3.3.1.2 Media Brilliant Green Lactose Broth BGLB
Ditimbang seksama media Brilliant Green Lactose Broth sebanyak 40 gram. Dimasukkan ke dalam beker gelas, dilarutkan dalam 1 liter akuades.
Dimasukkan Magnetic stirer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing
10 ml. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan 1 atm pada suhu 121 ˚C sel ama
15 menit, setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.
3.3.2 Uji Perkiraan
a Siapkan 9 tabung reaksi, dibuat sebanyak tiga seri yang berisi media Lactose
Broth siap pakai, yang terdiri dari tiga tabung berisi Lactose Broth Doble dan enam tabung Lactose Broth Single dalam keadaan steril dan dimasukkan
durham ke masing-masing tabung. Tabung kemudian disusun pada rak tabung, masing-masing diberi tanda sebagai berikut:
Nomor sampel
Volume sampel
Tanggal penanganan
b Sampel dikocok terlebih dahulu agar homogen
c Dimasukkan sampel dengan menggunakan pipet volume, tiga tabung
reaksi yang berisi Lactose Broth Doble LBD dimasukkan sample sebanyak 10 ml, tiga tabung yang berisi Lactose Broth Single LBS
dimasukkan sample sebanyak 1 ml dan tiga tabung reaksi yang berisi Lactose Broth Single LBS sebanyak 0,1 ml.
d Masukkan seluruhnya ke dalam tabung inkubator pada suhu 37
o
C selama 24-48 jam.
e Selanjutnya, diamati pembentukan gas yang terjadi di dalam tabung
durham. f
Catat tabung yang dinyatakan positif dengan dilihatnya tabung tersebut terlihat mengkeruh dan terdapat gelembung gas pada tabung durham.
Selanjutnya dilakukan uji penegasan. 3.3.3
Uji Penegasan A.
Total Coliform
1. Tabung yang dinyatakan positif pada uji perkiraan, diinokulasikan
kedalam tabung yang berisi media Brilliant Green Lactose Broth BGLB sebanyak 5 ml, masing-masing diisi satu sampai dua ose yang
pengerjaanya dilakukan secara aseptis. 2.
Diinkubasi pada suhu 37˚C selama 24 - 48 jam. 3.
Selanjutnya, dilakukan pengamatan dengan melihat tabung yang menunjukkan terbentuk gelembung gas pada tabung durham. Jika
terdapat gelembung gas pada tabung durham dan warna pada tabung reaksi terlihat mengkeruh maka uji penegasan dinyatakan positif.
4. Pembacaan hasil dilakukan dengan menghitung jumlah tabung yang
positif. Angka yang diperoleh dicocokkan dengan tabel MPN.
Kategori