Pengamatan Histologi Jaringan Hati dan Ginjal Kelinci. Pemeriksaan Lesi Aterosklerosis Aorta Kelinci
42
pendingin refrigerator. Setelah diinkubasi dicuci dengan PBS sebanyak tiga kali selama 10 menit tiap pencucian. Langkah selanjutnya, tiap sediaan ditetesi dengan
antibodi II yaitu Dako Envision Peroksidase System sebanyak 50-60 µ
L, kemudian sediaan diinkubasi selama satu jam pada suhu 37
o
C. Selanjutnya , sediaan dicuci kembali dengan PBS dan direndam pada kondisi gelap di dalam larutan DAB yang
telah ditambahkan H
2
O
2
selama kurang lebih 20 menit, selanjutnya dicek di bawah mikroskop. Proses akhir pewarnaan adalah setiap sediaan dicuci di dalam aquades
dan dilakukan dehidrasi, clearing, dan mounting Lampiran 9.
Pewarnaan imunohistokimia terhadap Cu,Zn-SOD dilakukan untuk mendeteksi
sel-sel penghasil Cu,Zn-SOD yang dapat menunjukkan jumlah sel penghasil serta kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD. Hal ini untuk mengetahui profil antioksidan
Cu,Zn-SOD pada jaringan hati dan ginjal kelinci kelompok perlakuan. Pengamatan terhadap sel-sel penghasil Cu,Zn-SOD dilakukan dengan tiga cara,
yaitu pengamatan kualitatif dan pengamatan kuantitatif jumlah inti sel hati dan tubuli renalis. Pengamatan kualitatif dilakukan terhadap produk reaksi positif pada
sitoplasma sel hati dan sel tubuli renalis dengan membandingkan intensitas warna cokelat yang terbentuk dan distribusinya pada seluruh bagian setiap preparat yang
diamati. Intensitas warna cokelat tersebut menunjukkan kandungan Cu,Zn-SOD, warna cokelat yang semakin tua dan semakin merata berarti mengandung semakin
banyak Cu,Zn-SOD. Pengamatan kuantitatif dilakukan terhadap inti sel dan tubuli renalis yang
memberikan reaksi positif pada berbagai tingkat kandungan terhadap Cu,Zn-SOD coklat tua atau positif kuat+++, cokelat sedang atau positif sedang++, dan cokelat
muda kebiruan atau positif muda +-, dan biru atau negatif-. Perhitungan inti sel-sel tersebut dilakukan tiap lapang pandang pada pembesaran 400x yang dilakukan pada
lima lapang pandang yang berbeda secara acak pada setiap preparat jaringan.