Uji Antihiperkolesterolemia Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) pada Serum Darah Marmot
(2)
(3)
Lampiran 3. Gambar tumbuhan binahong dan daun binahong segar
Gambar tumbuhan binahong
(4)
Lampiran 4. Gambar simplisia daun binahong dan serbuk simplisia daun
binahong
Gambar simplisia daun binahong
(5)
(6)
Lampiran 6. Gambar pemeriksaan mikroskopik daun binahong segar dan serbuk
simplisia daun binahong
Gambar penampang melintang daun binahong segar
Keterangan (perbesaran 10x40)
1. Kutikula 2. Epidermis atas 3. Jaringan palisade 4. Jaringan spons
5. Kristal kalsium oksalat bentuk druss 6. Epidemis bawah
7. Stomata
2 3 4 5 6 7 1
(7)
Lampiran 6. (Lanjutan)
Gambar penampang membujur daun binahong segar
Keterangan (perbesaran 10x40)
1. Stomata tipe parasitik 2. Sel tetangga
3. Sel penutup
3 2 1
(8)
Lampiran 6. (Lanjutan)
Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun binahong
Keterangan (Perbesaran 10x40)
1. Stomata tipe parasitik
2. Berkas pengangkut penebalan spiral 3. Kristal kalsium oksalat tipe druse
3 2 1
(9)
Lampiran 7. Hasil karakterisasi simplisia daun binahong
1. Penetapan kadar air
No. Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml)
1. 5,0038 1,3 1,7
2. 5,0071 1,7 2,0
3. 5,0043 2,0 2,4
% kadar air = e − e
e e x 100%
1. % kadar air = , − ,
, x 100% = 7,99%
2. % kadar air = , − ,
, x 100% = 5,99%
3. % kadar air = , − ,
, x 100% = 7,99%
% rata-rata kadar air = , %+ , %+ , % x 100% = 7,32%
2. Penetapan kadar sari larut air
No. Berat sampel (g) Berat sari (g)
1. 5,0081 0,2259
2. 5,0085 0,275
3. 5,0098 0,2856
% kadar sari larut air = e
e e
x
x 100%1. % kadar sari larut air = ,
,
x
x 100% = 22,55%2. % kadar sari larut air = ,
(10)
Lampiran 7. (Lanjutan)
3. % kadar sari larut air = ,
,
x
x 100% = 28,50%% rata-rata kadar sari larut air = , %+ , %+ , % x 100% = 26,16%
3. Penetapan kadar sari larut etanol
No. Berat sampel (g) Berat sari (g)
1. 5,0022 0,2524
2. 5,0028 0,2515
3. 5,0026 0,2725
% kadar sari larut etanol = e
e e
x
x 100%1. % kadar sari larut etanol = ,
,
x
x 100% = 25,22%2. % kadar sari larut etanol = ,
,
x
x 100% = 25,13%3. % kadar sari larut etanol = ,
,
x
x 100% = 27,23%% rata-rata kadar sari larut etanol = , %+ , %+ , % x 100%
= 25,86%
4. Penetapan kadar abu total
No. Berat sampel (g) Berat abu (g)
1. 2,0032 0,2524
2. 2,0035 0,2515
(11)
Lampiran 7. (Lanjutan)
% kadar abu total = e
e e x 100%
1. % kadar abu total = ,
, x 100% = 6,35 %
2. % kadar abu total = ,
, x 100% = 5,80 %
3. % kadar abu total = ,
, x 100% = 6,91 %
% rata-rata kadar abu total = , %+ , %+ , % x 100% = 6,35 %
5. Perhitungan Penetapan kadar abu tidak larut asam
No. Berat sampel (g) Berat abu (g)
1. 2,0032 0,0116
2. 2,0035 0,0128
3. 2,0030 0,0112
% kadar abu tidak larut asam = e
e e x 100%
1. % kadar abu tidak larut asam = ,
, x 100% = 0,57 %
2. % kadar abu tidak larut asam = ,
, x 100%= 0,63 %
3. % kadar abu tidak larut asam = ,
, x 100% = 0,56 %
(12)
Dimasukkan ke dalam bejana tertutup
Lampiran 8. Bagan alur pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong
(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).
Ampas Maserat
Digabung
Dpekatkan diatas penangas air Ekstrak kental (berat 43,8 gram)
Serbuk simplisia (berat 1000 gram)
Ditambahkan pelarut etilasetat (75 bagian) Ditutup rapat
Didiamkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sinar matahari, diaduk
Disaring
Maserat Ampas
Diremasesi dengan Pelarut etil asetat (25 bagian), sesekali diaduk
Didiamkan selama 2 hari terlindung dari cahaya matahari Disaring
(13)
Lampiran 9. Gambar alat dan objek yang digunakan
Microlab 300
(14)
Lampiran 9. (Lanjutan)
(15)
Lampiran 10. Bagan alur pengujian efek penurunan kolesterol
Penyiapan hewan uji hiperkolesterolemia
Pengujian Efek Penurunan Kolesterol Marmot
Marmot Hiperkolesterolemia
Diinduksi dengan campuran kuning telur (dosis 1% bb) dengan lemak kambing 15 g selama 14 hari secara oral
Diukur kadar kolesterolnya
Marmot
Dikondisikan selama 2 minggu Diukur kadar kolesterolnya Kadar kolesterol normal
Diberi perlakuan hiperkolesterol selama 14 hari Diukur kadar kolesterol
Kadar hiperkolesterolemia
Diberi perlakuan dengan pemberian suspensi CMC Na, simvastatin dan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong selama 7 hari mulai dari hari ke-15
Diukur kadar kolesterol pada hari ke-17 dan hari ke-21
(16)
Lampiran 10. (Lanjutan)
Pengambilan darah marmot Marmot
Darah Marmot
Diambil lapisan atas Dicukur bulu kakinya Dibersihkan dengan alkohol
Dipotong dengan pemotong kuku sampai berdarah
Ditampung dalam mikrotube
Didiamkan pada suhu kamar selama 30 menit Disentrifuge selama 15 menit kecepatan 3000 rpm
Dipuasakan selama 10-18 jam
(17)
Lampiran 11. Kadar kolesterol rata-rata darah marmot selama penelitian (mg/dl) Kelompok Kadar Kolesterol Hari 0 (sebelum induksi) Hari ke-14 (Hiperkolesterol emia) Hari ke-17 (Pemberian obat) Hari ke-21 (Pemberian obat) Normal
32 30 30 31
38 38 37 37
29 31 32 32
40 39 40 40
Rata-rata 34.75 34.5 34.75 35
CMC Na
25 114 110 112
33 80 80 78
30 102 115 99
22 109 113 113
Rata-rata 27.5 101.25 104.5 100.5
Simvastatin
29 78 58 32
31 79 52 36
35 67 54 30
42 76 60 35
Rata-rata 34.25 75 56 33.25
Ekstrak etil asetat daun binahong
100 mg/kgbb
22 65 53 41
28 101 89 76
20 72 60 48
39 84 72 51
Rata-rata 27.25 80.5 68.5 54
Ekstrak etil asetat daun binahong
200 mg/kgbb
28 85 71 56
25 115 100 83
34 76 62 47
42 97 82 67
Rata-rata 32.25 93.25 78.75 63.25
Ekstrak etil asetat daun binahong
400 mg/kgbb
43 79 57 36
37 74 52 33
24 86 62 41
22 92 69 38
(18)
Lampiran 12. Contoh perhitungan dosis
Konversi perhitungan dosis antar jenis hewan Mencit 20g Tikus 200 g Marmot 400 g Kelinci 1,5 g Kucing 2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit 20g
1,0 7,01 12,29 27,8 29,7 64,1 124,2 387,0
Tikus 200 g
0,14 1,0 1,74 3,3 4,2 9,2 17,8 56,0
Marmot 400 g
0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5
Kelinci 1,5 g
0,04 0,25 0,44 1,0 1,06 2,4 4,4 14,2
Kucing 2 kg
0,03 0,23 0,42 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0
Kera 4 kg
0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1
Anjing 12 kg
0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1
Manusia 70 kg
0,0026 0,018 0,031 0,07 0,013 0,16 0,32 1,0
(Suhardjono, 1995)
Contoh perhitungan dosis simvastatin 0,01% (Rangkuti, 2015) Dosis manusia (berat 70 kg) = 10 mg
Dosis marmot (berat 400 g) = 0,031 x 10 = 0,31 mg = 1000/400 x 0,31 mg = 0, 775 mg/kgbb = 0,8 mg/kgbb
Suspensi simvastatin sebanyak 0,8 mg/kgbb dibuat dalam sediaan 10 ml, dengan penimbangan 50 mg maka dibuat dalam sediaan
, / = 625 ml.
Dosis untuk marmot (berat 400 g) = 400 g x 0,8 mg/1000 g = 0,32 mg Jadi volume suspensi yang diberikan ,
, / = 4 ml
Dosis suspensi ekstrak etil asetat daun binahong yang akan dibuat adalah 100 mg/kgbb, 200 mg/kgbb, dan 400 mg/kgbb.
(19)
Lampiran 12. (Lanjutan)
a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong:
Timbang 100 mg, 200 mg, dan 400 mg ekstrak etil asetat daun binahong. Masing-masing dilarutkan dalam 10 ml suspensi CMC.
b. Berapa volume suspensi ekstrak etil asetat daun binahong yang akan diberikan pada marmot hiperkolesterol?
Misal: BB marmot = 400 g
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 100 mg/kgbb =
x mg = 40 mg
Volume larutan yang diberikan = x ml = 4 ml
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 200 mg/kgbb
= x mg = 80 mg
Volume larutan yang diberikan = x ml = 4 ml
Jumlah Ekstrak etil asetat daun binahong dosis 400 mg/kgbb
= x 4 mg = 0 mg
(20)
Lampiran 13. Perhitungan nilai AUC kadar kolesterol serum darah marmot
Pengu langa
n
Kelompok Uji Normal CMC
Na
Simvasta tin
Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 100 mg/kgbb 200 mg/kgbb 400 mg/kgbb
1 212 780 384 365 488 390
2 317,5 556 372,5 615 688,5 362
3 222,5 753,5 349,5 414 425 428
4 337 785 394 480 568 455,5
Rata-rata ± SD 272,25 ± 64,149 718,625 ± 109,294 375 ± 19,135 468,5 ± 108,438 542,375 ± 113,641 408,875 ± 41,203
AUC Kelompok Normal 1. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 90 + 122= 212 2. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 112,5 + 148= 317,5
3. AUC + =x (17-14)
+
+x
(21-17) = 94,5 + 128= 222,5 4. AUC =
+
x (17-14)
+
+4x
(21-17) = 118,5 + 160(21)
Lampiran 13. (Lanjutan)
AUC Kelompok CMC Na 1. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 336 + 444= 780 2. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 240 + 316= 556 3. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 325,5 + 428= 753,5 4. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 333 + 452= 785
AUCKelompok Simvastatin 1. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 204 + 180= 384 2. AUC =
+
(22)
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 196,5 + 176 = 372,5
3. AUC = + x (17-14)
+
+x
(21-17) = 181,5 + 168= 349,5 4. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 204 + 190= 394
AUCKelompok Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 100 mg/kgbb 1. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 177 + 188= 365 2. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 285 + 330= 615 3. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 198 + 216= 414
(23)
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 861 + 234 + 246 = 480
AUCkelompok ekstrak etil asetat daun binahong 200 mg/kgbb 1. AUC = + x (17-14)
+
+x
(21-17)= 234 + 254 = 488
2.
AUC =+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 322,5 + 366= 688,5 3. AUC
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 207 + 218= 425 4. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 270 + 298= 568
AUC Kelompok Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 400 mg/kgbb 1. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 204 + 186(24)
Lampiran 13. (Lanjutan)
= 390 2. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 192 + 170= 362 3. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 222 + 206= 428 4. AUC =
+
x (17-14)
+
+x
(21-17) = 241,5 + 214(25)
Lampiran 14. Hasil statistika perhitungan rata-rata AUC kolesterol marmot
ANOVA
Nilai AUC
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 474896.677 5 94979.335 13.316 .000
Within Groups 128392.313 18 7132.906
Total 603288.990 23
Nilai AUC
Tukey HSDa
Kelompok Uji N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Normal 4 272.25000
Simvastatin 4 375.00000 375.00000
EEADB 400 mg/kgbb 4 408.87500 408.87500
EEADB 100 mg/kgbb 4 468.50000
EEADB 200 mg/kgbb 4 542.37500 542.37500
CMC Na 4 718.62500
Sig. .249 .103 .078
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
(26)
Lampiran 15. Tabel hasil SPSS rata-rata penurunan kolesterol.
Descriptives
N Mean SD SE
95% Confidence Interval for Mean
Min. Max. Lower
Bound
Upper Bound
Hari 0
Normal 4 34.7500 5.12348 2.56174 26.5974 42.9026 29.00 40.00
CMC Na 4 27.5000 4.93288 2.46644 19.6507 35.3493 22.00 33.00
Simvastatin 4 34.2500 5.73730 2.86865 25.1207 43.3793 29.00 42.00
EEADB 100
mg/Kgbb 4 27.2500 8.53913 4.26956 13.6623 40.8377 20.00 39.00
EEADB 200
mg/kgbb 4 32.2500 7.50000 3.75000 20.3158 44.1842 25.00 42.00
EEADB 400
mg/kgbb 4 31.5000 10.14889 5.07445 15.3508 47.6492 22.00 43.00
Total 24 31.2500 7.09102 1.44745 28.2557 34.2443 20.00 43.00
Hari ke-14
Normal 4 34.5000 4.65475 2.32737 27.0933 41.9067 30.00 39.00
CMC Na 4 101.2500 14.99722 7.49861 77.3861 125.1139 80.00 114.00
Simvastatin 4 75.0000 5.47723 2.73861 66.2845 83.7155 67.00 79.00
EEADB 100
mg/Kgbb 4 80.5000 15.75860 7.87930 55.4246 105.5754 65.00 101.00
EEADB 200
mg/kgbb 4 93.2500 16.85972 8.42986 66.4224 120.0776 76.00 115.00
EEADB 400
mg/kgbb 4 82.7500 7.88987 3.94493 70.1955 95.3045 74.00 92.00
Total 24 77.8750 24.16126 4.93190 67.6726 88.0774 30.00 115.00
Hari ke-17
Normal 4 34.7500 4.57347 2.28674 27.4726 42.0274 30.00 40.00
CMC Na 4 104.5000 16.46208 8.23104 78.3052 130.6948 80.00 115.00
Simvastatin 4 56.0000 3.65148 1.82574 50.1897 61.8103 52.00 60.00
EEADB 100
mg/Kgbb 4 68.5000 15.75860 7.87930 43.4246 93.5754 53.00 89.00
EEADB 200
mg/kgbb 4 78.7500 16.35797 8.17899 52.7208 104.7792 62.00 100.00
EEADB 400
mg/kgbb 4 60.0000 7.25718 3.62859 48.4522 71.5478 52.00 69.00
(27)
Hari ke-21
Normal 4 35.0000 4.24264 2.12132 28.2490 41.7510 31.00 40.00
CMC Na 4 100.5000 16.29928 8.14964 74.5642 126.4358 78.00 113.00
Simvastatin 4 33.2500 2.75379 1.37689 28.8681 37.6319 30.00 36.00
EEADB 100
mg/Kgbb 4 54.0000 15.25341 7.62671 29.7284 78.2716 41.00 76.00
EEADB 200
mg/kgbb 4 63.2500 15.50000 7.75000 38.5860 87.9140 47.00 83.00
EEADB 400
mg/kgbb 4 37.0000 3.36650 1.68325 31.6431 42.3569 33.00 41.00
Total 24 53.8333 26.07625 5.32279 42.8223 64.8444 30.00 113.00
ANOVA Sum of
Squares Df
Mean
Square F Sig.
Hari 0
Between
Groups 209.500 5 41.900 .796 .566
Within
Groups 947.000 18 52.611
Total 1156.500 23
Hari ke-14
Between
Groups 10812.375 5 2162.475 14.889 .000 Within
Groups 2614.250 18 145.236
Total 13426.625 23
Hari ke-17
Between
Groups 11026.333 5 2205.267 15.142 .000 Within
Groups 2621.500 18 145.639
Total 13647.833 23
Hari ke-21
Between
Groups 13312.833 5 2662.567 20.600 .000 Within
Groups 2326.500 18 129.250
Total 15639.333 23
(28)
Lampiran 15. (Lanjutan)
Hari 0 Tukey HSDa
Kelompok Uji N
Subset for alpha = 0.05
1
Ekstrak 100 mg/Kg BB 4 27.2500
CMC Na 4 27.5000
Ekstrak 400 mg/kgbb 4 31.5000
Ekstrak 200 mg/kgbb 4 32.2500
Simvastatin 4 34.2500
Normal 4 34.7500
Sig. .691
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
Hari ke-14 Tukey HSDa
Kelompok Uji N Subset for alpha = 0.05
1 2
Normal 4 34.5000
Simvastatin 4 75.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB 4 80.5000
Ekstrak 400 mg/kgbb 4 82.7500
Ekstrak 200 mg/kgbb 4 93.2500
CMC Na 4 101.2500
Sig. 1.000 .061
Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
(29)
Lampiran 15. (Lanjutan)
Hari ke-17 Tukey HSDa
Kelompok Uji N Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Normal 4 34.7500
Simvastatin 4 56.0000 56.0000
Ekstrak 400 mg/kgbb 4 60.0000 60.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB 4 68.5000
Ekstrak 200 mg/kgbb 4 78.7500 78.7500
CMC Na 4 104.5000
Sig. .077 .132 .068
Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
Hari ke-21 Tukey HSDa
Kelompok Uji N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Simvastatin 4 33.2500
Normal 4 35.0000
Ekstrak 400 mg/kgbb 4 37.0000
Ekstrak 100 mg/Kg BB 4 54.0000 54.0000
Ekstrak 200 mg/kgbb 4 63.2500
CMC Na 4 100.5000
Sig. .153 .854 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.
(30)
Lampiran 16. Laporan hasil pengukuran kadar kolesterol serum marmot
(31)
DAFTAR PUSTAKA
Aaronson, P.I., dan Ward, J.P.T. (2010). At a Glance Sistem Kardiovaskular. Edisi III. Jakarta: Erlangga. Halaman 79.
Adam, J.M.F. (2006). Dislipemia. Sudoyo, A.W., Setiyohadi, B., Alwi, I., Simadibrata, M.K., dan Setiati, S., editors. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi IV. Jakarta: Departemen Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 1928-1931.
Ajie, R.B. (2015). White Dragon Fruit (Hylocereus undarus) Potensial as Diabetes Mellitus Treatment. J Majority. 4(1):71.
Astuti, S.M., Sakinah, M., Andayani, R., dan Risch, A. (2011). Determination of Saponin Compound from Anredera cordifolia (Ten.) Steenis Plant (Binahong) to Potential Treatment for Several Diseases. Journal of Agricultural Science. 3(4):224-232.
Astuti, S.M. (2012). Skrining Fitokimia Dan Uji Aktifitas Antibiotika Ekstrak etanol Daun, Batang, Bunga Dan Umbi Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Bogor: Balai Besar Pengujian Mutu dan Sertifikasi Obat Hewan (BBPMSOH). Halaman 10.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. (2008). Taksonomi Koleksi Tanaman Obat Kebun Tanaman Obat Citeureup. Jakarta: BPOM RI. Halaman 10.
Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. (2006). Inventaris Tanaman Obat Indonesia (IV). Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 17.
Botham, K.M., dan Mayes, P.A. (2014). Sintesis, Transpor, dan Ekskresi Kolesterol. Murray, R.K, Bender, D.A., Botham, K.M., Kennelly, P.J., Rodwell, V.W., dan Weil, P.A., editors. Biokimia Harper. Edisi XXIX. Jakarta: EGC. Halaman 280-290.
Dalimartha, S., dan Dalimartha, F.A. (2014). Tumbuhan Sakti Atasi Kolesterol. Jakarta: Penebar Swadaya. Halaman 15.
Davey, P. (2005). At A Glance Medicine. Pentejemah: Annisa Rahmalia dan Cut Novianty. Jakarta: Erlangga. Halaman 140-141.
Departemen Kesehatan RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 33.
Departemen Kesehatan RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman XIV, 321-326, 333-337.
(32)
Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan. (2013). Supplemen III Farmakope Herbal Indonesia. Edisi I. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. Halaman xx.
Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants. Journal of Pharmaceutical Sciences 55 (3) : 225-276.
Fauziah, F., Arifin, H., Elisma., dan Agustina, N. (2014). Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Terhadap Kadar Kolesterol Total Darah Pada Mencit Putih Jantan Hiperkolesterolemia. Prosiding Seminar Nasional dan Workshop “Perkembangan Terkini Sains Farmasi dan Klinik IV”: 13-14 Juni 2014; Padang, Sumatera Barat. Padang: Fakultas Farmasi Universitas Andalas. Febriani, D., Mulyanti, D., dan Rismawati, E. (2015). Karakterisasi Simplisia dan
Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata Linn.). Prosiding Penelitian Sivitas Akademika Unisba (Kesehatan dan Farmasi). Bandung: Universitas Islam Bandung. Halaman 475-480.
Guyton, A.C., dan Hall, J.E. (2007). Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi XI. Jakarta: EGC. Halaman 890-893.
Hanani, E. (2015). Analisis Fitokimia. Jakarta: EGC. Halaman 149.
Harmanto, N. (2005). Mengusir Kolesterol Bersama Mahkota Dewa. Jakarta: PT. Agromedia Pustaka. Halaman 16.
Hariana, A. (2013). 262 Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Jakarta: Penebar Swadaya. Halaman 60.
Hermawan, A. (2013). Pengaruh Pemberian Kombinasi Vitamin E dalam Olive Oil Topikal dengan Simvastatin Oral Terhadap Kadar Plasminogen Aktivator Inhibitor-1 (PAI-1) Cairan Peritoneum dan Derajat Adhesi Penelitian Eksperimental pada Wistar yang Dilakukan Abrasi Ileum. Tesis. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Hidayati, I. W. (2009). Uji Aktifitas Salep Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Sebagai Penyembuh Luka Bakar pada Kulit Punggung Kelinci. Skripsi. Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Jazillah, N., Fasya, A.G., Ningsih, R., dan Abtokhi, A. (2014). Uji Toksisitas Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Alchemy. (3)2: 118 – 124.
Kumalasari, E., dan Sulisyani, N. (2011). Aktivitas Antifungi Ekstrak Etanol Batang Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steen.) Terhadap Candida albicans Serta Skrining Fitokimia. Jurnal Ilmiah Kefarmasian 1(2): 51-62.
(33)
Lemmens, R.H.M.J., dan Bunyapraphatsara, N. (eds). (2003). Plant Resources of South East Asia No. 12(3) Medicinal and Poisonous plants 3. Bogor: Porsea Foundation. Halaman 73.
Lestari, D., Sukandar, E.Y., dan Fidrianny, I. (2016). Anredera Cordifolia Leaves Fraction As An Antihyperlipidemia. Asian Journal of Pharmaceutical And Clinical Research. 9(6):82-84.
Mahley, R.W., dan Bersot, T.P. (2012). Goodman & Gilman Dasar Farmakologi Terapi. Edisi X. Volume Dua. Penterjemah: Tim alih bahasa Sekolah Farmasi ITB. Jakarta: EGC. Halaman 943.
Mardiana, L. (2012). Daun Ajaib Tumpas Penyakit. Jakarta: Penebar Swadaya. Halaman 6, 11, 94, 97-99.
Pane, M. (2011). Uji Efek Ekstrak Daun Kemuning (Murraya paniculata (L.) Jack) Sebagai Penurun Kadar Kolesterol Darah Marmot Jantan (Cavia cobaya). Skripsi. Fakultas Farmasi USU Medan.
Prakoso, Z. (2006). Pengaruh Pemberian Vitamin C Terhadap Kadar LDL dan HDL Kolesterol Serum Tikus Wistar Jantan Hiperlipidemia Setelaj Perlakuan Jus Lidah Buaya (Aloe vera Linn.). Skripsi. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Putri,W.S., Warditiani, N.K., dan Larasanty, L.P.F. (2013). Skrining Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.). Jurnal Farmasi Udaya. 2(4): 56-60.
Rangkuti, S. N. (2015). Uji Efektifitas Nanopartikel Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) Sebagai Penurun Kadar Kolesterol Pada Serum Darah Marmot (Cavia cobaya). Skripsi. Fakultas Farmasi USU Medan. Robinson, T. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penterjemah:
Kosasih Padmawinata. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 19, 285.
Setyowati, W.A.E., Ariani, S.R.D., Ashadi., Mulyani, B., dan Rahmawati, C.P. (2014). Skrining Fitokimia dan Identifikasi Komponen Utama Ekstrak Metanol Kulit Durian (Durio zibethinus Murr.) Varietas Petruk. Seminar Nasional Kimia dan Pendidikan Kimia VI: 21 Juni 2014. Surakarta: Universitas Negeri Sebelas Maret.
Silalahi, J. (2006). Makanan Fungsional. Yogyakara: Penerbit Kanisius. Halaman 88–91.
Soesanto, M. (1988). Pemeliharaan, Pembiakan dan Penggunaan Hewan Percobaan di daerah Tropis. Jakarta: UI Press. Halaman 60.
(34)
Suhardjono, D. (1995). Percobaan Hewan Laboratorium. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Halaman 207.
Tan, H. T., dan Rahardja, K. (2002). Obat-Obat Penting, Khasiat, Penggunaan dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi VI. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Halaman 580.
UPT – Balai Informasi Teknologi LIPI. (2009). Kolesterol Tinggi. Http:// www.bit.lipi.go.id. Diakses 20 Desember 2016.
Utami, P., dan Puspaningtyas, D.E. (2013). The Miracle of Herbs. Jakarta: AgroMedia Pustaka. Halaman 37-40.
Wahjuni, S. (2014). Anti-Hiperchlesterolemia of Anredera Cordifolia in Hypercholesterolemia Rat Wistar Through Decrease of Malondialdehyde and 8 Hydroxy-Diguanosine. Indonesian Journal oh Biochemical Sciences 8 (I):4-7.
Waloya, T., Rimbawan., dan Andarwulan, N. (2013). Hubungan Antara Konsumsi Pangan dan Aktivitas Fisik dengan Kadar Kolesterol Darah Pria dan Wanita Dewasa di Bogor. Jurnal Gizi dan Pangan. 8(1): 9-16.
Wirawan, I.M.C. (2013). @BlokDokter. Jakarta: Hours Books (PT. Mizan Publika). Halaman 167.
World Health Organization. (1998). Quality Control Methods For Medicinal Plant Material. Geneva: WHO. Halaman 26-27.
(35)
BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan dengan metode eksperimental yang meliputi tahapan pengumpulan sampel dan pengolahan simplisia, karakterisasi simplisia, skrining fitokimia, pembuatan ekstrak etil asetat, serta uji antihiperkolesterolemia pada serum darah marmot. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara dan Balai Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Sumatera Utara. Analisis data dilakukan dengan menggunakan program statistika SPSS versi 22.
3.1Alat dan Bahan 3.1.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Sentrifuge , Microlab 300 (Merck), microtube, mikropipet (Clinicon), neraca analitik (Mettler Toledo), lemari pengering, pemotong kuku, seperangkat alat destilasi untuk penetapan kadar air, oral sonde, blender (Miyako), mikroskop, spuit, rak tabung reaksi, mortar, stamfer, kertas saring, alumunium foil, alat-alat gelas laboratorium (Iwaki pyrex), kaca objek dan kaca penutup, penangas air.
3.1.2 Bahan
Bahan tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Bahan kimia yang digunakan jika tidak disebutkan adalah berkualitas pro analisa yaitu : etil asetat (brataco), asam klorida pekat, asam nitrat pekat, asam sulfat pekat, asam asetat anhidrida, amil
(36)
alkohol, α-naftol, besi (III) klorida, bismuth nitrat, simvastatin, Na-CMC, kuning telur ayam, lemak kambing, etanol 96%, reagensia kolesterol DIALAB, toluen, kloralhidrat dan air suling.
3.2Penyiapan Bahan Tumbuhan
Penyiapan bahan tumbuhan meliputi pengambilan bahan tumbuhan, identifikasi tumbuhan, pembuatan dan karakterisasi simplisia dan pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong.
3.2.1Pengambilan bahan tumbuhan
Bahan yang digunakan adalah daun binahong yang masih segar. Pengambilan daun binahong dilakukan secara purposif tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan diambil dari Kampung Pondok Bitung, Desa Sukaharja, Kecamatan Cijeruk, Kabupaten Bogor, Jawa Barat.
3.2.2Identifikasi tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor.
3.2.3Pembuatan simplisia
Daun binahong dibersihkan dari kotoran yang melekat, dicuci dengan air bersih, ditiriskan, lalu ditimbang berat basah 20 kg, kemudian dikeringkan di lemari pengering dengan suhu 40-50oC. Daun kering yang ditandai rapuh (bila diremas menjadi hancur) dan diperoleh berat kering 1,2 kg, kemudian diserbuk dengan menggunakan blender. Serbuk simplisia disimpan dalam wadah plastik tertutup rapat.
(37)
3.3 Karakterisasi Simplisia
Pemeriksaan karakterisasi simplisia seperti penetapan kadar air dilakukan menurut prosedur World Health Organization (1998); pemeriksaan makroskopik, mikroskopik, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total dan penetapan kadar abu tidak larut asam dilakukan menurut prosedur Depkes RI (1995).
3.3.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik terhadap simplisia daun binahong meliputi pemeriksaan bentuk, bau, warna, dan rasa dan juga dilakukan pemeriksaan makroskopik terhadap daun binahong segar.
3.3.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap irisan melintang dan membujur daun binahong segar untuk melihat susunan anatomis dari daun binahong. Caranya: dibuat irisan melintang dan membujur dari daun binahong kemudian diletakkan di atas objek gelas lalu ditetesi larutan kloralhidrat, dipanaskan dengan lampu spriritus, dicuci dengan air, ditutup dengan kaca penutup dan dilihat di bawah mikroskop.
Pemeriksaan mikroskopik juga dilakukan terhadap serbuk simplisia daun Binahong untuk melihat fragmen-fragmen pengental dari simplisia tersebut. Sejumlah serbuk simplisia diletakkan merata di atas objek gelas yang telah ditetesi larutan kloralhidrat, ditutupi dengan kaca penutup dan dilihat dibawah mikroskop.
3.3.3 Penetapan kadar air
Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu alas bundar, lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toluene dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan
(38)
ketelitian 0,05 ml. kemudian ke dalam labu tersebut dimasukkan 5 gram serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluene mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen.
3.3.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air
Sebanyak 5 gram serbuk simplisia dimasukkan dalam labu tersumbat, dimaserasi dengan 100 ml air kloroform P (2,5 ml kloroform dalam 1000 ml air) selama 24 jam, sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian dibiarkan Selama 18 jam. Disaring, sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara, sisanya dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Hitung kadar dalam persen sari yang larut dalam air, terhadap bahan yang telah dikeringkan udara.
3.3.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
Sebanyak 5 gram serbuk simplisia dimasukkan dalam labu tersumbat, dimaserasi dengan 100 ml etanol 95% selama 24 jam, sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Disaring, kemudian sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan dangkal berdasarkan rata-rata cawam yang telah ditara sebelumnya, kemudian sisanya dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Hitung dalam persen kadar sari yang larut dalam
(39)
etanol terhadap bahan yang telah dikeringkan udara.
3.3.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 gram serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian dirata-ratakan. Krus pijar pada suhu 600oC sampai arang habis. Didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan udara.
3.3.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam
Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu total didihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, dipijar pada suhu 600oC sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan.
3.4Pembuatan Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong
Sebanyak 1000 g (10 bagian) serbuk simplisia dimasukkan ke dalam sebuah bejana, dituangi dengan 7,5 liter (75 bagian) etil asetat, ditutup dan dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sering diaduk. Setelah 5 hari sari diserkai, ampas diperas dan dicuci dengan etil asetat sebanyak 2,5 liter hingga diperoleh 100 bagian. Sari dipindahkan ke dalam bejana tertutup, dibiarkan ditempat sejuk dan terlindung dari cahaya selama 2 hari. Dienaptuangkan dan disaring. Pemekatan ekstrak dilakukan dengan diuapkan diatas penangas air sampai diperoleh ekstrak kental etil asetat daun binahong (Depkes, RI., 1979).
(40)
3.5Pembuatan Larutan Pereaksi
Pembuatan pereaksi Bourchardat, pereaksi Mayer, pereaksi Dragendroff, pereaksi Molisch, klorida 1%, pereaksi Liebermann-Burchard, larutan asam sulfat 2N, larutan kloralhidrat, larutan asam klorida 2N,larutan timbal (II) asetat 0,4 m, larutan besi (III) klorida 1%(Depkes RI, 1995).
3.5.1Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,4 g raksa (II) klorida dilarutkan dalam air suling hingga 60 ml pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 g kalium iodida lalu dilarutkan dalam 10 ml air suling. Kedua larutan dicampurkan dan ditambahkan air suling hingga diperoleh larutan 100 ml.
3.5.2 Pereaksi Dragendroff
Sebanyak 0,8 g bismuth (II) nitrat ditmbang, dilarutkan dalam 20 ml asam nitrat pekat, lalu ditimbang sebanyak 27,2 g kalium iodida dalam 50 ml air suling. Kedua larutan dicampurkan dan didiamkan sampai memisah sempurna, larutan jernih diencerkan dalam air suling hingga diperoleh larutan 100 ml.
3.5.3Pereaksi Bourchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang, dilarutkan dalam air suling secukupnya, lalu ditambahkan 2 g iodium kemudian ditambahkan air suling hingga diperoleh larutan 100 ml.
3.5.4Pereaksi Molisch
Sebanyak 3 g α-naftol ditimbang, dilarutkan dalam asam nitrat hingga
diperoleh larutan 100 ml.
3.5.5Pereaksi Liebermann-Burchard
Sebanyak 5 bagian volume asam sulfat pekat dicampurkan dengan 50 bagian volume etanol 95%. Ditambahkan dengan hati-hati 5 bagian volume asetat
(41)
anhidrida ke dalam campuran tersebut dan dinginkan.
3.5.6Larutan besi (III) klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air secukupnya hingga diperoleh larutan 100 ml.
3.5.7Larutan timbal (II) asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air suling bebas karbon dioksida sebanyak 100 ml.
3.5.8Larutan asam klorida 2 N
Sebanyak 17 ml larutan asam klorida pekat ditambahkan air suling hingga dieproleh larutan 100 ml.
3.5.9Larutan kloralhidrat
Sebanyak 50 g Kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 ml air suling.
3.5.10 Larutan asam sulfat 2 N
Sebanyak 5,5 ml larutan asam sulfat pekat ditambahkan air suling sampai 100 ml.
3.6Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia dilakukan terhadap simplisia daun binahong dan ekstrak etil asetat daun binahong meliputi pemeriksaan senyawa kimia golongan alkaloid, glikosida, saponin (Depkes RI, 1995); tanin, flavonoida, triterpenoid dan steroid (Farnsworth, 1996).
3.6.1Pemeriksaan triterpenoida/steroida
Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam, disaring, filtrat diuapkan dan sisanya ditambahkan pereaksi
(42)
Liebermann-Burchard. Terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru kehijauan menunjukkan adanya triterpenoid/steroid bebas.
3.6.2Pemeriksaan alkaloida
Timbang 500 mg serbuk simplisia, tambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air, panaskan di atas penganas air selama 2 menit, dinginkan dan saring. Pindahkan 3 tetes filtrat pada kaca arloji, tambahkan 2 tetes Bouchardat. Jika pada kedua percobaan tidak terjadi endapan, maka serbuk tidak mengandung alkaloid. Mayer terbentuk endapan berwarna putih atau kuning yang larut dalam metanol dan dengan Bouchardat terbentuk endapan berwarna coklat sampai hitam, maka ada kemungkinan terdapat alkaloid.
Lanjutkan percobaan dengan mengocok sisa filtrat dengan 3 ml ammonia pekat dan 10 ml campuran 3 bagian volume eter dan 1 bagian volume kloroform. Ambil fase organik, tambahkan natrium sulfat anhidrat, saring. Uapkan filtrat di atas penangas airm larutkan sisa dalam sedikit asam klorida 2 N. lakukan percobaan dengan keempat golongan larutan percobaan, serbuk mengandung alkaloid jika sekurang-kurangnya terbentuk endapan dengan menggunakan dua golongan larutan percobaan yang digunakan.
3.6.3Pemeriksaan glikosida
Sari 3 g serbuk simplisia dengan 30 ml campuran 7 bagian volume etanol (95%) dan 3 bagian volume air dalam alat pendingin alir balik selama 10 menit, dinginkan, saring. 20 ml filtrat tambahkan 25 ml air dan 25 m timbal (II) asetat 0,4 M, kocok, diamkan selama 5 menit, saring. Sari filtrat 3 kali, tiap kali dengan 20 ml campuran 3 bagian volume kloroform dan 2 bagian isopropanol. Kumpulan sari tambahkan natrium sulfat anhidrat, saring, dan uapkan pada suhu tidak lebih dari 50o. Larutkan sisa dengan 2 ml metanol.
(43)
Percobaan umum terhadap glikosida :
a. Uapkan 0,1 ml larutan percobaan di atas penangas air, larutkan sisa dalam 5 ml asam asetat anhidrida. Tambahkan 10 tetas asam sulfat pekat; terjadi warna biru atau hijau, menunjukkan adanya glikosida (reaksi Liebermann-Bourchard).
b. Masukkan 0,1 ml larutan percobaan dalam tabung reaksi, uapkan di atas penganas air. Pada sisa tambahkan 2 ml air dan 5 tetes Molisch. Tambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat pekat; terbentuk cincin berwarna ungu pada batas cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (reaksi Molisch).
3.6.4Pemeriksaan flavonoida
Sebanyak 10 g sampel kemudian ditambahkan 100 ml air panas, didihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat yang diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml HCl pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok, dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol.
3.6.5Pemeriksaan tanin
Sebanyak 1 g sampel dididihkan selama 3 menit dalam 10 ml air suling lalu didinginkan dan disaring. Filtrat diencerkan sampai hampir tidak berwarna, lalu ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1% (b/v), jika terjadi warna biru kehitaman atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin.
3.6.6Pemeriksaan saponin
Masukkan 0,5 g serbuk yang diperiksa ke dalam tabung reaksi, tambahkan 10 ml air panas, dinginkan dan kemudian kocok kuat-kuat selama 10 detik, terbentuk buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1 cm sampai 10 cm. pada penambahan 1 tetes asam klorida 2 N, buih tidak hilang.
(44)
3.7 Uji Penurunan Kadar Kolesterol 3.7.1Penyiapan hewan percobaan
Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah marmot jantan dengan berat 300-400 gram berumur 3-4 bulan yang dikondisikan selama 2 minggu dalam kandang yang baik untuk menyesuaikan lingkungan.
3.7.2Perhitungan besar sampel
Hewan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 24 ekor. Dimana 24 ekor marmot jantan tersebut dibagi dalam 6 kelompok uji, yang masing-masing kelompok uji terdiri dari 4 ekor marmot jantan. Perhitungan besar sampel dihitung dengan rumus Federer (Hermawan, 2013) sebagai berikut:
(t-1) (n-1) ≥ 15 (6-1) (n-1) ≥ 15
5n-5 ≥ 15
5n ≥ 20
n ≥ 4
keterangan :
t : Jumlah kelompok uji
n : Besar sampel per kelompok
3.7.3Penyiapan bahan
Penyiapan bahan-bahan meliputi kontrol (Na-CMC), bahan uji (Ekstrak etil asetat daun binahong, obat pembanding (Simvastatin)).
3.7.3.1Pembuatan suspensi CMC-Na 0,5% (b/v)
Sebanyak 500 mg CMC-Na ditaburkan ke dalam lumpang berisi air suling panas sebanyak 10 ml, ditutup dan dibiarkan selama 15 menit hingga massa menjadi transparan, digerus lalu diencerkan dengan air suling hingga 100 ml.
(45)
3.7.3.2Pembuatan suspensi ekstrak daun binahong
Daun ekstrak etil asetat daun binahong ditentukan berdasarkan orientasi hewan percobaan, yaitu dosis 100 mg/kgbb, 200 mg/kgbb, 400 mg/kgbb. Dosis I 100mg/kgbb, dosis II 200 mg/kgbb, dosis III 400mg/kgbb.
Cara kerja : Ekstrak etil asetat daun binahong masing-masing sebanyak 100 mg, 200 mg dan 400 mg dimasukkan ke dalam lumpang yang berisi sedikit suspensi CMC 0,5% digerus homogen lalu dicukupkan dengan suspensi Na-CMC 0,5% hingga 10 ml.
3.7.3.3Pembuatan suspensi simvastatin
Sebanyak 50 mg simvastatin digerus dalam lumpang, lalu ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% sedikit demi sedikit sambil terus digerus hingga homogen, lalu dicukupkan dengan suspensi Na-CMC 0,5% hingga 625 ml.
3.7.4Penyiapan hewan yang hiperkolesterolemia
Hewan yang digunakan pada penelitian ini adalah marmot yang sehat dan dewasa sebanyak 24 ekor yang terlebih dahulu dikarantina selama 2 minggu untuk menyesuaikan diri dengan lingkungannya. Diukur kadar kolesterol awalnya lalu sengaja dibuat hiperkolesterolemia dengan cara memberikan makanan induksi berupa kuning telur (dosis 1% bb) diberikan selama 14 hari berturut-turut yang dicampur dengan lemak kambing 15 g sebanyak sehari sekali secara oral serta diberi pakan biasa (Pane, 2011). Diukur kadar kolesterolnya.
3.7.5Pengujian efek penurun kadar kolesterol
Pengujian efek penurunan kadar kolesterol menggunakan dosis ekstrak daun binahong 100 mg/kgbb, 200 mg/kgbb, 400 mg/kgbb dengan pembanding suspensi simvastatin dosis 0,80 mg/kgbb marmot dan kontrol suspensi CMC-Na 0,5%.
(46)
3.7.5.1Pemberian suspensi kontrol, suspensi ekstrak daun binahong dan suspensi simvastatin pada marmot
Marmot dibagi menjadi 6 kelompok disetiap kelompok terdiri dari 4 marmot jantan, dimana kelompok pertama adalah normal, tidak mendapatkan perlakuan sebagai kontrol (-). Kelompok kedua diberikan suspensi simvastatin sebagai kontrol (+). Kelompok ketiga diberikan suspensi Na-CMC 0,5% sebagai kontol pelarut. Kelompok keempat diberikan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong dosis 100 mg/kgbb/hari. Kelompok kelima diberikan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong dosis 200 mg/kgbb/hari. Kelompok keenam diberikan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong 400 mg/kgbb/hari. Marmot yang telah diinduksi kolesterol selama 14 hari, pada hari ke-14 diambil darahnya dan marmot yang berada pada kondisi hiperkolesterolemia diberikan obat dan ekstrak etil asetat daun binahong pada hari ke-14 setelah pengambilan darah, hari ke-15 dan hari ke-16, kemudian diambil lagi darahnya pada hari ke-17 sebelum pemberian simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong. Marmot masih diberikan simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong pada hari ke-17,18,19,20 hingga pengambilan darah pada hari ke-21 (Pane, 2011). Selama pemberian simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong marmot diberikan makanan pakan biasa.
3.7.5.2Pengambilan darah
Sebelum pengambilan darah marmot dipuasakan selama 10-18 jam (tidak makan tetapi masih tetap diberi minum). Kuku marmot dipotong dengan pemotong kuku sampai berdarah, kemudian diambil ± 0,5 ml darah ditampung dalam microtube. Darah disentrifuge selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm sehingga terbentuk dua lapisan yaitu bagian serum dan padatan. Diambil bagian serum.
(47)
3.7.5.3 Penetapan kadar kolesterol serum darah marmot
Serum dipipet sebanyak 0,01 ml kemudian dimasukkan ke dalam tabung yang berisi reagensia kolesterol sebanyak 1 ml, lalu di inkubasi pada suhu 25oC selama 10 menit. Kadar kolesterol diukur menggunakan alat microlab pada panjang gelombang 546 nm.
3.8Analisis Data
Data hasil pengamatan dianalisis secara stratistik dengan metode Anova menggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi 22.
(48)
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1Hasil Identifikasi Tumbuhan
Tumbuhan yang telah diidentifikasi di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (Indonesian Institute of Sciences), Pusat Penelitian Biologi (Research Center For Biology), Bogor hasilnya adalah Anredera cordifolia (Ten.) Steenis,
suku Basellaceae. Hasil dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 48.
4.2Karakterisasi Simplisia
Pemeriksaan karakterisasi simplisia meliputi pemeriksaan makroskopis, pemeriksaan mikroskopis, dan pemeriksaan karaterisasi terhadap serbuk simplisia dilakukan uji kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, kadar abu total, dan kadar abu tidak larut asam.
4.2.1 Pemeriksaan makroskopis
Hasil pemeriksaan makroskopik dari daun binahong segar yaitu daunnya merupakan daun tunggal, panjang 4-8 cm, lebar 3-6 cm, berwana hijau, bentuk jantung. ujung runcing, tepi rata dan permukaan licin dan berasa pahit. Hasil dapat dilihat pada Lampiran 3, halaman 50.
4.2.2 Pemeriksaan mikroskopis
Hasil pemeriksaan mikroskopik terhadap daun segar binahong yaitu pada penampang melintang daun terlihat susunan anatomi daun yang terdiri dari epidermis atas, jaringan palisade, jaringan spons dan epidermis bawah. Penampang melintang daun terlihat juga kristal kalsium oksalat bentuk druss pada jaringan mesofil. Penampang membujur daun segar terlihat stomata dengan tipe
(49)
parasitik. Pemeriksaan serbuk simplisia terlihat stomata tipe parasitik, kristal kalsium oksalat bentuk druss dan berkas pengangkut penebalan spiral. Hasil dapat dilihat pada Lampiran 6, halaman 53.
4.2.3 Pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia
Hasil karakterisasi dari serbuk simplisia daun binahong dapat dilihat pada Tabel 4.1 di bawah ini:
Tabel 4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia daun binahong
No. Parameter Hasil
1. Kadar air 7,32 %
2. Kadar sari larut air 26,16%
3. Kadar sari larut etanol 25,86%
4. Kadar abu total 6,35 %
5. Kadar abu tidak larut asam 0,58 %
Karakterisasi simplisia meliputi penetapan kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, dan susut pengeringan, dilakukan dengan tujuan menjamin keseragaman mutu simplisia agar memenuhi persyaratan standar simplisia. Penetapan kadar air menggambarkan batasan maksimal kandungan air di dalam simplisia, karena jumlah air yang tinggi dapat menjadi media tumbuhnya bakteri dan jamur sehingga dapat merusak senyawa yang terkandung dalam simplisia. Penetapan kadar sari larut air dan etanol dilakukan untuk memberikan gambaran awal jumlah senyawa yang dapat tersari dengan pelarut air dan etanol. Penetapan kadar abu total dilakukan dengan tujuan memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya simplisia yang berkaitan dengan senyawa organik maupun anorganik yang diperoleh secara internal dan eksternal. Kadar abu tidak larut asam bertujuan untuk mengetahui
(50)
jumlah abu yang diperoleh dari faktor eksternal seperti pasir atau tanah silikat. (Febriani, dkk., 2015).
4.3Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia dilakakukan terhadap simplisia daun binahong dan ekstrak etil asetat daun binahong. Hasil skrining fitokimia terlihat pada Tabel 4.2 dibawah ini:
Tabel 4.2 Hasil pemeriksaan skrining fitokimia daun binahong
No. Golongan senyawa Simplisia Ekstrak etil asetat
1 Alkaloid + +
2 Glikosida + +
3 Flavonoida + +
4 Tanin + +
5 Saponin + +
6 Triterpenoid/Steroid + +
Keterangan: ( + ) positif: mengandung golongan senyawa ( ˗ ) negatif: tidak mengandung golongan senyawa
Berdasarkan hasil skrining diketahui bahwa simplisia daun binahong mengandung alkaloid, glikosida, flavonoida, tanin, saponin dan steroid. Daun Anredera cordifolia (Ten.) Steenis., mengandung senyawa alkaloid, polifenol,
fenolik flavonoida, saponin, streroid, triterpenoid, tanin (Astuti, 2012; Balitbangkes, 2006; Fauziah, dkk., 2014; Jazilah, dkk., 2014; Kumalasari dan Sulistyani, 2011) sedangkan ekstrak etil asetat daun binahong menunjukkan bahwa ekstrak mengandung alkaloid, glikosida, flavonoida, tanin, saponin dan steroid.
Identifikasi menggunakan reaksi warna, dilakukan dengan beberapa macam pereaksi alkaloid, terhadap warna atau endapan yang timbul. Pereaksi yang sering digunakan adalah pereaksi Dragendroff, Mayer, iodoplatinat, asam fosfowolframat, asam fosdomolibdat (Hanani, 2015). Pereaksi Mayer paling
(51)
banyak digunakan untuk mendeteksi alkaloid karena memberikan endapan pada hampir semua alkaloid (Robinson, 1955). Glikosida mudah larut dalam air, dengan cara mendidihkan sebentar dalam asam encer atau enim yang sesuai, cukup untuk menghidrolisis bagian gula dan aglikonnya (Farnsworth, 1966; Robinson, 1995). Uji tanin dinyatakan positif jika dengan penambahan larutan FeCl3 dan harus menghasilkan warna biru, biru kehitaman, hijau atau biru kehijauan dan lapisan endapan Pengujian flavonoida dengan penambahan serbuk magnesium dan HCl pekat akan menghasilkan perubahan warna dari orange-merah (flavon), orange-merah-orange-merah tua (flavonol), orange-merah tua-magenta (flavonon), dan terkadang hijau atau biru. Reaksi Lieberman-Burchard banyak digunakan untuk uji triterpenoid dan steroid akan memberikan warna hijau-biru menunjukan saponin steroidal dan warna merah, pink, atau ungu menunjukkan triterpenoida. Keberadaan saponin ditunjukkan dengan terbentuknya busa yang bertahan selama 30 menit setelah pengocokan dengan air panas selama 3-5 menit (Farnsworth, 1966).
4.4 Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Darah
Penelitian ini menggunakan marmot jantan sebagai hewan percobaan yang dibuat hiperkolesterolemia dengan harapan tercapai kenaikan kolesterol dalam darah dengan penginduksi kuning telur ayam yang dicampur dengan lemak kambing secara oral selama dua minggu secara terus menerus bersamaan dengan pakannya. Keadaan hiperkolesterolemia terjadi apabila kadar kolesterol darah dari marmot diatas 43 mg/dl (Soesanto, 1988).
Pemilihan marmot sebagai hewan penelitian karena pada marmot memiliki kesamaan dengan manusia yaitu memiliki kekurangan kemampuan
(52)
untuk mensintesis vitamin C, karena defisiensi vitamin c menyebabkan peningkatan kadar kolesterol darah (Prakoso, 2006).
Penginduksi yang digunakan pada penelitian ini adalah kuning telur ayam dan lemak kambing yang diberikan bersama pakan. Kuning telur dan lemak kambing merupakan diet tinggi lemak yaitu faktor penting dalam peningkatan konsentrasi LDL kolesterol dan penurunan konsentrasi HDL (Prakoso, 2006).
Pembanding yang digunakan pada penelitian ini adalah obat simvastatin 10 mg, pemilihan obat ini karena khasiatnya menurunkan LDL-nya lebih kuat. Pemberian dosis 10 mg simvastatin per hari mampu menurunkan kadar LDL-kolesterol hingga 27% (Tan dan Rahardja, 2002).
Pengujian efek penurun kadar kolesterol darah dari daun binahong diawali dengan melakukan orientasi dosis ekstrak etil asetat daun binahong. Dosis orientasi adalah 100 mg/kgbb. Ekstrak etl asetat daun binahong dosis 100 mg/kgbb sudah menunjukkan penurunan kolesterol serum. Berdasarkan hasil orientasi ini, maka penelitian selanjutnya digunakan dengan variasi ekstrak etil asetat daun binahong dosis 100, 200, dan 400 mg/kgbb. Variasi dosis yang diberikan pada hewan percobaan bertujuan untuk melihat dosis efektif dari ekstrak etil asetat daun binahong. Hasil pengukuran kadar kolesterol serum marmot dilakukan setelah marmot dipuasakan selama 10-18 jam, tetapi tetap diberi minum sebelum marmot diinduksi kolesterol dengan menggunakan penginduksi kuning telur ayam dan lemak kambing yang diberikan bersama pakannya selama dua minggu berturut-turut dan setelah diinduksi dengan menggunakan kuning telur ayam dan lemak kambing selama dua minggu berturut-turut serta hasil pengukuran penurunan kadar kolesterol serum marmot setelah pemberian ekstrak etil asetat daun binahong dan simvastatin ditunjukkan pada Tabel 4.3.
(53)
Tabel 4.3 Hasil pengukuran rata-rata kadar kolesterol darah marmot hari ke-0
(sebelum induksi) sampai hari ke-21 (7 hari setelah pemberian obat) Data adalah rerata ± SD, n = 4.
Kelompok
Kadar kolesterol darah (mg/dl) ± SD Hari ke-0 (sebelum induksi) Hari ke-14 (hiperkolester olemia) Hari ke-17 (3 hari setelah pemberian obat) Hari ke-21 (7 hari setelah pemberian obat) Normal (Kontrol negatif)
34,75 ± 5, 12
34,50 ± 4,65 34,75 ± 4,57 35,00 ± 4,24 CMC Na
(Kontrol pelarut)
27,5 ± 4,93 101,25 ± 14,99 * 104,50 ± 16,46* 100,50 ± 16,29* Simvastatin (Kontrol positif) 34,25 ± 5,73
75,00 ± 5,47 *
56,00 ± 3,65 33,25 ± 2,75 EEADB 100 mg/kgbb 27,25 ± 8,53 80,50 ±15,75 * 68,50 ± 15,75*
54,00 ± 15,25 EEADB 200
mg/kgbb
32,25 ± 7,50
93,25 ± 16,85 * 78,75 ± 16,35* 63,25 ± 15,50* EEADB 400 mg/kgbb 31,5 ± 10,14
82,75 ± 7,88 *
60,00 ± 7,25 37,00 ± 3,36
Sig. 0,691 0,00
* = Berbeda signifikan dengan kontrol negatif pada uji anova (α = 0,05)
Keterangan : EEADB = ekstrak etil asetat daun binahong
Hasil analisis statistik yang tercantum pada Tabel 4.3 diperoleh nilai signifikansi 0,691 pada hari ke-0 (sebelum induksi), tidak ada perbedaan yang signifikan antar kelompok. Hal ini menunjukkan bahwa marmot jantan yang digunakan berada dalam kondisi fisiologis yang homogen sehingga dapat digunakan sebagai hewan uji.
Setelah pemberian induksi makanan berupa kuning telur ayam (1%bb) dan lemak kambing 15 g yang dicampur dengan pakannya, terjadi peningkatan kadar kolesterol serum darah marmot dibandingkan dengan kadar kolesterol serum darah marmot sebelum diberikan induksi makanan tersebut. Peningkatan disebut kondisi hiperkolesterolemia jika kadarnya berada di atas normal (> 43 mg/dl). Kondisi ini ditunjukkan pada Tabel 4.4.
(54)
Tabel 4.4 Hasil pengukuran rata-rata kadar kolesterol darah marmot hari ke-14
(kondisi hiperkolesterolemia) dan persen peningkatannya. Data adalah rerata ± SD, n = 4.
Kelompok Rata-rata kadar
kolesterol serum (mg/dl) ± SD
Persen peningkatan (%)
Normal (Kontrol negatif) 34,50 ± 4,65 0,72
CMC Na (Kontrol pelarut) 101,25 ± 14,99 * 268, 18 Simvastatin (Kontrol positif) 75,00 ± 5,47 * 118,97
EEADB 100 mg/kgbb 80,50 ±15,75 * 195,41
EEADB 200 mg/kgbb 93,25 ± 16,85 * 189,14
EEADB 400 mg/kgbb 82,75 ± 7,88 * 162,69
Sig. 0,00
* = Berbeda signifikan dengan kontrol negatif pada uji anova (α = 0,05)
Berdasarkan tabel 4.4 dapat dilihat bahwa pemberian penginduksi hiperkolesterol berupa kuning telur ayam (dosis 1%bb) dan lemak kambing sebanyak 15 g dapat meningkatkan kadar kolesterol darah marmot. Seluruh marmot dapat digunakan sebagai hewan uji pada pengujian penurunan kadar kolesterol menggunakan ekstrak etil asetat daun binahong. Peningkatan kadar kolesterol ini diakibatkan pemberian pakan yang setiap 10 gram kuning telur mengandung 2000 mg kolesterol dan lemak kambing per 10 gram mengandung 130 mg kolesterol (Harmanto, 2005). Lemak hewani banyak mengandung asam lemak jenuh dan kolesterol. Lemak jenuh cenderung merangsang hati untuk memproduksi kolesterol sehingga kadarnya di dalam darah meningkat (Silalahi, 2006). Kadar kolesterol meningkat bila mengkonsumsi makanan yang banyak mengandung kolesterol atau lemak (Dalimartha dan Dalimartha, 2014).
Hari ke-17 (hari ke-3 setelah pemberian simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong), ternyata terjadi penurunan kadar kolesterol serum darah dengan mengukur rata-rata kadar kolesterol serum marmot. Pengamatan dilakukan sampai hari ke-21 (hari ke-7 setelah pemberian simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong).
(55)
Tabel 4.5 Hasil persen penurunan rata-rata kadar kolesterol serum marmot
hari ke-17 dan hari ke-21. Data adalah rerata ± SD, n = 4. Kelompok
Persen penurunan (%) kadar kolesterol (mg/dl) Hari ke-17 (3 hari
setelah pemberian obat)
Hari ke-21 (7 hari setelah pemberian obat)
Normal (Kontrol negatif) 0,72 0,72
CMC Na (Kontrol pelarut) 3,21 3.83
Simvastatin (Kontrol positif) 25.33 40,62
Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 100 mg/kgbb
14,90 21,16
Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 200 mg/kgbb
15,55 19,68
Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong 400 mg/kgbb
27,49 38,44
Berdasarkan tabel 4.5 Hasil pengukuran persen penurunan kadar kolesterol pada hari ke-17 masing-masing kelompok masih hiperkolesterolemia. Kelompok CMC Na tidak terdapat penurunan kolesterol. Berbeda dengan kelompok simvastatin dan kelompok ekstrak etil asetat daun binahong dengan dosis 100, 200, dan 400 mg/kgbb sudah menunjukkan penurunan kolesterol. Pemberian perlakuan dilakukan sampai hari ke-21. Hari ke-21, kelompok CMC Na tidak mengalami penurunan kolesterol sehingga dan tetap terjadi hiperkolesterolemia. Kelompok ekstrak etil asetat dosis 100 mg/kgbb dan dosis 200 mg/kgbb terjadi penurunan kolesterol tetapi masih mengalami hiperkolesterolemia. Kelompok simvastatin dan kelompok ekstrak etil asetat dosis 400 mg/kgbb mengalami penurunan dan kadar kolesterol sudah berada pada kadar kolesterol normal. Berdasarkan perhitungan rata-rata AUC kadar kolesterol serum darah marmot diperoleh hasil dosis 400 mg/kgbb mampu menurunkan kadar kolesterol serum marmot yang hampir sama dengan penurunan kolesterol simvastatin sehingga disimpulkan bahwa pada dosis 400 mg/kgbb merupakan dosis yang efektif untuk menurunkan kadar kolesterol pada marmot karena pada dosis 400 mg/kgbb sudah
(56)
dapat menurunkan kolesterol yang sama dengan simvastatin 10 mg dan sudah sama dengan keadaan normal. Hasil perhitungan AUC dapat dilihat pada Lampiran 13, halaman 67.
Gambar 4.1 Perbandingan penurunan kadar rata-rata kolesterol darah marmot
setelah pemberian obat dan dibandingkan dengan kontrol ± SD, n = 4 ekor marmot
Grafik 4.1 menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat dosis 400 mg/kgbb efektif untuk menurunkan kadar kolesterol dan tidak berbeda nyata dengan simvastatin sedangkan ekstrak etil asetat daun binahong dosis 100 mg/kgbb dan 200 mg/kgbb juga mempunyai efek menurunkan kolesterol tetapi tidak lebih baik dibandingkan simvastatin sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak etil asetat dosis 400 mg/kgbb merupakan dosis yang paling efektif untuk dapat menurunkan kadar kolesterol serum marmot dibandingkan dosis 100 mg/kgbb dan 200 mg/kgbb. 0 20 40 60 80 100 120 140
Hari 0 Hari 14 Hari 17 Hari 21
K a d a r ra ta -r a ta ko le st e ro l se ru m ( m g /d l) Hari
Normal CMC Na Simvastatin
(57)
Daun binahong mengandung senyawa saponin dan flavonoida yang berperan menurunkan kolesterol darah. Saponin atau biasa disebut bousingide A1 atau lareagenin A mampu menghambat pembentukan kolesterol darah dengan menghambat enzim pembentukan kolesterol (hidroksi metilglutaril koasetat reduktase). Penghambatan kerja enzim tersebut, maka kolesterol juga akan turun (Utami dan Puspaningtyas, 2013). Isolasi saponin menunjukkan berbagai aktivitas farmakologi seperti antitumor, penurunan kolesterol, potensiasi imun, antikanker, antioksidan dan menekan penurunan resiko implikasi pada penyakit jantung koroner (Astuti, dkk., 2011). Daun binahong memiliki potensi menurunkan kolesterol darah dan diduga bahwa kandungan triterpenoid saponin dalam binahong yang berperan menurunkan kadar gula darah dan kolesterol (Utami dan Puspaningtyas, 2013). Menurut hasil penelitian Wahjuni (2014), pada daun Anredera cordifolia ditemukan senyawa fitol yang merupakan alkohol diterpen
dan berfungsi sebagai prekursor vitamin E dan K pada hewan dan dapat di ubah lebih lanjut menjadi asam fitanik dan dapat ditemukan pada jaringan lemak hewan dapat berpotensi sebagai penghambat hiperkolesterolemia pada tikus putih.
Flavonoida berperan dalam pencegahan penyakit jantung koroner berdasarkan efek proses biologis yang meliputi proses inhibisi peroksidasi lipida dan agregasi platelet. Flavonoida diyakini menurunkan aterosklerosis dan menghambat oksidasi LDL, dengan cara menghambat pembentukan radikal bebas
(58)
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa :
a. Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia didapatkan kadar air 7,32%, kadar sari larut air 26,16%, kadar sari larut etanol 25,86%, kadar abu total 6,35 %, dan kadar abu tidak larut asam 0,58%.
b. Ekstrak etil asetat daun binahong dapat menurunkan kadar kolesterol serum pada darah marmot dengan dosis efektif 400 mg/kgbb.
c. Ekstrak etil asetat daun binahong mengandung senyawa saponin dan flavonoida yang dapat berperan dalam penurunan kadar kolesterol serum marmot.
5.2Saran
Diharapkan pada penelitian selanjutnya dilakukan pengujian aktivitas farmakologi atau mikrobiologi dengan menggunakan bagian tumbuhan daun binahong yang lain seperti batang atau umbi daun binahong.
(59)
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan 2.1.1 Morfologi
Anredera cordifolia (Ten.) Steenis atau biasa dikenal dengan binahong
merupakan tanaman menjalar yang bersifat perennial (berumur lama). Panjang tanaman bisa mencapai 5 meter, batang lunak, bentuk silindris, saling membelit, berwarna merah, dan bagian dalam solid dengan permukaan halus serta memiliki akar tunggang berdaging lunak dan berwarna cokelat kotor. Memiliki daun tunggal, tangkai pendek, tersusun berseling, berwarna hijau, bentuk jantung, panjang daun 5-10 cm, lebar daun 3-7 cm, ujung runcing, pangkal berlekuk, tepi rata, dan permukaannya licin (Utami dan Puspaningtyas, 2013).
2.1.2 Habitat dan penyebaran
Tumbuhan binahong berasal dari Amerika Selatan. Tumbuhan ini mudah tumbuh di dataran rendah maupun dataran tinggi. Banyak ditanam di dalam pot sebagai tanaman hias dan obat. Berkembang secara generatif (biji), namun lebih sering dikembangkan secara vegetatif melalui akar rimpangnya (Hidayati, 2009).
2.1.3 Sistematika tumbuhan
Sistematika dari tumbuhan binahong (BPOM, 2008) adalah sebagai berikut:
Divisi : Spermatophyta Sub divsi : Angiospermae Kelas : Dicotyledoneae Bangsa : Caryophyllales
(60)
Suku : Basellaceae Marga : Anredera
Jenis : Anredera cordifolia (Ten.) Steenis.
2.1.4 Sinonim
Sinonim dari tumbuhan binahong adalah Boussingaultia cordifolia (Ten), Boussingaultia gracilis Miers, Boussingaultia basselloides, Boussingaultia
pseudobasselloides Haum (Utami dan Puspaningtyas, 2013).
2.1.5 Nama asing
Nama asing dari tumbuhan binahong adalah Hearthleaf Maderavine (Inggris) dan Dheng Shan Chi (Cina) (Hariana, 2013).
2.1.6 Nama daerah
Nama daerah dari tumbuhan binahong adalah gandola (Sunda); gendola (Bali), lembayung (Minangkabau); genjerot, gedrek, uci-uci (Jawa); kandula (Madura), tatabuwe (Sulawesi Utara); poiloo (Gorontalo); kandola (Timor) (Hariana, 2013).
2.1.7 Manfaat
Tumbuhan Binahong dipercaya memiliki khasiat untuk membantu pengobatan luka, tipus, maag, radang usus, ambeien, pembengkakan, pembekuan darah, rematik, luka memar, asam urat, stroke, dan diabetes mellitus. Binahong mampu mengatasi berbagai penyakit degeneratif. Binahong memiliki potensi dalam mengatasi diabetes mellitus dan menurunkan kolesterol darah, dan diduga bahwa kandungan triterpenoid saponin dalam binahong yang berperan menurunkan kadar gula darah dan kolesterol (Utami dan Puspaningtyas, 2013).
Daun binahong ampuh dalam menurunkan gula darah. Diketahui bahwa persentase penurunan gula darah setelah mengkonsumsi air rebusan daun
(61)
binahong setara dengan persentase penurunan gula darah setelah meminum obat penurun gula darah. Zat yang berperan untuk menurunkan kadar gula darah adalah flavonoida (Utami dan Puspaningtyas, 2013). Flavonoida dapat menurunkan kadar glukosa darah dengan kemampuannya sebagai zat antioksidan. Antioksidan dapat mengikat radikal bebas sehingga dapat mengurangi resistensi insulin. Antioksidan dapat menurunkan Reactive Oxygen Spesies (ROS), dimana dalam pembentukan ROS, oksigen akan berikatan dengan elektron bebas. Antioksidan pada flavonoida dapapat menyumbangkan atom hidrogennya. Flavonoida akan teroksidasi dan berikatan dengan radikal bebas menjadi senyawa yang lebih stabil (Ajie, 2015).
Ekstrak daun binahong dapat menghambat pertumbuhan polibakteri dari Stomatitis Aftose Rekuren (SAR). Hal ini diduga karena adanya kandungan
flavonoida, terpenoid, saponin dalam daun binahong. Ekstrak daun binahong juga memiliki kemampuan membunuh bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aureginosa. Daun binahong memiliki aktivitas antibakteri terhadap
Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis. Senyawa aktif yang
bertanggung jawab sebagai antibakteri Staphylococcus epidermidis diduga adalah senyawa saponin, fenol, dan flavonoida. senyawa flavonoida bertanggung jawab terhadap perkembangan Propionibacterium acnes. Daun binahong berperan mengurangi peradangan sel dan mempercepat penyembuhan luka, flavonoida berperan mengurangi peradangan (Utami dan Puspaningtyas, 2013).
2.1.8 Kandungan kimia
Tumbuhan binahong memiliki kandungan senyawa alkaloid, polifenol, fenolik flavonoida, saponin, streroid, triterpenoid, tanin (Astuti, 2012; Balitbangkes, 2006; Fauziah, dkk., 2014; Jazilah, dkk., 2014; Kumalasari dan Sulisyani, 2011).
(62)
2.2Ekstraksi
Ekstraksi atau penyarian merupakan proses pemisahan senyawa dari matriks atau simplisia dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Metode ekstraksi yang digunakan tergantung pada jenis, sifat fisik, dan sifat kimia kandungan senyawa yang akan diekstraksi. Pelarut yang digunakan tergantung pada polaritas senyawa yang akan disari, mulai dari yang bersifat nonpolar hingga polar, sering disebut dengan ekstraksi bertingkat. Tujuan ekstraksi adalah menarik atau memisahkan senyawa dari campurannya atau simplisia. Pemilihan metode dilakukan dengan memerhatikan antara lain sifat senyawa, suhu dan tekanan merupakan faktor yang perlu diperhatikan dalam melakukan ekstraksi. Beberapa metode ekstraksi yang umum digunakan antara lain maserasi, perkolasi, refluks, soxhletasi, infudasi, dekok, destilasi, lawan arah (countercurrent), ultrasonik gelombang mikro (microwave assisted extraction, MAE), dan ekstraksi gas superkritis (supercritical gas extraction, SGE) (Hanani, 2015).
2.2.1Maserasi
Maserasi adalah cara ekstraksi simplisia dengan merendam dalam pelarut pada suhu kamar sehingga kerusakan atau degradasi metabolit dapat diminimalisasi. Maserasi terjadi proses keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar dan di dalam sel sehingga diperlukan penggantian pelarut secara berulang. Kinetik adalah cara ekstraksi, seperti maserasi yang dilakukan dengan pengadukan, sedangkan digesti adalah cara maserasi yang dilakukan pada suhu yang lebih tinggi dari suhu kamar, yaitu 40-60oC (Hanani, 2015).
2.2.2Perkolasi
Perkolasi adalah cara ekstraksi simplisia menggunakan pelarut yang selalu baru, dengan mengalirkan pelarut melalui simplisia hingga senyawa tersari
(63)
sempurna. Cara ini memerlukan waktu lebih lama dan pelarut yang lebih banyak. Perkolasi yang sempurna diketahui dengan cara perkolat diuji adanya metabolit dengan pereaksi yang spesifik (Hanani, 2015).
2.2.3Refluks
Refluks adalah cara ekstraksi dengan pelarut pada suhu titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Hasil penyarian lebih baik atau sempurna, refluks umumnya dilakukan berulang-ulang (3-6 kali) terhadap residu pertama. Cara ini memungkinkan terjadinya penguraian senyawa yang tidak tahan panas (Hanani, 2015).
2.2.4Soxhletasi
Soxhletasi adalah cara ekstraksi menggunakan pelarut organik pada suhu didih dengan alat soxhlet. Simplisia dan ekstrak berada pada labu berbeda. Pemanasan mengakibatkan pelarut menguap, dan uap masuk dalam labu pendingin. Hasil kondensasi jatuh bagian simplisia sehingga ekstraksi berlangsung terus-menerus dengan jumlah pelarut relatif konstan. Ekstraksi ini dikenal sebagai ekstraksi sinambung (Hanani, 2015).
2.2.5Infudasi
Infudasi adalah cara ekstraksi dengan menggunakan pelarut air, pada suhu 96-98oC selama 15-20 menit (dihitung setelah suhu 96oC tercapai). Cara ini sesuai untuk simplisia yang bersifat lunak, seperti bunga dan daun (Hanani, 2015).
2.2.6Dekok
Dekok adalah cara ekstraksi yang mirip dengan infudasi, hanya saja waktu ekstraksinya lebih lama yaitu 30 menit dan suhunya mencapai titik didih air (Hanani, 2015).
(64)
2.2.7Destilasi uap
Destilasi merupakan cara ekstraksi untuk menarik atau menyari senyawa yang ikut menguap dengan air sebagai pelarut. Proses pendinginan, senyawa dan uap air akan terkondensasi dan terpisah menjadi destilat air dan senyawa yang diekstraksi. Cara ini umum digunakan untuk menyari minyak atsiri dari tumbuhan (Hanani, 2015).
2.2.8 Lawan arah (counter current)
Cara ekstraksi ini serupa dengan cara perkolasi, tetapi simplisia bergerak berlawanan arah dengan pelarut yang digunakan. Cara ini banyak digunakan untuk ekstraksi herbal dalam skala besar (Hanani, 2015).
2.2.9Ultrasonik
Ekstraksi ultrasonik melibatkan penggunaan gelombang ultrasonic dengan frekuensi 20-2000 kHz sehingga permeabilitas dinding sel meningkat dan isi sel keluar. Frekuensi getaran memengaruhi hasil ekstraksi (Hanani, 2015).
2.2.10 Gelombang mikro (microwave assisted extraction, MAE)
Ekstraksi menggunakan gelombang mikro (2450 MHz) merupakan ekstraksi yang selektif dan digunakan untuk senyawa yang memiliki dipol polar. Cara ini dapat menghemat waktu ekstraksi dibandingkan dengan cara konvensional seperti maserasi dan menghemat pelarut (Hanani, 2015).
2.2.11 Ekstraksi gas superkritis (supercritical gas extraction, SGE)
Metode ekstraksi dilakukan menggunakan CO2 dengan tekanan tinggi, dan banyak digunakan untuk ekstraksi minyak atsiri atau senyawa yang bersifat mudah menguap atau termolabil. Penggunaan karbodioksida (CO2) lebih disukai karena bersifat inert toksisitasnya rendah, aman bagi lingkungan, harga relatif murah, dan tidak mudah terbakar pada kondisi superkritisnya (Hanani, 2015).
(65)
2.3Kolesterol dan Hiperkolesterolemia 2.3.1Kolesterol
Gambar 2.1 Struktur kolesterol
Kolesterol, yang formulanya diperlihatkan dalam gambar 2.1, terdapat dalam diet semua orang, dan dapat dibasorpsi dengan lambat dari saluran pencernaan ke dalam saluran limfe usus. Kolesterol sangat larut dalam lemak tetapi hanya sedikit larut dalam air. Kolesterol secara spesifik mampu membentuk ester dengan lemak. Hampir 70 persen kolesterol dalam lipoprotein plasma memang dalam bentuk ester kolesterol (Guyton dan Hall, 2007).
2.3.1.1Pembentukan kolesterol
Struktur dasar kolesterol adalah inti sterol. Inti sterol selurunya dibentuk dari molekul asetil-KoA. Inti sterol dapat dimodifikasi dengan berbagai rantai samping untuk membentuk (1) kolesterol, (2) asam kolat, yang merupakan dasar dari asam empedu yang dibentuk dihati, dan (3) beberapa hormon steroid penting yang diekskresi oleh korteks adrenal, ovarium, dan testis (Guyton dan Hall, 2007).
Biosintesis kolesterol dapat dibagi menjadi lima tahap: 1. Sintesis mevalonat dari asetil-KoA
2. Pembentukan unit isoprenoid dari mevalonat melalui pengeluaran CO2 3. Kondensasi enam unit isoprenoid untuk membentuk skualen
4. Siklisasi skualen menghasilkan steroid induk, lanosterol
(66)
2.3.1.2Metabolisme kolesterol
Kolesterol dan trigliserida ditranspor dalam aliran darah membentuk kompleks bersama dengan fosfolipid dan protein (apoprotein) dalam partikel yang disebut lipoprotein. Apoprotein berperan sebagai molekul atau enzim pemberi sinyal dan memegang peran sangat penting dalam mengendalikan transport lipid. Terdapat beberapa golongan lipoprotein yang mentranspor lipid antara jaringan yang berbeda dan mempunyai komposisi lipid dan apoprotein khas. Prinsipnya kolesterol dimetabolisme dihati. Kadar kolesterol dalam darah dikendalikan oleh keseimbangan antara ambilan (uptake) dalam darah, produksi kolesterol (aktivitas jalur biosintesis kolesterol), dan ekskresi dari saluran pencernaa (asam empedu) (Davey, 2005).
2.3.2Hiperkolesterolemia
Hiperkolesterolemia merupakan suatu kondisi dimana kolesterol dalam tubuh sudah melebihi kadar normal dalam darah. Kadar kolesterol yang berlebih akan mengendap di saluran peredaran darah sehingga mempersempit saluran aliran darah dan mengganggu sistem peredaran darah normal (Wirawan, 2013). Klasifikasi Frederickson/WHO mengidentifikasi enam fenotipe hiperlipidemik, tipe I, IV, dan V meliputi terutama hipertrigliserida, di mana kadar VLDL dan/atau kilomikron meningkat. Tipe IIa meliputi hiperkolesterolemia dengan peningkatan kolesterol LDL namun trigliserida normal. Tipe IIb dan III, hiperkolesterolemia dengan hipertrigliseridemia, baik kolesterol dan trigliserida meningkat. Pengobatan hiperlipidemia bertujuan menurunkan kolesterol LDL dan/atau trigliserida, serta meningkatkan kolesterol HDL. Kedua efek tersebut dapat memperlambat atau membalikan progresi lesi aterosklerosis (Aaronson dan Ward, 2010).
(67)
2.3.2.1Klasifikasi hiperkolesterolemia
A. Hiperkolesterolemia familial
Hiperkolesterolemia familial adalah sekelompok gangguan gen tunggal yang mempengaruhi reseptor low-density lipoprotein (LDL) dan menyebabkan berkurang atau tidak adanya ambilan partikel LDL, sehingga terakumulasi dalam aliran darah. Homozigot (1/1.000.000) memiliki kadar kolesterol yang sangat tinggi (10-25 mmol/L) dan penyakit jantung koroner pada usia remaja atau 20-an. Heterozigot (1/500) memiliki kolesterol yang cukup tinggi (7-12 mmol/L) dan berisiko mengidap penyakit jantung koroner (PJK) dini. Pasien bisa memiliki arkus kornea, xantelasma, dan xantoma tendon (Davey, 2005).
B.Hiperkolesterolemia poligenik
Hiperkolesterolemia poligenik adalah keadaan yang diturunkan (1/300-600) ditandai oleh kadar kolesterol yang agak meningkat (7-12 mmol/L) dengan atau tanpa kadar trigliserida yang tinggi, tidak disebabkan oleh kelainan tunggal, walaupun pada beberapa kasus nampaknya diturunkan secara dominan autosomal. Merupakan penyebab yang sangat penting pada peningkatan risiko aterosklerosis dalam populasi. Kadar trigliserida yang sangat tinggi bisa menyebabkan pankreatitis (Davey, 2005).
2.3.2.2Hubungan hiperkolesterol dengan aterosklerosis
Penelitian membuktikan bahwa kenaikan kolesterol plasma merupakan faktor risiko penting berkembangnya penyakit jantung koroner:
1. Kadar kolesterol total > 6,5 mmol/L melipatgandakan risiko PJK yang mematikan: > 7,8 mmol/L meningkatkan risiko sampai empat kali lipat.
2. Penurunan kadar kolesterol total sebesar 20% akan menurunkan risiko koroner sebesar 10%.
(68)
3. Hubungan yang paling erat adalah dengan kolesterol-LDL, sedangkan kolesterol high density lipoprotein (HDL) bersifat protektif. Salah satu indikator yang bisa digunakan adalah rasio LDL : HDL, risiko tinggi bila rasio mencapai > 4.
Kenaikan kadar kolesterol (terutama LDL teroksidasi) merusak endothelium dini pada proses aterosklerosis dan dibawa oleh makrofag (sel busa) ke dalam ini lipid dari plak yang telah terbentuk. Menurunkan kadar kolesterol-LDL dapat mengurangi deposisi kolesterol menjadi plak aterosklerotik dan bisa membalikkan proses ini. Menurunkan kadar kolesterol sangat penting karena akan menstabilkan plak, menurunkan risiko rupture plak akut (Davey, 2005).
2.3.2.3Obat penurun kolesterol
Pada saat ini dikenal sedikitnya 6 jenis obat yang dapat memperbaiki profil lipid serum yaitu bile acid sequestran, HMG-CoA reductase inhibitor (statin), derivat asam fibrat, asam nikotinik, ezetimibe, dan asam lemak omega-3. Selain obat tersebut, pada saat ini telah dipasarkan obat kombinasi dua jenis penurun lipid dalam satu tablet seperti Advicor (lofastatin dan niaspan), Vytorin (simvastatin dan ezetimibe) (Adam, 2006).
A.Bile acid sequestran
Terdapat tiga jenis bile acid sequestrans yaitu cholestryramin, colestipol dan colesevelam. Obat ini tidak diserap diusus, dan bekerja mengikat asam empedu di usus halus dan akan dikeluarkan dengan tinja, sehingga asam empedu yang kembali ke hati akan menurun, hal ini akan memacu hati memecahkan kolesterol lebih banyak untuk menghasilkan asam empedu yang dikeluarkan ke usus. Akibatnya kolesterol darah akan lebih banyak ditarik ke hati sehingga kolesterol serum menurun.
(1)
2.3.2.2 Hubungan hiperkolesterolemia dengan
aterosklerosis ... 15
2.3.2.3 Obat penurun kolesterol ... 16
BAB III METODE PENELITIAN ... 20
2.1 Alat dan Bahan ... 20
3.1.1 Alat ... 20
3.1.2 Bahan ... 20
2.2 Penyiapan Bahan Tumbuhan ... 21
3.2.1 Pengambilan bahan tumbuhan ... 21
3.2.2 Identifikasi tumbuhan ... 21
3.2.3 Pembuatan simplisia... 21
3. 3 Karakterisasi simplisia ... 22
3.3.1 Pemeriksaan makroskopik ... 22
3.3.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 22
3.3.3 Penetapan kadar air ... 22
3.3.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air ... 23
3.3.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol ... 23
3.3.6 Penetapan kadar abu total ... 24
3.3.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam ... 24
3.4 Pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong ... 24
3.5 Pembuatan Larutan Pereaksi ... 25
3.5.1 Pereaksi Mayer ... 25
3.5.2 Pereaksi Dragendroff ... 25
3.5.3 Pereaksi Bourchardat ... 25
(2)
xii
3.5.5 Pereaksi Liebermann-Burchard ... 26
3.5.6 Pereaksi Besi (III) klorida 1% ... 26
3.5.7 Pereaksi Timbal (II) asetat 0,4 M ... 26
3.5.8 Pereaksi asam klorida 2 N ... 26
3.5.9 Pereaksi Kloralhidrat ... 26
3.5.10 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ... 26
3.6 Skrining Fitokimia ... 26
3.6.1 Pemeriksaan terpenoida/steroida ... 27
3.6.2 Pemeriksaan alkaloida ... 27
3.6.3 Pemeriksaan glikosida ... 27
3.6.4 Pemeriksaan flavonoida ... 28
3.6.5 Pemeriksaan tanin ... 28
3.6.6 Pemeriksaan saponin ... 29
3.7 Uji Penurunan Kadar Kolesterol ... 29
3.7.1 Penyiapan hewan percobaan ... 29
3.7.2 Perhitungan besar sampel ... 29
3.7.3 Penyiapan bahan ... 29
3.7.3.1 Pembuatan suspensi CMC-Na 0,5% (b/v) ... 29
3.7.3.2 Pembuatan suspensi ekstrak daun binahong ... 30
3.7.3.3 Pembuatan suspensi simvastatin ... 30
3.7.4 Penyiapan hewan yang hiperkolesterolemia ... 30
3.7.5 Pengujian efek penurun kadar kolesterol ... 30
3.7.5.1 Pemberian suspensi ekstrak daun binahong, suspensi kontrol, dan suspensi simvastatin pada marmot ... 31
(3)
3.7.5.2 Pengambilan darah ... 31
3.7.5.3 Penetapan kadar kolesterol serum darah marmot ... 32
3.8 Analisis Data ... 32
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 33
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 33
4.2 Karakterisasi Simplisia ... 33
4.2.1.1 Pemeriksaan makroskopis ... 33
4.2.1.2 Pemeriksaan mikroskopis ... 33
4.2.1.3 Pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia ... 34
4.3 Skrining Fitokimia ... 35
4.4 Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Darah ... 36
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 43
5.1 Kesimpulan ... 43
5. 2 Saran ... 43
DAFTAR PUSTAKA ... 44
(4)
xiv
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia daun binahong... 34 4.2 Hasil pemeriksaan skrining fitokimia daun binahong ... 35 4.3 Hasil statistika pengukuran rata-rata kadar kolesterol darah
marmot hari ke-0 (sebelum induksi) sampai hari dengan hari ke-21 (7 hari setelah pemberian obat) ... 38 4.4 Hasil pengukuran rata-rata kadar kolesterol darah marmot
hari ke-14 (kondisi hiperkolesterolemia) dan persen peningkatannya ... 39 4.5 Hasil persen penurunan rata-rata kadar kolesterol serum marmot
hari ke-17 dan hari ke-21... 40
(5)
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Skema kerangka pikir penelitian ... 6 2.1 Struktur kolesterol ... 13 3.1 Perbandingan penurunan kadar rata-rata kolesterol darah
marmot setelah pemberian obat dan dibandingkan dengan kontrol ... 41
(6)
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Hasil identifikasi tumbuhan ... 48 2 Surat etikal klirens ... 49 3 Gambar tumbuhan binahong dan binahong segar ... 50 4 Gambar simplisia daun binahong dan serbuk simplisia daun
binahong ... 51 5 Gambar ekstrak etil asetat daun binahong... 52 6 Hasil pemeriksaan mikroskopik daun binahong segar dan
serbuk simplisia daun binahong ... 53 7 Hasil karakterisasi simplisia daun binahong ... 56 8 Bagan alur pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong
(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ... 59 9 Gambar alat dan objek yang digunakan ... 60 10 Bagan alur pengujian efek penurunan kolesterol ... 62 11 Kadar kolesterol rata-rata darah marmot selama penelitian
(mg/dl) ... 64 12 Contoh perhitungan dosis ... 65 13 Perhitungan nilai AUC penurunan kadar kolesterol serum .... 67 14 Tabel hasil SPSS AUC ... 72 15 Tabel hasil SPSS rata-rata penurunan kolesterol ... 73 16 Laporan hasil pengukuran kadar kolesterol serum marmot ... 77