Efek Kombinasi Ekstrak Aktif Buah Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.)dan Doxorubicin Terhadap Sel Kanker Payudara
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.)
Lampiran 2. Gambar tumbuhan andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.)
Lampiran 3. Gambar buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.)
Lampiran 4. Gambar serbuk simplisia buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.)
Lampiran 5. Gambar mikroskopik serbuk simplisia buah andaliman
(Zanthoxylum acanthopodium DC.)2. Sel Rambut (rambut penutup)
3. Rambut biasa (rambut penutup)
4. Epidermis
5. Sel Batu
6. Parenkim epidermis kulit biji berwarna jingga kemerahan
Lampiran 6. Bagan pembuatan serbuk simplisia dan skrining fitokimia,
karakterisasi simplisia buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.)Dibersihkan dari pengotor Dicuci hingga bersih
Ditiriskan hingga tidak ada lagi air Ditimbang sebagai berat basah
Dikeringkan di lemari pengering Dihaluskan
Dilakukan karakterisasi simplisia Simplisia
Serbuk Buah andaliman segar
Skrining Fi ki i
Pembuatan k k Karakterisasi
Si li i
- Alkaloid -
- Pemeriksaan mikroskopik (Simplisia)
- Pemeriksaan makroskopik
- Saponin -
- Penetapan kadar air
- Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
- Glikosida -
- Penetapan kadar sari yang larut dalam air
- Penetapan kadar abu total
- Steroid/Triterpenoida
- Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam
- KLT
Flavonoid
Tanin
Antrakuinon
E
Lampiran 7. Bagan pembuatan ekstrak serbuk simplisia buah andaliman secara maserasi bertahap
Serbuk Dimaserasi dengan n-heksan
Ampas n- Ekstrak
Dipekatkan dengan rotary Dikeringkan dengan
evaporatory cara diangin-anginkan
Dikeringkan dengan Dimaserasi dengan freeze dryer etilasetat E
E Ampas Diuji aktivitas Dipekatkan dengan Dikeringkan dengan Antikanker rotary evaporatory cara dianginkan
Dimaserai dengan H etanol
Ekstrak etilasetat k l Diuji aktivitas antikanker
Ekstrak Ampas H
Dipekatkan dengan rotary evaporatory Dikeringkan dengan freeze dryer
Ekstrak Diuji aktivitas antikanker
H
Lampiran 8. Perhitungan kadar air serbuk simplisia buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.)
volume air (ml) x 100% % Kadar air simplisia = berat sampel (g)
Berat Volume Volume o. sampel (g) awal (ml) akhir (ml)
5.009 1,8 2,1 . 5,006 2,1 2,5 . 5,007 2,5 2,8 .
volume akhir volume awal -
% Kadar air = x 100 %
berat sampel
- 2,10 1,80 1. x 100% = 5,98%
Kadar air = 5,009
2,50 - 2,10 2. x 100% = 7,99 %
Kadar air = 5,006
2,50 - 2,80 3. x 100% = 5 ,99%
Kadar air = 5,007 7 ,99% 7,99%
- 5,98%
= 6 ,65% % Rata-rata kadar air =
3
Lampiran 9. Perhitungan kadar sari larut air simplisia buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% berat sampel (g)
20 Berat sampel Berat sari (g) o. (g)
5,016 0,098 . 5,010 0,096 . 5,025 0,104 .
0,098 100 1. x x 100% = 9 ,77%
Kadar sari larut dalam air = 5,016
20 0,096 100
2. x x 100% = 9 ,58% Kadar sari larut dalam air =
5,010
20 0,104 100
3. x x 100% = 10 ,35% Kadar sari larut dalam air =
5,025
20 % Rata-rata kadar sari larut dalam air = 9 ,58%
- 9,77% 10 ,
35 % = 9 , 90 %
3
Lampiran 10 . Perhitungan kadar sari larut etanol simplisia buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% berat sampel (g)
20 Berat sampel Berat sari (g) o. (g)
5,010 0,195 . 5,005 0,189 . 5,012 0,201 .
0,195 100 1. x x 100% 20 ,05%
Kadar sari larut dalam etanol = =
5,010
20 0,195 100 2. x x 100% = 19 ,46%
Kadar sari larut dalam etanol =
5,10
20 0,189 100 3.
Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 18,46%
5,005
20
% Rata-rata kadar sari larut dalam etanol =
- 20,05% 9,46% 8,88% = 19,46%
3
Lampiran 11. Perhitungan kadar abu total simplisia buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat abu (g) % Kadar abu total = x 100% berat sampel (g)
Berat sampel (g) Berat abu (g) o.
2,000 0,0985 . 2,000 0,0957 . 2,000 0,0968 .
0,0985 1. x 100% = 4 ,93%
Kadar abu total = 2,000
0,0957 2. x 100% = 4,79%
Kadar abu total = 2,000
0,0968
3. x 100% 4,84%
=
Kadar abu total =
2,000
- 4,93% 4,79% 4,84% 4 ,
85 % % Rata-rata kadar abu total = =
3
Lampiran 12. Perhitungan kadar abu tidak larut asam simplisia buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
% Kadar abu total = 100% x (g) sampel berat
(g) abu berat o. Berat sampel (g)
Berat abu (g) . 2,000 0,0048 .
2,000 0,0059 . 2,000 0,0052 1.
Kadar abu total = 0,24% 100% x
2,000 0,0048
= 2. Kadar abu total =
0,30% 100% x 2,000
0,0059 = 3.
Kadar abu total = 0,26% 100% x
2,000 0,0052
= % Rata-rata kadar abu total = % 26 ,
3 0,26% 0,30% 0,24%
=
Lampiran 13. Perhitungan kadar air ekstrak n-heksana buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
volume akhir − volume awal x 100% % Kadar air = berat sampel
Berat Volum Volum o. sampel (g) e awal (ml) e akhir (ml)
2,018 1,80 1,90 . 2,005 1,90 2,00 . 2,012 2,00 2,10 .
1,90 1,80 - 1. x 100% = 4,95%
Kadar air = 2,018
2,
00 1 - ,90 2. x 100% = 4,96%
Kadar air = 2,005
2, 10 2,00 - 3. x 100% = 4 ,97%
Kadar air = 2,012
+ +
4,95% 4,96% 4,97%
% Rata-rata kadar air = =
4,96%
3
= 2.
Kadar sari larut dalam air =
Kadar sari larut dalam air =
0,87% 100% x
= 3.
1,005 0,0017
Lampiran 14. Perhitungan kadar sari larut air ekstrak n-heksana buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
0,84% 100% x
20 100 x
= % Rata-rata kadar sari larut dalam air =
20 100 x
0,97% 100% x
Berat sari (g) . 1,030 0,0020 . 1,005 0,0010 . 1,025 0,0020 1.
Berat sampel (g)
(g) sampel berat (g) sari berat o.
20 100 x
% Kadar sari larut dalam air = 100% x
1,030 0,0020
Kadar sari larut dalam air =
% 89 , 3 0,87% 0,84% 0,97%
=
1,025 0,0018
20 100 x
Lampiran 15. Perhitungan kadar sari larut etanol ekstrak n-heksana buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat sari (g) 100 x x 100% % Kadar sari larut dalam etanol = berat sampel (g)
20 Berat Berat sari o. sampel (g) (g)
1,170 0,010 . 1,152 0,008 . 1,010 0,007 .
0,010 100 1. x x 100% = 4 ,27%
Kadar sari larut dalam etanol = 1,170
20 0,009 100
2. x x 100% = 3 ,90% Kadar sari larut dalam etanol =
1,152
20 0,008 100
3. x x 100% = 3,96% Kadar sari larut dalam etanol =
1,010
20 % Rata-rata kadar sari larut dalam etanol =
3 ,90% 3,96% + + 4,27% 4 , 04 % =
3
Lampiran 16. Perhitungan kadar abu total ekstrak n-heksana buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat abu (g) x 100% % Kadar abu total = berat sampel (g)
Berat Berat abu o. sampel (g) (g)
1,010 0,0024 . 1,012 0,0027 . 1,011 0,0025 .
0,0024 1. x 100% = 0,23 %
Kadar abu total = 1,010
0,0027 2. x 100% = 0,26%
Kadar abu total = 1,012
0,0025 x 100% 0,24% 3. =
Kadar abu total = 1,011
- 0,23% 0,26% 0,24% % Rata-rata kadar abu total = = ,
24 %
3
3 % 029 , % 039 , % 029 , =
= 2. Kadar abu tidak larut dalam asam =
% 032 ,
= % Rata-rata kadar abu tidak larut dalam asam =
1,011 0,0003
Kadar abu tidak larut dalam asam = % 029 , 100% x
0,0003 = 3.
% 039 , 100% x 1,012
1,010 0,0003
Lampiran 17. Perhitungan kadar abu tidak larut asam ekstrak n-heksana
buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
Kadar abu tidak larut dalam asam = % 029 , 100% x
1,012 0,0003 . 1,011 0,0003 1.
(g) . 1,010 0,0003 .
Berat sampel (g) Berat abu
(g) sampel berat (g) abu berat o.
% Kadar abu tidak larut dalam asam = 100% x
=
= 2. Kadar air =
3 4,96% 4,87% 4,98%
= % Rata-rata kadar air = 4,93%
2,040 2,20 - 2,10
Kadar air = ,96% 4 100% x
1,90 - 2,00 = 3.
4,87% 100% x 2,050
2,007 1,80 - 1,90
Lampiran 18. Perhitungan kadar air ekstrak etilasetat buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
Kadar air = 4,98% 100% x
2,007 1,80 1,9 . 2,050 1,90 2,0 . 2,015 2,00 2,1 1.
Volum e akhir (ml) .
Berat sampel (g) Volu me awal (ml)
− awal volume akhir volume O
% Kadar air = 100% x sampel berat
Lampiran 19. Perhitungan kadar sari larut air ekstrak etilasetat buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat sari (g) 100 x x 100% % Kadar sari larut dalam air = berat sampel (g)
20 Berat sampel Berat sari (g) o. (g)
1,290 0,029 . 1,258 0,026 . 1,300 0,031 .
0,029 100 x x 100% 11,24%
1.
= Kadar sari larut dalam air =
1,290
20 0,026 100
2. x x 100% = 10,33% Kadar sari larut dalam air =
1,258
20 0,031 100
3. x x 100% = 11,92% Kadar sari larut dalam air =
1,300
20 % Rata-rata kadar sari larut dalam air =
- 11,24% 10,33% 11,92% = 11 ,
16 %
3
Lampiran 20. Perhitungan kadar sari larut etanol ekstrak etilasetat buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat sari (g) 100 x x 100% % Kadar sari larut dalam etanol = berat sampel (g)
20 Berat Berat sari o. sampel (g) (g)
1,102 0,166 . 1,130 0,180 . 1,120 0,169 .
0,166 100 1. x x 100% = 75 , 31 %
Kadar sari larut dalam etanol = 1,102
20 0,180 100 x x 100%
79 ,64% 2. =
Kadar sari larut dalam etanol = 1,130
20 0,169 100
3. x x 100% = 75,44% Kadar sari larut dalam etanol =
1,120
20 % Rata-rata kadar sari larut dalam etanol =
75,31% 79 ,64 % 75 ,44%
- 76 ,
79 % =
3
Lampiran 21. Perhitungan kadar abu total ekstrak etilasetat buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat abu (g) x 100% % Kadar abu total = berat sampel (g)
Berat Berat abu o. sampel (g) (g)
1,098 0,0073 . 1,068 0,0065 . 1,075 0,0068 .
0,0073 1. x 100% = 0,66 %
Kadar abu total = 1,098
0,0065 x 100% 0,61% 2. =
Kadar abu total = 1,068
0,0068 3. x 100% = 0,63 %
Kadar abu total = 1,075
- 0,66% 0,61% 0,63%
= , 63 % % Rata-rata kadar abu total =
3
Lampiran 22. Perhitungan kadar abu tidak larut asam ekstrak etilasetat
buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )% Kadar abu tidak larut dalam asam = 100% x
(g) sampel berat (g) abu berat o.
Berat sampel (g) Berat abu
(g) . 1,098 0,0009 .
1,068 0,0007 . 1,075 0,0008 1.
Kadar abu tidak larut dalam asam = % 082 , 100% x
1,098 0,0009
= 2. Kadar abu tidak larut dalam asam =
% 065 , 100% x 1,068
0,0007 = 3.
Kadar abu tidak larut dalam asam = % 074 , 100% x
1,075 0,0008
= % Rata-rata kadar abu tidak larut dalam asam = 0,082% +0,065% + 0,074% = 0,073%
3
Lampiran 23. Perhitungan kadar air ekstrak etanol buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
volume akhir − volume awal x 100% % Kadar air = berat sampel
Berat Volume Volume o. sampel (g) awal (ml) akhir (ml)
2,025 1,80 1,95 . 2,010 1,95 2,10 . 2,020 2,10 2,25 .
1 , 95 1,80 -
1. x 100% 7,40%
=
Kadar air =
2,025 2,10 1 - ,
95
2. x 100% = 7,46% Kadar air =
2,010
- 2,25 2,10
3. x 100% =
7 ,43%
Kadar air =
2,020
- 7,40% 7,46% 7,43% 7,4%
% Rata-rata kadar air = =
3
Lampiran 24. Perhitungan kadar sari larut air ekstrak etanol buah
andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat sari (g) 100 x x 100% % Kadar sari larut dalam air = berat sampel (g)
20 Berat sampel Berat sari (g) o. (g)
1,027 0,145 . 1,050 0,161 . 1,036 0,153 .
0,145 100 x 100% 70,59% 1. x =
Kadar sari larut dalam air = 1,027
20 0,161 100
2. x x 100% = 76 , 66 % Kadar sari larut dalam air =
1,050
20 0,153 100
3. x x 100% = 73,84% Kadar sari larut dalam air =
1,036
20
- 70,59 76,66%
7 3,84% = 73 , 69 %
% Rata-rata kadar sari larut dalam air =
3
Lampiran 25. Perhitungan kadar sari larut etanol ekstrak etanol buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat sari (g) 100 x x 100% % Kadar sari larut dalam etanol = berat sampel (g)
20 Berat Berat sari o. sampel (g) (g)
1,521 0262 . 1,236 0,211 . 1,256 0,215 .
0,262 100 1. x x 100% = 86,13%
Kadar sari larut dalam etanol = 1,521
20 0,211 100 x x 100% 85,35%
2.
= Kadar sari larut dalam etanol =
1,236
20 0,215 100
3. x x 100% = 85 ,58% Kadar sari larut dalam etanol =
1,256
20
- 86,13% 85,35% 85,58
= 85 , 68 % % Rata-rata kadar sari larut dalam etanol =
3
Lampiran 26. Perhitungan kadar abu total ekstrak etanol buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
berat abu (g) x 100% % Kadar abu total = berat sampel (g)
Berat Berat abu o. sampel (g) (g)
1.468 0,015 . 1,475 0,017 . 1,498 0,019 .
0,015 1. x 100% = 1,02%
Kadar abu total = 1,468 0,017
2. x 100% = 1,15% Kadar abu total =
1,475 0,019
3. x 100% = 1 , 20% Kadar abu total =
1,498
- 1,02 % 1,15% 1,20% % Rata-rata kadar abu total = =
1 , 12 %
3
=
0,28% 100% x 1,475
3 0,29% 0,28% 0,27%
% 28 ,
= % Rata-rata kadar abu total =
1,498 0,0044
Kadar abu total = 0,29% 100% x
0,0042 = 3.
= 2. Kadar abu total =
Lampiran 27. Perhitungan kadar abu tidak larut asam ekstrak etanol buah andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC. )
1,468 0,0041
Kadar abu total = 0,27% 100% x
1,475 0,0042 . 1,498 0,0044 1.
(g) . 1.468 0,0041 .
Berat sampel (g) Berat abu
(g) sampel berat (g) abu berat o.
% Kadar abu total = 100% x
Lampiran 28. Perhitungan persen sel Hidup pada sel MCF-7
0,931 0,164
62,5 0,983 0,875 0,919 91,40 79,49 84,34 85,08
500 0,207 0,206 0,203 5,84 5,73 5,40 5,66 250 0,369 0,317 0,254 23,70 17,97 11,03 17,57 125 0,756 0,680 0,638 66,37 57,99 53,36 59,24
Absorbansi % sel hidup % sel hidup rata-rata
Kadar (µg/ml)
500 0,197 0,181 0,254 4,74 2,98 11,03 6,25 250 0,490 0,500 0,486 37,04 38,15 36,60 37,26 125 0,697 0,729 0,716 59,87 63,40 61,96 61,74 62,5 0,883 0,918 0,998 80,37 84,23 93,05 87,22 31,25 0,97 1,017 1,031 89,97 95,15 96,69 93,94 c.
Absorbansi % sel hidup % sel hidup rata-rata
b. Fraksi n-heksan Kadar (µg/ml)
0,150 0,154 0,907 1,020 0,147
Persentase sel hidup =
1,323 1,061
Absorbansi kontrol sel dikurangi kontrol media
Absorbansi kontrol media Rata-rata absorbansi kontrol media
Rata-rata absorbansi kontrol sel
a. Kontrol sel dan kontrol media Absorbansi kontrol sel
x 100%
( Absorbansi perlakuan − Absorbansi kontrol media) ( Absorbansi kontrol sel − Absorbansi kontrol media)
Fraksi Etilasetat buah andaliman
31,25 1.069 0,953 1,013 100,22 88,09 94,71 94,34 d.
Ekstrak etanol buah andaliman
Kadar (µg/ml)
Absorbansi % sel hidup % sel hidup rata-rata
500 0,675 0,681 0,663 57,44 58,10 56,11 57,21 250 0,847 0,869 0,876 76,41 78,83 79,60 78,28 125 0,937 0,951 1,009 86,33 87,87 94,27 89,49
62,5 0,961 0,995 0,961 88,97 92,72 88,97 90,22 31,25 1,021 1,054 0,923 95,59 99,22 84,79 93,20 e.
Doxorubisin
Absorbansi kontrol media Rata-rata absorbansi kontrol media
Rata-rata absorbansi kontrol sel
0,855 0,866
0,159 0,159 0,707 0,865 0,161
0,878 0,157 Kadar
(µg/ml) Absorbansi % sel hidup
% sel hidup rata-rata 400 0,404 0,425 0,430 34,65 37,62 38,33 37% 200 0,694 0,728 0,723 75,67 80,48 79,77 79% 100 0,767 0,789 0,719 85,99 89,109 79,208 84% 50 0,706 0,809 0,782 77,36 91,93 88,11 86%
25 0,836 0,749 0,982 95,75 83,451 116,40 99%
Absorban si kontrol sel
Absorbansi kontrol sel dikurangi kontrol media
Lampiran 29. Hasil penentuan IC 50 sel MCF-7 dengan analisa probit SPSS 17 a.
27
1.9
1
2.05
1 46.658
63
81.2
41 2.112 .350 112.339
1.8
5
1.99
1 29.410
69.3
Ekstrak n-heksan buah andaliman pada sel MCF-7 Confidence Limits
64 2.056 .300 98.933
1.7
6
1.93
1 13.765
47
58.0
.150 61.966 37.113 84.980 1.792 1.570 1.929 .200 74.039 47.346 99.152 1.869 1.675 1.996 .250 86.254
10 19.067 6.880 32.922 1.280 0.838 1.517 020 24.461 9.877 40.007 1.388 0.995 1.602 .030 28.648 12.413 45.317 1.457 1.094 1.656 .040 32.265 14.732 49.801 1.509 1.168 1.697 .050 35.540 16.927 53.800 1.551 1.229 1.731 .060 38.589 19.043 57.478 1.586 1.280 1.760 .070 41.477 21.107 60.930 1.618 1.324 1.785 .080 44.246 23.138 64.216 1.646 1.364 1.808 .090 46.924 25.147 67.378 1.671 1.400 1.829 .100 49.532 27.143 70.444 1.695 1.434 1.848
Upper Bound Estimate Lower Bound Upper Bound PROBIT
Probability 95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak 95% Confidence Limits for log(konsentrasi ekstrak) b Estimate Lower Bound
10 2.166
.400 126.736
93.9
18
1 66.139
2.10
3
1.9
73 2.220 .450 142.419 107.370 188.606 2.154 2.031 2.276 .500 159.747 121.739 214.999 2.203 2.085 2.332 .550 179.183 137.214 246.543 2.253 2.137 2.392 .600 201.356 154.096 284.919 2.304 2.188 2.455 .650 227.161 172.844 332.567 2.356 2.238 2.522 .700 257.943 194.170 393.257 2.412 2.288 2.595
.750 295.857 219.205 473.254 2.471 2.341 2.675 .800 344.670 249.893 583.968 2.537 2.398 2.766 .850 411.821 289.971 749.084 2.615 2.462 2.875 .900 515.200 348.148 1029.130 2.712 2.542 3.012 .910 543.837 363.670 1111.793 2.735 2.561 3.046 .920 576.754 381.242 1209.375 2.761 2.581 3.083 .930 615.253 401.458 1326.872 2.789 2.604 3.123 .940 661.295 425.205 1471.994 2.820 2.629 3.168 .950 718.027 453.883 1657.433 2.856 2.657 3.219 .960 790.928 489.894 1905.988 2.898 2.690 3.280 .970 890.771 537.878 2264.159 2.950 2.731 3.355 .980 1043.273 608.650 2848.296 3.018 2.784 3.455 .990 1338.352 738.749 094.237 3.127 2.868 3.612 b.
Ekstrak etilasetat pada sel MCF-7 Confidence Limits
Probability 95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak 95% Confidence Limits for log
(konsentrasi ekstrak) a Estimate Lower Bound Upper Bound Estimate Lower Bound Upper Bound ROBIT
.010 21.043 15.216 27.019 1.323 1.182 1.432
.020 26.197 19.579 32.832 1.418 1.292 1.516 .030 30.104 22.967 37.167 1.479 1.361 1.570 .040 33.423 25.891 40.811 1.524 1.413 1.611 .050 36.390 28.537 44.045 1.561 1.455 1.644 .060 39.122 30.996 47.005 1.592 1.491 1.672 .070 41.686 33.322 49.770 1.620 1.523 1.697 .080 44.124 35.548 52.390 1.645 1.551 1.719 .090 46.465 37.698 54.897 1.667 1.576 1.740 .100 48.729 39.789 57.316 1.688 1.600 1.758 .150 59.340 49.692 68.598 1.773 1.696 1.836 .200 69.397 59.193 79.262 1.841 1.772 1.899 .250 79.374 68.668 89.870 1.900 1.837 1.954 .300 89.550 78.333 100.765 1.952 1.894 2.003 .350 100.140 88.350 112.227 2.001 1.946 2.050 .400 111.346 98.863 124.525 2.047 1.995 2.095 .450 123.379 110.025 137.955 2.091 2.041 2.140 .500 136.490 122.013 152.867 2.135 2.086 2.184 .550 150.995 135.057 169.705 2.179 2.131 2.230 .600 167.313 149.467 189.060 2.224 2.175 2.277 .650 186.035 165.684 211.764 2.270 2.219 2.326 .700 208.036 184.365 239.058 2.318 2.266 2.379 .750 234.707 206.551 272.925 2.371 2.315 2.436 .800 268.449 234.026 316.834 2.429 2.369 2.501 .850 313.949 270.239 377.649 2.497 2.432 2.577 .900 382.310 323.248 471.918 2.582 2.510 2.674 .910 400.941 337.456 498.137 2.603 2.528 2.697 .920 422.211 353.567 528.322 2.626 2.548 2.723 .930 446.903 372.134 563.683 2.650 2.571 2.751 .940 476.192 393.982 606.048 2.678 2.595 2.783 .950 511.945 420.416 658.351 2.709 2.624 2.818 .960 557.395 453.677 725.706 2.746 2.657 2.861 .970 618.837 498.095 818.190 2.792 2.697 2.913 .980 711.123 563.785 959.901 2.852 2.751 2.982
.990 885.305 684.987 1235.364 2.947 2.836 3.092 a. Logarithm base = 10.
c.
d.
Ekstrak etanol buah andaliman pada sel MCF-7
Confidence Limits 95% Confidence Limits for 95% Confidence Limits for a konsentrasi ekstrak log(konsentrasi ekstrak)
Pr Es Low Upp Low Upp
obability timate er Bound er Bound stimate er Bound er Bound
010 113278.677 25167.763 1783063.755 .054 4.401 6.251
ROBIT 020 64749.299 16319.303 806550.715 4.811 4.213 5.907 030 45406.131 12395.095 487658.939 4.657 4.093 5.688 040 34767.671 10077.215 334030.374 4.541 4.003 5.524 050 27981.323 8514.695 245557.426 4.447 3.930 5.390 060 23259.366 7376.648 188990.583 4.367 3.868 5.276 070 19779.552 6504.297 150231.575 4.296 3.813 5.177 080 17107.963 5810.829 122329.870 4.233 3.764 5.088 090 14992.906 5244.320 101485.089 4.176 3.720 5.006 100 13277.905 4771.598 85455.437 4.123 3.679 4.932150 8029.798 3225.445 41959.969 3.905 3.509 4.623
200 5384.029 2361.015 23858.821 3.731 3.373 4.378
250 3820.995 1805.293 14710.012 3.582 3.257 4.168
300 2808.224 1417.590 9535.090 3.448 3.152 3.979
350 2111.045 1132.092 6385.885 3.324 3.054 3.805
400 1610.260 913.605 4369.773 3.207 2.961 3.640
450 1239.125 741.484 3031.156 3.093 2.870 3.482
500 957.499 602.759 2118.435 2.981 2.780 3.326
550 739.880 488.822 1484.076 2.869 2.689 3.171
600 569.351 393.686 1037.408 2.755 2.595 3.016
650 434.289 312.983 720.600 2.638 2.496 2.858
700 326.471 243.355 495.679 2.514 2.386 2.695
750 239.939 182.133 337.107 2.380 2.260 2.528
800 170.282 127.547 226.933 2.231 2.106 2.356
.850 114.175 79.920 150.743 2.058 1.903 2.178
.900 69.047 41.823 95.608 1.839 1.621 1.980
.910 61.149 35.555 86.164 1.786 1.551 1.935
.920 53.589 29.755 77.089 1.729 1.474 1.887
.930 46.351 24.423 68.321 1.666 1.388 1.835
.940 39.417 19.558 59.798 1.596 1.291 1.777
.950 32.765 15.157 51.449 1.515 1.181 1.711
.960 26.369 11.215 43.190 1.421 1.050 1.635
.970 20.191 7.731 34.893 1.305 .888 1.543
980 14.159 4.704 26.336 1.151 .672 1.421
990 8.093 2.142 16.960 .908 .331 1.229
a. Logarithm base = 10.e.
Doxorubicin pada sel MCF-7
Confidence Limits Probability 95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak 95% Confidence Limits for log(konsentrasi ekstrak) b Estimate Lower Bound Upper Bound Estimate Lower Bound Upper Bound
PROBIT a .010 7634.015 1158.608 1.071E14 3.883 3.064 14.030 .020 5317.423 945.962 8.767E12 3.726 2.976 12.943 .030 4227.239 831.030 1.793E12 3.626 2.920 12.253 .040 3557.118 753.449 5.434E11 3.551 2.877 11.735 .050 3091.186 695.427 2.059E11 3.490 2.842 11.314 .060 2743.011 649.356 9.019E10 3.438 2.812 10.955 .070 2470.151 611.302 4.374E10 3.393 2.786 10.641 .080 2248.951 578.978 2.289E10 3.352 2.763 10.360 .090 2065.026 550.940 1.270E10 3.315 2.741 10.104 00 1909.048 526.220 7.390E9 3.281 2.721 9.869
50 1379.105 433.984 7.864E8 3.140 2.637 8.896 00 1065.027 370.854 1.331E8 3.027 2.569 8.124 50 853.241 322.738 2.910E7 2.931 2.509 7.464 00 699.199 283.571 7465712.089 2.845 2.453 6.873 50 581.397 250.162 2127856.994 2.764 2.398 6.328 00 488.022 220.569 651156.564 2.688 2.344 5.814 50 411.980 193.450 209031.997 2.615 2.287 5.320 00 348.722 167.729 69255.134 2.542 2.225 4.840 50 295.177 142.390 23434.649 2.470 2.153 4.370 00 249.183 116.319 8076.745 2.397 2.066 3.907 50 209.163 88.305 2870.574 2.320 1.946 3.458 00 173.923 57.935 1100.128 2.240 1.763 3.041 50 142.524 28.956 496.157 2.154 1.462 2.696 00 114.182 9.783 279.491 2.058 .990 2.446 50 88.178 2.123 186.242 1.945 .327 2.270 00 63.700 .261 132.947 1.804 -.583 2.124
.910 58.889 .155 124.276 1.770 -.809 2.094 .920 54.073 .088 115.935 1.733 -1.056 2.064 .930 49.231 .047 107.803 1.692 -1.330 2.033 .940 44.333 .023 99.754 1.647 -1.636 1.999 .950 39.340 .010 91.643 1.595 -1.988 1.962
.960 34.187 .004 83.276 1.534 -2.403 1.921 .970 28.767 .001 74.356 1.459 -2.914 1.871
980 22.870 .000 64.312 1.359 -3.597 1.808
990 15.930 .000 51.604 1.202 -4.676 1.713
Lampiran 30. Perhitungan persen sel Hidup pada sel T47D ( Absorbansi perlakuan − Absorbansi kontrol media)
Persentase sel hidup = x 100%
( Absorbansi kontrol sel − Absorbansi kontrol media)
a. Kontrol sel dan kontrol media Absorbansi Rata-rata Absorbansi Rata-rata Absorbansi kontrol kontrol sel absorbansi kontrol media absorbansi sel dikurangi kontrol sel kontrol media kontrol media
1,174 0,102 1,176 1,174 0,106 0,102 1,072 1,172 0,100
b. Ekstrak n-heksan buah andaliman Kadar
% sel hidup Absorbansi % sel hidup
(µg/ml) rata-rata 500 0,137 0,123 0,128 3,26 1,95 2,42 2,55
250 0,126 0,127 0,128 ,23 2,33 3,35 2,64 125 0,157 0,139 0,145 5,13 3,45 4,01 4,19 62,5 0,803 0,736 0,904 65,39 59,14 74,81 66,44 c.
Ekstrak etilasetat buah andaliman
Kadar % sel hidup
Absorbansi % sel hidup (µg/ml) rata-rata 500 0,148 0,214 0,145 ,291 10,44 4,01 6,25
250 0,24 0,256 0,270 12,873 14,366 15,672 14,30 125 0,409 0,466 0,451 28,63 33,95 32,55 31,71
62,5 0,625 0,586 0,638 48,787 45,149 50,00 47,97 f.
Ekstrak etanol buah andaliman kadar
(µg/ml) Absorbansi %sel hidup
% sel hidup rata-rata 500 0,628 0,794 0,512 49,062 64,55 38,24 50,62 250 1,028 0,694 0,512 86,38 55,22 324 59,95 125 0,924 0,851 1,848 76,67 69,86 72,04 72,04 62,5 0,945 0,0 0,928 78,63 74,44 77,05 76,71
Lampiran 31. Hasil penentuan IC
50 sel T47D dengan analisa probit SPSS 17 a.
Ekstrak n-heksan buah andaliman pada sel T47D
Confidence Limits Pr obability
95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak 95% Confidence Limits for log(konsentrasi ekstrak) b Estimate
L ower Bound Upp er Bound E stimate Low er Bound Upp er Bound PROBIT a .010 4.409 . . .644 . .
.020 5.952 . . .775 . . .030 7.199 . . .857 . . .040 8.307 . . .919 . . .050 9.333 . . .970 . . .060 10.305 . . 1.013 . . .070 11.241 . . 1.051 . . .080 12.150 . . 1.085 . . .090 13.041 . . 1.115 . . .100 13.919 . . 1.144 . . .150 18.228 . . 1.261 . . .200 22.585 . . 1.354 . . .250 27.144 . . 1.434 . . .300 32.018 . . 1.505 . . .350 37.312 . . 1.572 . . .400 43.143 . . 1.635 . . .450 49.651 . . 1.696 . .
.500 57.013 . . 1.756 . .
.550 65.466 . . 1.816 . . .600 75.340 . . 1.877 . . .650 87.114 . . 1.940 . . .700 101.518 . . 2.007 . . .750 119.746 . . 2.078 . . .800 143.920 . . 2.158 . . .850 178.323 . . 2.251 . . .900 233.523 . . 2.368 . . .910 249.241 . . 2.397 . . .920 267.517 . . 2.427 . . .930 289.163 . . 2.461 . . .940 315.416 . . 2.499 . .
.950 348.278 . . 2.542 . . .960 391.287 . . 2.592 . . .970 451.507 . . 2.655 . . .980 546.144 . . 2.737 . . .990 737.161 . . 2.868 . .
Ekstrak Etilasetat buah andaliman pada sel T47D
Confidence Limits Pr obability
95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak 95% Confidence Limits for log(konsentrasi ekstrak) b E stimate Low er Bound Upp er Bound E stimate Low er Bound Upp er Bound P
ROBIT a .010 .944 .001 6.742 -.025 -3.169 .829 .020 1.510 .002 9.119 .179 -2.687 .960 .030 2.034 .004 11.051 .308 -2.381 1.043 .040 2.546 .007 12.774 .406 -2.151 1.106 .050 3.055 .011 14.374 .485 -1.964 1.158
.060 3.568 .016 15.896 .552 -1.805 1.201 .070 4.088 .022 17.365 .612 -1.666 1.240 .080 4.618 .029 18.798 .664 -1.541 1.274 .090 5.160 .037 20.205 .713 -1.428 1.305 .100 5.714 .047 21.597 .757 -1.324 1.334 .150 8.718 .128 28.491 .940 -.892 1.455 .200 12.197 .282 35.580 1.086 -.550 1.551 .250 16.269 .552 43.138 1.211 -.258 1.635 .300 21.073 1.009 51.395 1.324 .004 1.711 .350 26.781 1.759 60.602 1.428 .245 1.782 .400 33.621 2.971 71.075 1.527 .473 1.852 .450 41.898 4.916 83.254 1.622 .692 1.920 .500 52.031 8.025 97.796 1.716 .904 1.990 .550 64.613 13.001 115.766 1.810 1.114 2.064 .600 80.519 20.977 139.050 1.906 1.322 2.143 .650 101.086 33.732 171.350 2.005 1.528 2.234 .700 128.469 53.805 220.849 2.109 1.731 2.344 .750 166.397 84.028 307.795 2.221 1.924 2.488 .800 221.948 126.349 486.669 2.346 2.102 2.687 .850 310.511 183.220 920.971 2.492 2.263 2.964 .900 473.761 266.228 2257.308 2.676 2.425 3.354 .910 524.657 288.821 2827.810 2.720 2.461 3.451 .920 586.164 314.752 3621.187 2.768 2.498 3.559 .930 662.150 345.112 4764.422 2.821 2.538 3.678 .940 758.714 381.558 6488.668 2.880 2.582 3.812
.950 886.150 426.776 9252.010 2.948 2.630 3.966 .960 1063.476 485.503 14073.914 3.027 2.686 4.148 .970 1330.820 567.190 23641.680 3.124 2.754 4.374 .980 1793.017 694.850 47287.066 3.254 2.842 4.675 .990 2868.383 951.321 141832.517 3.458 2.978 5.152
Ekstrak Etanol buah andaliman pada sel T47D
Confidence Limits Pr obability
95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak 95% Confidence Limits for log(konsentrasi ekstrak) a Es timate Lo wer Bound Upper
Bound stimate Low er Bound Upp er Bound ROBIT
010 .684 .029 3.170 -.165 -1.536 .501 020 1.468 .094 5.606 .167 -1.027 .749 030 2.383 .197 8.056 .377 -.704 .906 040 3.431 .345 10.588 .535 -.462 1.025 050 4.615 .543 13.231 .664 -.265 1.122 060 5.940 .798 15.999 .774 -.098 1.204 070 7.412 1.119 18.906 .870 .049 1.277 080 9.036 1.513 21.962 .956 .180 1.342 090 10.820 1.991 25.177 1.034 .299 1.401 100 12.773 2.562 28.560 1.106 .409 1.456 150 25.384 7.245 48.359 1.405 .860 1.684 .200 43.816 16.400 74.171 1.642 1.215 1.870
.250 69.987 32.628 108.456 1.845 1.514 2.035 .300 106.576 59.290 155.712 2.028 1.773 2.192 .350 157.363 99.784 224.984 2.197 1.999 2.352 .400 227.772 155.921 334.582 2.358 2.193 2.525 .450 325.747 227.828 517.724 2.513 2.358 2.714 .500 463.231 317.385 829.465 2.666 2.502 2.919 .550 658.740 430.597 1364.564 2.819 2.634 3.135 .600 942.093 577.879 2298.928 2.974 2.762 3.362 .650 1363.614 775.662 3980.009 3.135 2.890 3.600 .700 2013.432 1051.020 7142.650 3.304 3.022 3.854 .750 3066.053 1452.159 13487.072 3.487 3.162 4.130 .800 4897.347 2074.107 27469.461 3.690 3.317 4.439 .850 8453.305 3133.238 63131.323 3.927 3.496 4.800 .900 16800.000 5250.147 180389.280 4.225 3.720 5.256
.910 19831.410 5945.254 232534.390 4.297 3.774 5.366 .920 23747.613 6804.274 306435.207 4.376 3.833 5.486 .930 28951.964 7891.752 415122.779 4.462 3.897 5.618 .940 36123.632 9311.692 582745.567 4.558 3.969 5.765
.950 46495.317 11243.767 858116.353 4.667 4.051 5.934 .960 62545.495 14029.227 1352333.604 4.796 4.147 6.131 .970 90058.156 18412.047 2366097.294 4.955 4.265 6.374 .980 146214.769 26418.626 4978904.481 5.165 4.422 6.697 .990 313844.962 46644.447 1.609E7 5.497 4.669 7.207 a. Logarithm base = 10.
Lampiran 32. Bagan pembuatan media DMEM
DMEM 1 2 g 2 g Dimasukkan kedalam erlenmeyer Ditambahkan 800 ml aquabidest steril Dihomogenkan dengan menggunakan stirer magnet Diatur pH 7,2 – 7,4 (HCl 1N atau NaOH 1N) Ditambahkan aquabidest steril samapai 1 l
Larutan Dilakukan sterilisasi dengan penyaringan Ditampung dalam botol steril Diberi identitas pada botol media
Disimpan pada suhu 2 – 8 C Media
Lampiran 33. Bagan pembuatan media kultur lengkap (MK-DMEM) Fetal Penisili
Fungizon RPM
Bovine Serum n- Streptomisin
e (amphotericin I ad 100%
(FBS) (10%) (2%)
B) (0,5%) Dicampur
Diberi identitas pada botol MK-DMEM Disimpan pada suhu 2 – 8 C
Media Kultur Lengkap (MK –
Lampiran 34. Bagan pembuatan media MI99
M199 1 2 g 2,2 g Dimasukkan kedalam erlenmeyer Ditambahkan 800 ml aquabidest steril Dihomogenkan dengan menggunakan stirer magnet Diatur pH 7,2 – 7,4 (HCl 1N atau NaOH 1N) Ditambahkan aquabidest steril samapai 1 l
Larutan Dilakukan sterilisasi dengan penyaringan Ditampung dalam botol steril Diberi identitas pada botol media
Disimpan pada suhu 2 – 8 C Media
Lampiran 35. Bagan pembuatan media kultur lengkap (MK-M199)
Fetal Penisilin- Fungizone M19
Bovine Streptomisin (3%) (amphotericin B) 9 ad 100 Serum (FBS) (1 %)
% Dicampur Diberi identitas pada botol MK-M199 Disimpan pada suhu 2 – 8 C
Media Kultur Lengkap (MK –
Lampiran 36. Bagan penumbuhan sel MCF-7
Sel MCF-7 dalam Diambil dari freezer
Diambil beberapa tetes
Konikel
Dimasukkan kedalam konikel yg berisi DMEM Disentrifuge 600 rpm selama 5 menit Dibuang supernatan Ditambahkan 4 ml MK-DMEM Di resuspensi hingga homogen
Flask
Dimasukkan ke dalam flask Ditambahkan 5 ml MK kedalam setiap flask Dihomogenkan Diamati kondisi sel dengan mikroskop inverted Diberi identitas pada flask Disimpan dalam inkubator CO
2 Sel
Lampiran 37. Bagan panen sel MCF-7
Sel MCF-7, alat dan Dipersiapkan dan dikondisikan Diamati apakah sel telah konfluen 80% Dibuang MK dari flask dengan mikropipet
Sel yang Dicuci sel 2x dengan PBS Ditambahkan 400 µl trypsine-EDTA 0,25% Diinkubasi dalam inkubator CO
2 selama 5 menit
Ditambahkan 4 ml MK Di resuspensi dengan mikropipet Diamati sel dibawah mikroskop inverted Di resuspensi kembali jika masih ada sel yang menggerombol Ditransfer sel kedalam tabung konikel
Panen Sel MCF-7
Lampiran 38. Bagan penumbuhan sel Vero
Sel Vero dalam Diambil dari freezer
Diambil beberapa tetes
Konikel
Dimasukkan kedalam konikel yg berisi M199 Disentrifuge 1200 rpm selama 5 menit Dibuang supernatan Ditambahkan 4 ml M199 Di resuspensi hingga homogen
Flask
Dimasukkan ke dalam flask Ditambahkan 5 ml MK-M199 kedalam setiap flask Dihomogenkan Diamati kondisi sel dengan mikroskop inverted Diberi identitas pada flask Disimpan dalam inkubator CO
2 Sel
Lampiran 39. Bagan panen sel Vero
Sel Vero, alat, dan Dipersiapkan dan dikondisikan Diamati apakah sel telah konfluen 80% Dibuang MK-199 dari flask dengan mikropipet
Sel yang Dicuci sel 2x dengan PBS Ditambahkan 400 µl trypsine-EDTA 0,25% Diinkubasi dalam inkubator CO
2 selama 5 menit
Ditambahkan 4 ml MK-M199 Di resuspensi dengan mikropipet Diamati sel dibawah mikroskop inverted
Di resuspensi kembali jika masih ada sel yang menggerombol Ditransfer sel kedalam tabung konikel
Panen
Lampiran 40. Bagan penghitungan sel
Kultur Kultur
Diambil 10µl panenan sel Dipipetkan kedalam hemositometer Dihitung jumlah sel dibawah mikroskop
Jumlah Sel Jumlah
Lampiran 41. Bagan pembuatan larutan uji
Ekstrak n- Ekstrak Ekstrak hexan etilasetat etanol Ditimbang sebanyak 50 mg Dimasukkan kedalam polytube Dilarutkan dalam 1000 µl DMSO Di vortex Dibuat pengenceran sampai diperoleh konsentrasi 500 µg/ml, 250 µg/ml, 125 µg/ml, 62,5 µg/ml, dan 31,25 µg/ml
(pengenceran dengan media MK) Larutan Uji
Lampiran 42. Bagan Pengujian Sitotoksik
Sel Ditanam pada microplate 96 sumuran dengan
4
kepadatan 1 x 10
o
Diinkubasi selama 24 jam (CO
2 5%, 37
C) Dibuang medium Ditambahkan medium DMEM baru Ditambahkan larutan uji
o
Diinkubasi selama 24 jam (CO
2 5%, 37
C) Dibuang media dan larutan uji setelah 24 jam Dicuci dengan PBS
Ditambahkan 100 µl DMEM dan 10 µl MTT (5mg/ml) Diinkubasi selama 4-6 jam Ditambahkan SDS (sebagai stopper) Dibungkus dengan aluminium foil Dibiarkan selama 1 malam Sel di shaker selama 10 menit Dibaca serapan dengan ELISA reader pada λ 595 nm
Abs Dihitung % sel hidup Dihitung IC
50 dengan analisa probit menggunakan
SPSS 17
IC Keterangan: a. Sel MCF-7 sebelum diberi larutan uji (perbesaran 10 x 10)
b. Sel MCF-7 setelah diberi larutan uji (sel mengalami perubahan bentuk morfologi) (perbesaran 10 x 10)
Keterangan: a. Sel T47D sebelum diberi larutan uji (perbesaran 10 x 10)
b. Sel T47D setelah diberi larutan uji (sel mengalami perubahan bentuk morfologi) (perbesaran 10 x 10)
Lampiran 44. Microplate -96 sumuran dan kristal formazan
Keterangan: microplate-96 sumuran yang berisi sel dan larutan uji Keterangan: a. Kristal Formazan (perbesaran 10 x 10) ek strak
K ontrol K ontrol
500 250
12 62,5 ek strak ek strak
31,25
Lampiran 45. Bagan Pengujian Combinasi Index
Sel Ditanam pada microplate 96 sumuran dengan
4
kepadatan 1 x 10
o
Diinkubasi selama 24 jam (CO
2 5%, 37
C) Dibuang media dan ganti medium baru Ditambahkan larutan uji
o
Diinkubasi selama 24 jam (CO
2 5%, 37
C) Dibuang media dan larutan uji setelah 24 jam Dicuci dengan PBS Ditambahkan 100 µl DMEM dan 10 µl MTT Diinkubasi selama 4-6 jam Ditambahkan SDS (sebagai stopper) Dibungkus dengan aluminium foil Dibiarkan selama 1 malam Sel di shaker selama 10 menit
Dibaca serapan dengan ELISA reader pada λ 595 nm
Abs Dihitung % sel hidup Dihitung CI dengan analisa probit menggunakan SPSS 17
Dat
Kombinasi index EABA y = -0.355x + 105.8 Doxorubicin y = -0.199x + 126.2 r=0.998 r=0.979
IC 50 = 157.18 ug/ml
34
25 50 100 200
17 195.274 177.554 113.003 106.358
34 242.421 234.827 206.032 194.008
51 260.457 397.154 320.578 346.209
68 331.337 462.970 440.188 443.985
y = -0.355x + 105.8EEADA tunggal
25 50 100 200
17 98.016 90.579 63.486 60.697
34 117.805 114.617 102.532 97.485
51 125.375 182.749 150.609 161.367
68 155.125 210.374 200.811 202.405
COMBINASI
INDEX Doxo Etil asetat
25 50 100 200
17
0.30
0.47
1.15
2.16
0.39
34.51
0.51
0.82
1.38
51
0.50
0.40
0.65
0.89
68
0.51
0.43
0.57
33.95 perhitungan pada aplikasi tunggal doxorubicin tunggal y = -0.149x + 100.1
31.12
IC50 = 382.9 um Doxorubicin E EABA
34
25 50 100 200 100
98.54
89.96
78.64
69.17
17
77.75
71.00
73.64
83.26
84.25
60.91
50.73
63.98
65.11
69.40
71.19
51