22
UIN Syarif Hidayatullah
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Pangan Pusat Laboratorium Terpadu PLT UIN Syarif Hidayatullah Jakarta dan
Laboratorium Biologi Molekular LAPTIAB BPPT mulai bulan Februari Sampai Oktober 2014.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat
Seperangkat alat Elektroforesis SDS-PAGE Mini-PROTEAN Tetra Cell-BIO-RAD, Vortex, Hotplate stirrer, Setrifuge, Mikropipet,
Tip, Becker glass 100 ml, Beker glas 50 ml, Tube, Waterbath, Batang pengaduk, dan Pinset.
3.2.2 Bahan
Pepsin Sigma Aldrich catalog number 76218 Larutan AkrilamidBis 30T; 2,67C; SDS 10 wv, Tris HCl 0,5 M pH 6,8;
Sample buffer Tris HCl 0,5 M; Glycerol; SDS; dan Bromphenol Blue, Larutan Running buffer Tris basa, Glycerol, dan SDS, Amonium
Persulfat APS 10, TEMED, Aseton, Larutan Pewarna 0.1 commasie blue dalam larutan metanol : air : asam asetat 5:5:2, Larutan Pembilas
metanol 30 dan asam asetat 10, air deionisasi. 3.3
Tahap Penelitian 3.3.1
Pengambilan Sampel
Sampel yang digunakan berupa cangkang kapsul keras yang beredar di Pasar Pramuka, Jakarta Timur, DKI Jakarta.
3.3.2 Preparasi Reagent SDS-PAGE
Tahap preparasi larutan pereaksi terdapat di lampiran 3.
UIN Syarif Hidayatullah
3.3.3 Penyiapan Gel
Gel elektroforesis SDS-PAGE dibuat dengan stacking gel 4 dan variasi resolving gel 10 dan 12 dengan formulasi seperti pada tabel 3.1.
Tabel 3.1 Formula gel elektroforesis Sumber : Bio-rad
Persen Air deionisasi Akrilamidbis
Gel buffer 10 wv SDS
Gel ml
ml ml
ml 4
6,1 1,3
2,5 0,1
10 4,1
3,3 2,5
0,1 12
3,4 4,0
2,5 0,1
Resolving Gel Buffer – 1,5M tris-HC; pH 8,8
stacking Gel Buffer – 0,5M tris-HC; pH 6,8
3.3.4 Pembuatan Kapsul Simulasi
a Formulasi :
Gelatin : 5 gram
50 TiO
2
: 0,125 gram 1,25 Gliserin
: 1 ml 10
Pewarna : 5 mg
0,05 Aquadest
: add 10 ml add 100
b Cara pembuatan :
Seberat 5 gram gelatin ditimbang dengan kaca arloji dan dilarutkan dalam 5 ml air panas suhu 60
o
C. Sebanyak 1 ml gliserin ditambahkan dalam larutan gelatin kemudian ditambahkan pewarna sambil larutan
diaduk perlahan hingga larutan homogen. Kemudian 0,125 gram TiO
2
ditimbang dalam kaca arloji dan didispersikan dalam 1ml air kemudian dicampurkan dalam larutan gelatin. Campuran diaduk hingga TiO
2
terdispersi dengan baik. Selanjutnya larutan dipindahkan dalam cetakan dan didinginkan di suhu ruangan kemudian disimpan dalam desikator.
3.3.5 Ekstraksi Gelatin
Kategori