Implementasi Prosedur Kultur Sebar Mikrospora Antera Cabai (Capsicum annuum L.) Dengan Perlakuan Antibiotik Pada Kondisi Lokal Di Bogor
!
"#$%$%&'
(
)
*%%'
!
"
#
&' (
$ %
#
%
)
"
!
$
#
#
#
#3 "
#
$
#
#
!422
$ 0
". #
$
#
$
/ #
#
!
#
#
5
#
!
-
-
,
$
. %
$ 9 -
# +. #
#
/
# $
$
$
-
+
678
$
#
%
:
$
$ 9
-
-
)
,
&%&
* #
0
0
#
# + $ % $
0
0
$
$
0
# + $ $ #$ -$ - 0 0$
$ 0 + $
0
#
0
0
:
, #
,
$
0 0
- !12 #3 "
!422 #3 " :
-- 0 .
,
#
$
# $ $.
; - 00 $ .
0. !
. : $- .
+ $. - ":
5
.
0 :
+ :$ -$
: 678 0
. .
. :
#
,
$
. #
.
- - .
$ .
:
. 00 .
$ $.
;- 0
-+
. $
# 0
$
- #
$
-
-
#
$
0
-
" : $
&' (
$
+
+ 0
$
#3 "
.
$
# +
##
#
0
* #
#
. #
/
.
!12
#
$
/
0
&%&
$
, -
6
#
$
.
$#
#
<
/
$
#
!
"#$%$%&'
(
)
*%%'
4
'
=
!
"
#
#
%
%
=
= >641212?5
.
/ =
# +
+,
%
# +
!- . /
0 + 1
161@A1 5@
%
#
$ =
<
#
#
-2
##
=
3-++/ - ! /-+-1
% 161456777
$
-+-1
161??4676
A
#
/
#
) .
$ *
$
9%. +
22A
#
#
$
# +
#
#
+
$/ #
%
+
' .
:
$
$
+
$
22?+
$
.
+
. #
$
.
#
#
$
% +
#
-
-
+
.
+
+
$
$ ##
# &
. ) .
0
+
. :
$/ #
'
+
(
$
$
. #
#
- =
+
:
. #
$ . # . ' #
$
. #
*
+
+
+
$ + . .
% +
.+ BB+
+
+ $ #
1@+ / #
9
.
$+
> 67+
+ C.+ ' . +
+
<
+
# +
) +
# (
+
+
+
+
+
C +
) +
+
$
. #
#
#
.
$
0
+
.
. +
/
+
.
/ #
+
9
+
*: +
+
+
$
+
# = 0
+
$ / #
6@+
9
.+ )
+
+' +
+
+
+
D
+
)
#
# +
225
?
4 3
$
$
#
'
)
## 1
221
% #
#+ <
/
/
#
17@6
61 '
#
## % #
$
$
$
:
: )
$
&
#
$
:
#
$
#
$
##
&*&
#
$
%"
!
/
0
#
$
/ #
2213 22
$
$
224
:
. #
+
#
$
,
. $
$
0
2263 224
$ <
+
#
#
5
(
)
<
! +
,
%
)
%
1
&
1
1
$
#
#
)
0
,
0
<
#
$
)
%
%
<
#
6
4
A
?
?
@
(
)
1
#
$
#
$
#
$
6
#
E
F
#$
E>
$ 0
#
E
F
#$
E> ;.F
E>
;.F
$
4
'
A
A
;.F
6
6
0
-
$
#$
. # $
# ! #
9&
6
- :
22?"
#
E
F
;.F
4
- :
. #
E>
$
$ ## 12
#
! +
. #
$
$
A
+
)
$
/
#$
#
$ . #
-
#
#
#
-
$
/
224+
$ 174 A@@ $
.
755 AA $ !
22A"
. #
9
.
. %
,
$
$ /
9
#
#
,
# 9
#
.
$
224+
,
$ .
A ??
3$ +
#
$
. #
+
,
$
14 3$ +
7 1@ 3$ +
$
17 7?
3$ !$ =330
0
#"
,
#
- +
.
#
##
$ . #
$
. $
## + $ .
$
$
$ $
9
$
#
+ . #
.
,
.
. #
A
5
#
& $
+
. # 0
#$
#
#
$
9
#
$
$
. #
/
#
#9
#
$
!
"
:
#
/
. #
0
$
#
#
# $
/
$. #
*
9
#
/
: +
.
9
#
$
9
0
/ .
#
#
#
! :
1772"
#
- +.
+
.
!
G ;
17@1"
!% $ . $
177?"
- +
.
!
177 "
!
1777"
! 22? "
$
# 9
#
$
. #
,
+ .
# #
9
!
"
$
. #
.
#
.
/
+
+
$
#
9
+
9
+
$ ##
!
"
! 22? "
#
#
* #
# +
.
#$
.
0
#$
## #
$
. . #
$
#
+
.
$
$
. #
#
. #
9
#
-
##
#
$
$
!0
. #
#
!<
$
!<
/
-
/
0
"+
.
#
$
$
/
#$
.
## ##
%
177@"+
0
. +
. #
/ .
$
$
#9
#
9
0
0
. #
$
$
177@"
$
0 . #
0
+
.
!%
.
1775"+
!
222"+
!
22? "
#
!
"
# +
9
/
# $
##
+ 0
+
.
#
$
9
. #
$
5
6 - 0-!0!
6
. #
#
$
9
+
. # #
$
% -$ !% -$
H % -$ 17?7"
#
$
2 #3 +
#
0 12 #3
# 9 #
>
#3
#
+
#
0
>
+
.
#
9
$ C
AI
969
A I !
22? "
- :
? - +
$
6
#
$
-
: $+
6
#
.
/
#
0
#
#
-
$
!
#
. #
$
+
+ ! +
+
. # #
$
$
#
E> ;.F . #
!
!5
+
$ F
$
22? "
#
$
$ 9
$
E
#
#
#
6=1
-
.
!
# . # #
$
A28
$ - "
$. #
#
.
$
!
#
$
/ #
# . #
-
$
.
/ #
#
1775"
: $
$
$
#
-
#
#
.
/
-
22? "
#
:
!
- 9
/
#
. #
#3 K
2+ 122+ 22
0
2+ A+ 12+
#
2
#3
#
$
+
"
#
=
!2+2"K !12+2"K !12+122"K !12+ 22"K !12+422"
#3
- :
?
$
!
#
$
# ". #
?
#
. #
0
9
$
12 - :
9
/
+
#
+ .
!1" &
22A9
22?+ ! "
9'
22?+
!6"
#
9&
22?
+7 ! +
#
#
##
$
?
@
## +
. #
$
#
# + .
#
#
#
$
. #
#
+
9
#
.
+$
+
+
. #
.
#
/
. #
$
#
#
$
. #
.
+ .
#
$
#
$ .
! 0
J
# 17? "
$# H
# -
422
+
$ A
12
+6 5
1
-
$
#
$
+
0
+
)
528+
12
$
0
8
!,3,"+
#
#
:
2 6 8
+7
/ .
% &
9 2 2 2A8
6
#
!
#
-
9
#
#9
+
0
$
#
##
$
/
2 !0 +
E
;.F
. #
22
F
$
$
$ 0
0
0
E>
422 #3 !
#3
+
6
!6"
#
4
+ 5- 6
+
+ ! "
$+ .
0
#9
+
A
. +
0
+7 !
#
!1"
+
#
+
9
9
9
/
@28
$ .
628
. #
422 #3
! 2
$
0
#$
#3 / #
9
#3 "
$
E
E> ;.F !
2 #3
9
#
. #
1"
$
? A8+ .
+
#
6
#
$
;.F+
#3
9
0
422
#
!
122
422
9
9
@ +
E>
.
+ .
#
$ ##
12
A
"
F
+
$
#
#
#
E
$
+
#
! + +
-+ ! +
$
"
F
0
E
F
9
6
1
#
$
#$
9
E
F+
0
0
F
$
E> ;.F
#
E
$
9
L
! #3 "
2!
122
22
422
"
L # 9 #
-:
. #
#
/
$
#
$
6
> ;.
@28 !@312"
A28 !A312"
628 !6312"
628 !6312"
66 68 !431 "
@ 68 !131 "
5 58 !1316"
28 !2316"
# /
F
-
$
;.F
! #3 "
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
#
L
0
2!
A
12
2
! #3 "
"
L # 9 #
-:
. #
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
1 A8 !13@"
#
>
?1 A8
A6 @8
?1 A8
41 58
/
$
;.
!@316"
!5316"
!@316"
!A31 "
# /
! 0"
#9
E>
;.F
0M
$
#9
E>
0
"
$
$
E
$
!
-:
0
#
"
A28 !A312"
428 !4312"
428 !4312"
428 !4312"
28 !2312"
#
/
#
. #
( +-! +
$
!5 -7 +
0
-
E
F
E>
;.F
$
#
$
?1 A8
/
$ . 41 58
. # 9
0
2 #3
0
,
0 9
E
F
E> ;.F 9
/
.
#
9
#
+ #
E> ;.F
$
##
#
#
E
F )
$
0
+
E
F $ .
66 68
#
E> ;.F
$ ## @28 !
1" ) . #
/ #
/
0 9
+
#
E
F$ .
A8
#
#
E> ;.F
$
A
$
+.
?1 A8 !
"
0
12 #3
422 #3
/
E> ;.F
!
6"
2!
2
122
22
422
L # 9 #
/
$ -:
-:
. # $
# +
-:
$ ## A28
#
+ .
A8
9
/
$ .
1 A8
. #
9
0
2 #3
0 9
2 #3
E> ;.F / #
L
#
$
#
$
9
12
A
#
E>
. #
E
+
/
$
;.F
#
0
$
F
4
0
9
6 8+ .
E>
;.F
,
0
12
#
#
#
0
#
#3
422
!>
. #
-
12
#
.
1
$
0
1 "
?18
#
/
.
$
. !>
#3
9
5@
9
+
1 9 "
/
#
"
$
#
/
9
)
"
!>
$
$
. !1 1
0
$
)
177
. !678
# +
#
+
#
9
"
0
#
$
+
$
+
#
# 0 !0
#
$
122+ 22+
. #
,
,
+
+
#
#3
+
#
1 9 "
9
4
4
'
E>
$
;.F
. # $
# ! #
A
$
- :
22?"
9&
E
#
F
$
12
#
#
#
#
#
#
L
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
;.LL
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
>
L
LL
2!
2
122
22
422
"
21
2
2
21
2
!291"
!292"
!292"
!291"
!292"
11
24
26
21
21
!294"
!291"
!291"
!291"
!291"
16
24
26
26
21
!29A"
!291"
!291"
!291"
!291"
2!
2
122
22
422
"
5?
15
! 9A"
!294"
!295"
!29?"
!295"
42
2
66
!691A"
!194"
!19?"
!29?"
!29?"
11 ?
65
AA
4
45
!A9 2"
! 9A"
!2916"
!2911"
!1911"
5
?
2
5
. #
. #
+
2
-
02 M
2
A
. #
5
>
1
##
N1
-
=! "
#
#. #
$
K ! "
0
. #
K! "
#
. #
$
# +
# K ! "
#
$
0
$
+ N1 A
+ N1 -
#
$
=
#
+ N2 6
+
$
&
!6"
0 #
. #
#
/
22A9
#
9&
#
. # #
+ $ ##
$
#
+ .
22?+ ! "
22?
9
#
. #
$ ##
+
- # $
#
$ .
.
.
/
#
.
$ . #
9
$
. #
9
*
$
:
#
$
#
#
+
9
#
. #
!1"
9'
$
$
$ -
. #
J
+6 5
#
22?
##
##
#
+
/
#
#
0
. #
#
$
$
9
9
9
A
$
$
#
#
+.
#
$
. #
14
9
#
#
$
:
9
#
$
1775"
+
#
/
. #
+.
. #
9
#
# 0+
.
$
.
14
.
A
.
. #
$
12
A
$
$
/
A"
!
-
#
. #
$
. #
$
>
14 L
12 LL
A
L
LL
#
9&
2
2A
9' 2? !
2? !
;.
21
AA
"
# "
)
0
#3 "
#
!422
!12
#3 "
9
-
#
*
0
0
$
#$
2 #3 +
#
0
$ .
12 #3 +
! 22? "
2 #3
0
9
9
9
#
#
$
-
#$
$
#
! 22
#
$
##
0
122
#3
.
0
#
422
+
422
#
#3 "
##
$
$ ##
/
#
#
#$
0! $
0
#
#
. #
$
##
$ 0 0
/
#
. #
#
$
/ #
9
$
. # #
+ #
E> ;.F / $
$
##
E
F )
#
$:
E> ;.F
#
. #
$
0
#
# E
F
!
1
"
+
#
0
12 #3
422 #3 +
E> ;.F / #
#
/
$
# !A
12 "
/ $ $
)
$
/
$
# #
0
9
$
0
.
9
+
#
/
#
#
0
/
:
!
224"
' $
!17@ "+
$
#
!
"
. :
## # / :
# $
#
9
!
"
/
: +
$ ##
#$
# #
0
.
-
9
$
,
$
122+ 22+
422 #3
0 9
12
#3
#
# 0
0
0
$
#
9
+
#
#
.
,
+
#
E> ;.F !
4" )
/
#
! 22? "
0
9
$
177?"+
9
.
#$
0 !%
#
#
- :
$
0
#
0
. #
0
$ 0
. #
$
$ 0
0
-
$ .
/
+
$
#3
# . #
/
$ $ 4
$
:
/ $$
22? "
$ .
$ 7
$
#
14 " )
# +
#
!
$
#
##
#
A
. !
$:
$
.
!
#
$
12
A" )
$
. #
$
#
#
. #
#
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0
5
!
"#$%$%&'
(
)
*%%'
2
ABSTRAK
LESTARI BUDI UTAMI. Implementasi Prosedur Kultur Sebar Mikrospora Antera Cabai
(Capsicum annuum L.) dengan Perlakuan Antibiotik pada Kondisi Lokal di Bogor. Dibimbing
oleh ENCE DARMO JAYA SUPENA dan SUHARSONO.
Prosedur kultur sebar mikrospora (KSM) berhasil dikembangkan di Wageningen, Belanda
untuk mendapatkan tanaman haploid ganda dari kultivar cabai Indonesia. Implemetasi prosedur ini
pada kondisi lokal di Bogor mengalami hambatan utama berupa kontaminasi yang disebabkan oleh
mikrob. Penelitian ini bertujuan mempelajari pengaruh penggunaan antibiotik timentin, rifampisin,
dan kombinasi keduanya untuk mengatasi masalah kontaminasi bakteri pada kultur. Kombinasi
rifampisin (10 mg/l) dan timentin (400 mg/l) dapat mengatasi kontaminasi bakteri dengan
meminimalkan pengaruh fitotoksik antibiotik. Embrio lengkap (embrio dengan kotiledon,
hipokotil dan radikula) yang dihasilkan yaitu 2.7 embrio per kuncup bunga, yang merupakan 39%
dari total embrio. Embrio lengkap mampu berkecambah dan berkembang menjadi tanaman
normal. Kemampuan dan kapasitas embriogenesis pada kultur ini selain dipengaruhi oleh tingkat
fitotoksik antibiotik juga dipengaruhi oleh kisaran suhu praperlakuan dan inkubasi kultur.
ABSTRACT
LESTARI BUDI UTAMI. Implementation of Anthers Shed-Microspore Culture Protocol of
Pepper (Capsicum annuum L.) with Antibiotics Treatment under Local Conditions of Bogor.
Supervised by ENCE DARMO JAYA SUPENA and SUHARSONO.
A shed-microspore culture procedure was developed in Wageningen, the Netherlands for
producing doubled haploid plants of Indonesian hot pepper. In order to implement this procedure
under the local conditions of Bogor, the high chance of microbial contamination of culture is the
main problem. Therefore, the application of single and combination treatment of antibiotics
rifampicin and timentin were investigated to prevent bacterial contamination in culture. The
combined treatment of rifampicin (10 mg/l) and timentin (400 mg/l) was successfully preventing
the bacterial contamination and eliminating the phytotoxic effect in culture. The yield of complete
embryo (embryo with cotyledons, hypocotile and radicle) was 2.7 embryos per flower bud, which
was 39% from total embryo yield. Complete embryos were able to germinate and develop into
normal plants. The embryogenesis capability and capacity in this system was not only affected by
the phytotoxic of antibiotic, but also by the range of temperature in the pretreatment and culture
incubation periods.
+
)
$
/
#$
#
$ . #
-
#
#
#
-
$
/
224+
$ 174 A@@ $
.
755 AA $ !
22A"
. #
9
.
. %
,
$
$ /
9
#
#
,
# 9
#
.
$
224+
,
$ .
A ??
3$ +
#
$
. #
+
,
$
14 3$ +
7 1@ 3$ +
$
17 7?
3$ !$ =330
0
#"
,
#
- +
.
#
##
$ . #
$
. $
## + $ .
$
$
$ $
9
$
#
+ . #
.
,
.
. #
A
5
#
& $
+
. # 0
#$
#
#
$
9
#
$
$
. #
/
#
#9
#
$
!
"
:
#
/
. #
0
$
#
#
# $
/
$. #
*
9
#
/
: +
.
9
#
$
9
0
/ .
#
#
#
! :
1772"
#
- +.
+
.
!
G ;
17@1"
!% $ . $
177?"
- +
.
!
177 "
!
1777"
! 22? "
$
# 9
#
$
. #
,
+ .
# #
9
!
"
$
. #
.
#
.
/
+
+
$
#
9
+
9
+
$ ##
!
"
! 22? "
#
#
* #
# +
.
#$
.
0
#$
## #
$
. . #
$
#
+
.
$
$
. #
#
. #
9
#
-
##
#
$
$
!0
. #
#
!<
$
!<
/
-
/
0
"+
.
#
$
$
/
#$
.
## ##
%
177@"+
0
. +
. #
/ .
$
$
#9
#
9
0
0
. #
$
$
177@"
$
0 . #
0
+
.
!%
.
1775"+
!
222"+
!
22? "
#
!
"
# +
9
/
# $
##
+ 0
+
.
#
$
9
. #
$
5
6 - 0-!0!
6
. #
#
$
9
+
. # #
$
% -$ !% -$
H % -$ 17?7"
#
$
2 #3 +
#
0 12 #3
# 9 #
>
#3
#
+
#
0
>
+
.
#
9
$ C
AI
969
A I !
22? "
- :
? - +
$
6
+
)
$
/
#$
#
$ . #
-
#
#
#
-
$
/
224+
$ 174 A@@ $
.
755 AA $ !
22A"
. #
9
.
. %
,
$
$ /
9
#
#
,
# 9
#
.
$
224+
,
$ .
A ??
3$ +
#
$
. #
+
,
$
14 3$ +
7 1@ 3$ +
$
17 7?
3$ !$ =330
0
#"
,
#
- +
.
#
##
$ . #
$
. $
## + $ .
$
$
$ $
9
$
#
+ . #
.
,
.
. #
A
5
#
& $
+
. # 0
#$
#
#
$
9
#
$
$
. #
/
#
#9
#
$
!
"
:
#
/
. #
0
$
#
#
# $
/
$. #
*
9
#
/
: +
.
9
#
$
9
0
/ .
#
#
#
! :
1772"
#
- +.
+
.
!
G ;
17@1"
!% $ . $
177?"
- +
.
!
177 "
!
1777"
! 22? "
$
# 9
#
$
. #
,
+ .
# #
9
!
"
$
. #
.
#
.
/
+
+
$
#
9
+
9
+
$ ##
!
"
! 22? "
#
#
* #
# +
.
#$
.
0
#$
## #
$
. . #
$
#
+
.
$
$
. #
#
. #
9
#
-
##
#
$
$
!0
. #
#
!<
$
!<
/
-
/
0
"+
.
#
$
$
/
#$
.
## ##
%
177@"+
0
. +
. #
/ .
$
$
#9
#
9
0
0
. #
$
$
177@"
$
0 . #
0
+
.
!%
.
1775"+
!
222"+
!
22? "
#
!
"
# +
9
/
# $
##
+ 0
+
.
#
$
9
. #
$
5
6 - 0-!0!
6
. #
#
$
9
+
. # #
$
% -$ !% -$
H % -$ 17?7"
#
$
2 #3 +
#
0 12 #3
# 9 #
>
#3
#
+
#
0
>
+
.
#
9
$ C
AI
969
A I !
22? "
- :
? - +
$
6
#
$
-
: $+
6
#
.
/
#
0
#
#
-
$
!
#
. #
$
+
+ ! +
+
. # #
$
$
#
E> ;.F . #
!
!5
+
$ F
$
22? "
#
$
$ 9
$
E
#
#
#
6=1
-
.
!
# . # #
$
A28
$ - "
$. #
#
.
$
!
#
$
/ #
# . #
-
$
.
/ #
#
1775"
: $
$
$
#
-
#
#
.
/
-
22? "
#
:
!
- 9
/
#
. #
#3 K
2+ 122+ 22
0
2+ A+ 12+
#
2
#3
#
$
+
"
#
=
!2+2"K !12+2"K !12+122"K !12+ 22"K !12+422"
#3
- :
?
$
!
#
$
# ". #
?
#
. #
0
9
$
12 - :
9
/
+
#
+ .
!1" &
22A9
22?+ ! "
9'
22?+
!6"
#
9&
22?
+7 ! +
#
#
##
$
?
@
## +
. #
$
#
# + .
#
#
#
$
. #
#
+
9
#
.
+$
+
+
. #
.
#
/
. #
$
#
#
$
. #
.
+ .
#
$
#
$ .
! 0
J
# 17? "
$# H
# -
422
+
$ A
12
+6 5
1
-
$
#
$
+
0
+
)
528+
12
$
0
8
!,3,"+
#
#
:
2 6 8
+7
/ .
% &
9 2 2 2A8
6
#
!
#
-
9
#
#9
+
0
$
#
##
$
/
2 !0 +
E
;.F
. #
22
F
$
$
$ 0
0
0
E>
422 #3 !
#3
+
6
!6"
#
4
+ 5- 6
+
+ ! "
$+ .
0
#9
+
A
. +
0
+7 !
#
!1"
+
#
+
9
9
9
/
@28
$ .
628
. #
422 #3
! 2
$
0
#$
#3 / #
9
#3 "
$
E
E> ;.F !
2 #3
9
#
. #
1"
$
? A8+ .
+
#
6
#
$
;.F+
#3
9
0
422
#
!
122
422
9
9
@ +
E>
.
+ .
#
$ ##
12
A
"
F
+
$
#
#
#
E
$
+
#
! + +
-+ ! +
$
"
F
0
E
F
9
#
$
-
: $+
6
#
.
/
#
0
#
#
-
$
!
#
. #
$
+
+ ! +
+
. # #
$
$
#
E> ;.F . #
!
!5
+
$ F
$
22? "
#
$
$ 9
$
E
#
#
#
6=1
-
.
!
# . # #
$
A28
$ - "
$. #
#
.
$
!
#
$
/ #
# . #
-
$
.
/ #
#
1775"
: $
$
$
#
-
#
#
.
/
-
22? "
#
:
!
- 9
/
#
. #
#3 K
2+ 122+ 22
0
2+ A+ 12+
#
2
#3
#
$
+
"
#
=
!2+2"K !12+2"K !12+122"K !12+ 22"K !12+422"
#3
- :
?
$
!
#
$
# ". #
?
#
. #
0
9
$
12 - :
9
/
+
#
+ .
!1" &
22A9
22?+ ! "
9'
22?+
!6"
#
9&
22?
+7 ! +
#
#
##
$
?
@
## +
. #
$
#
# + .
#
#
#
$
. #
#
+
9
#
.
+$
+
+
. #
.
#
/
. #
$
#
#
$
. #
.
+ .
#
$
#
$ .
! 0
J
# 17? "
$# H
# -
422
+
$ A
12
+6 5
1
-
$
#
$
+
0
+
)
528+
12
$
0
8
!,3,"+
#
#
:
2 6 8
+7
/ .
% &
9 2 2 2A8
6
#
!
#
-
9
#
#9
+
0
$
#
##
$
/
2 !0 +
E
;.F
. #
22
F
$
$
$ 0
0
0
E>
422 #3 !
#3
+
6
!6"
#
4
+ 5- 6
+
+ ! "
$+ .
0
#9
+
A
. +
0
+7 !
#
!1"
+
#
+
9
9
9
/
@28
$ .
628
. #
422 #3
! 2
$
0
#$
#3 / #
9
#3 "
$
E
E> ;.F !
2 #3
9
#
. #
1"
$
? A8+ .
+
#
6
#
$
;.F+
#3
9
0
422
#
!
122
422
9
9
@ +
E>
.
+ .
#
$ ##
12
A
"
F
+
$
#
#
#
E
$
+
#
! + +
-+ ! +
$
"
F
0
E
F
9
6
1
#
$
#$
9
E
F+
0
0
F
$
E> ;.F
#
E
$
9
L
! #3 "
2!
122
22
422
"
L # 9 #
-:
. #
#
/
$
#
$
6
> ;.
@28 !@312"
A28 !A312"
628 !6312"
628 !6312"
66 68 !431 "
@ 68 !131 "
5 58 !1316"
28 !2316"
# /
F
-
$
;.F
! #3 "
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
#
L
0
2!
A
12
2
! #3 "
"
L # 9 #
-:
. #
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
1 A8 !13@"
#
>
?1 A8
A6 @8
?1 A8
41 58
/
$
;.
!@316"
!5316"
!@316"
!A31 "
# /
! 0"
#9
E>
;.F
0M
$
#9
E>
0
"
$
$
E
$
!
-:
0
#
"
A28 !A312"
428 !4312"
428 !4312"
428 !4312"
28 !2312"
#
/
#
. #
( +-! +
$
!5 -7 +
0
-
E
F
E>
;.F
$
#
$
?1 A8
/
$ . 41 58
. # 9
0
2 #3
0
,
0 9
E
F
E> ;.F 9
/
.
#
9
#
+ #
E> ;.F
$
##
#
#
E
F )
$
0
+
E
F $ .
66 68
#
E> ;.F
$ ## @28 !
1" ) . #
/ #
/
0 9
+
#
E
F$ .
A8
#
#
E> ;.F
$
A
$
+.
?1 A8 !
"
0
12 #3
422 #3
/
E> ;.F
!
6"
2!
2
122
22
422
L # 9 #
/
$ -:
-:
. # $
# +
-:
$ ## A28
#
+ .
A8
9
/
$ .
1 A8
. #
9
0
2 #3
0 9
2 #3
E> ;.F / #
L
#
$
#
$
9
12
A
#
E>
. #
E
+
/
$
;.F
#
0
$
F
4
0
9
6 8+ .
E>
;.F
,
0
12
#
#
#
0
#
#3
422
!>
. #
-
12
#
.
1
$
0
1 "
?18
#
/
.
$
. !>
#3
9
5@
9
+
1 9 "
/
#
"
$
#
/
9
)
"
!>
$
$
. !1 1
0
$
)
177
. !678
# +
#
+
#
9
"
0
#
$
+
$
+
#
# 0 !0
#
$
122+ 22+
. #
,
,
+
+
#
#3
+
#
1 9 "
9
4
4
'
E>
$
;.F
. # $
# ! #
A
$
- :
22?"
9&
E
#
F
$
12
#
#
#
#
#
#
L
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
;.LL
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
>
L
LL
2!
2
122
22
422
"
21
2
2
21
2
!291"
!292"
!292"
!291"
!292"
11
24
26
21
21
!294"
!291"
!291"
!291"
!291"
16
24
26
26
21
!29A"
!291"
!291"
!291"
!291"
2!
2
122
22
422
"
5?
15
! 9A"
!294"
!295"
!29?"
!295"
42
2
66
!691A"
!194"
!19?"
!29?"
!29?"
11 ?
65
AA
4
45
!A9 2"
! 9A"
!2916"
!2911"
!1911"
5
?
2
5
. #
. #
+
2
-
02 M
2
A
. #
5
>
1
##
N1
-
=! "
#
#. #
$
K ! "
0
. #
K! "
#
. #
$
# +
# K ! "
#
$
0
$
+ N1 A
+ N1 -
#
$
=
#
+ N2 6
+
$
&
!6"
0 #
. #
#
/
22A9
#
9&
#
. # #
+ $ ##
$
#
+ .
22?+ ! "
22?
9
#
. #
$ ##
+
- # $
#
$ .
.
.
/
#
.
$ . #
9
$
. #
9
*
$
:
#
$
#
#
+
9
#
. #
!1"
9'
$
$
$ -
. #
J
+6 5
#
22?
##
##
#
+
/
#
#
0
. #
#
$
$
9
9
9
A
$
$
#
#
+.
#
$
. #
14
9
#
#
$
:
9
#
$
1775"
+
#
/
. #
+.
. #
9
#
# 0+
.
$
.
14
.
A
.
. #
$
12
A
$
$
/
A"
!
-
#
. #
$
. #
$
>
14 L
12 LL
A
L
LL
#
9&
2
2A
9' 2? !
2? !
;.
21
AA
"
# "
)
0
#3 "
#
!422
!12
#3 "
9
-
#
*
0
0
$
#$
2 #3 +
#
0
$ .
12 #3 +
! 22? "
2 #3
0
9
9
9
#
#
$
-
#$
$
#
! 22
#
$
##
0
122
#3
.
0
#
422
+
422
#
#3 "
##
$
$ ##
/
#
#
#$
0! $
0
#
#
. #
$
##
$ 0 0
/
#
. #
#
$
/ #
9
$
. # #
+ #
E> ;.F / $
$
##
E
F )
#
$:
E> ;.F
#
. #
$
0
#
# E
F
!
1
"
+
#
0
12 #3
422 #3 +
E> ;.F / #
#
/
$
# !A
12 "
/ $ $
)
$
/
$
# #
0
9
$
0
.
9
+
#
/
#
#
0
/
:
!
224"
' $
!17@ "+
$
#
!
"
. :
## # / :
# $
#
9
!
"
/
: +
$ ##
#$
# #
0
.
-
9
$
,
$
122+ 22+
422 #3
0 9
12
#3
#
# 0
0
0
$
#
9
+
#
#
.
,
+
#
E> ;.F !
4" )
/
#
! 22? "
0
9
$
177?"+
9
.
#$
0 !%
#
#
- :
$
0
#
0
. #
0
$ 0
. #
$
$ 0
0
-
$ .
/
+
$
#3
# . #
/
$ $ 4
$
:
/ $$
22? "
$ .
$ 7
$
#
14 " )
# +
#
!
$
#
##
#
A
. !
$:
$
.
!
#
$
12
A" )
$
. #
$
#
#
. #
#
A
$
$
#
#
+.
#
$
. #
14
9
#
#
$
:
9
#
$
1775"
+
#
/
. #
+.
. #
9
#
# 0+
.
$
.
14
.
A
.
. #
$
12
A
$
$
/
A"
!
-
#
. #
$
. #
$
>
14 L
12 LL
A
L
LL
#
9&
2
2A
9' 2? !
2? !
;.
21
AA
"
# "
)
0
#3 "
#
!422
!12
#3 "
9
-
#
*
0
0
$
#$
2 #3 +
#
0
$ .
12 #3 +
! 22? "
2 #3
0
9
9
9
#
#
$
-
#$
$
#
! 22
#
$
##
0
122
#3
.
0
#
422
+
422
#
#3 "
##
$
$ ##
/
#
#
#$
0! $
0
#
#
. #
$
##
$ 0 0
/
#
. #
#
$
/ #
9
$
. # #
+ #
E> ;.F / $
$
##
E
F )
#
$:
E> ;.F
#
. #
$
0
#
# E
F
!
1
"
+
#
0
12 #3
422 #3 +
E> ;.F / #
#
/
$
# !A
12 "
/ $ $
)
$
/
$
# #
0
9
$
0
.
9
+
#
/
#
#
0
/
:
!
224"
' $
!17@ "+
$
#
!
"
. :
## # / :
# $
#
9
!
"
/
: +
$ ##
#$
# #
0
.
-
9
$
,
$
122+ 22+
422 #3
0 9
12
#3
#
# 0
0
0
$
#
9
+
#
#
.
,
+
#
E> ;.F !
4" )
/
#
! 22? "
0
9
$
177?"+
9
.
#$
0 !%
#
#
- :
$
0
#
0
. #
0
$ 0
. #
$
$ 0
0
-
$ .
/
+
$
#3
# . #
/
$ $ 4
$
:
/ $$
22? "
$ .
$ 7
$
#
14 " )
# +
#
!
$
#
##
#
A
. !
$:
$
.
!
#
$
12
A" )
$
. #
$
#
#
. #
#
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0
"#$%$%&'
(
)
*%%'
!
"
#
&' (
$ %
#
%
)
"
!
$
#
#
#
#3 "
#
$
#
#
!422
$ 0
". #
$
#
$
/ #
#
!
#
#
5
#
!
-
-
,
$
. %
$ 9 -
# +. #
#
/
# $
$
$
-
+
678
$
#
%
:
$
$ 9
-
-
)
,
&%&
* #
0
0
#
# + $ % $
0
0
$
$
0
# + $ $ #$ -$ - 0 0$
$ 0 + $
0
#
0
0
:
, #
,
$
0 0
- !12 #3 "
!422 #3 " :
-- 0 .
,
#
$
# $ $.
; - 00 $ .
0. !
. : $- .
+ $. - ":
5
.
0 :
+ :$ -$
: 678 0
. .
. :
#
,
$
. #
.
- - .
$ .
:
. 00 .
$ $.
;- 0
-+
. $
# 0
$
- #
$
-
-
#
$
0
-
" : $
&' (
$
+
+ 0
$
#3 "
.
$
# +
##
#
0
* #
#
. #
/
.
!12
#
$
/
0
&%&
$
, -
6
#
$
.
$#
#
<
/
$
#
!
"#$%$%&'
(
)
*%%'
4
'
=
!
"
#
#
%
%
=
= >641212?5
.
/ =
# +
+,
%
# +
!- . /
0 + 1
161@A1 5@
%
#
$ =
<
#
#
-2
##
=
3-++/ - ! /-+-1
% 161456777
$
-+-1
161??4676
A
#
/
#
) .
$ *
$
9%. +
22A
#
#
$
# +
#
#
+
$/ #
%
+
' .
:
$
$
+
$
22?+
$
.
+
. #
$
.
#
#
$
% +
#
-
-
+
.
+
+
$
$ ##
# &
. ) .
0
+
. :
$/ #
'
+
(
$
$
. #
#
- =
+
:
. #
$ . # . ' #
$
. #
*
+
+
+
$ + . .
% +
.+ BB+
+
+ $ #
1@+ / #
9
.
$+
> 67+
+ C.+ ' . +
+
<
+
# +
) +
# (
+
+
+
+
+
C +
) +
+
$
. #
#
#
.
$
0
+
.
. +
/
+
.
/ #
+
9
+
*: +
+
+
$
+
# = 0
+
$ / #
6@+
9
.+ )
+
+' +
+
+
+
D
+
)
#
# +
225
?
4 3
$
$
#
'
)
## 1
221
% #
#+ <
/
/
#
17@6
61 '
#
## % #
$
$
$
:
: )
$
&
#
$
:
#
$
#
$
##
&*&
#
$
%"
!
/
0
#
$
/ #
2213 22
$
$
224
:
. #
+
#
$
,
. $
$
0
2263 224
$ <
+
#
#
5
(
)
<
! +
,
%
)
%
1
&
1
1
$
#
#
)
0
,
0
<
#
$
)
%
%
<
#
6
4
A
?
?
@
(
)
1
#
$
#
$
#
$
6
#
E
F
#$
E>
$ 0
#
E
F
#$
E> ;.F
E>
;.F
$
4
'
A
A
;.F
6
6
0
-
$
#$
. # $
# ! #
9&
6
- :
22?"
#
E
F
;.F
4
- :
. #
E>
$
$ ## 12
#
! +
. #
$
$
A
+
)
$
/
#$
#
$ . #
-
#
#
#
-
$
/
224+
$ 174 A@@ $
.
755 AA $ !
22A"
. #
9
.
. %
,
$
$ /
9
#
#
,
# 9
#
.
$
224+
,
$ .
A ??
3$ +
#
$
. #
+
,
$
14 3$ +
7 1@ 3$ +
$
17 7?
3$ !$ =330
0
#"
,
#
- +
.
#
##
$ . #
$
. $
## + $ .
$
$
$ $
9
$
#
+ . #
.
,
.
. #
A
5
#
& $
+
. # 0
#$
#
#
$
9
#
$
$
. #
/
#
#9
#
$
!
"
:
#
/
. #
0
$
#
#
# $
/
$. #
*
9
#
/
: +
.
9
#
$
9
0
/ .
#
#
#
! :
1772"
#
- +.
+
.
!
G ;
17@1"
!% $ . $
177?"
- +
.
!
177 "
!
1777"
! 22? "
$
# 9
#
$
. #
,
+ .
# #
9
!
"
$
. #
.
#
.
/
+
+
$
#
9
+
9
+
$ ##
!
"
! 22? "
#
#
* #
# +
.
#$
.
0
#$
## #
$
. . #
$
#
+
.
$
$
. #
#
. #
9
#
-
##
#
$
$
!0
. #
#
!<
$
!<
/
-
/
0
"+
.
#
$
$
/
#$
.
## ##
%
177@"+
0
. +
. #
/ .
$
$
#9
#
9
0
0
. #
$
$
177@"
$
0 . #
0
+
.
!%
.
1775"+
!
222"+
!
22? "
#
!
"
# +
9
/
# $
##
+ 0
+
.
#
$
9
. #
$
5
6 - 0-!0!
6
. #
#
$
9
+
. # #
$
% -$ !% -$
H % -$ 17?7"
#
$
2 #3 +
#
0 12 #3
# 9 #
>
#3
#
+
#
0
>
+
.
#
9
$ C
AI
969
A I !
22? "
- :
? - +
$
6
#
$
-
: $+
6
#
.
/
#
0
#
#
-
$
!
#
. #
$
+
+ ! +
+
. # #
$
$
#
E> ;.F . #
!
!5
+
$ F
$
22? "
#
$
$ 9
$
E
#
#
#
6=1
-
.
!
# . # #
$
A28
$ - "
$. #
#
.
$
!
#
$
/ #
# . #
-
$
.
/ #
#
1775"
: $
$
$
#
-
#
#
.
/
-
22? "
#
:
!
- 9
/
#
. #
#3 K
2+ 122+ 22
0
2+ A+ 12+
#
2
#3
#
$
+
"
#
=
!2+2"K !12+2"K !12+122"K !12+ 22"K !12+422"
#3
- :
?
$
!
#
$
# ". #
?
#
. #
0
9
$
12 - :
9
/
+
#
+ .
!1" &
22A9
22?+ ! "
9'
22?+
!6"
#
9&
22?
+7 ! +
#
#
##
$
?
@
## +
. #
$
#
# + .
#
#
#
$
. #
#
+
9
#
.
+$
+
+
. #
.
#
/
. #
$
#
#
$
. #
.
+ .
#
$
#
$ .
! 0
J
# 17? "
$# H
# -
422
+
$ A
12
+6 5
1
-
$
#
$
+
0
+
)
528+
12
$
0
8
!,3,"+
#
#
:
2 6 8
+7
/ .
% &
9 2 2 2A8
6
#
!
#
-
9
#
#9
+
0
$
#
##
$
/
2 !0 +
E
;.F
. #
22
F
$
$
$ 0
0
0
E>
422 #3 !
#3
+
6
!6"
#
4
+ 5- 6
+
+ ! "
$+ .
0
#9
+
A
. +
0
+7 !
#
!1"
+
#
+
9
9
9
/
@28
$ .
628
. #
422 #3
! 2
$
0
#$
#3 / #
9
#3 "
$
E
E> ;.F !
2 #3
9
#
. #
1"
$
? A8+ .
+
#
6
#
$
;.F+
#3
9
0
422
#
!
122
422
9
9
@ +
E>
.
+ .
#
$ ##
12
A
"
F
+
$
#
#
#
E
$
+
#
! + +
-+ ! +
$
"
F
0
E
F
9
6
1
#
$
#$
9
E
F+
0
0
F
$
E> ;.F
#
E
$
9
L
! #3 "
2!
122
22
422
"
L # 9 #
-:
. #
#
/
$
#
$
6
> ;.
@28 !@312"
A28 !A312"
628 !6312"
628 !6312"
66 68 !431 "
@ 68 !131 "
5 58 !1316"
28 !2316"
# /
F
-
$
;.F
! #3 "
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
#
L
0
2!
A
12
2
! #3 "
"
L # 9 #
-:
. #
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
1 A8 !13@"
#
>
?1 A8
A6 @8
?1 A8
41 58
/
$
;.
!@316"
!5316"
!@316"
!A31 "
# /
! 0"
#9
E>
;.F
0M
$
#9
E>
0
"
$
$
E
$
!
-:
0
#
"
A28 !A312"
428 !4312"
428 !4312"
428 !4312"
28 !2312"
#
/
#
. #
( +-! +
$
!5 -7 +
0
-
E
F
E>
;.F
$
#
$
?1 A8
/
$ . 41 58
. # 9
0
2 #3
0
,
0 9
E
F
E> ;.F 9
/
.
#
9
#
+ #
E> ;.F
$
##
#
#
E
F )
$
0
+
E
F $ .
66 68
#
E> ;.F
$ ## @28 !
1" ) . #
/ #
/
0 9
+
#
E
F$ .
A8
#
#
E> ;.F
$
A
$
+.
?1 A8 !
"
0
12 #3
422 #3
/
E> ;.F
!
6"
2!
2
122
22
422
L # 9 #
/
$ -:
-:
. # $
# +
-:
$ ## A28
#
+ .
A8
9
/
$ .
1 A8
. #
9
0
2 #3
0 9
2 #3
E> ;.F / #
L
#
$
#
$
9
12
A
#
E>
. #
E
+
/
$
;.F
#
0
$
F
4
0
9
6 8+ .
E>
;.F
,
0
12
#
#
#
0
#
#3
422
!>
. #
-
12
#
.
1
$
0
1 "
?18
#
/
.
$
. !>
#3
9
5@
9
+
1 9 "
/
#
"
$
#
/
9
)
"
!>
$
$
. !1 1
0
$
)
177
. !678
# +
#
+
#
9
"
0
#
$
+
$
+
#
# 0 !0
#
$
122+ 22+
. #
,
,
+
+
#
#3
+
#
1 9 "
9
4
4
'
E>
$
;.F
. # $
# ! #
A
$
- :
22?"
9&
E
#
F
$
12
#
#
#
#
#
#
L
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
;.LL
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
>
L
LL
2!
2
122
22
422
"
21
2
2
21
2
!291"
!292"
!292"
!291"
!292"
11
24
26
21
21
!294"
!291"
!291"
!291"
!291"
16
24
26
26
21
!29A"
!291"
!291"
!291"
!291"
2!
2
122
22
422
"
5?
15
! 9A"
!294"
!295"
!29?"
!295"
42
2
66
!691A"
!194"
!19?"
!29?"
!29?"
11 ?
65
AA
4
45
!A9 2"
! 9A"
!2916"
!2911"
!1911"
5
?
2
5
. #
. #
+
2
-
02 M
2
A
. #
5
>
1
##
N1
-
=! "
#
#. #
$
K ! "
0
. #
K! "
#
. #
$
# +
# K ! "
#
$
0
$
+ N1 A
+ N1 -
#
$
=
#
+ N2 6
+
$
&
!6"
0 #
. #
#
/
22A9
#
9&
#
. # #
+ $ ##
$
#
+ .
22?+ ! "
22?
9
#
. #
$ ##
+
- # $
#
$ .
.
.
/
#
.
$ . #
9
$
. #
9
*
$
:
#
$
#
#
+
9
#
. #
!1"
9'
$
$
$ -
. #
J
+6 5
#
22?
##
##
#
+
/
#
#
0
. #
#
$
$
9
9
9
A
$
$
#
#
+.
#
$
. #
14
9
#
#
$
:
9
#
$
1775"
+
#
/
. #
+.
. #
9
#
# 0+
.
$
.
14
.
A
.
. #
$
12
A
$
$
/
A"
!
-
#
. #
$
. #
$
>
14 L
12 LL
A
L
LL
#
9&
2
2A
9' 2? !
2? !
;.
21
AA
"
# "
)
0
#3 "
#
!422
!12
#3 "
9
-
#
*
0
0
$
#$
2 #3 +
#
0
$ .
12 #3 +
! 22? "
2 #3
0
9
9
9
#
#
$
-
#$
$
#
! 22
#
$
##
0
122
#3
.
0
#
422
+
422
#
#3 "
##
$
$ ##
/
#
#
#$
0! $
0
#
#
. #
$
##
$ 0 0
/
#
. #
#
$
/ #
9
$
. # #
+ #
E> ;.F / $
$
##
E
F )
#
$:
E> ;.F
#
. #
$
0
#
# E
F
!
1
"
+
#
0
12 #3
422 #3 +
E> ;.F / #
#
/
$
# !A
12 "
/ $ $
)
$
/
$
# #
0
9
$
0
.
9
+
#
/
#
#
0
/
:
!
224"
' $
!17@ "+
$
#
!
"
. :
## # / :
# $
#
9
!
"
/
: +
$ ##
#$
# #
0
.
-
9
$
,
$
122+ 22+
422 #3
0 9
12
#3
#
# 0
0
0
$
#
9
+
#
#
.
,
+
#
E> ;.F !
4" )
/
#
! 22? "
0
9
$
177?"+
9
.
#$
0 !%
#
#
- :
$
0
#
0
. #
0
$ 0
. #
$
$ 0
0
-
$ .
/
+
$
#3
# . #
/
$ $ 4
$
:
/ $$
22? "
$ .
$ 7
$
#
14 " )
# +
#
!
$
#
##
#
A
. !
$:
$
.
!
#
$
12
A" )
$
. #
$
#
#
. #
#
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0
5
!
"#$%$%&'
(
)
*%%'
2
ABSTRAK
LESTARI BUDI UTAMI. Implementasi Prosedur Kultur Sebar Mikrospora Antera Cabai
(Capsicum annuum L.) dengan Perlakuan Antibiotik pada Kondisi Lokal di Bogor. Dibimbing
oleh ENCE DARMO JAYA SUPENA dan SUHARSONO.
Prosedur kultur sebar mikrospora (KSM) berhasil dikembangkan di Wageningen, Belanda
untuk mendapatkan tanaman haploid ganda dari kultivar cabai Indonesia. Implemetasi prosedur ini
pada kondisi lokal di Bogor mengalami hambatan utama berupa kontaminasi yang disebabkan oleh
mikrob. Penelitian ini bertujuan mempelajari pengaruh penggunaan antibiotik timentin, rifampisin,
dan kombinasi keduanya untuk mengatasi masalah kontaminasi bakteri pada kultur. Kombinasi
rifampisin (10 mg/l) dan timentin (400 mg/l) dapat mengatasi kontaminasi bakteri dengan
meminimalkan pengaruh fitotoksik antibiotik. Embrio lengkap (embrio dengan kotiledon,
hipokotil dan radikula) yang dihasilkan yaitu 2.7 embrio per kuncup bunga, yang merupakan 39%
dari total embrio. Embrio lengkap mampu berkecambah dan berkembang menjadi tanaman
normal. Kemampuan dan kapasitas embriogenesis pada kultur ini selain dipengaruhi oleh tingkat
fitotoksik antibiotik juga dipengaruhi oleh kisaran suhu praperlakuan dan inkubasi kultur.
ABSTRACT
LESTARI BUDI UTAMI. Implementation of Anthers Shed-Microspore Culture Protocol of
Pepper (Capsicum annuum L.) with Antibiotics Treatment under Local Conditions of Bogor.
Supervised by ENCE DARMO JAYA SUPENA and SUHARSONO.
A shed-microspore culture procedure was developed in Wageningen, the Netherlands for
producing doubled haploid plants of Indonesian hot pepper. In order to implement this procedure
under the local conditions of Bogor, the high chance of microbial contamination of culture is the
main problem. Therefore, the application of single and combination treatment of antibiotics
rifampicin and timentin were investigated to prevent bacterial contamination in culture. The
combined treatment of rifampicin (10 mg/l) and timentin (400 mg/l) was successfully preventing
the bacterial contamination and eliminating the phytotoxic effect in culture. The yield of complete
embryo (embryo with cotyledons, hypocotile and radicle) was 2.7 embryos per flower bud, which
was 39% from total embryo yield. Complete embryos were able to germinate and develop into
normal plants. The embryogenesis capability and capacity in this system was not only affected by
the phytotoxic of antibiotic, but also by the range of temperature in the pretreatment and culture
incubation periods.
+
)
$
/
#$
#
$ . #
-
#
#
#
-
$
/
224+
$ 174 A@@ $
.
755 AA $ !
22A"
. #
9
.
. %
,
$
$ /
9
#
#
,
# 9
#
.
$
224+
,
$ .
A ??
3$ +
#
$
. #
+
,
$
14 3$ +
7 1@ 3$ +
$
17 7?
3$ !$ =330
0
#"
,
#
- +
.
#
##
$ . #
$
. $
## + $ .
$
$
$ $
9
$
#
+ . #
.
,
.
. #
A
5
#
& $
+
. # 0
#$
#
#
$
9
#
$
$
. #
/
#
#9
#
$
!
"
:
#
/
. #
0
$
#
#
# $
/
$. #
*
9
#
/
: +
.
9
#
$
9
0
/ .
#
#
#
! :
1772"
#
- +.
+
.
!
G ;
17@1"
!% $ . $
177?"
- +
.
!
177 "
!
1777"
! 22? "
$
# 9
#
$
. #
,
+ .
# #
9
!
"
$
. #
.
#
.
/
+
+
$
#
9
+
9
+
$ ##
!
"
! 22? "
#
#
* #
# +
.
#$
.
0
#$
## #
$
. . #
$
#
+
.
$
$
. #
#
. #
9
#
-
##
#
$
$
!0
. #
#
!<
$
!<
/
-
/
0
"+
.
#
$
$
/
#$
.
## ##
%
177@"+
0
. +
. #
/ .
$
$
#9
#
9
0
0
. #
$
$
177@"
$
0 . #
0
+
.
!%
.
1775"+
!
222"+
!
22? "
#
!
"
# +
9
/
# $
##
+ 0
+
.
#
$
9
. #
$
5
6 - 0-!0!
6
. #
#
$
9
+
. # #
$
% -$ !% -$
H % -$ 17?7"
#
$
2 #3 +
#
0 12 #3
# 9 #
>
#3
#
+
#
0
>
+
.
#
9
$ C
AI
969
A I !
22? "
- :
? - +
$
6
+
)
$
/
#$
#
$ . #
-
#
#
#
-
$
/
224+
$ 174 A@@ $
.
755 AA $ !
22A"
. #
9
.
. %
,
$
$ /
9
#
#
,
# 9
#
.
$
224+
,
$ .
A ??
3$ +
#
$
. #
+
,
$
14 3$ +
7 1@ 3$ +
$
17 7?
3$ !$ =330
0
#"
,
#
- +
.
#
##
$ . #
$
. $
## + $ .
$
$
$ $
9
$
#
+ . #
.
,
.
. #
A
5
#
& $
+
. # 0
#$
#
#
$
9
#
$
$
. #
/
#
#9
#
$
!
"
:
#
/
. #
0
$
#
#
# $
/
$. #
*
9
#
/
: +
.
9
#
$
9
0
/ .
#
#
#
! :
1772"
#
- +.
+
.
!
G ;
17@1"
!% $ . $
177?"
- +
.
!
177 "
!
1777"
! 22? "
$
# 9
#
$
. #
,
+ .
# #
9
!
"
$
. #
.
#
.
/
+
+
$
#
9
+
9
+
$ ##
!
"
! 22? "
#
#
* #
# +
.
#$
.
0
#$
## #
$
. . #
$
#
+
.
$
$
. #
#
. #
9
#
-
##
#
$
$
!0
. #
#
!<
$
!<
/
-
/
0
"+
.
#
$
$
/
#$
.
## ##
%
177@"+
0
. +
. #
/ .
$
$
#9
#
9
0
0
. #
$
$
177@"
$
0 . #
0
+
.
!%
.
1775"+
!
222"+
!
22? "
#
!
"
# +
9
/
# $
##
+ 0
+
.
#
$
9
. #
$
5
6 - 0-!0!
6
. #
#
$
9
+
. # #
$
% -$ !% -$
H % -$ 17?7"
#
$
2 #3 +
#
0 12 #3
# 9 #
>
#3
#
+
#
0
>
+
.
#
9
$ C
AI
969
A I !
22? "
- :
? - +
$
6
#
$
-
: $+
6
#
.
/
#
0
#
#
-
$
!
#
. #
$
+
+ ! +
+
. # #
$
$
#
E> ;.F . #
!
!5
+
$ F
$
22? "
#
$
$ 9
$
E
#
#
#
6=1
-
.
!
# . # #
$
A28
$ - "
$. #
#
.
$
!
#
$
/ #
# . #
-
$
.
/ #
#
1775"
: $
$
$
#
-
#
#
.
/
-
22? "
#
:
!
- 9
/
#
. #
#3 K
2+ 122+ 22
0
2+ A+ 12+
#
2
#3
#
$
+
"
#
=
!2+2"K !12+2"K !12+122"K !12+ 22"K !12+422"
#3
- :
?
$
!
#
$
# ". #
?
#
. #
0
9
$
12 - :
9
/
+
#
+ .
!1" &
22A9
22?+ ! "
9'
22?+
!6"
#
9&
22?
+7 ! +
#
#
##
$
?
@
## +
. #
$
#
# + .
#
#
#
$
. #
#
+
9
#
.
+$
+
+
. #
.
#
/
. #
$
#
#
$
. #
.
+ .
#
$
#
$ .
! 0
J
# 17? "
$# H
# -
422
+
$ A
12
+6 5
1
-
$
#
$
+
0
+
)
528+
12
$
0
8
!,3,"+
#
#
:
2 6 8
+7
/ .
% &
9 2 2 2A8
6
#
!
#
-
9
#
#9
+
0
$
#
##
$
/
2 !0 +
E
;.F
. #
22
F
$
$
$ 0
0
0
E>
422 #3 !
#3
+
6
!6"
#
4
+ 5- 6
+
+ ! "
$+ .
0
#9
+
A
. +
0
+7 !
#
!1"
+
#
+
9
9
9
/
@28
$ .
628
. #
422 #3
! 2
$
0
#$
#3 / #
9
#3 "
$
E
E> ;.F !
2 #3
9
#
. #
1"
$
? A8+ .
+
#
6
#
$
;.F+
#3
9
0
422
#
!
122
422
9
9
@ +
E>
.
+ .
#
$ ##
12
A
"
F
+
$
#
#
#
E
$
+
#
! + +
-+ ! +
$
"
F
0
E
F
9
#
$
-
: $+
6
#
.
/
#
0
#
#
-
$
!
#
. #
$
+
+ ! +
+
. # #
$
$
#
E> ;.F . #
!
!5
+
$ F
$
22? "
#
$
$ 9
$
E
#
#
#
6=1
-
.
!
# . # #
$
A28
$ - "
$. #
#
.
$
!
#
$
/ #
# . #
-
$
.
/ #
#
1775"
: $
$
$
#
-
#
#
.
/
-
22? "
#
:
!
- 9
/
#
. #
#3 K
2+ 122+ 22
0
2+ A+ 12+
#
2
#3
#
$
+
"
#
=
!2+2"K !12+2"K !12+122"K !12+ 22"K !12+422"
#3
- :
?
$
!
#
$
# ". #
?
#
. #
0
9
$
12 - :
9
/
+
#
+ .
!1" &
22A9
22?+ ! "
9'
22?+
!6"
#
9&
22?
+7 ! +
#
#
##
$
?
@
## +
. #
$
#
# + .
#
#
#
$
. #
#
+
9
#
.
+$
+
+
. #
.
#
/
. #
$
#
#
$
. #
.
+ .
#
$
#
$ .
! 0
J
# 17? "
$# H
# -
422
+
$ A
12
+6 5
1
-
$
#
$
+
0
+
)
528+
12
$
0
8
!,3,"+
#
#
:
2 6 8
+7
/ .
% &
9 2 2 2A8
6
#
!
#
-
9
#
#9
+
0
$
#
##
$
/
2 !0 +
E
;.F
. #
22
F
$
$
$ 0
0
0
E>
422 #3 !
#3
+
6
!6"
#
4
+ 5- 6
+
+ ! "
$+ .
0
#9
+
A
. +
0
+7 !
#
!1"
+
#
+
9
9
9
/
@28
$ .
628
. #
422 #3
! 2
$
0
#$
#3 / #
9
#3 "
$
E
E> ;.F !
2 #3
9
#
. #
1"
$
? A8+ .
+
#
6
#
$
;.F+
#3
9
0
422
#
!
122
422
9
9
@ +
E>
.
+ .
#
$ ##
12
A
"
F
+
$
#
#
#
E
$
+
#
! + +
-+ ! +
$
"
F
0
E
F
9
6
1
#
$
#$
9
E
F+
0
0
F
$
E> ;.F
#
E
$
9
L
! #3 "
2!
122
22
422
"
L # 9 #
-:
. #
#
/
$
#
$
6
> ;.
@28 !@312"
A28 !A312"
628 !6312"
628 !6312"
66 68 !431 "
@ 68 !131 "
5 58 !1316"
28 !2316"
# /
F
-
$
;.F
! #3 "
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
#
L
0
2!
A
12
2
! #3 "
"
L # 9 #
-:
. #
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
A 28 ! 3@"
1 A8 !13@"
#
>
?1 A8
A6 @8
?1 A8
41 58
/
$
;.
!@316"
!5316"
!@316"
!A31 "
# /
! 0"
#9
E>
;.F
0M
$
#9
E>
0
"
$
$
E
$
!
-:
0
#
"
A28 !A312"
428 !4312"
428 !4312"
428 !4312"
28 !2312"
#
/
#
. #
( +-! +
$
!5 -7 +
0
-
E
F
E>
;.F
$
#
$
?1 A8
/
$ . 41 58
. # 9
0
2 #3
0
,
0 9
E
F
E> ;.F 9
/
.
#
9
#
+ #
E> ;.F
$
##
#
#
E
F )
$
0
+
E
F $ .
66 68
#
E> ;.F
$ ## @28 !
1" ) . #
/ #
/
0 9
+
#
E
F$ .
A8
#
#
E> ;.F
$
A
$
+.
?1 A8 !
"
0
12 #3
422 #3
/
E> ;.F
!
6"
2!
2
122
22
422
L # 9 #
/
$ -:
-:
. # $
# +
-:
$ ## A28
#
+ .
A8
9
/
$ .
1 A8
. #
9
0
2 #3
0 9
2 #3
E> ;.F / #
L
#
$
#
$
9
12
A
#
E>
. #
E
+
/
$
;.F
#
0
$
F
4
0
9
6 8+ .
E>
;.F
,
0
12
#
#
#
0
#
#3
422
!>
. #
-
12
#
.
1
$
0
1 "
?18
#
/
.
$
. !>
#3
9
5@
9
+
1 9 "
/
#
"
$
#
/
9
)
"
!>
$
$
. !1 1
0
$
)
177
. !678
# +
#
+
#
9
"
0
#
$
+
$
+
#
# 0 !0
#
$
122+ 22+
. #
,
,
+
+
#
#3
+
#
1 9 "
9
4
4
'
E>
$
;.F
. # $
# ! #
A
$
- :
22?"
9&
E
#
F
$
12
#
#
#
#
#
#
L
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
;.LL
02M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
0 12 M
>
L
LL
2!
2
122
22
422
"
21
2
2
21
2
!291"
!292"
!292"
!291"
!292"
11
24
26
21
21
!294"
!291"
!291"
!291"
!291"
16
24
26
26
21
!29A"
!291"
!291"
!291"
!291"
2!
2
122
22
422
"
5?
15
! 9A"
!294"
!295"
!29?"
!295"
42
2
66
!691A"
!194"
!19?"
!29?"
!29?"
11 ?
65
AA
4
45
!A9 2"
! 9A"
!2916"
!2911"
!1911"
5
?
2
5
. #
. #
+
2
-
02 M
2
A
. #
5
>
1
##
N1
-
=! "
#
#. #
$
K ! "
0
. #
K! "
#
. #
$
# +
# K ! "
#
$
0
$
+ N1 A
+ N1 -
#
$
=
#
+ N2 6
+
$
&
!6"
0 #
. #
#
/
22A9
#
9&
#
. # #
+ $ ##
$
#
+ .
22?+ ! "
22?
9
#
. #
$ ##
+
- # $
#
$ .
.
.
/
#
.
$ . #
9
$
. #
9
*
$
:
#
$
#
#
+
9
#
. #
!1"
9'
$
$
$ -
. #
J
+6 5
#
22?
##
##
#
+
/
#
#
0
. #
#
$
$
9
9
9
A
$
$
#
#
+.
#
$
. #
14
9
#
#
$
:
9
#
$
1775"
+
#
/
. #
+.
. #
9
#
# 0+
.
$
.
14
.
A
.
. #
$
12
A
$
$
/
A"
!
-
#
. #
$
. #
$
>
14 L
12 LL
A
L
LL
#
9&
2
2A
9' 2? !
2? !
;.
21
AA
"
# "
)
0
#3 "
#
!422
!12
#3 "
9
-
#
*
0
0
$
#$
2 #3 +
#
0
$ .
12 #3 +
! 22? "
2 #3
0
9
9
9
#
#
$
-
#$
$
#
! 22
#
$
##
0
122
#3
.
0
#
422
+
422
#
#3 "
##
$
$ ##
/
#
#
#$
0! $
0
#
#
. #
$
##
$ 0 0
/
#
. #
#
$
/ #
9
$
. # #
+ #
E> ;.F / $
$
##
E
F )
#
$:
E> ;.F
#
. #
$
0
#
# E
F
!
1
"
+
#
0
12 #3
422 #3 +
E> ;.F / #
#
/
$
# !A
12 "
/ $ $
)
$
/
$
# #
0
9
$
0
.
9
+
#
/
#
#
0
/
:
!
224"
' $
!17@ "+
$
#
!
"
. :
## # / :
# $
#
9
!
"
/
: +
$ ##
#$
# #
0
.
-
9
$
,
$
122+ 22+
422 #3
0 9
12
#3
#
# 0
0
0
$
#
9
+
#
#
.
,
+
#
E> ;.F !
4" )
/
#
! 22? "
0
9
$
177?"+
9
.
#$
0 !%
#
#
- :
$
0
#
0
. #
0
$ 0
. #
$
$ 0
0
-
$ .
/
+
$
#3
# . #
/
$ $ 4
$
:
/ $$
22? "
$ .
$ 7
$
#
14 " )
# +
#
!
$
#
##
#
A
. !
$:
$
.
!
#
$
12
A" )
$
. #
$
#
#
. #
#
A
$
$
#
#
+.
#
$
. #
14
9
#
#
$
:
9
#
$
1775"
+
#
/
. #
+.
. #
9
#
# 0+
.
$
.
14
.
A
.
. #
$
12
A
$
$
/
A"
!
-
#
. #
$
. #
$
>
14 L
12 LL
A
L
LL
#
9&
2
2A
9' 2? !
2? !
;.
21
AA
"
# "
)
0
#3 "
#
!422
!12
#3 "
9
-
#
*
0
0
$
#$
2 #3 +
#
0
$ .
12 #3 +
! 22? "
2 #3
0
9
9
9
#
#
$
-
#$
$
#
! 22
#
$
##
0
122
#3
.
0
#
422
+
422
#
#3 "
##
$
$ ##
/
#
#
#$
0! $
0
#
#
. #
$
##
$ 0 0
/
#
. #
#
$
/ #
9
$
. # #
+ #
E> ;.F / $
$
##
E
F )
#
$:
E> ;.F
#
. #
$
0
#
# E
F
!
1
"
+
#
0
12 #3
422 #3 +
E> ;.F / #
#
/
$
# !A
12 "
/ $ $
)
$
/
$
# #
0
9
$
0
.
9
+
#
/
#
#
0
/
:
!
224"
' $
!17@ "+
$
#
!
"
. :
## # / :
# $
#
9
!
"
/
: +
$ ##
#$
# #
0
.
-
9
$
,
$
122+ 22+
422 #3
0 9
12
#3
#
# 0
0
0
$
#
9
+
#
#
.
,
+
#
E> ;.F !
4" )
/
#
! 22? "
0
9
$
177?"+
9
.
#$
0 !%
#
#
- :
$
0
#
0
. #
0
$ 0
. #
$
$ 0
0
-
$ .
/
+
$
#3
# . #
/
$ $ 4
$
:
/ $$
22? "
$ .
$ 7
$
#
14 " )
# +
#
!
$
#
##
#
A
. !
$:
$
.
!
#
$
12
A" )
$
. #
$
#
#
. #
#
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0
?
#
#
#
0
#3 "
!422
$
' $
!12
#3 "
#
+
0
: $
-1A= 4569475
$ 0
#
$
5
%
#
/ #
$
$
#
#
0
#
$
9
$
(
+
,
-
''+ * $
9 #
0
'
$.
177?
$"
!
-
0
9 A
1?=
222
-
-
-
0 $
#
P
- 9
/
1775
G
,
<
<
-
# $"
"
$ $ 41= 4 79461
T
9
"
1=
- -
'+
'
0 -
0 ,
0
$
0
. #
-
,
1777
$
+
0 $
224
#
#
#
!
*
$
00 :
1?= 1?59156
%
*+
22?
0
& '
*
1A= 1669167
$
"
()
=
+
0
$
,
+
0
# $ 9
$
"- ,
?9 6
+
)+ % :0
,
$ #$ 0 T -
-
4A9?A
0
125=
+<
>
-
. #
U-$
@4= 41594 4
00 -
9
0
. #
!
0
! 146= 51957
+
:
177
#
+
-
#
0
$
-$
00R
S M6A
-
+ ' 22?
-$ 9 $
!
A= 1912
0
-
!
177@
$.
-
:$
+
F $Q
"=
R
-$ C
+)
-
,
! 1 = 4?@945A
17@1
!
; F
#R .
!: $
@A79@?4
$
'
+ )
; + $
;
- 0
0
$
* 1772
,
0
=
/ / ( +
"
*
# 9G # $
#
!
1775
-
+
'+
,
+ *.
.
% $ . $ +)
177? ) #$ #
0
$.
=
+
,
9
17?7 )
!
1?6= @A9@A
22A
22A '
#
T
% -$ ' + % -$
0
#
17= 6 5966
O
#
0 $
#
"
1 6= 1?79155
0
"-
!
17@
-$ T =
-
# < 17?
# :$
-
-
:
0
+
-
0
$
$
.
#
#
-
$
$#
#
. # $
#
E> ;.F
#
$ . 678
0
-$ -
- ,
: $
,
& - A4= 4962
#
#
+
,
9
$
+
-
*
0