Uji Antihiperkolesterolemia Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) pada Serum Darah Marmot
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan
48
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Surat etikal klirens
49
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar tumbuhan binahong dan daun binahong segar
Gambar tumbuhan binahong
Gambar daun binahong segar
50
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Gambar simplisia daun binahong dan serbuk simplisia daun
binahong
Gambar simplisia daun binahong
Gambar serbuk simplisia daun binahong
51
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Gambar ekstrak etil asetat daun binahong
52
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Gambar pemeriksaan mikroskopik daun binahong segar dan serbuk
simplisia daun binahong
1
2
3
4
5
6
7
Gambar penampang melintang daun binahong segar
Keterangan (perbesaran 10x40)
1. Kutikula
2. Epidermis atas
3. Jaringan palisade
4. Jaringan spons
5. Kristal kalsium oksalat bentuk druss
6. Epidemis bawah
7. Stomata
53
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. (Lanjutan)
1
2
3
Gambar penampang membujur daun binahong segar
Keterangan (perbesaran 10x40)
1. Stomata tipe parasitik
2. Sel tetangga
3. Sel penutup
54
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. (Lanjutan)
1
2
3
Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun binahong
Keterangan (Perbesaran 10x40)
1. Stomata tipe parasitik
2. Berkas pengangkut penebalan spiral
3. Kristal kalsium oksalat tipe druse
55
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Hasil karakterisasi simplisia daun binahong
1. Penetapan kadar air
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
5,0038
5,0071
5,0043
Volume awal (ml)
1,3
1,7
2,0
e
% kadar air =
e
−
1. % kadar air =
, − ,
,
x 100% = 7,99%
2. % kadar air =
, − ,
,
x 100% = 5,99%
3. % kadar air =
, − ,
,
x 100% = 7,99%
% rata-rata kadar air =
,
e
%+ ,
Volume akhir (ml)
1,7
2,0
2,4
e
%+ ,
x 100%
%
x 100% = 7,32%
2. Penetapan kadar sari larut air
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
5,0081
5,0085
5,0098
% kadar sari larut air =
1. % kadar sari larut air =
2. % kadar sari larut air =
,
,
,
,
e
Berat sari (g)
0,2259
0,275
0,2856
e
x
x
e
x
x 100%
x 100% = 22,55%
x 100% = 27,45%
56
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. (Lanjutan)
3. % kadar sari larut air =
,
,
% rata-rata kadar sari larut air =
,
x
x 100% = 28,50%
%+
,
%+
,
%
x 100% = 26,16%
3. Penetapan kadar sari larut etanol
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
5,0022
5,0028
5,0026
% kadar sari larut etanol =
1. % kadar sari larut etanol =
,
,
2. % kadar sari larut etanol =
,
3. % kadar sari larut etanol =
,
Berat sari (g)
0,2524
0,2515
0,2725
e
e
x
,
% rata-rata kadar sari larut etanol =
,
x
%+
x 100%
x 100% = 25,22%
x
,
x
e
x 100% = 25,13%
x 100% = 27,23%
,
%+
,
%
x 100%
= 25,86%
4. Penetapan kadar abu total
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
2,0032
2,0035
2,0030
Berat abu (g)
0,2524
0,2515
0,2725
57
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. (Lanjutan)
% kadar abu total =
1. % kadar abu total =
2. % kadar abu total =
3. % kadar abu total =
,
,
,
,
,
,
% rata-rata kadar abu total =
e
e
e
x 100%
x 100% = 6,35 %
x 100% = 5,80 %
x 100% = 6,91 %
,
%+ ,
%+ ,
%
x 100% = 6,35 %
5. Perhitungan Penetapan kadar abu tidak larut asam
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
2,0032
2,0035
2,0030
Berat abu (g)
0,0116
0,0128
0,0112
% kadar abu tidak larut asam =
1. % kadar abu tidak larut asam =
2. % kadar abu tidak larut asam =
3. % kadar abu tidak larut asam =
% rata-rata kadar abu total =
,
,
,
e
x 100%
e
x 100% = 0,57 %
,
x 100%= 0,63 %
,
,
,
e
x 100% = 0,56 %
%+ ,
%+ ,
%
x 100% = 0,58%
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Bagan alur pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong
(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).
Serbuk simplisia (berat 1000 gram)
Dimasukkan ke dalam bejana tertutup
Ditambahkan pelarut etilasetat (75 bagian)
Ditutup rapat
Didiamkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya sinar matahari, diaduk
Disaring
Maserat
Ampas
Diremasesi dengan
Pelarut etil asetat (25
bagian),
sesekali
diaduk
Didiamkan selama 2
hari terlindung dari
cahaya matahari
Disaring
Maserat
Ampas
Digabung
Dpekatkan diatas penangas air
Ekstrak kental (berat 43,8 gram)
59
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Gambar alat dan objek yang digunakan
Microlab 300
Larutan reagensia kolesterol
60
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. (Lanjutan)
Marmot (Hewan uji)
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Bagan alur pengujian efek penurunan kolesterol
Penyiapan hewan uji hiperkolesterolemia
Marmot
Diinduksi dengan campuran kuning telur
(dosis 1% bb) dengan lemak kambing 15
g selama 14 hari secara oral
Diukur kadar kolesterolnya
Marmot Hiperkolesterolemia
Pengujian Efek Penurunan Kolesterol
Marmot
Dikondisikan selama 2 minggu
Diukur kadar kolesterolnya
Kadar kolesterol normal
Diberi perlakuan hiperkolesterol selama 14 hari
Diukur kadar kolesterol
Kadar hiperkolesterolemia
Diberi perlakuan dengan pemberian suspensi
CMC Na, simvastatin dan suspensi ekstrak etil
asetat daun binahong selama 7 hari mulai dari
hari ke-15
Diukur kadar kolesterol pada hari ke-17 dan hari
ke-21
Kadar kolesterol
62
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (Lanjutan)
Pengambilan darah marmot
Marmot
Dipuasakan selama 10-18 jam
Dicukur bulu kakinya
Dibersihkan dengan alkohol
Dipotong
berdarah
dengan
pemotong
kuku
sampai
Darah Marmot
Ditampung dalam mikrotube
Didiamkan pada suhu kamar selama 30 menit
Disentrifuge selama 15 menit kecepatan 3000
rpm
Diambil lapisan atas
Darah diukur
63
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Kadar kolesterol rata-rata darah marmot selama penelitian (mg/dl)
Kelompok
Normal
Rata-rata
CMC Na
Rata-rata
Simvastatin
Rata-rata
Ekstrak etil
asetat daun
binahong
100
mg/kgbb
Rata-rata
Ekstrak etil
asetat daun
binahong
200
mg/kgbb
Rata-rata
Ekstrak etil
asetat daun
binahong
400
mg/kgbb
Rata-rata
Hari 0
(sebelum
induksi)
32
38
29
40
34.75
25
33
30
22
27.5
29
31
35
42
34.25
22
28
20
Kadar Kolesterol
Hari ke-14
Hari ke-17
(Hiperkolesterol
(Pemberian
emia)
obat)
30
30
38
37
31
32
39
40
34.5
34.75
114
110
80
80
102
115
109
113
101.25
104.5
78
58
79
52
67
54
76
60
75
56
65
53
101
89
72
60
Hari ke-21
(Pemberian
obat)
31
37
32
40
35
112
78
99
113
100.5
32
36
30
35
33.25
41
76
48
39
84
72
51
27.25
28
25
34
80.5
85
115
76
68.5
71
100
62
54
56
83
47
42
97
82
67
32.25
43
37
24
93.25
79
74
86
78.75
57
52
62
63.25
36
33
41
22
92
69
38
31.5
82.75
60
37
64
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Contoh perhitungan dosis
Konversi perhitungan dosis antar jenis hewan
Mencit
20g
Tikus
200 g
Marmot
400 g
Kelinci
1,5 g
Kucing 2
kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
Mencit
20g
1,0
Tikus
200 g
7,01
Marmot
400 g
12,29
Kelinci
1,5 g
27,8
Kucing
2 kg
29,7
Kera
4 kg
64,1
Anjing
12 kg
124,2
Manusia
70 kg
387,0
0,14
1,0
1,74
3,3
4,2
9,2
17,8
56,0
0,08
0,57
1,0
2,25
2,4
5,2
10,2
31,5
0,04
0,25
0,44
1,0
1,06
2,4
4,4
14,2
0,03
0,23
0,42
0,92
1,0
2,2
4,1
13,0
0,016
0,11
0,19
0,42
0,45
1,0
1,9
6,1
0,008
0,06
0,10
0,22
0,24
0,52
1,0
3,1
0,0026
0,018
0,031
0,07
0,013
0,16
0,32
1,0
(Suhardjono, 1995)
Contoh perhitungan dosis simvastatin 0,01% (Rangkuti, 2015)
Dosis manusia (berat 70 kg) = 10 mg
Dosis marmot (berat 400 g) = 0,031 x 10 = 0,31 mg
= 1000/400 x 0,31 mg
= 0, 775 mg/kgbb
= 0,8 mg/kgbb
Suspensi simvastatin sebanyak 0,8 mg/kgbb dibuat dalam sediaan 10 ml, dengan
penimbangan 50 mg maka dibuat dalam sediaan
,
= 625 ml.
/
Dosis untuk marmot (berat 400 g) = 400 g x 0,8 mg/1000 g = 0,32 mg
Jadi volume suspensi yang diberikan
,
,
/
= 4 ml
Dosis suspensi ekstrak etil asetat daun binahong yang akan dibuat adalah 100
mg/kgbb, 200 mg/kgbb, dan 400 mg/kgbb.
65
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (Lanjutan)
a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong:
Timbang 100 mg, 200 mg, dan 400 mg ekstrak etil asetat daun binahong.
Masing-masing dilarutkan dalam 10 ml suspensi CMC.
b. Berapa volume suspensi ekstrak etil asetat daun binahong yang akan diberikan
pada marmot hiperkolesterol?
Misal: BB marmot = 400 g
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 100 mg/kgbb
=
x
mg = 40 mg
Volume larutan yang diberikan =
ml = 4 ml
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 200 mg/kgbb
=
x
mg = 80 mg
Volume larutan yang diberikan =
x
x
ml = 4 ml
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 400 mg/kgbb
=
x4
mg =
0 mg
Volume larutan yang diberikan =
x
ml = 4 ml
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Perhitungan nilai AUC kadar kolesterol serum darah marmot
Pengu
langa
n
1
2
3
4
Ratarata
±
SD
CMC
Na
Normal
212
780
317,5
556
222,5
753,5
337
785
272,25 718,625
±
±
64,149 109,294
Kelompok Uji
Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong
Simvasta
100
200
400
tin
mg/kgbb
mg/kgbb
mg/kgbb
384
365
488
390
372,5
615
688,5
362
349,5
414
425
428
394
480
568
455,5
375
468,5
542,375
408,875
±
±
±
±
19,135
108,438
113,641
41,203
AUC Kelompok Normal
1.
+
AUC =
x (17-14) +
+
x (21-17)
x (17-14) +
+
x (21-17)
+
x (21-17)
+4
x (21-17)
= 90 + 122
= 212
2.
+
AUC =
= 112,5 + 148
= 317,5
3.
+
AUC
=x (17-14) +
= 94,5 + 128
= 222,5
4.
AUC =
+
x (17-14) +
= 118,5 + 160
= 337
67
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
AUC Kelompok CMC Na
1. AUC =
+
+
x (17-14) +
x (21-17)
= 336 + 444
= 780
2. AUC =
+
+
x (17-14) +
x (21-17)
= 240 + 316
= 556
3. AUC =
+
x (17-14) +
+
x (17-14) +
+
x (21-17)
= 325,5 + 428
= 753,5
4. AUC =
+
x(21-17)
= 333 + 452
= 785
AUC Kelompok Simvastatin
1. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 204 + 180
= 384
2. AUC =
+
x (17-14) +
68
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 196,5 + 176
= 372,5
3. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 181,5 + 168
= 349,5
4. AUC =
+
x (17-14) +
= 204 + 190
= 394
AUC Kelompok Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 100 mg/kgbb
1. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 177 + 188
= 365
2. AUC =
+
x (17-14) +
= 285 + 330
= 615
3. AUC =
+
x (17-14) +
= 198 + 216
= 414
4. AUC =
+
x (17-14) +
69
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 861 + 234 + 246
= 480
AUC kelompok ekstrak etil asetat daun binahong 200 mg/kgbb
+
1. AUC =
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 234 + 254
= 488
+
2. AUC =
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 322,5 + 366
= 688,5
+
3. AUC
x (17-14) +
+
x(21-17)
= 207 + 218
= 425
4. AUC =
+
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 270 + 298
= 568
AUC Kelompok Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 400 mg/kgbb
1. AUC =
+
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 204 + 186
70
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 390
2. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 192 + 170
= 362
3. AUC =
+
x (17-14) +
= 222 + 206
= 428
4. AUC =
+
x (17-14) +
= 241,5 + 214
= 455,5
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Hasil statistika perhitungan rata-rata AUC kolesterol marmot
ANOVA
Nilai AUC
Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
474896.677
5
94979.335
Within Groups
128392.313
18
7132.906
Total
603288.990
23
F
Sig.
13.316
.000
Nilai AUC
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Kelompok Uji
N
1
2
3
Normal
4
272.25000
Simvastatin
4
375.00000
375.00000
EEADB 400 mg/kgbb
4
408.87500
408.87500
EEADB 100 mg/kgbb
4
468.50000
EEADB 200 mg/kgbb
4
542.37500
CMC Na
4
Sig.
542.37500
718.62500
.249
.103
.078
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
72
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. Tabel hasil SPSS rata-rata penurunan kolesterol.
Descriptives
95% Confidence
Interval for Mean
N
SD
SE
Min.
Lower
Upper
Bound
Bound
Max.
Normal
4
34.7500
5.12348
2.56174 26.5974
42.9026
29.00
40.00
CMC Na
4
27.5000
4.93288
2.46644 19.6507
35.3493
22.00
33.00
Simvastatin
4
34.2500
5.73730
2.86865 25.1207
43.3793
29.00
42.00
4
27.2500
8.53913
4.26956 13.6623
40.8377
20.00
39.00
4
32.2500
7.50000
3.75000 20.3158
44.1842
25.00
42.00
4
31.5000 10.14889
5.07445 15.3508
47.6492
22.00
43.00
24
31.2500
7.09102
1.44745 28.2557
34.2443
20.00
43.00
Normal
4
34.5000
4.65475
2.32737 27.0933
41.9067
30.00
39.00
CMC Na
4 101.2500 14.99722
7.49861 77.3861 125.1139
80.00
114.00
Simvastatin
4
75.0000
2.73861 66.2845
83.7155
67.00
79.00
4
80.5000 15.75860
7.87930 55.4246 105.5754
65.00
101.00
4
93.2500 16.85972
8.42986 66.4224 120.0776
76.00
115.00
4
82.7500
7.88987
3.94493 70.1955
95.3045
74.00
92.00
77.8750 24.16126
4.93190 67.6726
88.0774
30.00
115.00
34.7500
2.28674 27.4726
42.0274
30.00
40.00
EEADB 100
Hari 0
Mean
mg/Kgbb
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
EEADB 100
Hari ke-
mg/Kgbb
14
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
24
5.47723
Normal
4
CMC Na
4 104.5000 16.46208
8.23104 78.3052 130.6948
80.00
115.00
Simvastatin
4
56.0000
3.65148
1.82574 50.1897
61.8103
52.00
60.00
4
68.5000 15.75860
7.87930 43.4246
93.5754
53.00
89.00
4
78.7500 16.35797
8.17899 52.7208 104.7792
62.00
100.00
4
60.0000
7.25718
3.62859 48.4522
71.5478
52.00
69.00
67.0833 24.35948
4.97236 56.7972
77.3694
30.00
115.00
EEADB 100
Hari ke-
mg/Kgbb
17
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
24
4.57347
73
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. (Lanjutan)
Normal
4
CMC Na
Simvastatin
EEADB 100
Hari ke-
mg/Kgbb
21
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
41.7510
31.00
40.00
4 100.5000 16.29928
8.14964 74.5642 126.4358
78.00
113.00
4
33.2500
2.75379
1.37689 28.8681
37.6319
30.00
36.00
4
54.0000 15.25341
7.62671 29.7284
78.2716
41.00
76.00
4
63.2500 15.50000
7.75000 38.5860
87.9140
47.00
83.00
4
37.0000
3.36650
1.68325 31.6431
42.3569
33.00
41.00
53.8333 26.07625
5.32279 42.8223
64.8444
30.00
113.00
24
35.0000
4.24264
2.12132 28.2490
ANOVA
Sum of
Squares
Hari 0
Between
Groups
209.500
5
41.900
Within
Groups
947.000
18
52.611
1156.500
23
10812.375
5
2162.475
2614.250
18
145.236
Total
13426.625
23
Between
Groups
11026.333
5
2205.267
2621.500
18
145.639
Total
13647.833
23
Between
Groups
13312.833
5
2662.567
2326.500
18
129.250
15639.333
23
Total
Between
Groups
Hari ke-14
Hari ke-17
Hari ke-21
Mean
Square
Df
Within
Groups
Within
Groups
Within
Groups
Total
F
Sig.
.796
.566
14.889
.000
15.142
.000
20.600
.000
74
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. (Lanjutan)
Hari 0
Tukey HSDa
Kelompok Uji
Subset for alpha
= 0.05
N
1
Ekstrak 100 mg/Kg BB
CMC Na
Ekstrak 400 mg/kgbb
Ekstrak 200 mg/kgbb
Simvastatin
Normal
4
4
4
4
4
4
27.2500
27.5000
31.5000
32.2500
34.2500
34.7500
Sig.
.691
Means for groups in homogeneous subsets are
displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
Hari ke-14
Tukey HSDa
Kelompok Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
Normal
4
Simvastatin
4
75.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB
4
80.5000
Ekstrak 400 mg/kgbb
4
82.7500
Ekstrak 200 mg/kgbb
4
93.2500
CMC Na
4
101.2500
Sig.
34.5000
1.000
.061
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
75
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. (Lanjutan)
Hari ke-17
Tukey HSDa
Kelompok Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
Normal
4
34.7500
Simvastatin
4
56.0000
56.0000
Ekstrak 400 mg/kgbb
4
60.0000
60.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB
4
68.5000
Ekstrak 200 mg/kgbb
4
78.7500
CMC Na
4
78.7500
104.5000
Sig.
.077
.132
.068
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
Hari ke-21
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Kelompok Uji
N
1
2
Simvastatin
4
33.2500
Normal
4
35.0000
Ekstrak 400 mg/kgbb
4
37.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB
4
54.0000
Ekstrak 200 mg/kgbb
4
CMC Na
4
Sig.
3
54.0000
63.2500
100.5000
.153
.854
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
76
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 16. Laporan hasil pengukuran kadar kolesterol serum marmot
77
Universitas Sumatera Utara
48
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Surat etikal klirens
49
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar tumbuhan binahong dan daun binahong segar
Gambar tumbuhan binahong
Gambar daun binahong segar
50
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Gambar simplisia daun binahong dan serbuk simplisia daun
binahong
Gambar simplisia daun binahong
Gambar serbuk simplisia daun binahong
51
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Gambar ekstrak etil asetat daun binahong
52
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Gambar pemeriksaan mikroskopik daun binahong segar dan serbuk
simplisia daun binahong
1
2
3
4
5
6
7
Gambar penampang melintang daun binahong segar
Keterangan (perbesaran 10x40)
1. Kutikula
2. Epidermis atas
3. Jaringan palisade
4. Jaringan spons
5. Kristal kalsium oksalat bentuk druss
6. Epidemis bawah
7. Stomata
53
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. (Lanjutan)
1
2
3
Gambar penampang membujur daun binahong segar
Keterangan (perbesaran 10x40)
1. Stomata tipe parasitik
2. Sel tetangga
3. Sel penutup
54
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. (Lanjutan)
1
2
3
Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun binahong
Keterangan (Perbesaran 10x40)
1. Stomata tipe parasitik
2. Berkas pengangkut penebalan spiral
3. Kristal kalsium oksalat tipe druse
55
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Hasil karakterisasi simplisia daun binahong
1. Penetapan kadar air
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
5,0038
5,0071
5,0043
Volume awal (ml)
1,3
1,7
2,0
e
% kadar air =
e
−
1. % kadar air =
, − ,
,
x 100% = 7,99%
2. % kadar air =
, − ,
,
x 100% = 5,99%
3. % kadar air =
, − ,
,
x 100% = 7,99%
% rata-rata kadar air =
,
e
%+ ,
Volume akhir (ml)
1,7
2,0
2,4
e
%+ ,
x 100%
%
x 100% = 7,32%
2. Penetapan kadar sari larut air
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
5,0081
5,0085
5,0098
% kadar sari larut air =
1. % kadar sari larut air =
2. % kadar sari larut air =
,
,
,
,
e
Berat sari (g)
0,2259
0,275
0,2856
e
x
x
e
x
x 100%
x 100% = 22,55%
x 100% = 27,45%
56
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. (Lanjutan)
3. % kadar sari larut air =
,
,
% rata-rata kadar sari larut air =
,
x
x 100% = 28,50%
%+
,
%+
,
%
x 100% = 26,16%
3. Penetapan kadar sari larut etanol
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
5,0022
5,0028
5,0026
% kadar sari larut etanol =
1. % kadar sari larut etanol =
,
,
2. % kadar sari larut etanol =
,
3. % kadar sari larut etanol =
,
Berat sari (g)
0,2524
0,2515
0,2725
e
e
x
,
% rata-rata kadar sari larut etanol =
,
x
%+
x 100%
x 100% = 25,22%
x
,
x
e
x 100% = 25,13%
x 100% = 27,23%
,
%+
,
%
x 100%
= 25,86%
4. Penetapan kadar abu total
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
2,0032
2,0035
2,0030
Berat abu (g)
0,2524
0,2515
0,2725
57
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. (Lanjutan)
% kadar abu total =
1. % kadar abu total =
2. % kadar abu total =
3. % kadar abu total =
,
,
,
,
,
,
% rata-rata kadar abu total =
e
e
e
x 100%
x 100% = 6,35 %
x 100% = 5,80 %
x 100% = 6,91 %
,
%+ ,
%+ ,
%
x 100% = 6,35 %
5. Perhitungan Penetapan kadar abu tidak larut asam
No.
1.
2.
3.
Berat sampel (g)
2,0032
2,0035
2,0030
Berat abu (g)
0,0116
0,0128
0,0112
% kadar abu tidak larut asam =
1. % kadar abu tidak larut asam =
2. % kadar abu tidak larut asam =
3. % kadar abu tidak larut asam =
% rata-rata kadar abu total =
,
,
,
e
x 100%
e
x 100% = 0,57 %
,
x 100%= 0,63 %
,
,
,
e
x 100% = 0,56 %
%+ ,
%+ ,
%
x 100% = 0,58%
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Bagan alur pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong
(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).
Serbuk simplisia (berat 1000 gram)
Dimasukkan ke dalam bejana tertutup
Ditambahkan pelarut etilasetat (75 bagian)
Ditutup rapat
Didiamkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya sinar matahari, diaduk
Disaring
Maserat
Ampas
Diremasesi dengan
Pelarut etil asetat (25
bagian),
sesekali
diaduk
Didiamkan selama 2
hari terlindung dari
cahaya matahari
Disaring
Maserat
Ampas
Digabung
Dpekatkan diatas penangas air
Ekstrak kental (berat 43,8 gram)
59
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Gambar alat dan objek yang digunakan
Microlab 300
Larutan reagensia kolesterol
60
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. (Lanjutan)
Marmot (Hewan uji)
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Bagan alur pengujian efek penurunan kolesterol
Penyiapan hewan uji hiperkolesterolemia
Marmot
Diinduksi dengan campuran kuning telur
(dosis 1% bb) dengan lemak kambing 15
g selama 14 hari secara oral
Diukur kadar kolesterolnya
Marmot Hiperkolesterolemia
Pengujian Efek Penurunan Kolesterol
Marmot
Dikondisikan selama 2 minggu
Diukur kadar kolesterolnya
Kadar kolesterol normal
Diberi perlakuan hiperkolesterol selama 14 hari
Diukur kadar kolesterol
Kadar hiperkolesterolemia
Diberi perlakuan dengan pemberian suspensi
CMC Na, simvastatin dan suspensi ekstrak etil
asetat daun binahong selama 7 hari mulai dari
hari ke-15
Diukur kadar kolesterol pada hari ke-17 dan hari
ke-21
Kadar kolesterol
62
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (Lanjutan)
Pengambilan darah marmot
Marmot
Dipuasakan selama 10-18 jam
Dicukur bulu kakinya
Dibersihkan dengan alkohol
Dipotong
berdarah
dengan
pemotong
kuku
sampai
Darah Marmot
Ditampung dalam mikrotube
Didiamkan pada suhu kamar selama 30 menit
Disentrifuge selama 15 menit kecepatan 3000
rpm
Diambil lapisan atas
Darah diukur
63
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Kadar kolesterol rata-rata darah marmot selama penelitian (mg/dl)
Kelompok
Normal
Rata-rata
CMC Na
Rata-rata
Simvastatin
Rata-rata
Ekstrak etil
asetat daun
binahong
100
mg/kgbb
Rata-rata
Ekstrak etil
asetat daun
binahong
200
mg/kgbb
Rata-rata
Ekstrak etil
asetat daun
binahong
400
mg/kgbb
Rata-rata
Hari 0
(sebelum
induksi)
32
38
29
40
34.75
25
33
30
22
27.5
29
31
35
42
34.25
22
28
20
Kadar Kolesterol
Hari ke-14
Hari ke-17
(Hiperkolesterol
(Pemberian
emia)
obat)
30
30
38
37
31
32
39
40
34.5
34.75
114
110
80
80
102
115
109
113
101.25
104.5
78
58
79
52
67
54
76
60
75
56
65
53
101
89
72
60
Hari ke-21
(Pemberian
obat)
31
37
32
40
35
112
78
99
113
100.5
32
36
30
35
33.25
41
76
48
39
84
72
51
27.25
28
25
34
80.5
85
115
76
68.5
71
100
62
54
56
83
47
42
97
82
67
32.25
43
37
24
93.25
79
74
86
78.75
57
52
62
63.25
36
33
41
22
92
69
38
31.5
82.75
60
37
64
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Contoh perhitungan dosis
Konversi perhitungan dosis antar jenis hewan
Mencit
20g
Tikus
200 g
Marmot
400 g
Kelinci
1,5 g
Kucing 2
kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
Mencit
20g
1,0
Tikus
200 g
7,01
Marmot
400 g
12,29
Kelinci
1,5 g
27,8
Kucing
2 kg
29,7
Kera
4 kg
64,1
Anjing
12 kg
124,2
Manusia
70 kg
387,0
0,14
1,0
1,74
3,3
4,2
9,2
17,8
56,0
0,08
0,57
1,0
2,25
2,4
5,2
10,2
31,5
0,04
0,25
0,44
1,0
1,06
2,4
4,4
14,2
0,03
0,23
0,42
0,92
1,0
2,2
4,1
13,0
0,016
0,11
0,19
0,42
0,45
1,0
1,9
6,1
0,008
0,06
0,10
0,22
0,24
0,52
1,0
3,1
0,0026
0,018
0,031
0,07
0,013
0,16
0,32
1,0
(Suhardjono, 1995)
Contoh perhitungan dosis simvastatin 0,01% (Rangkuti, 2015)
Dosis manusia (berat 70 kg) = 10 mg
Dosis marmot (berat 400 g) = 0,031 x 10 = 0,31 mg
= 1000/400 x 0,31 mg
= 0, 775 mg/kgbb
= 0,8 mg/kgbb
Suspensi simvastatin sebanyak 0,8 mg/kgbb dibuat dalam sediaan 10 ml, dengan
penimbangan 50 mg maka dibuat dalam sediaan
,
= 625 ml.
/
Dosis untuk marmot (berat 400 g) = 400 g x 0,8 mg/1000 g = 0,32 mg
Jadi volume suspensi yang diberikan
,
,
/
= 4 ml
Dosis suspensi ekstrak etil asetat daun binahong yang akan dibuat adalah 100
mg/kgbb, 200 mg/kgbb, dan 400 mg/kgbb.
65
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (Lanjutan)
a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong:
Timbang 100 mg, 200 mg, dan 400 mg ekstrak etil asetat daun binahong.
Masing-masing dilarutkan dalam 10 ml suspensi CMC.
b. Berapa volume suspensi ekstrak etil asetat daun binahong yang akan diberikan
pada marmot hiperkolesterol?
Misal: BB marmot = 400 g
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 100 mg/kgbb
=
x
mg = 40 mg
Volume larutan yang diberikan =
ml = 4 ml
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 200 mg/kgbb
=
x
mg = 80 mg
Volume larutan yang diberikan =
x
x
ml = 4 ml
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 400 mg/kgbb
=
x4
mg =
0 mg
Volume larutan yang diberikan =
x
ml = 4 ml
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Perhitungan nilai AUC kadar kolesterol serum darah marmot
Pengu
langa
n
1
2
3
4
Ratarata
±
SD
CMC
Na
Normal
212
780
317,5
556
222,5
753,5
337
785
272,25 718,625
±
±
64,149 109,294
Kelompok Uji
Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong
Simvasta
100
200
400
tin
mg/kgbb
mg/kgbb
mg/kgbb
384
365
488
390
372,5
615
688,5
362
349,5
414
425
428
394
480
568
455,5
375
468,5
542,375
408,875
±
±
±
±
19,135
108,438
113,641
41,203
AUC Kelompok Normal
1.
+
AUC =
x (17-14) +
+
x (21-17)
x (17-14) +
+
x (21-17)
+
x (21-17)
+4
x (21-17)
= 90 + 122
= 212
2.
+
AUC =
= 112,5 + 148
= 317,5
3.
+
AUC
=x (17-14) +
= 94,5 + 128
= 222,5
4.
AUC =
+
x (17-14) +
= 118,5 + 160
= 337
67
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
AUC Kelompok CMC Na
1. AUC =
+
+
x (17-14) +
x (21-17)
= 336 + 444
= 780
2. AUC =
+
+
x (17-14) +
x (21-17)
= 240 + 316
= 556
3. AUC =
+
x (17-14) +
+
x (17-14) +
+
x (21-17)
= 325,5 + 428
= 753,5
4. AUC =
+
x(21-17)
= 333 + 452
= 785
AUC Kelompok Simvastatin
1. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 204 + 180
= 384
2. AUC =
+
x (17-14) +
68
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 196,5 + 176
= 372,5
3. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 181,5 + 168
= 349,5
4. AUC =
+
x (17-14) +
= 204 + 190
= 394
AUC Kelompok Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 100 mg/kgbb
1. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 177 + 188
= 365
2. AUC =
+
x (17-14) +
= 285 + 330
= 615
3. AUC =
+
x (17-14) +
= 198 + 216
= 414
4. AUC =
+
x (17-14) +
69
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 861 + 234 + 246
= 480
AUC kelompok ekstrak etil asetat daun binahong 200 mg/kgbb
+
1. AUC =
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 234 + 254
= 488
+
2. AUC =
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 322,5 + 366
= 688,5
+
3. AUC
x (17-14) +
+
x(21-17)
= 207 + 218
= 425
4. AUC =
+
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 270 + 298
= 568
AUC Kelompok Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 400 mg/kgbb
1. AUC =
+
+
x (17-14) +
x(21-17)
= 204 + 186
70
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 390
2. AUC =
+
x (17-14) +
+
x(21-17)
+
x(21-17)
+
x(21-17)
= 192 + 170
= 362
3. AUC =
+
x (17-14) +
= 222 + 206
= 428
4. AUC =
+
x (17-14) +
= 241,5 + 214
= 455,5
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Hasil statistika perhitungan rata-rata AUC kolesterol marmot
ANOVA
Nilai AUC
Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
474896.677
5
94979.335
Within Groups
128392.313
18
7132.906
Total
603288.990
23
F
Sig.
13.316
.000
Nilai AUC
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Kelompok Uji
N
1
2
3
Normal
4
272.25000
Simvastatin
4
375.00000
375.00000
EEADB 400 mg/kgbb
4
408.87500
408.87500
EEADB 100 mg/kgbb
4
468.50000
EEADB 200 mg/kgbb
4
542.37500
CMC Na
4
Sig.
542.37500
718.62500
.249
.103
.078
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
72
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. Tabel hasil SPSS rata-rata penurunan kolesterol.
Descriptives
95% Confidence
Interval for Mean
N
SD
SE
Min.
Lower
Upper
Bound
Bound
Max.
Normal
4
34.7500
5.12348
2.56174 26.5974
42.9026
29.00
40.00
CMC Na
4
27.5000
4.93288
2.46644 19.6507
35.3493
22.00
33.00
Simvastatin
4
34.2500
5.73730
2.86865 25.1207
43.3793
29.00
42.00
4
27.2500
8.53913
4.26956 13.6623
40.8377
20.00
39.00
4
32.2500
7.50000
3.75000 20.3158
44.1842
25.00
42.00
4
31.5000 10.14889
5.07445 15.3508
47.6492
22.00
43.00
24
31.2500
7.09102
1.44745 28.2557
34.2443
20.00
43.00
Normal
4
34.5000
4.65475
2.32737 27.0933
41.9067
30.00
39.00
CMC Na
4 101.2500 14.99722
7.49861 77.3861 125.1139
80.00
114.00
Simvastatin
4
75.0000
2.73861 66.2845
83.7155
67.00
79.00
4
80.5000 15.75860
7.87930 55.4246 105.5754
65.00
101.00
4
93.2500 16.85972
8.42986 66.4224 120.0776
76.00
115.00
4
82.7500
7.88987
3.94493 70.1955
95.3045
74.00
92.00
77.8750 24.16126
4.93190 67.6726
88.0774
30.00
115.00
34.7500
2.28674 27.4726
42.0274
30.00
40.00
EEADB 100
Hari 0
Mean
mg/Kgbb
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
EEADB 100
Hari ke-
mg/Kgbb
14
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
24
5.47723
Normal
4
CMC Na
4 104.5000 16.46208
8.23104 78.3052 130.6948
80.00
115.00
Simvastatin
4
56.0000
3.65148
1.82574 50.1897
61.8103
52.00
60.00
4
68.5000 15.75860
7.87930 43.4246
93.5754
53.00
89.00
4
78.7500 16.35797
8.17899 52.7208 104.7792
62.00
100.00
4
60.0000
7.25718
3.62859 48.4522
71.5478
52.00
69.00
67.0833 24.35948
4.97236 56.7972
77.3694
30.00
115.00
EEADB 100
Hari ke-
mg/Kgbb
17
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
24
4.57347
73
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. (Lanjutan)
Normal
4
CMC Na
Simvastatin
EEADB 100
Hari ke-
mg/Kgbb
21
EEADB 200
mg/kgbb
EEADB 400
mg/kgbb
Total
41.7510
31.00
40.00
4 100.5000 16.29928
8.14964 74.5642 126.4358
78.00
113.00
4
33.2500
2.75379
1.37689 28.8681
37.6319
30.00
36.00
4
54.0000 15.25341
7.62671 29.7284
78.2716
41.00
76.00
4
63.2500 15.50000
7.75000 38.5860
87.9140
47.00
83.00
4
37.0000
3.36650
1.68325 31.6431
42.3569
33.00
41.00
53.8333 26.07625
5.32279 42.8223
64.8444
30.00
113.00
24
35.0000
4.24264
2.12132 28.2490
ANOVA
Sum of
Squares
Hari 0
Between
Groups
209.500
5
41.900
Within
Groups
947.000
18
52.611
1156.500
23
10812.375
5
2162.475
2614.250
18
145.236
Total
13426.625
23
Between
Groups
11026.333
5
2205.267
2621.500
18
145.639
Total
13647.833
23
Between
Groups
13312.833
5
2662.567
2326.500
18
129.250
15639.333
23
Total
Between
Groups
Hari ke-14
Hari ke-17
Hari ke-21
Mean
Square
Df
Within
Groups
Within
Groups
Within
Groups
Total
F
Sig.
.796
.566
14.889
.000
15.142
.000
20.600
.000
74
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. (Lanjutan)
Hari 0
Tukey HSDa
Kelompok Uji
Subset for alpha
= 0.05
N
1
Ekstrak 100 mg/Kg BB
CMC Na
Ekstrak 400 mg/kgbb
Ekstrak 200 mg/kgbb
Simvastatin
Normal
4
4
4
4
4
4
27.2500
27.5000
31.5000
32.2500
34.2500
34.7500
Sig.
.691
Means for groups in homogeneous subsets are
displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
Hari ke-14
Tukey HSDa
Kelompok Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
Normal
4
Simvastatin
4
75.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB
4
80.5000
Ekstrak 400 mg/kgbb
4
82.7500
Ekstrak 200 mg/kgbb
4
93.2500
CMC Na
4
101.2500
Sig.
34.5000
1.000
.061
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
75
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. (Lanjutan)
Hari ke-17
Tukey HSDa
Kelompok Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
Normal
4
34.7500
Simvastatin
4
56.0000
56.0000
Ekstrak 400 mg/kgbb
4
60.0000
60.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB
4
68.5000
Ekstrak 200 mg/kgbb
4
78.7500
CMC Na
4
78.7500
104.5000
Sig.
.077
.132
.068
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
Hari ke-21
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Kelompok Uji
N
1
2
Simvastatin
4
33.2500
Normal
4
35.0000
Ekstrak 400 mg/kgbb
4
37.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB
4
54.0000
Ekstrak 200 mg/kgbb
4
CMC Na
4
Sig.
3
54.0000
63.2500
100.5000
.153
.854
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
76
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 16. Laporan hasil pengukuran kadar kolesterol serum marmot
77
Universitas Sumatera Utara