Metode Most Probable Number MPN

kekeruhan atau terbentuknya gas yang dihasilkan pada tabung durham yang diletakkan pada posisi terbalik oleh mikroba pembentuk gas Fardiaz, 1993. Metode MPN merupakan uji deretan tabung yang menyuburkan pertumbuhan koliform sehingga diperoleh nilai untuk menduga jumlah koliform dalam sampel yang diuji. Jumlah koliform ini bukan merupakan perhitungan yang tepat namun merupakan angka yang mendekati jumlah yang sebenarnya. Uji ini terdiri dari tiga tahap yaitu: 1. Uji pendugaan Presumptive test Merupaka test pendahuluan tentang ada atau tidaknya kehadiran bakteri coliform berdasarkan terbentuknya asam dan gas disebabkan karena fermentasi laktosa oleh bakteri golongan coli. Terbentuknya gas dapat dilihat dari kekeruhan pada media laktosa dan gas yang dihasilkan dapat dilihat dalam tabung durham berupa gelembung udara. Tabung dinyatakan positif jika terbentuk gas sebanyak 10 atau lebih dari volume di dalam tabung durham. Banyaknya kandungan bakteri golongan coli dapat dilihat dengan menghitung tabung yang menunjukkan reaksi positif terbentuk asam dan gas dan dibandingkan dengan tabel MPN. Metode MPN dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di dalam sampel berbentuk cair. Bila inkubasi 1x24 jam pada suhu 35°C. Jika dalam waktu 2x24 jam tidak terbentuk gas dalam tabung durham, dihitung sebagai hasil negatif. Jumlah tabung yang positif dihitung pada masing-masing seri. MPN penduga dapat dihitung dengan melihat tabel MPN. 2. Uji penegasan Confirmed test Uji penegasan dilakukan untuk menegaskan bahwa gas yang terbentuk disebabkan oleh bakteri koliform. Uji positif pada uji penegasan menghasilkan angka indeks, angka ini disesuaikan dengan tabel MPN untuk menentukan jumlah koliform dalam sampel Lay, 1994. 3. Uji lengkap Completed test Bila diperlukan uji ini dapat dilakukan dengan menggunakan media yang menunjukkan hasil positif pada uji penegasan. Uji koliform tidak harus selalu dilakukan secara lengkap, tergantung dari berbagai faktor seperti waktu, mutu contoh yang diuji, biaya, dan faktor-faktor lainnya Lay, 1994, Irianto, 2013. Adapun persyaratan yang telah ditetapkan dalam Permenkes No.492MenkesPerIV2010 bahwa syarat-syarat mikrobiologis untuk air minum adalah MPN koliform per 100 ml air dinyatakan dengan 0 Colony Forming Units CFU100 ml sampel, sedangkan persyaratan mutu air bersih menurut permenkes No.416MenkesPerIX1990 bahwa syarat-syarat mikrobiologis untuk air bersih adalah MPN perkoliform per 100 ml air adalah 50 Menkes, 2010. Tabel yang digunakan untuk menentukan nilai MPN dari 3 seri tabung berbeda dengan tabel untuk 5 seri tabung. Kombinasi dipilih dimulai dari pengenceran tertinggi yang masih menghasilkan semua tabung posistif, sedang pada pengenceran yang berikutnya ada tabung yang negatif. Kombinasi yang diambil terdiri dari 3 pengenceran. Jika pada pengenceran yang keempat atau seterusnya masih ditemukan tabung yang hasil positif, maka jumlah tabung yang positif tersebut ditambahkan pada angka kombinasi ketiga sampai mencapai jumlah maksimum Fardiaz, 1993.

BAB III METODE PENGUJIAN

3.1 Tempat

Analisis Kualitatif bakteri Coliform pada air minum, dilakukan di Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Sumatera Utara yang bertempat di Jalan Williem Iskandar Pasar V No. 15 Medan.

3.2 Sampel, Alat, dan Bahan

3.2.1 Sampel

Organoleptis sampel: Bentuk: air minum dengan kode 0388. Warna: Sampel tidak berwarna Rasa: tidak berasa Bau: tidak berbau.

3.2.2 Alat

1. Peralatan yang digunakan untuk pembuatan media terdiri dari autoklaf, oven, beaker glass, hot plate, magnetic stirrer, neraca analitis dan pipet volume. 2. Peralatan yang digunakan untuk pengujian terdiri dari bola karet, inkubator 35 C, inkubator 44 C, jarum ose, bunsen, pipet volume, rak tabung, kapas, tabung durham dan tabung reaksi.

3.2.3 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan terdiri dari Media Lactose Broth dan Brilliant Green Lactose Broth.

3.3 Prosedur

3.3.1 Pembuatan Media

3.3.1.1 Media Lactose Broth

a. Pembuatan Media Lactose Broth Single

Ditimbang seksama media Lactose Broth sebanyak 13 gram. Dimasukkan ke dalam beker gelas, dilarutkan dalam 1 liter akuades. Dimasukkan Magnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 10 ml dalam 10 tabung. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan 1 atm pada suhu 121 ˚C selama 15 menit, setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.

b. Pembuatan Media Lactose Broth Double

Ditimbang seksama media Lactose Broth sebanyak 52 gram. Dimasukkan ke dalam beker gelas, dilarutkan dalam 1 liter akuades. Dimasukkan Magnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 5 ml dalam 5 tabung. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan 1 atm pada suhu 121 ˚ C selama 15 menit, setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.