ➦ ➮ ➯ ➳➦ Q75N96. Tingginya persentase kesamaan urutan asam amino antara fragmen MmPMA dengan ketujuh PMA tersebut diatas 90 menunjukkan bahwa MmPMA diduga mempunyai peranan yang sama dengan ketujuh PMA tersebut. Protein PMA ➚ ➪ ➦ ➽➤➦ ➤ ➻ ➤➱ ➮ ➦ ➬ ➻ Ï Ð Ñ ✃ Ò➚ ➦ ➽ ➻ dapat mengaktivasi serangkaian transporter sekunder dengan menghasilkan ➥ ➮ ➯ ➳➯ ➬ ➤➯ ➳➹ v ➻ ❮ ➯ ➮ ➵ ➻ yang dapat menggerakkan banyak solut, asimilat, atau metabolit melintasi membran plasma Serrano 1989; Sussman 1994. Studi terbaru menunjukkan bahwa H + - ATPase membran plasma terlibat dalam regulasi respons terhadap berbagai rangsangan lingkungan, antara lain cekaman Al Anwar 1999; Ahn 2004, cekaman NaCl Niu ➻ ➳ ➦ ➪ . 1996, defisiensi fosfat Yan ➻ ➳ ➦ ➪ . 2002, cekaman Gambar 12. Situs pemotongan enzim restriksi endonuklease fragmen ÓÔ Õ Ô Ö Ù ÚÚÛ Ü ÝÞ Ú ßàá Ü àâ ã ä àå ÝæÙ ç è è é ê ë ì àá í Ýî Ù ì ï Ù íÙ Ú ð àÚ Ù Ü â Ù Ü å Ù Ü æàí ñ Ù Ü å ï Ýò Ù æÝ íÝìÙ æÝ Û í àó ÙÞ ô æÝÜ æàíÙ ÚÙ ð à á ô àÚî Ù Ü å Ù Ü à Ú î á ÝÛ å Ù Ü ï Þ Ú õ Û î à á ö ÷ íàî àá et a øù ç è è ú ê ë ï Ù Ü ì à á íÝî Ùì ð Þ íÙ ï Ù í Ù Ú ó Û ÚàÛ æìÙ æÝæ ð û æÝ ì Û ð íÙ æ Ú Ù ìÙ Ü Ù Ú Ù Ü ü Û Þ Ü å et a øù é ý ý þ ê ù ÿÙ Ü Ù Ú Ù Ü Arabid ✁ ✂ is tha ø ia ✄ ☎ ñ Ù Ü å ï Ýìá Ù Ü æ ò Û á Ú Ù æÝ ï à Ü å Ù Ü å àÜ û ✆ ö ✝ ÿ ✞ Ù æà Ú àÚ î á Ù Ü ð í Ù æÚ Ù ✝ û ✝ ú ê ï Ù ð Ù ì Úà Úð à á î Ù Ý ô Ý ð à á ì Þ Úî Þ ó Ù Ü ð Ùï Ù ð û á à Ü ï Ù ó æàíÙ ÚÙ ð à á ô àÚî Ù Ü å Ù Ü ô à ã Ù Ú î Ù ó ü Û Þ Ü å et a øù é ý ý þ ê ù ✝ û ✝ ú Úà á Þ ð Ù ô Ù Ü å à Ü ñ Ù Ü å ì àá à ô æð á à æÝ ð Ù ï Ù æàíö æà í ô Û Ú ð Ù Ü Ý Û Ü ò íÛ à Ú ë ñ Ù ÝìÞ ï Ù à á Ù ó ñ Ù Ü å î àá ìÙ Ü å å Þ Ü å â Ù ✟ Ù î ï Ù í Ù Ú ð àÜ å Ù Ü å ô Þ ìÙ Ü â Ù á Ù ô âÙÞ ó ï Ùá Ý å Þ í Ù ë ó Ùá Ù ï Ù Ü ó Û á Ú Û Ü ù ✠ í Û àÚ Ú àÚð Þ Ü ñ Ù Ý ð û þ ë è Ù ìÙ Þ í à î Ýó æàó ÝÜ å å Ù íà î Ý ó æà Ü æÝ ì Ý ò ì àá ó Ùï Ù ð ð û á àÜ ï Ù ó ë Ù ô Ý î Ù ì Ü ñ Ù ï Ù à á Ù ó ÝÜ Ý Ú à á Þ ð Ù ô Ù Ü ì Ùá å à ì Þ ì Ù Ú Ù ð û á àÜ ï Ù ó ù ✡ ô æð á à æÝ å àÜ ✝ û ✝ ú ÚàÜ å ó Ù æÝ íô Ù Ü à Ü ☛ ÝÚ ñ Ù Ü å ï Ù ð Ùì Úà Ú Û Úð Ù û ✆ ô àíÞ Ùá æà í æà ó Ý Ü å å Ù ð û æÝìÛ ð í Ù æÚ Ù ï Ù ð Ùì ï Ý ð àá ì Ù ó Ù Ü ô Ù Ü ù ✞ àÜ å Ù Ú Ù ìÙ Ü ì àá æà î Þ ì ÚàÜ Þ Ü âÞ ô ô Ù Ü ð à á Ù Ü Ù Ü û ✆ ö ✝ ÿ ✞ Ù æà ÚàÚî á Ù Ü ð í Ù æÚ Ù ï Ù íÙ Ú ó Û ÚàÛ æìÙ æÝæ ð û æ Ý ì Û ð íÙ æÚ Ù ð Ù ï Ù ìÙ Ü Ù Ú Ù Ü ù ✝ ï Ù Ü ñ Ù Úàô Ù Ü Ý æÚà æ àð à á ì Ý Ý Ü Ý Ú àÜ Þ Ü â Þ ô ô Ù Ü î Ù ó ✟ Ù û ✆ ö ✝ ÿ ✞ Ù æà Úà Ú î á Ù Ü ð íÙ æÚÙ ï Ù ð Ùì ÚàÜ å Þ á Ù Ü å Ý ìÛ ô æÝ æÝ ì Ù æ ✝ í ô Ùá àÜ Ù ð á Û ì àÝ Ü Ý Ü Ý ï Ù ð Ù ì Ú àÚð à á ì Ù ó Ù Ü ô Ù Ü ð û æÝ ì Û ð íÙ æÚ Ù ï Ù í Ù Ú æ Þ Ù æ Ù Ü Ù Ü à ì á Ù í æàï Ù Ü å ô Ù Ü ìÛ ô æÝæ Ý ì Ù æ ✝ í ó Ù Ü ñ Ù ï Ù ð Ù ì ì àá â Ùï Ý ï Ù íÙ Ú æ Þ Ù æ Ù Ü Ù Ù æ Ù Ú Ùì ÙÞ ð û á à Ü ï Ù ó ☞ Ý ì Û á àí í Û et a ø ù ç è è ✌ ê ù ✍✎✏✑✎ ✒ ✓✔✕ ✖ ✗✘✙ ✚ ✛ ✗✜ ✗ ✢ ✒ ✎ ✣✤ ✛ ✒ ✎ ✥✦ ✏✙✏✑ ✒ ✎ ✥ ✘✎ ✥ ✚ ✗ ✗✜ ✦✤ ✛ ✗ ✜✚ ✎ ✦ ✏✎ ✘✎ ✒✤ ✧ ★ ✩✪ ✫ ✬✎ ✦ ✙ ✏ ✙ ✏ ✑ ✒ ✎ ✥ ✜✚ ✎ ✦ ✏✎✕ ✖ ✓ ✩ ✖ ✓ ✭ ✎✘✎ ✚ ✎ ✮ ✘ ✗ ✏✎ ✤ ✥ ✛ ✒ ✎ ✥✦ ✏✙✏✑ ✒ ✎ ✥ ✯ ✰ ✓ ✩ ✰ ✱ ✎✘ ✎ ✚ ✎ ✮ ✚ ✗✗✜ ✦✤ ✛ ✗✜ ✚ ✎ ✦ ✏✎ ✯ ✲ ✓ ✩ ✲✳ ✎✘ ✎ ✚ ✎ ✮ ✘ ✗ ✏✎ ✤ ✥ ✣ ✴ ✥ ✢ ✦✤ ✗ ✥ ✎ ✚ ✵ ✶ ✎ ✒ ✑ ✗ ✒ ✗ ✴ ✢ ✮ ✓ ✷ ✷ ✳ ✸ ✯ ✘ ✎ ✥ ✹ ✙✢ ✤ ✗ ✥ ✓ ✹ ✓ ✸ ✯ ✹ ✺ ✯ ✘ ✎ ✥ ✓✱ ✩ ✔ ✩ ✔ ✎✘ ✎ ✚ ✎ ✮ ✘ ✗ ✏✎ ✤ ✥ ✎ ✴ ✛ ✗ ✒ ✙✢ ✴ ✚ ✎ ✛ ✗✒ ✲ ✴ ✢ ✚ ✦ ✎ ✥ ✢ et a ✻ ✕ ✓ ✷ ✷✷✸ ✕ ✓✱ ✩ ✔ ✩ ✔ ✎✘ ✎ ✚ ✎ ✮ ✦✤ ✛ ✴ ✦ ✜ ✙ ✥✢ ✤ ✼ ✎ ✛ ✎ ✥ ✜ ✒ ✗ ✛ ✙ ✤ ✥ ✓✱✩ ✔ ✩ ✔ ✕ ✽ ✤ ✥ ✢ ✼ ✎ ✒ ✎ ✥ ✮✤ ✛ ✎✏ ✎✘ ✎ ✚ ✎ ✮ ✣✒ ✎✢✏✙ ✥ ✖✏ ✬ ✖ ✪ ✕ F2 F6 F1 F3 F4 F5 R2 14-3-3 R1 ❀❁ ❂ ❃❄ ❅❆ ❀❇❈ ❉❄❉ ❊ ❄ ❆ ❃❋ ● ❍ ■ ❏ ❂ ❉❑ ❅❆ ❃ ❁ ❑ ❆ ▲ ❉ ❄❉❊ ❁ ❑❆ ❇❍ ▼ ❇❍ ■ ◆ ❖ ✾ P ◗ ◗ ❘ ❙ ❏ ❑ ❚❑ ❉ ▲❅❃ ❂ ❯ ❚ ❑ ▲ ❉ ❑ ❱❍ ▼ ❱ ✾ ◆ ❖ ❲ ❏ ❂ ❉❑ ❅❆ ❳ ❋ ❆ ❨ ▲❅ ❂ ❆ ❑ ❚ ❩ ❍ ▼ ❩❲ ◆ ❖ ❏ ❑ ❆ ❬ ❏ ❂ ❉❑ ❅ ❆ ❑ ❋ ❃❂ ❁ ❄ ❨ ❋ ❚❑ ❃❂ ❁ ❭❍ ❖ ❭ ❪ ❖ ❏ ❑❆ ❍ ✾ ▼ ❬ ▼ ❬ ◆ ▲ ❄ ❯ ❄ ❁ ❃❅ ❏ ❅❃ ❋ ❆ ❫ ❋ ● ● ❑❆ ❯ ❑ ❏ ❑ ❴❑❉ ❊ ❑ ❁ ❍ ❬ ❵ ❀❑ ❏ ❑ ❱ ❪ ❉❄❉ ❯ ❋ ❆ ❛ ❑ ❅ ❋ ❁ ❋ ❃❑❆ ❃❄❁ ● ❂ ❆ ▲ ❄ ❁ ❜ ❑ ▲ ❅ ❝ ❴ ❞ ❡ ❏ ❂ ❉❑ ❅❆ ❑● ❃ ❅ ❜ ❅❃❑ ▲ ❳ ❂ ▲ ❳ ❑ ❃ ❑ ▲❄❖ ❩❍ ◆ ❖ ❯ ❑ ❏ ❑ ❱ ❬ ❉❄❉ ❯ ❋ ❆ ❛ ❑ ❅ ❢ ❣ ❝ ❴ ❝ ❤ ✐❥ ❝ ❏ ❂ ❉❑ ❅❆ ❳ ❂ ▲ ❳ ❂ ❁ ❅ ❚ ❑ ▲❅ ❅❆ ❃❄ ❁ ❉ ❄ ❏ ❅ ❄ ❃ ❏ ❑ ❆ ❃ ❁ ❑ ❆ ▲❏ ❋ ● ▲❅ ❖ ❩❪ ◆ ❖ ❣ ❴ ❈ ❀ ❏ ❂ ❉ ❑ ❅❆ ❯ ❄❆ ❨ ❅ ● ❑ ❃❑❆ ❈ ❝ ❀ ❏ ❑ ❆ ❦ ❑ ❃ ❑ ❋ ❑● ❃ ❅ ❜ ❅❃❑ ▲ ● ❅ ❆ ❑ ▲ ❄❖ ❩ ❬ ◆ ❖ ❢ ❀❀❭ ❏ ❂ ❉ ❑ ❅ ❆ ❯ ❄ ❆ ❨ ❅● ❑ ❃❑❆ ❈ ❝ ❀ ❖ ❩ ✾ ◆ ❖ ❇ ✐ ❥ ❧ ❝ ❴ ❢ ❏ ❂ ❉ ❑ ❅ ❆ ❯ ❄ ❆ ❨ ❅● ❑ ❃❑❆ ❈ ❝ ❀❖ ❩♠ ◆ ❏ ❑ ❆ ❴ ❢ ❴ ❧ ❥ ❝ ◆ ♥ ❢ ❈ ❡ ❀ ❈ ❡ ✐ ❣ ❏ ❂ ❉❑ ❅❆ ❯ ❄❆ ❨ ❅● ❑ ❃❑❆ ❈ ❝ ❀❖ ❩❲ ◆ ❡ ♦ ❑❁ ❊ ❂ ❁ ❂ ❋ ❨ ♣ ❍ q q ❲ ◆ ❖ ▲ ❄ ❏ ❑ ❆ ❨ ● ❑❆ ❯ ❑ ❏ ❑ ❱ ✾ ❉❄ ❉❯ ❋ ❆ ❛ ❑ ❅ ❭ ❄ ❨ ❅❂ ❆ ❍ ❭ ❍ ◆ ❖ ❭ ❪ ❖ ❏ ❑ ❆ ❍ ✾ ▼ ❬ ▼ ❬ ❏ ❂ ❉❑ ❅ ❆ ❑ ❋ ❃❂ ❁ ❄ ❨ ❋ ❚❑ ❃❂ ❁ ❩ ❋ ❨ ❚ ▲ ❑❆ ❨ et a P ❵ ❍ q q q ◆ ❵ r ❑ ▲❅ ❚ ❯ ❄❆ ❛ ❄ ❫ ❑❫ ❑❁ ❑❆ ❏ ❄ ❆ ❨ ❑❆ ❀ ❇ ❈ ❏ ❑❁ ❅ A s tha P ia t ✉ ❉❄ ❆ ❋ ❆ ❫ ❋ ● ● ❑❆ ❊ ❑ ♣ ✈❑ ❳ ❁ ❑ ❨ ❉❄ ❆ ❇❉❀❇ ❈ ❉ ❄❁ ❋ ❯ ❑● ❑❆ ❊ ❑ ❨ ❅ ❑ ❆ ❏ ❑ ❁ ❅ ❚ ❂ ❂ ❯ ❊ ❄ ▲ ❑ ❁ ▲❅ ❃❂ ❯ ❚❑ ▲ ❉❑ ❱ ❬ ◆ ❏ ❑❆ ❉❄ ❆ ❨ ❑❆ ❏ ❋ ❆ ❨ ❏ ❂ ❉ ❑ ❅❆ ❩ ❪ ❢ ❣ ❝ ❴ ❝ ✐ ❝ ❖ ❩ ❬ ❣ ❴ ❈ ❀ ❖ ❩ ✾ ❢ ❀❀❭ ❖ ❩♠ ❇ ❥ ❝ ❴ ❢ ❖ ❏ ❑ ❆ ▲ ❄ ❊ ❑ ❨ ❅❑❆ ❩❲ ❴ ❢ ❴ ❧ ♥ ❴❑❉ ❊ ❑ ❁ ❍ ❬ ❖ ❚ ❅❆ ❨ ● ❑❁ ❑❆ ◆ ❵ ✇ ❑ ❏ ❅ ❖ ❳ ❁ ❑ ❨ ❉ ❄❆ ❅ ❆ ❅ ❉ ❄❆ ❨ ❑❆ ❏ ❋ ❆ ❨ ❏ ❂ ❉❑ ❅ ❆ ❳ ❂ ▲ ❳ ❂ ❁ ❅❚❑ ▲❅ ❅❆ ❃ ❄ ❁ ❉ ❄ ❏ ❅ ❄ ❃ ❩ ❪ ◆ ❏ ❑ ❆ ❏ ❂ ❉❑ ❅ ❆ ❯ ❄ ❆ ❨ ❅● ❑ ❃❑❆ ❈ ❝ ❀ ❩ ❬ ❖ ❩ ✾ ❖ ❩♠ ❖ ❏ ❑❆ ▲ ❄❊ ❑ ❨ ❅❑❆ ❩❲ ◆ ❵ ❀❁ ❂ ❃ ❄ ❅ ❆ ❀❇ ❈ ❉❄ ❉❯ ❋ ❆ ❛ ❑ ❅ ❑❳ ❅❆ ❅ ❃ ❑ ▲ ❛ ❑ ❆ ❨ ❃ ❅❆ ❨ ❨ ❅ ❃ ❄ ❁ ♣ ❑ ❏ ❑❯ ❈ ❝ ❀ ❯ ❑ ❏ ❑ ▲ ❑❑ ❃ ❑● ❃❅ ❜ ❅ ❃❑ ▲ ❆ ❛ ❑ ❁ ❄ ❆ ❏ ❑ ♣ ❵ ❈❏ ❑ ❆ ❛ ❑ ❑ ● ❃❅ ❜ ❅❃❑ ▲ ● ❅ ❆ ❑ ▲ ❄ ❯ ❑ ❏ ❑ ❏ ❂ ❉ ❑ ❅❆ ❣❴ ❈ ❀ ❩ ❬ ▲ ❄ ❁ ❃ ❑ ❁ ❄ ❑● ▲❅ ❳ ❂ ▲ ❳ ❂ ❁ ❅ ❚ ❑ ▲❅ ❅ ❆ ❃❄❁ ❉❄ ❏ ❅❄ ❃ ❏ ❑ ❆ ❃❁ ❑❆ ▲❏ ❋ ● ▲❅ ▲❅❨ ❆ ❑❚ ❯ ❑ ❏ ❑ ❏ ❂ ❉❑ ❅ ❆ ❢ ❣ ❝ ❴ ❝ ✐ ❝ ❩ ❪ ◆ ❉ ❄❆ ❛ ❄ ❊ ❑❊ ● ❑❆ ❏ ❂ ❉ ❑ ❅❆ ❑ ❋ ❃ ❂ ❁ ❄ ❨ ❋ ❚❑ ❃❂ ❁ ❑ ● ❑❆ ❉❄❆ ❨ ❑❚ ❑❉ ❅ ❳ ❂ ▲ ❳ ❂ ❁ ❅❚❑ ▲❅ ❏ ❑❆ ❊ ❄ ❁ ❅ ❆ ❃ ❄ ❁ ❑● ▲❅ ❏ ❄ ❆ ❨ ❑❆ ❯ ❁ ❂ ❃❄ ❅❆ ❍ ✾ ▼ ❬ ▼ ❬ ▲ ❄ ♣ ❅❆ ❨ ❨ ❑ r ① ▼ ❈ ❝ ❀❑ ▲ ❄ ❉❄ ❉❊ ❁ ❑ ❆ ❯ ❚ ❑ ▲ ❉❑ ❉❄ ❆ ❫ ❑ ❏ ❅ ❑ ● ❃ ❅ ❳ ❵ ❈ ● ❃❅ ❜ ❅ ❃❑ ▲ ❄❆ ② ❅ ❉ ❅❆ ❅ ❑● ❑ ❆ ❉❄ ❆ ❋ ❁ ❋ ❆ ❑ ❯ ❑ ❊ ❅ ❚ ❑ ❃ ❄ ❁ ❫ ❑ ❏ ❅ ❏ ❄❳ ❂ ▲ ❳ ❂ ❁ ❅❚❑ ▲❅ ❉❄❚ ❑❚ ❋ ❅ ❑ ● ❃❅ ❜ ❅ ❃ ❑ ▲ ❳ ❂ ▲ ❳ ❑ ❃ ❑ ▲ ❄ ❯ ❑ ❏ ❑ ❏ ❂ ❉❑ ❅ ❆ ❝ ❴ ❞ ❡ ❩❍ ◆ ❡ ② ❄ et a P s ❍ q q q ◆ ❵ ❀❑ ❏ ❑ ❏ ❂ ❉❑ ❅❆ ❳ ❂ ▲ ❳ ❂ ❁ ❅❚ ❑ ▲❅ ❅❆ ❃❄❁ ❉❄ ❏ ❅❄ ❃ ❢ ❣ ❝ ❴ ❝ ✐ ❝ ❖ ❃ ❄ ❁ ❫❑ ❏ ❅ ❯ ❄❚ ❅ ❯ ❑ ❃❑❆  ❛ ❑❆ ❨ ❉❄❆ ❄ ❉❯ ❑ ❃● ❑ ❆ ❁ ❄ ▲❅❏ ❋ ❑ ▲ ❯ ❑ ❁ ❃❑ ❃ ❢ ❊ ❄❁ ❑ ❏ ❑ ❯ ❑ ❏ ❑ ❯ ❄❁ ❉ ❋ ● ❑❑ ❆ ❯ ❁ ❂ ❃ ❄ ❅ ❆ ❵ ❀ ❂ ▲❅▲ ❅ ❅❆ ❅ ▲ ❑❆ ❨ ❑ ❃ ❉ ❄❆ ❨ ❋ ❆ ❃❋ ❆ ❨ ● ❑ ❆ ❊ ❑ ❨ ❅ ❄ ❆ ②❅❉ ❋ ❆ ❃ ❋ ● ❉❄ ❆ ❄ ❁ ❅ ❉❑ ❨ ❋ ❨ ❋ ▲  ▼ ❯ ♣ ❂ ▲ ❯ ♣ ❂ ❁ ❛ ❚ ❏ ❑ ❁ ❅ ❈ ❝ ❀ ❏ ❑ ❆ ❋ ❆ ❃❋ ● ❉❄❉ ❊ ❄ ❆ ❃ ❋ ●  ▼ ❑ ♦ ❛ ❚ ❯ ♣ ❂ ▲ ❯ ♣ ❑ ❃ ❄ ❅ ❆ ❃ ❄ ❁ ❉ ❄ ❏ ❅ ❑ ❃ ❄ ❏ ❑ ❁ ❅ ▲ ❅ ● ❚ ❋ ▲ ❁ ❄ ❑● ▲❅ ❵ ③ ❅ ❚ ❑ ❃ ❄ ❁ ❫ ❑ ❏ ❅ ❉ ❋ ❃ ❑ ▲❅ ❯ ❑ ❏ ❑ ❁ ❄ ▲❅ ❏ ❋ ❅❆ ❅ ❏ ❄ ❆ ❨ ❑ ❆ ❨ ❚ ❋ ❃ ❑ ❉❑ ❃ ❞ ◆ ❖ ❑ ▲ ❯ ❑ ❁ ❑ ❨ ❅❆ ♥ ❖ ❑ ❃❑ ❋ ▲ ❄ ❁ ❅ ❆ ❡ ❉❄❆ ❛ ❄❊ ❑ ❊ ● ❑❆ ❯ ❄ ❆ ♦ ❄ ❨ ❑ ♣ ❑❆ ❃❄ ❁ ♣ ❑ ❏ ❑ ❯ ❊ ❅ ❂ ❨ ❄ ❆ ❄ ▲❅ ▲ ❈ ❝ ❀❑ ▲ ❄ ❭ ❑ ❂ ❡ ❚❑ ❛ ❉ ❑❆ ❍ q q ❬ ◆ ❵ ❡ ❄❉ ❋ ❑ ❏ ❂ ❉❑ ❅ ❆ ❏ ❅ ❑ ❃ ❑ ▲ ❊ ❄❁ ❯ ❄❁ ❑ ❆ ❑ ❆ ❏ ❑ ❚❑ ❉ ❯ ❄❉ ❂ ❉❯ ❑❑ ❆ ❯ ❁ ❂ ❃ ❂ ❆ ❏ ❑❁ ❅ ▲❅❃ ❂ ❯ ❚ ❑ ▲ ❉ ❑ ● ❄ ❚ ❋ ❑❁ ▲ ❄ ❚ ▲ ❄ ♣ ❅ ❆ ❨ ❨ ❑ ❏ ❑ ❯ ❑ ❃ ❉❄❉ ❯ ❄ ❁ ❃ ❑ ♣ ❑ ❆ ● ❑ ❆ ❯ r ▲❅ ❃❂ ❯ ❚❑ ▲ ❉❑❖ ❛ ❑ ❅ ❃ ❋ ▲ ❄ ● ❅❃ ❑ ❁ ✿ ❵ ♠ ③ ❋ ♦ ♣ ❑ ❆ ❑ ❆ et a P s ❪ ■ ■ ■ ◆ ❖ ▲ ❄ ♣ ❅❆ ❨ ❨ ❑ ❈ ❚ ❛ ❑❆ ❨ ♣ ❑ ❆ ❛ ❑ ❃❄❁ ❚❑ ❁ ❋ ❃ ❯ ❑ ❏ ❑ ❯ r ❑ ▲❑❉ ❏ ❑ ❯ ❑ ❃ ❏ ❅ ♦ ❄ ❨ ❑ ♣ ④ ❂ ❋ ❆ ❨ et a P ❵ ❍ q q ⑤ ◆ ❵ ⑧⑨ ⑩ ❶ ❷ ❸ ❷ ⑩ ❹ ❷ ❺ ❻ ❷ ❸❼❽ ❾ ⑨ ❺ ❿ ⑨ ➀❷ ➀❷ ⑩ ❷ ❺ ❷ ❸❷➁ ❷ ➁ ❼❺ ➂ ❾ ❷ ❶ ❷ ❶ ➂ ➁❷ ❼ ❺ ➃ ➂ ❸➃ ➂ ⑩ ❼ ❽ ❷ ❸❼ ❼ ❺ ➄⑨ ⑩ ➁⑨ ❶ ❼⑨➄ ➅➆ ➇ ❶ ❷ ❺ ❾ ⑨ ❺ ➈ ❼❹ ❷ ➄❷ ❺ ➉➊ ➋ ➅ ➌ ➍ ➅ ⑥ ➍ ➅ ➎ ➍ ❶ ❷❺ ➅ ➏ ➇ ❷ ❺ ➄ ❷ ⑩ ❷ ➐ ➁ ➋ ➐➉ ❶ ⑨ ❺ ➈ ❷ ❺ ➋ ➑ ➄ ❿ ❾ ⑨ ➉➊ ➋ ❷ ❸⑨ ❽ ❷ ❼❺ ➁⑨❺ ➒ ❺ ➀ ➒ ❹ ❹ ❷ ❺ ➓ ❷ ❻ ➔ ❷ ❸ ⑨ ➁ ➒ ❷ ❶ ➂ ➁❷ ❼❺ ➄⑨ ⑩ ❸⑨➓ ➒ ➄ ➄⑨ ⑩ ❹ ➂ ❺ ❸ ⑨ ⑩ → ❷ ❸❼ ❾ ❷ ❶ ❷ ❸ ⑨➁ ➒ ❷ ➋ ➑ ➄ ❿ ❾ ⑨ ➉➊ ➋ ❷ ❸ ⑨ ➍ ❹ ⑨ ➣ ➒ ❷❽ ❼ ❾ ❷ ❶ ❷ ❾ ➂ ➁❾ ❷ ❽➂ ➈ ❷➁ ➓ ⑨ ⑩ ❷ ➄ ➄ ❼ ❶ ❷ ❹ ➁⑨➁ ❾ ➒ ❺ ❿ ❷ ❼ ➒ ⑩ ➒ ➄❷ ❺ ➄⑨ ⑩ ❹ ➂ ❺ ❸⑨ ⑩ → ❷ ❸❼ ↔↕ ➉ ➋➙➛ ➜ ➅ ➌ ➇ ❶ ❷ ❺ ➝➋ ➋➙➞ ➙➟ ➠ ➅ ⑥ ➊ ❷➓ ⑨ ❽ ➆ ➡ ➠⑨ ❸❼❶ ➒ ❿ ❷❺ ➈ ➄ ⑨ ⑩ ❽ ❼➓ ❷➄ ❶ ❷❽ ❷➁ ⑩ ⑨ ❷❹ ❸❼ ➃ ➂ ❸➃ ➂ ⑩ ❼❽❷ ❸❼ ❼ ❺ ➄⑨ ⑩ ➁⑨ ❶ ❼ ⑨ ➄ ➒ ❺ ➄ ➒ ❹ ❸ ⑨➁ ➒ ❷ ➋➑ ➄ ❿ ❾ ⑨ ➉➊ ➋ ❷ ❸ ⑨ ❷ ❶ ❷❽ ❷❻ ➉ ❸ ❾ ❷ ⑩ ➄ ❷➄ ➝ ➍ ❸ ⑨ ❶ ❷ ❺ ➈ ❹ ❷❺ ⑩ ⑨ ❸❼❶ ➒ ❿ ❷❺ ➈ ➄ ⑨ ⑩ ❽ ❼ ➓ ❷➄ ❶ ❷ ❽ ❷➁ ❾ ⑨ ❺ ➈ ❼❹ ❷ ➄❷ ❺ ➉➊ ➋ ❷ ❶ ❷ ❽❷ ❻ ➢ ❼❸❼❺ ↔ ❾ ❷ ❶ ❷ ➅ ➌ ➍ ➉ ❸ ❾ ❷ ⑩ ➄ ❷➄ ➝ ❾ ❷ ❶ ❷ ➅ ⑥ ❶ ❷❺ ➅ ➎ ➍ ❸ ⑨ ⑩ ➄ ❷ ➆ ⑩ ⑨ ❸❼ ❶ ➒ ➉ ❸ ❾ ❷ ⑩ ➄❷ ➄ ❶ ❷ ❺ ➤ ⑩ ⑨ ❸❼ ❶ ➒ ➢ ❼❸❼❺ ↔ ❷➄ ❷ ➒ ➥❼ ❸ ➄ ❼ ❶ ❼ ❺ ➥ ❾ ❷ ❶ ❷ ➅ ➏ ➡ ➋ ❷ ❶ ❷ ➅ ➏ ❾ ➂ ➁ ❾ ❷ ❽➂ ➈ ❷➁ ➓ ⑨ ⑩ ❷➄ ➍ ⑩ ⑨ ❸❼ ❶ ➒ ❿ ❷ ❺ ➈ ➄ ⑨ ⑩ ❽ ❼ ➓ ❷➄ ❷ ❶ ❷❽❷ ❻ ➆ ⑩ ⑨ ❸❼ ❶ ➒ ❷ ❸ ❾ ❷ ⑩ ➄❷➄ ❶ ❷❺ ➤ ⑩ ⑨ ❸❼❶ ➒ ➉❽ ❷❺ ❼ ❺ ➉ ➍ ❸➒ ❷ ➄ ➒ ❷ ❸ ❷ ➁ ❷ ➁ ❼❺ ➂ ❿ ❷ ❺ ➈ ➄ ❼❶ ❷❹ ➓ ⑨ ⑩ ➁ ➒ ❷ ➄❷ ❺ ➛⑨ ⑩ ⑩ ❷❺ ➂ ➤ ➦ ⑦ ➦ ➇ ➡ ➥ ❷ ❸❼ ❽ ❼ ❺ ❼ ➁⑨ ❺ ➒ ❺ ➀ ➒ ❹ ❹ ❷❺ ➓ ❷❻ ➔ ❷ ➐ ➁ ➋ ➐➉ ❹ ⑨ ➁ ➒ ❺ ➈ ❹ ❼ ❺ ❷ ❺ ➁ ⑨➁❾ ➒ ❺ ❿ ❷ ❼ ➁⑨ ❹ ❷ ❺ ❼❸ ➁⑨ ❿ ❷ ❺ ➈ ❸ ❷ ➁❷ ❶ ⑨ ❺ ➈ ❷❺ ➋➑ ➄ ❿ ❾ ⑨ ➉➊ ➋ ❷ ❸ ⑨ ❽ ❷ ❼❺ ❶ ❷ ❽❷ ➁ ➁⑨ ➁➂ ➁❾ ❷ ❹ ❷ ➄ ❼➂ ❺ ➍ ❿ ❷ ❼➄ ➒ ❷ ❺ ➄❷ ⑩ ❷ ❽ ❷ ❼❺ ➁ ⑨❽ ❼ ➓ ❷➄ ❹ ❷❺ ⑩ ⑨❷ ❹ ❸ ❼ ➃ ➂ ❸➃ ➂ ⑩ ❼ ❽ ❷ ❸ ❼ ❼❺ ➄⑨ ⑩ ➁ ⑨ ❶ ❼ ⑨ ➄ ❶ ❷ ❺ ❻ ❼ ❶ ⑩ ➂ ❽ ❼❸❼ ❸ ➉➊ ➋ ➁⑨ ❺ ➀ ❷ ❶ ❼ ➉ ➝➋ ❶ ❷ ❺ ➋❼ ❸ ⑨ ➓ ❷ ➈ ❷ ❼ ❸ ➒ ➁ ➓ ⑨ ⑩ ⑨❺ ⑨ ⑩ ➈ ❼ ➡ ➅ ⑩ ❷ ➈ ➁⑨ ❺ ➐➁ ➋ ➐➉ ➁ ⑨➁❾ ➒ ❺ ❿ ❷ ❼ ❹ ⑨ ➁ ❼ ⑩ ❼❾ ❷❺ ❿ ❷❺ ➈ ➄ ❼❺ ➈ ➈ ❼ ❶ ⑨❺ ➈ ❷❺ ➋ ➐➉ ➧ ➨ sba ➩ ➫ a r ➭ ➯ trata ➍ ➂ ❽ ⑨❻ ❹ ❷ ⑩ ⑨ ❺ ❷ ❼➄ ➒ ➍ ➋ ➐➉ ❼ ❺ ❼ ❶ ❼ ➀ ❷ ❶ ❼❹ ❷ ❺ ❷ ➣ ➒ ❷❺ ➒ ❺ ➄ ➒ ❹ ❷ ❺ ❷ ❽ ❼ ❸❼❸ ❻ ❼ ❶ ⑩ ➂ ➃ ➂ ➓ ❼❸❼➄❷ ❸ ➐➁ ➋ ➐➉ ➡ ⑧ ⑨ ⑩ ❶ ❷ ❸ ❷ ⑩ ❹ ❷❺ ❻ ❷ ❸❼❽ ❷❺ ❷ ❽ ❼ ❸❼ ❸ ➁⑨❺ ➒ ❺ ➀ ➒ ❹ ❹ ❷ ❺ ➃ ⑩ ❷ ➈ ➁⑨ ❺ ➲ ➳➵ ➸➺ ➻ ➼ ➽➳➾➚ ➺ ➪ ➸ ➶ ➹➸➘ ➳ ➘ ➳➴➳➶ ➷➴ ➷ ➬ ➳➶ ➳➾➳ ➮ ➳ ➮ ➚ ➶ ➱ ➵ ➸ ➵ ➸ ➴➳➪➳ ✃ ➱ ➮ ➳➚ ➶ ✃➳➴➚ ➵ ➸ ➴➵➳ ❐➳➚ ➬ ➚ ➪ ➸ ❒➲ ❮➳➾ ➸➼ ÐÑÒÐÓ Ô Õ Ö ×Ø × Ù × Ø × Ø ×Õ Ö ×Ú Ú ÛØ Ö Ü Ý ÛÞ Ûß à á× Þ Ûâ Û Ø Ûãä â åä ß ß ×â Ü ÞÕ Ú ×Ø ×â æ × ç Õ Ô ×è Û ×â Ô Õ ç× Ö Ø ×Ö Û ß ä Ö é × Ù Ö Ü Ý Û Þ Ú Û Ø Ö Ü Ý Ü Ô Û çÛã ×ç êæ ãÕ ëÜ Ü ÞÛ ãã Þ Õ ä â ãä ß Ý Ö ×è ÑÕâ ÐÑÒÐ Ó Ô Õ Ö × Ø × Ù × Ø × Ø ×Õ Ö ×Ú Ø Û Ô ×ì× Ú í î× Ñ Ô × Ö ï ❰ à á×Þ Û â Û ç Õ ç ä ×Û Ø Õ â è ×â Ú × çÛÞ Ù Õ â æ Õ å× å× Ö ×â × ç×Ñ ×ÑÛâ Ü Ð Ñ ÒÐÓ Ø Õâ è × â Ò Ð Ó Þ ×Ûâ ç Õ Ù Õ Ö ãÛ æ ×â è Ø Ûãä â å ä ß ß ×â Ù ×Ø × î × Ñ Ô ×Ö ï ð Þ Ûâ è ß ×Ö ×â ñ Ø Û ×ã ×çò Ø Û Ñ× â × Ð Ñ ÒÐÓ Ô Õ Ö × Ø × Ù ×Ø × Ø × Õ Ö ×Ú ó ð æ × Ûãä Ø ×Õ Ö ×Ú Þ Ü Ü Ù ã Õ Ö Ô Õ ç×Ö çÛã Ü Ù Þ ×ç Ñ×à á× çÛÞ Ù Õ â Õ Þ Ûã Û×â Ûâ Û Ø × Ù ×ã Ø Û è ä â × ß ×â ç ÕÔ ×è × Û Ø ×ç× Ö ä â ãä ß Ñ Õâ Ø Õ ç× Û â Ù Ö ÛÑ Õ Ö ç Ù Õ çÛÝ Ûß Ø × Þ× Ñ Ñ Õ â è Û çÜ Þ× çÛ è Õâ Ûâ Û ç Õ ô ×Ö × ä ãä Ú Ø × â Ø × Ù ×ã Ù ä Þ× Ø Û è ä â × ß ×â ä â ãä ß Ñ Õâ è ä å Û Õ ß ç Ù Ö Õ çÛ â æ × Ø Û Ø × Þ× Ñ ã×â × Ñ×â à C õ B 320 400 500 600 ö÷øù ÷ ú û üý þúÿ ✁ ✂ ✄✁ ☎ú ÿ ÿ ù ✁ ✆✁ ✝ ÷ ✆ þ✞ ✟ ✠✡ sba ☛ ia r ☞ strata ✌ ✆ú ✄÷✍ ✎ ✟ ✌ ú ÷✏ø✑✒ þ ✞ ✟ ✠ esba ☛ ✓ a r ☞ strata ✔ ☎ ÷✒ ú ÷✏ø✑✒ ✞ øþ✞ ✟ ✕ ✘✙ s ✚ mpul ✛ n ✜✢ ✣ ✤ ✥ ✦✧ ★ ✩✪✫ ✬ ✭ a ✮ ✣ ✢ ✯ ✰ ✱ ✭ a ✲ abathricu ✭ ✳✴ ✰ ✭ ✬ ✭ a ✵ ✣ ✧ ✤ ✶ ✦ ✢ ✷ ✣ ✸ ✯✹ ✮ ✯ ✯ ✸ ✺ ✹✣✸ ✯ ✶ ✦✢ ✻ ✼ ✻ ✢ ✣ ✧ ✽ ✗ ✾ ✿ ✶ ✮ ✣✧ ✥ ✦✥ ✯✹ ✯ ✼ ✯ ✼ ✦✸✣✥ ✣✣ ✧ ✵ ✣✧ ✤ ❀ ✯✧ ✤ ✤ ✯ ✮ ✦✧ ✤ ✣ ✧ ✬ ✭ a ✮ ✣ ✢ ✯ ❁ ❂ sba ❃ ❄ a r ❅ ❆ trata ❁ ❇✬ ✭ a ✴ ❈ ✦✢ ✮ ✣✸✣ ✢ ✼ ✣✧ ✮ ✦✮ ✻ ✼ ✸ ✯ ✣✸✣ ✥ ✣✥ ✯ ✧ ✺ ❉ ❊ ✥ ❋❊✫ ✥ ✦ ✥ ✿ ✻ ✧ ✵ ✣ ✯ ✼ ✦✸✣✥ ✣✣ ✧ ✮ ✦✧ ✤ ✣✧ ✮ ✣ ✦ ✢ ✣ ✷ ✲❅ ❅ ✬ s ✸ ✯ ❀ ✺ ✿ ✹ ✣ ✸✥✣ ✼ ✦ ● ❍ ■ ❍ ❏ ✵ ✣✧ ✤ ✥ ✦ ✧ ✤ ✣✧ ✮ ✻ ✧ ✤ ✮ ✺ ✥✣ ✯✧ ❑ ✺ ✸ ❑ ✺ ✢ ✯ ✹ ✣ ✸ ✯ ✯ ✧ ❀ ✦ ✢ ✥ ✦✮ ✯ ✦ ❀ ✜ ▲ ❏ ✮ ✣✧ ✮ ✺ ✥✣ ✯✧ ✿ ✦ ✧ ✤ ✯ ✼ ✣ ❀ ✣✧ ✫ ▼ ❋ ✜ ❍ ❉ ✜ ◆ ❉ ✜✖ ❉ ✮ ✣ ✧ ✸ ✦✶ ✣ ✤ ✯✣✧ ✜ ✾ ❏ ✴ ✩ ✺ ✥✣ ✯ ✧ ✯✧ ✯ ✸✣ ✧ ✤ ✣ ❀ ✿ ✦ ✧ ❀ ✯ ✧ ✤ ✮ ✣ ✹✣✥ ✣ ✼ ❀ ✯ ❖ ✯ ❀ ✣ ✸ ✦ ✧ P ✯ ✥ ❋ ❊ ✫ ✼ ✣ ✢ ✦ ✧ ✣ ✿ ✣ ✮ ✣ ✮ ✺ ✥✣ ✯✧ ✯✧ ✯ ❀ ✦✢ ◗ ✣✮ ✯ ✢ ✦ ✣ ✼ ✸ ✯ ❑ ✺ ✸ ❑ ✺ ✢ ✯ ✹ ✣ ✸ ✯ ✯ ✧ ❀ ✦✢ ✥ ✦✮ ✯ ✦ ❀ ✮ ✣✧ ❀ ✢ ✣✧ ✸✮ ✻ ✼ ✸ ✯ ✸ ✯✤ ✧ ✣ ✹ ✸ ✦✢ ❀ ✣ ✣ ✼ ❀ ✯ ❖ ✯ ❀ ✣ ✸ ✼ ✯✧ ✣ ✸ ✦ ✸ ✦✷ ✯ ✧ ✤ ✤ ✣ ✮ ✺ ✥✣ ✯✧ ✣ ✻ ❀✺ ✢ ✦✤ ✻ ✹✣ ❀ ✺ ✢ ❀ ✦ ✢ ❑ ✺ ✸ ❑ ✺ ✢ ✯ ✹ ✣ ✸ ✯ ✮ ✣ ✧ ✥ ✦ ✧ ✵ ✦✶ ✣ ✶ ✼ ✣✧ ✦✧ P ✯ ✥ ✥ ✦✧ ◗ ✣ ✮ ✯ ✣ ✼ ❀ ✯ ❑ ✴ ❘❙ ✛ ❚ ✛ ❯ ❱ ✙ r ✚ m ✛ ✘✛ ❲ ✚ ❳ ❋ ✦✧ ✦ ✹✯ ❀ ✯ ✣✧ ✯✧ ✯ ✮ ✯ ✶ ✯✣ ✵ ✣ ✯ ✺ ✹✦ ✷ ❨ ✯✶ ✣ ✷ ❩ ✺ ✥ ✿ ✦ ❀ ✦✧ ✸ ✯ ✮ ✦ ✧ ✤ ✣✧ ◗ ✻ ✮ ✻ ✹ ❬ ❭ ✸ ✺ ✹✣✸ ✯ ✮ ✣✧ ✦ ✼ ✸ ✿ ✢ ✦ ✸ ✯ ✤ ✦ ✧ ✮ ✣ ✹ ✣ ✥ ✢ ✣ ✧ ✤ ✼ ✣ ✿ ✦ ✢ ✣ ✼ ✯ ❀ ✣✧ ❀ ✣✧ ✣✥✣ ✧ ✵ ✣✧ ✤ ❀✺ ✹ ✦✢ ✣ ✧ ❀ ✦ ✢ ✷ ✣ ✮ ✣ ✿ ★ ✦ ✼ ✣ ✥✣ ✧ ✣✸✣ ✥ ✮ ✣ ✧ ✣ ✹ ✻ ✥ ✯ ✧ ✯ ✻ ✥ ✣ ❪✧ ✴ ✩✢ ✴ ❫ ✻ ✷ ✣ ✢ ✸ ✺ ✧ ✺ ✴ ❊ ✻ P ✻ ✧ ✯ ✮ ✯✮ ✻ ✼ ✻ ✧ ✤ ✺ ✹ ✦✷ ❋ ✢ ✺ ✤ ✢ ✣✥ ❈✦✣✸ ✯✸ ❴ ✣ ❈❋❋❫❉ ✩✦ ✿ ✣ ✢ ❀ ✦ ✥ ✦✧ ❋ ✦ ✧ ✮ ✯ ✮ ✯ ✼ ✣ ✧ ✪ ✣ ✸ ✯ ✺ ✧ ✣ ✹ ❉ ❭ ✧ ✮ ✺ ✧ ✦✸ ✯✣✴ ❵ ❛❜ ❝❞ ❛❵ ❡ ❞ ❢ ❣ ❤❢ ✐❥ ❝ ❜❢ ❞ ❢ ✐❤❢ ❣ ❤ ❢ ❦ ❞ ❢ ❡ I ❧ ♠ - ❞ ♥❣ ♦ s ♣ q❤qrs ❞ ❢ ❣ ❝ ❞ ❛ q ❞ ❡ ❞ s I M t ✉ a ✈ toma mala ✇ ath ① ic ② m ❝③ ④⑤ str ⑥ ⑦ Me ⑧ a ⑨⑩ ❶ ❷ a ❷ a ⑧ aba ⑩ h ❸ ic ❹ ❷ ❺ . ❻ ❼ ❻ ❽❻ ❾ ❿➀ ❻ ➁ ➀ ➁❻ ➂ ❻ ➃❻➂ ❾ ➄➅ ➆➇ ❻ ➈ ➀ ➃ ➀ ❽❻➁ ➉ ➇ ➊ ❽ ➋ ❻ ➂ ➌ ➁ ➀ ➃➍ ➀ ❾ ➅ ❻ ❼ ❻ ➁❻ ➂ ❻ ❾ ❻ ❿❻ ➃ ❼ ➆➂ ➌ ❻ ➂ ➁ ➄➂ ➌ ➈ ❻➁ ➈ ➆❽❻ ➇ ➀ ➁ ❻➂ ❻ ❽ ➀ ➃➄➂ ➄➀ ➃ ➁ ➄➂ ➌ ➌ ➄ ➅ ❻ ❼ ❻ ❼ ❻ ➆ ➇ ❻ ❾ ➁➇ ➉ ➅ ➄❿ . ➎ ❻ ❽❻ ❾ ❿ ❻ ➁ ➀ ➆➂ ➏ ➄➃ ➅ ➆➂ ➁ ➄ ➂ ➌ ❼ ❻ ❽❻ ➃ ❼ ➆➁➉ ➈ ❿ ➄➐ ➄➈ ❻ ❿➄ ➊ ❽ ❻ ❼ ❻ ❽❻ ❾ ➑ + - ➊➒➓ ❻ ❿➆ ➃➆➃ ➍ ➇ ❻ ➂ ➅ ❽❻ ❿➃ ❻ , ❿➀ ❻➁ ➀ ➅ ➇ ➉ ➁ ➆➄➂ ➋ ❻➂ ➌ ➅ ❻ ❽ ➄➂ ➌ ➃➆❽ ➄ ➃ ➅ ❻❾ ➅ ❻ ❼ ❻ ➃ ➆➃ ➍ ➇ ❻➂ ➅ ❽ ❻ ❿➃❻ , ➋ ❻ ➂ ➌ ❼ ➄ ❿ ❻ ➂ ❼ ➄➈ ❻ ➂ ➉ ❽ ➆ ❾ ➌ ➆➂ ➔ ❷ a. ➒➀ → ➀ ❻ ➂ ➅ ➆ ➂ ➆ ❽ ➄ ➁ ➄ ❻ ➂ ➄➂ ➄ ❻ ❼ ❻❽ ❻❾ ➃➆ ➂ ➌ ➄❿ ➉ ❽ ❻ ❿➄ ❼ ❻ ➂ ➃➆ ➂ ➌ ➈ ❽➉ ➂ ➌ ➆➂ ➋ ❻ ➂ ➌ ➃ ➆ ➂ ➋ ❻ ➂ ❼ ➄➈ ❻➂ ➑ + - ➊➒➓ ❻ ❿➆ ➃ ➆➃ ➍ ➇ ❻ ➂ ➅ ❽ ❻ ❿➃ ❻ ❼ ❻➇ ➄ Me ⑧ a ⑨ ⑩ ❶ ❷ a ❷ a ⑧ aba ⑩ h ❸ ic ❹ ❷ ❺ . ➣↔↕ ➊ ➁ ➉ ➁❻ ❽ ➁ ➆ ❽ ❻❾ ➍ ➆➇ ❾ ❻ ❿➄ ❽ ❼ ➄ ❿➄➂ ➁ ➆ ❿➄❿ ❼ ➆➂ ➌ ❻ ➂ ➃➆➂ ➌ ➌ ➀ ➂ ❻ ➈ ❻ ➂ ➁➇ ❻➂ ❿ ➈ ➇ ➄ ➅ ❿➄ ➍ ❻ ❽ ➄➈ ❼ ➆➂ ➌ ❻➂ ➙ ↕ ➊ ➁ ➉ ➁❻❽ ❿➆➍ ❻ ➌ ❻ ➄ ➣ ➆➁❻➈ ❻ ➂ . ➣↔ ↕ ➊ M ❷ ➔ ❷ a ➀ ➁ ➀ ❾ ➁ ➆ ❽ ❻❾ ➍ ➆➇ ❾ ❻ ❿➄❽ ❼ ➄➄ ❿ ➉ ❽❻ ❿➄ ➃ ➆ ❽ ❻❽ ➀ ➄ ➄❿➉ ❽ ❻ ❿ ➄ ➌ ➆ ➂ ❿➆ ➣ ❻ ➇ ❻ ➍ ➆➇ ➁❻ ❾ ❻ ➅ . ➛ ❻ ➌ ➄❻ ➂ ➀ → ➀ ➂ ➌ 5’ ❼ ❻ ➂ ➁ ➆ ➂ ➌ ❻❾ ➌ ➆➂ M ❷ ➔ ❷ a ➁ ➆ ❽ ❻❾ ❼ ➄➄ ❿ ➉ ❽❻ ❿➄ ❼ ➆ ➂ ➌ ❻➂ ➓ ➜ ➙ ➔ ❶ ⑧ ➝ ❷ e ❸ a ⑨ e chai ➞ ❸ eac ⑩ i ❶ ➞ ➃➆ ➂ ➌ ➌ ➀ ➂ ❻➈ ❻ ➂ ➣ ↔↕ ➊ ➁ ➉ ➁❻❽ ❿➆ ➍ ❻ ➌ ❻ ➄ ➣ ➆➁❻ ➈ ❻ ➂ ❼ ❻➂ ➅ ➇ ➄ ➃➆➇ ➔ ❷ a ➋ ❻➂ ➌ ❼ ➄ ❼ ➆❿ ❻ ➄ ➂ ❼ ❻ ➇ ➄ ➍ ➆ ➍ ➆ ➇ ❻➅ ❻ ➁ ❻➂ ❻ ➃ ❻ ➂ , ❿➆ ❼ ❻ ➂ ➌ ➈ ❻➂ ➍ ❻ ➌ ➄ ❻ ➂ ➀ → ➀ ➂ ➌ 3’ ➌ ➆ ➂ M ❷ ➔ ❷ a ➁ ➆❽❻ ❾ ❼ ➄➄ ❿ ➉ ❽❻ ❿➄ ❼ ➆ ➂ ➌ ❻ ➂ 3’ ➙ ➊ ➜ ➟➠ ➛ ❻ ➌ ➄ ❻ ➂ - ➍ ❻ ➌ ➄❻ ➂ ➌ ➆➂ ➁ ➆ ➇ ❿➆ ➍ ➀ ➁ ➁ ➆❽❻❾ ➍ ➆➇ ❾ ❻ ❿➄❽ ❼ ➄ ➌ ❻ ➍ ➀ ➂ ➌ ➃ ➆ ➂ ➌ ➌ ➀ ➂ ❻ ➈ ❻ ➂ ➓ ➜ ➙ ❼ ❻ ➂ ➁ ➆ ❽ ❻❾ ❼ ➄ ❿➄ ❿➄ ➅ ➈ ❻➂ ➈ ➆ ❼ ❻ ❽❻ ➃ ➅ ➡➟➢ - ➒ ➟ ❻ ❿➋ . ➓ ❽❻ ❿➃➄ ❼ ➇ ➆➈ ➉ ➃➍ ➄➂ ❻ ➂ ➁ ➆ ➇ ❿➆ ➍ ➀ ➁ ➁ ➆ ❽ ❻❾ ➍ ➆➇ ❾ ❻ ❿➄❽ ❼ ➄➄➂ ➁ ➇ ➉ ❼ ➀ ➈ ❿➄ ➈ ❻ ➂ ➈ ➆ ❼ ❻ ❽ ❻ ➃ ➤➥ c ❶ ⑧ i ↔ ➑ 5α . ➊ ➂ ❻ ❽ ➄❿➄ ❿ ❿➆ ➈ ➀ ➆ ➂ ➂ ➀ ➈ ❽ ➆➉ ➁ ➄ ❼ ❻ ➃➆ ➂ ➀ ➂ → ➀ ➈ ➈ ❻ ➂ ➍ ❻ ❾ ➦ ❻ ➅ ❻➂ → ❻➂ ➌ ❿➆➈ ➀ ➆ ➂ ➅ ➆➂ ➋ ❻ ➂ ❼ ➄ ➜↔ ➎ M ❷ ➔ ❷ a ❻ ❼ ❻❽ ❻❾ 2871 ➅ ➍ ➋ ❻ ➂ ➌ ➃ ➆ ➂ ➋ ❻ ➂ ❼ ➄➈ ❻➂ 956 ❻ ❿ ❻ ➃ ❻ ➃➄➂ ➉ ❼ ➆➂ ➌ ❻ ➂ ➍ ➆➇ ❻➁ ➃ ➉ ❽ ➆➈ ➀ ❽ 105.29 ➈ ↔ ❻ ❼ ❻ ➂ ➅ ➇ ➆ ❼ ➄➈ ❿➄ ➂ ➄ ❽ ❻ ➄ ➅ I ❿➆➈ ➄➁ ❻➇ 6.84. ➊ ➂ ❻ ❽ ➄ ❿➄ ❿ ➈ ➆ ❿➆ → ❻ → ❻ ➇ ❻➂ ❽➉ ➈ ❻❽ ➍ ➆➇ ❼ ❻ ❿ ❻➇ ➈ ❻➂ ➂ ➀ ➈ ❽ ➆➉ ➁ ➄ ❼ ❻ ➃ ➙ ↕ ➊ ➃➆➂ ➀ ➂ → ➀ ➈ ➈ ❻➂ ➍ ❻❾ ➦ ❻ M ❷ ➔ ❷ a ➃ ➆➃ ➅ ➀ ➂ ➋ ❻ ➄ ➈ ➆➃ ➄ ➇ ➄➅ ❻ ➂ 82 ❼ ➆ ➂ ➌ ❻➂ ➔ ❷ a ➧➨ ⑩ i ⑨ ➩ i ➞ ➨ fe ❸ a; 81 ❼ ➆➂ ➌ ❻➂ ➔ ❷ a J ❹ ➫ ⑧ a ➞ ⑨ ❸ egia, ➔ ❷ a P ❶ ➔ ❹ ⑧❹ ⑨ ⑩ ❸ ich ❶ ➭ a ❸ ➔ ➯ , ➔ ❷ a Se ⑨ ba ➞ ➨ a ❸ ❶ ⑨ ⑩ ❸ a ⑩ a, ❼ ❻ ➂ ➔ ❷ a P ❸❹ ➞ ❹ ⑨ ➔ ➲ ❸⑨ ica ❼ ❻➂ 80 ❼ ➆➂ ➌ ❻➂ ➔ ❷ a L ➝ c ❶ ➔ ➲ ❸⑨ ic ❶ ➞ e ⑨ c ❹ ⑧ e ➞ ⑩ ❹ ❷ . ➛ ➆➇ ❼ ❻ ❿ ❻➇ ➈ ❻➂ ❼ ➆ ❼ ➀ ➈ ❿➄ ➀ ➇ ➀ ➁ ❻➂ ❻ ❿ ❻ ➃ ❻ ➃➄➂ ➉ , ➢ ➃➓ ➢ ➊ ➃➆ ➃ ➅ ➀ ➂ ➋ ❻ ➄ ➈ ➆ ➃➄➇ ➄➅ ❻➂ 94 ❼ ➆➂ ➌ ❻➂ ➓ ➢ ➊ ➧ ➨ ⑩ i ⑨ ➩ i ➞ ➨ fe ❸ a ❼ ❻➂ ➓ ➢ ➊ J ❹ ➫ ⑧ a ➞ ⑨ ❸ egia; 93 ❼ ➆ ➂ ➌ ❻➂ ➓ ➢ ➊ P ❶ ➔ ❹ ⑧ ❹ ⑨ ⑩ ❸ ich ❶ ca ❸ ➔ ➯ ; 92 ❼ ➆➂ ➌ ❻➂ ➓ ➢ ➊ ➧➨ cia faba, L ➝ c ❶ ➔ ➲ ❸ ⑨ ic ❶ ➞ e ⑨ c ❹ ⑧ e ➞ ⑩ ❹ ❷ , S ❶ ⑧ a ➞ ❹ ❷ ⑩ ❹ ➳ ➲ ❸❶ ⑨❹ ❷ , ❼ ❻ ➂ ➵ ❸ abid ❶ ➔ ⑨ i ⑨ ⑩ ha ⑧ ia ➞ ➯ , ➊➑➊ 4. ➢ ➃➓ ➢ ➊ ➃➆➃➅ ➀ ➂ ➋ ❻ ➄ 10 ❼ ➉ ➃ ❻ ➄ ➂ ➁➇ ❻ ➂ ❿ ➃➆➃ ➍ ➇ ❻ ➂ , 4 ❽ ➉ ➉ ➅ ❿➄ ➁ ➉ ➅ ❽❻ ❿➃ ❻ , 6 ❼ ➉ ➃ ❻ ➄ ➂ ➐ ➀ ➂ ➌ ❿ ➄ ➉ ➂ ❻❽ ❼ ❻ ➂ 3 ❼ ➉ ➃ ❻ ➄➂ ❻ ➀ ➁➉ ➇ ➆➌ ➀ ❽ ❻➁ ➉ ➇ . ④⑤ str ⑥ ➸ t Me ⑧ a ⑨⑩ ❶ ❷ a ❷ a ⑧ aba ⑩ h ❸ ic ❹ ❷ ❺ . ➄ ❿ ❻➂ ➊ ❽ - ❻ ➣➣ ➀ ➃➀ ❽❻➁ ➄ ➂ ➌ ➅ ❽ ❻➂ ➁ ➁❾ ❻➁ ➌ ➇ ➉ ➦ ❿ ➦ ➆❽ ❽ ➄ ➂ ❻ ➣ ➄❼ ➄ ➣ ❿ ➉ ➄ ❽ ❿ ➦ ➄ ➁ ❾ ❾ ➄➌ ❾ ❽ ➆ ➺ ➆❽ ➉ ➐ ❿ ➉ ❽ ➀ ➍ ❽ ➆ ❻❽ ➀ ➃➄ ➂ ➄ ➀ ➃ ➄ ➂ ➁❾ ➆ ➁ ➇ ➉ ➅ ➄ ➣ ❿ . ➻ ➂ ➆ ➉ ➐ ➁ ❾ ➆ ➄➃ ➅ ➉ ➇ ➁❻ ➂ ➁ ➅ ➇ ➉ ➁ ➆ ➄➂ ❿ ➄ ➂ ➁❾ ➆ ❼ ➆ ➁ ➉ ➼ ➄ ➐ ➋ ➄➂ ➌ ➊ ❽ ❿ ➁➇ ➆ ❿❿ ➄❿ ❻ ➅ ❽ ❻ ❿➃ ❻ ➃➆➃➍ ➇ ❻ ➂ ➆ ➑ + - ➊➒➓ ❻ ❿ ➆ , ❻ ➃ ➉ ❿ ➁ ❻ ➍ ➀ ➂ ❼ ❻ ➂ ➁ ➅ ➇ ➉ ➁ ➆ ➄➂ ➉ ➂ ➁❾ ➆ ➅ ❽❻ ❿➃ ❻ ➃ ➆➃ ➍ ➇ ❻ ➂ ➆ , ➆ ➂ ➣ ➉ ❼ ➆❼ ➍ ➋ ➔ ❷ a ➌ ➆➂ ➆ . ➒❾ ➆ ➉ ➍ → ➆ ➣ ➁ ➄ ➺ ➆ ➉ ➐ ➁ ❾ ➄❿ ➇ ➆❿➆❻➇ ➣ ❾ ➄ ❿ ➁➉ ➄ ❿ ➉ ❽❻ ➁ ➆ ❻ ➂ ❼ ➣ ❾ ❻ ➇ ❻ ➣ ➁ ➆ ➇ ➄➏ ➆ ➁❾ ➆ ➌ ➆➂ ➆ ➆ ➂ ➣ ➉ ❼ ➄ ➂ ➌ ➅ ❽ ❻ ❿➃ ❻ ➃➆➃ ➍ ➇ ❻ ➂ ➆ ➑ + - ➊➒➓ ❻ ❿➆ ➐ ➇ ➉ ➃ M ➥ ❷ a ⑧ aba ⑩ h ❸ ic ❹ ❷ ❺ . ➽➀ ❽ ❽ ❽ ➆ ➂ ➌ ➁ ❾ ➣ ↔↕ ➊ ➉ ➐ M ❷ ➔ ❷ a ➾➚➪ ➶➹➹➘ ➴ ➷➬➬➹➴ ➴ ➮➷➱➱ ✃ ➄ ❿ ➉ ❽❻ ➁ ➆ ❼ ➁ ❾ ➇ ➉ ➀ ➌ ❾ ❻ ➌ ➇ ❻ ❼ ➀ ❻❽ ➄ ❿ ➉ ❽ ❻ ➁ ➄➉ ➂ ➉ ➐ ➁ ❾ ➆ ➌ ➆➂ ➆ . ➒ ❾ ➆ 5’ ➆ ➂ ❼ ❻➂ ❼ ➃ ➄❼ ❼ ❽ ➆ ➌ ➆ ➂ ➆ ➉ ➐ M ❷ ➔ ❷ a ➾ ➚➪ ➶➹➹➘ ➴ ➷➬➬➹➴ ➴ ➮ ➷➱ ➱✃ ➄❿ ➉ ❽ ❻➁ ➆❼ ➍ ➋ ➓ ➜➙ ➔ ❶ ⑧ ➝ ❷ e ❸ a ⑨ e chai ➞ ❸ eac ⑩ i ❶ ➞ ➍ ➋ ➀ ❿ ➄ ➂ ➌ ➁➉ ➁ ❻❽ ➣ ↔↕ ➊ ❻ ❿ ➁ ➆➃ ➅ ❽❻ ➁ ➆ ❻➂ ❼ ➔ ❷ a ➅ ➇ ➄ ➃➆ ➇ ❿ ❼ ➆ ❿➄➌ ➂ ➆❼ ➐ ➇ ➉ ➃ ❿ ➉ ➃ ➆ ➅ ❽❻ ➂ ➁ ❿ , ➦ ❾ ➄ ❽ ➆ ➁ ❾ ➆ 3’ ➆ ➂ ❼ ➉ ➐ M ❷ ➔ ❷ a ❾ ❻ ❼ ➍ ➆ ➆ ➂ ➄❿➉ ❽ ❻➁ ➆❼ ➍ ➋ 3’ ➙ ➊ ➜ ➟ . ➒ ❾ ➆ ➅ ❻➇ ➁ ❿ ➉ ➐ ➁❾ ➆ ➌ ➆➂ ➆ ❾ ❻ ❼ ➍ ➆ ➆ ➂ ❿➀ ➣➣ ➆❿❿➐ ➀ ❽ ❽➋ → ➉ ➄➂ ➆❼ ➍ ➋ ➓ ➜➙ . ➒❾ ➆ → ➉ ➄ ➂ ➄ ➂ ➌ ➅ ➇ ➉ ❼ ➀ ➣ ➁ ➦ ❻ ❿ ❿➀ ➣ ➣ ➆ ❿❿➐ ➀ ❽❽ ➋ ➄ ➂ ❿➆➇ ➁ ➆❼ ➄➂ ➁➉ ➅ ➡➟➢ - ➒ ➟ ❻ ❿ ➋ ❻➂ ❼ ➁ ❾ ➆ ➇ ➆ ➣ ➉ ➃➍ ➄➂ ❻➂ ➁ ➅ ❽ ❻ ❿➃➄ ❼ ➦ ❻ ❿ ❿➀ ➣ ➣ ➆ ❿❿➐ ➀ ❽❽ ➋ ➄➂ ➁ ➇ ➉ ❼ ➀ ➣ ➆ ❼ ➄➂ ➁ ➉ ➤ ➥ c ❶ ⑧ i ↔ ➑ 5α. ↕ ➀ ➣ ❽ ➆ ➉ ➁ ➄❼ ➆ ❿➆❐ ➀ ➆ ➂ ➣ ➆ ❻➂ ❻❽ ➋ ❿➄❿ ❿ ❾ ➉ ➦ ➆ ❼ ❒ ❮ ❰❒ ❒ ❮ Ï Ð ÏÑ Ò ❒ ❮ Ó Ô M ÕÖ Õ a × Ó Ø ÙÑ Ò ÚÏÛ Ü ÏÑ × Ï Ý ❰ Ú 2871 Þ ß Ï Ñ ×Ó Ø Ù Ñ Ò 956 ❰ à ÙÑ Ó ❰ × ÙØ Ú ÝÙ ❒ ❮ à Ó Ð Ï×Ü Ð❰ á ÝÏ ÙÒ ❮ ❒ Ó Ô 105.29 â ã❰ ❰ Ñ Ø ❰ ß á Ï Ø Ù × ❒ ÏØ ß I ä ❰Ð Ü Ï Ó Ô 6.84. å Ó ×❰ Ð ❰Ð ÙÒ Ñ à Ï Ñ ❒ ❰Ñ ❰Ð æ ÚÙÚ Þ ❰ ÚÏØ Ó Ñ Ñ Ü × Ð ÏÓ ❒ Ù Ø Ï Ó Ô à ç èé Ú❮ Ó ÝÏØ ❒ ❮ ❰ ❒ M ÕÖ Õ a Ù Ú 82 ÙØ Ï Ñ ❒ Ù×❰Ð ❒ Ó Ö Õ a êëì i í î i ï ë fe ð a; 81 ❒ Ó Ö Õ a J ñ ò ó a ï í ð egia, Ö Õ a P ô Ö ñ ó ñ í ì ð ich ô ca ð Ö õ , Ö Õ a Se í ba ï ë a ðô íì ð a ì a, ❰ Ñ Ø Ö Õ a P ðñ ï ñ í Ö ö ð í ica ❰ Ñ Ø 80 ❒ Ó Ö Õ a L ÷ c ô Ö ö ð í ic ô ï e í c ñ ó e ï ì ñ Õ . ø❰ ÚÏØ Ó Ñ Ø ÏØ Ü ×Ï Ø ❰à ÙÑ Ó ❰ × ÙØ ÚÏÛ Ü Ï Ñ × Ï , ù à úùé ÙÚ 94 Ù Ø Ï Ñ ❒ Ù × ❰ Ð ❒ Ó úùé êëì i í î i ï ë fe ð a ❰Ñ Ø úù é J ñ ò ó a ï í ð egia; 93 ❒ Ó úùé P ô Ö ñ ó ñ í ì ð ich ô ca ð Ö õ ; 92 ❒ Ó úùé êë cia faba, L ÷ c ô Ö ö ð í ic ô ï e í c ñ ó e ï ì ñ Õ , S ô ó a ï ñ Õ ì ñ û ö ðô í ñ Õ , ❰ Ñ Ø ü ð abid ô Ö í i í ì ha ó ia ï a, é ý é 4. ù à úùé ❮ ❰ Ú 10 ❒á ❰Ñ Ú à Ï à Þ á ❰Ñ Ø Ó à ❰ ÙÑ Ú , 4 × æ ❒ Ó ß Ð ❰ Ú à Ð Ó Ó ß Ú , 6 Ô Ü Ñ ×❒ Ù Ó Ñ ❰ Ð Ø Ó à ❰ ÙÑ Ú ❰ Ñ Ø 3 ❰Ü ❒ Ó á ÏÒ Ü Ð❰ ❒ Ó á æ Ø Ó à❰ Ù Ñ Ú . þÿ ✁✂ ✄☎✆ : M ✝ ✞ a ✟ aba ✠ h ✡ ic ☛ ✞ ☞ ., ✌ ✍✎✆ ✏✎ ✏ ÿ ✏✑✄ ✎✒ ÿ ✓ + - ✔ ✕ ✖ ✎ ✆ ÿ , ✎✍✗✏✘ ✒ ✘ ✗ ✏ , ✙✚✛✔ , ✖ ✜✢✣ ✤✥ n ✦✧ ★ u ✩ u ✧ n ✪Ó Ñ ÚÏÑ ❒á ❰ ÚÙ ❰ ÐÜ à ÙÑ ÙÜ à æ ❰Ñ Ò ❒ Ù Ñ Ò Ò Ù Ø ❰Ð ❰à ❒❰ Ñ ❰ ❮ à Ï á Ü ß ❰ â ❰Ñ Ú ❰Ð ❰ ❮ Ú ❰❒ Ü Ô ❰ â ❒ Ó á Ü ❒ ❰à❰ æ ❰Ñ Ò à Ï à Þ ❰ ❒❰ ÚÙ ß Ï á ❒Ü à Þ Ü ❮ ❰ Ñ ❒ ❰Ñ ❰à ❰Ñ Ø Ù ❒ ❰Ñ ❰ ❮ ❰ Ú ❰ à . ✫ Ó Ñ é Ð Ø ❰ß ❰ ❒ Ø ÏÑ Ò ❰ Ñ à Ü Ø ❰ ❮ à Ï à Þ Ï Ñ ❒ Ü â â Ó à ß Ð Ï â Ú Ø ÏÑ Ò ❰Ñ ÚÏÑ æ ❰ Ý ❰ - ÚÏÑ æ ❰ Ý ❰ ÙÑ ❒ á ❰ ÚÏÐÜ Ð Ïá ß ❰ Ø ❰ ß ý ÚÙ ❒ Ó ÚÓ Ð Ù â ÚÏ ❮ ÙÑ Ò Ò ❰ Ø ❰ ß ❰❒ à ÏÑ Ò ❮ ❰à Þ ❰ ❒ à Ï ❒ ❰ Þ Ó Ð Ù Ú à Ï ÚÏÐ ù ❰ ❒ Ú Ü à Ó ❒ Ó 2000. úÏ Ñ Ù Ñ Ò â ❰ ❒❰ Ñ ß á Ó Ø Ü â Ú Ù ß Ï á ❒ ❰Ñ Ù ❰ Ñ ❒ Ïá Ü ❒❰ à❰ Ø Ù Ð❰ ❮ ❰Ñ ❰ Ú ❰ à Ø Ï Ñ Ò ❰Ñ â Ï Ð❰ á Ü ❒ ❰ Ñ ❰Ð Ü à Ù Ñ ÙÜ à ❒ ÙÑ Ò Ò Ù Ø ❰ß ❰❒ Ø Ù × ❰ ß ❰ Ù Ø Ï Ñ Ò ❰ Ñ à ÏÐ❰ â Ü â ❰Ñ ß á Ó Ò á ❰ à Ù Ñ ❒ ÏÑ ÚÙÔ Ù â ❰ ÚÙ à❰ Ü ß Ü Ñ Ïâ Ú ❒ ÏÑ ÚÙÔ Ù â ❰ ÚÙ . ✪ÏØ Ü ❰ ß á Ó Ò á ❰ à Ù Ñ Ù à Ï à Þ Ü ❒ Ü ❮ â ❰Ñ â Ü Ð ❒ Ù ä ❰ á Ü Ñ Ò Ò Ü Ð . ✪ Ü Ð ❒ Ù ä ❰ á Ü Ñ Ò Ò Ü Ð Ø ❰ ß ❰❒ Ø Ùá ❰ â Ù ❒ à Ï Ð ❰ ÐÜ Ù ß Ï á Þ ❰ Ù â ❰Ñ Ò ÏÑ Ï ❒ Ùâ Þ ❰ Ù â à ÏÐ ❰ÐÜ Ù ß Ïá ÚÙ Ð ❰Ñ Ò ❰Ñ â Ó Ñ ä Ï Ñ ÚÙ Ó Ñ ❰ Ð æ ❰ Ñ Ò Ø ÙÙ â Ü ❒ Ù Ø ÏÑ Ò ❰ Ñ ÚÏÐ Ï â ÚÙ ÚÏ Ú Ü ❰ Ù Ø ÏÑ Ò ❰Ñ ÚÙ Ô ❰❒ â ÏÜ Ñ Ò Ò Ü Ð ❰Ñ æ ❰ Ñ Ò Ø ÙÙÑ Ò Ù Ñ â ❰Ñ à❰Ü ß Ü Ñ à Ï Ð❰ Ð Ü Ù ❒ Ï â Ñ Ó Ð Ó Ò Ù ã èé á Ïâ Ó à Þ Ù Ñ ❰ Ñ . úÏ Ñ Ø Ï â ❰❒ ❰Ñ ß ÏàÜ Ð Ù❰❰ Ñ â Ó Ñ ä ÏÑ Ú ÙÓ Ñ ❰Ð Ø Ù ❮ ❰ Ø ❰ß â ❰Ñ ß ❰ Ø ❰ ❒ Ïá Þ ❰ ❒❰ Ú Ñ æ ❰ Ú Ü à Þ Ï á Ø ❰æ ❰ Ò ÏÑ Ï❒ Ùâ Ü Ñ ❒ Ü â ❒ Ó Ð Ïá ❰Ñ ÚÙ ❒❰ Ñ ❰ à❰ Ñ ❒ Ïá ❮ ❰ Ø ❰ ß ❒❰ Ñ ❰ ❮ ❰ Ú ❰à Ø ❰Ñ é Ð ❒ Ù Ñ Ò Ò Ù . ã ÏÑ Ò ❰ Ñ Ø Ï à Ù â Ù ❰ Ñ , ß Ïá ÐÜ Ø ÙÐ❰ â Ü â ❰Ñ ß ÏÑ Ø Ïâ ❰ ❒❰ Ñ ❒ Ï â Ñ Ó Ð Ó Ò Ù ã èé á Ïâ Ó à Þ Ù Ñ ❰ Ñ Ü Ñ ❒Ü â à Ïá ❰ â Ù❒ ❒ ❰Ñ ❰ à❰Ñ ❒á ❰ Ñ ÚÒ ÏÑ Ù â æ ❰ Ñ Ò ❒ Ó Ð Ï á ❰ Ñ ❒ Ïá ❮ ❰ Ø ❰ ß ❒ ❰Ñ ❰ ❮ ❰ Ú ❰à Ø ❰ Ñ é Ð ❒ ÙÑ Ò Ò Ù . ✬ ❰ Ñ ❰à❰ Ñ æ ❰Ñ Ò Ø ❰ß ❰ ❒ Ø ÙÒ Ü Ñ ❰ â ❰ Ñ ÚÏ Þ ❰ Ò ❰ Ù Ú Ü à Þ Ï á Ò ÏÑ Ü Ñ ❒Ü â ❒ Ó Ð Ïá ❰ Ñ ÚÙ ❒❰ Ñ ❰ à❰ Ñ ❒ Ïá ❮ ❰ Ø ❰ ß ❒❰ Ñ ❰ ❮ ❰ Ú ❰à Ø ❰Ñ é Ð ❒ Ù Ñ Ò Ò Ù ❰ Ñ ❒❰ á ❰ Ð ❰ ÙÑ Me ó a íì ô Õ a Õ a ó aba ì h ð ic ñ Õ å . æ ❰ Ñ Ò Ø ❰ ß ❰❒ Ø Ù ❒ ÏàÜ Ù ❒ Ïá Ü ❒ ❰à❰ Ø Ù Ø ❰ Ïá ❰ ❮ ❒á Ó ß ÙÚ . ✬ Ü à Þ Ü ❮ ❰ Ñ ❒ Ïá Ú ÏÞ Ü ❒ Ø ❰ ß ❰ ❒ ❒ Ü à Þ Ü ❮ Ø ÏÑ Ò ❰ Ñ Þ ❰ Ùâ ß ❰ Ø ❰ ❒ ❰Ñ ❰ ❮ ❰ Ú ❰à ÚÏ ❮ Ù Ñ Ò Ò ❰ à ÏÑ ✭❰ Ø Ù Ù Ñ Ø Ùâ ❰ ❒ Ó á ❒❰ Ñ ❰ ❮ ❰ Ú ❰ à , Ø ❰Ñ Ø ❰ß ❰ ❒ à Ï Ñ Ò ❰ â Ü àÜ Ð❰ ÚÙ ❰ ÐÜ à ÙÑ ÙÜ à Ø ❰Ð ❰à ✭Ü àÐ❰ ❮ ❒ ÙÑ Ò Ò Ù Ø Ù Ø ❰ Ü Ñ Ø ❰Ñ ❰ â ❰ á Ú Ï❮ Ù Ñ Ò Ò ❰ Ø ÙÚÏ Þ Ü ❒ ÚÏÞ ❰ Ò ❰ Ù ❰ â Ü àÜ Ð❰ ❒ Ó á é Ð ✮ ❰ ❒❰ Ñ ❰ Þ Ï ✯Ú ❰ â Ù 2002 ❰ . ú ❰ Ø ❰ ß ý 4.0, ß Ï á ❒Ü à Þ Ü ❮ ❰Ñ ❰ â ❰á M ✰ Õ a ó aba ì h ð ic ñ Õ å . ❒ ÙØ ❰ â ❒ Ï á Ò ❰Ñ Ò Ò Ü ✱ â Ï×Ü ❰ Ð Ù ß ❰ Ø ❰ ß ý 3.0 æ ❰Ñ Ò ❮ ❰ Ñ æ ❰ ❰ Ø ❰ Ø Ù ✲ ✳✴ ✵ ✶ ✳✷ ✵ ✶ ✸ ✹ ✺ ✻✹ ✼ ✳✽✺✸ ✾ 2008. ✻ ✽ ✾ ✹ ✶ ✹ ✷ ✿✳ ✷✳ ✾ ✳✴ ✽ e ❀ a ❁ . 1998 ✳ , M ❂ ❃ a ❁ aba ❀ h ❄ ic ❅ ❃ ❆ . ✺ ✳✺❇ ✹ ✺ ✽ ✾ ❈ ✳❉ ✹ ✺ ✹ ✲ ✳❊ ✸ ✲ ✽ ✴ ✸ ✼ ❋ ✳✶ ✸ 14.4 ❈ ●✲ ❉ ❈ ❋ ✳✹ ✾ ✷ ✹ ✳ ❋ ✳✾ ✲ ✽✴ ✸ ✼ ❋ ✳ ✶ ✸ 8 ❈ ●✲ ❉ ❈ ❋ ✳✹ ✾ ✺ ✹ ❋ ✳ ✷✳ ✾ ❇ ✳ ✺ ✽✾ ❈ ✳✲ ✳ ✺✸ ❉ ✽ ✶ ✳❍ ✹ ✾ ✳✾ ■ ●✾ ✳✲✸ ❊ ✸ ❊ ✳❉ ✹ ✺ ✹ ✲ ✳❊ ✸ ●✲ ❇ ✳ ❋ ✳ Me ❁ a ❏ ❀ ❑ ❃ a affi ▲ e ❆ . ❊ ✸ ✾ ✵ ✾ ✸✺ ❋ ✽ ✾ ❈ ✳✾ Me ❁ a ❏ ❀ ❑ ❃ a ❃ a ❁ aba ❀ h ❄ ic ❅ ❃ ❆ . ▼ ✳ ✾ ❈ ✺ ✽✾ ❋ ✳ ❇ ✳ ✷ ❍✽❉ ✳ ✺ ✳ ✾ 3.2 ✺ ✻ ●✲ ❇ ✳❋ ✳ ❇ ◆ 4 ❋ ✳✲ ✳✺ ✺ ✽❋ ✸ ✳ ❍✳✸ ✶ ✺ ✽ ✾ ✹ ✾ ❖ ✹ ❉ ❉ ✳✾ ✴ ✳✼ P✳ M ❂ affi ▲ ◗ ❆ . ✺ ✳✺❇ ✹ ✺ ✽ ✾ ❈ ✳ ❉ ✹ ✺ ✹ ✲ ✳ ❊ ✸ 8.81 ❈ ● ✲ ❉ ❈ ❋ ✳ ✹ ✾ ✷✹ ✳ ❊✽ ✷✽✲ ✳✼ 2 ✴ ✹ ✲ ✳✾ ❇ ✽ ✶ ✲ ✳❉ ✹ ✳ ✾ ✻✹ ✷ ✸ ✳❊✳ ✶ ✸ 2008. ❘ ✳✲ ✳ ✼ ❊✳✷ ✹ ❈ ✽ ✾ ▼ ✳ ✾ ❈ ✷ ✽ ✶ ✲ ✸✴ ✳ ✷ ❋ ✳✲ ✳ ✺ ✷ ✵ ✲ ✽ ✶ ✳ ✾ ❊ ✸ ✷ ✳ ✾ ✳ ✺ ✳✾ ✷ ✽✶ ✼ ✳ ❋ ✳ ❇ ✷ ✳✾ ✳ ✼ ✳ ❊✳ ✺ ❋ ✳ ✾ ●✲ ✷✸ ✾ ❈ ❈ ✸ ✳❋ ✳✲ ✳ ✼ ❈ ✽✾ ❇ ✽ ✾ ▼ ✳✾ ❋ ✸ ◆ + - ●❙ ❚✳ ❊✽ ✺ ✽✺✴ ✶ ✳✾ ❇ ✲ ✳ ❊ ✺ ✳ ● ✾ P✳✶ 1999; ● ✼ ✾ e ❀ a ❁ . 2004. ◆ + - ●❙ ❚✳ ❊✽ ✺ ✽ ✺✴ ✶ ✳✾ ❇ ✲ ✳❊ ✺ ✳ ✺ ✽✶ ✹ ❇ ✳ ❉ ✳✾ ❇ ✶ ✵ ✷✽✸ ✾ ▼ ✳ ✾ ❈ ❇ ✳✲✸ ✾ ❈ ✺ ✽ ✲ ✸ ✺❇ ✳ ✼ ❇ ✳❋ ✳ ✺ ✽✺✴ ✶ ✳✾ ❇ ✲ ✳ ❊ ✺ ✳ ❋ ✳✾ ✷✽ ✶ ✲ ✸ ✴ ✳ ✷ ❋ ✳✲ ✳ ✺ ✴ ✳✾ ▼ ✳❉ ✶ ✽ ❊ ❇ ✵ ✾ ❊ ❍✽❉ ✳✺ ✳ ✾ . ❚✶ ✵ ✷ ✽ ✸ ✾ ✸ ✾ ✸ ✺ ✽ ✾ ❈ ✳❉ ✷✸ ❯ ✳❊✸ ❊✽ ✶ ✳ ✾ ❈ ❉ ✳ ✸ ✳✾ ✷ ✶ ✳ ✾ ❊❇ ✵ ✶ ✷✽ ✶ ❊ ✽ ❉ ✹ ✾ ❋ ✽✶ ❋ ✽✾ ❈ ✳✾ ✺ ✽ ✾ ❈ ✼ ✳❊ ✸ ✲❉ ✳✾ ❱ ❄ ❑ ❀ ❑ ▲ ❃ ❑ ❀ i ❲ e f ❑ ❄ ce ▼ ✳ ✾ ❈ ❋ ✳ ❇ ✳ ✷ ✺ ✽✾ ❈ ❈ ✽ ✶ ✳ ❉ ❉ ✳✾ ✴ ✳ ✾ ▼ ✳ ❉ ❊ ✵ ✲ ✹ ✷ , ✳❊ ✸ ✺✸✲ ✳✷ , ✳ ✷✳ ✹ ✺ ✽✷ ✳ ✴ ✵ ✲✸ ✷ ✺ ✽ ✲ ✸ ✾ ✷✳ ❊ ✸ ✺ ✽ ✺✴ ✶ ✳✾ ❇ ✲ ✳ ❊ ✺ ✳ ❘ ✹ ❊❊ ✺ ✳ ✾ 1994. ◆ + - ●❙ ❚✳ ❊✽ ✺ ✽✺✴ ✶ ✳✾ ❇ ✲ ✳❊✺ ✳ ✷✽ ✶ ✲ ✸✴ ✳ ✷ ❋ ✳✲ ✳✺ ✶ ✽❈ ✹ ✲ ✳ ❊ ✸ ✶ ✽ ❊ ❇ ✵ ✾ ❊ ✷✽ ✶ ✼ ✳❋ ✳ ❇ ✴ ✽✶ ✴ ✳❈ ✳✸ ✶ ✳ ✾ ❈ ❊✳ ✾ ❈ ✳ ✾ ✲ ✸ ✾ ❈ ❉ ✹ ✾ ❈ ✳ ✾ ❳ ❊✽ ❇ ✽ ✶ ✷✸ ❍✽❉ ✳✺ ✳ ✾ ●✲ ● ✾ P✳✶ 1999; ● ✼ ✾ 2004, ❍✽❉ ✳ ✺ ✳ ✾ ❨✳❩✲ ❨ ✸ ✹ e ❀ a ❁ . 1996, ❋ ✽ ❬ ✸ ❊ ✸ ✽✾ ❊ ✸ ❬ ✵ ❊ ❬ ✳✷ ❭ ✳ ✾ e ❀ a ❁ . 2002, ❋ ✳ ✾ ❍✽❉ ✳✺ ✳ ✾ ✳ ✺ ✺ ✵ ✾ ✸ ✹ ✺ ❪ ✽ ✶ ✾ ✽❖ ❍ ❆ ✽❈ ✸ ❊✳ 2001. ❘ ✽ ✲ ✳ ✸ ✾ ✸ ✷ ✹ , ◆ + - ●❙ ❚✳ ❊✽ ✺ ✽ ✺ ✴ ✶ ✳ ✾ ❇ ✲ ✳❊ ✺ ✳ ❖ ✹ ❈ ✳ ✷✽ ✶ ✲✸ ✴ ✳ ✷ ❋ ✳ ✲ ✳ ✺ ❇ ✽✺ ✳✾ ❖ ✳✾ ❈ ✳ ✾ ❊✽ ✲ ▼ ✳ ✾ ❈ ❋ ✸ ❬ ✳❊ ✸ ✲✸ ✷✳ ❊ ✸ ✵ ✲ ✽ ✼ ✳✹ ❉ ❊ ✸ ✾ ❊✽ ✲ ✳ ✺ ✳ ❇ ✽ ✶ ❉ ✽✺✴ ✳✾ ❈ ✳✾ ✽ ✺✴ ✶ ✸ ✵ ❈ ✳ ✾ ❋ ✹ ✺ ❫ ✵ ✴ ✽✶ - ❴ ✲ ✽ ✴ ✽ ✶ e ❀ a ❁ . 2003, ❋ ✳✾ ✷ ✽✶ ✲✸ ✴ ✳ ✷ ❇ ✹ ✲ ✳ ❋ ✳ ✲ ✳ ✺ ✼ ✵ ✺ ✽ ✵ ❊✷✳ ❊ ✸ ❊ ❇ ◆ ❊ ✸ ✷ ✵ ❇ ✲ ✳❊✺ ✳ ✷ ✳✾ ✳✺ ✳✾ ❭ ✵ ✹ ✾ ❈ e ❀ a ❁ . 1998. ❙ ✳ ✾ ✳ ✺ ✳ ✾ ❵ ❄ abid ❑ ❱ ❏ i ❏ ❀ ha ❁ ia ▲ ❛ ▼ ✳✾ ❈ ❋ ✸ ✷ ✶ ✳✾ ❊ ❬ ✵ ✶ ✺ ✳❊✸ ❋ ✽ ✾ ❈ ✳ ✾ ❈ ✽✾ ◆ + - ●❙ ❚✳❊✽ ✺ ✽ ✺✴ ✶ ✳✾ ❇ ✲ ✳ ❊ ✺ ✳ ●◆● 3 ❋ ✳ ❇ ✳ ✷ ✺ ✽✺❇ ✽✶ ✴ ✳ ✸ ❉ ✸ ❇ ✽✶ ✷ ✹ ✺ ✴ ✹ ✼ ✳✾ ❇ ✳ ❋ ✳ ❇ ◆ ✶ ✽ ✾ ❋ ✳ ✼ ❊✽ ✲ ✳ ✺ ✳ ❇ ✽ ✶ ❉ ✽ ✺ ✴ ✳ ✾ ❈ ✳ ✾ ❉ ✽ ❍✳✺✴ ✳✼ ❭ ✵ ✹ ✾ ❈ e ❀ a ❁ . 1998. ●◆● 3 ✺ ✽✶ ✹ ❇ ✳ ❉ ✳✾ ❈ ✽ ✾ ▼ ✳ ✾ ❈ ✷✽ ✶ ✽❉ ❊ ❇ ✶ ✽ ❊ ✸ ❇ ✳❋ ✳ ❊✽ ✲ - ❊✽✲ ❉ ✵ ✺ ❇ ✳ ✾ ✸ ✵ ✾ ❬ ✲ ✵ ✽✺ , ▼ ✳ ✸ ✷✹ ❋ ✳ ✽✶ ✳ ✼ ▼ ✳ ✾ ❈ ✴ ✽ ✶ ✷✳ ✾ ❈ ❈ ✹ ✾ ❈ ❖ ✳P✳✴ ❋ ✳✲ ✳ ✺ ❇ ✽✾ ❈ ✳ ✾ ❈ ❉ ✹ ✷✳ ✾ ❖ ✳ ✶ ✳❉ ❖ ✳✹ ✼ ❋ ✳ ✶ ✸ ❈ ✹ ✲ ✳ , ✼ ✳ ✶ ✳ ❋ ✳✾ ✼ ✵ ✶ ✺ ✵ ✾ ■ ❜ ✲ ✵ ✽ ✺ ✺ ✽ ✺❇ ✹ ✾ ▼ ✳✸ ❇ ◆ 8,0 ✳ ✷✳ ✹ ✲ ✽ ✴ ✸ ✼ ❊✽✼ ✸ ✾ ❈ ❈ ✳ ✲ ✽ ✴ ✸ ✼ ❊✽ ✾ ❊ ✸ ✷✸ ❬ ✷✽ ✶ ✼ ✳❋ ✳❇ ❇ ◆ ✶ ✽ ✾ ❋ ✳ ✼ , ✳ ❉ ✸✴ ✳ ✷✾ ▼ ✳ ❋ ✳✽✶ ✳ ✼ ✸ ✾ ✸ ✺ ✽✶ ✹ ❇ ✳❉ ✳✾ ✷✳ ✶ ❈ ✽✷ ✹ ✷✳ ✺ ✳ ❇ ◆ ✶ ✽✾ ❋ ✳✼ . ❝ ❉ ❊ ❇ ✶ ✽ ❊ ✸ ❈ ✽✾ ●◆● 3 ✺ ✽✾ ❈ ✼ ✳ ❊ ✸ ✲❉ ✳✾ ✽ ✾ ❞✸✺ ▼ ✳✾ ❈ ❋ ✳❇ ✳✷ ✺ ✽ ✺ ✵ ✺ ❇ ✳ ◆ + ❉ ✽ ✲ ✹ ✳ ✶ ❊✽ ✲ ❊✽✼ ✸ ✾ ❈ ❈ ✳ ❇ ◆ ❋ ✳❇ ✳✷ ❋ ✸ ❇ ✽✶ ✷ ✳✼ ✳✾ ❉ ✳ ✾ . ❚✽✾ ❈ ✳ ✺ ✳ ✷✳ ✾ ✷✽ ✶ ❊✽ ✴ ✹ ✷ ✺ ✽✾ ✹ ✾ ❖ ✹ ❉ ❉ ✳✾ ❇ ✽ ✶ ✳ ✾ ✳✾ ◆ + - ●❙ ❚✳❊✽ ✺ ✽✺✴ ✶ ✳✾ ❇ ✲ ✳❊✺ ✳ ❋ ✳ ✲ ✳ ✺ ✼ ✵ ✺ ✽ ✵ ❊✷✳ ❊ ✸ ❊ ❇ ◆ ❊ ✸ ✷ ✵ ❇ ✲ ✳ ❊ ✺ ✳ ✷ ✳✾ ✳ ✺ ✳ ✾ . ❡ ✽ ✴ ✽✶ ✳❇ ✳ ❉ ✳ ❖✸ ✳ ✾ ✷✽ ✾ ✷✳ ✾ ❈ ✽❉ ✵ ❬ ✸ ❊ ✸ ✵ ✲ ✵ ❈ ✸ ✳❋ ✳❇ ✷✳❊✸ ✻✽ ✲ ✳❊✷ ✵ ✺ ✳ ❇ ✳❋ ✳ ✷✳ ✾ ✳ ✼ ✳ ❊✳✺ ❋ ✽ ✾ ❈ ✳ ✾ ❉ ✽ ✲ ✳✶ ✹ ✷✳ ✾ ●✲ ▼ ✳✾ ❈ ✷ ✸ ✾ ❈ ❈ ✸ ✷ ✽ ✲ ✳✼ ❋ ✸ ✲ ✳❉ ✹ ❉ ✳✾ ✵ ✲ ✽✼ ❢ ❊ ✳ ❉ ✸ e ❀ a ❁ . 1998 ❋ ✳✾ ❣❤ ✐❤ ❥ ❤ ❦ ❧ ♠♥❤ ♦ ♣ 2002 ❤ . q❧ ❦ ❧r ❤s ❤ t ❧ ❥ ✉ ❤ ❥ t ✈ ♣ ✈ ✇ t ❤ ✐❧r ①♣ ❦ ❤ ✐ ✈ ❤①❤ ② ✐③ ① ❧r ❤ ❥ ♥♣ ✐ ❤ ❥ ❤②❤ ❥ ✐❧r ④ ❤✈ ❤ s ⑤❧ ♦ ❤②❤ ❥ ❤♥❤② ✈ ❤ ❥ ⑥① ✐ ♣ ❥ t t ♣ ✐ ❧ ①❤④ ✈ ♣♣♥ ③ ①❤ ♥ ♣ , ❤ ❥ ✐ ❤ r ❤ ①❤♣ ❥ t ❧ ❥ s ❧❥ ✉ ❤ ❥ ✈ ♣ ⑦⑧ ⑨⑩ id ❶ ⑧ g ❶ e ❷ i ❷⑩ a ❸ ce a ❷❷❹ cia ⑩ ed ❺ ❶❹ ⑩ ei ❸ ❻❼❽ ❾✇ ④ ❤ r ♥ ③ ❥ ③ e ⑩ a ⑨ . 2008, t ❧❥ s ❧❥ ✉ ❤ ❥ ✈ ♣ ⑦ e ⑩ a ⑨⑨❹ ⑩ hi ❹ ❸ ei ❸ ⑩ ❿ ❺ e 2 M ⑩ 2 ❾✇ ④ ❤ r ♥ ③ ❥ ③ e ⑩ a ⑨ . 2009 ✈ ❤ ❥ ➀ r ❤ t ② ❧❥ t ❧ ❥ s ❧❥ ✉ ❤ ❥ ✈ ♣ ➁ + - ⑥➂❽ ❤ ♥❧ ② ❧ ② ❦ r ❤ ❥ s ①❤♥②❤ ❻✇ ➃ ✇ ❥ ♣ e ⑩ a ⑨ . 2010. ➄ ❤② ✇ ❥ ♥❤ ②s ❤ ♣ ♥❤ ❤ ✐ ♣ ❥ ♣ ❦ ❧ ① ✇ ② ❤✈ ❤ t ❧❥ ✇ ✐ ✇ ④ s ❧❥ ✉ ❤ ❥ ✈ ♣ ➁ + - ⑥➂❽❤ ♥ ❧ ② ❧② ❦ r ❤ ❥ s ①❤ ♥②❤ ✈ ❤ r ♣ M ➅ ⑦ a ⑨ aba ⑩ h ❶ ic ⑧ ⑦ ✉ ❤ ❥ t ✐ ❧①❤④ ✈ ♣ ♣♥ ③ ① ❤♥ ♣ . q ❧ ❦ ❧ r ❤ s ❤ ② ❧✐ ③ ✈ ❧ ✉ ❤ ❥ t ✈ ❤ s ❤ ✐ ✈ ♣① ❤ ♦ ✇ ♦ ❤ ❥ ✇ ❥ ✐ ✇ ♦ ② ❧ ① ❤ ♦ ✇ ♦ ❤ ❥ ♣♥ ③ ① ❤♥♣ t ❧ ❥ ✇ ✐✇ ④ ❦ ❧ r ✈ ❤ ♥❤ r ♦ ❤ ❥ ➀ r ❤ t ② ❧❥ ✈ ❤ r ♣ ♥ ✇ ❤ ✐ ✇ t ❧ ❥ ❤ ❥ ✐ ❤ r ❤ ①❤ ♣ ❥ ✈ ❧❥ t ❤ ❥ ② ❧ ① ❤ ♦ ✇ ♦ ❤ ❥ s ❧ ❥ ❤ s ♣♥❤ ❥ ✐❧ r ④ ❤✈ ❤s s ✇ ♥ ✐❤ ♦ ❤ t ❧ ❥ ③ ② , s ✇ ♥ ✐ ❤ ♦ ❤ ⑤➆➄ ⑥ , ❼ ➂ - ❽➇ ❼ Re ➈ e ❶❷ e T ❶ a ❸ ❷ c ❶ i ❺ ⑩ a ❷ e ➉ ➊ ❹ ⑨ y ⑦ ➋ ❶ ➌ ❷ ➋ ➍ ➎ ➌ ➏ ❸ ➐➋ ➌ ➑ ⑩ ➏ ❹ ❸ , ✈ ❤ ❥ ❼⑥➇ ➒ ➐➌ ❺ ➏ ➓ ➔ ⑦ ❺ ⑨ ➏ →➏ ➑ ➌ ⑩ ➏ ❹ ❸ ➑ ➣↔ ➔ ↕ ❸ ➓ ❷ . ➆ ❤① ❤② s ❧❥ ❧ ① ♣ ✐♣❤ ❥ ♣ ❥ ♣ ❦ ❧ r ✈ ❤ ♥❤ r ♦ ❤ ❥ ➀ r ❤ t ② ❧❥ ⑤➆➄ ⑥ s ❧❥ ✉ ❤ ❥ ✈ ♣ ➁ + - ⑥ ➂❽❤♥ ❧ ②❧ ② ❦ r ❤ ❥ s ①❤♥②❤ ❻✇ ➃ ✇ ❥ ♣ ➋ ⑩ ➌ ⑨ . 2010, ⑤➆➄ ⑥ ✇ ✐✇ ④ ✈ ❤ r ♣ t ❧ ❥ s ❧ ❥ ✉ ❤ ❥ ✈ ♣ ➁ + - ⑥➂❽❤♥ ❧ ② ❧② ❦ r ❤ ❥ s ① ❤♥ ②❤ ✈ ❤ r ♣ ➙ ➅ ⑦ ➌ ⑨ ➌ ➛ ➌ ⑩ ➎ ❶ ➏➑ ⑧ ⑦ ✐❧①❤④ ✈ ♣ ♣♥ ③ ①❤ ♥ ♣ ② ❧ ①❤ ① ✇ ♣ ❼ ➂ - ❽➇ ❼ ➐➋ v ➋ ❶❷ ➋ ➜ ❶ ➌ ❸ ❷ ➑ ❶ ➏ ❺ ⑩ ➌ ❷ ➋ ➉ ➊ ❹ ⑨ y ⑦ ➋ ❶ ➌ ❷ ➋ ➍ ➎ ➌ ➏ ❸ ➐ ➋ ➌ ➑ ⑩ ➏ ❹ ❸ ✈ ❤ ❥ ② ❧✐ ③ ✈ ❧ ❼⑥➇ ➒ . ➝ ➞ ➟➞ ➠ ➡ ➞ ➠ ➢➤ t ➥ ➡➤ ➝ ➞ ➟➞ ➠ q❤④ ❤ ❥ ✐❤ ❥ ❤②❤ ❥ ✉ ❤ ❥ t ✈ ♣ t ✇ ❥ ❤ ♦ ❤ ❥ ❤ ✈ ❤① ❤④ ✈ ❤ ✇ ❥ ✐ ✇ ② ❦ ✇ ④ ❤ ❥ ➙ ➅ ⑦ ➌ ⑨ ➌ ➛ ➌ ⑩ ➎ ❶ ➏ ➑ ⑧ ⑦ ➦ . ✉ ❤ ❥ t ✐✇ ② ❦ ✇ ④ ✈ ♣ ①❤ ④ ❤ ❥ ❤♥ ❤② ➧ ❤♥♣ ❥ t ❤ q ③ t ③ r ➧ ❤ ➨ ❤ q❤ r ❤ ✐ . s ➩➒ ❻ - ➂ ➒ ❤ ♥✉ ➑ ⑨❹ ❸ ➏ ❸ ➫ ❷ y ❷⑩ ➋ ⑦ 3015 s ❦ ❽ r ③ ② ❧t ❤ ✈ ♣ t ✇ ❥ ❤ ♦ ❤ ❥ ♥ ❧ ❦ ❤ t ❤♣ ➭ ❧ ♦ ✐③ r s ❧❥ t ♦ ① ③ ❥ ❤ ❥ ✈ ❤ ❥ ↕ ➅ ➑ ❹ ⑨ ➏ ➆➁ 5 ✈ ♣ t ✇ ❥ ❤ ♦ ❤ ❥ ♥ ❧❦ ❤ t ❤♣ ♣ ❥ ❤ ❥ t ➭ ❧ ♦ ✐③ r r ❧♦ ③ ② ❦ ♣ ❥ ❤ ❥ . ❽r ♣ ② ❧ r ❤ ♦ ✐ ♣ ❥ ➌ ➑ ⑩ F 5’- ⑥➂ ➩➩ ➇⑥ ➩ ⑥➂ ➩ ➇ ➇ ➩ ⑥ ➩➩ ⑥➂⑥➂ -3’ ✈ ❤ ❥ ➌ ➑ ⑩ ➐ 5’- ➇ ⑥ ➩ ➂➂ ➩ ➂ ➩ ➇ ➩ ⑥➇➇ ⑥➇ ➂ - ➂ ➩ ➇ ⑥ -3’ ✈ ♣ t ✇ ❥ ❤ ♦ ❤ ❥ ♥ ❧ ❦ ❤ t ❤ ♣ ❤ ①❤ ✐ ❧ ➭ ❤① ✇ ❤ ♥♣ ♦ ❧② ✇ r ❥ ♣ ❤ ❥ ⑤➆➄ ⑥ ✐③ ✐ ❤ ① . ❽ r ♣② ❧r ➓ ➋ ➫ ➋ ❸ ➋ ❶ ➌ ⑩ ➋ ➓ ❽ ❻ ⑥ 2- ➯ 5’- ⑥➂ ➩➩➩➩➩ ⑥ ➩ ⑥ ⑥ ➩ ➇➇ ➂ ➩ ⑥ ❼ ➩ ➂ ❼➲➂ ❼ ➩ -3’, ✈ ❤ ❥ s r ♣ ② ❧r ♥ s ❧♥♣ ➀ ♣ ♦ ❻ ❤s ②❤ ❥ ➳ - ❼ 5’- ➇ ⑥ ➂ ➇ ⑥ ➩ ➩ ⑥ ➇ ⑥⑥➇ ⑥ ➩ ➂⑥➂➇ ➇ ➩ -3’, ✈ ❤ ❥ ❻ ❤ ❽ ❻ ⑥s - ❼ 5’- ⑥➇➇ ➂ ➇ ➩ ⑥➂ ➩ ⑥ ➩ ⑥➂ ➂➂➂ ➂ ➩ ➂ ➇⑥⑥➇ ⑥ ➩ -3’ ✈ ♣ t ✇ ❥ ❤ ♦ ❤ ❥ ✇ ❥ ✐✇ ♦ ② ❧❥ t ♣♥ ③ ① ❤♥♣ ✇ ➵ ✇ ❥ t 5’ t ❧❥ s ❧ ❥ ✉ ❤ ❥ ✈ ♣ ➁ + - ⑥➂ ❽❤♥ ❧ ② ❧② ❦ r ❤ ❥ s ① ❤♥② ❤ , ➙ ⑦ ❺ ⑦ ➌ ➙ ➋ ⑨ ➌ ❷⑩❹ ⑦ ➌ ⑦ ➌ ⑨ ➌ ➛ ➌ ⑩ ➎ ❶ ➏ ➑ ⑧ ⑦ ➦ . ❺ ⑨ ➌ ❷⑦ ➌ ⑦ ➋ ⑦ ➛ ❶ ➌ ❸ ➋ ➸ ➺ ➉ ➔ ➜➊➌ ❷ ➋ . ❽ r ♣② ❧ r ➓ ➋ ➫ ➋ ❸ ➋ ❶ ➌ ⑩ ➋ ➓ ⑥➯ 2 5’- ➩ ⑥➂ ➩ ➂➇ ➇ ➂➂ ➂ ➩ ➇⑥ ➩ ➂ ➩ ⑥➲⑥⑥ ❼ ⑥➇ -3’ ✈ ❤ ❥ ⑥ ❼ 2 5’ ➂➇ ⑥➂➂ ➩ ⑥➇⑥➇ ➇ ⑥➂➇ ❣ ➇ ➇❣ ➩ ➂➇ ⑥ ➂ ➻ ➼ ✈ ♣ t ✇ ❥ ❤ ♦ ❤ ❥ ✇ ❥ ✐✇ ♦ ② ❧❥ t ♣ ♥ ③ ①❤ ♥♣ ❦ ❤ t ♣ ❤ ❥ ✐❧ ❥ t ❤④ t ❧ ❥ ➙ ⑦ ❺ ⑦ ➌ ❻✇ ➃ ✇ ❥ ♣ ➋ ⑩ ➌ ⑨ . 2010. ➩ ❧❥ ❧❼❤ ⑤ ❧r ➽➾ ➚ ♣ ✐ ➪ ❥ ➭ ♣ ✐r ③ t ❧ ❥ ➶ , s r ♣ ② ❧r ♥ s ❧♥♣ ➀ ♣ ♦ ❻ ❤s ②❤ ❥ 2- ➯ 5’- ⑥⑥ ➩➩ ➇ ⑥ ➩ ⑥➂ ➩➩ ➇ ➂➂ ➂ ➩ ➇➂ ➩➩ -3’ , ❻ ❤❽ ❻ ⑥s - ➹ 5’- ➘ ➴ ➷➬➷➷ ➘ ➬➷➬ ➘ ➷ ➘ ➷ ➬ ➬ ➘ ➬ ➘➷ ➷ ➘ ➴ ➘ ➷ -3’, ➘ ➮ ➱ ➮ ✃ ❐❒➮ ❮ ❰Ï 3’ Ð ❮ ÑÒ➮ ❮ 5 ’- ➘ ➴➬ ➘ ➬ ➴ ➷ ➷➴ ➘ ➷➬➷➴ ➘ ➴ ➬➷➴ ➘ ➬➷➷➴ ➘ -3’, Ó ❐➱ ➘ ➮ ➱ ➮ ✃ ❐❒➮ ❮ ❰Ï 3’ Ô ➮ ÕÖ➮ Ó Ð ❮ ÑÒ➮ ❮ 5’- ➴ ➘ ➴ ➬➷➴ ➘ ➬➷➷➴ ➘➘ ➴➷➬ ➘ ➷➴ ➷ ➘ ➬ ➘ -3’ Ó Ñ× Ø ➱ ❐Ù ❐➱ Ø ➱ ÖØ Ù Ò➮ ➱ × Ñ Õ Ú Û ❐ Õ Ñ Ø Ü Ø ➱ × 3’ × ➮ ➱ M ÝÞ Ý a. ß ❮ ÑÒ➮ ❮ 3’ à ➬ ✃ - ✃ 5’- ➷➷ ➬➴ ➷➷ ➷➷➬ ➴ ➘ ➷ ➴ - ➷ ➘ ➬ ➬ ➘ ➴ ➷➬➷➷ ➘ ➷ -3’ Ó Ñ× Ø ➱ ❐Ù ❐ ➱ Ø ➱ ÖØ Ù Ò➮ ➱ × ❐ÒÐ Û Ñá ÑÙ ❐ Õ Ñ â ❐ × Ñ ❐➱ 3’ à ➬ ✃ . ß ❮ Ñ Ò ➮ ❮ ã ß 6 5’- ➷➬➬➬ ➷ ➘➘ ➬ ➘ ➷➴ ➷➴ ➬➷➬➷ ➘ ➷➷ -3’ Ó ❐ ➱ ➬ ä 5’- ➬ ➷➷➬➷➴ ➘ ➷➴➬ ➴➷➴ - ➬➷➬➷ ➘➘➘ -3’ Ó Ñ × Ø ➱ ❐ Ù ❐ ➱ Ø ➱ ÖØ Ù Ò➮ ➱ × ❐ Ò Ð Û Ñ á ÑÙ ❐Õ Ñ åÔ ➷ Õ ÑÕ Ñ Ð ❐ ➱ Ó Ñ Ó ❐ Û ❐Ò Ð ➘æç - ➬ æ❐Õ è . éê t ë ì ê íê n ê î ï t ïð ñ ò s ë î ð óï ôõ ö ÷ o t ð î . ø Õ Ú Û ❐ Õ Ñ ✃Ô ➷ Ò➮ ➱ × ÑÙ Ø Ö Ñ Ò➮Ö Ú Ó ➮ ù Ñ ➴ Û ➴ ú ❐➱ × 1993 è ❐ ➱ × Ó Ñ Ò Ú Ó Ñ á ÑÙ ❐ Õ Ñ . å❐ Ø ➱ 0,5 × ❮ ❐Ò Ó Ñ× ➮ ❮ Ø Õ Ó ➮ ➱ × ❐➱ Ò Ú ❮ Ö ❐❮ Õ ❐ÒÐ ❐Ñ ú ❐ Û Ø Õ Ó ➮ ➱ × ❐ ➱ â ❐➱ Ö Ø ❐ ➱ Ð ❐Õ Ñ ❮ Ù Ø ❐ ❮ Õ ❐ . û❐Õ Ñ Û × ➮ ❮ Ø Õ ❐➱ Ó Ñ Ò ❐ ÕØ Ù Ù ❐ ➱ Ù ➮ Ó ❐ Û ❐Ò Ö ❐â Ø ➱ × 30 Ò Û Ó ❐ ➱ Ó Ñ ❒❐ÒÐ Ø ❮ Ó ➮ ➱ × ❐ ➱ 10 Ò Û â Ø á á ➮ ❮ ➮ Ù ÕÖ ❮ ❐Ù Õ Ñ 2 ➴ ➬➷ ü , 2 ßý ß 25000, 100 Ò ç ➬ ❮ Ñ Õ - û ➴ Û Ð û 8, 25 Òç æ å ➬➷ , 2 ç Ô❐➴ Û Ó ❐ ➱ 250 Òç - Ò➮ ❮ ❒❐Ð Ö Ú ➮Ö ❐➱ Ú Û è ❐ ➱ × Ö➮ Û ❐ú Ó Ñú ❐➱ × ❐ÖÙ ❐➱ 65 þ C ÿ Ó Ñ Ù Ú ❒ Ú Ù ú Ñ ➱ × × ❐ ú Ú Ò Ú × ➮ ➱ Ó ❐ ➱ Ó ÑÑ ➱ Ù Ø â ❐ Õ Ñ Ð ❐ Ó ❐ ÕØ ú Ø ✁ ✂ C Õ➮ Û ❐ Ò ❐ ✄ ☎ Ò➮ ➱ Ñ Ö ÿ Ù ➮ ÒØ Ó Ñ ❐➱ Ó ÑÓ Ñ➱ × Ñ ➱ Ù ❐ ➱ Ó Ñ ÕØ ú Ø ❮ Ø ❐➱ × Ó ❐➱ Ó ÑÖ ❐ Ò â ❐ ú Ù ❐➱ ✄ ☎ Ò Û C ú Û Ú ❮ Ú á Ú ❮ Ò ✆ I Õ Ú ❐ Ò Ñ Û ❐ Û Ù Ú ú Ú Û CI ✝ ✞ ✆ ✄ ✟ Ù ➮Ò Ø Ó Ñ ❐➱ Ó Ñ ✠ Ú ❮ Ö ➮Ù Õ Ó ❐ ➱ Ó Ñ Õ➮ ➱ Ö ❮ Ñ á Ø × ❐ Õ Ñ ✄ ✁ ✡ ☎ ☎ ☎ ❮ Ð Ò S Ø ❮ ✠ ❐ ÛÛ U Û Ö ❮ ❐ P ❮ Ú ☛ ☎ ✟ Ð ❐Ó ❐ ÕØ ú Ø ✞ ✂ C Õ➮ Û ❐ Ò ❐ ✄ ☎ Ò➮ ➱ ÑÖ✡ C ❐Ñ ❮ ❐ ➱ Ó ÑÒ ❐ÕØ Ù Ù ❐➱ Ù ➮ Ö ❐ â Ø ➱ × â ❐❮ Ø ÿ Ó ÑÖ ❐ Ò â ❐ ú Ù ❐ ➱ ✄ ☞ ✠ Ú Û Ø Ò➮ ✝ ÿ ✁ M L Ñ C Û Ó ❐ ➱ Ó ÑÑ ➱ Ù Ø â ❐ Õ Ñ Ð ❐Ó ❐ ÕØ ú Ø ✌ ✍ ✝ þ C Õ ➮ Û ❐Ò❐ ✝ ÿ ✁ Ü ❐ Ò✡ C ❐ ÒÐ Ø ❮ ❐➱ Ó Ñ Õ➮ ➱ Ö ❮ Ñ á Ø × ❐ Õ Ñ Ð ❐Ó ❐ ✄ ✁ ✡ ☎ ☎ ☎ ❮ Ð Ò ÿ ÕØ ú Ø ✞ ✂ C Õ➮ Û ❐ Ò ❐ ✄ ☎ Ò➮ ➱ ÑÖ✡ C ❐Ñ ❮ ❐ ➱ Ó Ñâ Ø ❐➱ × Ó ❐ ➱ ➮ ➱ Ó ❐Ð ❐ ➱ Ó ÑÕØ ÕÐ ➮ ➱ Õ ÑÙ ❐ ➱ Ó ➮ ➱ × ❐ ➱ ✁ ☎ ☎ ✎ Û TE ✄ ☎ Ò M T ❮ Ñ Õ Ð û ☛ ✏ ✄ Ò M EDTA ÿ Ù ➮ ÒØ Ó Ñ❐ ➱ Ó Ñ ➮ Ù ÕÖ ❮ ❐Ù Õ Ñ Ó ➮ ➱ × ❐ ➱ ✄ ☞ ✠ Ú Û Ø Ò➮ á ➮ ➱ Ú Û Ð û ✑ ÿ Ó Ñ ✠ Ú ❮ Ö➮ Ù Õ Ó ❐ ➱ Ó Ñ Õ➮ ➱ Ö ❮ Ñ á Ø × ❐Õ Ñ Ð ❐Ó ❐ ✄ ✞ ✡ ☎ ☎ ☎ ❮ Ð Ò Õ ➮ Û ❐Ò ❐ ✄ ☎ Ò ➮ ➱ Ñ Ö Ð ❐Ó ❐ ÕØ ú Ø ✝ ☎ ✂ C ✡ C ❐Ñ ❮ ❐➱ â ❐ × Ñ ❐➱ ❐Ö ❐Õ Ó Ñ ❐ Ò â Ñ Û Ó ❐ ➱ Ó Ñ➮Ù ÕÖ ❮ ❐ Ù Ù ➮Ò â ❐ Û Ñ Ó ➮ ➱ × ❐➱ ✄ ☞ ✠ Ú Û Ø Ò➮ á ➮ ➱ Ú Û✆ ❒ ú Û Ú ❮ Ú á Ú ❮ Ò ✆ ÑÕ Ú ❐ Ò Ñ Û ❐ Û Ù Ú ú Ú Û PCI ✝ ✁ ✆ ✝ ✞ ✆ ✄ ✟ ÿ Ó Ñ ✠ Ú ❮ Ö➮ Ù Õ Ó ❐➱ Ó ÑÕ➮ ➱ Ö ❮ Ñ á Ø × ❐Õ Ñ Ð ❐ Ó ❐ ✄ ✞ ✡ ☎ ☎ ☎ ❮ Ð Ò Õ➮ Û ❐ Ò ❐ ✄ ☎ Ò➮ ➱ ÑÖ Ð ❐ Ó ❐ ÕØ ú Ø ✝ ☎ ✂ C ✡ F ❐ Õ➮ ❒ ❐Ñ ❮ Ó ÑÐ Ñ➱ Ó ❐ú Ù ❐ ➱ Ù ➮ Ö ❐ â Ø ➱ × â ❐ ❮ Ø ÿ Ó Ñ Ö ❐ Ò â ❐ ú Ù ❐ ➱ ✄ ☞ ✠ Ú Û Ø Ò ➮ ✝ ÿ ✁ M L Ñ C Û Ó ❐ ➱ Ó ÑÑ ➱ Ù Ø â ❐ Õ Ñ Ð ❐Ó ❐ ÕØ ú Ø ✌ ✍ ✝ ✂ C Õ➮ Û ❐Ò ❐ ✄ Ü ❐ Ò✡ C ❐ ÒÐ Ø ❮ ❐ ➱ Ó ÑÕ➮ ➱ Ö ❮ Ñá Ø × ❐Õ Ñ Ð ❐ Ó ❐ ✄ ✞ ✡ ☎ ☎ ☎ ❮ Ð Ò Ð ❐ Ó ❐ ÕØ ú Ø ✞ ✂ C Õ➮ Û ❐Ò ❐ ✄ ✁ Ò➮ ➱ ÑÖ ✡ S Ø Ð ➮ ❮ ➱ ❐ Ö ❐ ➱ Ó Ñ â Ø ❐ ➱ × ÿ ➮ ➱ Ó ❐Ð ❐ ➱ Ó Ñ ❒ Ø ❒Ñ Ó ➮ ➱ × ❐➱ ❐ Û Ù Ú ú Ú Û ä ☎ ✒ Ó ❐ ➱ Ó ÑÕ➮ ➱ Ö ❮ Ñá Ø × ❐ Õ Ñ Ð ❐ Ó ❐ ✄ ✁ ✡ ☎ ☎ ☎ ❮ Ð Ò Ð ❐ Ó ❐ ÕØ ú Ø ✞ ✂ C Õ➮ Û ❐ Ò ❐ ✄ ☎ Ò➮ ➱ Ñ Ö✡ E ➱ Ó ❐Ð ❐➱ Ó ÑÕØ Õ Ð ➮ ➱ Õ ÑÙ ❐ ➱ Ó ➮ ➱ × ❐ ➱ ❐ Ñ❮ DEPC Ó ❐ ➱ Ó Ñ Õ Ñ ÒÐ ❐ ➱ Ð ❐Ó ❐ ÕØ ú Ø ✌ ✍ ✝ ✂ C ✡ ✓✔ ✕✖ ✗✘ ✕✙ ✚✛✜ ✢ ✙ ✖ ✗✣ ✤✥ ✦ ✔ ✦ ✥ ✘ ✢ ✗ ✘ ✧ ✥ ✘ ★✛✥ ✕✗ ✩ ✥✘ ✧ ✪ ✗✪ ✥ ✕ ✚ ✛✥ ✕ ✗ ✔ ✘ ✫✔ ✦ ✬ ✗✬✔ ✣ ✘ ✙ ✦ ✥ ✘ ✚ ✛✜ ✢ ✥✣ ✙ ★✛✜ . ✭ ✔ ✥ ✤ ✙ ✫✥ ✕ ✚✛✜ ✩ ✥ ✘ ✧ ✪ ✥ ✙ ✦ ✢ ✙✫ ✔ ✘ ✮✔ ✦ ✦ ✥✘ ✥✢ ✥✘ ✩ ✥ ✢ ✔ ✥ ✖ ✙ ✫✥ ✣ ✙ ✪ ✯ ✕✯ ✬ 18 ✓ ✢ ✥✘ 28 ✓ ✢ ✥ ✘ ✦ ✔ ✥ ✘ ✫ ✙✫ ✥ ✕ ✢ ✙✔ ✦ ✔ ✣ ✢ ✗✘ ✧ ✥✘ ✥ ✤✥✫ ✕✖ ✗ ✦ ✫✣ ✯ ✰ ✯ ✫ ✯ ✬ ✗✫ ✗✣ ✱ ✗✲✙ ✤ ✱ ✳ 2020 ✖ ✥ ✢ ✥ ✖ ✥✘ ✮✥✘ ✧ ✧ ✗✤✯ ✬✪ ✥✘ ✧ 260 ✘ ✬ ✢ ✗✘ ✧ ✥✘ ✖ ✗✣ ✴ ✙✫ ✔ ✘ ✧ ✥✘ 1 ✵ ★ 260 ✶ ✷ ✸  ✧ ✹✬ ✤ RNA ✺ ✻ ✼ n t ✽ s ✼ s ✾ ✿❀ ❁ ❂ o t ❃ ❄❅ ✲ DNA ✫ ✯ ✫✥ ✤ ✢ ✙ ✕ ✙✘ ✫ ✗✕ ✙ ✕ ✬ ✗ ✘ ✧ ✧ ✔ ✘ ✥ ✦ ✥ ✘ S ❆ ❇ ❈❉ Sc ❉ i ❇ ❊ II RT I ✘ ❋ ✙ ✫✣ ✯ ✧ ✗ ✘ ● ✺ K ✯ ✬ ✖ ✯ ✕ ✙ ✕ ✙ ✕ ✙✘ ✫ ✗✕ ✙ ✕ ✲ DNA ✫ ✯ ✫✥ ✤ ✥ ✢ ✥ ✤ ✥ ✴ ❍ ✸ ✸ ✘ ✧ ■ ✸  ✤ RNA ✫ ✯ ✫ ✥ ✤ ✩ ✥ ✘ ✧ ✕ ✔ ✢ ✥ ✴ ✢ ✙ ✖ ✗✣ ✤ ✥ ✦ ✔ ✦ ✥✘ ✢ ✗✘ ✧ ✥ ✘ DNA ✕✗❏ ■ ❑ ✰ ✙ ✣ ✕ ✫ ▲ ✕✫✣ ✥ ✘ ✢ ✪ ✔ ✰ ✰ ✗ ✣ ❏ ✸ ✺ ❍ ▼ M ✯ ✤✙✧ ✯ ◆ ✢ ❖ ● P◗ ❏ ✸ ✺ ❘ M DTT ❏ ✸ ✺ ❘ ✬ M ✢ ✛ TP ✬✙ ❑ ❏ ✷ ✸ U ✗ ✘ ❙✙ ✬ S ✔ ✖ ✗ ✣ S ✲✣ ✙ ✖ ✫ TM II RT ❏ ✢ ✥✘ ✢ ✢ H ❚ O ✩ ✥ ✘ ✧ ✢ ✙ ✖ ✗ ✣ ✤✥ ✦ ✔ ✦ ✥ ✘ DEPC ✕✗ ✴ ✙✘ ✧ ✧ ✥ ✬ ✗ ✘ ✲ ✥ ✖ ✥ ✙ ❋ ✯ ✤ ✔ ✬ ✗ ✥ ✦ ✴ ✙ ✣ ❘ ✸ ▼ ✤ ✺ C ✥ ✬ ✖ ✔ ✣ ✥ ✘ ✢ ✙ ✣ ✗✥ ✦ ✕ ✙ ✦ ✥ ✘ ✖ ✥✢ ✥ ✕ ✔ ✴ ✔ ❯ ✸ ❱ C ❏ ■ ✸ ✬ ✗✘ ✙ ✫ ❲ ✷ ❘ ❱ C ❏ ❍ ✸ ✬ ✗ ✘ ✙ ✫ ❲ ❳ ❍ ❱ C ❏ ❍ ✬ ✗ ✘ ✙ ✫ ❲ ✢ ✥ ✘ ■ ❍ ❱ C ❏ ■ ✸ ✬ ✗✘ ✙✫ ✬ ✗✘ ✧ ✧ ✔ ✘ ✥ ✦ ✥ ✘ ✬ ✗✕ ✙ ✘ ❨ CR MJ R ✗ ✕✗ ✥ ✣ ✲ ✴ ❖ ❩ ■ ✸ ✸ ● ✺ K ✗✬✔ ✣ ✘ ✙✥ ✘ ✲ DNA ✢ ✙ ✦ ✗✫✥ ✴ ✔ ✙ ✬ ✗✤✥ ✤✔ ✙ PCR ✢ ✗ ✘ ✧ ✥✘ ✖ ✣ ✙ ✬ ✗✣ ✕✖ ✗ ✕ ✙ ✰ ✙ ✦ ✔ ✘ ✫✔ ✦ ✲ DNA ✗❑ ✯ ✘ ■ ▲ ✗❑ ✯ ✘ ❘ ✢ ✥ ✣ ✙  ▲ ✥ ✦ ✫ ✙✘ ✢ ✗ ✘ ✧ ✥✘ ✦ ✯ ✬ ✖ ✯ ✕ ✙ ✕ ✙ ■ ❬ ✤ ✲ DNA ❏ ■ ❑ ✫ ✥ ❭ ✪ ✔ ✰ ✰ ✗✣ ❏ ✸ ✺ ❘ ✬ M ✢ ✛ TP ✬ ✙ ❑ ❏ ✸ ✺ ❍ ▼ M ✖ ✣ ✙ ✬ ✗✣ ❪❫❊ ❴ ❏ ✸ ✺ ❍ ▼ M ✖ ✣ ✙✬ ✗ ✣ ❪ c ❊ R ❏ ✷ ❵ DMSO ❏ ■ ✺ ❘ ❍ U ✫✥ ❭ DNA ✖ ✯ ✤✩ ✬ ✗ ✣ ✥ ✕ ✗ RBC B ✙ ✯ ✕✲ ✙ ✗ ✘ ✲✗ ✢ ✥ ✘ ✢ ✢ H ❚ O ✴ ✙ ✘ ✧ ✧ ✥ ✬ ✗✘ ✲✥ ✖ ✥✙ ❋ ✯ ✤✔ ✬ ✗ ✥ ✦ ✴ ✙ ✣ ❘ ✸ ❬✤✺ C ✥✬ ✖ ✔ ✣ ✥✘ ✢ ✙ ✣ ✗ ✥ ✦ ✕✙ ✦ ✥✘ ✢ ✗✘ ✧ ✥ ✘ ✦ ✯ ✘ ✢ ✙ ✕ ✙ ✖ ✣ ✥ ▲ PCR ❳ ✷ ❱ C ❏ ❍ ✬ ✗ ✘ ✙ ✫ ❲ ✢ ✗ ✘ ✥ ✫✔ ✣ ✥ ✕ ✙ ❳ ✷ ❱ C ❏ ❯ ✸ ✢ ✗✫✙ ✦ ❲ ✖ ✗✘ ✗ ✬ ✖ ✗ ✤ ✥✘ ✖ ✣ ✙ ✬ ✗✣ ❍ ❍ ❱ C ❏ ❯ ✸ ✢ ✗✫✙ ✦ ❲ ✖ ✗✬✥✘ ✮✥✘ ✧ ✥ ✘ ❛ ❘ ❱ C ❏ ■ ✺ ❍ ✬ ✗✘ ✙✫ ✢ ✥ ✘ ✖ ✥ ✕✲✥ ▲ PCR ❛ ❘ ❱ C ❏ ❍ ✬ ✗ ✘ ✙ ✫✺ PCR ✢ ✙ ✤✥ ✦ ✔ ✦ ✥ ✘ ✕ ✗ ✪ ✥✘ ✩ ✥ ✦ ❯ ❍ ✕ ✙ ✦ ✤ ✔ ✕ ✺ ❜ s ❝ ❄❃ ❞ ✼ ❡ ❃ ❢ ✼❃ ❣ ❂✽ n ❢ ❃ ❤ ✐ ✽ n Mmpma. B ✥ ✧ ✙ ✥✘ ✫ ✗ ✘ ✧ ✥ ✴ ✧ ✗ ✘ M ❥ ❇ ❥ a ❏ ✩ ✥✘ ✧ ✕✗✤✥✘ ✮ ✔ ✫ ✘ ✩ ✥ ✢ ✙ ✕✗✪ ✔ ✫ ✕✗ ✪ ✥✧ ✥✙ M ❥ ❇ ❥ a ✬ ❏ ✢ ✙✙ ✕✯ ✤ ✥ ✕ ✙ ✪ ✗✣ ✢ ✥ ✕ ✥✣ ✦ ✥✘ ✬ ✗✫ ✯ ✢ ✗ M ✔ ❙ ✔ ✘ ✙ e ❊ a ❦✺ ❘ ✸ ■ ✸ ● ✺ PCR ✢ ✙ ✤✥ ✦ ✔ ✦ ✥ ✘ ✫ ✗✣ ✴ ✥ ✢ ✥ ✖ ✲ DNA ✬ ✗✘ ✧ ✧ ✔ ✘ ✥ ✦ ✥✘ ✖ ✣ ✙ ✬ ✗ ✣ ✕✖ ✗ ✕ ✙ ✰ ✙ ✦ AF ❘ ✢ ✥ ✘ AR ❘ ✺ C ✥ ✬ ✖ ✔ ✣ ✥ ✘ ✣ ✗✥ ✦ ✕ ✙ PCR ✩ ✥✘ ✧ ✢ ✙ ✧ ✔ ✘ ✥ ✦ ✥ ✘ ✥ ✢ ✥ ✤✥ ✴ ■ ▼✤ ✲ DNA ✫ ✯ ✫ ✥ ✤ ❏ ■ ❑ ✪ ✔ ✰ ✰ ✗ ✣ ✫✥ ❭ ❏ ✸ ✺ ❘ ✬ M ✢ ✛ TP ✬✙ ❑ ❏ ✸ ✺ ❍ ▼ M ✖ ✣ ✙ ✬ ✗✣ AF ❘ ❏ ✸ ✺ ❍ ▼ M ✖ ✣ ✙✬ ✗ ✣ AR ❘ ❏ ✷ ❵ DMSO ❏ ■ ✺ ❘ ❍ U ✫✥ ❭ DNA ✖ ✯ ✤✩ ✬ ✗ ✣ ✥ ✕ ✗ RBC B ✙ ✯ ✕✲✙ ✗✘ ✲ ✗ ✢ ✥ ✘ ✢ ✢ H ❚ O ✴ ✙✘ ✧ ✧ ✥ ❋ ✯ ✤ ✔ ✬ ✗ ✥ ✦ ✴ ✙ ✣ ❘ ✸ ▼✤✺ PCR ✢ ✙ ✤ ✥ ✦ ✔ ✦ ✥✘ ✕✗ ✪ ✥✘ ✩ ✥ ✦ ❯ ❍ ✕✙ ✦ ✤ ✔ ✕ ✢ ✗✘ ✧ ✥✘ ✦ ✯ ✘ ✢ ✙ ✕ ✙ ✖ ✣ ✥ ▲ PCR ❳ ✷ ❱ C ❏ ❍ ✬ ✗✘ ✙ ✫ ❲ ✢ ✗✘ ✥✫ ✔ ✣ ✥ ✕ ✙ ❳ ✷ ❱ C ❏ ❯ ✸ ✢ ✗✫✙ ✦ ❲ ✖ ✗ ✘ ✗ ✬ ✖ ✗ ✤ ✥ ✘ ✖ ✣ ✙ ✬ ✗ ✣ ❍ ❧ ♠ C ❏ ❯ ✸ ✢ ✗ ✫ ✙ ✦ ❲ ✖ ✗✬✥✘ ✮✥✘ ✧ ✥ ✘ ❛ ❘ ❱ C ❏ ■ ✺ ❍ ✬ ✗ ✘ ✙✫ ❏ ✢ ✥ ✘ ✖ ✥ ✕✲ ✥ ▲ PCR ❛ ❘ ❱ C ❏ ❍ ✬ ✗ ✘ ✙ ✫✺ Iso l ❃ ❞ ✼ ❡ ❃ ❢ ✼ ❃ ❣ ♥♦ u n ❢ ♣ q ✐ ✽ n Mmpma. U ✮✔ ✘ ✧ ❍ ’ ✧ ✗✘ M ❥ ❇ ❥ a ❏ ✩ ✥✘ ✧ ✕✗✤✥✘ ✮ ✔ ✫ ✘ ✩ ✥ ✢ ✙ ✕ ✗ ✪ ✔ ✫ ✕ ✗ ✪ ✥✧ ✥✙ M ❥ ❇ ❥ a ❍ r ❏ ✢ ✙ ✙ ✕✯ ✤✥ ✕ ✙ ✬ ✗ ✘ ✧ ✧ ✔ ✘ ✥ ✦ ✥✘ ❘ ✫✥ ✴ ✥ ✖ ✺ T ✥ ✴ ✥ ✖ ✖ ✗✣ ✫✥ ✬✥ ❏ ✕✗✪ ✥ ✘ ✩ ✥ ✦ ■ ▼✤ ✲ DNA ✫ ✯ ✫✥ ✤ ✢ ✙ ✲✥✬ ✖ ✔ ✣ ✢ ✗✘ ✧ ✥ ✘ ✸ ✺ ❍ ▼ M ✖ ✣ ✙✬ ✗ ✣ PMA ❘ ▲ F ❏ ✸ ✺ ❍ ▼ M ✖ ✣ ✙✬ ✗ ✣ M ✥ ✖ ✬✥✘ ❘ ▲ R ❏ ■ ❑ ✪ ✔ ✰ ✰ ✗ ✣ ✫✥ ❭ ❏ ✸ ✺ ❘ ✬ M ✢ NTP ✬ ✙ ❑ ❏ ■ ✺ ❘ ❍ U LA ✫ ✥ ❭ DNA ✖ ✯ ✤✩ ✬ ✗✣ ✥ ✕✗ T ✥ ✦ ✥✣ ✥ ✢ ✥ ✘ H ❚ O ✴ ✙✘ ✧ ✧ ✥ ❋ ✯ ✤✔ ✬ ✗ ✥ ✦ ✴ ✙✣ ❘ ✸ ▼ ✤ ✺ PCR ✢ ✙ ✤✥ ✦ ✔ ✦ ✥ ✘ st ✉ ✈✇ ① ✈② 35 s ③ ② ④ ⑤ s ⑥ t✇ ⑦ ✈ ✇ ② ⑧ ✇ ⑥ ③s ③ ⑨ ⑩ ✈ - ❶❷ ❸ 94 ❹ C ❺ ❻ ❼t✇ ③❽❾ ⑥ t ✇ ✈❽ ⑤ ⑩ ✈s ③ ❿ ➀ ❹ C ❺ ➁ ➂ ⑥ t ❽③ ② ❾ ⑨ t ✇ t ❼ ⑨ t④ ✈ ✇ ⑨ ⑩ ③ ❼ t ⑩ ❻ ❻ ➃ C ❺ ➁ ➂ ⑥ t ❽ ③② ❾ ⑨ t ❼✈✇ ➄ ✈✇ ⑦ ✈✇ ➅ ➆ ❹ C ❺ ➇ ➈ ❻ ❼ t✇ ③ ❽❺ ⑥ ✈✇ ⑨ ✈s ➉✈➊ PCR ➅ ➆ ❹ C ❺ ❻ ❼ t✇ ③ ❽ ➈ T ✈➋ ✈ ⑨ ② t ⑥ ⑤ ✈ ❺ s t ✉ ✈ ✇ ① ✈ ② ➇ ➌④ ⑨ ⑩ ⑧ ⑥ ⑤ ② PCR ⑥ ③✈ ❽✈s ⑥ ③ ➉✈ ❼ ⑨ ⑤ ⑩ ⑥ t ✇ ⑦ ✈ ✇ ➂ ➈ ❻ ➌ M ⑨ ⑩ ③❼t ⑩ PMA ➆ ➊ F ❺ ➂ ➈ ❻ ➌ M ⑨ ⑩ ③ ❼ t ⑩ M ✈ PMA ⑨ ➊ R ❺ ⑥ ✈ ✇ ② ⑧ ❼ ⑨ ⑧ ✇ t✇ ④ ✈③✇ st ⑨ t ⑩ ❽③ ⑨ ✈⑥ ✈ ❽✈➋ ✈⑨ ⑨ t ⑩ ❽✈ ❼✈➈ K ⑧ ✇ ⑥ ③s ③ PCR ⑥ ③④ ✈ ② ⑤ ② ✈✇ st⑨ t ⑩ ❽ ③ ⑨ ✈ ⑥ ✈ ❽✈➋ ✈⑨ ⑨ t ⑩ ❽ ✈❼ ✈ ➈ ➍ s ➎ ➏➐ ➑➒ ➓ ➐ ➔ ➒➐ → ➣↔ u n ➔ ↕ ➙ ➛➜ n Mmpma. U ➄ ⑤ ✇ ⑦ ➁ ’ ⑦ t ✇ M ➝➞ ➝ a ❺ ① ✈ ✇ ⑦ st④ ✈ ✇ ➄⑤ ❽✇ ① ✈ ⑥ ③ s t ✉ ⑤ ❽ st ✉ ✈⑦ ✈③ M ➝➞ ➝ a ➁ ➟ ❺ ⑥ ③ ③ s ⑧ ④ ✈ s ③ ❼t✇ ⑦ ⑦ ⑤ ✇ ✈ ② ✈ ✇ ❼t ❽ ⑧ ⑥ t RACE Ra ➞ ➠ d ➡➝➞ ➢ ifica ➤ i ➥ ➦ c ➧ N ➡ ➨➦ ➩ ➫ ➈ S ③✇ ❽ts ③ s ➉ DNA ❼ t ✇ ⑦ ③② ⑤ ❽③ ⑨ t ❽ ⑤ ✇ ➄⑤ ② ⑥ ✈ ⑩ ③ ❼✈ ✇ ⑤ ✈ ④ G t ✇ t R ✈➉t ⑩ K ③ ❽ I ✇ ➭ ③❽ ⑩ ⑧ ⑦ t✇ ➯ ➈ PCR ⑥ ③ ④ ✈② ⑤ ② ✈✇ ⑥ t ✇ ⑦ ✈✇ ❼ t ✇ ➉✈❼⑨ ⑤ ⑩ ➇ ➌ ④ ➉ DNA ❽ ⑧ ❽ ✈ ④ ⑥ t ✇ ⑦ ✈ ✇ ➂ ➈ ❻ ➌ M ⑨ ⑩ ③❼t ⑩ M ✈⑨ ❼ ✈ ✇ ➆ ➊ F ❺ ➂ ➈ ❻ ➌ M G t✇ t R ✈ ➉ t ⑩ ➁ ➟ ⑨ ⑩ ③❼t ⑩ ❺ ⑥ ✈✇ ② ⑧ ❼⑨ ⑧ ✇ t✇ ④ ✈③✇ st⑨ t ⑩ ❽ ③ ⑨ ✈ ⑥ ✈ ③s ⑧ ④ ✈s ③ ⑤ ➄ ⑤ ✇ ⑦ ❻ ➟ ⑦ t✇ ➈ S t ✉ ✈✇ ① ✈ ② ➇ ➌ ④ ⑨ ⑩ ⑧ ⑥ ⑤ ② PCR ⑥ ③ ➉✈ ❼ ⑨ ⑤ ⑩ ⑥ t ✇ ⑦ ✈ ✇ ➂ ➈ ❻ ➌ M ⑨ ⑩ ③ ❼ t ⑩ M ✈ PMA ⑨ ➊ F ❺ ➂ ➈ ❻ ➌ M G t✇ t R ✈➉t ⑩ ➁ ➟ N t s ❽t ⑥ ⑨ ⑩ ③ ❼ t ⑩ ⑥ ✈✇ ② ⑧ ❼ ⑨ ⑧ ✇ t✇ ④ ✈③✇ st ⑨ t ⑩ ❽③ ⑨ ✈⑥ ✈ ③ s ⑧ ④ ✈s ③ ⑤ ➄⑤ ✇ ⑦ ❻ ➟ ⑦ t✇ ➈ K ⑧ ✇ ⑥ ③ s ③ PCR ⑥ ③④ ✈ ② ⑤ ② ✈✇ st ⑨ t ⑩ ❽③ ⑨ ✈ ⑥ ✈ ③s⑧ ④ ✈ s ③ ⑤ ➄ ⑤ ✇ ⑦ ❻ ➟ ⑦ t ✇ ➈ ➲ ➒➔ ➐ ➑➒ ➓ ➐ ➔ ➒➐ → - ➓ ➐ ➔ ➒ ➐ → ➛➜ n Mmpma ➳ ➜ n ➔ ➐ n ➵ ➜ k to r ➸ ➜ n ➔ ➺ lo n ➐ n . P ⑩ ⑧ ⑥ ⑤ ② PCR ⑥ ✈ ⑩ ③ ② t ❽ ③⑦ ✈ ✉ ✈⑦ ③ ✈ ✇ ⑦ t ✇ M ➝➞ ➝ a ❼✈s ③ ✇ ⑦ ➊ ❼ ✈ s ③✇ ⑦ ⑥ ③ s ③ s ③⑨ ② ✈✇ ② t ⑥ ✈④ ✈ ❼ ⑨ ➻ EM ➊ T E ✈ s ① P ⑩ ⑧ ❼ t ⑦ ✈ ❼t✇ ⑦ ③② ⑤ ❽③ ⑨ t ❽⑤ ✇ ➄⑤ ② ⑥ ✈ ⑩ ③ P ⑩ ⑧ ❼ t ⑦ ✈ I ✇ ➉➈ ❺ ① ✈ ③ ❽⑤ ❼ t✇ ➉ ✈❼ ⑨ ⑤ ⑩ ② ✈✇ ❼ ✈ s ③✇ ⑦ ➊ ❼ ✈ s ③✇ ⑦ ➆ ➂ ✇ ⑦ M ➝➞ ➝ a ❼❺ ➆ ❻ ✇ ⑦ M ➝➞ ➝ a ❻ ➟ ❺ ⑥ ✈ ✇ ➁ ➅ ✇ ⑦ M ➝➞ ➝ a ➁ ➟ ⑥ t ✇ ⑦ ✈✇ ➆ ❻ ✇ ⑦ ⑨ ➻ EM ➊ T E ✈s ① ❺ ➂ ➈ ❻ ➌④ ➇ ➈ ❻ U T ➀ DNA L ③ ⑦ ✈st ❺ ❻ ➌ ④ ➆ ➼ Ra ➞ ➠ d Liga ➤ i ➥ ➦ ➽ ➾ ➚ fe ➪ ❺ ⑥ ✈✇ ⑥ ⑥ ➶ ➹ O ➋ ③✇ ⑦ ⑦ ✈ ➭ ⑧ ④ ⑤ ❼ t ✈ ② ➋ ③ ⑩ ❼✈ s ③✇ ⑦ ➊ ❼ ✈ s ③✇ ⑦ ❼ t ✇ ➉ ✈ ⑨ ✈③ ➇ ➂ ➌ ④ ➈ M ✈s ③ ✇ ⑦ ➊ ❼ ✈ s ③✇ ⑦ ➉✈ ❼ ⑨ ⑤ ⑩ ✈✇ ⑩ t ✈ ② s ③ ⑥ ③ ③✇ ② ⑤ ✉ ✈ s ③ ⑨ ✈ ⑥ ✈ ➀ ➃ C st ❼✈ ④ ✈❼ ➈ H ✈ s ③ ④ ④ ③⑦ ✈ s ③ ❼✈ s ③ ✇ ⑦ ➊ ❼ ✈ s ③✇ ⑦ ⑥ ③③✇ ❽⑩ ⑧ ⑥ ⑤ ② s ③ ② ✈ ✇ ② t ⑥ ✈ ④ ✈❼ ➨➘ c ➥ ➢ i DH ❻  ❼ t ✇ ⑦ ③ ② ⑤ ❽ ③ ⑨ ⑩ ⑧ st ⑥ ⑤ ⑩ S ⑤ ➋ ✈ ⑩ s ⑧ ✇ ⑧ e ➤ a ➢➈ ➆ ➂ ➂ ❿ ➯ ➈ ➸ ➜ n ➔ ➔ ➐ ➴ u n ➔ ➐ n ➓➐ ➔ ➒ ➐ n - ➓➐ ➔ ➒ ➐ → ➛➜ n Mmpma. P t ✇ ⑦ ⑦ ✈✉ ⑤ ✇ ⑦ ✈✇ M ➝➞ ➝ a ❼ ⑥ ✈✇ M ➝➞ ➝ a ➁ ➟ ❺ ① ✈ ✇ ⑦ st ④ ✈✇ ➄ ⑤ ❽ ✇ ① ✈ ⑥ ③ st ✉ ⑤ ❽ st ✉ ✈ ⑦ ✈③ M ➝➞ ➝ a ❼➁ ➟ ❺ ⑥ ③④ ✈ ② ⑤ ② ✈✇ ⑥ t✇ ⑦ ✈ ✇ PCR ❺ ① ✈③ ❽ ⑤ ❼ t✇ ➉✈ ❼ ⑨ ⑤ ⑩ ② ✈ ✇ ➇  ④ ➉ DNA ❽ ⑧ ❽✈④ ⑥ t✇ ⑦ ✈✇ ➂ ➈ ❻ ➌ M ⑨ ⑩ ③❼t ⑩ AF ➆ ❺ ➂ ➈ ❻ ➌ M ⑨ ⑩ ③ ❼ t ⑩ ➁ ➟ UTR ➊ R ❺ ⑥ ✈✇ ② ⑧ ❼ ⑨ ⑧ ✇ t✇ ④ ✈ ③✇ st ⑨ t ⑩ ❽③ ⑨ ✈⑥ ✈ ③s ⑧ ④ ✈s ③ M ➝➞ ➝ a ❻ ’ ➈ PCR ⑥ ③④ ✈ ② ⑤ ② ✈✇ st ✉ ✈✇ ① ✈ ② ➁ ❻ s ③ ② ④ ⑤ s ⑥ t ✇ ⑦ ✈✇ ② ⑧ ✇ ⑥ ③ s ③ ⑨ ⑩ ✈➊ PCR ❿ ➀ ❹ C ❺ ❻ ❼ t✇ ③ ❽ ❾ ⑥ t✇ ✈ ❽⑤ ⑩ ✈ s ③ ❿ ➀ ❹ C ❺ ➁ ➂ ⑥ t ❽③ ② ❾ ⑨ t ✇ t ❼ ⑨ t④ ✈ ✇ ⑨ ⑩ ③ ❼ t ⑩ ❻ ❻ ➃ C ❺ ➁ ➂ ⑥ t ❽ ③② ❾ ⑨ t ❼✈✇ ➄ ✈✇ ⑦ ✈ ✇ ➅ ➆ ❹ C ❺ ➆ ➈ ❻ ❼ t✇ ③❽ ❺ ⑥ ✈✇ ⑨ ✈s ➉ ✈ ➊ PCR ➅ ➆ ❹ C ❺ ❻ ❼ t ✇ ③ ❽➈ P ⑩ ⑧ ⑥ ⑤ ② PCR st ④ ✈✇ ➄ ⑤ ❽ ✇ ① ✈ ⑥ ③ ② ④ ⑧ ✇ ② t ⑥ ✈④ ✈❼ ⑨ ➻ EM ➊ T E ✈ s ① ⑥ ✈ ✇ ⑥ ③ st ② ⑤ t ✇ ⑤ ✇ ❽ ⑤ ② ② ⑧ ✇ ➷ ③ ⑩ ❼ ✈ s ③ ➈ G t✇ ⑤ ❽⑤ ➋ ➬ f ➾ ➢➢ ➢ e ➦ ➮ ➤ h ge ➦ e ⑥ ③⑨ t ⑩ ⑧ ④ t➋ ⑥ t✇ ⑦ ✈ ✇ 3 ➱ ✃ ❐ ✃❒ , ❮ ✃❰➱ Ï 1 ✃Ð ❒ Ñ❰ Ò ❰ Ó ✃Ô❰ M ÕÖ Õ a5’ × ØÙ Ú ✃Ù ❒ Û ❰ Ð ØÛ ÜÝÞ 2- ß × ✃Ù Ý✃Ü ÝÞ❒ - à ❒ Û á × Ï Ó Ü â à 1, × ✃ Ù M ÕÖ Õ a Ð 3’ × ØÙ Ú ✃ Ù ❒ Û ❰ ÐØÛ Þß 2 × ✃Ù 3’ ãä à - à ❒ Û á × Ï Ó Üâ à 2; 2 ❒ Û á × Ï Ó Ü âà 1 × ✃Ù 2 × ❰ Ú ✃å Ï Ù Ú × ØÙ Ú ✃Ù ❒ ØÛ å ✃ Ù × ❰Ù Ú ✃ Ù Ð á Ñ ❮ ✃ Ù Ú Ô ✃ Ð✃ , Ñ ✃ÑÏ × ❰ æ ✃ Ð❒ Ï Û × Ø Ù Ú ✃ Ù 0.2 ÐÝ × ç äÜ Ð❰ è é 1 è å Ï Ò Ò ØÛ ä ✃ ê , 1.25 ã ë Þ ä ✃ ê ì ç Þ ❒ á Ñ❮ ÐØ Û ✃ Ô Ø , × ✃ Ù × × í 2 î ❐ ❰Ù Ú Ú ✃ ï á ÑÏ ÐØ 20  Ñ . Ü â à × ❰ Ñ✃Ó Ï Ó ✃Ù Ô Øå ✃Ù ❮ ✃Ó 10 Ô❰ Ó ÑÏ Ô × ØÙ Ú ✃Ù Ó á Ù × ❰ Ô❰ ❒ Û ✃ - Ü âà 96 ð C é ñ ÐØÙ ❰ ➱ ò × ØÙ ✃➱Ï Û ✃Ô❰ ó ô ð C é õ ÐØ Ù ❰ ➱ ò ❒ ØÙ ØÐ ❒ Ø Ñ✃Ù × ✃Ù ❒ Ø Ð✃ Ù ö ✃Ù Ú ✃Ù ô ÷ ð C é ø Ð Ø Ù ❰➱ é × ✃Ù ❒ ✃ Ô æ ✃ ù PCR ô ÷ ð C é ú ÐØÙ ❰➱ ò ø û Ô Øå ✃Ù ❮ ✃Ó õ  Ñ ❒ Û á × Ï Ó PCR ➱ ✃ ❐ ✃❒ ñ × ❰ æ ✃Ð ❒ Ï Û × ØÙ Ú ✃Ù ü ý ú þ M ❒ Û ❰ ÐØÛ PMA ñ ù F é ü ý ú þ M ❒ Û ❰ Ð ØÛ ø ÿ UTR ù R é ü ý ñ Ð M × ç TP Ð ❰ è é õ è å Ï Ò Ò Ø Û T ✃ ê é õ ý ñ ú U LA T ✃ ê DNA ❒ á Ñ❮ Ð ØÛ ✃ Ô Ø é × ✃Ù × × í O ❐ ❰ Ù Ú Ú ✃ ï á Ñ Ï ÐØ ñ ü  Ñý PCR × ❰ Ñ✃Ó Ï Ó ✃Ù Ô Ø å ✃ Ù ❮ ✃ Ó ø ü Ô❰Ó ÑÏ Ô × ØÙ Ú ✃Ù Ó á Ù × ❰Ô❰ ❒ Û ✃ ù PCR ó ÷ ð C é ñ Ð Ø Ù ❰➱ ò × ØÙ ✃ ➱ Ï Û ✃Ô❰ ó ÷ ð C é ñ ü × Ø ➱ ❰Ó ò ❒ Ø Ù ØÐ ❒ Ø Ñ✃Ù ú ú ✁ C é ú × Ø➱❰ Ó ò × ✃Ù ❒ ØÐ ✃ Ù ö ✃Ù Ú ✃ Ù ✂ ñ ð C é ø ÐØÙ ❰ ➱ é × ✃ Ù ❒ ✃ Ô æ ✃ ù PCR ✂ ñ ð C é ú Ð Ø Ù ❰ ➱ý S ØÑ ✃ Ù ö Ï ➱ Ù ❮ ✃ Ú ØÙ M ÕÖ Õ a × ❰Ó Ñá Ù Ó Ø × ✃Ñ ✃Ð ❒ ✄ EM ù T E ✃ Ô❮ ý ☎✆✝ ✆✞ s ✟

E. coli