Penyiapan Botol Kultur, Akuades Steril dan Alat-Alat Tanam

39

3.2.4.3 Sterilisasi Polong Buah dan Penanaman Biji

Sterilisasi bertujuan untuk menciptakan bahan tanaman yang akan digunakan untuk perbanyakan secara in vitro dalam kondisi aseptik. Untuk itu sebelum biji ditanam, polong buah anggrek Phalaenopsis hibrida yang akan digunakan disterilkan terlebih dahulu. Sterilisasi dilakukan dengan cara membersihkan kotoran yang menempel pada polong buah secara hati-hati. Selanjutnya polong buah dicuci dengan deterjen dan dicuci dengan air mengalir secara hati–hati. Setelah itu dilakukan sterilisasi polong buah anggrek di dalam aaminar air flow cabinet LAFC. Polong buah direndam-kocok dalam larutan pensteril yang berisi air steril ditambah larutan Bayclin 15 dan Tween 20 sebanyak 1 tetes selama 10 menit, kemudian dibilas sebanyak 3 kali dengan air steril. Setelah itu polong buah dicelupkan ke dalam alkohol 96 dan dibakar dengan cepat sampai nyala api di permukaan polong buah padam. Perlakuan ini dilakukan dua kali. Selanjutnya polong buah diletakkan dalam cawan petri steril dan dipotong bagian ujung dan pangkalnya, sedangkan bagian tengahnya dibelah pada kedua sisinya dengan menggunakan pisau scalpel steril untuk mengeluarkan biji-biji anggrek dari polong Gambar 10. 40 Gambar 10. Sterilisasi polong anggrek Phalaenopsis hibrida a polong dicuci, b larutan pensteril, c polong disterilkan, d polong diletakan pada cawah petridis, e polong dibakar secara cepat, f polong dibelah untuk mengeluarkan biji anggrek. Penanaman biji dilakukandengan cara menaburkan sejumlah biji kepermukaan media perlakuan menggunakan ujung spatula steril, diusahakan agar volumenya samaGambar 11. Setelah itu botol ditutup kembali dan diikat dengan karet. Kemudian botol tersebut diberi label tanggal penanaman dan jenis bahan tanaman yang digunakan. Selanjutnya botoldiletakkan di rak-rak dalam ruang kultur yang bersuhu 24-28 C denganpencahayaan lampu flouresens ±1000 lux secara terus menerus. Penanaman biji dilakukandengan cara menaburkan sejumlah biji kepermukaan media perlakuan menggunakan ujung spatula steril, diusahakan agar volumenya samaGambar 11. Setelah itu botol ditutup kembali dan diikat dengan karet. Kemudian botol tersebut diberi label tanggal penanaman dan jenis